RU2754292C1

RU2754292C1 - Method for predicting high risk of autoimmune inflammation in post-traumatic uveitis in long term

Info

Publication number: RU2754292C1
Application number: RU2021102004A
Authority: RU
Inventors: Ирина Анатольевна Филатова; Наталья Владимировна Балацкая; Ирина Геннадьевна Куликова; Виктория Олеговна Денисюк; Ихаб Мохаммад Джамиль Мохаммад
Priority date: 2021-01-29
Filing date: 2021-01-29
Publication date: 2021-08-31

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely to ophthalmology, and can be used to predict a high risk of autoimmune inflammation in post-traumatic uveitis in the long term. The level of transforming growth factor TGF-B1 is determined in the moisture of the anterior chamber of the injured eye and in the blood serum. If its level is below 1000 pkg/ml in the moisture of the anterior chamber and above 30,000 pkg/ml in the blood serum, a high risk of autoimmune inflammation is predicted.

EFFECT: invention provides a choice of treatment tactics that prevent the development of sympathetic ophthalmia by determining the level of transforming growth factor TGF-B1 in the moisture of the anterior chamber of the injured eye and in the blood serum.

1 cl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования высокого риска аутоиммунного воспаления при посттравматическом увейте на отдаленных сроках течения.The invention relates to medicine, namely to ophthalmology, and is intended to predict a high risk of autoimmune inflammation in post-traumatic uveitis in the long term.

Травма глаза, согласно сведениям большинства анализируемых работ, является одной из ведущих причин монокулярной слепоты во всем мире, особенно в развивающихся странах, и в настоящее время продолжает занимать лидирующие позиции в структуре причин первичной инвалидизации по зрению [Астахов Ю.С. Использование политетрафторэтиленовых имплантатов в офтальмохирургии / Ю.С. Астахов, В.П. Николаенко, В.Е. Дьяков. - Санкт-Петербург, 2007. - 256 с., Вериго Е.Н. Показания к энуклеации при посттравматической патологии / Е.Н. Вериго // Глазное протезирование и пластическая хирургия в области орбиты: сб. науч. тр. - Москва, 1987. - С. 41-48., Гаврилова Т.В. Анализ случаев удаления глазного яблока по поводу последствий проникающего ранения глаза / Т.В. Гаврилова, Е.В. Родионова, М.В. Черешнева // Навстречу 100-летию высшего медицинского образования на Урале: науч. сессия Пермского гос. мед. ун-та им. акад. Е.А. Вагнера. - Пермь, 2015. - С. 25-27. Гундорова Р.А. Энуклеация с хрящевым имплантатом / Р.А. Гундорова, М.Г. Катаев // Глазное протезирование и пластическая хирургия в области орбиты: сб. науч. тр. - Москва, 1987. - С. 48-50. (8)).Eye trauma, according to most of the analyzed works, is one of the leading causes of monocular blindness all over the world, especially in developing countries, and currently continues to occupy a leading position in the structure of the causes of primary visual disability [Astakhov Yu.S. The use of polytetrafluoroethylene implants in ophthalmic surgery / Yu.S. Astakhov, V.P. Nikolaenko, V.E. Dyakov. - St. Petersburg, 2007 .-- 256 p., Verigo E.N. Indications for enucleation in post-traumatic pathology / E.N. Verigo // Eye prosthetics and plastic surgery in the orbital area: collection of articles. scientific. tr. - Moscow, 1987 .-- S. 41-48., Gavrilova T.V. Analysis of cases of removal of the eyeball regarding the consequences of a penetrating wound of the eye / T.V. Gavrilova, E.V. Rodionova, M.V. Chereshneva // Towards the 100th anniversary of higher medical education in the Urals: scientific. session of the Perm state. honey. un-ta them. acad. E.A. Wagner. - Perm, 2015 .-- S. 25-27. Gundorova R.A. Enucleation with a cartilaginous implant / R.A. Gundorova, M.G. Kataev // Ophthalmic prosthetics and plastic surgery in the orbital area: collection of articles. scientific. tr. - Moscow, 1987 .-- S. 48-50. (eight)).

Также следует отметить, что с ростом популярности новых высокотехнологичных методов хирургического лечения, главным образом витреоретинальной хирургии, которая широко применяется при лечении отслойки сетчатки различного генеза, иногда возникают осложнения, связанные как с отслоенным процессом, так и с характером и качеством хирургических вмешательств, которые обостряются после операции и ведут к необратимым изменениям в сетчатой оболочке и потере зрения [Хорошилова-Маслова И.П., Набиева М.М., Лепарская Н.Л. Морфогенез осложнений после длительного пребывания силиконового масла в полости глаза (клинико-гистопатологическое исследование) // Вестник офтальмологии. - 2012, - №4. - C. 57-61. Sisk RA, Davis JL, Dubovy SR, Smiddy WE. Sympathetic ophthalmia following vitrectomy for endophthalmitis after intravitreal bevacizumab. Ocullmmunollnflamm.2008 Sep-Oct;16(5):236-8. doi: 10.1080/09273940802409951].It should also be noted that with the growing popularity of new high-tech methods of surgical treatment, mainly vitreoretinal surgery, which is widely used in the treatment of retinal detachment of various origins, sometimes complications arise associated with both the detached process and the nature and quality of surgical interventions, which are exacerbated after surgery and lead to irreversible changes in the retina and loss of vision [Khoroshilova-Maslova IP, Nabieva MM, Leparskaya N.L. Morphogenesis of complications after prolonged stay of silicone oil in the eye cavity (clinical and histopathological examination) // Bulletin of Ophthalmology. - 2012, - No. 4. - S. 57-61. Sisk RA, Davis JL, Dubovy SR, Smiddy WE. Sympathetic ophthalmia following vitrectomy for endophthalmitis after intravitreal bevacizumab. Ocullmmunollnflamm. 2008 Sep-Oct; 16 (5): 236-8. doi: 10.1080 / 09273940802409951].

