RU2768476C1 - Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов - Google Patents
Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2768476C1 RU2768476C1 RU2021118697A RU2021118697A RU2768476C1 RU 2768476 C1 RU2768476 C1 RU 2768476C1 RU 2021118697 A RU2021118697 A RU 2021118697A RU 2021118697 A RU2021118697 A RU 2021118697A RU 2768476 C1 RU2768476 C1 RU 2768476C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cornea
- contact lens
- soft contact
- fungal
- day
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F9/00—Methods or devices for treatment of the eyes; Devices for putting-in contact lenses; Devices to correct squinting; Apparatus to guide the blind; Protective devices for the eyes, carried on the body or in the hand
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F9/00—Methods or devices for treatment of the eyes; Devices for putting-in contact lenses; Devices to correct squinting; Apparatus to guide the blind; Protective devices for the eyes, carried on the body or in the hand
- A61F9/007—Methods or devices for eye surgery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/11—Aldehydes
- A61K31/115—Formaldehyde
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/235—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group
- A61K31/24—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group having an amino or nitro group
- A61K31/245—Amino benzoic acid types, e.g. procaine, novocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
- A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mathematical Physics (AREA)
- Computational Mathematics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Algebra (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Surgery (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Educational Administration (AREA)
- Educational Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Осуществляют аппликацию смоченным в 5% спиртовом растворе формалина стерильным диском из гемостатической губки размером 10×10 мм под местной анестезией 0,4% оксибупрокаина. Надевают мягкую контактную линзу на 24 часа, на следующий день снимают мягкую контактную линзу и диск гемостатической губки. Далее на поверхность роговицы в течение 3 дней инстиллируют 0,1% раствор дексаметазона 4 раза в сутки, на 3-й день под местной инфильтрационной анестезией производят скарификацию эпителия роговицы размером 10×10 мм. После скарификации инсулиновым шприцем с интегрированной иглой 29G производят интрастромальную инъекцию 0,1 мл 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. Затем инстиллируют 2-3 капли 99% концентрата димексида, промывают роговицу и конъюнктивальную полость 0,1% раствором дексаметазона. После чего осуществляют орошение конъюнктивальной поверхности и роговицы 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия. Далее на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы наносят 0,2-0,3 мл этой же суспензии, надевают мягкую контактную линзу на роговицу. В последующие дни через 1 день за 5-6 подходов проводят дополнительные процедуры заражения роговицы, сняв мягкую контактную линзу, выполняют орошение 99% концентратом димескида, свежей клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. 106 КОЕ/мл совместно с интрастромальной инъекцией. Способ позволяет достоверно воспроизвести экспериментальную модель грибкового кератоувеита с изъязвлением роговицы у кроликов, не требует специального офтальмохирургического оборудования, при этом позволяет расширить возможность для исследования возникновения и течения патологического процесса и разработать местное этиологическое лечение. 1 пр., 6 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для моделирования грибкового кератоувеита с формированием язвы роговицы у кроликов в экспериментальных условиях с целью изучения механизмов происхождения и течения патологического процесса и разработки метода медикаментозной терапии.
В литературе растет число сообщений об увеличении доли грибковых кератитов в структуре инфекционных воспалений роговицы. В то же время этиологическое лечение окуломикозов остается недоступным в большинстве стран, в том числе и в Российской Федерации. [Давлетшина Н.И., Самойлов А.Н. Эпидемиология и методы лечения грибковых кератитов. Вестник офтальмологии. 2020; 136(4): 138-145.]. Если предположить, что все случаи с отрицательным микробиологическим посевом являются грибковыми, ежегодная заболеваемость составит 1.480.916 случаев (1.036.641-1.925.191) [The global incidence and diagnosis of fungal keratitis. Accessed 01.09.21. https://www.thelancet.com/journals/laninf/article/PIIS1473-3099(20)30448-5/fulltext].
Разработка эффективных и безопасных лекарственных средств местного этиологического лечения кератомикозов является приоритетной задачей для борьбы с окуломикозами. Создание воспроизводимых экспериментальных моделей кератомикозов на животных несомненно необходимо для изучения механизмов заражения, течения патологического процесса и разработки методик лечения.
