RU2752363C2 - Method for predicting high risk of early atherosclerosis - Google Patents
Method for predicting high risk of early atherosclerosis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2752363C2 RU2752363C2 RU2019145642A RU2019145642A RU2752363C2 RU 2752363 C2 RU2752363 C2 RU 2752363C2 RU 2019145642 A RU2019145642 A RU 2019145642A RU 2019145642 A RU2019145642 A RU 2019145642A RU 2752363 C2 RU2752363 C2 RU 2752363C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ser447ter
- gly482ser
- atherosclerosis
- lpl
- lipc
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеThe technical field to which the invention relates
Настоящее изобретение относится к области молекулярной биологии и генетики и может быть использовано в медицине при определении высокого риска развития раннего атеросклероза. В частности, в настоящем изобретении предложен способ прогноза персонифицированной диагностики риска развития раннего атеросклероза, на основе бальной оценки числа полиморфных аллелей и их определенных сочетаний, включающий анализ ДНК субъекта, выявление аллельных вариантов генов липидного и углеводного обмена LPL, LIPC, АРОЕ, а также и генов окислительного и противовоспалительного гомеостаза EDN, PPARGC1A. В целом способ представляет собой набор полиморфных маркеров LPL, LIPC, АРОЕ, EDN, PPARGC1A для предиктивной диагностики раннего атеросклероза. Различные комбинации генетических вариантов полиморфных локусов Leu28Pro (rs769452) АРОЕ, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL, Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lys198Asn (rs5370) EDN указывают на развитие раннего атеросклероза.The present invention relates to the field of molecular biology and genetics and can be used in medicine to determine the high risk of developing early atherosclerosis. In particular, the present invention proposes a method for predicting a personalized diagnosis of the risk of early atherosclerosis, based on a point assessment of the number of polymorphic alleles and their specific combinations, including analysis of the subject's DNA, identification of allelic variants of lipid and carbohydrate metabolism genes LPL, LIPC, APOE, as well as genes for oxidative and anti-inflammatory homeostasis EDN, PPARGC1A. In general, the method is a set of polymorphic markers LPL, LIPC, APOE, EDN, PPARGC1A for predictive diagnosis of early atherosclerosis. Various combinations of genetic variants of polymorphic loci Leu28Pro (rs769452) APOE, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL, Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lys198Asn (rs5370) EDN indicate the development of early atherosclerosis.
Применение заявленного способа позволит диагностировать среди мужчин и женщин группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятии.Application of the claimed method will make it possible to diagnose risk groups among men and women and promptly implement the necessary therapeutic and prophylactic measures in these groups.
Уровень техникиState of the art
Заболевания сердечно-сосудистой системы, которые обусловлены атеросклерозом, представляют собой основную причину смертности во всем мире, в том числе и в России (Roger С. et al., 2012; ВОЗ, 2017). В современной медицине, проблема атеросклероза является одной из самых актуальных, на сегодняшний день, учитывая ее распространенность и выраженность клинических симптомов. Одной из особенностей патологии является то, что длительное время атеросклероз протекает без клинических проявлений, пока не приведет к осложнениям в виде острых или хронических сосудистых событий. В настоящее время атеросклероз рассматривают в качестве мультифакторного заболевания, развитие которого может быть запущено комбинацией нескольких факторов. Индивидуальный вклад каждого фактора может быть незначительным, и только их сумма ведет к развитию заболевания. Подавляющая часть работ, направленных на исследование генетических причин развития атеросклероза, связана с изучением аллельных вариантов генов одной функциональной генной сети, например, генов липидного и углеводного обменов, генов окислительного и провоспалительного гомеостаза, генов, кодирующих компоненты дыхательной цепи митохондриального генома. В то же время известно, что ранние этапы развития атеросклероза базируются на механизмах, лежащих в основе функционирования нескольких функциональных групп белков и генов, их кодирующих.Diseases of the cardiovascular system, which are caused by atherosclerosis, represent the main cause of death worldwide, including in Russia (Roger S. et al., 2012; WHO, 2017). In modern medicine, the problem of atherosclerosis is one of the most urgent today, given its prevalence and severity of clinical symptoms. One of the features of the pathology is that for a long time atherosclerosis proceeds without clinical manifestations until it leads to complications in the form of acute or chronic vascular events. Currently, atherosclerosis is considered as a multifactorial disease, the development of which can be triggered by a combination of several factors. The individual contribution of each factor may be insignificant, and only their sum leads to the development of the disease. The overwhelming majority of works aimed at studying the genetic causes of the development of atherosclerosis are associated with the study of allelic variants of genes of one functional gene network, for example, genes for lipid and carbohydrate metabolism, genes for oxidative and proinflammatory homeostasis, genes encoding components of the respiratory chain of the mitochondrial genome. At the same time, it is known that the early stages of atherosclerosis development are based on the mechanisms underlying the functioning of several functional groups of proteins and genes encoding them.
Атеросклероз - полиэтиологичный процесс, в литературе было описано свыше 250 эндогенных и экзогенных факторов риска его развития. Однако характерно, что атеросклероз возникает как у лиц с гиперхолестеринемией, так и с нормальным содержанием холестерина в крови, у лиц с артериальной гипертензией и с нормальным давлением крови, у лиц с ожирением и кахексией, на фоне сахарного диабета и без него (Niebylski М., 2015). Существенный вклад в патогенез развития атеросклероза вносят такие факторы, как эндотелиальная дисфункция, воспаление, нарушенный метаболизм липопротеина и гомоцистеина, а также дисфункциональная коагуляция и фибринолиз (Rader, Daugherty, 2008).Atherosclerosis is a polyetiologic process; more than 250 endogenous and exogenous risk factors for its development have been described in the literature. However, it is characteristic that atherosclerosis occurs both in persons with hypercholesterolemia and in those with normal blood cholesterol levels, in persons with arterial hypertension and normal blood pressure, in persons with obesity and cachexia, with and without diabetes mellitus (Niebylski M. , 2015). Factors such as endothelial dysfunction, inflammation, impaired lipoprotein and homocysteine metabolism, as well as dysfunctional coagulation and fibrinolysis make a significant contribution to the pathogenesis of atherosclerosis (Rader and Daugherty, 2008).