Наиболее частым воспалительным осложнением травмы глаза, в том числе и хирургической, является посттравматический увеит (ПТУ), который нередко принимает хроническое течение (ХПТУ) и приводит к вынужденной профилактической энуклеации в связи с угрозой развития симпатической офтальмии (СО) [Марачева Я.М. Иммунопатологические варианты течения посттравматического увеита при проникающем ранении глазного яблока // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2012. - №2 (39). - С. 42-44].The most frequent inflammatory complication of eye trauma, including surgical, is post-traumatic uveitis (PTU), which often takes a chronic course (CPTU) and leads to forced prophylactic enucleation due to the threat of sympathetic ophthalmia (SO) [Maracheva Ya.M. Immunopathological variants of the course of post-traumatic uveitis with a penetrating wound of the eyeball // Bulletin of the Ural Medical Academic Science. - 2012. - No. 2 (39). - S. 42-44].

Несмотря на значительное число работ, посвященных проблеме ПТУ, механизмов его развития и поиска пусковых факторов, предшествующих развитию СО, этот вопрос все еще остается недостаточно изученным.Despite a significant number of works devoted to the problem of vocational school, the mechanisms of its development and the search for triggering factors preceding the development of CO, this issue is still insufficiently studied.

На протяжении последних десятилетий научные интересы многих врачей были сосредоточены на изучении иммунных аспектов при травме глаза. Однако число этих работ невелико, и они совершенно не затрагивают отдаленный период течения посттравматического увеита, представляющего огромный научный интерес ввиду того, что все новые хирургические методы, которые внедряют в повседневную практику офтальмохирурга, в настоящее время позволяют сохранять глаза, раннее считавшиеся бесперспективными. Это ведет к тому, что лишенный зрения глаз пациенты предпочитают не удалять. Однако травмированный слепой глаз неизбежно подвергается постепенной субатрофии, а протекающий внутри воспалительный процесс с периодами обострений, которые могут быть спровоцированы любыми стрессорными факторами (переохлаждение, ОРВИ, гиперинсоляция, длительные физические нагрузки, прием лекарственных средств и др.), может привести к развитию ХПТУ иммунной природы, потенциально опасного из-за угрозы симпатической офтальмии (СО) на парном интактном глазу.Over the past decades, the scientific interests of many doctors have focused on the study of the immune aspects of eye injury. However, the number of these works is small, and they do not at all touch upon the long-term period of the course of post-traumatic uveitis, which is of great scientific interest due to the fact that all new surgical methods that are introduced into the daily practice of an ophthalmic surgeon now allow preserving eyes that were previously considered unpromising. This leads to the fact that patients who have lost sight of their eyes prefer not to remove them. However, the injured blind eye inevitably undergoes gradual subatrophy, and the internal inflammatory process with periods of exacerbations, which can be triggered by any stress factors (hypothermia, acute respiratory viral infections, hyperinsolation, prolonged physical activity, taking medications, etc.), can lead to the development of CPTU immune nature, potentially dangerous due to the threat of sympathetic ophthalmia (CO) in the paired intact eye.

Несмотря на тот факт, что последние годы все усилия направлены на поиск специфических маркеров аутоиммунного воспаления в глазу, которые помогли бы офтальмохирургу принять решение об опасности и целесообразности удаления травмированного глаза, этот вопрос до сих пор остается открытым. На данный момент не существует тестов, позволяющих с уверенностью говорить о начинающейся аутоиммунизации и, следовательно, риске симпатической офтальмии. Наиболее интересными в этом плане маркерами являются те, содержание которых можно было бы отследить как на местном, так и на системном уровне и провести сравнительный анализ между ними.Despite the fact that in recent years all efforts have been directed to the search for specific markers of autoimmune inflammation in the eye, which would help the ophthalmic surgeon decide on the danger and advisability of removing the injured eye, this question still remains open. At the moment, there are no tests that allow us to speak with confidence about the incipient autoimmunization and, therefore, the risk of sympathetic ophthalmia. The most interesting markers in this regard are those whose content could be tracked both at the local and systemic levels and a comparative analysis between them can be carried out.

Известно, что одним из ключевых звеньев, обеспечивающих иммунную привилегию глаза, является феномен «иммунного отклонения, связанный с передней камерой» (ИОПК или ACAID) [Stein-Streilein J., Streilein JW. Иммунное отклонение, связанное с передней камерой камеры (AC AID): регуляция, биологическое значение и значение для терапии // Int. Rev. Immunol. 2002. 21: 123-52; Китаичи Н., Намба К., Тейлор А.В. Индуцируемая иммунная регуляция после аутоиммунного заболевания в иммунопривилегированном глазу // J. Leukoc. Биол. 2005. 77: 496-502; Дарт Д.А., Дана Р., Д'Амор П., Нидеркорн Дж. Я. Иммунология, воспаления и заболевания глаз. Академическая пресса. 2013. С. 50-57, 38-42].It is known that one of the key links providing the immune privilege of the eye is the phenomenon of "immune rejection associated with the anterior chamber" (IOPC or ACAID) [Stein-Streilein J., Streilein JW. Immune abnormality associated with the anterior chamber of the chamber (AC AID): regulation, biological significance and significance for therapy // Int. Rev. Immunol. 2002.21: 123-52; Kitaichi N., Namba K., Taylor A.V. Induced immune regulation after autoimmune disease in an immunoprivileged eye // J. Leukoc. Biol. 2005.77: 496-502; Dart D.A., Dana R., D'Amore P., Niederkorn J.Ya. Immunology, inflammation and eye diseases. Academic press. 2013. S. 50-57, 38-42].

