RU2782361C1 - Композиция для облегчения, предупреждения или лечения заболеваний костей или метаболических заболеваний, содержащая новый штамм lactobacillus sakei cvl-001 и ее культуральную среду - Google Patents
Композиция для облегчения, предупреждения или лечения заболеваний костей или метаболических заболеваний, содержащая новый штамм lactobacillus sakei cvl-001 и ее культуральную среду Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782361C1 RU2782361C1 RU2021126140A RU2021126140A RU2782361C1 RU 2782361 C1 RU2782361 C1 RU 2782361C1 RU 2021126140 A RU2021126140 A RU 2021126140A RU 2021126140 A RU2021126140 A RU 2021126140A RU 2782361 C1 RU2782361 C1 RU 2782361C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cvl
- lactobacillus sakei
- strain
- culture
- hours
- Prior art date
Links
- 241000186612 Lactobacillus sakei Species 0.000 title claims abstract description 126
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 29
- 208000003432 Bone Disease Diseases 0.000 title description 23
- 208000008466 Metabolic Disease Diseases 0.000 title description 18
- 239000001963 growth media Substances 0.000 title 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 37
- 210000002997 Osteoclasts Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 230000002148 osteoclast Effects 0.000 claims abstract description 24
- 210000000988 Bone and Bones Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 6
- 108020004465 16S Ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 10
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000020395 negative regulation of osteoclast differentiation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 56
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 47
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 39
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 36
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 30
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 30
- 235000021109 kimchi Nutrition 0.000 description 28
- 239000002609 media Substances 0.000 description 28
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 26
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 25
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 25
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 24
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 19
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 19
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 18
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 18
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 17
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 17
- 201000010870 diseases of metabolism Diseases 0.000 description 16
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 13
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 12
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 11
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 9
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 235000020828 fasting Nutrition 0.000 description 7
- 239000007758 minimum essential media Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 7
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 6
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000001603 reducing Effects 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 102000004171 Cathepsin K Human genes 0.000 description 5
- 108090000625 Cathepsin K Proteins 0.000 description 5
- 102100008411 DCSTAMP Human genes 0.000 description 5
- 101710044877 DCSTAMP Proteins 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 5
- 102100000563 NFATC1 Human genes 0.000 description 5
- 101710044747 NFATC1 Proteins 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 5
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000865 phosphorylative Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 5
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 5
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- 108091007472 MAP kinase family Proteins 0.000 description 4
- 102000004331 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 4
- 108090000823 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 4
- 230000002293 adipogenic Effects 0.000 description 4
- 230000003178 anti-diabetic Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 4
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 4
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 4
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229960003563 Calcium Carbonate Drugs 0.000 description 3
- 241000272184 Falconiformes Species 0.000 description 3
- 101710008404 GAPDH Proteins 0.000 description 3
- 102100006425 GAPDH Human genes 0.000 description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 3
- 229940039696 Lactobacillus Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 3
- 229940029983 VITAMINS Drugs 0.000 description 3
- 229940021016 Vitamin IV solution additives Drugs 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 3
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 230000001054 cortical Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 3
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 102000003995 transcription factors Human genes 0.000 description 3
- 108090000464 transcription factors Proteins 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N (3β)-Cholest-5-en-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 2
- 210000000577 Adipose Tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 208000008787 Cardiovascular Disease Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 2
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N Fructose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 2
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010062060 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010063000 Low turnover osteopathy Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N Maltose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@H]1CO)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 206010061289 Metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M NaHCO3 Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 2
- 210000004940 Nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 206010031149 Osteitis Diseases 0.000 description 2
- 208000005368 Osteomalacia Diseases 0.000 description 2
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 description 2
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 2
- 208000007442 Ricket Diseases 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 2
- 102100000153 TNFRSF11B Human genes 0.000 description 2
- 210000000538 Tail Anatomy 0.000 description 2
- 102000007591 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108010032050 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 2
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 description 2
- 230000002730 additional Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000008975 bone inflammation disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 2
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000003451 hyperinsulinaemic Effects 0.000 description 2
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 235000015073 liquid stocks Nutrition 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- -1 maltose and sucrose Chemical compound 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic Effects 0.000 description 2
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000000790 osteoblast Effects 0.000 description 2
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- OFPTZWGZSRJCOT-MSPNRCMCSA-M potassium;2-[(1S,2S,3R,4S,5S,6R)-3-(diaminomethylideneamino)-4-[(2R,3R,4R,5S)-3-[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy-2,5,6-trihydroxycyclohexyl]guanidine;(2S,5R,6R)-3,3-d Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O OFPTZWGZSRJCOT-MSPNRCMCSA-M 0.000 description 2
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic Effects 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 2
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2R,3R,4S,5R,6S)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2R,3R,4S,5R,6R)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3-Isobutyl-1-methyl-2,6(1H,3H)-purinedione Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 Abdominal Cavity Anatomy 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 102000017910 Adrenergic receptor family Human genes 0.000 description 1
- 108060003345 Adrenergic receptor family Proteins 0.000 description 1
- XJKJWTWGDGIQRH-BFIDDRIFSA-N Alginic acid Chemical compound O1[C@@H](C(O)=O)[C@@H](OC)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H]1O XJKJWTWGDGIQRH-BFIDDRIFSA-N 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N Aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 Aspartame Drugs 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- ABIUHPWEYMSGSR-UHFFFAOYSA-N Bromocresol purple Chemical compound BrC1=C(O)C(C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C=C(Br)C(O)=C(C)C=2)=C1 ABIUHPWEYMSGSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940105657 CATALASE Drugs 0.000 description 1
- 229960005069 Calcium Drugs 0.000 description 1
- JHLNERQLKQQLRZ-UHFFFAOYSA-N Calcium silicate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] JHLNERQLKQQLRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940112822 Chewing Gum Drugs 0.000 description 1
- 229940107161 Cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 206010011401 Crohn's disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N Dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 Dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102000016938 EC 1.11.1.6 Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 EC 1.11.1.6 Proteins 0.000 description 1
- 108091007936 ERK family Proteins 0.000 description 1
- 208000005679 Eczema Diseases 0.000 description 1
- 210000000105 Enteric Nervous System Anatomy 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 230000036826 Excretion Effects 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 230000035520 G1 Phase Effects 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 101710037135 GAPC2 Proteins 0.000 description 1
- 101710037116 GAPC3 Proteins 0.000 description 1
- 101710025049 GAPDG Proteins 0.000 description 1
- 101710010461 Gapdh1 Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229940014259 Gelatin Drugs 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-MRVPVSSYSA-N L-Noradrenaline Natural products NC[C@@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- 101710025050 MK0970 Proteins 0.000 description 1
- 206010027304 Menopausal symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000036740 Metabolism Effects 0.000 description 1
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N Methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101700040223 NOD2 Proteins 0.000 description 1
- 229960002748 Norepinephrine Drugs 0.000 description 1
- 208000001164 Osteoporotic Fracture Diseases 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N Propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010498 Receptor Activator of Nuclear Factor-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010038036 Receptor Activator of Nuclear Factor-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 206010039073 Rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000003705 Ribosomes Anatomy 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N Saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 Saccharin Drugs 0.000 description 1
- 229940076279 Serotonin Drugs 0.000 description 1
- 210000002356 Skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 210000000225 Synapses Anatomy 0.000 description 1
- 102000003714 TNF receptor-associated factor 6 Human genes 0.000 description 1
- 108090000009 TNF receptor-associated factor 6 Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H Tricalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004291 Uterus Anatomy 0.000 description 1
- 235000005042 Zier Kohl Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000011759 adipose tissue development Effects 0.000 description 1
- 238000009632 agar plate Methods 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering Effects 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001714 calcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014171 carbonated beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000010000 carbonizing Methods 0.000 description 1
- 101710025091 cbbGC Proteins 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture media Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 230000023298 conjugation with cellular fusion Effects 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical Effects 0.000 description 1
- 201000004624 dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 201000008286 diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating Effects 0.000 description 1
- 231100001003 eczema Toxicity 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cells Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal Effects 0.000 description 1
- 231100000592 few side effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 101710025070 gapdh-2 Proteins 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N iso-propanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000035786 metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 1
- 210000001721 multinucleated osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 235000021096 natural sweeteners Nutrition 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 238000009546 plain radiography Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000017991 positive regulation of osteoclast differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 231100000247 serious adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000000862 serotonergic Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 230000035886 specific defense system Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003356 suture material Substances 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 230000005700 syncytium formation by plasma membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 1
- 201000006704 ulcerative colitis Diseases 0.000 description 1
- 235000015192 vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к штамму Lactobacillus sakei CVL-001 и его применению. Предложен штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, предназначенный для восстановления минеральной плотности костей у млекопитающего или ингибирования дифференцировки остеокластов. Предложена также фармацевтическая композиция для восстановления минеральной плотности костей у млекопитающего или ингибирования дифференцировки остеокластов, содержащая эффективное количество указанного штамма и фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение обеспечивает восстановление минеральной плотности костей у млекопитающего или ингибирования дифференцировки остеокластов и может эффективно применяться для предупреждения или лечения остеопороза. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 13 ил., 13 табл., 11 пр.
