RU2783426C1 - Штамм бактерий Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 " ингибитор роста фитопатогенных грибов - Google Patents
Штамм бактерий Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 " ингибитор роста фитопатогенных грибов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2783426C1 RU2783426C1 RU2021135897A RU2021135897A RU2783426C1 RU 2783426 C1 RU2783426 C1 RU 2783426C1 RU 2021135897 A RU2021135897 A RU 2021135897A RU 2021135897 A RU2021135897 A RU 2021135897A RU 2783426 C1 RU2783426 C1 RU 2783426C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- strain
- vkpm
- phytopathogenic fungi
- fungi
- Prior art date
Links
- 240000008371 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 23
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 229940075615 Bacillus subtilis Drugs 0.000 title claims abstract description 21
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title abstract description 13
- 230000003032 phytopathogenic Effects 0.000 title abstract description 13
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 title description 3
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 title 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 13
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 claims description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 abstract description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000813 microbial Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000855 fungicidal Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001408 fungistatic Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 21
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 4
- 241000589174 Bradyrhizobium japonicum Species 0.000 description 4
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000002633 protecting Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 210000004215 spores Anatomy 0.000 description 4
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 2-mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 2
- 102200141637 FRG2C C12R Human genes 0.000 description 2
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K Tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L mgso4 Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- -1 refampenicillin Chemical compound 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- JFPVXVDWJQMJEE-IZRZKJBUSA-N (6R,7R)-3-[(carbamoyloxy)methyl]-7-[(2Z)-2-(furan-2-yl)-2-(methoxyimino)acetamido]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(N)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CC=CO1 JFPVXVDWJQMJEE-IZRZKJBUSA-N 0.000 description 1
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N (6R,7R)-7-[(2Z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(methoxyimino)acetamido]-3-{[(2-methyl-5,6-dioxo-1,2,5,6-tetrahydro-1,2,4-triazin-3-yl)sulfanyl]methyl}-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 1
- MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-7-methyl-4-oxo-1,4-dihydro-1,8-naphthyridine-3-carboxylic acid Chemical compound C1=C(C)N=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=C1 MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S Ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N Amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N Ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N Azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N Boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940105657 CATALASE Drugs 0.000 description 1
- 229960003563 Calcium Carbonate Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229960004755 Ceftriaxone Drugs 0.000 description 1
- 229960001668 Cefuroxime Drugs 0.000 description 1
- 229960005091 Chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N Chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 EC 1.11.1.6 Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 EC 1.11.1.6 Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 102000013382 Gelatinases Human genes 0.000 description 1
- 108010026132 Gelatinases Proteins 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 229960002182 IMIPENEM Drugs 0.000 description 1
- ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N IMIPENEM Chemical compound C1C(SCC\N=C\N)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@H]([C@H](O)C)[C@H]21 ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N 0.000 description 1
- 239000005569 Iron sulphate Substances 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L Iron(II) sulfate Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229940042115 Methylene blue Drugs 0.000 description 1
- 241000865904 Mycoleptodiscus terrestris Species 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 229960000210 Nalidixic Acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000808 Netilmicin Drugs 0.000 description 1
- 229960001180 Norfloxacin Drugs 0.000 description 1
- OGJPXUAPXNRGGI-UHFFFAOYSA-N Norfloxacin Chemical compound C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCNCC1 OGJPXUAPXNRGGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 102000035443 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- RXZBMPWDPOLZGW-XMRMVWPWSA-N Roxithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=N/OCOCCOC)/[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 RXZBMPWDPOLZGW-XMRMVWPWSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- DZZWHBIBMUVIIW-DTORHVGOSA-N Sparfloxacin Chemical compound C1[C@@H](C)N[C@@H](C)CN1C1=C(F)C(N)=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN(C3CC3)C2=C1F DZZWHBIBMUVIIW-DTORHVGOSA-N 0.000 description 1
- 229960000707 Tobramycin Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N Tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 1
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N netilmycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@]([C@H](NC)[C@@H](O)CO1)(C)O)NCC)[C@H]1OC(CN)=CC[C@H]1N ZBGPYVZLYBDXKO-HILBYHGXSA-N 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229960005224 roxithromycin Drugs 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 229960004954 sparfloxacin Drugs 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 235000019798 tripotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005429 turbidity Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Bacillus subtilis BS2017, обладающий фунгистатической и фунгицидной активностью в отношении фитопатогенных грибов Fusarium, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов НИЦ «Курчатовский институт» – ГосНИИгенетика под номером B-13389. Изобретение обеспечивает расширение арсенала штаммов микробов-антагонистов фитопатогенных грибов для использования в сельском хозяйстве. 1 ил., 1 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано для защиты растений от фитопатогенных грибов.
