RU2785267C1 - Способ оценки степени экспозиции токсических веществ на работников нефтехимических производств - Google Patents
Способ оценки степени экспозиции токсических веществ на работников нефтехимических производств Download PDFInfo
- Publication number
- RU2785267C1 RU2785267C1 RU2021138456A RU2021138456A RU2785267C1 RU 2785267 C1 RU2785267 C1 RU 2785267C1 RU 2021138456 A RU2021138456 A RU 2021138456A RU 2021138456 A RU2021138456 A RU 2021138456A RU 2785267 C1 RU2785267 C1 RU 2785267C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- exposure
- toxic substances
- degree
- comets
- dna
- Prior art date
Links
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 231100000614 Poison Toxicity 0.000 title claims abstract description 24
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims abstract description 31
- 210000003819 Peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N Ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 21
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 230000000737 periodic Effects 0.000 description 8
- 102000003852 Autoantibodies Human genes 0.000 description 6
- 108090000206 Autoantibodies Proteins 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 241001067407 Cometes Species 0.000 description 4
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 4
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 3
- 238000003927 comet assay Methods 0.000 description 3
- 231100000170 comet assay Toxicity 0.000 description 3
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003348 petrochemical agent Substances 0.000 description 3
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010082126 Alanine Transaminase Proteins 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 102100013894 BCL2 Human genes 0.000 description 2
- 108060000885 BCL2 Proteins 0.000 description 2
- 229940105657 CATALASE Drugs 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N Chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- 108010053835 EC 1.11.1.6 Proteins 0.000 description 2
- 102000016938 EC 1.11.1.6 Human genes 0.000 description 2
- 210000003617 Erythrocyte Membrane Anatomy 0.000 description 2
- 102100016439 FAS Human genes 0.000 description 2
- 101700079540 FAS Proteins 0.000 description 2
- 102100010966 GPT Human genes 0.000 description 2
- 102100006815 IL2RA Human genes 0.000 description 2
- 101700082799 IL2RA Proteins 0.000 description 2
- 101700015336 ISG20 Proteins 0.000 description 2
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 Urine Anatomy 0.000 description 2
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 102000009178 bcl-2-Associated X Protein Human genes 0.000 description 2
- 108010048571 bcl-2-Associated X Protein Proteins 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHCVCKDNQYMGEX-UHFFFAOYSA-N 1,1'-biphenyl;phenoxybenzene Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 MHCVCKDNQYMGEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000601 Blood Cells Anatomy 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000015554 Dopamine receptor family Human genes 0.000 description 1
- 108050004812 Dopamine receptor family Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 102000005915 GABA Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010005551 GABA Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 229940028885 Interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 231100000601 Intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 238000001276 Kolmogorov–Smirnov test Methods 0.000 description 1
- RLJMLMKIBZAXJO-UHFFFAOYSA-N Lead(II) nitrate Chemical compound [O-][N+](=O)O[Pb]O[N+]([O-])=O RLJMLMKIBZAXJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 1
- 210000004761 Scalp Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 210000000538 Tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N ethylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1 YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003317 industrial substance Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N oxane Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000004796 pathophysiological change Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда, может быть использовано для оценки степени экспозиции токсических веществ на работников нефтехимических производств, в том числе при прохождении периодического медицинского осмотра. Проводят выделение мононуклеарных клеток периферической крови, которые наносят на предметное стекло в 1% легкоплавкой агарозе, лизируют в щелочном растворе, проводят гель-электрофорез, после чего микропрепараты фиксируют 15 минут в 70% этаноле, высушивают на воздухе при комнатной температуре и окрашивают в 0,5% водном растворе бромистого этидия. Полученные «ДНК-кометы» исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа, подсчитывают относительное содержание ДНК в хвосте «комет», после чего у индивидов, имеющих процент «комет» с разрывами ДНК от 0,00 до 19,99%, определяют низкую степень экспозиции токсических веществ на работника; от 20,00 до 39,99% - среднюю степень экспозиции токсических веществ; от 40,00 до 100,00% определяют высокую степень экспозиции токсических веществ. Использование изобретения повышает точность оценки за счет раннего определения повреждений ДНК. 6 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда, может быть использовано для оценки степени экспозиции токсических веществ на работников нефтехимических производств, в том числе при прохождении периодического медицинского осмотра.