Модели in vivo с отработкой способа на экспериментальных животных наиболее точно отражают патологические исходы процесса, в то же время эти протоколы сложны для реализации и требуют строго соблюдения этических норм. Одна из основных проблем экспериментальной медицины - выбор вида животных, на которых будут проводиться исследования. Для изучения закономерностей грибкового процесса на глазах выбраны кролики. Все эксперименты in vivo, описанные в данной работе, одобрены локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Казанский государственный медицинский университет» МЗ РФ (заседание №1 от 4 февраля 2020 года).
В литературе описано немало аналогов, содержащих разнообразные способы моделирования грибкового кератита у экспериментальных животных.
Известны современные способы создания грибковых кератитов в рамках эксперимента у животных при помощи инстилляции и интрастромальной инъекции суспензии грибковых изолятов с обеспечением условий для инвазии инфекционного агента и формирования воспаления, близкого к клиническому.
Из известных отечественных разработок стоит отметить способ достижения грибкового кератита у кроликов (Патент RU №2346338 С2, МПК G09B 23/28, A61F 9/00 - 10.02.2009, Бюл. №4). Производится скарификация эпителия всей поверхности роговицы, далее надевают на глаз предварительно инфицированную дрожжевыми грибами мягкую контактную линзу и сшивают веки на 3-8 суток. Заявленный метод позволял достичь клинической картины грибкового кератита с контролируемыми стадиями процесса.
Недостатком данного способа является травматичность процедуры, необходимость хирургической блефарорафии. Также нам не удалось достичь выраженной картины грибкового кератита по заявленной методике.
Аналогичным методом с интрастромальным введением инокулята является способ моделирования грибкового кератита у кроликов посредством интракорнеального введения 0,1 мл клеточной взвеси грибков (2,5 × клеток/мл) [Schreiber, W., Olbrisch, A., Vorwerk, С., Koenig, W., Behrens-Baumann, W. Combined topical fluconazole and corticosteroid treatment for experimental Candida albicans keratomycosis. Investigative ophthalmology & visual science, 44(6): 2634-2643].
Недостатком данного способа является слабая контагиозность грибков Candida albicans, также воспроизвести грибковый кератит по заявленной методике при выполнении только лишь инъекции с грибковой суспензией нам не удалось.
Заявленный метод инфицирования кандидозным кератитом, в котором предварительно производят инстиляции гентамицина сульфата 0,5% 2 раза в сутки или глазных капель хлорамфеникола 0,2% без консервантов. Суспензию грибов вводят непосредственно в роговицу через канюлю 27G [Rabbit Model of Candida Keratomycosis. M. Motschmann W. Behrens-Baumann. Handbook of Animal Models of Infection. Experimental Models in Antimicrobial Chemotherapy, 1999, Pages 697-707].
Недостатком данного способа является слабая контагиозность грибков Candida albicans, к тому же для нашей практики большее значение имеет Fusarium spp.
Известен «Способ создания экспериментальной модели грибкового кератита у кроликов» (Патент RU №2746647, МПК G09B 23/28 - 19.04.2021, Бюл. №11). Способ создания экспериментальной модели грибкового кератита у кроликов заключается в том, что под местной анестезией на роговицу накладывают смоченный в 5% спиртовом растворе формалина стерильный диск из гемостатической губки, надевают мягкую контактную линзу на 24 часа, на следующий день снимают мягкую контактную линзу и диск гемостатической губки, на поверхность роговицы в течение 3 дней инстиллируют 0,1% раствор дексаметазона 4 раза в сутки, на 3-й день под местной инфильтрационной анестезией производят скарификацию эпителия роговицы размером 10×10 мм, инстиллируют на роговицу 99% концентрат димексида, далее производится орошение конъюнктивальной поверхности 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия, на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы наносят 0,2-0,3 мл этой же суспензии, надевают мягкую контактную линзу на роговицу, в последующие дни через 1 день за 3-4 подхода производят дополнительное орошение роговицы, отодвинув мягкую контактную линзу, 99% концентратом димексида, свежей клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. 106 КОЕ/мл.
Данный патент принят за прототип.
