RU2012122473A

RU2012122473A - Способ оценки днк-повреждений в тканях эмбрионов и плаценты животных

Info

Publication number: RU2012122473A
Application number: RU2012122473/15A
Authority: RU
Inventors: Сергей Борисович Середенин; Ольга Васильевна Шредер; Екатерина Дмитриевна Шредер; Андрей Дмитриевич Дурнев
Priority date: 2012-05-31
Filing date: 2012-05-31
Publication date: 2013-12-10

Abstract

1. Способ оценки ДНК-повреждений в тканях эмбрионов и/или плаценты животных, включающий анализ клеток эмбрионов и/или плаценты животных, выполняемый согласно стандартному протоколу щелочной версии метода ДНК-комет: приготовление гель-слайдов, получение микропрепаратов, лизис, щелочная денатурация, электрофорез, нейтрализация/фиксация, окрашивание; микроскопический анализ; анализ распределения клеток методом количественной оценки с применением критерия Колмогорова-Смирнова, где в качестве показателя поврежденности используют параметр «% ДНК в хвосте», на основании которого выделяют четыре категории клеток с различной степенью фрагментации ДНК:1 категория - клетки с «ДНК в хвосте» до 10%;2 категория - клетки с повреждениями ДНК от 10 до 30%;3 категория - клетки с повреждениями ДНК от 30 до 50%;4 категория - клетки с ДНК-повреждениями выше 50%при этом клетки 1-й категории принимают за норму, 2-й и 3-й категорий, интерпретируются как маркеры повышенного риска аномального развития, клетки 4-й категории рассматриваются как апоптотические; и по долевому соотношению клеток различных категорий судят о наличии патологии в эмбриогенезе.2. Применение способа по п.1 в биологических исследованиях.

Claims

1. Способ оценки ДНК-повреждений в тканях эмбрионов и/или плаценты животных, включающий анализ клеток эмбрионов и/или плаценты животных, выполняемый согласно стандартному протоколу щелочной версии метода ДНК-комет: приготовление гель-слайдов, получение микропрепаратов, лизис, щелочная денатурация, электрофорез, нейтрализация/фиксация, окрашивание; микроскопический анализ; анализ распределения клеток методом количественной оценки с применением критерия Колмогорова-Смирнова, где в качестве показателя поврежденности используют параметр «% ДНК в хвосте», на основании которого выделяют четыре категории клеток с различной степенью фрагментации ДНК:

1 категория - клетки с «ДНК в хвосте» до 10%;

2 категория - клетки с повреждениями ДНК от 10 до 30%;

3 категория - клетки с повреждениями ДНК от 30 до 50%;

4 категория - клетки с ДНК-повреждениями выше 50%

при этом клетки 1-й категории принимают за норму, 2-й и 3-й категорий, интерпретируются как маркеры повышенного риска аномального развития, клетки 4-й категории рассматриваются как апоптотические; и по долевому соотношению клеток различных категорий судят о наличии патологии в эмбриогенезе.

2. Применение способа по п.1 в биологических исследованиях.