RU2775205C1 - Диагностический набор для определения беременности и бесплодия коров - Google Patents

Диагностический набор для определения беременности и бесплодия коров Download PDF

Info

Publication number
RU2775205C1
RU2775205C1 RU2021113020A RU2021113020A RU2775205C1 RU 2775205 C1 RU2775205 C1 RU 2775205C1 RU 2021113020 A RU2021113020 A RU 2021113020A RU 2021113020 A RU2021113020 A RU 2021113020A RU 2775205 C1 RU2775205 C1 RU 2775205C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
pregnancy
cows
diagnostic
diagnostic kit
alizarin
Prior art date
Application number
RU2021113020A
Other languages
English (en)
Inventor
Сергей Владимирович Позябин
Лариса Александровна Гнездилова
Сергей Васильевич Федотов
Наталья Сергеевна Белозерцева
Анна Вадимовна Панкратова
Светлана Федоровна Назимкина
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина) filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина)
Application granted granted Critical
Publication of RU2775205C1 publication Critical patent/RU2775205C1/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарного акушерства и гинекологии, в частности к препаратам, позволяющим определить беременность у коров. Диагностический набор включает упаковку, в которую помещают тестируемую поверхность или многолуночный планшет и диагностический препарат. Диагностический препарат содержит, об. %: фосфатно-буферный раствор 65-80; кристаллическую целлюлозу 10-25; бензоат натрия 0,5-1,0; 1%-ный бычий альбумин 1,0-2,0; ализарин 1,0-2,0; и остальное в виде сыворотки крови от иммунизированных животных. Использование изобретения позволит повысить точность постановки диагноза на беременность коров на ранних сроках стельности. 2 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к области ветеринарного акушерства и гинекологии, в частности к препаратам позволяющим определить беременность у коров.
В настоящее время основным способом диагностики беременности у крупных животных, например у коров, является ректальная пальпация развивающегося плода через прямую кишку. Данный способ дает возможность установления сроков беременности через 60-70 дней после оплодотворения. Использование УЗИ-сканеров для определения сроков беременности также ограничено из-за необходимости ввода электронного датчика через прямую кишку.
Ранняя и точная диагностика неудавшейся беременности животного, которое подвергают осеменению, имеет большое экономическое значение для промышленного животноводства. В связи с чем, существует значительная потребность в способе, с помощью которого можно точно определить, что животное не является беременным, чтобы не упустить возможности вновь осеменить животное в следующую стадию возбуждения полового цикла.
Известен способ иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок [2, 3], включающий обнаружение в сыворотке плацентарного гормона - хорионического гонадотропина в реакции ализариновых суспензионных антихориогонин-антител при помощи диагностикума, отличающийся тем, что гормон обнаруживается в моче животных, которую в объеме 5 мл вносят в пробирку, добавляют 1-2 капли диагностикума, содержимое пробирки перемешивают вращательными движениями до его однородного окрашивания в оранжевый цвет (10-15 с), далее пробы выдерживают при комнатной температуре в течение 15 мин и визуально учитывают реакцию, при этом положительная реакция на стельность - содержимое пробирки окрашивается в фиолетовый цвет, с последующим выпадением обильного осадка сиреневого или фиолетового цвета и просветлением надосадочной жидкости, отрицательная реакция - содержимое пробирки сохраняет изначальный оранжевый цвет и гомогенную консистенцию.
Известен способ определения ранней диагностики стельности включающий использование проб цельного молока, отобранные на 21 день после осеменения коров. Пробы наносили на мембранный носитель для получения сухих образцов [1].
Используя метод иммуноферментного анализа (ИФА) определяли количество образовавшихся пероксидазных иммунокомплексов с помощью однокомпонентного субстратного раствора на основе тетраметилбензидина (ТМБ). Интенсивность окраски образующегося продукта окисления ТМБ, регистрируемая на спектрофотометре, обратно пропорциональна концентрации прогестерона в анализируемом образце. В качестве стандартов использовали растворы, содержащие известную концентрацию прогестерона. Недостатком предлагаемого метода является то, что он требует наличия особого оборудования, которое в полевых условиях не всегда имеется.
Наиболее близким по своей технической сущности является диагностикумопределения беременности, основанный на способности церулоплазмина проявлять каталитическую активность как полифенолоксидазы. В результате окисления парафенилендиамина образуются вещества оранжевого цвета, интенсивность окраски пропорциональна концентрации церулоплазмина [4].