Этот способ неоднократно воспроизведен в рамках экспериментального исследования, однако основным его недостатком является не достаточная глубина расположения инфильтрата, абсолютное самоизлечение у экспериментальных животных и низкий риск потери органа зрения. В клинической практике грибковые кератиты часто приводят к сквозному поражению стромы и перфорации роговицы.
В условиях эксперимента воспроизведение глубокого стромального поражения роговицы по известным методам оказалось трудоемким и безрезультативным. Нами была произведена скарификация эпителия роговицы и применение контактных линз. Необходимым условием для развития грибковой инфекции роговицы явились повреждение эпителия и локальная иммуносупрессия. По этой причине наша методика отличается однократным применением 5% спиртового раствора формалина и инстиляций дексаметазона на этапе подготовки к заражению, а также применением 99% концентрата димексида в момент орошения роговицы кролика клинической суспензией Fusarium spp, и, в отличие от изобретения-прототипа, интрастромальная инъекция 0,1 мл инокулята при каждом сеансе заражения. Таким образом, в 4-5 приемов был достигнут кератоувеит с изъязвлением роговицы у экспериментального животного, что делает результат клинически актуальным. Для приготовления инокулюма также, как и в прототипном способе, использованы чистые, пяти суточные культуры грибов Fusarium solani, выросшие на плотной питательной среде Сабуро. Инокулят предварительно растерт в ступке. В стерильном изотоническом растворе хлорида натрия приготовлена взвесь микроорганизмов с конечной плотностью 1,0×106 клеток/мл, что соответствует 0,5 MF (измерение денситометром согласно данным изготовителя стандартов мутности bioMerieux).
Задачей заявляемого изобретения является разработка достоверно воспроизводимой экспериментальной модели грибкового кератоувеита с изъязвлением роговицы у кроликов, не требующей специального офтальмохирургического оборудования, что позволит расширить возможности для исследования возникновения и течения патологического процесса и разработки местного этиологического лечения.
Техническим результатом заявленного изобретения является достоверно производимый грибковый кератоувеит с изъязвлением роговицы с применением клинической суспензии Fusarium spp.
Технический результат заявленного изобретения достигается за счет того, что под местной анестезией 0,4% оксибупрокаина на роговицу накладывают смоченный в 5% спиртовом растворе формалина стерильный диск из гемостатической губки размером 10×10 мм, надевают мягкую контактную линзу на 24 часа, на следующий день снимают мягкую контактную линзу и диск гемостатической губки, далее на поверхность роговицы в течение 3 дней инстилируют 0,1% раствор дексаметазона 4 раза в сутки, на 3-ий день под местной инфильтрационной анестезией производят скарификацию эпителия роговицы размером 10×10 мм, особенность заключается в том, что инсулиновым шприцем с интегрированной иглой 29G производят интрастромальную инъекцию 0,1 мл 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., инстилируют на роговицу 2-3 капли 99% концентрата димексида, далее производится орошение конъюнктивальной поверхности 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия, на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзой наносят 0,2-0,3 мл этой же суспензии, надевают мягкую контактную линзу на роговицу, в последующие дни через 1 день за 5-6 подходов производят дополнительные процедуры заражения роговицы, сняв мягкую контактную линзу, орошая 99% концентратом димескида, свежей клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. 106 КОЕ/мл совместно с интрастромальной инъекцией.
Преимуществом приведенного алгоритма является достоверность воспроизведения патологического процесса, сравнимого с клиническим, малоинвазивные методы инъекций при помощи малотравматичных игл, осуществляемые под инстилляционной анестезией, результативности предварительной подготовки инстиляциями медицинских растворов.
Детали, признаки, а также преимущества настоящего изобретения следует из нижеследующего описания реализации заявленного технического решения с использованием фигур, на которых показано:
Фиг. 1 - здоровая роговица экспериментального животного (кролик породы «советская шиншилла») перед началом экспериментального заражения;
Фиг. 2 - результат аппликации стерильной гемостатической губки в 5% спиртовом растворе формалина под мягкой контактной линзой в течение 1 суток: смешанная инъекция сосудов конъюнктивы, слизистое отделяемое, эпителиопатия, выраженный роговичный синдром;
Фиг. 3 - момент интрастромальной инъекции клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp.;
Фиг. 4 - вид роговицы под мягкой контактной линзой сразу после интрастромальной инъекции клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., орошения поверхности роговицы этой же суспензией;
Фиг. 5 - Кератоувеит с изъязвлением роговицы у кролика в результате экспериментального заражения роговицы кролика клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. по описанной методике;
Фиг. 6 - Перфорация язвы роговицы у кролика в результате экспериментального заражения роговицы кролика клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. по описанной методике на 14-ый день от первой процедуры заражения.
