RU2777095C1 - Фармацевтическая композиция, включающая полипептид - Google Patents
Фармацевтическая композиция, включающая полипептид Download PDFInfo
- Publication number
- RU2777095C1 RU2777095C1 RU2021104106A RU2021104106A RU2777095C1 RU 2777095 C1 RU2777095 C1 RU 2777095C1 RU 2021104106 A RU2021104106 A RU 2021104106A RU 2021104106 A RU2021104106 A RU 2021104106A RU 2777095 C1 RU2777095 C1 RU 2777095C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- polypeptide
- polyethylene glycol
- fatty liver
- alcoholic fatty
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 218
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 129
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 123
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 74
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims abstract description 70
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 50
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 50
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 41
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 64
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 64
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 24
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 21
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 17
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 14
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 12
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 10
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 9
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 9
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 8
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 8
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 7
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 5
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 5
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 4
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001734 PEG propionaldehyde Polymers 0.000 claims description 4
- 208000010002 alcoholic liver cirrhosis Diseases 0.000 claims description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 4
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 4
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 claims description 4
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 claims description 2
- XAZYLPKXQGUQBU-UHFFFAOYSA-N C1(CCC(N1OCC(=O)O)=O)=O Chemical compound C1(CCC(N1OCC(=O)O)=O)=O XAZYLPKXQGUQBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 abstract description 90
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 69
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 42
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 42
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 28
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 26
- 230000037406 food intake Effects 0.000 abstract description 17
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 abstract description 17
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 9
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 8
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 abstract description 7
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000008693 nausea Effects 0.000 abstract description 7
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 47
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 47
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 46
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 29
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 25
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 24
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 21
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 21
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 20
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 17
- 108010063919 Glucagon Receptors Proteins 0.000 description 16
- 102100040890 Glucagon receptor Human genes 0.000 description 16
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 15
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 15
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 14
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 13
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 13
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 13
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 12
- 102100032882 Glucagon-like peptide 1 receptor Human genes 0.000 description 12
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 12
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 11
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 11
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 10
- AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) propanoate Chemical compound CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 9
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 9
- ASUGWWOMVNVWAW-UHFFFAOYSA-N 1-(2-methoxyethyl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound COCCN1C(=O)C=CC1=O ASUGWWOMVNVWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 8
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 8
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 8
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 8
- PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N molport-023-276-326 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N 0.000 description 8
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 8
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 7
- 101800001388 Oxyntomodulin Proteins 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 102400000319 Oxyntomodulin Human genes 0.000 description 6
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 6
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 6
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 6
- CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 5
- DUTMKEAPLLUGNO-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O DUTMKEAPLLUGNO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 5
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 5
- GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N Phe-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 4
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 4
- ARRIJPQRBWRNLT-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N ARRIJPQRBWRNLT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N Thr-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IVDFVBVIVLJJHR-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 4
- OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N Val-Gln-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 4
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 4
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 4
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229960001243 orlistat Drugs 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N Gly-Thr-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N 0.000 description 3
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KUSYCSMTTHSZOA-DZKIICNBSA-N Phe-Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N KUSYCSMTTHSZOA-DZKIICNBSA-N 0.000 description 3
- YLGQHMHKAASRGJ-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N YLGQHMHKAASRGJ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- BSCBBPKDVOZICB-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BSCBBPKDVOZICB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 description 3
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 3
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 3
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000003877 glucagon like peptide 1 receptor agonist Substances 0.000 description 3
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 3
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- MFMDKJIPHSWSBM-GUBZILKMSA-N Ala-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFMDKJIPHSWSBM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 2
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N Glu-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 2
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHZRWFUGWRTUOD-IUCAKERBSA-N His-Gly-Gln Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N CHZRWFUGWRTUOD-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- 101150046735 LEPR gene Proteins 0.000 description 2
- 101150063827 LEPROT gene Proteins 0.000 description 2
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 2
- AHLBNYSZXLDEJQ-UHFFFAOYSA-N N-formyl-L-leucylester Natural products CCCCCCCCCCCC(OC(=O)C(CC(C)C)NC=O)CC1OC(=O)C1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 2
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 2
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 2
- 229940125708 antidiabetic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 235000019577 caloric intake Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000010030 glucose lowering effect Effects 0.000 description 2
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- DHHVAGZRUROJKS-UHFFFAOYSA-N phentermine Chemical compound CC(C)(N)CC1=CC=CC=C1 DHHVAGZRUROJKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 229940001470 psychoactive drug Drugs 0.000 description 2
- 239000004089 psychotropic agent Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- VDWWLJRQDNTHJB-MXAMYCJDSA-N (2s)-2-[[(2s,3r)-2-[[2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 VDWWLJRQDNTHJB-MXAMYCJDSA-N 0.000 description 1
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- HSWYMWGDMPLTTH-FXQIFTODSA-N Asp-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HSWYMWGDMPLTTH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GHODABZPVZMWCE-FXQIFTODSA-N Asp-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GHODABZPVZMWCE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KHBLRHKVXICFMY-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Lys Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O KHBLRHKVXICFMY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- IIMZHOLDKUBDSH-UHFFFAOYSA-N C1CC(=O)N(C1=O)C(C(=O)O)OC(C(=O)O)N2C(=O)CCC2=O Chemical compound C1CC(=O)N(C1=O)C(C(=O)O)OC(C(=O)O)N2C(=O)CCC2=O IIMZHOLDKUBDSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000113 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 206010052806 Drug tolerance increased Diseases 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- OXEMJGCAJFFREE-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXEMJGCAJFFREE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010019837 Hepatocellular injury Diseases 0.000 description 1
- AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N His-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AFPFGFUGETYOSY-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101500028775 Homo sapiens Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 101001040075 Homo sapiens Glucagon receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- WZPIKDWQVRTATP-SYWGBEHUSA-N Ile-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 WZPIKDWQVRTATP-SYWGBEHUSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N Leu-Val-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- WXJKFRMKJORORD-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ala Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WXJKFRMKJORORD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010033557 Palpitations Diseases 0.000 description 1
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 description 1
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- IJGPOONOTBNTFS-GVXVVHGQSA-N Val-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IJGPOONOTBNTFS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 210000000579 abdominal fat Anatomy 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- SNAAJJQQZSMGQD-UHFFFAOYSA-N aluminum magnesium Chemical compound [Mg].[Al] SNAAJJQQZSMGQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000001539 anorectic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125710 antiobesity agent Drugs 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015337 arteriosclerotic cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 description 1
- WDRMVIMVHHWVBI-STCSGHEYSA-N chembl1222074 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)[C@@H](C)O)[C@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 WDRMVIMVHHWVBI-STCSGHEYSA-N 0.000 description 1
- 231100000359 cholestasis Toxicity 0.000 description 1
- 230000007870 cholestasis Effects 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000225 effect on diabetes Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000012007 large scale cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- OQMAKWGYQLJJIA-CUOOPAIESA-N lipstatin Chemical class CCCCCC[C@H]1[C@H](C[C@H](C\C=C/C\C=C/CCCCC)OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)OC1=O OQMAKWGYQLJJIA-CUOOPAIESA-N 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 229960005060 lorcaserin Drugs 0.000 description 1
- XTTZERNUQAFMOF-QMMMGPOBSA-N lorcaserin Chemical compound C[C@H]1CNCCC2=CC=C(Cl)C=C12 XTTZERNUQAFMOF-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000023187 negative regulation of glucagon secretion Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229960003562 phentermine Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 1
- 235000017924 poor diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 1
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical class O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000010692 trans-unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940002552 xenical Drugs 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению терапевтически активных пептидных конъюгатов, и может быть использовано в медицине для профилактики или лечения заболевания, выбранного из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени. Изобретение обеспечивает получение композиции, включающей сайт-специфический конъюгат с полипептидом и непептидным полимером, которая обладает превосходным эффектом профилактики или лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени путем повышения периода полужизни в крови с поддержанием при этом активности полипептида in vivo. Фармацевтическая композиция является безопасной в части побочных эффектов, таких как рвота или тошнота, и обладает эффектами уменьшения потребления пищи, повышения секреции инсулина, сдерживания опорожнения желудка, промотирования липолиза и снижения уровня триглицеридов. 7 н. и 12 з.п. ф-лы, 14 ил., 9 табл., 10 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей полипептид, и ее медицинскому применению, например, для лечения или профилактики ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени. Полипептид имеет эффекты снижения потребления пищи, усиления секреции инсулина, сдерживания опорожнения желудка, стимулирования липолиза и снижения уровня триглицеридов без побочных эффектов, таких как рвота или тошнота.
Предпосылки к созданию изобретения
В последнее время в связи с экономическим развитием и высокими темпами роста научных технологий старение населения растет, а заболеваемость взрослого населения быстро увеличивается. Это вызвано стрессом, неправильным питанием, чрезмерным потреблением калорий и снижением физической активности. Показатели смертности от сердечных и цереброваскулярных заболеваний, которые являются осложнениями, сопровождающими ожирение, занимают первое и второе место, а ожирение считается причиной различных заболеваний взрослых, таких как диабет, неалкогольное жировое заболевание печени и т.п.
Ожирение относится к состоянию, при котором жир накапливается в большем количестве, чем обычно, и наиболее точным методом оценки ожирения является измерение жировой массы тела. Однако точное измерение жировой массы является дорогостоящим и поэтому оценивается косвенными методами. Наиболее часто используемыми косвенными методами являются измерение индекса массы тела (ИМТ) и окружности талии. Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) объявила классификации на основе данных, касающихся связи ИМТ с риском смерти, которые базируются на нормальной массе тела: от 18,5 до 24,9 кг/м2, избыточной массе тела: от 25 до 29,9 кг/м2 и ожирении: 30 кг/м2 или более.
Причины ожирения известны как энергетический дисбаланс из-за чрезмерного потребления калорий и относительно пониженной активности, что приводит к увеличению жировых отложений. Однако трудно определить только один фактор, поскольку ожирение связано с различными факторами риска, такими как привычки питания, образ жизни, возраст, раса, генетические факторы и т.д.
Диабет подразделяется на инсулинозависимый диабет (диабет I типа), инсулиннезависимый диабет (диабет II типа) и сахарный диабет, связанный с недостаточностью питания (MRDM). Сахарный диабет II типа, на долю которого приходится более 90% всех случаев диабета, является метаболическим заболеванием, характеризующимся гипергликемией, и, как сообщается, вызывается снижением секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы или повышенной инсулинорезистентностью в периферических тканях из-за генетических, метаболических и экологических факторов. В связи с этим, когда жировые отложения увеличиваются, чувствительность к инсулину снижается, в частности, накопление абдоминального жира, как известно, связано с непереносимостью глюкозы. Также известно, что инсулинорезистентность тесно связана с ожирением у пациентов, страдающих диабетом II типа, при этом чем тяжелее ожирение, тем выше инсулинорезистентность.