Результаты ряда исследований показали, что ИОПК обеспечивает целый комплекс «пассивных» и «активных» факторов, и одним из важнейших является TGFpi. [Sugita S., Horie S., Nakamura O., Futagami Y., Takase H., Keino H., Aburatani H., Katunuma N., Ishidoh K., Yamamoto Y., Mochizuki M. Пигментный эпителий сетчатки CTLA-2alpha индуцирует TGFbeta-продуцирующие T-регуляторные клетки // J. Immunol. 2008. 181: 7525-36; Хори С., Сугита С., Футагами Ю., Кавагути Т., Камой К., Ширато С., Мочизуки М. Пигментный эпителий радужной оболочки человека подавляет активацию сторонних Т-клеток посредством взаимодействия рецепторов TGFbeta-TGFbeta // Exp Eye Res. 2009. 88: 1033-42; Деннистон А.К., Kottoor SH, Khan I., Oswal K., Williams GP, Abbott J., Wallace GR, Salmon M., Rauz S., Murray PI, Curnow SJ. Эндогенный кортизол и TGF-бета в водянистой влаге человека способствуют иммунным привилегиям глаз, регулирующие функцию дендритных клеток // J Immunol. 2011. 186 (1): 305-11].The results of a number of studies have shown that IOPC provides a whole range of "passive" and "active" factors, and one of the most important is TGFpi. [Sugita S., Horie S., Nakamura O., Futagami Y., Takase H., Keino H., Aburatani H., Katunuma N., Ishidoh K., Yamamoto Y., Mochizuki M. Retinal pigment epithelium CTLA-2alpha induces TGFbeta-producing T-regulatory cells // J. Immunol. 2008.181: 7525-36; Hori S., Sugita S., Futagami Y., Kawaguchi T., Kama K., Shirato S., Mochizuki M. Pigment epithelium of the human iris suppresses the activation of third-party T cells through the interaction of TGFbeta-TGFbeta receptors // Exp Eye Res. 2009.88: 1033-42; Denniston A.K., Kottoor SH, Khan I., Oswal K., Williams GP, Abbott J., Wallace GR, Salmon M., Rauz S., Murray PI, Curnow SJ. Endogenous cortisol and TGF-beta in human aqueous humor contribute to the immune privileges of the eyes, regulating the function of dendritic cells // J Immunol. 2011. 186 (1): 305-11].

Трансформирующий фактор роста [31 может быть как провоспалительным так и противовоспалительным (иммуносупрессивным). Последний эффект, как правило, превалирует, что является важным фактором защиты глаза и, как следствие, представляет интерес для изучения его в аспекте ХПТУ, в особенности на отдаленных сроках течения (Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции развития возбудителей) и иммунитета // Иммунология. 1995. Т.3. С. 30-44).Transforming growth factor [31 can be both pro-inflammatory and anti-inflammatory (immunosuppressive). The latter effect, as a rule, prevails, which is an important factor in protecting the eye and, as a consequence, is of interest for studying it in the aspect of CPTU, especially in the long-term course (Ketlinskiy S.A., Kalinina N.M. Cytokines of mononuclear phagocytes in regulation of the development of pathogens) and immunity // Immunology. 1995. Vol.3. S. 30-44).

Однако, если говорить о воспалении травмированного глаза, то наличие изменений показателя TGFβ1 на местном уровне может говорить о риске воспаления травмированного или оперированного глаза. Поскольку симпатическая офтальмия - это переход аутоиммунного воспаления на парный интактный глаз, что связано, во многом, с нарушением гематоофтальмического барьера, т.е. сломом иммунной привилегии глаза, то для оценки влияния воспаленного травмированного глаза на парный орган, необходимо оценить показатели также и в сыворотке крови.However, if we talk about inflammation of the injured eye, then the presence of changes in the TGFβ1 index at the local level may indicate the risk of inflammation of the injured or operated eye. Since sympathetic ophthalmia is the transition of autoimmune inflammation to a paired intact eye, which is largely associated with a violation of the blood-ophthalmic barrier, i.e. breaking the immune privilege of the eye, then in order to assess the effect of the inflamed injured eye on the paired organ, it is necessary to evaluate the indicators also in the blood serum.

Ввиду этого необходим способ, который мог бы определить наличие угрозы присоединения аутоиммунного компонента воспаления при ХПТУ на системном уровне, чтобы оценить риск перехода воспалительной реакции с локального уровня на системный. Если при оценке течения увеита инфекционной природы речь шла об одном глазу с соответствующей патологией, то при последствиях травмы необходимо оценивать риск развития воспаления аутоиммунной природы не только в самом травмированном глазу, но и вероятность вовлечения парного глаза при наличии соответствующих маркеров воспаления в сыворотке крови.In view of this, a method is needed that could determine the presence of a threat of attachment of the autoimmune component of inflammation in CPTU at the systemic level in order to assess the risk of the transition of the inflammatory response from the local to the systemic level. If, when assessing the course of uveitis of an infectious nature, we were talking about one eye with a corresponding pathology, then with the consequences of trauma, it is necessary to assess the risk of developing inflammation of an autoimmune nature not only in the injured eye itself, but also the likelihood of involvement of the paired eye in the presence of appropriate markers of inflammation in the blood serum.