Штамм Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 может использоваться в качестве эффективного средства для защиты от фитопатогенных микроорганизмов, как самостоятельного компонента, так и в композиции с другими агрономически полезными микробами для повышения продуктивности растений.
Известен штамм Bacillus subtilis ВНИИСХМ 128, составляющий основу биопрепарата «Фитоспорин» для защиты растений от болезней [патент RU 2099947 C1. Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней. МПК A01N 63/00, C12N 1/20, C12N 1/20, C12R 1/125. Заявка № 96121980/13 от 15.11.1996, опубл.: 27.12.1997], с концентрацией микробных клеток 109-1010 в 1,0 мл физраствора в количестве 92-98% и наполнитель в количестве 2-8 об. %.
Известен штамм Bacillus subtilis 8А, депонированный под номером RCAM 00876 в коллекции ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии, в качестве средства повышения продуктивности растений и защиты от фитопатогенных микроорганизмов [патент RU 2495119 C1. ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis 8A В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ И ИХ ЗАЩИТЫ ОТ ФИТОПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. МПК C12N 1/20, C12R 1/125, A01N 63/00. Заявка № 2012151104/10 от 29.11.2012, опубл.: 10.10.2013 в Бюл. № 28].
Однако отсутствуют данные об ингибирующем действии на другие агрономически полезные микроорганизмы, что не позволяет сделать окончательного заключения о возможности их использования в составе комплексных микробиологических препаратов.
Задачей изобретения является установление штамма для возможного его использования в сельском хозяйстве как средства защиты от фитопатогенных грибов, позволяющего расширить перечень подобных штаммов микробов-антагонистов, и возможного компонента в композиции с другими агрономически полезными штаммами микроорганизмов при создании биоудобрений.
Указанная задача решается за счет того, что в качестве средства защиты от патогенных грибов, как самостоятельного компонента, так и в композиции с другими агрономически полезными микроорганизмами при создании биоудобрений, обеспечивающих повышение продуктивности сельскохозяйственных растений, предлагается использовать штамм эндофитных бактерий Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389, что позволит расширить номенклатуру микробов-антагонистов фитопатогенных грибов, используемых в растениеводстве.
Полученный штамм характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки
При выращивании на плотной питательной среде на основе FT-агара через 24 часа культивирования при температуре (37±1)°C образует однородные, округлые колонии мягкой консистенции, плоские, бежевого цвета с волнистым краем. В жидкой тиогликолевой среде наблюдается равномерное помутнение среды с рыхлым осадком на вторые сутки. При микроскопии мазков, окрашенных по Граму, наблюдаются грамположительные спорообразующие прямые палочки с закругленными краями, расположенные отдельно. Культура штамма образует споры, которые при окрашивании по Шефферу-Фултону расположены внутри микробных клеток в периферической части.
Физиолого-биохимические свойства
Штамм обладает способностью к росту при температуре от 10°C до 37°C в аэробных условиях, оптимум при температуре (32÷37)°C и pH (6,0÷7,0). Продолжительность культивирования на плотной питательной среде (FT-агар) - (24÷48) часов, жидкой питательной среде (тиогликолевая среда) - (48÷72) часа.
Штамм образует желатиназу, каталазу, протеазы, амилазу, редуцирует нитраты, обесцвечивает метиленовую синь.
Штамм чувствителен к следующим антибиотикам: норфлоксацину, амикацину, спарфлоксацину, тобрамицину, азитромицину, рокситромицину, рефампеницилину, налидиксовой кислоте, левомицетину, имипенему, цефтриаксону, цефтоксиму, ампициллину, цефуроксиму и нетилмицину.
Штамм не обладает патогенностью для человека и животных согласно классификации, приведенной в Санитарных правилах С.Н.1.3.2322-08. Поддержание и хранение штамма осуществляет в лиофилизированном состоянии при температуре (2÷6)°C в течение 24 месяцев.