Неалкогольные жировые заболевания печени (NAFLD) относятся к ряду заболеваний, включающих простой стеатоз с чрезмерным накоплением жира в клетках печени независимо от употребления алкоголя, неалкогольный стеатогепатит (NASH), включая гепатоцеллюлярное повреждение (баллонная дистрофия клеток печени), воспаление, фиброз и, в более запущенных случаях, цирроз. Уровень распространенности неалкогольной жировой болезни печени быстро увеличивается с увеличением распространенности ожирения во всем мире, и, хотя уровень распространенности диабета в разных странах варьирует, он затрагивает от 20 до 30% от общей численности населения в западных странах, и уровень заболеваемости достигает около 16% в Корее.
Неалкогольная жировая болезнь печени демонстрирует тесную связь с метаболическими синдромами, включая ожирение, диабет II типа, дислипидемию и т.п., основанными на резистентности к инсулину. Действительно, известно, что многие пациенты с преддиабетом и диабетом II типа страдают неалкогольным ожирением печени/неалкогольным стеатогепатитом, а скорость прогрессирования до цирроза и рака печени (т.е. гепатоцеллюлярной карциномы) является высокой у этих пациентов. Между тем, распространенность диабета у пациентов с неалкогольной жировой болезнью печени высока и очевидна у пациентов с неалкогольным стеатогепатитом.
Пациентам с ожирением в первую очередь рекомендуется контролировать массу тела путем более здорового питания и физической активности, но когда эти методы неэффективны, пациентов можно лечить лекарственными или хирургическими методами.
Существующий рынок лекарственных средств от ожирения оценивается более чем в один миллиард долларов и ежегодно растет примерно на 10%. Лекарственные препараты, которые в основном используются в качестве средств от ожирения, представляют собой аноректические средства (лоркасерин, фентермин и т.д.), которые классифицируются как психотропные препараты, большинство из которых действуют на центральную нервную систему. Такие лекарственные средства, как известно, проявляют эффект подавления аппетита у пациентов, чтобы они могли похудеть, но имеют побочные эффекты, такие как привыкание и зависимость, сердцебиение, беспокойство, бессонница и т.п., при использовании в течение длительного периода времени.
Ксеникал является одним из лекарственных средств, используемых в качестве средства от ожирения, но не психотропного средства. Липаза поджелудочной железы действует как ключевой фермент, расщепляющий триглицерид на 2-моноацилглицерин и жирную кислоту. Типичным ингибитором липазы поджелудочной железы является тетрагидролипстатин (орлистат), который является производным липстатина, получаемого из Streptomyces toxitricini, и обладает высокой эффективностью ингибирования абсорбции примерно 30% потребляемых жиров. В настоящее время тетрагидролипстатин (орлистат) коммерчески доступен как лекарственное средство, но имеет побочные эффекты, такие как желудочно-кишечные расстройства, анафилаксия, холестаз и т.п. Поэтому существует мало терапевтических средств, которые можно безопасно использовать для пациентов с ожирением.
В лекарственной терапии для лечения неалкогольной жировой болезни печени лекарственные средства воздействуют на механизмы, обостряющие неалкогольную жировую болезнь печени, такие как инсулинорезистентность, окислительный стресс, апоптоз, воспалительные цитокины и т.п., и ингибируют прогрессирование неалкогольной жировой болезни печени. Из них противодиабетические средства, как известно, имеют эффект облегчения ожирения печени, а также эффект снижения уровня глюкозы в крови за счет улучшения общих физиопатологических состояний против начала ожирения печени. Однако, поскольку до сих пор ни одно лекарственное средство не одобрено для лечения жировой болезни печени, существует неудовлетворенная медицинская потребность в разработке эффективных терапевтических средств.
Между тем в настоящее время внимание сфокусировано на производных глюкагона. Глюкагон вырабатывается в поджелудочной железе, когда уровень глюкозы в крови начинает падать из-за медикаментозного лечения, заболеваний, дефицита гормонов или ферментов и т.д. Глюкагон стимулирует выделение глюкозы печенью путем расщепления гликогена и служит для повышения уровня глюкозы в крови до нормального уровня. В дополнение к эффекту повышения уровня глюкозы в крови глюкагон, согласно сообщениям, также подавляет аппетит и активирует гормоночувствительную липазу в жировых клетках, способствуя расщеплению жиров, тем самым проявляя эффект против ожирения. В качестве одного из таких производных глюкагона глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1) представляет собой вещество, которое все еще находится в стадии разработки в качестве терапевтического средства для облегчения гипергликемии у пациентов с диабетом, и его действие направлено на промотирование синтеза и секреции инсулина, ингибирование секреции глюкагона, сдерживание опорожнения желудка, облегчение усвоения глюкозы и ингибирование приема пищи. Также известно, что эксендин-4, полученный из яда ящерицы, который имеет приблизительно 50% гомологию аминокислот с GLP-1, служит для активации рецептора GLP-1 для облегчения гипергликемии у пациентов с диабетом. Однако, согласно сообщениям, агонисты рецепторов GLP-1 для лечения ожирения или диабета имеют проблему, поскольку они вызывают побочные эффекты, такие как рвота и тошнота.
В качестве альтернативы GLP-1 в центре внимания оказался оксинтомодулин, который может связываться с рецепторами как GLP-1, так и глюкагона. Оксинтомодулин представляет собой пептид, который происходит из предшественника глюкагона (то есть пре-глюкагона), демонстрирует эффекты подавления приема пищи посредством GLP-1, ингибирования гликонеогенеза в печени для регулирования уровня глюкозы в крови и улучшения насыщения, а также обладает липолитической функцией глюкагона. Поэтому оксинтомодулин имеет высокую вероятность применения в качестве противодиабетического средства и средства против ожирения.
На основе двойной функции пептида оксинтомодулина активно ведутся исследования по разработке лекарственных средств для лечения диабета и ожирения. Например, в зарегистрированном корейском патенте № 925017 раскрыта фармацевтическая композиция для перорального, парентерального, мукозального, ректального, подкожного или чрескожного введения для лечения избыточной массы тела у людей, которая включает оксинтомодулин в качестве активного ингредиента. Однако сообщается, что лекарственное средство от ожирения, включающее оксинтомодулин, имеет короткий период полужизни in vivo и имеет низкий уровень терапевтического эффекта при ожирении даже при приеме трижды в день при высокой дозе.
Между тем, предпринимаются постоянные попытки преодолеть короткий период полужизни терапевтического пептида in vivo, чтобы сохранить высокий уровень фармакологического эффекта в течение длительного периода времени и, соответственно, максимизировать эффект терапевтического средства. Патент США № 7141547 раскрывает слитые белки GLP-1 и его аналогов с альбумином с использованием метода рекомбинантной ДНК, а патент США № 8273854 раскрывает слитые белки GLP-1 и его аналогов с фрагментом иммуноглобулина (Fc). Эти методы частично улучшили короткий период полужизни пептида in vivo, но не лишены проблем, связанных с иммуногенностью, вызываемых введением белков, которые не являются нативными для человеческого организма. Как результат, эти методы имеют недостаток, заключающийся в том, что фармакологический эффект лекарственных средств может уменьшаться, если лекарственные средства вводят в течение длительного периода времени. Кроме того, существуют дополнительные проблемы, поскольку требуются крупномасштабные системы культивирования клеток и очистки для производства лекарственных препаратов, и может быть трудно контролировать качество лекарственных средств, поскольку лекарственные средства могут содержать примеси, происходящие из клеток-хозяев, в зависимости от природы рекомбинантных белков, и могут не быть абсолютно одинаковыми для каждой партии. Кроме того, использование пептида, содержащего дисульфидную связь, такого как кальцитонин, имеет такой недостаток, что выход может быть снижен из-за неправильной укладки. Кроме того, трудно получить лекарственное средство способом получения рекомбинантного белка, когда он имеет неприродные аминокислотные остатки.
Между тем, в патенте США № 8110665 раскрыт пептид, короткий период полужизни которого увеличивают путем получения конъюгата с использованием непептидного полимера и фрагмента иммуноглобулина (Fc). Однако в этом патенте описан сложный способ получения, который включает получение биологически активного пептида, непептидного полимера и фрагмента иммуноглобулина по отдельности, а также объединение пептида, полимера и фрагмента иммуноглобулина вместе, что создает такие проблемы, как остаточные побочные продукты и уменьшенный выход.
Между тем, ПЭГилирование терапевтических пептидов и белков является наиболее эффективным фармацевтическим методом для увеличения периода полужизни in vivo. ПЭГилирование пептидов и белков служит для увеличения их молекулярной массы, защиты протеолитического сайта и маскировки иммуногенного сайта, что приводит к увеличению периода полужизни лекарственных средств in vivo и снижению иммуногенности пептидов и белков. Поэтому метод ПЭГилирования эффективен для усиления терапевтического эффекта за счет решения проблем, связанных с пептидными лекарственными средствами. Благодаря этим преимуществам, ПЭГилирование пептидов и белков играет важную роль в усилении терапевтического эффекта в системе доставки лекарственного средства.
Однако метод с использованием ПЭГ имеет недостатки, поскольку ПЭГилирование снижает активность пептидных лекарственных средств и дает низкий выход из-за плохой реактивности в отношении пептидов с увеличивающейся молекулярной массой ПЭГ. В связи с этим существует необходимость в способе ПЭГилирования с использованием простого производственного процесса и реакции с высокой селективностью.
Поэтому существует потребность в терапевтическом средстве для лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени, которое имеет эффекты снижения потребления пищи, усиления секреции инсулина, сдерживания опорожнения желудка, стимулирования липолиза и снижения уровня триглицеридов без каких-либо побочных эффектов, таких как рвота или тошнота, и которое может быть получено с высоким выходом за счет оптимизации способа получения.