К тому же важным является сам факт определения трансформирующего фактора роста в кровотоке ввиду того, что в норме он системно выявляется в малых концентрациях, и выраженный дисбаланс в его уровне может свидетельствовать о значительном срыве иммунных механизмов.In addition, the very fact of determining the transforming growth factor in the bloodstream is important due to the fact that it is normally detected systemically in low concentrations, and a pronounced imbalance in its level may indicate a significant breakdown of immune mechanisms.

Ближайшим аналогом изобретения является способ прогнозирования перехода посттравматического увеита в хроническое течение после проникающих ранений глазного яблока, включающий фенотипический анализ состава лимфоцитов с выделением T-reg клеток и субпопуляций В-лимфоцитов, позволяющий определить течение посттравматического увеита у больных в раннем периоде после проникающей травмы глаза (Марачева Н.М. Посттравматический увеит при проникающих ранениях глазного яблока: клинико-инструментальные, иммунологические критерии оценки и прогнозирования течения // Дисс. докт. мед. наук, 2014 г). Однако в данном способе в исследуемой группе были пациенты со свежей травмой глаза (иммунологический анализ проводился на 10-е сутки после проникающего ранения).The closest analogue of the invention is a method for predicting the transition of post-traumatic uveitis into a chronic course after penetrating wounds of the eyeball, including phenotypic analysis of the composition of lymphocytes with the release of T-reg cells and subpopulations of B-lymphocytes, which makes it possible to determine the course of post-traumatic uveitis in patients in the early period after a penetrating eye injury ( Maracheva N.M.Post-traumatic uveitis in case of penetrating wounds of the eyeball: clinical and instrumental, immunological criteria for assessing and predicting the course // Diss. Doctor of Medical Sciences, 2014). However, in this method, the study group included patients with fresh eye trauma (immunological analysis was performed on the 10th day after penetrating injury).

Известен также способ прогнозирования органоспецифической аутоиммунизации при воспалительных заболеваниях глаз, который базируется на определении во влаге передней камеры концентрации трансформирующего ростового фактора бета1 (TGFβ1)(RU 2564929, 10.10.2015).There is also known a method for predicting organ-specific autoimmunization in inflammatory eye diseases, which is based on determining the concentration of transforming growth factor beta1 (TGFβ1) in the moisture of the anterior chamber (RU 2564929, 10.10.2015).

Однако данный способ не учитывает наличие именно хронического увеита, связанного с травмой глаза, при этом в отдаленном периоде, который часто принимает волнообразное течение с частыми периодами обострений и, что очень важно, является угрозой риска развития СО. Также данный способ предлагает диагностику лишь на местном уровне, что не позволяет оценить, какие механизмы происходят на уровне всего организма, что имеет принципиальное значение для понимания механизмов, задействованных при развитии аутоиммунизации и поражении парного глаза, а следовательно, точности диагностики и лечения.However, this method does not take into account the presence of chronic uveitis associated with an eye injury, while in the long-term period, which often takes an undulating course with frequent periods of exacerbations and, which is very important, is a threat to the risk of developing CO. Also, this method offers diagnostics only at the local level, which does not allow assessing what mechanisms occur at the level of the whole organism, which is of fundamental importance for understanding the mechanisms involved in the development of autoimmunization and lesions of the paired eye, and, consequently, the accuracy of diagnosis and treatment.

Задачей предлагаемого способа является разработка критериев риска аутоиммунного воспаления в отдаленные сроки посттравматического увеита. Техническим результатом предлагаемого способа является выбор тактики лечения, обеспечивающей предупреждение развития симпатической офтальмии. Технический результат достигается за счет определения уровня трансформирующего фактора роста TGF- β1 во влаге передней камеры травмированного глаза и в сыворотке крови.The objective of the proposed method is to develop criteria for the risk of autoimmune inflammation in the long term post-traumatic uveitis. The technical result of the proposed method is the choice of treatment tactics that prevent the development of sympathetic ophthalmia. The technical result is achieved by determining the level of the transforming growth factor TGF-β1 in the moisture of the anterior chamber of the injured eye and in the blood serum.

Патогенетическим обоснованием предлагаемого способа послужили данные, полученные нами при изучении связи между концентрацией TGFβ1 во влаге передней камеры (ВПК) и в сыворотке крови (СК) с развитием системного клеточного иммунного ответа на антигены тканей глаза, ассоциированного с иммунным воспалением, подтвержденным морфологическим исследованием.The pathogenetic substantiation of the proposed method was the data obtained by us in the study of the relationship between the concentration of TGFβ1 in the moisture of the anterior chamber (MIC) and in the blood serum (SC) with the development of a systemic cellular immune response to antigens of eye tissue associated with immune inflammation, confirmed by morphological study.

