RU2772054C1 - Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата - Google Patents
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата Download PDFInfo
- Publication number
- RU2772054C1 RU2772054C1 RU2021109886A RU2021109886A RU2772054C1 RU 2772054 C1 RU2772054 C1 RU 2772054C1 RU 2021109886 A RU2021109886 A RU 2021109886A RU 2021109886 A RU2021109886 A RU 2021109886A RU 2772054 C1 RU2772054 C1 RU 2772054C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- myocardial fibrosis
- heart
- galectin
- transplantation
- diagnosis
- Prior art date
Links
- 206010028594 Myocardial fibrosis Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 title claims abstract 6
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 abstract description 26
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004083 survival Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 206010007554 Cardiac failure Diseases 0.000 description 7
- 206010019280 Heart failure Diseases 0.000 description 7
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 6
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 6
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 5
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative Effects 0.000 description 3
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 206010007558 Cardiac failure chronic Diseases 0.000 description 1
- 210000002808 Connective Tissue Anatomy 0.000 description 1
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 210000001723 Extracellular Space Anatomy 0.000 description 1
- 101710015954 HVA1 Proteins 0.000 description 1
- 206010019315 Heart transplant rejection Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022114 Injury Diseases 0.000 description 1
- 101700065814 LEA2 Proteins 0.000 description 1
- 101700021338 LEC Proteins 0.000 description 1
- 101700077545 LECC Proteins 0.000 description 1
- 101700028499 LECG Proteins 0.000 description 1
- 101700063913 LECT Proteins 0.000 description 1
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 Myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 101710034340 Os04g0173800 Proteins 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 230000036462 Unbound Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 102000005578 human galectin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108091000289 human galectin-3 Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 101700036391 lecA Proteins 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 101700001016 mbhA Proteins 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000268 renotropic Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата. В плазме периферической крови реципиента определяют концентрацию галектина-3. При ее величине более 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата. Способ обеспечивает доступность и неинвазивность диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца, сокращение времени ее проведения при одновременном достижении достоверной диагностики в любые сроки после трансплантации, а также повышение выживаемости реципиентов и улучшение результатов трансплантации сердца за счет своевременного определения показаний к внеплановой эндомиокардиальной биопсии путем определения величины концентрации галектина-3 в плазме периферической крови реципиентов сердца. 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении реципиентов сердца для диагностики фиброза миокарда трансплантата.
Успешное развитие программы трансплантации сердца содействовало решению новых задач - обеспечение длительного выживания и улучшения качества жизни пациентов с трансплантированным сердцем. Патологические процессы, протекающие в трансплантированном сердце, впоследствии могут приводить к разрастанию соединительной ткани - развитию фиброза миокарда. У реципиентов сердца в отдаленные сроки после трансплантации может развиться субклиническая хроническая сердечная недостаточность, возникающая вследствие совокупности различных патологических механизмов (артериальная гипертензия, острое отторжение и васкулопатия трансплантата, а также ряд сопутствующих заболеваний, в том числе наличие сахарного диабета, метаболического синдрома и прочее), приведших к формированию фиброза миокарда трансплантата.
Разработка малоинвазивных методов выявления осложнений в посттрансплантационном периоде - поиск новых биомаркеров - проводится с целью улучшения доклинической диагностики и увеличения продолжительности жизни реципиентов и трансплантатов.
В настоящее время особое внимание уделяется выявлению профиброгенных биологических агентов - биомаркеров, способных быть индикаторами риска негативных событий, связанных с развитием фиброза. Одним из новых биомаркеров развития тяжести сердечной недостаточности и фиброза миокарда является галектин-3. Галектин-3 относится к семейству лектинов; играет важную роль в регуляции процессов воспаления, иммунного ответа, дегенерации нервной ткани и фиброза. В месте повреждения галектин-3 секретируется во внеклеточное пространство и способствует развитию фиброза через активацию фибробластов, находящихся в покое.
Галектин-3 может иметь прогностическое значение в отношении развития нежелательных событий у пациентов, страдающих сердечной недостаточностью (СН). Выявлена зависимость между уровнем галектина-3 и течением СН: повышение уровня галектина-3 указывает на развитие СН, а при снижении его концентрации - на уменьшение тяжести заболевания [Coromilas Е., Que-Xu Е., Moore D. et al. Dynamics and prognostic role of galectin-3 in patients with advanced heart failure, during left ventricular assist device support and following heart transplantation. BMC Cardiovasc Disord. - 2016.- 16: 138-148.].