Для поддержания свойств штамма проводится высев исходной культуры на плотную питательную среду (FT-агар) в чашках по методу Дригальского, для последующего отбора наиболее типичных колоний для дальнейшего накопления. С этой целью осуществляют пересев отобранных колоний на плотную питательную среду (FT-агар), скошенную в пробирках и матрацах. Культуру, выращенную на скошенной плотной питательной среде в матрацах, смывают средой высушивания, фасуют во флаконы и подвергают лиофильной сушке. Полученную сухую культуру закладывают на последующее хранение. При необходимости приготовления биомассы сухую культуру ресуспендируют физиологическим раствором и полученную суспензию микробных клеток используют для дальнейшего их накопления, в соответствии с разработанной технологией.
Изобретение поясняется следующими примерами.
Пример 1. Выделение штамма BS2017 ВКПМ B-13389
Штамм Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 выделен из ассоциации почвенных микроорганизмов путем последовательных пересевов культур на плотной питательной среде (FT-агар) после инкубирования культур в течение 48 часов при температуре 32°C. Высев проводили по методу Дригальского на 6 последовательных чашек. В результате проведенных операций была выделена культура BS2017, обладающая культурально-морфологическими, биохимическими признаками, способностью к спорообразованию, присущими роду Bacillus. Дальнейшие исследования были проведены совместно со специалистами ФГУП ГосНИИГенетика, в которые были отправлены для проведения токсанометрической идентификации на основании молекулярно-генетического анализа «чистые» агаризованные культуры выделенного изолята. Идентификация штамма BS2017 до вида с использованием анализа сиквенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК (99%), а также ПЦР анализа с использованием видоспецифических праймеров позволили отнести тестируемый штамм к виду Bacillus subtilis.
Результат проведенных экспериментальных исследований определили целесообразность депонирования штамма Bacillus subtilis BS2017 во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером B-13389.
Пример 2. Приготовление посевного материала и прототипа биопрепарата (компонента биопрепарата) на основе микробных клеток Bacillus subtilis штамма BS2017 ВКПМ B-13389.
Лиофильно высушенную культуру Bacillus subtilis ресуспендировали в 0,9% растворе хлорида натрия и высевали на плотную питательную среду FT-агар, скошенную в пробирках, содержащую (г/дм3):
| сернокислотный гидролизат рыбной муки | 17,0; |
| стимулятор роста гемофильных микроорганизмов | 5,0; |
| экстракт пекарских дрожжей | 2,3; |
| MgSO4•7H2O | 0,5; |
| Na2 SO4 | 0,7; |
| цистеин | 0,5; |
| агар | 15,0; |
| дистиллированная вода | до 1,0 дм3. |
Посевы инкубировали при температуре (30±2)°C в течение 46÷50 часов. Выращенную на скошенной плотной питательной среде в пробирках микробную культуру смывали 0,9% раствором хлорида натрия и готовили посевной материал с концентрацией 1,0×109 КОЕ в 1,0 см3.
Приготовленную бактериальную суспензию вносили в количестве 15,0 см3 в колбу емкостью 500,0 см3, содержащую 150,0 см3 жидкой питательной среды Федорова состава (г/дм3):
| калий фосфорнокислый однозамещенный | 0,5; |
| магний сернокислый | 0,3; |
| хлорид натрия | 0,3; |
| железо сернокислое | 0,005; |
| марганец сернокислый | 0,005; |
| карбонат кальция | 3,5; |
| меласса | 30,0; |
| борная кислота | 0,005; |
| дистилированная вода | до 1,0 дм3. |
| pH (7,2±0,2) |
Полученные посевы выращивали при температуре (32±1)°C в течение (46÷50) часов в шейкер-инкубаторе с частотой вращения (250±2) оборотов в минуту.
Полученную нативную культуру, содержащую не менее 1,0×109 КОЕ в 1,0 см3, использовали в качестве прототипа биологического препарата (прототипа компонента биологического препарата) для оценки ингибирующего действия в отношении грибов рода Fusarium и изучения антагонистической активности в отношении агрономически полезных микроорганизмов.
Пример 3. Исследование ингибирующего действия штамма Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 в отношении грибов рода Fusarium.
Объектом проводимых исследований являлся штамм Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389, выращенный на жидкой питательной среде Федорова.