Description
Область изобретения
Настоящее раскрытие было сделано при поддержке Министерства науки и ИКТ (Информационно-коммуникационные технологии), Республика Корея, в рамках проекта №2018R1A2B3004143, который проводился Национальным фондом по НИОКР (Научно-исследовательские и опытно-конструкторские работы) Chonnam в исследовательском проекте под названием «Исследование Nod2-опосредованной клеточной/тканеспецифичной системы защиты от патогенной инфекции» под управлением Национального исследовательского фонда Кореи для проекта под названием «Проект по поддержке основных исследователей», с 01 марта 2018 года по 28 февраля 2022 года.
Данная заявка заявляет приоритет и преимущества по корейской заявке на патент №№10-2019-0022670 и 10-2019-0022671, поданной 26 февраля 2019 года, и корейской заявке на патент №10-2020-0012763, поданной 03 февраля 2020 года в Офисе интеллектуальной собственности Республики Корея, содержания которых включены в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
Настоящее раскрытие относится к штамму Lactobacillus sakei CVL-001 и способу его выделения, и, более конкретно, к штамму Lactobacillus sakei CVL-001, выделенному и идентифицированному из кимчи.
Кроме того, настоящее раскрытие относится к композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001 или его культуральную жидкость, для облегчения, предупреждения или лечения заболеваний костей или метаболического заболевания и, более конкретно, к композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, или его культуральную жидкость, для облегчения, предупреждения или лечения заболеваний костей или метаболических заболеваний.
Предшествующий уровень техники
Молочнокислые бактерии в большом количестве обнаружены в корейских традиционных ферментированных пищевых продуктах, таких как кимчи. При существовании в симбиозе друг с другом в пищеварительной системе человека молочнокислые бактерии отвечают за деградацию волокон и сложных белков, обеспечивая важные питательные вещества и поддерживая кишечную среду при кислотном рН с ингибированием пролиферации вредных бактерий, таких как Е. coli или Chlostridium sp., и с облегчением диареи и запора, и играют роль в синтезе витаминов и снижении уровней холестерина в крови. В частности, сильно связываясь с клетками слизистой оболочки и эпителиальными клетками кишечника, молочнокислые бактерии вносят большой вклад в регуляцию кишечника.
Кроме того, известно, что молочнокислые бактерии усиливают способность макрофагов распознавать и уничтожать вредные кишечные бактерии посредством стимуляции пролиферации макрофагов и демонстрируют иммуностимулирующее действие за счет стимуляции секреции иммуноопосредованных веществ (Gabriela peridgon et al. J of food Protection 53: 404-411, 1990: Katsumasa sato et al., Microbiol Immunol., 32(7): 689-698, 1998).
Микроорганизмы Lactobacillus spp., которые осуществляют гомо- или гетероферментативное молочнокислое брожение, обычно участвуют в ферментации молочных продуктов и овощей. Недавно проводилось активное исследование по разработке микроорганизмов Lactobacillus spp в качестве пробиотиков, пищевых добавок и т.д.
За последние годы широко исследуется важность кишечной микробиоты (ниже в данном документе называемой «GM» (от англ. gut microbiota)) как в отношении здоровья, так и заболевания. GM включает триллионы бактерий, которые в совокупности содержат в 150 раз больше генов, чем геном человека. GM приобретается при рождении и, хотя и являясь четко выраженной структурой, явно совместно эволюционировала с человеческим геномом и может считаться многоклеточным органом, который взаимодействует с и воздействует на своего хозяина множеством способов.
Состав GM модулируется целым рядом факторов окружающей среды, таких как рацион и лечение антибиотиками. Молекулы, продуцируемые кишечными бактериями, могут быть как полезными, так и вредными, и, как известно, воздействуют на эндокринные клетки в кишечнике, энтеральную нервную систему, проницаемость кишечника и иммунную систему. Предполагают, что нарушенный состав микроорганизмов вовлечен в целый ряд воспалительных состояний, в пределах и вне кишечника, включая болезнь Крона, язвенный колит, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, диабет, пищевые аллергии, экзему и астму, а также ожирение и метаболический синдром.
Женщины в климактерический период переживают разные синдромы менопаузы. В частности, падение уровня эстрогена у женщин во время менопаузы вызывает повторное поглощение кальция из костей с уменьшением костной массы. Увеличенная потеря костной массы делает кость пористой, приводя к высокому риску остеопороза. По многим причинам женщинам нелегко в период менопаузы распознавать постменопаузные симптомы, поскольку для появления симптомов после начала менопаузы требуется продолжительный период времени. В соответствии с корейской национальной медицинской статистикой Министерства здравоохранения и социального обеспечения, сообщено, что распространенность остеопороза у людей в возрасте 30 лет или старше составляет 1% в случае мужчин и 9% в случае женщин, с 9-кратным преобладанием у женщин, по сравнению с мужчинами.
Перелом костей, вызываемый остеопорозом, является главной проблемой со здоровьем и приводит к огромной экономической нагрузке на системы здравоохранения. Пожизненный риск какого-либо остеопоротического перелома является высоким на Западе (примерно 50% в случае женщин и 20% в случае мужчин), и переломы связаны со значительной смертностью и заболеваемостью. Кортикальное вещество кости составляет приблизительно 80% кости в организме. Многие исследования показали, что кортикальное вещество кости является главным определяющим фактором прочности костей и, вследствие этого, склонности к переломам. Потеря костной массы в возрасте старше 65 лет главным образом обусловлена потерей в кортикальном веществе кости, а не в губчатых костях (Lancet, 2010, May 15; 375(9727):1729-36).
Скелет заново создается посредством остеобластов, формирующих кость (ОВ - от англ. osteoblast), и остеокластов, резорбирующих кость (OCL - от англ. osteoclast). Макрофагальный колониестимулирующий фактор (MCSF - от англ. Macrophage colony stimulating factor) увеличивает пролиферацию и выживаемость клеток - предшественников OCL, а также повышающую регуляцию экспрессии активатора рецептора ядерного фактора-κВ (RANK - от англ. receptor activator of nuclear factor-κВ) в OCL. Это обеспечивает связывание лиганда RANK (RANKL) и начало сигнального каскада, что приводит к образованию OCL. Эффект RANKL может быть ингибирован остеопротегерином (OPG - от англ. osteoprotegerin), который представляет собой рецептор-ловушку для RANKL.
Кроме того, метаболические заболевания, такие как ожирение, сахарный диабет и т.д., имеют тенденцию к росту вследствие генетических факторов и факторов окружающей среды, наряду с быстрым экономическим ростом и европеизированным режимом питания. В то время как продолжаются исследования веществ, предупреждающих и лечащих данные заболевания, требуется разработка разных функциональных продуктов питания.
Распространенность ожирения увеличивается по всему миру, одновременно возрастает заинтересованность в лечении ожирения из-за метаболических осложнений, вызываемых ожирением. Лекарственные средства против ожирения, используемые в настоящее время, обычно предназначены для подавления аппетита в результате индукции насыщения или для индукции потери массы тела в результате снижения поглощения жиров. Насыщение индуцируется посредством повышения концентрации норэпинефрина или серотонина в синапсисах нейромедиаторов или посредством стимуляции серотонинергических рецепторов или адренергических рецепторов.
Однако, лекарственные средства, разработанные для лечения ожирения, демонстрируют серьезные нежелательные эффекты, в сравнении с их фармакологическим действием. Таким образом, существует острая необходимость в разработке вещества, которое обладало бы новым механизмом действия, приводящим к превосходному действию, направленному против ожирения, с маленькими побочными эффектами.
Раскрытие изобретения
Техническая проблема
Посредством трудоемкого и всестороннего исследования авторам настоящего изобретения удалось выделить и идентифицировать штамм Lactobacillus sakei из образцов кимчи, собранных со всех частей Кореи, и они обнаружили, что данный штамм Lactobacillus sakei, выделенный из кимчи, и его культуральная жидкость оказывают эффекты ингибирования дифференцировки остеокластов, облегчения заболеваний на основе остеопороза, ингибирования дифференцировки адипоцитов и подавления набора массы тела.
Целью настоящего раскрытия, таким образом, является предложение штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP.
Другой целью настоящего раскрытия является предложение культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP.
Еще одной целью настоящего раскрытия является предложение способа выделения штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, причем способ включает стадию культивирования экстракта кимчи.
Еще одной целью настоящего раскрытия является предложение штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, который обладает активностью облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей или метаболического заболевания.
Еще одной целью настоящего раскрытия является предложение культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, который обладает активностью облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей или метаболического заболевания.
Еще одной целью настоящего раскрытия является предложение фармацевтической композиции для предупреждения или лечения заболевания костей или метаболического заболевания, содержащей культуральную жидкость штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP.
Еще одной целью настоящего раскрытия является предложение пищевой композиции для облегчения заболевания костей или метаболического заболевания, содержащей культуральную жидкость штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP.
Дополнительной целью настоящего раскрытия является применение штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, в облегчении, предупреждении или лечении заболевания костей или метаболического заболевания.
Решение проблемы
Настоящее раскрытие относится к штамму Lactobacillus sakei CVL-001, способу его выделения, композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001 или его культуральную жидкость, для облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей или метаболического заболевания.