Анализируемые в заявленном способе аллельные варианты генов были отобраны по результатам анализа данных литературы с учетом их патогенетического вклада в формирование атеросклероза на ранних этапах развития заболевания, а также результатов собственных исследований по генотипированию мужчин и женщин с выраженными признаками атеросклеротического поражения. Краткая характеристика, исследуемых генов представлена в таблице 1.The allelic variants of genes analyzed in the claimed method were selected based on the analysis of literature data, taking into account their pathogenetic contribution to the formation of atherosclerosis in the early stages of the development of the disease, as well as the results of our own research on the genotyping of men and women with pronounced signs of atherosclerotic lesions. A brief description of the genes under study is presented in Table 1.
Ген аполипопротеина-Е (АРОЕ) оказывает выраженное влияние на уровень липидов крови и предрасположенность к ряду сердечно-сосудистых заболеваний. АРОЕ обеспечивает поглощение холестерина через В, Е-рецепторы, способствует поглощению ремнантов хломикронов и липопротеинов очень низкой плотности печенью, активирует липопротеинлипазу и лицетинхолинацилтрансферазу, связывает гепароиды с эндотелиальными клетками, участвует в формировании богатых эфирами холестерина липопротеинов низкой плотности и перераспределении липидов в тканях (Laws S. М., et al., 2002).The apolipoprotein-E (APOE) gene has a pronounced effect on blood lipids and predisposition to a number of cardiovascular diseases. APOE ensures the absorption of cholesterol through B, E receptors, promotes the absorption of remnants of chlomicrons and very low density lipoproteins by the liver, activates lipoprotein lipase and lycetin choline acyltransferase, binds heparoids with endothelial cells, participates in the formation of cholesterol-rich lipoproteins in the tissues of low density lipoproteins (Laws M., et al., 2002).
Ген EDN1, кодирующий предшественник эндотелина-1, локализуется на хромосоме 6 (р24-23) и содержит пять экзонов (Arinami Т., et al., 2006). В промоторной области гена располагаются последовательности СААТ и TATA, регулирующие транскрипцию (Levine et al., 1995). Установлено, что ген эндотелина-1 ассоциирован с системой патологической вазоконстрикции и артериальной гипертензией (Pare et al., 2007).The EDN1 gene, which encodes the precursor of endothelin-1, is located on chromosome 6 (p24-23) and contains five exons (Arinami T., et al., 2006). The promoter region of the gene contains the CAAT and TATA sequences that regulate transcription (Levine et al., 1995). It was found that the endothelin-1 gene is associated with the system of pathological vasoconstriction and arterial hypertension (Pare et al., 2007).
Ген LIPC, ответственный за синтез печеночной липазы, а также ремоделирование липопротеинов низкой и высокой плотности. Локализован на 15 хромосоме человека в позиции q21-q23. Общая протяженность экзонов гена - 35 kb. Экзон 1 кодирует сигнальный пептид; экзон 4 кодирует область связывания пептида с липопротеиновыми субстратами; экзон 5 кодирует каталитическую область пептида; экзоны 6 и 9 кодируют область пептида, обогащенную основными аминокислотами, с помощью которых пептид прикрепляется к эндотелиальной поверхности, взаимодействуя с кислыми доменами гликозамингликанов (Andersen et al., 2011). Печеночная липаза участвует с поверхностными протеогликанами, как лиганд в активации поглощения липопротеинов печенью, включая богатые триглицеридами липопротеиновые остатки, частицы ЛПНП и ЛПВП. Хотя роль печеночной липазы в катаболизме липопротеина хорошо установлена, ее роль в качестве анти- или про-атерогенного фактора все еще спорная (Rosamond et al., 2007).LIPC gene, responsible for the synthesis of hepatic lipase, as well as the remodeling of low and high density lipoproteins. It is localized on the 15th human chromosome in the position q21-q23. The total length of the gene exons is 35 kb. Exon 1 encodes a signal peptide; exon 4 encodes the binding region of the peptide to lipoprotein substrates; exon 5 encodes the catalytic region of the peptide; exons 6 and 9 encode a region of the peptide enriched in basic amino acids, through which the peptide attaches to the endothelial surface interacting with acidic domains of glycosaminoglycans (Andersen et al., 2011). Hepatic lipase is involved with surface proteoglycans as a ligand in the activation of lipoprotein uptake by the liver, including triglyceride-rich lipoprotein residues, LDL and HDL particles. Although the role of hepatic lipase in lipoprotein catabolism is well established, its role as an anti- or pro-atherogenic factor is still controversial (Rosamond et al., 2007).
Сывороточный уровень триглицеридов является важным независимым фактором риска развития атеросклероза. Липопротеиновая липаза (LPL) является ключевым ферментом для катаболизма богатых триглицеридом липопротеиновых частиц, используя АРОС-II в качестве кофактора. Сниженная активность LPL приводит к повышенному уровню триглицеридов (Hu et al., 2006).Serum triglyceride levels are an important independent risk factor for atherosclerosis. Lipoprotein lipase (LPL) is a key enzyme for the catabolism of triglyceride-rich lipoprotein particles using APOC-II as a cofactor. Decreased LPL activity results in increased triglyceride levels (Hu et al., 2006).
В 5-м экзоне гена EDN-1 была обнаружена однонуклеотидная замена Lys198Asn, представляющая собой трансверсию G>T в 5665-м нуклеотиде, приводящую к замене лизина на аспарагин в 198-м положении аминокислотной последовательности (Holzhauser, Zolty, 2014). В нескольких исследованиях было отмечено, что частота аллеля 198Asn имеет этнические и географические особенности, которая высока среди азиатов и белых европейцев по сравнению с индийцами, афроамериканцами и якутами, а самая низкая встречаемость наблюдается среди жителей южной Америки. Для носителей генотипа Asn/Asn характерен более высокий уровень эндотелина 1 в плазме по сравнению с носителями генотипа Lys/Lys (Калинин и др., 2015).In the 5th exon of the EDN-1 gene, a single nucleotide substitution Lys198Asn was found, which is a G> T transversion at the 5665th nucleotide, leading to the substitution of lysine for asparagine at position 198 of the amino acid sequence (Holzhauser and Zolty, 2014). Several studies have noted that the 198Asn allele has ethnic and geographic characteristics that are high among Asians and White Europeans compared to Indians, African Americans and Yakuts, and the lowest incidence is found among South Americans. Carriers of the Asn / Asn genotype are characterized by a higher level of
PPARGC1 локализуется на 4 хромосоме (4р15.1). Продукт экспрессии гена PPARGC1A играет ключевую роль в метаболизме клеток миокарда. Активация PPARGC1A в миоцитах сердца ведет к индукции генов, кодирующих ферменты системы перекисного окисления липидов (Lehman et al., 2000). Также PPARGC1A активирует ряд транскрипционных факторов, таких как NRF-1, которые стимулируют биогенез митохондрий и усиливают экспрессию генов, кодирующих компоненты системы переноса электронов в митохондриях (Huss et al., 2004).PPARGC1 is localized on chromosome 4 (4p15.1). The expression product of the PPARGC1A gene plays a key role in the metabolism of myocardial cells. Activation of PPARGC1A in cardiac myocytes leads to the induction of genes encoding enzymes of the lipid peroxidation system (Lehman et al., 2000). PPARGC1A also activates a number of transcription factors, such as NRF-1, which stimulate mitochondrial biogenesis and enhance the expression of genes encoding components of the mitochondrial electron transport system (Huss et al., 2004).