Исследования проводили с помощью иммунноферментного анализа (ИФА), реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) и морфологического исследования материала удаленных глаз. Обследовано 87 пациентов с ХПТУ. Пациенты разделены на две группы. I - пациенты с положительной РТМЛ хотя бы к одному антигену, ассоциированной с иммунным воспалением, выявленным морфологически. II - пациенты с отрицательной РТМЛ, ассоциированной с отсутствием иммунного воспаления при морфологическом анализе, что имеет принципиальное значение в диагностике аутоиммунного воспаления в глазу, так как именно гистологическое исследование способно точно подтвердить наличие или отсутствие иммунного/аутоиммунного воспаления.The studies were carried out using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), reaction inhibition of leukocyte migration (RTML) and morphological examination of the material of the removed eyes. 87 patients with CPTU were examined. The patients are divided into two groups. I - patients with positive RTML to at least one antigen associated with immune inflammation identified morphologically. II - patients with negative RTML associated with the absence of immune inflammation in morphological analysis, which is of fundamental importance in the diagnosis of autoimmune inflammation in the eye, since it is the histological examination that can accurately confirm the presence or absence of immune / autoimmune inflammation.

Всем 87 пациентам было проведено хирургическое лечение - удаление слепого бесперспективного глаза. Перед операцией всем пациентам осуществляли забор крови из локтевой вены в стерильные пробирки Vacuette с ЭДТА. Интраоперационно, непосредственно перед началом хирургического вмешательства производили забор влаги передней камеры травмированного глаза (ВПК). После операции материал отправляли на морфологическое исследование. Во ВПК с помощью ИФА определяли содержание трансформирующего фактора роста (TGFβ1). В сыворотке крови содержание TGFβ1 также оценивали методом иммуноферментного анализа.All 87 patients underwent surgical treatment - removal of a blind, unpromising eye. Before surgery, all patients underwent blood sampling from the cubital vein into sterile Vacuette tubes with EDTA. Intraoperatively, immediately before the start of the surgical intervention, moisture was taken from the anterior chamber of the injured eye (VPK). After the operation, the material was sent for morphological examination. The content of transforming growth factor (TGFβ1) was determined in the MIC using ELISA. In the blood serum, the TGFβ1 content was also assessed by the enzyme-linked immunosorbent assay.

Системный иммунный ответ на антигены тканей глаза (роговица, хрусталик, увеальная ткань, S-антиген сетчатки) оценивали с помощью РТМЛ в 96-луночных микропланшетах. Количественный учет результатов РТМЛ производили на инвертированном микроскопе и оценивали по соотношению индексу перемещений (ИМ) - площади площадей перемещения лейкоцитов в опыте (реакция с антигеном) и контроле (среда RPMI 1640 «Sigma» без антигена). При оценке результатов за норму принимали интервал ИМ от 0,80 до 1,20. Показатели ниже 0,80 и выше 1,20 считали положительной реакцией, отражавшей системный клеточный иммунный ответ на органоспецифические антигены глаза.The systemic immune response to antigens of ocular tissues (cornea, lens, uveal tissue, retinal S antigen) was assessed using RTML in 96-well microplates. Quantitative registration of RTML results was performed on an inverted microscope and was assessed by the ratio of the displacement index (MI) - the area of the areas of movement of leukocytes in the experiment (reaction with antigen) and control (RPMI 1640 "Sigma" medium without antigen). When evaluating the results, the MI interval from 0.80 to 1.20 was taken as the norm. Indicators below 0.80 and above 1.20 were considered a positive reaction reflecting the systemic cellular immune response to organ-specific antigens of the eye.

Морфологическое исследование осуществляли посредством световой микроскопии. Для гистологического изучения удаленные глаза фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, разрезали на 3 части: центральную и две боковых колодки. Центральную колодку проводили по спиртам восходящей концентрации с целью обезвоживания и заключали в парафин. С каждой центральной колодки делали серию из 50-100 срезов толщиной 5-7 микрон, окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали с помощью микросистемы со сквозным оптико-цифровым каналом наблюдения Микровизор проходящего света мVizo-101, а также на световом микроскопе «Micros» производства Австрия, и с помощью микросистемы фирмы «Leica» с цифровой фотокамерой.Morphological examination was carried out by means of light microscopy. For histological examination, the removed eyes were fixed in a 10% solution of neutral formalin, cut into 3 parts: a central and two lateral blocks. The central block was passed through alcohols of ascending concentration for the purpose of dehydration and embedded in paraffin. A series of 50-100 sections with a thickness of 5-7 microns was made from each central block, stained with hematoxylin and eosin and examined using a microsystem with a through optical-digital observation channel. , and using a microsystem from Leica with a digital camera.

Статистическую обработку результатов осуществляли в программе «BIOSTATD» (t-критерий Стьюдента, критерий Фишера). Показатель статистической значимости: р<0,05.Statistical processing of the results was carried out in the "BIOSTATD" program (Student's t-test, Fisher's test). Statistical significance index: p <0.05.

Наиболее важные результаты выявлены при исследовании TGFβ1 в группе I - у пациентов с положительной РТМЛ хотя бы к одному антигену, ассоциированной с иммунным воспалением, выявленным морфологически. Содержание его во ВПК у этих больных оказалось достоверно ниже, чем у пациентов II группы, что указывает на недостаточность одного из главных факторов защиты, обеспечивающего привилегированность глаза. К тому же значительный дисбаланс в сторону повышения трасформирующего фактора роста (медиатора, который работает практически лишь на местном уровне) в системном кровотоке в первой группе свидетельствует о выраженном иммунном дисбалансе и срыве компенсаторных механизмов, что характерно для аутоиммунизации. Все это свидетельствует о том, что данные пациенты находятся в высокой группе риска в связи с угрозой развития симпатической офтальмии.The most important results were found in the study of TGFβ1 in group I - in patients with positive RTML to at least one antigen associated with immune inflammation identified morphologically. Its content in the MIC in these patients turned out to be significantly lower than in patients of group II, which indicates the insufficiency of one of the main protective factors that ensures the privilege of the eye. In addition, a significant imbalance towards an increase in the transforming growth factor (a mediator that works practically only at the local level) in the systemic circulation in the first group indicates a pronounced immune imbalance and a breakdown of compensatory mechanisms, which is characteristic of autoimmunization. All this indicates that these patients are at high risk due to the threat of developing sympathetic ophthalmia.