Необходимые реактивы:
- раствор №1: 0,4М ацетатный буфер (рН 5,6). Для приготовления раствора берут 1 мл 0,4 М СН3СООН и 7,2 мл 0,4 М CH3COONa.
- раствор №2: 1%-ный водный раствор парафенилендиаминасолянокислого. Берут 1 г парафенилендиамина солянокислого и растворяют в 99 мл Н2О.
- раствор №3: 25%-ный раствор едкого натра (NaOH). Берут 25 г NaOH и растворяют в 75 мл Н2О.
Способ осуществляется следующим образом.
В пробирки помещают 0,1 мл сыворотки крови, добавляют 1 мл 0,4 М ацететного буфера (рН 5.6) и 0,5 мл 1%-ного водного раствора парафенилендиамина солянокислого. Смешивают и помещают в водяную баню при 60°С. Через 10 мин реакцию останавливают добавлением 3,5 мл охлажденного 25%-ного раствора едкого натра. Полученную оранжевого цвета жидкость колориметрируют при 440 нм.
При значениях церрулоплазмина более 0,095 ед. оптической плотности диагностируют беременность (стельность) у коров на ранней стадии с высокой точностью и объективностью.
Однако данный диагностикум позволяет определять беременность в более поздние сроки, что ведет к потере времени на проведение повторного оплодотворения животных.
Задачей заявленного изобретения является расширение ассортимента диагностических реактивов и получение диагностического набора для определения беременности и бесплодия животных. В этом аспекте изобретение представляет диагностический набор определения беременности у животных по наличию хориального гонадотропина в биологических жидкостях (молоко).
Техническим результатом заявленного изобретения является точность постановки диагноза на беременность коров и телок на более ранних сроках стельности.
Достижение указанного технического результата возможно с применением диагностического набора для определения беременности и бесплодия коров, включающего буферный раствор и препарат натрия, который дополнительно содержит кристаллическую целлюлозу, бычий альбумин, краситель ализарин и сыворотку крови от иммунизированных животных при следующем соотношении компонентов, об. %:
Фосфатно-буферный раствор 65-80
Кристаллическая целлюлоза 10-25
1%-ный бычий альбумин 1,0-2,0
Краситель ализарин 1,0-2,0
Бензоат натрия 0,5-1,0
Сыворотка крови от
иммунизированных животных остальное
Для отработки количественного соотношения компонентов в наборе было сформирована группа стельных коров - из 20. Проверку на стельность проводили предлагаемым препаратом, содержащим разный количественный состав компонентов. Положительная реакция на беременность сопровождается образованием крупных хлопьев в пробах, в случае отсутствия хлопьев ставим диагноз на бесплодие у проверяемой коровы или телки.
Первый опыт ставили на пробах молока, которые смешивали с диагностическим препаратом, содержащий об. %: фосфатно-буферный раствор - 80; кристаллическая целлюлоза - 15; 1%-ного бычьего альбумина 0,5; красителя ализарина - 0,5; бензоат натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.
Во втором опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 70; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 1; красителя ализарина - 1,0; бензоата натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.
В третьем опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 65; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 2,0; красителя ализарина - 2,0; бензоат натрия - 1,0; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.
По результатам анализа диагностических тестов выявлено расхождение в постановке диагноза на стельность. Так набор, используемый в первом опыте был менее эффективен, погрешность составила 24,6%.
Набор препаратов, используемый во втором и третьем опыте показал одинаковую эффективность, при которой погрешность составила 4%.
Предложенный диагностический набор готовят следующим образом:
В 80 мл фосфатно-буфера растворяем 15 г кристаллической целлюлозы, затем вносим 1 г 1%-ного бычьего альбумина, тщательно перемешиваем. Далее в стерильном флаконе к готовому раствору добавляем 1 г красителя ализаринаи 1 г бензонат натрия смешиваю путем взбалтывания, а затем сыворотку крови от иммунизированных животных, доводя их объем состава до 100 мл.
Полученный таким образом препарат готов к применению.
Срок годности препарата - 8-12 месяцев, при хранении темном и прохладном месте (режиме 2+5°С).
Рабочее название диагностического препарата «Удин» (универсальный диагностический инновационный набор).