[Документы предшествующего уровня техники]
[Патентные документы]
Патентный документ 1: Зарегистрированный корейский патент № 0925017, озаглавленный “Oxyntomodulin for Preventing or Treating Excess Weight”
Патентный документ 2: Зарегистрированный патент США № 7141547, озаглавленный “Albumin Fusion Proteins Comprising GLP-1 Polypeptides”
Патентный документ 3: Зарегистрированный патент США № 8273854, озаглавленный “GLP-1 Analog Fusion Proteins”
Патентный документ 4: Зарегистрированный патент США № 8110665, озаглавленный “Pharmaceutical Composition Comprising an Immunoglobulin FC Region as a Carrier”
Патентный документ 5: Зарегистрированный корейский патент № 1665009, озаглавленный “Pharmaceutical Composition for Preventing or Treating Non-alcoholic Fatty Liver Diseases”
Раскрытие изобретения
Техническая задача
Для решения указанных выше задач авторами настоящего изобретения были осуществлены исследования и предприняты попытки разработать терапевтическое средство для лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени, которое является безопасным, а также обладает эффектами уменьшения потребления пищи, повышения секреции инсулина, сдерживания опорожнения желудка, промотирования липолиза и снижения уровня триглицеридов без каких-либо побочных эффектов, таких как рвота или тошнота, а также разработать способ получения терапевтического средства с высоким выходом и получения полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1. В результате, авторы настоящего изобретения подтвердили, что композиция, включающая полипептид, обладает отличным эффектом профилактики или лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени, и сайт-специфический конъюгат с полипептидом и непептидным полимером обладает превосходным эффектом профилактики или лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени путем повышения периода полужизни в крови с поддержанием при этом активности полипептида in vivo, создав, таким образом, настоящее изобретение.
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидроксиимидазопропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазопропионил;
X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислоту (Aib);
R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и
R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин.
Поэтому, целью настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции, включающей полипептид, для профилактики или лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени.
Решение задачи
Для решения указанных выше задач фармацевтическая композиция в соответствии с одним иллюстративным вариантом осуществления настоящего изобретения включает полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1.
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидрокси-имидазо-пропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазопропионил; X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислоту (Aib); R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин.
Полипептид может быть ковалентно связан или может образовывать микросферы с любым одним или более, выбранными из группы, состоящей из непептидного полимера, жирной кислоты, холестерина, антитела, фрагмента антитела, альбумина и его фрагмента, нуклеотида, фибронектина, трансферрина, FcRn-связывающего вещества, сахарида, эластина, гепарина и их производных.
R2 включает глутаминовую кислоту (E) и лизин (K), и глутаминовая кислота и лизин могут быть взяты вместе с образованием кольца через амидную связь, что может способствовать альфа-спиральной структуре полипептида.
Непептидный полимер может быть выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), полипропиленгликоля, coполимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта (PVA), полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, полимолочной кислоты (PLA), полимолочной-гликолевой кислоты (PLGA), липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинации. Производные непептидного полимера известны из соответствующего уровня техники, и другие производные, которые легко можно получить при техническом уровне предшествующего уровня техники, также охватываются объемом настоящего изобретения.
Предпочтительно, непептидный полимер может представлять собой полиэтиленгликоль или его производное.
Непептидный полимер может иметь молекулярную массу 3000-100000 Да.
В этом случае производное полиэтиленгликоля может представлять собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из метоксиполиэтиленгликоля, метоксиполиэтиленгликоль-N-гидроксисукцинимида, метоксиполиэтиленгликоль-пропиональдегида, метоксиполиэтиленгликоль-малеимида, полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (ПЭГ-сукцинимидилпропионат), метоксиполиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (метокси-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата акрилата (ПЭГ-сукцинимидилпропионата акрилат), тиол-полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (тиол-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), гидроксисукцинимидил-полиэтиленгликоля (гидроксисукцинимидил-ПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира метоксиполиэтиленгликоля (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир мПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира полиэтиленгликоля акрилата (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир ПЭГ акрилат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилкарбоната (ПЭГ-сукцинимидилкарбонат), полиэтиленгликоль-пропиональдегида (ПЭГ-пропиональдегид), полиэтиленгликоль-бутилальдегида (ПЭГ-бутилальдегид), их производных и мультиразветвленных форм их производных.
Полиэтиленгликоль или его производное может быть линейным или разветвленным.
Фармацевтическую композицию можно использовать для профилактики или лечения одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени.
Неалкогольная жировая болезнь печени может включать одно или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из неалкогольного ожирения печени, неалкогольного стеатогепатита, цирроза печени и рака печени.
Способ получения фармацевтической композиции в соответствии с другим иллюстративным вариантом осуществления настоящего изобретения включает смешивание непептидного полимера с полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1, для взаимодействия друг с другом.
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидрокси-имидазо-пропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазо-пропионил; X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислоту (Aib); R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин.
Непептидный полимер может быть выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), полипропиленгликоля, coполимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта (PVA), полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, полимолочной кислоты (PLA), полимолочной-гликолевой кислоты (PLGA), липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинации. Производные непептидного полимера, известные в данной области техники, и другие производные, которые легко можно получить при техническом уровне предшествующего уровня техники, также охватываются объемом настоящего изобретения.
Предпочтительно, непептидный полимер может представлять собой полиэтиленгликоль или его производное.
В этом случае производное полиэтиленгликоля может представлять собой по меньшей мере одно производное, выбранное из группы, состоящей из метоксиполиэтиленгликоля, метоксиполиэтиленгликоль-N-гидроксисукцинимида, метоксиполиэтиленгликоль-пропиональдегида, метоксиполиэтиленгликоль-малеимида, полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (ПЭГ-сукцинимидилпропионат), метоксиполиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (метокси-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата акрилата (ПЭГ-сукцинимидилпропионата акрилат), тиол-полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (тиол-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), гидроксисукцинимидил-полиэтиленгликоля (гидроксисукцинимидил-ПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира метоксиполиэтиленгликоля (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир мПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира полиэтиленгликоля акрилата (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир ПЭГ акрилат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилкарбоната (ПЭГ-сукцинимидилкарбонат), полиэтиленгликоль-пропиональдегида (ПЭГ-пропиональдегид), полиэтиленгликоль-бутилальдегида (ПЭГ-бутилальдегид), их производных и мультиразветвленных форм их производных.
Смешивание непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом может включать обеспечение возможности взаимодействия полипептида и непептидного полимера при молярном соотношении от 1:1 до 1:5.
Смешивание непептидного полимера с полипептидом для взаимодействия друг с другом можно осуществить при pH 4,0-9,0.
При смешивании непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом время реакции может находиться в пределах от 0,5 до 24 часов.
Фармацевтическую композицию можно использовать для профилактики или лечения одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени.
Неалкогольная жировая болезнь печени может включать одно или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из неалкогольного ожирения печени, неалкогольного стеатогепатита, цирроза печени и рака печени.
Способ профилактики или лечения одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, в соответствии с другим иллюстративным вариантом осуществления настоящего изобретения включает введение фармацевтической композиции субъекту.
Полезные эффекты изобретения
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может включать полипептид, и таким образом, обладать эффектами уменьшения потребления пищи, повышения секреции инсулина, сдерживания опорожнения желудка, промотирования липолиза и снижения уровня триглицеридов.
Также фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может включать полипептид, и таким образом, может снижать побочные эффекты, такие как рвота или тошнота, и т.п.
Кроме того, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может включать непептидный полимер, который является высокоселективным и реактивным с полипептидом, и таким образом, может быть получена с высоким выходом.
Кроме того, фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может включать конъюгат, включающий полипептид и непептидный полимер, и таким образом, может иметь продолжительный период полужизни in vivo и высокий терапевтический эффект на ожирение даже при введении при низкой дозе, а также может обладать эффектами снижения уровня глюкозы в крови, чтобы глюкозу в крови можно было поддерживать таким образом на нормальном уровне, и эффективного снижения уровня триглицеридов.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 показывает результаты ВЭЖХ анализа конъюгата Примера 2, включающего полипептид и непептидный полимер.
Фиг. 2 показывает результаты MALDI-TOF (времяпролетная масс-спектрометрия с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией) анализа конъюгата Примера 2, включающего полипептид и непептидный полимер.
Фиг. 3 показывает результаты измерения уровня гликированного гемоглобина (HbA1c) после окончания лечения конъюгатом Примера 2 для определения степени изменения долгосрочной средней концентрации глюкозы в крови (** p < 0,01).
Фиг. 4 показывает результаты измерения конечной массы тела мышей после лечения конъюгатом Примера 2 в течение двух недель с разной частотой введения (*** p < 0,001).
Фиг. 5 показывает результаты изменений уровня глюкозы в крови у мышей после введения конъюгата Примера 2 или 6.
Фиг. 6 показывает результаты интраперитонеального теста переносимости глюкозы (ipGTT) после введения конъюгата Примера 2 или 6.
Фиг. 7 показывает результаты измерения изменений сывороточного холестерин после введения конъюгата Примера 2.
Фиг. 8 показывает результаты измерения изменений массы печени после введения конъюгата Примера 2.
Фиг. 9 показывает результаты наблюдения тканей печени мышей после введения конъюгата Примера 2 (более темно окрашенная область представляет собой нормальную ткань печени, белая (ярко)-окрашенная область представляет собой жировую каплю).
Фиг. 10 показывает результаты измерения изменений сывороточного холестерина после введения конъюгата Примера 2.
Фиг. 11 показывает результаты измерения изменений массы печени после введения конъюгата Примера 2.
Фиг. 12 показывает результаты измерения изменений уровней триглицеридов в печени после введения конъюгата Примера 2.
Фиг. 13 показывает результаты наблюдения тканей печени мышей после введения конъюгата Примера 2 (более темно окрашенная область представляет собой нормальную ткань печени, а белая (ярко)-окрашенная область представляет собой жировую каплю).
Фиг. 14 показывает результаты определения оценок NAFLD активности (NAS) после введения конъюгата Примера 2.
Лучший способ осуществления изобретения
Настоящее изобретение относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1.
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидрокси-имидазо-пропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазо-пропионил;
X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислот (Aib);
R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и
R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин.
Настоящее изобретение относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1, для применения в профилактике или лечении заболевания, выбранного из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени.
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидрокси-имидазо-пропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазо-пропионил;
X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислот (Aib);
R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и
R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, которая включает полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1.
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидрокси-имидазо-пропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазо-пропионил;
X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислот (Aib);
R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и
R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную общей формулой 1, выше, для профилактики или лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени.