Таким образом, результаты проведенного клинико-иммуно-морфологического исследования выявили связь с падением TGFβ1 во ВПК и его повышение в СК с риском аутоиммунного воспаления при ХПТУ. Выявленные показатели качества сдвигов в локальном и системном цитокиновом статусе - снижение уровня TGFβ1 во ВПК и повышение в СК могут служить критерием раннего прогнозирования аутоиммунного воспаления, что важно для клинической практики для профилактики развития симпатической офтальмии.Thus, the results of the conducted clinical, immunomorphological study revealed a connection with a drop in TGFβ1 in the MIC and its increase in the SC with the risk of autoimmune inflammation in CPTU. The revealed indicators of the quality of shifts in the local and systemic cytokine status - a decrease in the level of TGFβ1 in the MIC and an increase in the SC can serve as a criterion for early prediction of autoimmune inflammation, which is important for clinical practice for the prevention of the development of sympathetic ophthalmia.

Способ осуществляют следующим образом. У пациента с перенесенной ранее травмой глаза и травматическим увеитом во влаге передней камеры травмированного глаза и в сыворотке крови определяют уровень трансформирующего фактора роста TGF- β1. При его уровне ниже 1000 пкг/мл во влаге передней камеры и выше 30000 пкг/мл в сыворотке крови прогнозируют высокий риск аутоиммунного воспаления.The method is carried out as follows. In a patient with a previous eye injury and traumatic uveitis, the level of transforming growth factor TGF-β1 is determined in the moisture of the anterior chamber of the injured eye and in the blood serum. When its level is below 1000 pkg / ml in the moisture of the anterior chamber and above 30,000 pg / ml in the blood serum, a high risk of autoimmune inflammation is predicted.

Клинические примеры.Clinical examples.

Пример 1. Больной С., 48 лет поступил в отделение пластической хирургии и глазного протезирования НМИЦ глазных болезней им. Гельмгольца с диагнозом OD: Последствие травмы: амавроз, субатрофия I степени, состояние после неоднократных витреоретинальных хирургических вмешательств, болевой синдром.OS - здоров.Example 1. Patient S., 48 years old, was admitted to the Department of Plastic Surgery and Ophthalmic Prosthetics of the N.N. Helmholtz with a diagnosis of OD: Sequelae of trauma: amaurosis, grade I subatrophy, condition after repeated vitreoretinal surgical interventions, pain syndrome. OS - healthy.

При сборе анамнеза установлено, что у пациента травма правого глаза (проникающее ранение отверткой) была 5 лет назад, было проведено ПХО корнеосклерального ранения, затем в течение года были выполнены 3 витреоретинальных вмешательства. Получал консервативное лечение, но на протяжении последнего года происходят частые рецидивы увеита правого глаза.When collecting anamnesis, it was found that the patient had an injury to his right eye (a penetrating wound with a screwdriver) was 5 years ago, a PST of corneoscleral injury was performed, then 3 vitreoretinal interventions were performed within a year. He received conservative treatment, but over the past year there have been frequent relapses of uveitis in the right eye.

Пациент отмечает болезненность в правом глазу, покраснение, слезотечение.The patient notes soreness in the right eye, redness, lacrimation.

VisOD = ноль; VisOS = 1,0 ВГД OD п/п - 1 OS п/п NVisOD = zero; VisOS = 1.0 IOP OD p / n - 1 OS p / n N

При обследовании: OD: смешанная инъекция конъюнктивы глазного яблока, врастающие сосуды роговицы, корнеосклеральный рубец, в передней камере незначительное количество силиконового масла. Радужка отечная, рубеоз. Помутнение хрусталика в кортикальных слоях и ядре. Глубже лежащие среды не просматриваются.On examination: OD: mixed injection of the conjunctiva of the eyeball, ingrowing vessels of the cornea, corneoscleral scar, a small amount of silicone oil in the anterior chamber. The iris is edematous, rubeosis. Lens clouding in the cortical layers and nucleus. Deeper environments are not visible.

OS: Глаз спокоен. Конъюнктива бледно-розовая, отделяемого нет. Роговица прозрачная, блестящая, сферичная. Передняя камера средней глубины, равномерная, влага ее прозрачная. Радужка структурная, зрачок круглый, по центру, реакция на свет живая. Хрусталик склерозирован. Стекловидное тело структурное. Глазное дно: без патологии.OS: The eye is calm. The conjunctiva is pale pink, there is no discharge. The cornea is transparent, shiny, spherical. The anterior chamber is of medium depth, uniform, its moisture is transparent. The iris is structural, the pupil is round, in the center, the reaction to light is lively. The lens is sclerosed. The vitreous body is structural. The fundus of the eye: no pathology.

Анамнез и клиническая картина свидетельствуют об очередном рецидиве хронического посттравматического увеита. С учетом травмы и витреоретинальных вмешательств в анамнезе высока вероятность развития увеита аутоиммунной природы с угрозой перехода в симпатическую офтальмию.The history and clinical picture indicate another recurrence of chronic post-traumatic uveitis. Given the history of trauma and vitreoretinal interventions, there is a high likelihood of developing an autoimmune uveitis with a threat of transition to sympathetic ophthalmia.