Генетические исследования сердечно-сосудистой патологии имеют несколько составляющих, в том числе и идентификацию ДНК/РНК маркеров, имеющих прогностическую ценность для оценки риска развития атеросклероза. Проведение генотипирования по одному полиморфизму не позволяет получить результат с высокой прогностической значимостью. Прогностическая значимость исследования повышается при включении в анализ аллельных вариантов нескольких функциональных групп генов, контролирующих ключевые процессы развития атеросклероза.Genetic studies of cardiovascular pathology have several components, including the identification of DNA / RNA markers that have prognostic value for assessing the risk of atherosclerosis. Genotyping for one polymorphism does not allow obtaining a result with a high predictive value. The predictive value of the study increases when allelic variants of several functional groups of genes that control key processes in the development of atherosclerosis are included in the analysis.
Известен способ выявления предрасположенности к развитию атеросклероза, раскрытый в патенте RU 2367956 C1 (опубл. 20.09.2009). Способ осуществляют путем идентификации генетических полиморфных систем, методом вертикального электрофореза в нативных условиях в 7,5% полиакриламидном геле на электрофоретической ячейке PROTEAN II xi 2-D фирмы BIO-RAD с использованием генетического анализа. Однако предложенный способ не отличается высокой надежностью получаемых данных и практически не используется в медицинских целях.A known method for detecting a predisposition to the development of atherosclerosis, disclosed in patent RU 2367956 C1 (publ. 20.09.2009). The method is carried out by identification of genetic polymorphic systems by vertical electrophoresis in native conditions in 7.5% polyacrylamide gel on an electrophoretic cell PROTEAN II xi 2-D from BIO-RAD using genetic analysis. However, the proposed method is not distinguished by high reliability of the data obtained and is practically not used for medical purposes.
Известен способ диагностики предрасположенности к ишемической болезни сердца, заключающийся в сравнении количественного уровня повреждений митохондриальной ДНК в образце крови больного субъекта с аналогичным уровнем в образце крови контрольного субъекта, не страдающего атеросклерозом. В данном случае определяют количественную степень повреждений митохондриальной ДНК методом количественной ПЦР, где ДНК обрабатывают гликозилазой FAPY до указанного уровня ПЦР-амплификации RU 2243558C1 (опубл. 27.12.2004). Однако в известном решении исследуются только гены митохондриальной ДНК, и не учитывается роль генов ядерного генома в развитии атеросклероза, что недостаточно для обеспечения точности диагностики.A known method for diagnosing a predisposition to ischemic heart disease, which consists in comparing the quantitative level of damage to mitochondrial DNA in a blood sample of a sick subject with a similar level in a blood sample of a control subject not suffering from atherosclerosis. In this case, the quantitative degree of damage to mitochondrial DNA is determined by quantitative PCR, where DNA is treated with FAPY glycosylase to the specified level of PCR amplification RU 2243558C1 (publ. 27.12.2004). However, the known solution investigates only the genes of mitochondrial DNA, and does not take into account the role of the genes of the nuclear genome in the development of atherosclerosis, which is insufficient to ensure the accuracy of the diagnosis.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ выявления предрасположенности к заболеванию атеросклерозом на основе определения экспрессии генов, вовлеченных в накопление холестерина, раскрытый в патенте RU 2698092 С1 (опубл. 22.08.2019). Способ предусматривает измерение с помощью ПЦР-РВ уровня экспрессии генов, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, идентифицированных как IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15, и сравнения полученных данных с аналогичными значениями уровня экспрессии тех же генов здоровых людей.Closest to the claimed invention is a method for detecting a predisposition to atherosclerosis on the basis of determining the expression of genes involved in the accumulation of cholesterol, disclosed in patent RU 2698092 C1 (publ. 08/22/2019). The method involves measuring, using RT-PCR, the level of expression of genes closely related to the accumulation of cholesterol by human macrophages, identified as IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 and IL15, and comparing the obtained data with similar level values expression of the same genes in healthy people.
В способе-прототипе учитывается влияние только генов, связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, тогда как атеросклероз является многофакторным заболеванием, и развитие патологии определяется взаимодействием факторов нескольких функциональных групп. При этом в настоящем изобретении была показана значимость полиморфных различий по генам нескольких функциональных групп - липидного и углеводного обмена, а также генов окислительного и противовоспалительного гомеостаза.The prototype method takes into account the influence of only genes associated with the accumulation of cholesterol by human macrophages, while atherosclerosis is a multifactorial disease, and the development of pathology is determined by the interaction of factors of several functional groups. At the same time, the present invention showed the significance of polymorphic differences in genes of several functional groups - lipid and carbohydrate metabolism, as well as genes for oxidative and anti-inflammatory homeostasis.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Задачей настоящего изобретения является разработка способа прогнозирования высокого риска развития раннего атеросклероза на основании определения сочетания генетических вариантов Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro АРОЕ, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC, Ser447Ter LPL, APOC3 (C3238G), т.е. аллельных вариантов 5-ти генов нескольких функциональных групп - липидного и углеводного обмена, а также генов окислительного и противовоспалительного гомеостаза для диагностики раннего атеросклероза. Указанный способ обеспечивает повышение результативности указанного прогнозирования по сравнению с известным уровнем техники.The objective of the present invention is to develop a method for predicting a high risk of developing early atherosclerosis based on the determination of a combination of genetic variants Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro APOE, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC, Ser447Ter LPL, APOC3 (C3238G), i.e. allelic variants of 5 genes of several functional groups - lipid and carbohydrate metabolism, as well as genes of oxidative and anti-inflammatory homeostasis for the diagnosis of early atherosclerosis. The specified method provides an increase in the effectiveness of the specified prediction in comparison with the prior art.