При периодических медицинских осмотрах представляется актуальным выявление ранних изменений, обнаруживаемых в организме человека вследствие воздействия вредных факторов рабочей среды и трудовой деятельности, для своевременного осуществления профилактических мер и сохранения здоровья работников. Ранние изменения состава крови давно используются в качестве маркеров физиологических и патологических состояний организма.
Работники современных нефтехимических производств при выполнении рабочих операций испытывают на себе воздействие вредных факторов рабочей среды и трудового процесса, и часто подвергаются влиянию разнообразных химических веществ, поступающих в организм в основном из воздуха рабочей зоны и через незащищенные участки кожи, что делает необходимым проведение профилактических мероприятий и использование средств индивидуальной защиты.
Важным для определения профессиональной вредности является оценка степени экспозиции работника нефтехимического производства вредными промышленными веществами такими, как ароматические (бензол и его производные), непредельные (с одной или двумя связями С=С) и предельные углеводороды, бензины, окись этилена, окись пропилена, нефрас и др. нефтехимическими веществами. Но оценка степени экспозиции токсичными веществами трудоемка и предполагает индивидуальное обследование каждого рабочего места (которое, как правило, не имеет точных границ в пространственно-временном описании), определение (качественное и количественное) выраженности, частоты, продолжительности и путей воздействия вредных веществ, находящихся в окружающей среде. Для предотвращения вреда здоровью работника нефтехимического производства существует потребность в быстром скрининговом тесте, позволяющем оценить клеточный ответ организма индивида на контакт с используемыми на производстве токсичными веществами для определения эффективности используемых и необходимости проведения дополнительных профилактических мероприятий.
Известен способ прогнозирования преморбидного состояния при воздействии химических загрязнителей производственной среды путем исследования мочи и крови по уровню железоиндуцированной хемилюминесценции [патент RU 2178563, 2002]. Недостатком способа является невозможность прогнозирования процессов, сопряженных с патофизиологическими изменениями в организме, не влияющими на уровень железоиндуцированной хемилюминесценции мочи и крови.
Известен способ определения чувствительности мембран эритроцитов к воздействию тяжелых металлов, включающий проверку действия химических веществ на фиксированных клетках крови, что сокращает возможности оценки биологического действия исследуемых соединений [патент RU 2332668, 2008]. Недостатком метода является то, что для испытаний использованы растворы солей 4 тяжелых металлов (сульфаты марганца, никеля и цинка, нитрат свинца) и не учитывается действие остальных химических соединений. Кроме того, отсутствие чувствительности мембран эритроцитов не означает, что остальные клетки и ткани организма человека окажутся нечувствительными к тяжелым металлам, метод продолжителен во времени и составляет сложность его скорая реализация одним человеком.
Известен способ выявления ранних признаков хронического воздействия винилхлорида, заключающийся в том, что в сыворотке крови работающих определяют содержание интерлейкина 4, белка S-100β, уровень аутоантител к белку S-100, аутоантител к вольтаж-зависимому Ca-каналу, аутоантител к глутаматным рецепторам, аутоантител к γ-аминомасляной кислоте-рецепторам, аутоантител к дофаминовым рецепторам, рассчитывают диагностические коэффициенты F1 и F2 и при значении F1 меньше F2 диагностируют ранние изменения в нервной системе при хроническом воздействии винилхлорида, при F1 больше или равно F2 - делают заключение об отсутствии признаков хронического воздействия винилхлорида [патент RU 2485514, 2013]. Недостатком способа является невозможность его применения для диагностики ранних признаков интоксикации химическими соединениями, встречающимися на остальных нефтехимических производствах. Также для его реализации требуются дорогостоящие реагенты: наборы для определения аутоантител к белкам-маркерам и соответствующее оборудование. Необходимость измерения большого числа показателей требует длительного времени, в течение которого возможны искажения результата.