Набор включает в себя упаковку, которая вмещает тестируемую поверхность, такую как предметное стекло или многолуночные планшеты, где на указанную поверхность наносится 1 капля (0,05 мл) диагностикума «Удин», содержащего антитела к хориальному гонадотропину, которое будет связываться с эпитопом хориального гонадотропина исследуемого биологического материала (0,05 мл). В присутствии реагента, который при контакте с антителом способствует визуальному определению относительного количества присутствия хориального гонадотропина, указывающее на наличие или отсутствие беременности.
Набор согласно изобретению для диагностики статуса беременности с помощью определения относительного уровня индуцируемого при беременности гормона, такого как хориальный гонадотропин, в тестируемом образце по сравнению с контролем может быть получен различными способами, которые будут очевидны специалистам в данной области при прочтении описания.
Пример 1. Для ранней диагностики стельности подобрали группу коров, которых оплодотворили путем трансцервикального искусственного осеменения. На 22 день отбирали пробы цельного молока от исследуемых коров с целью постановки диагноза на беременность с использованием диагностического препарата «Удин». Для подтверждения диагноза отбирали образцы крови (10 мл) посредством венепункции яремной вены в пробирки "vacutainer", содержащие EDTA с последующим исследования сыворотки на специфический для беременности белок при помощи ИФА.
Для выявления стельности в качестве стандартного метода и контроля на 65-70 сутки после осеменения использовали ректальный метод диагностики. Полученные данные сведены в таблицу №1.
Figure 00000001
Из 34 исследованных коров при ректальной диагностике диагноз на наличие беременности был поставлен у 25 голов. Из них у 92% предварительный диагноз на стельность был поставлен при тестировании сыворотки крови в ИФА и при использовании набора для диагностики «УДИН», что свидетельствует о высокой достоверности метода.
Пример 2. Во второй серии тестов с целью диагностики беременности использовали слюну стельных коров с реагентами препарата «Удин». Для подтверждения диагноза отбирали образцы крови (10 мл) посредством венепункции яремной вены в пробирки "vacutainer", содержащие EDTA с последующим исследования сыворотки на специфический для беременности белок при помощи ИФА.
Для выявления стельности в качестве стандартного метода и контроля на 65-70 сутки после осеменения использовали ректальный метод диагностики. Полученные данные сведены в таблицу №2.
Figure 00000002
Из 34 коров при ректальной диагностики диагноз на наличие беременности был поставлен у 25 голов. Из них у 28% от общего числа исследованных животных были получены несовпадающие результаты диагностики стельности при использовании реагентов предлагаемого препарата со слюной коров.
Считаем, что применять предлагаемый диагностический набор целесообразно с пробой цельного молока (0,05 мл) с постановкой реакции на предметном стекле. Использование других биологических материалов (слюна и т.д.) не имеет смысла на ранних сроках стельности.
Пример 3. Было сформирована группа стельных коров - из 20. Проверку на стельность проводили предлагаемым препаратом содержащим разный количественный состав компонентов. Первый опты ставили на пробах молока, которые смешивали с диагностическим препаратом, содержащий об. %: фосфатно-буферный раствор - 80; кристаллическая целлюлоза - 15; 1%-ного бычьего альбумина 0,5; ализарина- 0,5; бензоат натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.
Во втором опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 70; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 1; ализарина- 1,0; бензоата натрия - 0,5; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.
В третьем опыте молоко смешивали с предлагаемым диагностическим препаратом, содержащим, об. %: фосфатно-буферный раствор - 65; кристаллическая целлюлоза - 25; 1%-ного бычьего альбумина - 2,0; ализарина - 2,0; бензоат натрия - 1,0; сыворотку крови от иммунизированных животных - остальное.
По результатам анализа диагностических тестов выявлено расхождение в постановке диагноза на стельность. Так, диагностический набор, используемый в первом опыте был менее эффективен, погрешность составила 24,6%.
Диагностический набор, используемый во втором и третьем опыте показал одинаковую эффективность при которой погрешность составила 4%.
Источники информации
1. М. Sheldon. Pregnancy diagnosis in cattle. InPregtice. 2002. 24. 310-317.
2. Богданов И.И. Иммунологический экспресс-тест на беременность и бесплодие коров. / И.И. Богданов, М.А. Богданова, А.Н. Фомин. - Вестник ветеринарии. 2011. 59(4). 11-12.
3. Заявка на патент №2011134963. Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок.
4. Патент на изобретение №2306701. Способ диагностики беременности у коров.