При определении динамики концентрации галектина-3 в сыворотке крови реципиентов сердца в различные сроки после трансплантации выявлена обратная корреляция между уровнем галектина-3 и скоростью клубочковой фильтрации. Однако не выявлено связи между уровнем галектина-3, наличием гипертрофии и фиброза миокарда трансплантата. Результаты проводимых исследований позволяют предположить, что галектин-3 может играть роль системного биомаркера, но не кардиоспецифического [Circulating galectin-3 levels are persistently elevated after heart transplantation and are associated with renal dysfunction / Grupper A., Nativi-Nativi J., Maleszewski J.J. et al. // JACC: Heart Failure. - 2016. - 4: 847-856].
Показан диагностический потенциал измерения концентрации галектина-3 в образцах крови пациентов в отношении развития фиброза миокарда трансплантированного сердца [RU 2709193, С1], однако данная методика эффективна в отношении диагностики фиброза миокарда только в отдаленные сроки после трансплантации; при этом диагностическая эффективность способа имеет место при условии наличия у реципиентов эпизодов острого отторжения в анамнезе.
На сегодняшний день объективным методом верификации степени и характера острого отторжения трансплантированного сердца, васкулопатии и фиброза миокарда трансплантата является эндомиокардиальная биопсия (ЭМБ) и коронографическое исследование [Клинические рекомендации. Трансплантация сердца, наличие трансплантированного сердца, отмирание и отторжение трансплантата сердца. / Профессиональная ассоциация: Общероссийская общественная организация трансплантологов «Российское трансплантологическое общество». - 2020.] - (прототип). ЭМБ выполняются в сроки после трансплантации, предусмотренные протоколом, а также при проявлении признаков нарушения функции трансплантированного сердца.
Однако ЭМБ имеет ряд ограничений и рисков, свойственных инвазивным методам диагностики. Кроме того, при получении биоптата исследуют локальный участок, который не всегда может отражать состояние целого трансплантированного органа. Многочисленные публикации зарубежных и отечественных авторов свидетельствуют о высоком риске осложнений и неблагоприятного исхода при использовании данного метода. В связи с его трудоемкостью существует очевидная необходимость в разработке нового неинвазивного диагностического средства, которое может не только выявить наличие фиброза миокарда трансплантата, но и контролировать лечение реципиента.
Нами поставлена задача - разработать доступный, достоверный способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца у реципиентов сердца.
Технический результат заключается в обеспечении доступности и неинвазивности диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца, сокращении времени ее проведения при одновременном достижении достоверной диагностики в любые сроки после трансплантации, а также в повышении выживаемости реципиентов сердца и улучшении результатов трансплантации за счет своевременного определения показаний к внеплановой эндомиокардиальной биопсии путем определения концентрации галектина-3 в плазме периферической крови реципиентов сердца.
Предлагаемый способ позволяет повысить выживаемость пациентов с трансплантированным сердцем и улучшить результаты трансплантации сердца за счет своевременного определения показаний к внеплановой ЭМБ путем определения концентрации галектина-3 в плазме периферической крови.
Нами эмпирически установлен достоверный диагностический показатель развития фиброза миокарда трансплантированного сердца, основанный на оценке концентрации галектина-3 в плазме периферической крови реципиентов сердца.
Использование предполагаемого маркера позволяет ограничить круг пациентов, которым требуется проведение ЭМБ для уточнения диагноза фиброза миокарда трансплантированного сердца в любые сроки после трансплантации и независимо от наличия кризов отторжения сердечного трансплантата в анамнезе.
Сущность изобретения состоит в следующем.
Для диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиента, перенесшего острое отторжение, в плазме венозной крови определяют концентрацию галектина-3. При его уровне выше 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза трансплантата.
Способ осуществляется следующим образом. В качестве материала для исследования концентрации биомаркера используют плазму венозной крови. Взятие крови для исследования производят, как правило, одновременно с плановым обследованием пациентов.
Кровь собирают в одноразовые пробирки с антикоагулянтом ЭДТА (BD Vacutainer, Becton Dickinson, США) и центрифугируют в течение 10 минут при 3500/1500 g оборотах при комнатной температуре. Полученную плазму замораживают и хранят при температуре -20°С.