Известен способ диагностики нарушений клеточного иммунитета у работников химических производств при воздействии формальдегида, характеризующийся тем, что производят отбор пробы венозной крови у работников, устанавливают в ней концентрацию формальдегида, определяют количество лимфоцитов, затем устанавливают критериальный показатель, по которому судят о нарушении клеточного иммунитета. В качестве основных параметров Т-клеточного иммунитета определяют в процентах число активированных Т-лимфоцитов CD3+CD95+ и также определяют в процентах число Т-регуляторных лимфоцитов CD4+CD25+CD127-, а в качестве критериального показателя используют интегральный показатель, равный отношению установленного процента числа CD3+CD95+ - лимфоцитов к проценту числа CD4+CD25+CD127- - лимфоцитов. При значении этого интегрального показателя, равного и более 40, диагностируют нарушение клеточного иммунитета у работников химических производств при воздействии формальдегида [патент RU 2539391, 2015].
Известен способ оценки влияния метанола на иммунный статус работников химического производства, включающий отбор пробы венозной крови у работников, установление в ней фактического содержания метанола и лабораторных иммунологических показателей, внутриклеточных маркеров апоптоза: белка bax и белка bcl2. Причем после установления в пробе крови фактического содержания метанола производят его сравнение с величиной фоновой концентрации путем определения коэффициента, равного их соотношению: С1/С2, где С1 - фактическое содержание метанола в крови; С2 - фоновая концентрация метанола, затем рассчитывают критериальный коэффициент, равный соотношению указанных bax/bcl2, далее рассчитывают информационный индекс клеточной гибели по формуле. При значении указанного индекса клеточной гибели более 6, при одновременном содержании метанола в крови выше его фоновой концентрации, оценивают состояние иммунного статуса работника химического производства от воздействия метанола как иммунодефицитное [патент RU 2546524, 2015].
Наиболее близким аналогом изобретения является способ диагностики комбинированного воздействия ароматических углеводородов, оксидов олефинов и их смеси на работников нефтехимических и химических производств, заключающийся в том, что у работников нефтехимических и химических производств в сыворотке периферической крови спектрофотометрическим методом определяют активность каталазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и количественное содержание перекисей в липидах, при снижении активности каталазы, увеличении активности аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и количественного содержания перекисей в липидах диагностируют комбинированное воздействие смеси ароматических углеводородов и оксидов олефинов [патент RU 2488827, 2013]. Недостатком прототипа является то, что исследуемые показатели являются относительно стабильными и меняются только при наличии значительных патологических изменений, вызванных воздействием химических веществ.
Задачей изобретения является разработка способа оценки степени экспозиции токсичными химическими веществами работников нефтехимических производств.
Техническим результатом изобретения является повышение точности оценки за счет раннего определения повреждений ДНК.
Предлагаемый способ оценки степени экспозиции токсичными химическими веществами работников нефтехимических производств осуществляется следующим образом. Мононуклеарные клетки периферической крови выделяют у работника нефтехимического производства методом экстракции в градиенте фиколла (1,077 г/см3) из 2 мл крови по Boyum с последующей промывкой в фосфатном солевом буферном растворе, содержащем 1% ЭДТА. Свежевыделенную клеточную суспензию используют для приготовления микропрепаратов в 1% легкоплавкой агарозе. Из каждого образца выделенных клеток, полученного от одного работника, готовят по 3 микропрепарата. Перед нанесением на предметное стекло 100 мкл суспензии клеток прогревают при +37°С и смешивают со 100 мкл 2% легкоплавкой агарозы в равных пропорциях. Микропрепараты мононуклеарных клеток погружают в охлажденный лизирующий солевой раствор (рН10-11) и инкубируют в холодильнике при температуре +5-+10°С не менее 1,5 ч. Далее микропрепараты погружают на 25 минут в охлажденный щелочной буферный раствор (рН>13). В дальнейшем в течение 20 минут проводят гель-электрофорез ДНК