Авторы настоящего изобретения выделили штаммы из экстрактов кимчи, осуществляли отбор грамположительных, каталаза-негативных штаммов из них и идентифицировали отобранный штамм как Lactobacillus sakei CVL-001. Кроме того, идентифицировали, что штамм или его культуральная жидкость ингибируют дифференцировку остеокластов и оказывают терапевтическое действие на заболевание костей, с подавлением набора массы тела и уменьшением уровня глюкозы в крови, наблюдаемого у мышей с ожирением, вызванным рационом с высоким содержанием жира.
Ниже будет приведено подробное описание настоящего раскрытия.
Аспект настоящего раскрытия принадлежит к штамму Lactobacillus sakei CVL-001, депонированному под номером доступа KCTC13816BP.
Штамм может включать последовательность 16S рРНК (рибосомная рибонуклеиновая кислота), представленную SEQ ID NO: 1.
Еще один аспект настоящего раскрытия принадлежит к культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP.
Штамм может включать последовательность 16S рРНК, представленную SEQ ID NO: 1.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к способу выделения штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, включающему стадию культивирования экстракта кимчи.
Экстракт кимчи может представлять собой сок из измельченной кимчи, полученный посредством измельчения кимчи и фильтрации измельченной кимчи. Например, экстракт кимчи может представлять собой разбавленный сок кимчи, полученный посредством добавления воды к соку из измельченной кимчи, но не ограничивается им.
Стадия культивирования может включать первую стадию культивирования для инкубации экстракта кимчи; и вторую стадию культивирования для культивирования штамма, выделенного на первой стадии культивирования.
Первая стадия культивирования может быть проведена в среде, содержащей 0,5-2% карбоната кальция или 0,004-0,006% бромкрезолового пурпурного, для выявления молочнокислых бактерий, например, в среде, содержащей карбонат кальция, но без ограничений ею.
Первую стадию культивирования можно проводить при температуре от 20 до 32°С в течение 36-60 часов, например, при 30°С в течение 48 часов, но, не ограничиваясь этим. Затем колонии с ореолом отбирали и подвергали второй стадии.
Вторая стадия культивирования может представлять собой стадию, на которой молочнокислые бактерии выбирают среди отобранных колоний и культивируют. Подробно, она может представлять собой стадию, на которой осуществляют отбор грамположительных, каталаза-негативных молочнокислых бактерий из выделанных штаммов.
Вторую стадию культивирования можно проводить при температуре от 20 до 32°С в течение 12-36 часов, например, при 30°С в течение 24 часов, но, не ограничиваясь этим.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к штамму Lactobacillus sakei CVL-001, депонированному под номером доступа KCTC13816BP, который обладает активностью облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей. Штамм может быть выделен из кимчи, но, не ограничиваясь ей.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, которая обладает активностью облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к фармацевтической композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, или его культуральную жидкость, для предупреждения или лечения заболевания костей.
Заболевание костей может быть выбрано из остеопороза, метастатического рака кости, остеомаляции, рахита, фиброзного остита, адинамической болезни кости, метаболического заболевания и периодонтита, например, остеопороза, но, не ограничиваясь ими.
Культуральная жидкость может представлять собой супернатант, полученный посредством культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и удаления вышеуказанного, его концентрат, его фракцию или его лиофилизат.
Культуральная жидкость может быть получена в результате культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в течение 12-30 часов, 12-24 часов, 18-30 часов или 18-24 часов, например, 22-26 часов, но, не ограничиваясь этим. При заданном пороговом значении 24 часа, ингибирующая активность в отношении дифференцировки остеокластов не повышается при культивировании зависимым от времени образом, когда время культивирования превышает пороговое значение.
Для культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 можно использовать среду Альфа-МЕМ.
Подробно, среда ВМЕ (от англ. Basal Media Eagle - базальная среда Игла), которую получают в результате исследования необходимых питательных веществ, неорганических солей и витаминов, необходимых для роста клеток, представляет собой основной состав для MEM и DMEM, обе из которых широко используются. MEM (от англ. Minimum Essential Media Eagle - минимальная основная среда Игла) имеет более высокую концентрацию аминокислот, чем ВМЕ, и содержит соли Эрла для буферизующего действия CO2/NaHCO3. В соответствии с типами клеток, можно использовать среду, дополнительно дополненную заменимыми аминокислотами, или среду, содержащую соли Хэнка, вместо солей Эрла. Дополненная аминокислотами, витаминами и т.д., среда Альфа-МЕМ (MEM, модификация Альфа) является полезной для трансформации ДНК в животных клетках.
Композиция может содержать культуральную жидкость в концентрации от 50 до 400, от 50 до 350, от 50 до 300, от 50 до 250, от 100 до 400, от 100 до 350, от 100 до 300, от 100 до 250, от 150 до 400, от 150 до 350, от 150 до 300, от 150 до 250, от 180 до 400, от 180 до 350 или от 180 до 300 мкл/мл, например, от 180 до 250 мкл/мл, но, не ограничиваясь ими.
Культуральная жидкость может иметь рН от 6,5 до 8,5, от 6,5 до 8,0, от 6,5 до 7,5, от 7,0 до 8,5 или от 7,0 до 8,0, например, рН 7,0-7,5, но не ограничивается им.
При росте молочнокислых бактерий, продуцируются метаболиты, такие как молочная кислота и т.д., делая культуральную жидкость кислотной, рН которой попадает в диапазон рН, неподходящий для культивирования клеток. Исходя из данной ситуации, рН 7,4 является наиболее подходящим для культивирования клеток.
Предупреждение и лечение заболевания костей может быть достигнуто посредством ингибирования дифференцировки остеокластов, но, не ограничиваясь им.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к фармацевтической композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, или его культуральную жидкость, для предупреждения или лечения метаболического заболевания.
Метаболическое заболевание может представлять собой по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, состоящей из ожирения, сахарного диабета, гипертензии, гиперлипидемии, сердечнососудистого заболевания и гиперинсулинемии.
Фармацевтическая композиция может содержать штамм Lactobacillus sakei CVL-001 в концентрации от 5×105 до 5×1012 КОЕ (колониеобразующая единица)/мл, от 5×106 до 5×1011 КОЕ/мл или от 5×107 до 5×1010 КОЕ/мл, например, от 5×108 до 5×109 КОЕ/мл, но, не ограничиваясь этим.
Культуральная жидкость может быть получена посредством культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на протяжении 12-30 часов, 12-24 часов, 18-30 часов или 18-24 часов, например, 22-26 часов, но, не ограничиваясь этим. При заданном пороговом значении 24 часа, эффект подавления набора массы тела или уменьшения уровней глюкозы в крови не значимо увеличивается зависимым от времени образом, когда время культивирования превышает пороговое значение.
Культуральная жидкость может представлять собой супернатант культуры, полученный посредством культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и удаления вышеуказанного, его концентрат, его фракцию или его лиофилизат.
Культуральная жидкость может иметь рН 6,5-8,5, 6,5-8,0, 6,5-7,5, 7,0-8,5 или 7,0-8,0, например, рН 7,0-7,5, но, не ограничиваясь этим.
При росте молочнокислых бактерий, продуцируются метаболиты, такие как молочная кислота и т.д., делая культуральную жидкость кислотной, рН которой попадает в диапазон рН, неподходящий для культивирования клеток. Исходя из данной ситуации, рН 7,4 является наиболее подходящим для культивирования клеток.
Фармацевтическая композиция по настоящему раскрытию может использоваться в виде фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и/или фармацевтически приемлемый носитель.
В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «фармацевтически эффективное количество» относится к количеству, которое обеспечивает в достаточной степени достижение эффективности или активности культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001.
Фармацевтически приемлемый носитель, содержащийся в фармацевтической композиции по настоящему раскрытию, может представлять собой любой фармацевтически приемлемый носитель, который обычно используется в композициях. Примеры данного носителя включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло и тому подобное, но не ограничиваются ими. Помимо данных носителей фармацевтическая композиция по настоящему раскрытию может дополнительно содержать смазывающее вещество, увлажнитель, подсластитель, корригент, эмульгатор, суспендирующий агент, консервант и т.д.
Фармацевтическая композиция по настоящему раскрытию может быть введена млекопитающим, включая человека, разными способами. Все возможные способы введения могут быть рассмотрены, включая, например, пероральный, накожный, внутривенный, внутримышечный, подкожный и другие способы, с предпочтением в отношении перорального способа.
Подходящая доза фармацевтической композиции по настоящему раскрытию может варьировать в зависимости от способов приготовления фармацевтической композиции, способов введения, возраста пациента, массы тела, пола, тяжести заболеваний, рациона, времени введения, способа введения, скорости экскреции и чувствительности. Лечащие врачи со средними навыками могут легко определять и диагностировать уровень дозировки лекарственного средства, эффективный для желательного лечения или предупреждения целевых нарушений или заболеваний.
Фармацевтическая композиция по настоящему раскрытию может быть приготовлена в однодозовой форме и многодозовой форме в соответствии со способами, которые могут осуществляться специалистом в данной области, используя фармацевтически приемлемый носитель и/или наполнитель. В связи с этим, композиция может находиться в форме раствора в масляной или водной среде, суспензии или эмульсии, экстракта, порошка, гранулы, таблетки, капсулы или геля (например, гидрогеля), и может дополнительно содержать диспергирующее средство или стабилизатор.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к пищевой композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, или его культуральную жидкость, для облегчения заболевания костей.