Способ осуществляется следующим образом.
Производится экспозиция в 5% спиртовом растворе формалина диска размером 10×10 мм стерильной гемостатической губки. Под местной анестезией 0,4% оксибупрокаина губка устанавливается на поверхность роговицы, надевается обычная мягкая контактная линза на 24 часа. На следующий день диск гемостатической губки и мягкая контактная линза удаляются. В течение последующих 3 дней производятся инстиляции 0,1% дексаметазона 4 раза в сутки в исследуемый глаз. На 3-ий день под местной инфильтрационной анестезией 0,4% оксибупрокаина производится скарификация эпителия стерильным микрохирургическим лезвием в оптической зоне 10×10 мм. Инсулиновым шприцем с интегрированной иглой 29G производят интрастромальную инъекцию 0,1 мл 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. Инстилируется 2-3 капли 99% концентрата димексида. Выжидается 20-30 минут для испарения лишнего объема лекарственных средств. Промывание роговицы и конъюнктивальной полости 0,1% р-ром дексаметазона. Производится орошение конъюнктивальной поверхности 106 КОЕ/мл клинической суспензии грибковых изолятов Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия. На внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы наносится 0,2-0,3 мл этой же суспензии. Мягкая контактная линза надевается на роговицу. В последующие дни через 1 день в 5-6 приемов под местной анестезией производится дополнительное орошение поверхности роговицы клинической суспензией Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия, с предварительной инстиляцией 1 капли 99% концентрата димексида и 2-3 капель 0,1% дексаметазона. Дополнительно производится интрастромальная инъекция 0,1 мл суспензии Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия. В результате мероприятий на 10-12-ый день получают глубокий грибковый гипопион-кератоувеит с изъязвлением роговицы, на 14-ый день без лечения сформирована перфорация роговицы.
Изобретение направлено на устранение вышеописанных недостатков и достоверное воспроизведение грибкового кератоувеита с изъязвлением роговицы с причинением минимальных страданий экспериментальному животному.
Всего проведен эксперимент на 6 кроликах.
Способ поясняется следующим экспериментальным примером.
Пример 1.
Кролик (фиг. 1), у которого при культуральном исследовании мазков конъюнктивы и роговицы здорового глаза выявлен Aspergillus flavus 102 КОЕ/мл, Penicillium expansum 102 КОЕ/мл, S. aureus 101 КОЕ/мл, Enterobacteriaceae 101 КОЕ/мл. Роговица инфицирована по описанной методике.
На 1-й день производится экспозиция в 5% спиртовом растворе формалина диска размером 10×10 мм стерильной гемостатической губки. Под местной анестезией 0,4% оксибупрокаина губка устанавливается на поверхность роговицы, надевается обычная мягкая контактная линза на 24 часа. На следующий день диск гемостатической губки и мягкая контактная линза удаляются.
После обработки роговицы 5% спиртовым раствором формалина развилась клиническая картина химического ожога конъюнктивы и роговицы: смешанная инъекция сосудов конъюнктивы, обильное слизистое отделяемое, эпителиопатия, выраженный роговичный синдром (фиг. 2). Бактериологический и микологический посев мазка отделяемого конъюнктивальной полости, забранного в этот день, роста микрофлоры не обнаружил, таким образом достигнуто асептическое воспаление.