Концентрация галектина-3 может быть измерена иммуноферментным методом, например, с помощью наборов реагентов Human Galectin-3 Platinum ELISA (Bender MedSystems GmbH, Vienna, Austria).
Определение проводят с использованием реагентики, входящей в состав наборов и в соответствии с прилагаемой к ним инструкцией. В подготовленные для работы планшеты с фиксированными на дне лунок моноклональными антителами к галектину-3, добавляют заранее подготовленные калибраторы, контроли и разведенные в 2 раза буфером образцы плазмы венозной крови пациентов. Инкубируют микропланшет при комнатной температуре (18-25°С) в течение 60 минут при встряхивании в термо-шейкере со скоростью 400 оборотов в минуту. После четырехкратного отмывания планшета от несвязавшихся компонентов реакции в каждую лунку вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата (стрептавидин-HRP). Инкубируют планшет при комнатной температуре (18-25°С) в течение 60 минут при встряхивании со скоростью 400 оборотов в минуту.
Для выявления ферментной метки в планшет вносят по 100 мкл субстрата, предварительно отмыв 4-х кратно планшет. Время инкубации составляет 30 минут в темноте. Реакцию останавливают с помощью стоп-реагента, также предусмотренного производителем набора (по 100 мкл в лунку). Интенсивность изменения цвета реагентной смеси прямо коррелирует с концентрацией галектина-3 в исследуемом образце. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при длине волны 450 нм.
У реципиентов сердца с величиной концентрации галектина-3 в плазме крови выше 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза трансплантированного сердца.
Для доказательств возможности реализации заявленного назначения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.
Пример 1.
Пациенту Е., 70 лет, выполнена ортопическая трансплантация сердца. Послеоперационный период протекал гладко (с первых суток и до двух лет после трансплантации). Иммуносупрессивная терапия назначена по стандартной схеме. Измеренная на 53 сутки после операции величина концентрации галектина-3 в плазме крови составила 33,98 нг/мл. В соответствии с предлагаемым способом у пациента диагнастирован фиброз миокарда трансплантата. Методом ЭМБ диагноз подтвержден: был установлен выраженный диффузный фиброз миокарда.
Пример 2.
Пациенту М., 52 лет, выполнена ортопическая трансплантация сердца. Послеоперационный период протекал гладко (с первых суток и до двух лет после трансплантации). Иммуносупрессивная терапия назначена по стандартной схеме. Измеренная на 470 сутки после операции величина концентрации галектина-3 в плазме крови составила 27,10 нг/мл. В соответствии с предлагаемым способом у пациента диагнастирован фиброз миокарда трансплантата. Методом ЭМБ диагноз подтвержден: был установлен диффузно-очаговый фиброз миокарда.
Пример 3.
Пациенту П., 42 года, выполнена ортопическая трансплантация сердца. Послеоперационный период протекал гладко (с первых суток и до двух лет после трансплантации). Иммуносупрессивная терапия назначена по стандартной схеме лечения. Измеренная на 299 сутки после операции величина концентрации галектина-3 в плазме крови составила 7,35 нг/мл. По данным ЭМБ признаков фиброза миокарда трансплантата не установлено.
Предложенный способ апробирован в клинической практике на реципиентах сердца в различные сроки после трансплантации (с первых суток и до пяти лет после трансплантации). Уровень галектина-3 после трансплантации выше установленного нами порогового значения - 21,7 нг/мл наблюдался у 31 реципиента в ранние и/или отдаленные сроки после трансплантации сердца, из них в 28 (90,3%) случаях результатами ЭМБ был верифицирован фиброз миокарда трансплантированного сердца различного типа (диффузный, очаговый, диффузно-очаговый).
Специфичность предложенного способа диагностики составляет 78,6%.
Использование в клинической практике патентуемого способа дает возможность диагностировать наличие фиброза миокарда трансплантированного сердца в любые сроки после трансплантации независимо от наличия кризов острого отторжения в анамнезе.