Заболевание костей может быть выбрано из остеопороза, метастатического рака кости, остеомаляции, рахита, фиброзного остита, адинамической болезни кости, метаболического заболевания и периодонтита, например, остеопороза, но, не ограничиваясь ими.
Культуральная жидкость может представлять собой супернатант, полученный посредством культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и удаления вышеуказанного, его концентрат, его фракцию или его лиофилизат.
Культуральная жидкость может быть получена в результате культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в течение 12-36 часов, 12-30 часов, 12-24 часов, 18-36 часов, 18-30 часов или 18-24 часов, например, 22-26 часов, но без ограничения этим.
Композиция может содержать культуральную жидкость в концентрации 20-400, 20-350, 20-300, 20-250, 50-400, 50-350, 50-300, 50-250, 100-400, 100-350, 100-300, 100-250, 150-400, 150-350, 150-300, 150-250, 180-400, 180-350 или 180-300 мкл/мл, например, 180-250 мкл/мл, но без ограничений ими.
Культуральная жидкость может иметь рН от 6,5 до 8,5, от 6,5 до 8,0, от 6,5 до 7,5, 7,0 до 8,5 или от 7,0 до 8,0, например, рН от 7,0 до 7,5, но не ограничивается этим.
Облегчение заболевания костей могло быть достигнуто посредством ингибирования дифференцировки остеокластов, но без ограничений им.
Еще один аспект настоящего раскрытия относится к оздоровительной функциональной пищевой композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, или его культуральную жидкость, для облегчения метаболического заболевания.
Метаболическое заболевание может представлять собой по меньшей мере одно метаболическое заболевание, выбранное из группы, состоящей из ожирения, сахарного диабета, гипертензии, гиперлипидемии, сердечнососудистого заболевания и гиперинсулинемии.
Оздоровительная функциональная пищевая композиция может содержать штамм Lactobacillus sakei CVL-001 в концентрации от 5×105 до 5×1012 КОЕ/мл, от 5×106 до 5×1011 КОЕ/мл или от 5×107 до 5×1010 КОЕ/мл, например, от 5×108 до 5×109 КОЕ/мл, но без ограничений этим.
Культуральная жидкость может быть получена посредством культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в течение 12-36 часов, 12-30 часов, 12-24 часов, 18-36 часов, 18-30 часов или 18-24 часов, например, 22-26 часов, но без ограничений этим.
Культуральная жидкость может представлять собой супернатант культуры, полученный посредством культивирования штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и удаления вышеуказанного, его концентрат, его фракцию или его лиофилизат.
Культуральная жидкость может иметь рН 6,5-8,5, 6,5-8,0, 6,5-7,5, 7,0-8.,5 или 7,0-8,0, например, рН 7,0-7,5, но не ограничивается этим.
При использовании в качестве пищевой добавки, пищевую композицию по настоящему раскрытию можно добавлять, как она есть, или можно использовать в комбинации с другой пищей или пищевым ингредиентом, и можно подходящим образом применять общепринятым образом. В получении пищевых продуктов или напитков пищевую композицию можно обычно добавлять в количестве 15 масс.% или меньше и предпочтительно в количестве 10 масс.% в расчете на массу сырого вещества.
Никаких конкретных ограничений не накладывается на типы пищевых продуктов, для которых можно применять пищевую композицию. Примеры добавляемых пищевых продуктов включают мясные продукты, сосиски, хлебобулочные изделия, шоколад, конфеты, закуски, кондитерские изделия, пиццу, рамен, другие типы лапши, жевательные резинки, молочные продукты, включая виды мороженого, разные типы супов, напитки, чаи, напитки, алкогольные напитки и комплексы витаминов и, в соответствии со здравым смыслом, все типы пищевых продуктов.
Напитки могут содержать разные ароматизаторы или природные углеводы в качестве дополнительных ингредиентов. Примеры природных углеводов включают моносахариды, такие как глюкоза и фруктоза, дисахариды, такие как мальтоза и сахароза, натуральные подсластители, такие как декстран и циклодекстран, и синтетические подсластители, такие как сахарин и аспартам. Количество природных углеводов может быть соответствующим образом определено специалистом в данной области.
Кроме того, композиция по настоящему раскрытию может содержать разные питательные вещества, витамины, электролиты, ароматизаторы, красители, пектиновую кислоту или ее соли, альгиновую кислоту или ее соли, органические кислоты, защитные коллоидные загустители, регуляторы рН, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирт, карбонизирующие агенты, используемые в газированных напитках, и т.д. Кроме того, пищевая композиция по настоящему раскрытию может содержать фруктовую мякоть для получения натуральных фруктовых соков, напитков на основе фруктового сока и овощных соков. Данные компоненты можно использовать отдельно или в сочетании. Содержания данных добавок в композиции могут быть соответствующим образом выбраны специалистом в данной области.
Преимущественные эффекты изобретения
Настоящее раскрытие относится к штамму Lactobacillus sakei CVL-001 и способу его выделения. Штамм может быть выделен из кимчи и, как таковой, может преимущественно использоваться в пробиотическом агенте или пищевой добавке.
Кроме того, настоящее раскрытие относится к композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001 или его культуральную жидкость, для облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей. Демонстрируя эффект ингибирования дифференцировки остеокластов, облегчения остеопоротических заболеваний и подавления адипогенной дифференцировки и набора массы тела, штамм Lactobacillus sakei, выделенный из кимчи, и его культуральная жидкость могут находить преимущественные применения в облегчении, предупреждении или лечении заболевания - остеопороза или ожирения.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1а представляет собой графическое изображение, показывающее ингибирующее действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на дифференцировку остеокластов.
Фиг. 1b представляет собой график, показывающий ингибирующее действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на дифференцировку остеокластов.
Фиг. 2 представляет собой фотографическое изображение, показывающее вестерн-блоты, которые объясняют ингибирующее действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на фосфорилирование белков, индуцирующих дифференцировку остеокластов.
Фиг. 3 демонстрирует графики, которые объясняют ингибирующее действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на экспрессию генов, индуцирующих дифференцировку остеокластов.
Фиг. 4 представляет собой график, показывающий возрастающее действие штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и его культуральной жидкости на минеральную плотность костной ткани в мышиных моделях с индуцированным остеопорозом.
Фиг. 5 представляет собой график, показывающий ингибирующее действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на дифференцировку адипоцитов.
Фиг. 6 представляет собой график, показывающий ингибирующее действие штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на набор массы тела со временем в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров.
Фиг. 7 представляет собой график, показывающий действие штамма Lactobacillus sakei CVL-001, заключающееся в уменьшении массы эпидидимальной жировой ткани в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров.
Фиг. 8 представляет собой график, показывающий ингибирующее действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 на набор массы тела со временем в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров.
Фиг. 9 представляет собой график, показывающий действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001, заключающееся в уменьшении массы эпидидимальной жировой ткани в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров.
Фиг. 10 представляет собой график, показывающий противодиабетическое действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров, как измерено посредством теста толерантности к глюкозе.
Фиг. 11 представляет собой график, показывающий противодиабетическое действие штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров, как измерено посредством теста толерантности к глюкозе.
Фиг. 12 представляет собой график, показывающий противодиабетическое действие культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров, как измерено посредством теста на толерантность к инсулину.
Фиг. 13 представляет собой график, показывающий противодиабетическое действие штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в опытных группах, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров, как измерено посредством теста на толерантность к инсулину.
Наилучший способ осуществления изобретения
Настоящее раскрытие относится к штамму Lactobacillus sakei CVL-001, депонированному под номером доступа KCTC13816BP, обладающему активностью облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей.
Способ осуществления изобретения
Лучшее понимание настоящего раскрытия может быть получено посредством следующих примеров, которые изложены для иллюстрации, а не для того, чтобы рассматриваться как ограничивающие настоящее раскрытие.
Если не указано иное, «%», используемый для того, чтобы показать концентрации конкретных веществ, означает масс./масс.% в следующем случае: твердое вещество/твердое вещество, масс./об.% в следующем случае: твердое вещество/жидкость и об./об.% в следующем случае: жидкость/жидкость на всем протяжении описания изобретения.
Пример 1: Выделение штамма
Пекинскую капусту кимчи сразу после приготовления собирали со всех частей Кореи. При хранении при 6°С плюс/минус 0,5°С с недели 0 по неделю 5, собранную кимчи использовали в качестве образцов кимчи для выделения молочнокислых бактерий. Ручной блендер (Hanil Со, Корея) использовали для измельчения 500 г кимчи с последующей фильтрацией через стерильную марлю. Фильтрат подвергали серийному разведению стерильной водой от 101 до 107 раз. Наконец, 107-кратно разведенный сок кимчи распределяли по агару.
Разведенный сок кимчи распределяли по агару MRS (от англ. Man-Rogosa-Sharpe - Ман-Рогоза-Шарп) (Difco Co., Франция), содержащему 2% карбоната кальция (СаСО3), и инкубировали при 30°С в течение 48 часов перед отбором колоний с ореолом. Отобранные колонии подвергали окрашиванию по Граму (набор для окрашивания по Граму, BD Co., США) и тестированию на каталазу (Biomerieux Co., Франция) для аккуратного отбора грамположительной колонии, негативной в отношении каталазы, в качестве молочнокислых бактерий.