В качестве тест-объектов использовали мицелиальные грибы из коллекции ФГБНУ Федеральный научный аграрный центр Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого, вызывающие корневые гнили бобовых. Для хранения культур грибов использовали агаризованную среду Чапека и картофельно-глюкозный агар.
При изучении фунгицидной активности штамма Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 определяли его фунгистатическое действие в опытах in vitro на фитопатогенные грибы Fusarium oxysporum и F. gibbosum. Активность антагониста в отношении грибов оценивали в соответствии с ОФС 1.2.4.0010.15 «Определение антимикробной активности методом диффузии в агар». Суспензию спор грибов каждого вида тест-штаммов смывали стерильной водой с колоний 10 суточного возраста (100,0 мкл при плотности спор 106 спор/мл) и распределяли по поверхности среды в чашках Петри на картофельно-глюкозном агаре. Далее на поверхность агара производили посев биомассы антагониста уколом. Чашки Петри с посевами инкубировали при температуре (28±1)°С в течение 72 и 144 часов. При оценке результатов учитывали наличие и интенсивность роста патогенных грибов. С этой целью измеряли диаметр зон ингибирования роста грибного мицелия. Также фунгицидное действие оценивали по величине диаметра зоны задержания роста грибов вокруг колоний штамма.
Результаты фунгистатического действия штамма Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 на исследуемые культуры фитопатогенных грибов отражены в таблице.
Активность штаммов Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 в отношении Fusarium oxysporum и F. gibbosum носит выраженный фунгистатический и фунгицидный эффекты, которые проявляются не только в задержке роста мицелия фитопатогенных грибов, но и в увеличении диаметра зон подавления роста (см. таблицу).
На основании полученных результатов можно сделать вывод о том, что уровень подавления фитопатогенных микромицетов штаммом Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 сравним с эффективностью действия ранее полученных высокоактивных антагонистических штаммов B. subtilis, например, B. subtilis Б-046.
Пример 4. Оценка антагонистической активности штамма Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 в отношении агрономически полезных микроорганизмов.
Объектом проводимых исследований являлся штамм Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389, выращенный на жидкой питательной среде Федорова.
В качестве тест-объектов использовали агрономически полезные культуры штаммов Bacillus megatherium var. phosphaticum RCAM03190 и Bradyrhizobium japonicum (Kirchner) Jordan CSAU R2901, выращенные на плотной питательной среде «FT-агар».
Штамм Bradyrhizobium japonicum является клубеньковой бактерией, способной использовать атмосферный азот в симбиозе с бобовыми растениями.
Штамм Bacillus megatherium var. phosphaticum является мобилизатором труднорастворимых фосфатов почвы, так как обладает фосфат разлагающими свойствами.
Антагонистическую активность оценивали диффузионным методом с использованием перпендикулярных штрихов. С этой целью на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри с применением бактериологической петли высевали культуру Bacillus subtilis BS2017 сплошной чертой по её диаметру. Посев инкубировали в термостате при температуре (30±1)°С в течение 24 часов. Через указанное время перпендикулярно от края чашки к штриху, но не касаясь его, бактериологической петлей на поверхность плотной питательной среды наносили культуры Bacillus megatherium var. phosphaticum и Bradyrhizobium japonicum (Kirchner) Jordan. Чашку Петри с плотной питательной средой, засеянную тест-культурами и оцениваемым штаммом, инкубировали в термостате при температуре (30±1)°С в течение 2 суток. Результаты проверки антагонистической активности методом перпендикулярного штриха, представленные на чертеже, где 1 - Bacillus subtilis, 2 - Bradyrhizobium japonicum; 3 - Bacillus megatherium, свидетельствуют об отсутствии зоны ингибирования роста культур на границе их посевов, что позволяет сделать заключение, что изученные штаммы не обладают взаимной антагонистической активностью.