Аминокислоты, указанные в настоящей заявке, сокращенно указаны в соответствии с номенклатурой IUPAC-IUB, как показано в следующей Таблице 1.
| Таблица 1 | |||
| Аминокислоты | Аббревиатуры | Аминокислоты | Аббревиатуры |
| Аланин | A | Аргинин | R |
| Аспарагин | N | Аспарагиновая кислота | D |
| Цистеин | C | Глутаминовая кислота | E |
| Глутамин | Q | Глицин | G |
| Гистидин | H | Изолейцин | I |
| Лейцин | L | Лизин | K |
| Метионин | M | Фенилаланин | F |
| Пролин | P | Серин | S |
| Треонин | T | Триптофан | W |
| Тирозин | Y | Валин | V |
В общей формуле 1, R1 представляет собой предпочтительно гистидин на N-конце полипептида, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
X1 предпочтительно представляет собой глицин или Aib, более предпочтительно Aib. В этом случае X1 конкретно не ограничивается, при условии, что он может повышать химическую стабильность полипептида.
Также X1 является предпочтительным, если он может иметь резистентность к дипептидилпептидазе-4 (DPP-4), повышая таким образом стабильность фермента.
R2 представляет собой предпочтительно EQAAK или EEAVK, более предпочтительно EQAAK, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
R2 включает глутаминовую кислоту (E) и лизин (K), и глутаминовая кислота и лизин предпочтительно взяты вместе с образованием кольца через амидную связь, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Таким образом, когда два остатка в аминокислотной последовательности полипептида образуют ковалентное кольцо через амидную связь, ковалентное кольцо может повышать стабильность in vivo и улучшать способность к связыванию с рецептором глюкагона или рецептором производного глюкагона. Также ковалентное кольцо может способствовать альфа-спиральной структуре полипептида.
R3 представляет собой C-конец полипептида, который может связываться с веществом для повышения периода полужизни in vivo или устойчивости in vivo. В этом случае R3 предпочтительно представляет собой цистеин, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
Полипептид может иметь 70%-90% гомологию последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO. 1 (SEQ ID NO. 1: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT).
При этом, согласно сообщениям, аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO. 1, идентична части или всей аминокислотной последовательности природного глюкагона, а природный глюкагон промотирует разложение гликогена и инсулина и демонстрирует эффект против ожирения. Однако применение природного глюкагона в качестве терапевтического средства ограничено из-за низкой растворимости и его осаждения при нейтральном pH.
Таким образом, полипептид, включающий аминокислотную последовательность, имеющую 70%-90% гомологию последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO. 1, может представлять собой производное глюкагона или производное оксинтомодулина. В этом случае производное оксинтомодулина представляет собой пептид, который получен из предшественника глюкагона (например, преглюкагон).
Предпочтительно, полипептид может иметь 73%-90%, более предпочтительно 75%-90% гомологию последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO. 1, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
В настоящем описании термин “гомология” относится к степени сходства с аминокислотной последовательностью дикого типа и последовательностью нуклеиновой кислоты дикого типа. В этом случае сравнение гомологии между этими последовательностями осуществляют с использованием доступной программы сравнения. Можно использовать коммерчески доступную компьютерную программу для расчета гомологии между двумя или более последовательностями в процентах (%). Гомологию (%) можно рассчитать для смежных последовательностей. Можно обеспечить большое количество пептида путем вставки полинуклеотида, кодирующего пептид, в вектор и экспрессии пептида.
В настоящем описании термин “пептид” относится к соединению, в котором две или более α-аминокислот связаны через пептидную связь.
При этом полипептид может быть ковалентно связан или может образовывать микросферы с любым одним или более, выбранными из группы, состоящей из непептидного полимера, жирной кислоты, холестерина, антитела, фрагмента антитела, альбумина и его фрагмента, нуклеотида, фибронектина, трансферрина, FcRn-связывающего вещества, сахарида, эластина, гепарина и их производных.
Предпочтительно, непептидный полимер ковалентно связан с полипептидом, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
Полипептид ковалентно связывается или образует микросферы с указанными выше веществами и, таким образом, обладает эффектами повышения стабильности в крови, замедления выделения лекарственного средства в почку и индукции изменений сродства к рецепторам.
Полипептид может повышать период полужизни in vivo и увеличивать время удерживания in vivo, когда полипептид ковалентно связан с непептидным полимером. В этом случае сайт связывания между непептидным полимером и полипептидом может варьироваться в зависимости от функциональной группы непептидного полимера и аминокислотной последовательности полипептида. Предпочтительно, сайт связывания конкретно не ограничивается, при условии, что непептидный полимер полимеризован с C-концом полипептида, или его можно получить с высоким выходом благодаря высокой скорости реакции.
Когда непептидный полимер связывают с полипептидом, непептидный полимер, имеющий малеимидную группу, можно связывать с полипептидом с использованием сульфгидрильной(-SH) группы C-концевого цистеина полипептида, или непептидный полимер, имеющий сукцинимидное производное, можно связывать с полипептидом с использованием амино группы лизина (K) полипептида.
Непептидный полимер может быть выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), полипропиленгликоля, coполимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта (PVA), полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, полимолочной кислоты (PLA), полимолочной-гликолевой кислоты (PLGA), липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинаци. Предпочтительно непептидный полимер представляет собой полиэтиленгликоль или его производное, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Производные непептидного полимера, известные в данной области техники, и другие производные, которые легко можно получить при техническом уровне предшествующего уровня техники, также охватываются объемом настоящего изобретения.
Производное полиэтиленгликоля может представлять собой по меньшей мере одно производное, выбранное из группы, состоящей из метоксиполиэтиленгликоля, метоксиполиэтиленгликоль-N-гидроксисукцинимида, метоксиполиэтиленгликоль-пропиональдегида, метоксиполиэтиленгликоль-малеимида, полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (ПЭГ-сукцинимидилпропионат), метоксиполиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (метокси-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата акрилата (ПЭГ-сукцинимидилпропионата акрилат), тиол-полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (тиол-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), гидроксисукцинимидил-полиэтиленгликоля (гидроксисукцинимидил-ПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира метоксиполиэтиленгликоля (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир мПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира полиэтиленгликоля акрилата (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир ПЭГ акрилат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилкарбоната (ПЭГ-сукцинимидилкарбонат), полиэтиленгликоль-пропиональдегида (ПЭГ-пропиональдегид), полиэтиленгликоль-бутилальдегида (ПЭГ-бутилальдегид), их производных и мультиразветвленных форм их производных. Предпочтительно, производное полиэтиленгликоля представляет собой линейный метоксиполиэтиленгликоль-малеимид, диразветвленный метоксиполиэтиленгликоль-малеимид или триразветвленный метоксиполиэтиленгликоль-малеимид, более предпочтительно триразветвленный метоксиполиэтиленгликоль-малеимид.
Полиэтиленгликоль или его производное, который можно использовать в настоящей заявке, является линейным или разветвленным, предпочтительно диразветвленным или триразветвленным, и более предпочтительно триразветвленным.
Непептидный полимер может иметь молекулярную массу 3000-100000 Да, предпочтительно 20000-70000 Да и более предпочтительно 40000-60000 Да. Когда непептидный полимер имеет молекулярную массу в этом молекулярно-массовом диапазоне, непептидный полимер может связываться с полипептидом для повышения растворимости получаемого конъюгата и увеличения времени удерживания конъюгата in vivo.
Поэтому фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает конъюгат, содержащий непептидный полимер, связанный с полипептидом, и, таким образом, может повышать стабильность in vivo и увеличивать период полужизни in vivo.
Также фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает конъюгат, включающий полипептид, или включающий полипептид и непептидный полимер, и таким образом, может использоваться в фармацевтической композиции для профилактики или лечения одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени.
Также фармацевтическую композицию, включающую конъюгат, который включает полипептид или включает полипептид и непептидный полимер, в соответствии с настоящим изобретением можно использовать в фармацевтической композиции для профилактики или лечения заболеваний, причиной которых является недостаточная секреция инсулина или пониженная чувствительность к инсулину.
Заболевания, причиной которых является недостаточная секреция инсулина или пониженная чувствительность к инсулину, могут включать диабет I типа, диабет II типа и диабетические осложнения.
Также фармацевтическую композицию, включающую конъюгат, который включает полипептид или включает полипептид и непептидный полимер, в соответствии с настоящим изобретением можно использовать в качестве фармацевтической композиции для профилактики, облегчения или лечения заболеваний, таких как гиперлипидемия, сердечно-сосудистые заболевания, артериосклероз и липид-связанные метаболические синдромы.
Также фармацевтическую композицию, включающую конъюгат, который включает полипептид или включает полипептид и непептидный полимер, в соответствии с настоящим изобретением можно использовать в качестве фармацевтической композиции для профилактики, облегчения или лечения заболеваний печени, таких как рак печени, цирроз печени, неалкогольный стеатогепатит и неалкогольное ожирение печени.
Когда композицию по настоящему изобретению используют в качестве лекарственного средства, фармацевтическая композиция, включающая полипептид, может быть сформулирована в виде следующих различных лекарственных форм для перорального или парентерального введения, которые затем вводят клинически, но настоящее изобретение этим не ограничивается.
Лекарственные формы для перорального введения включают, например, таблетки, пилюли, твердые/мягкие капсулы, растворы, суспензии, эмульсии, сиропы, гранулы, эликсиры, пастилки и т.п. В дополнение к активному ингредиенту эти композиции содержат разбавители (например, лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу и/или глицин), лубриканты (например, диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту и ее магниевые или кальциевые соли, и/или полиэтиленгликоль). Таблетки могут также содержать связующее, такое как силикат магния и алюминия, крахмальная паста, желатин, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидин, и могут необязательно содержать разрыхлитель, такой как крахмал, агар, альгиновая кислота или ее натриевые соли, или шипучую смесь и/или абсорбент, краситель, ароматизатор и подсластитель.
Фармацевтическую композицию, включающую полипептид, можно вводить парентерально. В этом случае парентеральное введение осуществляют такими методами, как подкожные, внутривенные, внутримышечные инъекции, интраназальный спрей, введение в полость носа или кишечник через слизистую оболочку, введение путем ингаляции или интраторакальной инъекции.
В этом случае, чтобы получить препарат для парентерального введения, полипептид можно смешать со стабилизатором или буфером для получения раствора или суспензии, которые могут быть получены в виде стандартных дозированных форм для ампул или флаконов. Композиция может быть стерильной и/или может содержать адъюванты, такие как консервант, стабилизатор, увлажняющий агент или агент, способствующий образованию эмульсии, соль и/или буфер для осмотического регулирования и другие терапевтически полезные вещества. В этом случае композицию можно формулировать в соответствии с обычными методами, такими как смешивание, гранулирование или нанесение покрытия.