Штаммы молочнокислых бактерий, выделенные таким образом, инокулировали в бульон MRS, инкубировали при 30°С в течение 24 часов, и к ним добавляли 25 об./об.% глицерина для получения глицериновых стоков, которые хранили при -70°С до применения.
Пример 2: Идентификация молочнокислых бактерий
Отобранную в конечном итоге молочнокислую бактерию Lactobacillus sakei CVL-001 идентифицировали посредством секвенирования 16S рРНК. После полного выделения штаммы, распределенные по чашкам с MRS, доставляли посредством службы доставки замороженных упаковок в SolGent (Daejeon, Корея), где штаммы анализировали посредством секвенирования 16S рРНК с набором универсальных праймеров 27F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3') и 1492R (5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3').
Выделенный штамм Lactobacillus sakei CVL-001, как определяли, имеет 16S рРНК-кодирующую нуклеотидную последовательность, состоящую в общей сложности из 1439 п.н., показанную ниже, в Таблице 1.
В отношении нуклеотидной последовательности, полученной выше, поиск сходства последовательностей запускали посредством программного обеспечения Blast (www.ncbi.nlm.nhi.gov) для зарегистрированной базы данных (база данных GenBank). В результате штамм в конечном итоге идентифицировали как Lactobacillus sakei LZ217 из-за 99%-ного сходства между ними.
С учетом результатов, полученных выше, а именно, морфологических признаков, способности к сахарному обмену, и результатов секвенирования 16S рРНК, штамм Lactobacillus sakei CVL-001 с прекрасной продуктивностью маннита и жизнеспособностью (преобладание) в соке кимчи, идентифицировали как Lactobacillus sakei LZ217.
Выделенный штамм называли Lactobacillus sakei CVL-001 и депонировали в корейскую коллекцию типовых культур, расположенную в 823, Shinjung-dong, Jeongeup City, Jeollabuk-do, Корея.
Пример 3: Получение культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001
Культуру для использования в применении к клеткам получали посредством культивирования Lactobacillus sakei CVL-001 в течение 24 часов в среде альфа-МЕМ, центрифугирования клеточной культуры и регулирования рН у отделенного супернатанта до 7,4.
Пример 4: Анализ ингибирующей активности культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в отношении дифференцировки остеокластов
Макрофаги мыши высевали при плотности 2×105 клеток/лунка в 12-луночные планшеты и инкубировали в течение 24 часов. После замены среды средой с добавлением фетальной телячьей сыворотки (далее в данном документе называемой «FBS» (от англ. fetal bovine serum)), 1% пенициллина-стрептомицина (далее в данном документе называемых «PS» (от англ. penicillin-streptomycin)) и макрофагального колониестимулирующего фактора (далее в данном документе называемого «М-CSF» (от англ. macrophage colony stimulating factor)), клетки инкубировали с культуральной жидкостью (50, 100 и 200 мкл/мл) в течение 2 часов. Затем, клетки обрабатывали 100 нг/мл RANKL (от англ. receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand - лиганд рецептора-активатора ядерного фактора каппа-В) в течение 24 часов и обеспечивали дифференцировку в течение 6 суток способом, описанным выше.
Затем, хромогенный субстрат для цитохимического фермента-маркера, устойчивой к тартрату кислой фосфатазы (далее в данном документе называемой «TRAP» (от англ. tartrate-resistant acid phosphatase)), добавляли для окрашивания ядер. Многоядерные клетки с тремя или более ядрами наблюдали и получали изображения.
Применимо к макрофагам, RANKL связывается с RANK, вызывая дифференцировку в TRAP-позитивные клетки. Стимуляция TRAP-позитивных клеток фактором воспаления, таким как RANKL, TNF-α (от англ. tumor necrosis factor alpha - фактор некроза опухоли альфа) и т.д. превращает слияние клеток в многоядерные TRAP-позитивные клетки.
Как показано на Фиг. 1а и 1b и в Таблице 2, обработка макрофага RANKL повышала уровень дифференцировки в остеокласты, и наблюдали, что культуральная жидкость значимо уменьшала число остеокластов дозозависимым образом. Из данного результата было понятно, что культуральная жидкость Lactobacillus sakei CVL-001 может ингибировать дифференцировку остеокластов.
Пример 5: Анализ ингибирующей активности культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001 в отношении экспрессии белка, индуцирующего дифференцировку остеокластов
Проводили исследование механизма MAPK (от англ. mitogen-activated protein kinase - митоген активируемая протеинкиназа) - и NF-κВ-сигнализации, когда мышиные макрофаги обрабатывались RANKL и культуральной жидкостью. С этой целью мышиные макрофаги высевали при плотности 4×105 клеток/лунка в 12-луночные планшеты и инкубировали в течение 24 часов. После замены среды средой, дополненной FBS, 1% PS и M-CSF, культуральную жидкость штамма Lactobacillus sakei CVL-001 (100 мкл/мл) инкубировали в течение 2 часов. Затем, клетки обрабатывали 100 нг/мл RANKL в течение 0, 5, 15 и 30 мин.
После удаления среды белки экстрагировали буфером, лизирующим белок, и количественно оценивали, и 30 мкг белков разделяли в геле SDS-PAGE (от англ. sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия). Белки переносили на мембрану, последовательно инкубировали с первичными и вторичными антителами (p-jnk (Cell Signaling Technology, №9251S), p-p38 (Cell Signaling Technology, 9211S), p-ERK (Santa Cruz, sc-7383), Ikbalpha (Cell Signaling Technology, 9242S), p-p65 (Cell Signaling Technology, 3031S)). Развитие окраски осуществляли, используя набор (BIO-RAD, набор растворов для выявления ECL) и измеряли посредством устройства (Chemidoc).
RANKL связывается с RANK, осуществляя повышающую регуляцию экспрессии MAPK и NF-κВ посредством TRAF6 и индуцируя активацию разных транскрипционных факторов, приводя к стимуляции дифференцировки остеокластов. Таким образом, проводили исследование для того, чтобы посмотреть, вмешивается ли культуральная жидкость Lactobacillus sakei в данные механизмы, ингибируя дифференцировку остеокластов. В связи с этим, анализировали фосфорилирование MAPK-белков ERK, JNK и р38 посредством вестерн-блоттинга.
В результате, повышенные уровни фосфорилирования JNK, Р38 и ERK наблюдались через 5 и 15 мин после инкубации с RANKL, тогда как MAPK-белки были дефосфорилированы в результате обработки культуральной жидкостью. Кроме того, ингибирование наблюдалось как в отношении деградации IκВ альфа, так и в отношении фосфорилирования р65.
Как понятно по данным Фиг. 2, культуральная жидкость Lactobacillus sakei ингибирует фосфорилирование JNK, Р38 и ERK, подавляя, таким образом, дифференцировку в остеокласты.
Пример 6: Анализ воздействия культуральной жидкости Lactobacillus sakei на экспрессию гена, индуцирующего дифференцировку остеокластов
После обработки культуральной жидкостью Lactobacillus sakei мышиные макрофаги анализировали в отношении экспрессии гена TRAP, DC-STAMP, Катепсина K и NFATc1, которые представляют собой гены, участвующие в остеокластогенезе, посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция) в реальном времени. Макрофаги костномозгового происхождения (далее в данном документе называемые «BMDM» (от англ. bone marrow-derived macrophage)) высевали при плотности 1×105 клеток/лунка в 12-луночные планшеты и инкубировали в течение 24 часов. Далее, клетки обрабатывали средой, не содержащей FBS, с добавлением только 1% PS в течение 1 часа и затем 100 мкл/мл культуральной жидкости Lactobacillus sakei в течение 2 часов с последующей инкубацией с RANKL на протяжении 24 часов. Данным образом, клетки подвергали дифференцировке в течение 3 суток перед выделением РНК из клеток с помощью раствора Тризола. На основе количественного определения РНК заранее приготовленную смесь RT (от англ. reverse transcription - обратная транскрипция) использовали для синтеза кДНК, которую затем амплифицировали посредством ПЦР в реальном времени с использованием праймеров.
Используемые праймеры конструировали для мышиных TRAP, DC-STAMP, Катепсина K и NFATc1, которых анализировали в количествах относительно контрольного гена GAPDH (от англ. Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase - глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа).
Макрофаги подвергаются дифференцировке в TRAP-позитивные, многоядерные остеокласты при обработке RANKL, который связывается с RANK. Кроме того, обработка RANKL активирует NFATc1, который представляет собой транскрипционный фактор, играющий важную роль в дифференцировке в остеокласты и осуществляет повышающую регуляцию экспрессии TRAP, Катепсина K и DC-STAMP, которые участвуют в остеокластогенезе.
Как может быт видно на Фиг. 3 и в Таблице 3, уровни экспрессии TRAP, DC-STAMP, Катепсина K и NFATc1, которые были повышены в результате обработки RANKL, снижались в результате обработки культуральной жидкостью Lactobacillus sakei. Эти данные подразумевают, что культуральная жидкость Lactobacillus sakei ингибирует активность транскрипционного фактора NFATc1, осуществляя понижающую регуляцию экспрессии TRAP, DC-STAMP и Катепсина K, которые представляют собой гены, участвующие в остеокластогенезе, подавляя, таким образом, дифференцировку остеокластов.