Claims (1)
- Штамм Bacillus subtilis BS2017, депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов НИЦ «Курчатовский институт» – ГосНИИгенетика под номером B-13389 – ингибитор роста патогенных грибов Fusarium.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2783426C1 true RU2783426C1 (ru) | 2022-11-14 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2495119C1 (ru) * | 2012-11-29 | 2013-10-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis 8A В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ И ИХ ЗАЩИТЫ ОТ ФИТОПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ |
| CN104087542A (zh) * | 2014-07-16 | 2014-10-08 | 南京新果园生态农业科技有限公司 | 防治西瓜枯萎病的生防菌株及其应用 |
| RU2553518C1 (ru) * | 2013-11-20 | 2015-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2495119C1 (ru) * | 2012-11-29 | 2013-10-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis 8A В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ И ИХ ЗАЩИТЫ ОТ ФИТОПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ |
| RU2553518C1 (ru) * | 2013-11-20 | 2015-06-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ |
| CN104087542A (zh) * | 2014-07-16 | 2014-10-08 | 南京新果园生态农业科技有限公司 | 防治西瓜枯萎病的生防菌株及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СИДОРОВА Т.М. и др., "Биологически активные метаболиты Bacillus subtilis и их роль в контроле фитопатогенных микроорганизмов."; Сельскохозяйственная биология, 2018, т.53, N1, с.29-37. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101569737B1 (ko) | 벼 근권에서 분리된 신규 식물 내생세균 바실러스 오리지콜라 및 이를 이용한 천연식물 보호 및 식물 강화제 개발 | |
| CN101250495B (zh) | 一株植物病原真菌拮抗菌及其在防治植物病害中的应用 | |
| CN108148794B (zh) | 一种广谱抑菌活性的枯草芽孢杆菌DYr3.3及制备方法和应用 | |
| Andargie et al. | Identification and evaluation of potential bio-control fungal endophytes against Ustilagonoidea virens on rice plants | |
| KR20140127670A (ko) | 식물 내생세균 바실러스 메칠로트로피쿠스 yc7007 균주 및 이를 이용한 다기능 생물농약 및 미생물비료 개발 | |
| CN109456921B (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌、应用及微生物菌剂、粉剂和颗粒剂 | |
| CN111040976B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN107075459B (zh) | 芽孢杆菌属的新型细菌及其用途 | |
| CN115181693B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| Kannan et al. | Diversity analysis of antagonistic microbes against bacterial leaf and fungal sheath blight diseases of rice | |
| KR20230052410A (ko) | 식물 병원성 곰팡이에 대한 항진균 활성을 갖는 신규 스트렙토마이세스 뮤리누스 js029 균주 | |
| CN110317747A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌jt68及其在防治茶炭疽病的应用 | |
| KR101535893B1 (ko) | 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴펜션스 cc110와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약 | |
| KR101005484B1 (ko) | 식물병원균에 대한 항균 활성을 갖는 스트렙토마이세스 스포로클리바투스 ｃｊｓ－49 ｋｃｔｃ 11109ｂｐ 및 이를 포함하는 생물농약 | |
| KR20080045346A (ko) | 신규한 바실러스 서브틸리스 엠27 균주 및 이를유효성분으로 한 식물 균핵병 방제 방법 | |
| CN104152372A (zh) | 防治植物病害的生防菌株g68及其菌剂制备方法和应用 | |
| RU2783426C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus subtilis BS2017 ВКПМ B-13389 " ингибитор роста фитопатогенных грибов | |
| RU2625977C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens OPS-32 для получения биопрепарата комплексного действия для защиты сельскохозяйственных растений от фитопатогенных грибов, стимуляции их роста и повышения урожайности | |
| KR101027082B1 (ko) | 식물 병원균에 대한 항균활성을 갖는 스트렙토마이세스 미조넨시스 ｃｊｓ-70 균주 및 이를 이용한 식물 병원균방제용 미생물 제제 | |
| JP4366924B2 (ja) | ピシウム属菌に対する拮抗微生物の検出方法、該拮抗微生物およびそれを用いた土壌病害防除剤 | |
| JP4892583B2 (ja) | ピシウム属菌に対する拮抗微生物の検出方法、該拮抗微生物およびそれを用いた土壌病害防除剤 | |
| CN113388549A (zh) | 一种索诺拉沙漠芽孢杆菌及其应用 | |
| Bakli et al. | Isolation of fluorescent Pseudomonas spp. strains from rhizosphere agricultural soils and assessment of their role in plant growth and phytopathogen biocontrol | |
| KR100574346B1 (ko) | 바실러스 서브틸리스 ｅｂ072 균주, 이를 포함하는 식물병 방제용 미생물 제제 및 이를 이용하여 식물병을 방제하는 방법 | |
| KR100732910B1 (ko) | 식물 병원균 길항 균주 바실러스 섭틸리스 ｆｂｓ―2 및이를 이용한 식물 병원균 방제용 미생물 제제 |