Одним из преимуществ настоящего изобретения является увеличение эффективности, точности и достоверности выявления риска к развитию атеросклероза за счет определения генотипа по пяти аллельным вариантам генов ядерного генома Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro АРОЕ, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC, Ser447Ter LPL.One of the advantages of the present invention is an increase in the efficiency, accuracy and reliability of detecting the risk to the development of atherosclerosis by determining the genotype for five allelic variants of the genes of the nuclear genome Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro APOE, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC, Ser447Ter LPL.
В одном из вариантов настоящего изобретения заявленный способ прогнозирования высокого риска развития раннего атеросклероза включает определение аллельных вариантов, выбранных из группы, включающей Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro АРОЕ, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC и Ser447Ter LPL и при установлении наличия по меньшей мере трех из указанных вариантов прогнозируют высокий риск развития раннего атеросклероза.In one embodiment of the present invention, the claimed method for predicting a high risk of developing early atherosclerosis comprises identifying allelic variants selected from the group consisting of Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro APOE, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC and Ser447Ter LPL and determining the presence of at least three of these variants predict a high risk of developing early atherosclerosis.
В одном из вариантов настоящего изобретения прогнозируют высокий риск развития раннего атеросклероза при следующем сочетании аллельных вариантов:In one embodiment of the present invention, a high risk of developing early atherosclerosis is predicted with the following combination of allelic variants:
LIPC (G250A)xLPL(Ser447Ter)x PPARGC1A(Gly482Ser)LIPC (G250A) xLPL (Ser447Ter) x PPARGC1A (Gly482Ser)
LPL(Ser447Ter)xAPOE(Leu28Pro)xPPARGC1A(Gly482Ser)LPL (Ser447Ter) xAPOE (Leu28Pro) xPPARGC1A (Gly482Ser)
LPL(Ser447Ter)xPPARGC1A(Gly482Ser)xEDN(Lys198Asn)LPL (Ser447Ter) xPPARGC1A (Gly482Ser) xEDN (Lys198Asn)
LIPC (G250A)xLPL(Ser447Ter)xAPOE(Leu28Pro).LIPC (G250A) xLPL (Ser447Ter) xAPOE (Leu28Pro).
В одном из вариантов настоящего изобретения заявленный способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови мужчин и женщин, анализ генетических полиморфизмов генов липидного и углеводного обмена Leu28Pro (rs769452) АРОЕ, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL и генов окислительного и противовоспалительного гомеостаза Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lys198Asn EDN и прогнозирование высокого риска развития раннего атеросклероза при выявлении одного из четырех генотипов по комбинациям исследуемых генетических полиморфизмов:In one embodiment of the present invention, the claimed method comprises isolation of DNA from the peripheral venous blood of men and women, analysis of genetic polymorphisms of genes for lipid and carbohydrate metabolism Leu28Pro (rs769452) APOE, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL and genes of oxidative and anti-inflammatory homeostasis Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lys198Asn EDN and predicting a high risk of developing early atherosclerosis when one of the four genotypes is identified by combinations of the studied genetic polymorphisms:
LIPC (G250A)xLPL(Ser447Ter)xPPARGC1A(Gly482Ser)LIPC (G250A) xLPL (Ser447Ter) xPPARGC1A (Gly482Ser)
LPL(Ser447Ter)xAPOE(Leu28Pro)xPPARGC1A(Gly482Ser)LPL (Ser447Ter) xAPOE (Leu28Pro) xPPARGC1A (Gly482Ser)
LPL(Ser447Ter)xPPARGClA(Gly482Ser)xEDN(Lys198Asn)LPL (Ser447Ter) xPPARGClA (Gly482Ser) xEDN (Lys198Asn)
LIPC (G250A)xLPL(Ser447Ter)xAPOE(Leu28Pro).LIPC (G250A) xLPL (Ser447Ter) xAPOE (Leu28Pro).
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития раннего атеросклероза по наличию различных сочетаний генетических вариантов полиморфных локусов генов ядерного генома Leu28Pro (rs769452) АРОЕ, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL, Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lysl98Asn (rs5370) EDN.The novelty and inventive step lie in the fact that the prior art does not know the possibility of predicting the risk of early atherosclerosis by the presence of various combinations of genetic variants of polymorphic loci of the genes of the nuclear genome Leu28Pro (rs769452) APOE, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447TerL (rs328) , Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lysl98Asn (rs5370) EDN.
Краткое описание чертежейBrief Description of Drawings
На Фиг. 1 представлен пример электрофореграммы результатов амплификации после аллель-специфичной полимеразной цепной реакции.FIG. 1 shows an example of an electrophoretogram of the amplification results after allele-specific polymerase chain reaction.
На Фиг. 2 показаны результаты значимых трехлокусных сочетаний генов при раннем атеросклерозе, полученных при проведении MDR анализа. Ячейки темно-серого цвета - это генотипы высокого риска, ячейки светло-серого цвета - это генотипы более низкого риска, ячейки белого цвета - отсутствуют сочетания генотипов.FIG. 2 shows the results of significant trilocus gene combinations in early atherosclerosis obtained by MDR analysis. Dark gray cells are high risk genotypes, light gray cells are lower risk genotypes, white cells are no combinations of genotypes.
Осуществление изобретенияImplementation of the invention
Квалифицированному специалисту очевидно, что заявленный способ может быть осуществлен различными методиками, позволяющими установить наличие указанных аллельных вариантов в генетическом материале субъекта.It is obvious to a qualified specialist that the claimed method can be carried out by various methods, allowing to establish the presence of these allelic variants in the genetic material of the subject.
При сравнении с общеизвестными частотами указанных полиморфизмов было установлено, что у больных с ранним атеросклерозом они встречаются чаще, чем у нормальных людей.When compared with the well-known frequencies of these polymorphisms, it was found that they are more common in patients with early atherosclerosis than in normal people.