В течение последующих 3 дней производятся инстиляции 0,1% дексаметазона 4 раза в сутки в исследуемый глаз. На 3-й день инстиляций дексаметазона под местной анестезией 0,4% оксибупрокаина проведена скарификация эпителия стерильным микрохирургическим лезвием в оптической зоне 10×10 мм. Инсулиновым шприцем с интегрированной иглой 29G произведена интрастромальная инъекция 0,1 мл 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp (фиг. 3). Инстилируется 2-3 капли 99% концентрата димексида. Выжидается 20-30 минут для испарения лишнего объема лекарственных средств. Промывание роговицы и конъюнктивальной полости 0,1% р-ром дексаметазона. Далее производится орошение конъюнктивальной поверхности 106 КОЕ/мл клинической суспензии грибковых изолятов Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия. На внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы наносится 0,2-0,3 мл этой же суспензии. Мягкая контактная линза надевается на роговицу (фиг. 4). Повторно мероприятия проводились через 1 день в 5-6 приемов.
В результате вышеописанного алгоритма получен глубокий грибковый гипопион-кератоувеит с изъязвлением роговицы (фиг. 5), на 14-й день без лечения сформирована перфорация роговицы (фиг. 6), что является сопоставимым прогнозом развития грибкового кератита при отсутствии лечения в клинических случаях.
Применение спиртового раствора формалина позволяет полностью санировать конъюнктивальную полость экспериментальных животных, что подтверждено культуральными данными в начале исследования, получить химический ожог легкой степени и инициировать асептическое воспаление. Инстиляции дексаметазона позволяют достичь местной иммунносупрессии и предотвратить самостоятельную санацию условно-патогенного Fusarium spp. При электронной микроскопии соскобов с роговицы выявлено, что применение димексида способствует повышению адгезии грибковых элементов к эпителию, боуменовой оболочке и строме, что в результате улучшает результативность контаминации. Отсутствие мягкой контактной линзы приводит к самопроизвольной санации даже при выполнении вышеописанных условий. Интрастромальные инъекции позволили достичь картины агрессивного течения кератита, сопоставимого с клиническим.
Таким образом, заявленная методика позволяет воспроизвести глубокий грибковый кератоувеит с изъязвлением роговицы у кроликов с применением микроинвазивной травмы у экспериментальных животных, формалин обеспечивает предварительное обеззараживание конъюнктивальной полости, дополнительное применение дексаметазона подавляет защитные механизмы местного иммунитета, а димексид способствует повышению адгезии мицелии грибов в клинической суспензии.
Claims (1)
- Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов, включающий последовательное проведение аппликации смоченным в 5% спиртовом растворе формалина стерильным диском из гемостатической губки размером 10×10 мм под местной анестезией 0,4% оксибупрокаина, надевания мягкой контактной линзы на 24 часа, снятия мягкой контактной линзы и диска гемостатической губки, инстилляции на поверхность роговицы 0,1% раствора дексаметазона 4 раза в сутки в течение 3 дней, скарификации эпителия роговицы размером 10×10 мм на 3-й день под местной инстилляционной анестезией, отличающийся тем, что после скарификации инсулиновым шприцем с интегрированной иглой 29G производят интрастромальную инъекцию 0,1 мл 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., затем инстиллируют 2-3 капли 99% концентрата димексида, промывают роговицу и конъюнктивальную полость 0,1% раствором дексаметазона, после чего осуществляют орошение конъюнктивальной поверхности и роговицы 106 КОЕ/мл клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp., включающей фрагменты мицелия, далее на внутреннюю поверхность мягкой контактной линзы наносят 0,2-0,3 мл этой же суспензии, надевают мягкую контактную линзу на роговицу, в последующие дни через 1 день за 5-6 подходов проводят дополнительные процедуры заражения роговицы, сняв мягкую контактную линзу, выполняют орошение 99% концентратом димескида, свежей клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp. 106 КОЕ/мл совместно с интрастромальной инъекцией.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2021118697A RU2768476C1 (ru) | 2021-06-25 | 2021-06-25 | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2021118697A RU2768476C1 (ru) | 2021-06-25 | 2021-06-25 | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2768476C1 true RU2768476C1 (ru) | 2022-03-24 |
Family
ID=80819426