Количество фармацевтической композиции, включающей полипептид в соответствии с настоящим изобретением, для введения в организм человека, может варьировать в зависимости от возраста, массы тела, пола, способа введения, состояния здоровья и тяжести заболевания пациента. Например, фармацевтическую композицию можно вводить пероральным или парентеральным путем введения в дозе от 0,001 до 200 мг/кг/день по усмотрению врача или фармацевта.
Настоящее изобретение также относится к способу получения фармацевтической композиции, включающей конъюгат, который включает полипептид и непептидный полимер.
Прежде всего, в способе получения фармацевтической композиции полипептид имеет аминокислотную последовательность, представленную общей формулой 1, как описано выше. Кроме того, непептидный полимер описан выше, поэтому подробное описание полипептида и непептидного полимера будет опущено.
Более конкретно, способ получения фармацевтической композиции включает смешивание непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом. В этом случае полипептид и непептидный полимер могут взаимодействовать при молярном соотношении от 1:1 до 1:5, таким образом, полипептид и непептидный полимер могут связываться друг с другом при молярном соотношении 1:1. В этом случае смешивание предпочтительно осуществляют при молярном соотношении от 1:1 до 1:2 и более предпочтительно при молярном соотношении 1:1,2, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Когда смешивание осуществляют в этих пределах молярного соотношениия, конъюгат можно получить с высоким выходом, что делает возможным получение конъюгата, включающего полипептид и непептидный полимер, с высокой чистотой.
В соответствии с одним иллюстративным вариантом осуществления настоящего изобретения, конъюгат также можно получить путем ковалентного связывания непептидного полимера с C-концом полипептида. Например, конъюгат также можно получить с высокой реактивностью с использованием, в качестве непептидного полимера, метоксиполиэтиленгликоля, имеющего малеимидную группу, и с использованием, в качестве полипептида, полипептида, имеющего цистеин на его C-конце, и, таким образом, можно получить высокий выход и увеличенный период полужизни в крови.
Смешивание непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом можно осуществить при pH 4,0-9,0, предпочтительно при pH 5,5-7,5, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Когда смешивание осуществляют вне этого диапазона pH, выход может уменьшаться. Например, когда в качестве непептидного полимера используют метоксиполиэтиленгликоль, имеющий малеимидную группу, а в качестве полипептида используют полипептид, имеющий цистеин на его C-конце, смешивание предпочтительно осуществляют при pH 6-8. Когда полипептид и метоксиполиэтиленгликоль взаимодействуют в этом диапазоне pH, побочные реакции, такие как раскрытие кольца для малеимида, могут подавляться без побочных реакций, вызываемых амино группой полипептида.
Поскольку выход конъюгата составляет 85-95% при смешивании непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом, этот способ будет рентабельным благодаря очень высокому выходу и будет высоковоспроизводимым. Поэтому этот способ будет эффективно использоваться для получения лекарственных средств.
При смешивании непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом время реакции может составлять от 0,5 до 24 часов или от 1 до 24 часов, и предпочтительно составляет 2 часа, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Когда время реакции меньше чем 0,5 часа, выход будет снижаться и чистота будет снижаться. С другой стороны, когда время реакции больше 24 часов, полипептид может разлагаться или экономические эффекты могут снижаться из-за длительного времени переработки.
Также при смешивании непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом температура может составлять 0-10°C, предпочтительно 4-40°C, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Также температура конкретно не ограничивается, при условии отсутствия химических изменений полипептида или непептидного полимера.
При смешивании непептидного полимера с полипептидом для их взаимодействия друг с другом каждый из полипептида и непептидного полимера можно растворить с использованием одинаковых или разных растворителей. Предпочтительно растворитель представляет собой буферный раствор, спирт, диметилсульфоксид (DMSO) или их смесь, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Также растворитель включает растворители, которые легко можно использовать в данной обьласти техники.
Настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, который включает введение субъекту фармацевтической композиции, включающей полипептид.
Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения одного или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, который включает введение субъекту фармацевтической композиции, включающей полипептид.
Способ осуществления изобретения
Далее настоящее изобретение будет подробно описано со ссылкой на прилагаемые чертежи, чтобы специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение, мог легко осуществить изобретение на практике. Однако должно быть понятно, что настоящее изобретение может быть осуществлено в различных формах, но не предполагает ограничения в этом контексте. По всему описанию одинаковые ссылочные позиции относятся к одинаковым элементам.
Пример 1
Полипептид, в который был введен цистеин (молекулярная масса: 3,509 Да; SEQ ID NO. 2:
H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC).
Остатки, подчеркнутые и выделенные жирным шрифтом в аминокислотной последовательности SEQ ID NO. 2, означают, что ковалентное кольцо образовано между этими остатками.
Пример получения 1: Синтез конъюгата, включающего полипептид и непептидный полимер
Для получения конъюгата, включающего полипептид и непептидный полимер, в качестве полипептида использовали полипептид, в который был введен цистеин в C-концевую область (в положение 30) (молекулярная масса(MW): 3509 Да; SEQ ID NO. 2: H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC).
При этом, малеимид-активированный монометокси ПЭГ (мПЭГ-MAL, NOF (Japan)) использовали в качестве непептидного полимера, как показано в следующей Таблице 2.
Для получения конъюгатов Примеров 2-7 полипептиды получали, как показано в следующей Таблице 2. В этом случае каждый из полипептидов растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO), а мПЭГ-MAL растворяли в 50 мМ фосфатно-солевом буферном растворе (pH 6).
| Таблица 2 | ||
| Наименование | Полипептиды | Непептидные полимеры |
| Пример 2 | Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC (SEQ ID NO. 2) |
Триразветвленный мПЭГ-MAL (MW: 50 кДа) |
| Пример 3 | Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC (SEQ ID NO. 2) |
Диразветвленный мПЭГ-MAL (MW: 20 кДа) |
| Пример 4 | Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEQAAKEFVQWLMNTC (SEQ ID NO. 2) |
Линейный мПЭГ-MAL (MW: 20 кДа) |
| Пример 5 | Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность HGQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC (SEQ ID NO. 3) |
Триразветвленный мПЭГ-MAL (MW: 50 кДа) |
| Пример 6 | Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность H(Aib)QGTFTSDYSKYLDEEAVKEFVQWLMNTC (SEQ ID NO. 4) |
Триразветвленный мПЭГ-MAL (MW: 50 кДа) |
| Пример 7 | Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность HGQGTFTSDYSKYLDEEAVKEFVQWLMNTC (SEQ ID NO. 5) |
Триразветвленный мПЭГ-MAL (MW: 50 кДа) |
В аминокислотных последовательностях SEQ ID NO. 2-4, как показано в Таблице 2, два остатка, подчеркнутые и выделенные жирным шрифтом, относятся к остаткам, имеющим ковалентное кольцо, образованное между ними.
Полипептид и непептидный конъюгат смешивали в молярном соотношении 1:1,2 и осуществляли взаимодействие при комнатной температуре в течение 2 часов. После завершения реакции реакционный раствор разделяли ионообменной хроматографией с использованием колонки TSK SP-5PW (7,5 × 75 мм, Tosoh, Japan) при скорости потока 0,8 мл/мин. Разделение отслеживали при УФ длине волны 280 нм. ПЭГилированный полипептид разделяли с использованием метода линейного градиента с использованием в качестве подвижных фаз 20 мМ ацетатного буферного раствора (pH 4) (подвижная фаза A) и 1 M раствора хлорида натрия (в 20 мМ ацетатного буферного раствора (pH 4)) (подвижная фаза B). ВЭЖХ осуществляли для оценки чистоты ПЭГилированного полипептида (см. Фиг. 1). Затем измеряли молекулярную массу ПЭГилированного полипептида с использованием масс-спектрометра MALDI-TOF (см. Фиг. 2). Также на основании хроматограммы, полученной в процессе хроматографического разделения, рассчитывали выходы конъюгатов Примеров 2-7 как отношения площадей конъюгатов по отношению к полипептиду. Результаты представлены в Таблице 3.
| Таблица 3 | |
| Наименование | Выход |
| Пример 2 | 90% |
| Пример 3 | 92% |
| Пример 4 | 91% |
| Пример 5 | 89% |
| Пример 6 | 91% |
| Пример 7 | 90% |
Как показано в Таблице 3, было подтверждено, что конъюгаты были получены с выходом 90% или больше. Поэтому способ получения фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением обладает преимуществом, заключающимся в том, что этот способ можно эффективно использовать для получения терапевтического средства, поскольку конъюгаты получают с высоким выходом благодаря высокой реактивности с пептидами, и способ является рентабельным и высоковоспроизводимым благодаря простым процедурам получения.
Экспериментальный Пример 1: Измерение активности Примера 2 in vitro
Для проверки профилактического или терапевтического эффекта конъюгата Примера 2 на ожирение, диабет и неалкогольную жировую болезнь печени этот эксперимент осуществляли с использованием клеточной линии, экспрессирующей рецептор GLP-1 (производное глюкагона) и рецептор глюкагона (GCGR).
Для определения активности в отношении рецептора GLP-1 клетки HEK293/CRE-Luc, экспрессирующие человеческий глюкагоновый GLP-1 рецептор, закупали у GenScript и использовали. Клетки высевали в 96-луночный планшет при 5 × 104 клеток/лунка и каждую из лунок затем обрабатывали полипептидом Примера 1 (0,001-300 нМ), конъюгатом Примера 2 (0,001-300 нМ), природным глюкагоном (SEQ ID NO. 1: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT, 0,013-300 нМ) и GLP-1 (SEQ ID NO. 6: HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR, 0,001-300 нМ). Затем клетки инкубировали в течение 4 часов при температуре 37°C в CO2 инкубаторе. Затем измеряли количество генерируемого цАМФ (люциферазный репортер) с использованием системы анализа люциферазы One-Glo™ (Promega) для расчета EC50 значения в отношении GLP-1 рецептора. Результаты представлены в следующей Таблице 4.