В одном из неограничивающих вариантов, способ осуществляют следующим образом.In one non-limiting embodiment, the method is carried out as follows.
У пациента делают забор крови и проводят исследование на наличие полиморфизмов Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro АРОЕ, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC, Ser447Ter LPL. При наличии четырех или более полиморфизмов делают заключение о возможном риске развития раннего атеросклероза.The patient is sampled and tested for the presence of polymorphisms Gly482Ser PPARGC1A, Leu28Pro APOE, Lys198Asn EDN, G-250A LIPC, Ser447Ter LPL. In the presence of four or more polymorphisms, a conclusion is made about the possible risk of developing early atherosclerosis.
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови мужчин и женщин на мембранных колонках с использованием набора реагентов ДНК (Qiagen, Германия).DNA is isolated from samples of peripheral venous blood of men and women on membrane columns using a DNA reagent kit (Qiagen, Germany).
Образцы лизируют в высокоденатурирующих условиях при комнатной температуре (15-25°С) в присутствии протеиназы К и буфера, которые в совокупности обеспечивают инактивацию нуклеаз. Добавить буфер АСВ, который позволяет скорректировать условия связывания для совместного выделения ДНК и РНК. Затем лизат переносят в колонку QIAamp Mini. Во время центрифугирования нуклеиновые кислоты адсорбируются кремнеземными мембранами, а примеси проходят через мембраны. Двухэтапная тщательная отмывка позволяет удалить оставшиеся примеси и ингибиторы ферментов, нуклеиновые кислоты элюируются в буфере AVE.Samples are lysed under highly denaturing conditions at room temperature (15-25 ° C) in the presence of proteinase K and buffer, which together provide nuclease inactivation. Add buffer ACB, which allows you to adjust the binding conditions for the joint isolation of DNA and RNA. The lysate is then transferred to a QIAamp Mini column. During centrifugation, nucleic acids are adsorbed to silica membranes and impurities pass through the membranes. A two-step thorough washing removes residual contaminants and enzyme inhibitors, and nucleic acids are eluted in Buffer AVE.
Основные этапы выделения ДНК: С помощью дозатора перенести 20 мкл протеиназы К в микроцентрифужную пробирку 2 мл. Добавить к протеиназе К 200 мкл крови. Добавить 100 мкл лизирующего буфера. Перемешать ее содержимое пульсационным способом. Выдержать смесь при температуре 20-25°С 15 мин. Кратковременно центрифугировать пробирку 2 мл. Добавить в образец 350 мкл буфера АСВ. Кратковременно центрифугировать пробирку 2 мл. Перенести лизат в колонку QIAamp Mini, помещенную в пробирку для сбора образцов 2 мл. Центрифугировать при 6000 × g (8000 об/мин) 1 мин. Поместить колонку QIAamp Mini в чистую пробирку. Открыть колонку QIAamp Mini и внесите в нее 600 мкл буфера AW1. Центрифугировать при 6000 × g (8000 об/мин) 1 мин. Поместить колонку QIAamp Mini в чистую пробирку для сбора образцов 2 мл и утилизируйте пробирку с фильтратом. Открыть колонку QIAamp Mini и внесите в нее 600 мкл буфера AW2. Центрифугировать при 6000 × g (8000 об/мин) 1 мин.Basic steps for DNA extraction: Transfer 20 μl of proteinase K into a 2 ml microcentrifuge tube using a pipette. Add 200 μl blood to proteinase K. Add 100 μl Lysis Buffer. Stir its contents in a pulsating manner. Maintain the mixture at a temperature of 20-25 ° С for 15 minutes. Centrifuge the 2 ml tube briefly. Add 350 μl of ACB buffer to the sample. Centrifuge the 2 ml tube briefly. Transfer the lysate to a QIAamp Mini column placed in a 2 ml collection tube. Centrifuge at 6000 × g (8000 rpm) for 1 min. Place the QIAamp Mini column in a clean tube. Open the QIAamp Mini column and add 600 μL Buffer AW1. Centrifuge at 6000 × g (8000 rpm) for 1 min. Place the QIAamp Mini column in a clean 2 ml collection tube and discard the tube with the filtrate. Open the QIAamp Mini column and add 600 μL Buffer AW2. Centrifuge at 6000 × g (8000 rpm) for 1 min.
Поместить колонку QIAamp Mini в чистую пробирку для сбора образцов 2 мл и утилизируйте пробирку с фильтратом. Центрифугировать (20 000 × g, 14 000 об/мин) 2 мин для высушивания мембраны. Поместить колонку QIAamp Mini в чистую микроцентирфужную пробирку 1,5 мл. Открыть колонку QIAamp Mini и нанести 50-150 мкл буфера AVE по центру мембраны. Выдержать при комнатной температуре (15-25°С) 1 мин. Центрифугировать на полной скорости (20 000 × g, 14 000 об/мин) 1 мин. Полученный супернатант использовать в качестве исследуемого образца ДНК.Place the QIAamp Mini column in a clean 2 ml collection tube and discard the tube with the filtrate. Centrifuge (20,000 xg, 14,000 rpm) 2 min to dry the membrane. Place the QIAamp Mini column in a clean 1.5 ml microcentre tube. Open the QIAamp Mini column and apply 50-150 µl of Buffer AVE to the center of the membrane. Keep at room temperature (15-25 ° С) for 1 min. Centrifuge at full speed (20,000 × g, 14,000 rpm) for 1 min. Use the resulting supernatant as a test DNA sample.
Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием наборов реагентов SNP. Анализ основан на одновременном проведении двух реакций амплификации с двумя парами аллель-специфичныхи праймеров. Одна пара праймеров комплементарна нормальному аллелю, вторая комплементарна полиморфному варианту гена. Данный анализ позволяет выявлять как гетерозиготное состояние полиморфных вариантов гена, так и гомозиготное.The isolated DNA is then subjected to polymerase chain reaction using SNP reagent kits. The analysis is based on the simultaneous carrying out of two amplification reactions with two pairs of allele-specific primers. One pair of primers is complementary to the normal allele, the second is complementary to the polymorphic variant of the gene. This analysis makes it possible to identify both the heterozygous state of the polymorphic variants of the gene and the homozygous one.