изолированных клеток, ранее заключенных в 1% легкоплавкую агарозу и на предметных стеклах, при напряженности электрического поля 0,9-1 В/см. По окончании электрофореза микропрепараты фиксируют 15 минут в 70% этаноле, высушивают на воздухе при комнатной температуре и окрашивают в 0,5% водном растворе бромистого этидия. Полученные таким образом микропрепараты «комет» исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа (при увеличении 100× или 200×) и фотографируют с использованием цифровой камеры, подключенной к компьютеру. Базовые принципы методики получения и анализа изображений комет описаны в литературе [Tice R.R., Agurell Е., Anderson D., Burlinson В., Hartmann A., Kobayashi H., Miyamae Y., Rojas E., Ryu J.C., Sasaki Y.F. Single cell gel/comet assay: guidelines for in vitro and in vivo genetic toxicology testing. Environ Mol Mutagen. 2000. V.35. N.3. P.206 221 (https://doi.org/10.1002/(sici)1098-2280(2000)35:3<206::aid-em8>3.0.co;2-j); Collins A.R. The comet assay for DNA damage and repair: principles, applications, and limitations. Mol Biotechnol. 2004. V.26. N.3. P.249 - 261 (https://doi.Org/10.1385/MB:26:3:249)]. На каждом микропрепарате образца мононуклеарных клеток, полученного от одного работника, фотографируют не менее 50 «комет». Далее подсчитывают относительное содержание ДНК в хвостах «комет» (в процентах) с использованием любой доступной версии программного обеспечения, используемого для анализа изображений ДНК «комет» (ImageJ, CaspLab, OpenComet, Comet Assay IV и т.п.). Если процент содержания ДНК в хвосте «кометы» больше 5%, то ее причисляют к «кометам» с повышенной выраженностью разрывов ДНК (далее, «комет» с разрывами ДНК). Затем определяют процент таких «комет» у каждого работника.
У индивидов, имеющих процент «комет» с разрывами ДНК:
1. От 0,00 до 19,99% определяют низкую степень экспозиции работника токсичными веществами;
2. От 20,00 до 39,99% определяют среднюю степень экспозиции токсичными веществами, есть необходимость в проверке качества выполнения профилактических мероприятий;
3. От 40,00 до 100,00% определяют высокую степень экспозиции токсичными веществами, есть основание исследовать условия труда определенного работника на наличие превышений ПДК химических веществ в воздухе рабочей зоны и повысить качество выполняемых профилактических мероприятий.
В Уфимском НИИ медицины труда и экологии человека были обследованы 107 работников нефтехимического производства, среди которых 82 работника (от 21 до 66 лет) имеют экспозицию токсичными химическими соединениями, а 25 работников (от 22 до 62 лет) не имели экспозиции токсичными химическими соединениями. Химический фактор включает в себя токсичные нефтехимические вещества, представленные ароматическими (бензол и его производные), непредельными (с одной или двумя связями С=С) и предельными углеводородами, бензинами и др. нефтехимическими веществами.
Средний возраст работников, контактирующих с химическим фактором, составляет 45,24±10,88 лет (95%ДИ: 42,85-47,63), а средний стаж 18,83±12,25 лет (95%ДИ: 16,13-21,52). Работники, включенные в контрольную группу и не подвергающиеся воздействию химического фактора в процессе трудовой деятельности имеют средний возраст 49,80±8,89 лет (95%ДИ: 46,13-53,47), средний стаж 19,17±12,60 лет (95%ДИ: 13,26-25,06). Сформированные группы не имеют статистически значимых различий по возрасту и стажу при сравнении с использованием t-критерия Стьюдента для независимых выборок (р>0,05).
По результатам определения процента «комет» с разрывами ДНК 71 работник имеют низкую степень экспозиции работника токсичными веществами, процент «комет» с разрывами ДНК определялся у них от 0,00 до 19,99%. 29 работников имеют среднюю степень экспозиции токсическими веществами, процент «комет» с разрывами ДНК определялся у них от 20,00 до 39,99%. 7 работников имеют высокую степень экспозиции токсическими веществами, процент «комет» с разрывами ДНК определялся у них от 40,00 до 100,00%. Распределение значений процента «комет» с разрывами ДНК в исследуемой выборке относится к ненормальным по одновыборочному критерию Колмогорова-Смирнова (р<0,05), поэтому для сравнения групп использовалась непараметрическая статистика. При множественном сравнении групп работников с разной степенью экспозиции также имеются статистически значимые отличия по Н-критерию Краскела-Уоллиса (р<0,001).