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021118697A RU2768476C1 (ru) | 2021-06-25 | 2021-06-25 | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2768476C1 (ru) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2346338C1 (ru) * | 2007-06-21 | 2009-02-10 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт глазных болезней РАМН | Способ моделирования грибкового кератита у кроликов |
UA66829U (ru) * | 2011-05-06 | 2012-01-25 | Государственное Учреждение "Институт Глазных Болезней И Тканевой Терапии Им. В.П. Филатова Академии Медицинских Наук Украины" | Способ моделирования грибкового кератита |
RU2709834C1 (ru) * | 2019-05-14 | 2019-12-23 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Способ моделирования в эксперименте рецидивирующей эрозии роговицы |
RU2746647C1 (ru) * | 2020-09-21 | 2021-04-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератита у кроликов |
-
2021
- 2021-06-25 RU RU2021118697A patent/RU2768476C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2346338C1 (ru) * | 2007-06-21 | 2009-02-10 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт глазных болезней РАМН | Способ моделирования грибкового кератита у кроликов |
UA66829U (ru) * | 2011-05-06 | 2012-01-25 | Государственное Учреждение "Институт Глазных Болезней И Тканевой Терапии Им. В.П. Филатова Академии Медицинских Наук Украины" | Способ моделирования грибкового кератита |
RU2709834C1 (ru) * | 2019-05-14 | 2019-12-23 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Способ моделирования в эксперименте рецидивирующей эрозии роговицы |
RU2746647C1 (ru) * | 2020-09-21 | 2021-04-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератита у кроликов |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Schreiber W. et al. Combined topical fluconazole and corticosteroid treatment for experimental Candida albicans keratomycosis. Investigative ophthalmology & visual science, 2003, 44(6): 2634-2643. * |
Давлетшина Н.И., Самойлов А.Н. Эпидемиология и методы лечения грибковых кератитов. Вестник офтальмологии. 2020;136(4): 138-145. * |
Давлетшина Н.И., Самойлов А.Н. Эпидемиология и методы лечения грибковых кератитов. Вестник офтальмологии. 2020;136(4): 138-145. Schreiber W. et al. Combined topical fluconazole and corticosteroid treatment for experimental Candida albicans keratomycosis. Investigative ophthalmology & visual science, 2003, 44(6): 2634-2643. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Thomas | Current perspectives on ophthalmic mycoses | |
Deg et al. | Delayed corneal wound healing following radial keratotomy | |
Pfister | Permanent corneal edema resulting from the treatment of PTK corneal haze with mitomycin: a case report | |
Mravičić et al. | An overview of fungal keratitis and case report on trichophyton keratitis | |
McGuire et al. | Fungal endophthalmitis: an experimental study with a review of 17 human ocular cases | |
Liu et al. | Modified lamellar keratoplasty and immunosuppressive therapy guided by in vivo confocal microscopy for perforated Mooren's ulcer | |
RU2768476C1 (ru) | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератоувеита у кроликов | |
US20040081643A1 (en) | Process for inhibiting vascular proliferation in the eye | |
RU2746647C1 (ru) | Способ создания экспериментальной модели грибкового кератита у кроликов | |
Plummer et al. | Deep lamellar endothelial keratoplasty in 10 horses | |
Trivedi et al. | Viscoanesthesia: Part I: toxicity to corneal endothelial cells in a rabbit model | |
RU2346338C1 (ru) | Способ моделирования грибкового кератита у кроликов | |
RU2626598C1 (ru) | Способ лечения болящей буллезной кератопатии | |
RU2309710C1 (ru) | Способ лечения осложненной гнойной язвы роговицы | |
RU2542799C1 (ru) | Способ лечения кератоконуса роговицы | |
Cohen et al. | Intraocular fluid cultures after primary pars plana vitrectomy | |
RU2823978C1 (ru) | Способ моделирования грибкового кератита у кроликов | |
RU2820070C2 (ru) | Способ лечения грибкового кератита после сквозной кератопластики | |
Sinha et al. | Visual outcome of cataract surgery with pupillary sphincterotomy in eyes with coexisting corneal opacity | |
Carney et al. | Vitrectomy in endophthalmitis | |
RU2817496C1 (ru) | Способ хирургического лечения эндофтальмита | |
RU2353341C2 (ru) | Способ лечения рецидива болящей буллезной кератопатии после фототерапевтической кератэктомии на глазах с глаукомой | |
Nunnery | How to select appropriate treatment for corneal ulcers. | |
Shi et al. | Special Cases in the Diagnosis and Treatment of Fungal Keratitis | |
Yashaswini | A Clinical Study and Management of Fungal Keratitis in North Karnataka Region |