Ход работы:Working process:
Эксперимент проводится в стерильном боксе, все реагенты должны находиться в штативе со льдом. Реакционный мастер микс готовить в следующих пропорциях: Buf III 1x, MgCl2 3.5 mM, dNTPs 200 mM, SYBR Green 2x, ROX 0,3x, Taq Polymerase, MQ довести до 25 мкл для каждой пробы, предварительно учитывая прямой и обратные праймеры - по 1,25 мкл каждого на пробу и матрицу ДНК - 1 мкл.The experiment is carried out in a sterile box; all reagents should be kept in a rack with ice. Prepare the reaction master mix in the following proportions: Buf III 1x, MgCl 2 3.5 mM, dNTPs 200 mM, SYBR Green 2x, ROX 0.3x, Taq Polymerase, MQ bring up to 25 μl for each sample, after taking into account forward and reverse primers - each 1.25 μl each per sample and DNA matrix - 1 μl.
Перенести пробирки в прогретый до 9°С программируемый термостат и провести амплификацию по следующей программе.Transfer the tubes to a programmable thermostat warmed up to 9 ° C and carry out amplification according to the following program.
Далее ПЦР проводили по схеме: денатурация ДНК при 94°С в течение 5 мин, затем 35 циклов амплификации, включающей в себя денатурацию ДНК (94°С/30 секунд), отжиг праймеров (56°С/30 секунд для Leu28Pro, Lysl98Asn, G-250A, Ser447Ter, Gly482Ser) и элонгацию (синтез второй цепи) 72°С/3:30 мин, по окончании 35 циклов установить на заключительную элонгацию 72°С/7 мин.Then PCR was carried out according to the scheme: DNA denaturation at 94 ° C for 5 min, then 35 cycles of amplification, including DNA denaturation (94 ° C / 30 seconds), primer annealing (56 ° C / 30 seconds for Leu28Pro, Lysl98Asn, G-250A, Ser447Ter, Gly482Ser) and elongation (synthesis of the second chain) 72 ° C / 3: 30 min, at the end of 35 cycles set to the final elongation 72 ° C / 7 min.
Для каждого запуска амплификатора вместе с пробами ставить отрицательный контроль, по составу идентичный анализируемым пробам, ноFor each run of the thermocycler, together with the samples, put a negative control, which is identical in composition to the analyzed samples, but
вместо раствора ДНК использовать стерильную воду. Таким образом, при отсутствии амплификации в отрицательном контроле, исключить вывод об отсутствии контаминации остальных образцов чужеродными фрагментами ДНК.use sterile water instead of DNA solution. Thus, in the absence of amplification in the negative control, exclude the conclusion about the absence of contamination of the remaining samples with foreign DNA fragments.
После окончания амплификации провести анализ кривых флуоресценции по отдельным лункам в окне «Расчет» раздела «Анализ данных» и анализ распределения генотипов в окне «Аллельная дискриминация» согласно протоколу прибора. О наличии того или иного аллеля исследуемого локуса идентифицировать по росту флуоресценции соответствующих красителей SYBR и ROX. After the end of amplification, analyze the fluorescence curves for individual wells in the "Calculation" window of the "Data analysis" section and analyze the distribution of genotypes in the "Allelic discrimination" window according to the instrument protocol. The presence of one or another allele of the locus under study is identified by the increase in fluorescence of the corresponding dyes SYBR and ROX.
Детекция продуктов амплификацииDetection of amplification products
Горизонтальное электрофоретическое разделение использовать для количественной оценки выделенной ДНК в 1% агарозном геле, а также для количественной и качественной оценки продуктов амплификации в 1,5%-ном агарозном геле в присутствии бромистого этидия.Horizontal electrophoretic separation is used for quantitative assessment of isolated DNA in 1% agarose gel, as well as for quantitative and qualitative assessment of amplification products in 1.5% agarose gel in the presence of ethidium bromide.
Визуализацию геля производили с помощью гель-документирующей системы Molecular Imager® Gel Doc™ XR System (BioRad) при использовании ультрафиолетового фильтра. (BIO-RAD Power Supply model 500/200), электрофорезного аппарата (LKB 2013 miniphor Elektrophore.The gel was visualized with a Molecular Imager® Gel Doc ™ XR System (BioRad) using a UV filter. (BIO-RAD Power Supply model 500/200), electrophoresis apparatus (LKB 2013 miniphor Elektrophore.
Возможность использования предложенного способа для прогнозирования риска развития раннего атеросклероза подтверждает анализ результатов исследования. В нашем исследовании мы использовали сыворотку мужчин и женщин в возрасте от 29 до 79 лет, для изучения межгенного взаимодействия полиморфных вариантов генов липидного, углеводного обмена, факторов окислительного и противовоспалительного гомеостаза в развитии раннего и у жителей Ростовской области. Для сбора информации, на каждого пациента, врачом была заполнена анкета, в которой отмечали: возраст, пол, отсутствие клинических проявлений заболеваний атеросклеротического генеза, уровень артериального давления, для женщин - отсутствие или наличие менопаузы (спонтанной или хирургической), а также экзогенные факторы - курение.The possibility of using the proposed method to predict the risk of developing early atherosclerosis is confirmed by the analysis of the study results. In our study, we used the serum of men and women aged 29 to 79 years to study the intergenic interaction of polymorphic variants of genes for lipid, carbohydrate metabolism, factors of oxidative and anti-inflammatory homeostasis in the development of early and in residents of the Rostov region. To collect information, for each patient, the doctor filled out a questionnaire, in which they noted: age, gender, absence of clinical manifestations of diseases of atherosclerotic genesis, blood pressure level, for women - absence or presence of menopause (spontaneous or surgical), as well as exogenous factors - smoking.
Критериями исключения из исследования были: ненормальная анатомическая конфигурация шеи и мышц; выраженная извитость и/или глубина залегания сонных артерий, и/или необычные места артериальных ветвей; перенесенный инфаркт миокарда, инсульт, острые преходящие нарушения мозгового кровообращения в анамнезе; перемежающаяся хромота; реваскуляризация сонных, коронарных и периферических артерий.Exclusion criteria from the study were: abnormal anatomical configuration of the neck and muscles; pronounced tortuosity and / or depth of occurrence of the carotid arteries, and / or unusual places of arterial branches; suffered myocardial infarction, stroke, history of acute transient cerebrovascular accident; intermittent claudication; revascularization of the carotid, coronary and peripheral arteries.