Пример 7: Конструирование животной модели остеопороза посредством овариэктомии у мышей
Самок мышей C57BL/6 (в возрасте 7 недель) размещали в пластмассовых клетках, в которых поддерживалась температура 22 плюс/минус 2°С и относительная влажность 50 плюс/минус 10% с фотопериодом 12 ч света и 12 ч темноты. Мышей акклиматизировали к одной и той же окружающей среде на протяжении примерно одной недели перед овариэктомией.
Мышам давали наркоз с использованием внутримышечной инъекции Zoletil и Lumpun, после которой область овариэктомии сбривали и стерилизовали. На коже проводили надрез 1 см. Затем, вдоль матки аккуратно выявляли яичник, чтобы не повредить другие органы, и сшивали с помощью шовного материала таким образом, чтобы резецировать противоположные яичники. После овариэктомии каждый из органов повторно позиционировали в пределах брюшной полости, и надрез сшивали посредством нити. С 10 суток терапевтическое вещество вводили в течение 8 недель.
Введение молочнокислых бактерий: после предварительной культивации и основной культивации Lactobacillus sakei разделяли на аликвоты 1×107, 1×108 и 1×109 клеток/мл и вводили перорально.
Введение культуральной жидкости: после предварительной культивации и основной культивации Lactobacillus sakei делили на аликвоты 1×107, 1×108 и 1×109 клеток/мл. Аликвоты клеток разводили в 10 раз и культивировали в среде MRS при 30°С в течение 24 часов. Клетки осаждали посредством центрифугирования, и супернатант культуральной жидкости собирали, и его рН доводили до 7,4 перед пероральным введением в дозе 200 мкл.
Опытные группы делили следующим образом:
Мыши C57BL/6; 80 голов
G5: опытная группа, которую подвергали овариэктомии (OVX), 10 голов, вводили культуральную жидкость (разведенную в 1/4)
G6: опытная группа, которую подвергали овариэктомии (OVX), 10 голов, вводили культуральную жидкость (разведенную в 1/2)
G7: опытная группа, которую подвергали овариэктомии (OVX), 10 голов, вводили культуральную жидкость (сток)
G8: опытная группа, которую подвергали овариэктомии (OVX), 10 голов, вводили Lactobacillus sakei в дозе 1×107 клеток/мл
G9: опытная группа, которую подвергали овариэктомии (OVX), 10 голов, вводили Lactobacillus sakei в дозе 1×108 клеток/мл
G10: опытная группа, которую подвергали овариэктомии (OVX), 10 голов, Lactobacillus sakei вводили в дозе 1×109 клеток/мл.
Пример 8: Оценка минеральной плотности костной ткани у мышей с индуцированным остеопорозом в соответствии с введением Lactobacillus sakei и его культуральной жидкостью
Минеральные плотности костной ткани измеряли с использованием компьютерной микротомографии (micro-CT - от англ. microcomputed tomography), которая может обеспечить изображения с более высоким разрешением, чем простая рентгенография и компьютерная томография.
После завершения эксперимента мышиные ноги фиксировали формалином и анализировали в отношении минеральной плотности костной ткани в лабораторном животном центре медицинского инновационного фонда Daegu-Gyeongbuk.
Известно, что у мышей, подвергающихся овариэктомии, уменьшается минеральная плотность костной ткани вследствие неэффективности эстрогена и тому подобное, они широко используются для исследования заболеваний остеопороза.
Как может быть видно на Фиг. 4 и в Таблице 4, наблюдали, что у группы мышей после овариэктомии (G4) значимо уменьшалась минеральная плотность костной ткани, по сравнению с группами имитации. Между тем, штамм Lactobacillus sakei и его культуральная жидкость увеличивали минеральную плотность костной ткани дозозависимым образом. В частности, группы, которым вводили сток культуральной жидкости (G7) и высокую концентрацию бактерий (G10), восстанавливали минеральную плотность костной ткани до уровней вплоть до уровней в группах имитации, не подвергавшихся овариэктомии.
Пример 9: Анализ ингибирующего действия культуральной жидкости штамма Lactobacillus sakei CVL-001, выделенного из кимчи, на дифференцировку адипоцитов (in vitro)
9-1. Получение культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001
Lactobacillus sakei CVL-001 культивировали при плотности 1×108 КОЕ/мл в среде DMEM в течение 24 часов с последующим центрифугированием. рН супернатанта, полученного таким образом, доводили до 7,4, обеспечивая получение культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001.
9-2. Дифференцировка адипоцитов с использованием линии недифференцированных преадипоцитов 3T3-L1
Преадипоциты 3T3-L1, приобретенные у АТСС (Американская коллекция типовых культур, США), поддерживали посредством пассажа в DMEM с добавлением 10% бычьей телячьей сывороткой (BCS - от англ. bovine calf serum) и 1% PS. Сутки, в которые клетки достигали 100% конфлюентности после засевания в планшеты, обозначали как сутки -2. Пока клетки культивировали в течение еще двух суток, клеточный цикл был приостановлен на уровне фазы G1 во всех клетках, культивируемых в планшетах.
В сутки 0 клеткам давали начать дифференцировку в присутствии IBMX (от англ. 3-isobutyl-1-methylxanthine - 3-изобутил-1-метилксантин), дексаметазона и инсулина (MDI). В сутки 2 среду заменяли средой, содержащей только инсулин. С суток 4 среду заменяли средой с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS) каждые двое суток до дифференцировки.
9-3. Анализ ингибирующей активности культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001 в отношении дифференцировки адипоцитов (окрашивание масляным красным О)
Дифференцировку адипоцитов индуцировали, когда бычью телячью сыворотку (BCS) в составе среды заменяли FBS. Клетки 3T3-L1 высевали при плотности 5×105 клеток/лунка в 12-луночные планшеты, содержащие среду, дополненную 10% FBS и 1% PS. Через двое суток после достижения клетками 100% конфлюентности, а именно, в сутки 0, клетки обрабатывали культуральной жидкостью (12,5, 25,0 и 50,0%) в течение 2 часов и затем индуктором адипогенеза MDI.
Культуральную жидкость получали в результате культивирования L. sakei в концентрации 1×108 КОЕ/мл в среде DMEM (высокое содержание глюкозы) + FBS (10%) + PS (1%) в течение 24 часов, и разведение культуральной жидкости проводили с помощью среды DMEM.
В сутки 2 клетки инкубировали с культуральной жидкостью (12,5, 25,0 и 50,0%) в течение 2 часов, в то время как среду заменяли с последующей обработкой инсулином. В сутки 4 клетки инкубировали с культуральной жидкостью (12,5, 25,0 и 50,0%) одновременно с заменой среды. Ту же процедуру повторяли каждые двое суток до дифференцировки.
Когда наблюдались дифференцированные адипоциты, среду заменяли 4% формалином для фиксации клеток в течение 10 мин. Для окрашивания адипоцитов клетки два раза промывали D.W. (от англ. distilled water - дистиллированная вода) и инкубировали со смесью 6:4 (краситель масляный красный О : D.W) в течение 30 мин. За промывкой D.W. следовало исследование под микроскопом. Затем масляный красный О экстрагировали 100% изопропанолом, и проводили количественный анализ посредством считывания поглощения при 510 нм.
Как понятно из данных Фиг. 5 и Таблицы 5, клетки 3T3-L1 подвергались адипогенной дифференцировке, когда к среде клеточной культуры добавляли MDI. В результате данного исследования воздействие на клетки 3T3-L1 MDI увеличивало адипогенную дифференцировку, тогда как наблюдалось, что культуральная жидкость значимо уменьшала число адипоцитов дозозависимым образом.
В целом, данные подразумевают, что культуральная жидкость Lactobacillus sakei CVL-001 может ингибировать адипогенную дифференцировку.
Пример 10: Конструирование животной мышиной модели ожирения для анализа эффекта уменьшения ожирения (in vivo)
10-1. Получение живых Lactobacillus sakei CVL-001
Получали живые бактерии, подлежащие применению. Кратко, бактерии культивировали в течение 24 часов при 30°С на чашках с агаром MRS, и единичную колонию, образованную таким образом, отбирали и предварительно культивировали в бульоне MRS. Предварительное культивирование проводили в 5 мл среды при 30°С в течение 24 часов при встряхивании при 150 об/мин. Затем 10-кратное разведение культуры наращивали в течение 3 часов в тех же условиях.
Для сохранения равновесия между количеством клеток, полученные в конечном итоге культуры разводили в PBS (от англ. phosphate buffered saline - фосфатно-солевой буферный раствор) до достижения оптической плотности при 600 нм (OD600) 0,6, как измерено посредством спектрофотометра. Значение O.D. соответствует существованию молочнокислых бактерий в концентрации 0,89×109 КОЕ/мл. С введением 200 мкл каждой мыши (1×108 КОЕ/мышь, 1×109 КОЕ/мышь) внутрь, среды живых бактерий получали посредством центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 мин.