Кроме того, для определения активности в отношении рецептора глюкагона (GCGR), использовали набор для анализа cAMP Hunter™ eXpress GCGR CHO-K1 GPCR от компании DiscoverX. Использовали CHO-K1 клетки, экспрессирующие рецептор глюкагона человека, и высевали в 96-луночный планшет при плотности 3 × 104 клеток/лунка. Затем каждую из лунок обрабатывали полипептидом Примера 1 (0,013-300 нМ), конъюгатом Примера 2 (0,013-300 нМ), природным глюкагоном (0,015-33,33 нМ) и GLP-1 (0,001-30,00 нМ) и клетки инкубировали в течение 30 минут при температуре 37°C в CO2 инкубаторе. Затем измеряли количество генерируемого цАМФ для расчета EC50 значения в отношении рецептора глюкагона (GCGR). Результаты представлены в следующей Таблице 4.
| Таблица 4 | ||
| Наименование | EC50 рецептора GLP-1 (нМ) | EC50 рецептора глюкагона (GCGR) (нМ) |
| Пример 1 | 0,13 | 38,65 |
| Пример 2 | 2,12 | 46,98 |
| Природный глюкагон | 11,42 | 0,15 |
| GLP-1 | 0,07 | > 1,000 |
Как показано в Таблице 4, GLP-1 показал высокую активность в отношении GLP-1 рецептора, но имел очень низкую активность в отношении рецептора глюкагона, которую нельзя было измерить. С другой стороны, природный глюкагон имел очень высокую активность в отношении рецептора глюкагона, но показал низкую активность в отношении рецептора GLP-1. На основании этих результатов было подтверждено, что экспериментальный способ имел высокую селективность.
При этом, было подтверждено, что полипептид Примера 1 имел значение EC50=0,13 в отношении GLP-1 рецептора, значение, которое почти идентично значению GLP-1, что указывает на то, что полипептид Примера 1 показал очень высокую активность в отношении GLP-1 рецептора, и что полипептид Примера 1 также обладал активностью в отношении рецептора глюкагона. Также с использованием эксперимента на животных было подтверждено, что полипептид Примера 1 имел эффект против ожирения.
Также было подтверждено, что конъюгат Примера 2 сохранял аналогичную активность в отношении GLP-1 рецептора и рецептора глюкагона по сравнению с полипептидом Примера 1. Было подтверждено, что полипептид, как правило, имел значительно более низкую активность в отношении рецепторов, когда непептидный полимер (например, ПЭГ) был связан с полипептидом, по сравнению с активностью до конъюгации, тогда как конъюгат Примера 2 имел менее уменьшенную активность в отношении рецепторов, даже когда непептидный полимер был связан с полипептидом, что указывает на то, что конъюгат Примера 2 показал увеличенный период полужизни in vivo с поддержанием при этом высокой активности.
Поэтому было подтверждено, что фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением обладает отличной активностью в отношении рецептора глюкагона и GLP-1 рецептора и, таким образом, обладает антидиабетическим эффектом и эффектом против ожирения, а также эффектом снижения уровня триглицеридов путем подавления аппетита, повышения секреции инсулина и промотирования липолиза в жировых клетках.
Экспериментальный Пример 2: Измерение 1 активности Примера 2 in vivo
Для проверки профилактического или терапевтического эффекта конъюгата Примера 2 на ожирение или диабет конъюгат Примера 2 вводили C57BL/6 мышам для измерения изменения потребления пищи, глюкозы в крови и массы тела. Результаты представлены в Таблице 5.
Сначала получали животную модель ожирения путем содержания нормальных C57BL/6 мышей (примерно 6-недельного возраста) на 60% высокожировой диете в течение примерно 24 недель и увеличения массы тела мышей в среднем до примерно 50 г. Затем вводили конъюгат Примера 2 подкожной инъекцией при дозе 20 нмоль/кг один раз в два дня в течение 2 недель. В качестве положительного контроля также вводили агонист GLP-1 ‘лираглутид’ подкожной инъекцией при дозе 100 нмоль/кг один раз в день в течение 2 недель. В течение 2 недель, когда вводили лекарственное средство, потребление пищи, уровень глюкозы в крови и массу тела измеряли один раз в два дня в заданных точках времени. Результаты представлены в следующей Таблице 5.
В этом случае массу тела и уровень глюкозы в крови выражали в процентах (%), исходя из 100% до введения (День 0).
| Таблица 5 | |||||||||
| Время (день) | Пример 2 | Положительный контроль | Необработанная группа | ||||||
| Масса тела (%) | Потребление пищи (г) | Глюкоза в крови (%) | Масса тела (%) | Потребление пищи (г) | Глюкоза в крови (%) | Масса тела (%) | Потребление пищи (г) | Глюкоза в крови (%) | |
| 0 | 100 | 0 | 100 | 100 | 0 | 100 | 100 | 0 | 100 |
| 2 | 97 | 4 | 87 | 93 | 2 | 59 | 100 | 6 | 93 |
| 4 | 94 | 8 | 75 | 92 | 5 | 78 | 101 | 11 | 125 |
| 6 | 89 | 11 | 48 | 90 | 9 | 80 | 100 | 16 | 123 |
| 8 | 82 | 13 | 32 | 89 | 13 | 81 | 101 | 21 | 110 |
| 10 | 74 | 15 | 35 | 87 | 16 | 85 | 102 | 28 | 129 |
| 12 | 68 | 17 | 32 | 86 | 19 | 88 | 102 | 34 | 120 |
| 14 | 61 | 18 | 18 | 86 | 22 | 93 | 102 | 40 | 121 |
В этом случае необработанная группа относится к группе мышей, которым вводили PBS вместо конъюгата Примера 2.
Как показано в Таблице 5, необработанная группа потребляла примерно 40 г пищи в течение 2 недель, тогда как группа мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, потребляла примерно 18 г пищи, в которой кумулятивное потребление пищи снижалось более чем наполовину по сравнению с необработанной группой. Потребление пищи было схожим в группах мышей, которым вводили положительный контроль и конъюгат Примера 2.
При этом, что касается паттерна изменений массы тела с течением времени, изменения массы тела не наблюдали в необработанной группе по сравнению с массой тела, наблюдаемой в момент времени введения (День 0), и масса тела снижалась примерно на 15% в группе положительного контроля по сравнению с массой тела, наблюдаемой до введения, что указывает на то, что лираглутид обладал низким профилактическим или терапевтическим эффектом на ожирение. С другой стороны, в группе мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, масса тела заметно снижалась до 61% по сравнению с массой тела, измеренной до введения.
Также, что касается паттерна изменений уровня глюкозы в крови с течением времени, было показано, что уровень глюкозы в крови снижался на примерно 80% по сравнению с уровнем, измеренным до введения, что указывает на то, что конъюгат Примера 2 обладал эффектом снижения уровня глюкозы в крови, но что положительный контроль обладал низким эффектом снижения уровня глюкозы в крови.
На основании этих результатов можно видеть, что эффект конъюгата Примера 2 на снижение массы тела был эффектом, проявляемым за счет повышения энергетического метаболизма в организме, а также просто уменьшения потребления пищи. Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением могла обладать эффектами уменьшения потребления пищи, сдерживания опорожнения желудка и промотирования липолиза.
Экспериментальный Пример 3: Измерение 2 активности Примера 2 in vivo
Этот эксперимент осуществляли таким же образом, как в Экспериментальном примере 2, и затем оценивали переносимость глюкозы в мышиной модели с использованием интраперитонеального теста переносимости глюкозы (ipGTT).
По завершении 2-недельного введения лекарственных средств таким же образом, как в Экспериментальном примере 2, интраперитонеально вводили 2 г/кг глюкозы для измерения изменения уровня глюкозы в крови с течением времени (0, 15, 30, 60, 90 и 120 минут). Результаты представлены в следующей Таблице 6.
| Таблица 6 | |||
| Время (мин) | Пример 2 | Положительный контроль | Необработанная группа |
| 0 | 40 | 109 | 118 |
| 15 | 216 | 283 | 600 |
| 30 | 172 | 202 | 522 |
| 60 | 61 | 145 | 336 |
| 90 | 48 | 124 | 236 |
| 120 | 44 | 103 | 146 |
Как показано в Таблице 6, на основании результатов, полученных после введения лекарственных средств в течение 2 недель, было подтверждено, что уровень глюкозы в крови резко повышался, а затем снижался в необработанной группе из-за введения глюкозы, но что повышение уровня глюкозы в крови существенно уменьшалось в группе мышей, которым вводили конъюгат Примера 2. Поэтому, было подтверждено, что для конъюгата Примера 2 переносимость глюкозы повышалась, по сравнению с необработанной группой. Также было показано, что повышение уровня глюкозы в крови было меньше в группе мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, по сравнению с положительным контролем.
Экспериментальный Пример 4: Измерение 3 активности Примера 2 in vivo
Для оценки профилактического или терапевтического эффекта конъюгата Примера 2 на диабет конъюгат Примера 2 вводили мышам BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd (db/db мышам) примерно 7-недельного возраста и измеряли изменения уровня глюкозы в крови и массы тела с течением времени.
Прежде всего, 7-недельным мышам db/db вводили конъюгат Примера 2 подкожной инъекцией при дозе 20 нмоль/кг один раз в два дня в течение 12 дней. В течение 12 дней, когда вводили лекарственное средство, изменение уровня глюкозы в крови и массы тела определяли один через день после каждого введения лекарственного средства. Результаты представлены в следующей Таблице 7.
Затем для осуществления интраперитонеального теста переносимости глюкозы (ipGTT) 2 г/кг глюкозы вводили интраперитонеально после 12-дневого введения лекарственного средства и определяли изменение уровня глюкозы в крови с течением времени (0, 15, 30, 60, 90, и 120 минут). Результаты представлены в Таблице 8. Для определения степени долгосрочного изменения среднего уровня глюкозы в крови также измеряли уровень гликированного гемоглобина (HbA1c) после введения лекарственного средства. Результаты показаны на Фиг. 3.
| Таблица 7 | ||||||
| Время (день) | Пример 2 | Необработанная группа | ||||
| Глюкоза в крови (%) | Масса тела (%) | Глюкоза в крови (%) | Масса тела (%) | |||
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | ||
| 2 | 88 | 96 | 105 | 99 | ||
| 4 | 34 | 91 | 113 | 100 | ||
| 6 | 25 | 86 | 108 | 102 | ||
| 8 | 17 | 84 | 122 | 103 | ||
| 10 | 17 | 79 | 119 | 106 | ||
| 12 | 16 | 76 | 128 | 104 | ||
| Таблица 8 | ||||||
| Время (мин) | Пример 2 | Необработанная группа | ||||
| 0 | 63 | 244 | ||||
| 15 | 190 | 564 | ||||
| 30 | 246 | 600 | ||||
| 60 | 341 | 600 | ||||
| 90 | 356 | 600 | ||||
| 120 | 396 | 600 | ||||
Как показано в Таблице 7, было подтверждено, что потеря массы тела наблюдалась в группе мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, по сравнению с необработанной группой. Также было подтверждено, что высокий уровень глюкозы в крови сохранялся в течение 2 недель в необработанной группе, тогда как в группе мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, уровень глюкозы в крови снижался.