Были проведены общепринятые иммунологические исследования (РТМЛ): результаты РТМЛ с антигенами роговицы ИМ = 0,86; хрусталика ИМ = 1,0;увеа ИМ = 1,34. Повышение показателя увеа до 1,34 (норма 1,20) свидетельствует о наличии сенсибилизации к увеапигментной ткани, что ухудшает прогноз течения хронического посттравматического увеита.Conventional immunological studies (RTML) were carried out: the results of RTML with corneal antigens MI = 0.86; lens MI = 1.0; uvea MI = 1.34. An increase in the uvea index to 1.34 (normal 1.20) indicates the presence of sensitization to uveapigment tissue, which worsens the prognosis of the course of chronic post-traumatic uveitis.

Для оценки риска аутоиммунного воспаления взяты для определения уровня TGFβ1 влага передней камеры травмированного глаза и сыворотка крови. Получены результаты: во влаге передней камеры травмированного правого глаза выявлен уровень TGFβ1 = 847 пг/мл. При исследовании сыворотки крови выявлен уровень TGFβ1 = 30105 пг/мл. Полученные данные свидетельствуют о высоком риске развития аутоиммунного воспаления на травмированном глазу, т.е. очень высок риск развития симпатической офтальмии на интактном левом глазу. Проведена эвисцерация с резекцией заднего полюса склеры с неврэктомией по ранее разработанному безопасному методу с коагуляцией эмиссариев, резекцией заднего полюса склеры с неврэктомией и частичной резекцией внутренних слоев склеры с удалением остаточных элементов пигментного эпителия. Кроме того, после операции проведен курс профилактического лечения, включающий системный прием нестероидных противовоспалительных препаратов и инстилляции кортикостероидов и нестероидных противовоспалительных препаратов в оставшийся левый глаз. После проведенной морфологическое исследование подтвердило наличие увеита на иммунной основе.To assess the risk of autoimmune inflammation, moisture in the anterior chamber of the injured eye and blood serum were taken to determine the level of TGFβ1. The results were obtained: the level of TGFβ1 = 847 pg / ml was found in the moisture of the anterior chamber of the injured right eye. The study of blood serum revealed the level of TGFβ1 = 30105 pg / ml. The data obtained indicate a high risk of developing autoimmune inflammation in the injured eye, i.e. the risk of developing sympathetic ophthalmia in the intact left eye is very high. Evisceration was performed with resection of the posterior pole of the sclera with neurectomy according to the previously developed safe method with coagulation of the emissaries, resection of the posterior pole of the sclera with neurectomy and partial resection of the inner layers of the sclera with the removal of residual elements of the pigment epithelium. In addition, after the operation, a course of prophylactic treatment was carried out, including the systemic administration of non-steroidal anti-inflammatory drugs and the instillation of corticosteroids and non-steroidal anti-inflammatory drugs into the remaining left eye. After the morphological examination, the presence of immune-based uveitis was confirmed.

Данный пример показывает, что снижение уровня TGFβ1 во влаге передней камеры травмированного глаза с одновременным значительным повышением уровня TGFβ1 в сыворотке крови соотносится с высоким риском аутоиммунного воспаления, угрожающего развитием симпатического воспаления и потери зрения на парном глазу. Предпринятые меры: операция по безопасному методу и дополнительный курс противовоспалительной терапии позволили избежать нежелательного исхода. В отдаленном периоде наблюдений данных за симпатическое воспаление на парном глазу не выявлено.This example shows that a decrease in the level of TGFβ1 in the moisture of the anterior chamber of the injured eye with a simultaneous significant increase in the level of TGFβ1 in the blood serum correlates with a high risk of autoimmune inflammation threatening the development of sympathetic inflammation and loss of vision in the paired eye. Measures taken: a safe operation and an additional course of anti-inflammatory therapy allowed to avoid an undesirable outcome. In the long-term observation period, data for sympathetic inflammation in the paired eye were not revealed.

Пример 2. Больная С., 54 года, обратилась на консультативный прием в отделение пластической хирургии и глазного протезирования МНИЦ ГБ им. Гельмгольца с диагнозом OD - последствие травмы: амавроз, субатрофия II степени, отслойка сетчатки. OS - здоров.Example 2. Patient S., 54 years old, applied for a consultation at the Department of Plastic Surgery and Ophthalmic Prosthetics of the I. Helmholtz with a diagnosis of OD - a consequence of trauma: amaurosis, grade II subatrophy, retinal detachment. OS is healthy.

Из анамнеза известно, что 3 года назад пациентка травмировала правый глаз спицей, было проведено ПХО раны роговицы и удаление мутного хрусталика. Получала консервативное лечение, в течение 2-х лет глаз не беспокоил, однако в последние 6 месяцев дважды было обострение хронического посттравматического увеита.From the anamnesis it is known that 3 years ago the patient injured her right eye with a wire, the corneal wound PCO was performed and the cloudy lens was removed. Received conservative treatment, for 2 years the eye did not bother, however in the last 6 months there was twice an exacerbation of chronic post-traumatic uveitis.

Пациентка отмечает болезненность в правом глазу, покраснение, слезотечение.The patient notes soreness in the right eye, redness, lacrimation.