Claims (1)
- Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата, отличающийся тем, что в плазме периферической крови реципиента определяют концентрацию галектина-3 и при ее величине более 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2772054C1 true RU2772054C1 (ru) | 2022-05-16 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2709193C1 (ru) * | 2019-08-27 | 2019-12-17 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТИО им. ак. В.И. Шумакова" Минздрава России) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиентов, перенесших острое отторжение |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2709193C1 (ru) * | 2019-08-27 | 2019-12-17 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТИО им. ак. В.И. Шумакова" Минздрава России) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиентов, перенесших острое отторжение |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| COROMILAS E. et al. Dynamics and prognostic role of galectin-3 in patients with advanced heart failure, during left ventricular assist device support and following heart transplantation. BMC Cardiovasc Disord. 2016, 16, 138, https://doi.org/10.1186/s12872-016-0298-z. * |
| ШЕВЧЕНКО О.П. и др. МикроРНК-27 и -339 при фиброзе миокарда трансплантированного сердца: анализ диагностической значимости. Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2021, 23 (3), стр.73-81. ШЕВЧЕНКО О.П. и др. Диагностическая значимость галектина 3 при патологии миокарда трансплантированного сердца. Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2020, 22 (1), стр.8-15. УЛЫБЫШЕВА А.А. и др. Галектин-3 у реципиентов сердца. Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2019, 21 (2), стр.145-149. SUAREZ-FUENTETAJA N. et al. Circulating galectin-3 following heart transplant: long-term dynamics and prognostic value. Rev Esp Cardiol (Engl Ed). 2019, 72 (11), p.899-906. GRUPPER A. et al. Circulating galectin-3 levels are persistently elevated after heart transplantation and are associated with renal dysfunction. JACC Heart Fail. 2016, 4 (11), p.847-856. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2709193C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиентов, перенесших острое отторжение | |
| RU2750035C2 (ru) | Способы и наборы диагностики и стратификации риска пациентов с ишемией | |
| JP6449247B2 (ja) | 移植拒絶反応、神経変性疾患又はうつ病と特に関連する潜在的炎症のインビトロ早期検出方法 | |
| CA2781754A1 (en) | Diagnostic method for detecting acute kidney injury using heat shock protein 72 as a sensitive biomarker | |
| Gurel et al. | Plasma pentraxin-3 is associated with endothelial dysfunction in non-alcoholic fatty liver disease. | |
| Polat et al. | Neutrophil-to-lymphocyte ratio as a marker in patients with non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy | |
| RU2750973C1 (ru) | Способ диагностики обструкции бронхов у реципиентов легочного трансплантата | |
| RU2772054C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата | |
| Müller et al. | Protein signatures of remodeled airways in transplanted lungs with bronchiolitis obliterans syndrome obtained using Laser-Capture microdissection | |
| RU2408889C1 (ru) | Способ дооперационного прогнозирования течения послеоперационного периода у пациента после операции на сердце, проводимой в условиях искусственного кровообращения | |
| Okamoto et al. | Evaluation of myocardial changes in familial amyloid polyneuropathy after liver transplantation | |
| RU2759048C1 (ru) | Способ диагностики обструкции бронха у реципиента трансплантированных легких | |
| CN107043824B (zh) | 青光眼诊断分子标记物lncRNAsT342877、试剂盒及应用 | |
| RU2759049C1 (ru) | Способ диагностики острого отторжения трансплантата у реципиентов сердца | |
| RU2618404C1 (ru) | Способ скрининговой диагностики острого клеточного отторжения трансплантированного сердца | |
| CN112557664B (zh) | Cryab在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒 | |
| RU2697395C1 (ru) | Способ прогнозирования идиопатического бесплодия мужчин | |
| CN112034189B (zh) | 内皮素-1作为用于评价原发性慢性肾脏病患者无症状心血管器官损伤的标志物的应用 | |
| RU2758993C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца | |
| RU2369874C2 (ru) | Способ диагностики рассеянного склероза | |
| RU2761470C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда у реципиентов донорского сердца | |
| RU2761733C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики уремического панкреатита и деструктивного панкреатита у пациентов, получающих заместительную почечную терапию - программный гемодиализ | |
| RU2770285C1 (ru) | Способ оценки вероятности развития неблагоприятного ремоделирования левого желудочка сердца у больных острым инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST | |
| RU2760093C1 (ru) | Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда у реципиентов сердечного трансплантата | |
| RU2739321C1 (ru) | Способ диагностики хронического активного лимфоцитарного миокарда у пациентов с "идиопатической" формой фибрилляции предсердий |