Как показано в Таблице 8, также было обнаружено, что группа мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, показала более высокую переносимость глюкозы по сравнению с необработанной группой.
Также, как показано на Фиг. 3, было обнаружено, что введение конъюгата Примера 2 существенно снижало уровень гликированного гемоглобина, что указывает на то, что уровень глюкозы в крови стабильно поддверживался на низком уровне посредством введения конъюгата Примера 2.
Экспериментальный Пример 5: Измерение 4 активности Примера 2 in vivo
Для проверки профилактического или терапевтического эффекта концентрации и количества введений конъюгата Примера 2 на ожирение конъюгат Примера 2 вводили мышам C57BL/6 и определяли изменения потребления пищи и массы тела с течением времени.
Сначала получали животную модель ожирения путем содержания нормальных C57BL/6 мышей (примерно 6-недельного возраста) на 60% высокожировой диете в течение примерно 24 недель и увеличения массы тела мышей в среднем до примерно 50 г. Затем каждой из групп вводили конъюгат Примера 2 в течение 2 недель, как показано в следующей Таблице 9. Через 2 недели измеряли конечную массу тела мышей. Результаты показаны на Фиг. 4.
| Таблица 9 | |
| Группа | Способ введения |
| Группа 1 | Пример 2 вводят подкожной инъекцией при 20 нмоль/кг один раз в два дня |
| Группа 2 | Пример 2 вводят подкожной инъекцией при 40 нмоль/кг один раз в два дня |
| Группа 3 | Пример 2 вводят подкожной инъекцией при 40 нмоль/кг один раз в неделю |
| Необработанная группа | PBS вводят подкожной инъекцией один раз в два дня |
Как показано на Фиг. 4, было определено, что эффект конъюгата Примера 2 на снижение массы тела был более заметным при введении конъюгата Примера 2 при увеличивающейся дозе, и что конъюгат Примера 2 имел существенный эффект на снижение массы тела даже при введении при низкой дозе 20 нмоль/кг. Поэтому было подтверждено, что конъюгат Примера 2 показал дозозависимый ответ. Также было подтверждено, что, даже когда интервал между введениями конъюгата Примера 2 увеличивали до введения один раз в неделю, конъюгат Примера 2 имел такой же эффект на снижение массы тела. Поэтому фармацевтическая композиция для профилактики или лечения ожирения в соответствии с настоящим изобретением имела продолжительный период полужизни in vivo и была способна демонстрировать высокий уровень терапевтического эффекта на ожирение даже при введении при низкой дозе.
Экспериментальный Пример 6: Измерение 5 активности Примеров 2 и 6 in vivo
Для проверки профилактического или терапевтического эффекта конъюгатов Примеров 2 и 6, которые имели разные аминокислотнные последовательности, на ожирение или диабет получали животную модель ожирения путем содержания нормальных C57BL/6 мышей (примерно 6-недельного возраста) на 60% высокожировой диете в течение примерно 24 недель и увеличения массы тела мышей в среднем примерно до 50 г. Затем каждый из конъюгатов Примеров 2 или 6 вводили подкожной инъекцией при дозе 20 нмоль/кг один раз в два дня в течение 2 недель. В качестве контроля вводили PBS вместо конъюгатов Примеров. В течение 2 недель, когда вводили конъюгаты Примеров 2 или 6, определяли изменения уровня глюкозы в крови с течением времени. Результаты показаны на Фиг. 5. Также для осуществления интраперитонеального теста переносимости глюкозы (ipGTT) после 2-недельного введения лекарственного средства вводили 2 г/кг глюкозы интраперитонеально и определяли изменения уровня глюкозы в крови с течением времени (0, 15, 30, 60, 90, и 120 минут). Результаты показаны на Фиг. 6.
Как показано на Фиг. 5, было обнаружено, что уровень глюкозы в крови снижался у мышей, которым вводили конъюгаты Примеров 2 или 6, по сравнению с контролем, но что уровень глюкозы в крови повышался в контрольной группе, которой вводили PBS.
Как показано на Фиг. 6, было обнаружено, что уровень глюкозы в крови резко повышался, а затем снижался в контрольной группе из-за введения глюкозы, но что повышение уровня глюкозы в крови существенно уменьшалось у мышей, которым вводили конъюгаты Примеров 2 или 6 в течение 2 недель, по сравнению с контролем. На основании этих результатов, было подтверждено, что переносимость глюкозы при введении конъюгатов Примеров 2 и 6 повышалась, по сравнению с контролем.
Поэтому было подтверждено, что фармацевтическая композиция, включающая полипептид в соответствии с настоящим изобретением, имела профилактический или терапевтический эффект на ожирение и диабет, как показано в Фиг. 5 и 6.
Экспериментальный Пример 7: Измерение 6 активности Примера 2 in vivo
Для проверки профилактического или терапевтического эффекта конъюгата Примера 2 на неалкогольные жировые заболевания печени конъюгат Примера 2 вводили животным моделям неалкогольной жировой болезни печени, проверяли уровень сывороточного холестерина и изменение массы печени и брали биопсию печени. Результаты показаны на Фиг. 7-9.
Более конкретно, сначала получали лабораторную животную модель неалкогольных жировых заболеваний печени путем содержания нормальных C57BL/6 мышей (примерно 6-недельного возраста) на 60% высокожировой диете в течение примерно 24 недель и увеличения массы тела мышей в среднем примерно до 50 г. Затем вводили конъюгат Примера 2 подкожной инъекцией при дозе 20 нмоль/кг один раз в два дня в течение 2 недель. В качестве контроля также подкожной инъекцией вводили агонист GLP-1 ‘лираглутид’ при дозе 100 нмоль/кг ежедневно в течение 2 недель. После 2-недельного введения лекарственного средства кровь мышей собирали для измерения концентрации сывороточного холестерина и печень извлекали, взвешивали и заливали в парафин, а затем при помощи микротома получали тонкие срезы. Затем осуществляли биопсию печени с использованием гематоксилина & эозина (H&E).
Что касается Фиг. 7 и 8, показывающих измерение уровня сывороточного холестерина и массы печени, было подтверждено, что уровень сывороточного холестерина и масса печени существенно снижались у мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, по сравнению с необработанной группой, которой вводили PBS, а также снижались по сравнению с положительным контролем (т.е. лираглутид-обрабатываемой группой). Также, что касается результатов биопсии печени, показанных на Фиг. 9, можно видеть, что жировой гепатоз существенно уменьшался в группе мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, по сравнению с необработанной группой, которой вводили PBS, а также уменьшался по сравнению с положительным контролем (т.е. лираглутид-обрабатываемой группой).
Таким образом, было обнаружено, что фармацевтическая композиция для профилактики или лечения неалкогольной жировой болезни печени в соответствии с настоящим изобретением была эффективна в профилактике и лечении неалкогольной жировой болезни печени, поскольку фармацевтическая композиция уменьшала массу печени, уровень сывороточного холестерина и жировой гепатоз в животной модели неалкогольных жировых заболеваний печени.
Экспериментальный Пример 8: Измерение 7 активности Примера 2 in vivo
Для проверки профилактического или терапевтического эффекта конъюгата Примера 2 на неалкогольные жировые заболевания печени животной модели неалкогольных жировых заболеваний печени вводили конъюгат Примера 2 и измеряли уровень сывороточного холестерина, массу печени и изменение уровня триглицеридов в печени. Результаты показаны на Фиг. 10-12.
Прежде всего, получали лабораторную животную модель неалкогольных жировых заболеваний печени путем содержания нормальных C57BL/6 мышей (примерно 6-недельного возраста) на диете с высоким содержанием трансжиров, которая содержала 40% жиров, 20% фруктозы и 2% холестерина, в течение примерно 16 недель. Затем вводили конъюгат Примера 2 подкожной инъекцией при дозе 20 нмоль/кг один раз в три дня в течение 4 недель. В качестве положительного контроля также подкожной инъекцией вводили агонист GLP-1 ‘лираглутид’ при дозе 53 нмоль/кг ежедневно в течение 4 недель. По завершении 4-недельного эксперимента измеряли уровень сывороточного холестерина, массу печени и уровень триглицеридов в печени (печеночные TG).
Что касается Фиг. 10-12, показывающих измерение уровня сывороточного холестерина, массы печени и печеночных TG, можно видеть, что уровень сывороточного холестерина, масса печени и уровень триглицеридов в печени существенно снижались у мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, по сравнению с необработанной группой, которой вводили физиологический раствор, а также снижались по сравнению с положительным контролем (т.е. лираглутид-обрабатываемой группой). Таким образом, было обнаружено, что фармацевтическая композиция для профилактики или лечения неалкогольной жировой болезни печени в соответствии с настоящим изобретением была эффективна в профилактике и лечении неалкогольной жировой болезни печени, поскольку фармацевтическая композиция снижала массу печени, уровни сывороточного холестерина и триглицеридов в печени в животной модели неалкогольных жировых заболеваний печени.
Экспериментальный Пример 9: Измерение 8 активности Примера 2 in vivo
После осуществления эксперимента таким же образом, как в Экспериментальном примере 8, брали биопсию печени и осуществляли оценку NAFLD активности (NAS) для проверки профилактического или терапевтического эффекта на неалкогольные жировые заболевания печени. Эксперимент осуществляли таким же образом, как в Экспериментальном примере 8, после 4-недельного введения конъюгата Примера 2 печени мышей извлекали, заливали в парафин, а затем при помощи микротома получали тонкие срезы. Затем осуществляли окрашивание гематоксилином & эозином (H&E) и окрашивание oil-red-O красителем.
В результате, как показано на Фиг. 13 и 14, гистология печени и NAS результаты после 4-недельного введения показали, что жировой гепатоз и NAS существенно уменьшались у мышей, которым вводили конъюгат Примера 2, по сравнению с необработанной группой, которой вводили физиологический раствор, и с положительным контролем (т.е. лираглутид-обрабатываемой группой). Таким образом, было обнаружено, что фармацевтическая композиция для профилактики или лечения неалкогольной жировой болезни печени в соответствии с настоящим изобретением была эффективна в профилактике и лечении неалкогольной жировой болезни печени, поскольку фармацевтическая композиция уменьшала жировой гепатоз и имела пониженную NAS в животной модели неалкогольных жировых заболеваний печени.