Всем участникам исследования проводили забор крови из локтевой вены в вакуумные пробирки с ЭДТА. Наличие каротидного атеросклероза и степени его выраженности определяли при помощи триплексного сканирования экстракраниального отдела брахиоцефальных артерий с оценкой толщины комплекса интима-медиа по Шкале Gensini.All study participants underwent blood sampling from the cubital vein into vacuum tubes with EDTA. The presence of carotid atherosclerosis and the degree of its severity were determined using triplex scanning of the extracranial section of the brachiocephalic arteries with an assessment of the thickness of the intima-media complex according to the Gensini Scale.
Исследование выполнено на базе центра коллективного пользования «Высокие технологии ЮФУ», клинический материал и инструментальные исследования выполнены на базе кардиологического центра Ростовской областной клинической больницы, медицинского центра ООО «Наука».The study was carried out on the basis of the Center for Collective Use "High Technologies of the Southern Federal University", clinical material and instrumental studies were carried out on the basis of the Cardiology Center of the Rostov Regional Clinical Hospital, the medical center LLC "Science".
Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с риском развития раннего атеросклероза с помощью биоинформатического подхода - Multifactor Dimensionality Reduction (программа MDR, v. 1.1.0 www.epistasis.org/mdr.html) для моделирования геномных взаимодействий высокого порядка. Метод MDR специально разработан для изучения характера межгенных взаимодействий для популяционно-генетических исследований мультифакторных полигенных заболеваний, использующих относительно небольшие объемы выборок больных и здоровых.Analysis of associations of combinations of genetic variants with the risk of early atherosclerosis using the bioinformatic approach - Multifactor Dimensionality Reduction (MDR program, v. 1.1.0 www.epistasis.org/mdr.html) for modeling high-order genomic interactions. The MDR method was specially designed to study the nature of intergenic interactions for population genetic studies of multifactorial polygenic diseases using relatively small sample sizes of patients and healthy people.
В Таблице 2 показаны выявленные модели межгенного взаимодействия, полученные при проведении MDR анализа по полиморфным вариантам исследуемых генов липидного и углеводного обмена и генов окислительного и провоспалительного гомеостаза среди мужчин и женщин с атеросклеротическим поражением на ранней стадии.Table 2 shows the identified models of intergenic interaction obtained during MDR analysis for polymorphic variants of the studied genes of lipid and carbohydrate metabolism and genes of oxidative and pro-inflammatory homeostasis among men and women with atherosclerotic lesions at an early stage.
Как видно из представленных результатов при раннем атеросклерозе установлены статистически значимые трехлокусные модели взаимодействия генов LIPC, LPL, PPARGC1A (р=0,034), LPL,PPARGC1A, EDN1(p=0,039), LPL,AP0E,PPARGC1A (p=0,014), LIPC,LPL,APOE (p=0,038).As can be seen from the presented results in early atherosclerosis, statistically significant three-locus models of the interaction of the genes LIPC, LPL, PPARGC1A (p = 0.034), LPL, PPARGC1A, EDN1 (p = 0.039), LPL, AP0E, PPARGC1A (p = 0.014), LIPC, LPL, APOE (p = 0.038).
В первых трех моделях перекрестная проверка показала 10/10.In the first three models, the cross-validation was 10/10.
В таблице 3 и на Фиг. 2 показаны результаты сочетаний генотипов и перекрестной проверки межгенного взаимодействия при раннем атеросклерозе трехлокусной модели LIPC, LPL, PPARGC1A.Table 3 and FIG. 2 shows the results of combinations of genotypes and cross-checking of intergenic interactions in early atherosclerosis of the trilocus model LIPC, LPL, PPARGC1A.
Значимые синергитические связи полиморфизмов Gly482Ser гена PPARGC1A и G250A гена LIPC (3,78%), Leu28Pro гена АроЕ и Lys198Asn гена EDN1(3,46%) и менее выраженная связь Leu28Pro гена АроЕ и Gly482Ser гена PPARGC1A.Significant synergistic relationships between the Gly482Ser polymorphisms of the PPARGC1A gene and G250A of the LIPC gene (3.78%), Leu28Pro of the ApoE gene and Lys198Asn of the EDN1 gene (3.46%) and a less pronounced relationship between Leu28Pro of the ApoE gene and Gly482Ser of the PPARGC1 gene.
На основании полученных данных авторы настоящего изобретения установили, что следующие генетические полиморфизмы Leu28Pro (rs769452) АРОЕ, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL, Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lys198Asn (rs5370) EDN играют значимую роль в формировании генетической предрасположенности к высокому риску развития раннего атеросклероза. Сочетание полиморфных вариантовBased on the data obtained, the authors of the present invention found that the following genetic polymorphisms Leu28Pro (rs769452) APOE, G-250A (rs2070895) LIPC, Ser447Ter (rs328) LPL, Gly482Ser (rs8192678) PPARGC1A, Lys198Asn (rs5370) predisposition to a high risk of developing early atherosclerosis. Combination of polymorphic variants
LIPC (G250A) xLPL(Ser447Ter)x PPARGC1 A(Gly482Ser)LIPC (G250A) xLPL (Ser447Ter) x PPARGC1 A (Gly482Ser)
LPL(Ser447Ter)xAPOE(Leu28Pro)xPP ARGC1 A(Gly482Ser)LPL (Ser447Ter) xAPOE (Leu28Pro) xPP ARGC1 A (Gly482Ser)
LPL(Ser447Ter)xPPARGClA(Gly482Ser)xEDN(Lysl98Asn)LPL (Ser447Ter) xPPARGClA (Gly482Ser) xEDN (Lysl98Asn)
LIPC (G250A) xLPL(Ser447Ter)xAPOE(Leu28Pro).LIPC (G250A) xLPL (Ser447Ter) xAPOE (Leu28Pro).