10-2. Получение культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001
Среду MRS, в которой было завершено размножение Lactobacillus sakei, разводили в 10 раз, инкубировали при 30°С в течение 24 часов при встряхивании при 150 об/мин. После центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 мин, супернатант отделяли, и его рН доводили до 7,4. Проводили фильтрацию через 0,45 мкм мембранный бумажный фильтр перед хранением при 4°С.
10-3. Анализ активности штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и культуральной жидкости, направленной против ожирения (in vivo)
Самцам мышей C57BL/6 в возрасте 7 недель вводили живые бактерии (однократная суточная доза 200 мкл/субъект), культуральную жидкость (однократная суточная доза 200 мкл/субъект) и рацион с высоким содержанием жиров. Далее, мышей взвешивали каждые две недели. На неделе 11 у мышей измеряли уровни сахара в крови. На неделе 14 на мышах проводили вскрытие, после которого производили забор образцов крови, и взвешивали органы.
Информация о группах, используемых для анализа данного штамма, выглядела следующим образом:
G1: контрольная группа (кормили нормальным рационом), перорально вводили PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) (n=6)
G2: Контрольная группа, перорально вводили 109 L. sakei (n=6)
G3: Группа высокого содержания жиров (кормили рационом с высоким содержанием жиров), перорально вводили PBS (n=8)
G4: Группа высокого содержания жиров, перорально вводили 108 L. sakei (n=8)
G5: Группа высокого содержания жиров, перорально вводили 109 L. sakei (n=8)
Информация о группах, используемых для анализа культуральной жидкости, выглядела следующим образом:
G1: Контрольная группа (кормили нормальным рационом), перорально вводили MRS (n=6)
G2: Контрольная группа, перорально вводили культуральную жидкость (сток) (n=6)
G3: Группа высокого содержания жиров (кормили рационом с высоким содержанием жиров), перорально вводили MRS (n=8)
G4: Группа высокого содержания жиров, перорально вводили культуральную жидкость (разведенную в 1/2) (n=8)
G5: Группа высокого содержания жиров, перорально вводили культуральную жидкость (сток) (n=8).
Пример 11: Анализ действия штамма Lactobacillus sakei CVL-001, выделенного из кимчи, и его культуральной жидкости (in vivo)
11-1. Изменение в массе тела под действием штамма Lactobacillus sakei CVL-001 или его культуральной жидкости (in vivo)
Пероральное введение рациона с высоким содержанием жиров, включающего 60% жиров, как известно, дополнительно увеличивает массу мышей, по сравнению с пероральным введением нормального рациона. Таким образом, животные модели ожирения, вызванного рационом с высоким содержанием жиров, широко используются для исследований заболеваний, связанных с ожирением.
Как может быть видно на Фиг. 6, значимый набор массы тела наблюдали в группе, которую кормили рационом с высоким содержанием жиров (G3), по сравнению с группой, которую кормили нормальным рационом (G1). В частности, наблюдали, что группы (G4 и G5), которых кормили штаммом Lactobacillus sakei CVL-001, в дозе 108 и 109 клеток, соответственно, вместе с рационом с высоким содержанием жиров, значимо уменьшались по массе, в сравнении с G3.
Как показано на Фиг. 7 и в Таблице 6, у G3, которую кормили высоким содержанием жиров, значимо увеличивалась масса эпидидимального жира, по сравнению с G1, в то время как значимое уменьшение массы эпидидимального жира наблюдали в G5, которую кормили штаммом в дозе 109 клеток вместе с рационом с высоким содержанием жиров. Как показано на Фиг. 8, наблюдали, что у группы, которую кормили рационом с высоким содержанием жиров (G3), значимо увеличивалась масса тела, по сравнению с группой, которую кормили нормальным рационом (G1). В частности, значимое уменьшение массы тела выявляли в группе (G5), которую кормили стоком культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001 вместе с рационом с высоким содержанием жиров, по сравнению с G3. Набор массы тела, вызываемый рационом с высоким содержанием жиров, не подавлялся введением культуральной жидкости, разведенной в 1/2 (G4).
Как понятно из данных Фиг. 9 и Таблицы 7, масса эпидидимального жира также значимо увеличивалась в группе G3, которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, и значимо уменьшалась в G5, которую кормили стоком культуральной жидкости вместе с рационом с высоким содержанием жиров, по сравнением с группой G1, которую кормили нормальным рационом.
11-2. Анализ уровня сахара в крови, проводимый натощак, у мышей, у которых вызвано ожирение, после введения штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и культуральной жидкости
После голодания на протяжении 12 часов с 9 часов вечера перед днем эксперимента до 9 часов утра в день эксперимента, мышей подвергали анализу уровня сахара в крови. Как измеряли, у животных мышиных моделей, которых кормили рационом с высоким содержанием жиров, сохранялись высокие уровни сахара в крови натощак. Анализы для опытных групп проводили в тех же условиях, как в Примере 10-3, и группы, которым вводили штамм и культуральную жидкость, перечислены в Таблицах 8 и 9, соответственно.
Как может быть видно в Таблице 8, группа G3, которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, поддерживала значимо высокий уровень глюкозы в крови натощак, по сравнению с группой G1, которую кормили нормальным рационом, в данном эксперименте. В частности, уровни глюкозы в крови в G4 и G5, которым вводили штамм Lactobacillus sakei CVL-001 в разных дозах вместе с рационом с высоким содержанием жиров, были ниже, чем уровни глюкозы в крови G3, и похожи на уровни глюкозы в крови группы G1, которую кормили нормальным рационом.
Как может быть видно в Таблице 9, значимо высокий уровень глюкозы в крови натощак сохранялся в группе G3, которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, по сравнению с группой G1, которую кормили нормальным рационом, в данном эксперименте. В частности, уровень глюкозы в крови в G5, которую кормили стоком культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001, вместе с рационом с высоким содержанием жиров, как наблюдалось, был низким, по сравнению с уровнем глюкозы в крови группы G3, которой вводили сток культуральной жидкости, и похож на уровень глюкозы в крови группы G1, которую кормили нормальным рационом.
11-3. Тест толерантности к глюкозе у мышей, у которых вызвано ожирение, после введения штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и культуральной жидкости
Тесты для опытных групп проводили в тех же условиях, как в Примере 10-3, и мышей подвергали тесту толерантности к глюкозе после голодания в течение 12 часов с 9 часов вечере перед днем эксперимента до 9 часов утра в день эксперимента. Раствор PBS, содержащий 10% глюкозу, стерилизованный посредством фильтрации через 0,2 мкм), внутрибрюшинно вводили (стерильной иглой 27G) в дозе 2 мг (глюкоза/г. объем (мкл) = масса тела (г) × 20) каждой мыши. Мышей снова размещали в клетки и измеряли уровень глюкозы в крови с временными интервалами 0, 30, 60, 90 и 120 мин. Для анализа глюкозы кровь брали из хвостов. Измерения приведены в Таблицах 10 и 11 и на Фиг. 10 и 11.
Как показано в Таблице 10 и на Фиг. 10, наблюдали, что группа (G3), которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, поддерживала значимо высокий уровень сахара в крови, по сравнению с группой, которую кормили нормальным рационом (G1). В частности, значимое уменьшение уровня глюкозы в крови выявляли в группе (G5), которой вводили сток культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001, вместе с рационом с высоким содержанием жиров, по сравнению с G3, начиная с 30 мин после введения. Повышение уровня глюкозы в крови, вызванное рационом с высоким содержанием жиров, не подавлялось введением культуральной жидкости, разведенной в 1/2 (G4).
Как может быть видно в Таблице 11 и на Фиг. 11, значимый высокий уровень глюкозы в крови наблюдали в группе (G3), которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, по сравнению с группой, которую кормили нормальным рационом (G1). В частности, наблюдали, что у групп (G4 и G5), которых кормили штаммом Lactobacillus sakei CVL-001 в дозе 108 и 109 клеток, соответственно, вместе с рационом с высоким содержанием жиров, значимо уменьшался уровень глюкозы в крови, по сравнению с G3.
11-4. Тест на толерантность к инсулину у мышей, у которых было вызвано ожирение, после введения штамма Lactobacillus sakei CVL-001 и культуральной жидкости
Тесты для опытных групп проводили в тех же условиях, как в Примере 10-3, и мышей подвергали тестированию толерантности к инсулину после голодания в течение 4 часов с 9 часов утра до 1 часа дня в день эксперимента. Каждой мыши внутрибрюшинно вводили 2 мг/ил инсулина (в D.W. с рН, доведенным до 3 посредством разбавленной HCl) (стерильной иглой 27G) в дозе 1 U (0,03846 мг/кг. Объем (мкл) = масса тела (г) × 20). Мышей снова размещали в клетки, и измеряли у них уровень глюкозы в крови с временными интервалами 0, 30, 60, 90 и 120 мин. Для анализа глюкозы осуществляли забор крови из хвостов.
Как показано в Таблице 12 и на Фиг. 12, наблюдали, что группа (G3), которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, сохраняла значимо высокий уровень сахара в крови, по сравнению с группой, которую кормили нормальным рационом (G1). В частности, значимое уменьшение уровня глюкозы в крови выявляли в группе (G5), которой вводили сток культуральной жидкости Lactobacillus sakei CVL-001 вместе с рационом с высоким содержанием жиров, по сравнению с G3, через 90 и 120 мин после введения. Группа (G4), которой вводили культуральную жидкость, разведенную в 1/2, демонстрировала значимо уменьшенный уровень сахара в крови, по сравнению с G3, через 120 мин после введения.