VisOD = ноль; VisOS = 1,0 ВГД OD п/п -1 OS п/п NVisOD = zero; VisOS = 1.0 IOP OD p / n -1 OS p / n N

При обследовании в OD: смешанная инъекция конъюнктивы глазного яблока. Рубец роговицы на 14-17 ч., с врастающими новообразованными сосудами. ПК неравномерная. Радужка подтянута к рубцу, зрачок запаян, глубже лежащие среды не просматриваются.When examined in OD: mixed injection of the conjunctiva of the eyeball. Corneal scar at 14-17 hours, with ingrowing newly formed vessels. PC is uneven. The iris is pulled up to the scar, the pupil is sealed, the deeper media are not visible.

Анамнез и клиническая картина свидетельствуют об очередном рецидиве хронического посттравматического увеита. С учетом характера травмы есть вероятность развития увеита аутоиммунной природы с угрозой перехода в симпатическую офтальмию.The history and clinical picture indicate another recurrence of chronic post-traumatic uveitis. Given the nature of the injury, there is a likelihood of developing an autoimmune uveitis with the threat of transition to sympathetic ophthalmia.

Были проведены общепринятые иммунологические исследования (РТМЛ): результаты РТМЛ с антигенами роговицы ИМ = 0,86; хрусталика ИМ = 1,0;увеа ИМ = 0,95. Все показатели в пределах референтной нормы, однако, поскольку данный анализ информативен только в 30-50% случаев для оценки риска аутоиммунного воспаления взяты для определения уровня TGFβ1 влага передней камеры травмированного правого глаза и сыворотка крови. Получены результаты: во влаге передней камеры травмированного правого глаза выявлен уровень TGFβ1 = 1953 пг / мл. При исследовании сыворотки крови выявлен уровень TGFβ1 = 14908 пг / мл.Conventional immunological studies (RTML) were carried out: the results of RTML with corneal antigens MI = 0.86; lens MI = 1.0; uvea MI = 0.95. All indicators are within the reference norm, however, since this analysis is informative only in 30-50% of cases to assess the risk of autoimmune inflammation, moisture in the anterior chamber of the injured right eye and blood serum were taken to determine the level of TGFβ1. The results were obtained: the level of TGFβ1 = 1953 pg / ml was found in the moisture of the anterior chamber of the injured right eye. The study of blood serum revealed the level of TGFβ1 = 14908 pg / ml.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии риска развития аутоиммунного воспаления на травмированном глазу.The data obtained indicate that there is no risk of developing autoimmune inflammation in the injured eye.

В данной ситуации метод выбора хирургического вмешательства по удалению глаза у хирурга свободный. Если склера позволяет, то целесообразнее выполнить эвисцерацию с резекцией заднего полюса склеры и неврэктомией. Необходимости в проведении профилактического противовоспалительного курса терапии нет. После проведенной операции (эвисцерация с резекцией заднего полюса склеры и неврэктомия) морфологическое исследование выявило признаки атрофии и фиброза оболочек глаза, признаков увеита на иммунной основе выявлено не было.In this situation, the surgeon has a free choice of surgical intervention to remove the eye. If the sclera allows, then it is more expedient to perform evisceration with resection of the posterior pole of the sclera and neurectomy. There is no need for a prophylactic anti-inflammatory course of therapy. After the operation (evisceration with resection of the posterior pole of the sclera and neurectomy), morphological examination revealed signs of atrophy and fibrosis of the membranes of the eye, no signs of immune-based uveitis were found.

Данный пример показывает, что уровень TGFβ1 в пределах нормальных значений как во влаге передней камеры, так и в сыворотке крови соотносится с отсутствием иммунного воспаления и спокойной морфологической картиной.This example shows that the level of TGFβ1 within normal values both in the moisture of the anterior chamber and in the blood serum correlates with the absence of immune inflammation and a calm morphological picture.

В данной ситуации отсутствует риск развития симпатической офтальмии на парном глазу и лечение будет заключаться только в удалении слепого воспаленного бесперспективного глаза без дополнительных приемов во время операции и последующего курса профилактического лечения. Последующие наблюдения подтвердили отсутствие симпатического воспаления на парном глазу.In this situation, there is no risk of developing sympathetic ophthalmia in the paired eye and the treatment will consist only in removing the blind, inflamed, unpromising eye without additional techniques during the operation and the subsequent course of preventive treatment. Subsequent observations confirmed the absence of sympathetic inflammation in the paired eye.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет прогнозировать высокий риск аутоиммунного воспаления при ХПТУ длительного течения посредством выявленных изменений в уровне трансформирующего фактора роста (TGF- β1) во влаге передней камеры и в сыворотке крови. Это позволяет оптимизировать диагностический подход, а также определить тактику ведения пациентов с ХПТУ в плане выбора безопасного метода удаления глаза и проведения профилактического курса патогенетически ориентированной терапии.Thus, the proposed method makes it possible to predict a high risk of autoimmune inflammation in long-term CPTU through the revealed changes in the level of transforming growth factor (TGF-β1) in the moisture of the anterior chamber and in the blood serum. This makes it possible to optimize the diagnostic approach, as well as to determine the tactics of managing patients with CPTU in terms of choosing a safe method for removing the eye and conducting a prophylactic course of pathogenetically oriented therapy.

Claims

A method for predicting a high risk of autoimmune inflammation in post-traumatic uveitis in the late stages of the course, characterized in that the level of transforming growth factor TGF-β1 is determined in the moisture of the anterior chamber of the injured eye and in the blood serum and at its level below 1000 pkg / ml in the moisture of the anterior chamber and above 30,000 pg / ml in serum predict a high risk of autoimmune inflammation.