Claims (2)

  1. Диагностический набор для определения беременности коров по наличию хорионического гонадотропина в молоке, характеризующийся тем, что он содержит упаковку, в которую помещают тестируемую поверхность в виде предметного стекла или многолуночный планшет и диагностический препарат, содержащий фосфатно-буферный раствор, бензоат натрия, кристаллическую целлюлозу, 1%-ный бычий альбумин, ализарин и сыворотку крови от иммунизированных животных при следующем соотношении компонентов, об. %:
  2. фосфатно-буферный раствор 65-80 кристаллическая целлюлоза 10-25 1%-ный бычий альбумин 1,0-2,0 ализарин 1,0-2,0 бензоат натрия 0,5-1,0 сыворотка крови от иммунизированных животных остальное
RU2021113020A 2021-05-04 Диагностический набор для определения беременности и бесплодия коров RU2775205C1 (ru)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2775205C1 true RU2775205C1 (ru) 2022-06-28

Family

ID=

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2814890C1 (ru) * 2022-11-02 2024-03-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Калмыцкий государственный университет имени Б.Б. Городовикова" Способ ранней диагностики стельности самок крупного рогатого скота

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1591207A1 (ru) * 1987-07-01 1998-03-10 Саратовский государственный зоотехническо-ветеринарный институт Способ диагностики беременности коров
RU2298791C2 (ru) * 2005-03-09 2007-05-10 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия" Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок
RU2306701C1 (ru) * 2006-04-24 2007-09-27 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГОУ ВПО ОрелГАУ) Способ диагностики беременности у коров

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1591207A1 (ru) * 1987-07-01 1998-03-10 Саратовский государственный зоотехническо-ветеринарный институт Способ диагностики беременности коров
RU2298791C2 (ru) * 2005-03-09 2007-05-10 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия" Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок
RU2306701C1 (ru) * 2006-04-24 2007-09-27 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГОУ ВПО ОрелГАУ) Способ диагностики беременности у коров

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARTIN SHELDON et al., Pregnancy diagnosis in cattle, Ib Practicle, 2002 June, p.310-317. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2814890C1 (ru) * 2022-11-02 2024-03-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Калмыцкий государственный университет имени Б.Б. Городовикова" Способ ранней диагностики стельности самок крупного рогатого скота

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7892774B2 (en) Diagnostic method for determining the susceptibility to delivery and reagent kit for use therefor
US8658431B2 (en) Determination of pregnancy status in ungulate ruminants
KR0162504B1 (ko) 양막파열을 감지하는 진단방법과 이 방법을 이용한 테스트키트
Lucy et al. Pregnancy determination in cattle: a review of available alternatives
US3689633A (en) Preparation of test sample for immunological assay of pregnancy of mares
Gajewski et al. Concentration of bovine pregnancy associated glycoprotein in plasma and milk: its application for pregnancy diagnosis in cows
RU2775205C1 (ru) Диагностический набор для определения беременности и бесплодия коров
CN111596075B (zh) 一种检测牛早期妊娠的方法
CN111596073B (zh) 一种检测羊早期妊娠的方法
Balogh et al. The use of semi-quantitative tests at Cesarean section delivery for the differentiation of canine fetal fluids from maternal urine on the basis of biochemical characteristics
Richardson A new biochemical test for pregnancy: A study of 2,560 tests on 1,640 patients
US20230270534A1 (en) A kit for visual pregnancy diagnosis in livestock and method of detection thereof
RU2306701C1 (ru) Способ диагностики беременности у коров
Garden et al. Serological pregnancy test using latex particles
RU2731474C1 (ru) Способ диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок
Reddy et al. Comparative study on certain early pregnancy diagnostic methods in Sahiwal cows
Siad et al. Sodium hypochlorite test for early pregnancy diagnosis in cows Promising innovative method
ÇİPLAK Pregnancy Diagnosis Methods in Cows
López-Gatius et al. Evaluation of a Commercial Pregnancy Test Using Blood or Plasma Samples in High-Producing Dairy Cows
Hameed et al. Comparative evaluation of pregnancy diagnosis in sheep using On-site pregnancy test (Pregnostx) and ultrasonography
Srilatha et al. Qualitative evaluation of early pregnancy using Rapid detection milk kit in Graded Murrah buffalo cows.
Szenci et al. Accuracy of transrectal ultrasonography and progesterone tests for diagnosis of non-pregnancy at day 21 after insemination in dairy cows
Aditya Mishra et al. Immunological techniques for detection of early pregnancy in farm animals.
Nabulindo Blood Progesterone Determination by Lateral Flow Immunoassay for Assessment of Reproductive Status of Dairy Cattle in Kenya.
Gibbs An evaluation of current trends in pregnancy testing