Как может быть видно в Таблице 13 и на Фиг. 13, значимый высокий уровень глюкозы в крови наблюдали в группе (G3), которую кормили рационом с высоким содержанием жиров, по сравнению с группой, которую кормили нормальным рационом (G1). В частности, наблюдали, что у групп (G4 и G5), которых кормили штаммом Lactobacillus sakei CVL-001 в дозе 108 и 109 клеток, соответственно, вместе с рационом с высоким содержанием жиров, значимо уменьшался уровень глюкозы в крови, по сравнению с G3, на протяжении всего времени, за исключением 0 мин после введения.
Промышленная применимость
Настоящее раскрытие относится к штамму Lactobacillus sakei (Lactobacillus sakei) CVL-001 и способу его выделения, и, более конкретно, к штамму Lactobacillus sakei CVL-001, выделенному и идентифицированному из кимчи.
Кроме того, настоящее раскрытие относится к композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001 или его культуральную жидкость, для облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей, и, более конкретно, к композиции, содержащей штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, или его культуральную жидкость, для облегчения, предупреждения или лечения заболевания костей.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Industry-University Cooperation Foundation Chonnam University
<120> КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ОБЛЕГЧЕНИЯ, ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОСТЕЙ
ИЛИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СОДЕРЖАЩАЯ НОВЫЙ ШТАММ LACTOBACILLUS
SAKEI CVL-001 И ЕЕ КУЛЬТУРАЛЬНУЮ СРЕДУ
<130> PP200015RU
<150> KR 10-2019-0022670
<151> 2019-02-26
<150> KR 10-2019-0022671
<151> 2019-02-26
<150> KR 10-2020-0012763
<151> 2020-02-03
<160> 3
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1439
<212> ДНК
<213> Неизвестен
<220>
<223> 16S рРНК Lactobacillus sakei CVL-001
<400> 1
gcagtcgaac gcactctcgt ttagattgaa ggagcttgct cctgattgat aaacatttga 60
gtgagtggcg gacgggtgag taacacgtgg gtaacctgcc ctaaagtggg ggataacatt 120
tggaaacaga tgctaatacc gcataaaacc taacaccgca tggtgtaggg ttgaaagatg 180
gtttcggcta tcactttagg atggacccgc ggtgcattag ttagttggtg aggtaaaggc 240
tcaccaagac cgtgatgcat agccgacctg agagggtaat cggccacact gggactgaga 300
cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg acgaaagtct 360
gatggagcaa cgccgcgtga gtgaagaagg ttttcggatc gtaaaactct gttgttggag 420
aagaatgtat ctgatagtaa ctgatcaggt agtgacggta tccaaccaga aagccacggc 480
taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gatttattgg 540
gcgtaaagcg agcgcaggcg gtttcttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa 600
gaagtgcatc ggaaactggg aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta 660
gcggtgaaat gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt 720
aactgacgct gaggctcgaa agcatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca 780
tgccgtaaac gatgagtgct aggtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc cgcagctaac 840
gcattaagca ctccgcctgg ggagtacgac cgcaaggttg aaactcaaag gaattgacgg 900
gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgaag aaccttacca 960
ggtcttgaca tcctttgacc actctagaga tagagctttc ccttcgggga caaagtgaca 1020
ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 1080
cgcaaccctt attactagtt gccagcattt agttgggcac tctagtgaga ctgccggtga 1140
caaaccggag gaaggtgggg acgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca 1200
cacgtgctac aatggatggt acaacgagtt gcgagaccgc gaggtttagc taatctctta 1260
aaaccattct cagttcggat tgtaggctgc aactcgccta catgaagccg gaatcgctag 1320
taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc 1380
acaccatgag agtttgtaac acccaaagcc ggtgaggtaa cccttcgggg agccagccg 1439
<210> 2
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Прямой праймер 16S рРНК Lactobacillus sakei
<400> 2
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 3
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Обратный праймер 16S рРНК Lactobacillus sakei
<400> 3
ggttaccttg ttacgactt 19
<---
Claims (4)
1. Штамм Lactobacillus sakei CVL-001, депонированный под номером доступа KCTC13816BP, для восстановления минеральной плотности костей у млекопитающего или ингибирования дифференцировки остеокластов.
2. Штамм Lactobacillus sakei CVL-001 по п. 1, где штамм включает последовательность 16S рРНК, представленную SEQ ID NO: 1.
3. Фармацевтическая композиция для восстановления минеральной плотности костей у млекопитающего или ингибирования дифференцировки остеокластов, содержащая эффективное количество штамма Lactobacillus sakei CVL-001, депонированного под номером доступа KCTC13816BP, и фармацевтически приемлемый носитель.
4. Фармацевтическая композиция по п. 3, представляющая собой суспензию и содержащая штамм Lactobacillus sakei CVL-001 в концентрации от 5×105 до 5×1012 КОЕ/мл.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2019-0022671 | 2019-02-26 | ||
KR10-2019-0022670 | 2019-02-26 | ||
KR10-2020-0012763 | 2020-02-03 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2022127438A Division RU2022127438A (ru) | 2019-02-26 | 2020-02-24 | Композиция для облегчения, предупреждения или лечения заболеваний костей или метаболических заболеваний, содержащая новый штамм lactobacillus sakei cvl-001 и ее культуральную среду |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2782361C1 true RU2782361C1 (ru) | 2022-10-26 |
Family
ID=
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2250267C2 (ru) * | 2000-05-29 | 2005-04-20 | Родиа Шими | Бактериоцин против листерий |
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2250267C2 (ru) * | 2000-05-29 | 2005-04-20 | Родиа Шими | Бактериоцин против листерий |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2752157C2 (ru) | Новые молочнокислые бактерии и их применение | |
KR101349452B1 (ko) | 새로운 락트산간균 균주 및 헬리코박터 필로리에 대한 그사용 | |
KR101494279B1 (ko) | 지방세포 분화 유도에 관여하는 유전자의 발현을 억제함으로써 지방세포 분화 억제 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 케이와이1032 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 | |
US11273189B2 (en) | Lactobacillus plantarum TCI378 and its uses in losing fat and improving gastrointestinal functions | |
EP3715449B1 (en) | Novel lactic acid bacteria and use thereof | |
KR102242668B1 (ko) | 락토바실러스 사케이 cvl-001 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 골 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR101992537B1 (ko) | 신규한 락토바실러스 사케이 및 이를 포함하는 조성물 | |
US20150182566A1 (en) | Lactic acid bacterium-containing preparation | |
KR102297271B1 (ko) | 당뇨 및 고지혈증을 포함하는 대사성 질환의 예방 또는 치료 활성을 갖는 락토바실러스 람노서스 nbm 17-4 균주 | |
KR102323783B1 (ko) | 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile) 성장 억제효과를 갖는 클로스트리디움 신덴스 균주 | |
KR20190068078A (ko) | 비만 억제 활성을 갖는 락토바실러스 파라카제이 ao356 균주 및 이를 포함하는 비만 개선 또는 치료용 조성물 | |
KR101956867B1 (ko) | 콜레스테롤 저감 및 비만증세 완화 효능을 갖는 락토바실러스 람노서스 균주 ckdb009 및 이의 용도 | |
KR20210002032A (ko) | 장관면역 조절을 위한 신규한 프로바이오틱 조성물 | |
US20220135935A1 (en) | Composition comprising lactobacillus sakei cvl-001 or culture liquid thereof for alleviating, preventing, or treating bone diseases or metabolic diseases | |
KR20200018532A (ko) | 질염 원인균에 대한 증식억제활성을 갖는 락토바실러스 속 균주 조합 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 | |
US20230293607A1 (en) | Lactobacillus formulations with improved stability and efficacy | |
RU2782361C1 (ru) | Композиция для облегчения, предупреждения или лечения заболеваний костей или метаболических заболеваний, содержащая новый штамм lactobacillus sakei cvl-001 и ее культуральную среду | |
KR102465484B1 (ko) | 엔테로코커스 패칼리스 사균체를 유효성분으로 함유하는 비만 또는 비만으로부터 유도된 대사증후군의 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR20190102498A (ko) | 질염 원인균에 대한 증식억제활성을 갖는 락토바실러스 속 균주 조합 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 | |
KR102144838B1 (ko) | 락토바실러스 쿠르바투스 WiKim38 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 골 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR101504912B1 (ko) | 인슐린 저항성 개선 효능을 가지는 락토바실러스 애시도필러스 hy7037 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 | |
KR102639561B1 (ko) | 락토바실러스 플란타룸 nchbl-004 균주 또는 이의 배양액을 이용한 비만, 당뇨 또는 지방간을 포함하는 대사성 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물 | |
KR101535077B1 (ko) | 인슐린 저항성 개선 효능을 가지는 비피도박테리움 락티스 hy8101 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 | |
KR102485269B1 (ko) | 비피도박테리움 비피덤을 포함하는 면역력 증강 또는 개선용 조성물 | |
RU2785355C2 (ru) | Новые молочнокислые бактерии и их применение |