Изобретение поясняется следующими клиническими примерами.
Пример 1.
Работник Ю., 1996 г.р., стаж 8 лет, выполняет обязанности слесаря КИПиА на нефтехимическом предприятии. Проходил периодический медицинский осмотр с целью определения степени экспозиции и необходимых профилактических мероприятий. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 2 мл венозной крови с последующим определением разрывов ДНК в мононуклеарных клетках периферической крови. Процент «комет» с разрывами ДНК составляет 0,00%, что определяет низкую степень экспозиции работника токсичными веществами и достаточность проводимых профилактических мероприятий. Химический фактор: этилен. Концентрация химического вещества в воздухе рабочей зоны на момент проверки не превышала ПДК.
Пример 2.
Работник П., 1965 г.р., стаж 35 лет, по профессии аппаратчик сжигания на нефтехимическом производстве. Проходил периодический медицинский осмотр с целью определения степени экспозиции и необходимых профилактических мероприятий. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 2 мл венозной крови с последующим определением разрывов ДНК в мононуклеарных клетках. Процент «комет» с разрывами ДНК составляет 39,99%, что определяет среднюю степень экспозиции работника токсичными веществами и необходимость проверки качества выполнения профилактических мероприятий. При проверке качества выполнения профилактических мероприятий было обнаружено, что работник часто не использовал респиратор при нахождении на рабочем месте. Химический фактор: алканы С1-С10, бута-1,3-диен. Концентрации химических веществ в воздухе рабочей зоны на момент проверки превышают ПДК в 1,5 раза.
Пример 3.
Работник Ш., 1977 г.р., стаж 2 года, по профессии слесарь по ремонту технологического оборудования на нефтехимическом производстве. Проходил периодический медицинский осмотр с целью определения степени экспозиции и необходимых профилактических мероприятий. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 2 мл венозной крови с последующим определением разрывов ДНК в мононуклеарных клетках периферической крови. Процент «комет» с разрывами ДНК составляет 40,00%, что определяет высокую степень экспозиции работника токсичными веществами и необходимость проверки качества профилактических мероприятий. При проверке качества выполнения профилактических мероприятий было обнаружено, что работник часто во время выполнения производственных работ использовал непрорезиненные рукавицы и надевал противогаз, который был подобран не по размеру и неплотно прилегал к коже головы. Химический фактор: стирол, этилбензол. Концентрации химических веществ в воздухе рабочей зоны химических веществ на момент проверки превышают предельно допустимые значения в 2,5 раза.
Пример 4. Работник 3., 1968 г.р., стаж 8 лет, машинист компрессорных установок на нефтехимическом производстве. Проходил периодический медицинский осмотр с целью определения степени экспозиции и необходимых профилактических мероприятий. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 2 мл венозной крови с последующим определением разрывов ДНК в мононуклеарных клетках периферической крови. Процент «комет» с разрывами ДНК составляет 100,00%, что определяет высокую степень экспозиции работника токсичными веществами и необходимость проверки качества профилактических мероприятий. Химический фактор: нефрас, хлорметан. Обнаружено превышение ПДК в воздухе рабочей зоны нефраса в 3,5 раза, хлорметана в 2,5 раза. Работник направлен в стационар на углубленное обследование и проведение лечебно-профилактических мероприятий.
Пример 5. Работник Н., 1962 г.р., стаж 30 лет, электромонтер по ремонту и эксплуатации технологического оборудования. Проходил периодический медицинский осмотр с целью определения степени экспозиции и необходимых профилактических мероприятий. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 2 мл венозной крови с последующим определением разрывов ДНК в мононуклеарных клетках периферической крови. Процент «комет» с разрывами ДНК составляет 19,99%, что определяет низкую степень экспозиции работника токсичными веществами и достаточность проводимых профилактических мероприятий. Химический фактор: динил, олефины С4-С10. Концентрация химических веществ в воздухе рабочей зоны на момент проверки не превышала ПДК.