ассоциированы с высоким риском развития раннего атеросклероза.are associated with a high risk of developing early atherosclerosis.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019145642A RU2752363C2 (en) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | Method for predicting high risk of early atherosclerosis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019145642A RU2752363C2 (en) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | Method for predicting high risk of early atherosclerosis |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019145642A3 RU2019145642A3 (en) | 2021-06-30 |
| RU2019145642A RU2019145642A (en) | 2021-06-30 |
| RU2752363C2 true RU2752363C2 (en) | 2021-07-26 |
Family
ID=76742286
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019145642A RU2752363C2 (en) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | Method for predicting high risk of early atherosclerosis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2752363C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2698092C1 (en) * | 2018-04-10 | 2019-08-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" | Method for determining predisposition to atherosclerosis disease based on determining expression of genes involved in accumulation of cholesterol |
| CN110205375A (en) * | 2019-06-26 | 2019-09-06 | 宁夏医科大学 | A kind of atherosclerosis diagnosis molecular marker and its application |
-
2019
- 2019-12-30 RU RU2019145642A patent/RU2752363C2/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2698092C1 (en) * | 2018-04-10 | 2019-08-22 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" | Method for determining predisposition to atherosclerosis disease based on determining expression of genes involved in accumulation of cholesterol |
| CN110205375A (en) * | 2019-06-26 | 2019-09-06 | 宁夏医科大学 | A kind of atherosclerosis diagnosis molecular marker and its application |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| А. В. Усатов, А. Е. Панич]. - Ростов-на-Дону; Таганрог: Издательство Южного федерального университета, 2017. - С.133. * |
| ДЕРЕВЯНЧУК Е.Г. и др. Исследование ассоциации полиморфизмов генов с развитием атеросклероза в ростовской популяции. Генетика - фундаментальная основа инноваций в медицине и селекции: материалы Научно-практической конференции с международным участием (Ростов-на-Дону, 2-4 ноября 2017 г.) / Южный федеральный университет; [гл. ред.: Т. П. Шкурат, * |
| НЕСКУБИНА О.М. Межгенные взаимодействия при раннем атеросклерозе. Генетика - фундаментальная основа инноваций в медицине и селекции: материалы Научно-практической конференции с международным участием (Ростов-на-Дону, 2-4 ноября 2017 г.) / Южный федеральный университет; [гл. ред.: Т. П. Шкурат, А. В. Усатов, А. Е. Панич]. - Ростов-на-Дону; Таганрог: Издательство Южного федерального университета, 2017. - С.141. * |
| НЕСКУБИНА О.М. Межгенные взаимодействия при раннем атеросклерозе. Генетика - фундаментальная основа инноваций в медицине и селекции: материалы Научно-практической конференции с международным участием (Ростов-на-Дону, 2-4 ноября 2017 г.) / Южный федеральный университет; [гл. ред.: Т. П. Шкурат, А. В. Усатов, А. Е. Панич]. - Ростов-на-Дону; Таганрог: Издательство Южного федерального университета, 2017. - С.141. ДЕРЕВЯНЧУК Е.Г. и др. Исследование ассоциации полиморфизмов генов с развитием атеросклероза в ростовской популяции. Генетика - фундаментальная основа инноваций в медицине и селекции: материалы Научно-практической конференции с международным участием (Ростов-на-Дону, 2-4 ноября 2017 г.) / Южный федеральный университет; [гл. ред.: Т. П. Шкурат, А. В. Усатов, А. Е. Панич]. - Ростов-на-Дону; Таганрог: Издательство Южного федерального университета, 2017. - С.133. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2019145642A3 (en) | 2021-06-30 |
| RU2019145642A (en) | 2021-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Low et al. | Inflammatory bowel disease is linked to 19p13 and associated with ICAM-1 | |
| US20100184050A1 (en) | Diagnosis and treatment of inflammatory bowel disease in the puerto rican population | |
| RU2287158C1 (en) | Method for predicting the dvelopment for hypertonic disease according to genetic risk factors | |
| Alharbi et al. | Screening for genetic mutations in LDLR gene with familial hypercholesterolemia patients in the Saudi population | |
| WO2011104023A1 (en) | Genetic marker for the diagnosis of dementia with lewy bodies | |
| KR101979633B1 (en) | SNP markers for metabolic syndrome and use thereof | |
| Asif et al. | TG haplotype in the LRP8 is associated with myocardial infarction in south Indian population | |
| RU2752363C2 (en) | Method for predicting high risk of early atherosclerosis | |
| JP6494356B2 (en) | Nonalcoholic fatty liver disease and / or nonalcoholic steatohepatitis risk and / or severity risk determination method, and oligonucleotide kit for determination | |
| CN113667665B (en) | Familial hypercholesterolemia related gene, detection kit and application thereof | |
| Azizi et al. | Association between NOS3 gene G894T polymorphism and late-onset Alzheimer disease in a sample from Iran | |
| JP2018157786A (en) | Method for detecting hereditary risk of cerebrovascular disorder | |
| Dewi et al. | Association polymorphism of guanine nucleotide–binding protein β3 subunit (GNB3) C825T and insertion/deletion of the angiotensin-converting enzyme (ACE) gene with peripartum cardiomyopathy | |
| WO2012002529A1 (en) | Method for determination of risk of behcet's disease | |
| WO2015168252A1 (en) | Mitochondrial dna copy number as a predictor of frailty, cardiovascular disease, diabetes, and all-cause mortality | |
| Purkait et al. | Renin-angiotensin-aldosterone system gene polymorphisms in Type 2 diabetic patients among the Mewari population of Rajasthan | |
| WO2015037681A1 (en) | Test method for evaluating the risk of anti-thyroid drug-induced agranulocytosis, and evaluation kit | |
| RU2738975C1 (en) | Method for liability to development of atherosclerosis in middle-aged men | |
| JP7046401B1 (en) | How to determine the genetic predisposition of sensitive skin | |
| Rashad et al. | Association of apolipoprotein A1 gene polymorphism and coronary heart diseases in patients with type 2 diabetes mellitus | |
| RU2423521C1 (en) | Biochip for mutation detection in galactose-1-phosphate-uridyl transferase gene causing hepatic involvement in newborns | |
| Dawood et al. | Determination the Relationship between (KLF14 rs972283) Genotype and Type 2 Diabetes in a Sample of Iraqi Patients | |
| Khin Sandar | Association Between Angiotensinogen Gene M235T Polymorphism and Plasma Angiotensinogen Level in Essential Hypertension | |
| JP4859088B2 (en) | Method and kit for detecting human WNT5B gene polymorphism associated with type 2 diabetes | |
| JP4825956B2 (en) | Determination of the risk of airway mucosal inflammatory disease |