Хотя предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения были подробно описаны выше, должно быть понятно, что многие изменения и/или модификации изложенных основных концепций изобретения, которые могут быть очевидными для специалистов в соответствующей области техники, тем не менее будут охватываться объемом настоящего изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
Промышленная применимость
Фармацевтическая композиция, включающая полипептид в соответствии с настоящим изобретением, может быть использована для безопасной профилактики или лечения ожирения, диабета или неалкогольной жировой болезни печени, поскольку фармацевтическая композиция обладает эффектами уменьшения потребления пищи, повышения секреции инсулина, сдерживания опорожнения желудка, промотирования липолиза и снижения уровня триглицеридов без каких-либо побочных эффектов, таких как рвота или тошнота.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> D&D Pharmatech Inc.
Lee, Kang Choon
Park, Og Yi
An, Hyoung Tae
Park, Eun Ji
Shin, Jae Hee
Lim, Sung Mook
<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД
<130> DDP 100 PCT
<140> PCT/KR2019/008918
<141> 2019-07-19
<150> KR 10-2018-0083946
<151> 2018-07-19
<150> KR 10-2019-0060513
<151> 2019-05-23
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29
<212> Белок
<213> Неизвестно
<220>
<223> Глюкагон
<400> 1
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 2
<211> 30
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<220>
<221> Xaa = аминоизомасляная кислота (Aib)
<222> (2)..(2)
<400> 2
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 3
<211> 30
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 3
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 4
<211> 30
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<220>
<221> Xaa = аминоизомасляная кислота (Aib)
<222> (2)..(2)
<400> 4
His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 5
<211> 30
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 5
His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys
20 25 30
<210> 6
<211> 30
<212> Белок
<213> Неизвестно
<220>
<223> GLP-1
<400> 6
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 7
<211> 27
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 7
Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Lys Arg
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 8
<211> 27
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 8
Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Gln Ala
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 9
<211> 27
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 9
Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Glu Ala
1 5 10 15
Val Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 10
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 10
Glu Lys Arg Ala Lys
1 5
<210> 11
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 11
Glu Gln Ala Ala Lys
1 5
<210> 12
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 12
Glu Glu Ala Val Lys
1 5
<---
Claims (34)
1. Терапевтическое средство для профилактики или лечения заболевания, выбранного из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, состоящее из полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1:
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, N-диметил-гистидил, бета-гидрокси-имидазо-пропионил, 4-имидазоацетил или бета-карбокси-имидазо-пропионил;
X1 представляет собой делецию, глицин или аминоизомасляную кислоту (Aib);
R2 представляет собой EKRAK, EQAAK или EEAVK; и
R3 представляет собой делецию, цистеин, лизин или метионин, и
непептидного полимера,
причем полипептид ковалентно связан с непептидным полимером.
2. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания, выбранного из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, содержащая эффективное количество терапевтического средства по п.1.
3. Фармацевтическая композиция по п.2, где терапевтическое средство не включает фрагмент антитела.
4. Фармацевтическая композиция по п.2, где R2 включает глутаминовую кислоту (E) и лизин (K), и глутаминовая кислота и лизин образуют кольцо через амидную связь.
5. Фармацевтическая композиция по п.2, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), полипропиленгликоля, coполимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта (PVA), полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, полимолочной кислоты (PLA), полимолочной-гликолевой кислоты (PLGA), липидного полимера, хитина, гиалуроновой кислоты и их комбинаций.
6. Фармацевтическая композиция по п.5, где непептидный полимер представляет собой полиэтиленгликоль или его производное.
7. Фармацевтическая композиция по п.6, где непептидный полимер имеет молекулярную массу 3000-100000 Да.
8. Фармацевтическая композиция по п.6, где производное полиэтиленгликоля представляет собой по меньшей мере одно производное, выбранное из группы, состоящей из метоксиполиэтиленгликоля, метоксиполиэтиленгликоль-N-гидроксисукцинимида, метоксиполиэтиленгликоль-пропиональдегида, метоксиполиэтиленгликоль-малеимида, полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (ПЭГ-сукцинимидилпропионат), метоксиполиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (метокси-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата акрилата (ПЭГ-сукцинимидилпропионата акрилат), тиол-полиэтиленгликоль-сукцинимидилпропионата (тиол-ПЭГ-сукцинимидилпропионат), гидроксисукцинимидил-полиэтиленгликоля (гидроксисукцинимидил-ПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира метоксиполиэтиленгликоля (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир мПЭГ), сукцинимидилкарбоксиметилового эфира полиэтиленгликоля акрилата (сукцинимидилкарбоксиметиловый эфир ПЭГ акрилат), полиэтиленгликоль-сукцинимидилкарбоната (ПЭГ-сукцинимидилкарбонат), полиэтиленгликоль-пропиональдегида (ПЭГ-пропиональдегид), полиэтиленгликоль-бутилальдегида (ПЭГ-бутилальдегид), их производных и мультиразветвленных форм их производных.
9. Фармацевтическая композиция по п.6, где полиэтиленгликоль или его производное является линейным или разветвленным.
10. Фармацевтическая композиция по п.2, где фармацевтическую композицию используют для профилактики или лечения ожирения.
11. Фармацевтическая композиция по п.2, где фармацевтическую композицию используют для профилактики или лечения диабета.
12. Фармацевтическая композиция по п.2, где фармацевтическую композицию используют для профилактики или лечения неалкогольной жировой болезни печени.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, где неалкогольная жировая болезнь печени включает одно или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из неалкогольного ожирения печени, неалкогольного стеатогепатит, цирроза печени и рака печени.
14. Терапевтическое средство для профилактики или лечения заболевания, выбранного из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, состоящее из полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, представленную следующей общей формулой 1:
[Общая формула 1]
R1-X1-QGTFTSDYSKYLD-R2-EFVQWLMNT-R3,
где R1 представляет собой гистидин;
X1 представляет собой аминоизомасляную кислоту (Aib);
R2 представляет собой EQAAK; и
R3 представляет собой цистеин; и
причем полипептид ковалентно связан с триразветвленным метоксиполиэтиленгликоль-малеимидом.
15. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания, выбранного из ожирения, диабета и неалкогольной жировой болезни печени, содержащая эффективное количество терапевтического средства по п.14.
16. Способ профилактики или лечения неалкогольной жировой болезни печени, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.2 или 15.
17. Способ по п.16, где неалкогольная жировая болезнь печени включает одно или более заболеваний, выбранных из группы, состоящей из неалкогольного ожирения печени, неалкогольного стеатогепатита, цирроза печени и рака печени.
18. Способ профилактики или лечения ожирения, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.2 или 15.
19. Способ профилактики или лечения диабета, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.2 или 15.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2018-0083946 | 2018-07-19 | ||
| KR10-2019-0060513 | 2019-05-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2777095C1 true RU2777095C1 (ru) | 2022-08-01 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2607365C2 (ru) * | 2011-06-17 | 2017-01-10 | Ханми Сайенс Ко., Лтд. | Конъюгат, содержащий оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина, и его применение |
| CA3021933A1 (en) * | 2016-04-22 | 2017-10-26 | Shenzhen Turier Biotech Co., Ltd. | Glp-1r/gcgr dual target agonist polypeptide for treatment of fatty liver diseases, hyperlipemia and arteriosclerosis |
| RU2642267C2 (ru) * | 2012-07-25 | 2018-01-24 | Ханми Фарм. Ко., Лтд. | Композиция для лечения гиперлипидемии, содержащая производное оксинтомодулина |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2607365C2 (ru) * | 2011-06-17 | 2017-01-10 | Ханми Сайенс Ко., Лтд. | Конъюгат, содержащий оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина, и его применение |
| RU2642267C2 (ru) * | 2012-07-25 | 2018-01-24 | Ханми Фарм. Ко., Лтд. | Композиция для лечения гиперлипидемии, содержащая производное оксинтомодулина |
| CA3021933A1 (en) * | 2016-04-22 | 2017-10-26 | Shenzhen Turier Biotech Co., Ltd. | Glp-1r/gcgr dual target agonist polypeptide for treatment of fatty liver diseases, hyperlipemia and arteriosclerosis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MULLER S. et al., Spliceosomal peptide P140 for immunotherapy of systemic lupus erythematosus: results of an early phase II clinical trial, Arthritis & Rheumatism: Official Journal of the American College of Rheumatology, 2008, V. 58, N. 12, p.3873-3883, PAKULA A.A. et al., Genetic analysis of protein stability and function. Anna. Rev. Genet. 1989, v.23, p.289-310, TOKURIKI N. ET AL., Stability effects of mutations and protein evolvability, Curr. Opin. Struct. Biol., 2009, v.19, n.5, p.596-604, ORLANDO M., Modification of proteins and low molecular weight substances with hydroxyethyl starch (HES), Inauguraldissertation, Giesen, 2003, p.166, с.15 ZHOU J. et al. Preparation and PEGylation of exendin-4 peptide secreted from yeast Pichia pastoris, European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics, 2009, V. 72, N. 2, p.412-417, TREETHARNMATHUROT B. et al, Effect of PEG molecular weight and linking chemistry on the biological activity and thermal stability of PEGylated trypsin, Internat * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11667688B2 (en) | Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same | |
| US20210188937A1 (en) | Long-acting conjugate of triple glucagon/glp-1/gip receptor agonist | |
| KR101591411B1 (ko) | 옥신토모듈린과 면역글로불린 단편을 포함하는 결합체 및 그의 용도 | |
| US8097586B2 (en) | Modified exedins and uses thereof | |
| KR102291020B1 (ko) | 안정성이 증가된 글루카곤 유도체 | |
| KR102394681B1 (ko) | 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| US20250270275A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising polypeptide | |
| US20120196802A1 (en) | Modified exendins and uses thereof | |
| JP2006520818A (ja) | ポリエチレングリコール結合ｇｌｐ−１化合物 | |
| EA036479B1 (ru) | Пептид, активирующий рецептор гпп-1 и рецептор глюкагона, фармацевтическая композиция на его основе и их применение для профилактики или лечения ожирения | |
| KR20220092442A (ko) | 신규한 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중활성체 및 이의 용도 | |
| KR20120116942A (ko) | 폴리펩티드 접합체 | |
| RU2777095C1 (ru) | Фармацевтическая композиция, включающая полипептид | |
| KR101990075B1 (ko) | 폴리펩티드를 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| KR102094103B1 (ko) | 폴리펩티드를 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| HK1248129B (en) | Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same |