Пример 6. Работник А., 1986 г.р., стаж 3 года, машинист компрессорных установок. Проходил периодический медицинский осмотр с целью определения степени экспозиции и необходимых профилактических мероприятий. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 2 мл венозной крови с последующим определением разрывов ДНК в мононуклеарных клетках. Процент «комет» с разрывами ДНК составляет 20,00%, что определяет среднюю степень экспозиции работника токсичными веществами и необходимость проверки качества выполнения профилактических мероприятий. Химический фактор: бензины, пропилен, алкены С2-С5. Концентрация химических веществ в воздухе рабочей зоны на момент проверки не превышала ПДК. При проверке качества выполнения профилактических мероприятий было обнаружено, что работник иногда не использовал средства защиты органов дыхания.
Claims (1)
- Способ оценки степени экспозиции токсических веществ на работников нефтехимических производств, включающий исследование периферической крови, отличающийся тем, что проводят выделение мононуклеарных клеток периферической крови, которые наносят на предметное стекло в 1% легкоплавкой агарозе, лизируют в щелочном растворе, проводят гель-электрофорез, после чего микропрепараты фиксируют 15 минут в 70% этаноле, высушивают на воздухе при комнатной температуре и окрашивают в 0,5% водном растворе бромистого этидия, полученные «ДНК-кометы» исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа, подсчитывают относительное содержание ДНК в хвосте «комет», после чего у индивидов, имеющих процент «комет» с разрывами ДНК от 0,00 до 19,99%, определяют низкую степень экспозиции токсических веществ на работника; от 20,00 до 39,99% - среднюю степень экспозиции токсических веществ; от 40,00 до 100,00% определяют высокую степень экспозиции токсических веществ.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2785267C1 true RU2785267C1 (ru) | 2022-12-05 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488827C1 (ru) * | 2012-02-15 | 2013-07-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ диагностики комбинированного воздействия ароматических углеводородов, оксидов олефинов и их смеси на работников нефтехимических и химических производств |
| RU2012122473A (ru) * | 2012-05-31 | 2013-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова" Российской академии медицинских наук | Способ оценки днк-повреждений в тканях эмбрионов и плаценты животных |
| RU2530639C1 (ru) * | 2013-05-30 | 2014-10-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Екатеринбургский медицинский-научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Способ профилактики вредных эффектов общетоксического и генотоксического действия наносеребра на организм |
| CN105891305A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-08-24 | 深圳烟草工业有限责任公司 | 一种卷烟烟气冷凝物生物安全性的检测方法 |
| RU2597157C1 (ru) * | 2015-09-15 | 2016-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Екатеринбургский медицинский-научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ повышения устойчивости организма к хроническому комбинированному токсическому действию наночастиц оксида никеля и оксида марганца |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488827C1 (ru) * | 2012-02-15 | 2013-07-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ диагностики комбинированного воздействия ароматических углеводородов, оксидов олефинов и их смеси на работников нефтехимических и химических производств |
| RU2012122473A (ru) * | 2012-05-31 | 2013-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова" Российской академии медицинских наук | Способ оценки днк-повреждений в тканях эмбрионов и плаценты животных |
| RU2530639C1 (ru) * | 2013-05-30 | 2014-10-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Екатеринбургский медицинский-научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Способ профилактики вредных эффектов общетоксического и генотоксического действия наносеребра на организм |
| RU2597157C1 (ru) * | 2015-09-15 | 2016-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Екатеринбургский медицинский-научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ повышения устойчивости организма к хроническому комбинированному токсическому действию наночастиц оксида никеля и оксида марганца |
| CN105891305A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-08-24 | 深圳烟草工业有限责任公司 | 一种卷烟烟气冷凝物生物安全性的检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Э.В. Филиппов и др. Использование метода "ДНК-комет" для детекции и оценки степени повреждений ДНК клеток организмов растений, животных и человека, вызванных факторами окружающей среды (обзор). НАУКА И ОБРАЗОВАНИЕ, 2014, N2, с. 72-78. Сорочинская У.Б., Михайленко В.М. Применение метода "ДНК-комет" для оценки повреждений ДНК, вызванных различными агентами окружающей среды // Онкология. 2008. Т.10, N3. С. 303-309. Раскоша О.В., Башлыкова Л.А. ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ХРОНИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ В МАЛЫХ ДОЗАХ. Современные проблемы науки и образования. 2017. N 4. Tomáš Gichner, Zdeˇnka Patková, Jiˇrina Száková, Kateˇrina Demnerová. Cadmium induces DNA damage in tobacco roots, but no DNA damage, somatic mutations or ЧУГУНОВ, ФИЛИППОВА, ХАЛДЕЕВА, СТЕПАНОВ 78 НАУКА И ОБРАЗОВАНИЕ, 2014. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Agarwal et al. | MiOXSYS: a novel method of measuring oxidation reduction potential in semen and seminal plasma | |
| Pizzichini et al. | Measurement of inflammatory indices in induced sputum: effects of selection of sputum to minimize salivary contamination | |
| Wiwanitkit | Plateletcrit, mean platelet volume, platelet distribution width: its expected values and correlation with parallel red blood cell parameters | |
| Chinudomwong et al. | Diagnostic performance of reticulocyte hemoglobin equivalent in assessing the iron status | |
| Jeal et al. | HLA associations with occupational sensitization to rat lipocalin allergens: a model for other animal allergies? | |
| US8535226B2 (en) | Method for measuring in vivo hematotoxicity with an emphasis on radiation exposure assessment | |
| Tomsič et al. | Plasma total antioxidant capacity and activities of blood glutathione peroxidase and superoxide dismutase determined in healthy dogs by using commercially available kits | |
| Barić Rafaj et al. | Haematological and biochemical values of farmed red deer (Cervus elaphus). | |
| Belsey et al. | Evaluation of a laboratory system intended for use in physicians' offices: II. Reliability of results produced by health care workers without formal or professional laboratory training | |
| RU2785267C1 (ru) | Способ оценки степени экспозиции токсических веществ на работников нефтехимических производств | |
| Calvo et al. | Andrology: Characterization and frequency distribution of sperm acrosome reaction among normal and infertile men | |
| Nejatifar et al. | Evaluation of hematological indices among insecticides factory workers | |
| Guibourdenche et al. | Rapid detection of insulin-like growth factor-binding protein-1 and foetal fibronectin in cervico-vaginal secretions to diagnose premature membrane rupture | |
| JP5144950B2 (ja) | ナチュラルキラー活性の評価方法 | |
| JP5657813B2 (ja) | プラスモジウム感染の検出方法 | |
| Kharche et al. | Hemoglobin Variants in Patients With Microcytic Hypochromic Anemia: A Review of Indian Studies | |
| US20110312015A1 (en) | RAPID THROMBOCHEK TEST KIT BASED ON WHOLE BLOOD SCREENING TEST TO DETECT PLATELET HYPERAGGREGATION AT A TEMPERATURE OF 37ºC IN THE CLINICAL LABORATORY | |
| Rosenthal et al. | Assessment of the reliability of plasma electrophoresis in birds | |
| Herteman et al. | Retrospective investigation of automated hematology analyzer–determined indicators of neutrophil activation in blood samples from horses with asthma | |
| JPH08500437A (ja) | 哺乳動物の血液の検体の抗原に対するアレルギー誘発応答を決定する方法 | |
| Baig et al. | Comparison of manual sperm analysis with computer-assisted sperm analysis: A comparative cross-sectional study | |
| Yis | Comparison of fully automatic analyzer and manual measurement methods in sperm analysis and clinical affect | |
| Klenner et al. | Myeloperoxidase deficiency in dogs observed with the ADVIA® 120 | |
| Prajapati | Comparison of platelet count by automated hematology analyzer and peripheral blood smear in thrombocytopenic patient | |
| RU2557956C1 (ru) | Способ определения целесообразности проведения иммунологического обследования у работников животноводческого комплекса |