RU2745801C2 - Одноцепочечные белки-агонисты рецептора cd40 - Google Patents
Одноцепочечные белки-агонисты рецептора cd40 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2745801C2 RU2745801C2 RU2017141727A RU2017141727A RU2745801C2 RU 2745801 C2 RU2745801 C2 RU 2745801C2 RU 2017141727 A RU2017141727 A RU 2017141727A RU 2017141727 A RU2017141727 A RU 2017141727A RU 2745801 C2 RU2745801 C2 RU 2745801C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- cd40l
- receptor
- seq
- cell
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 180
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 176
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 title claims abstract description 114
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 title claims abstract description 114
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims abstract description 163
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims abstract description 142
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 claims abstract description 118
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims abstract description 116
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 99
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 80
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 80
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 15
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 172
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 79
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 73
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 61
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 59
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 39
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 35
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 28
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 20
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 20
- 101100059511 Homo sapiens CD40LG gene Proteins 0.000 claims description 18
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 18
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 18
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 229940076376 protein agonist Drugs 0.000 claims description 15
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 claims description 14
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 12
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 11
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 11
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 7
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 6
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 claims description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 5
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 claims description 4
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000002980 germ line cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 45
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 33
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 description 33
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 33
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 33
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 27
- 101710173438 Late L2 mu core protein Proteins 0.000 description 25
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 25
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 22
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 21
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 21
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 20
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 20
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 18
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 18
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 18
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 18
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 18
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 17
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 17
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 15
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 12
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 11
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 10
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 9
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 9
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 9
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 9
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 9
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 8
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 7
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 6
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 6
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 6
- 101710165474 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Proteins 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 6
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 5
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 5
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 5
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 5
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 5
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 5
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 5
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 5
- -1 without limitation Chemical compound 0.000 description 5
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 4
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 4
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 4
- PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N Cladribine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(Cl)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 4
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 4
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 4
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 4
- UUVWYPNAQBNQJQ-UHFFFAOYSA-N hexamethylmelamine Chemical compound CN(C)C1=NC(N(C)C)=NC(N(C)C)=N1 UUVWYPNAQBNQJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- GURKHSYORGJETM-WAQYZQTGSA-N irinotecan hydrochloride (anhydrous) Chemical compound Cl.C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 GURKHSYORGJETM-WAQYZQTGSA-N 0.000 description 4
- SHGAZHPCJJPHSC-XFYACQKRSA-N isotretinoin Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-XFYACQKRSA-N 0.000 description 4
- RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N leuprolide acetate Chemical compound CC(O)=O.CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 4
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 4
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 description 3
- VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 6alpha-methylprednisolone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 0.000 description 3
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 3
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 3
- ZBNZXTGUTAYRHI-UHFFFAOYSA-N Dasatinib Chemical compound C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1Cl ZBNZXTGUTAYRHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000724228 Enterobacteria phage RB69 Species 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 239000002067 L01XE06 - Dasatinib Substances 0.000 description 3
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 description 3
- 101800000442 Protein X2 Proteins 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 3
- CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N Temsirolimus Chemical compound C1C[C@@H](OC(=O)C(C)(CO)CO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N 0.000 description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 3
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 3
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 3
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 3
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 3
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YLMAHDNUQAMNNX-UHFFFAOYSA-N imatinib methanesulfonate Chemical compound CS(O)(=O)=O.C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 YLMAHDNUQAMNNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229960005280 isotretinoin Drugs 0.000 description 3
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N megestrol acetate Chemical compound C1=C(C)C2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N 0.000 description 3
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 3
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- XWXYUMMDTVBTOU-UHFFFAOYSA-N nilutamide Chemical compound O=C1C(C)(C)NC(=O)N1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 XWXYUMMDTVBTOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 3
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 3
- JXLYSJRDGCGARV-CFWMRBGOSA-N vinblastine Chemical compound C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-CFWMRBGOSA-N 0.000 description 3
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BMKDZUISNHGIBY-ZETCQYMHSA-N (+)-dexrazoxane Chemical compound C([C@H](C)N1CC(=O)NC(=O)C1)N1CC(=O)NC(=O)C1 BMKDZUISNHGIBY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- 102100025573 1-alkyl-2-acetylglycerophosphocholine esterase Human genes 0.000 description 2
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 2
- XAUDJQYHKZQPEU-KVQBGUIXSA-N 5-aza-2'-deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 XAUDJQYHKZQPEU-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SJVQHLPISAIATJ-ZDUSSCGKSA-N 8-chloro-2-phenyl-3-[(1S)-1-(7H-purin-6-ylamino)ethyl]-1-isoquinolinone Chemical compound C1([C@@H](NC=2C=3N=CNC=3N=CN=2)C)=CC2=CC=CC(Cl)=C2C(=O)N1C1=CC=CC=C1 SJVQHLPISAIATJ-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N Aromasine Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 description 2
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 2
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 2
- VWUXBMIQPBEWFH-WCCTWKNTSA-N Fulvestrant Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3[C@H](CCCCCCCCCS(=O)CCCC(F)(F)C(F)(F)F)CC2=C1 VWUXBMIQPBEWFH-WCCTWKNTSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010069236 Goserelin Proteins 0.000 description 2
- BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N Goserelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](COC(C)(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NNC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000005411 L01XE02 - Gefitinib Substances 0.000 description 2
- 239000005551 L01XE03 - Erlotinib Substances 0.000 description 2
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 2
- 239000002136 L01XE07 - Lapatinib Substances 0.000 description 2
- 239000005536 L01XE08 - Nilotinib Substances 0.000 description 2
- 239000003798 L01XE11 - Pazopanib Substances 0.000 description 2
- 239000002177 L01XE27 - Ibrutinib Substances 0.000 description 2
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 2
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011785 NMRI mouse Methods 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-UHFFFAOYSA-N Panrexin Chemical compound OC(=O)C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- 108010045306 T134 peptide Proteins 0.000 description 2
- NAVMQTYZDKMPEU-UHFFFAOYSA-N Targretin Chemical compound CC1=CC(C(CCC2(C)C)(C)C)=C2C=C1C(=C)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 NAVMQTYZDKMPEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 2
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 2
- 239000004191 allura red AC Substances 0.000 description 2
- 229960000473 altretamine Drugs 0.000 description 2
- JKOQGQFVAUAYPM-UHFFFAOYSA-N amifostine Chemical compound NCCCNCCSP(O)(O)=O JKOQGQFVAUAYPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003437 aminoglutethimide Drugs 0.000 description 2
- ROBVIMPUHSLWNV-UHFFFAOYSA-N aminoglutethimide Chemical compound C=1C=C(N)C=CC=1C1(CC)CCC(=O)NC1=O ROBVIMPUHSLWNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OTBXOEAOVRKTNQ-UHFFFAOYSA-N anagrelide Chemical compound N1=C2NC(=O)CN2CC2=C(Cl)C(Cl)=CC=C21 OTBXOEAOVRKTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOLCXWYRSKYTSP-UHFFFAOYSA-N arsenic trioxide Inorganic materials O1[As]2O[As]1O2 GOLCXWYRSKYTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 2
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002436 cladribine Drugs 0.000 description 2
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 description 2
- BGSOJVFOEQLVMH-VWUMJDOOSA-N cortisol phosphate Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COP(O)(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 BGSOJVFOEQLVMH-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 2
- 229960002448 dasatinib Drugs 0.000 description 2
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960000605 dexrazoxane Drugs 0.000 description 2
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 229950004949 duvelisib Drugs 0.000 description 2
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 2
- LIQODXNTTZAGID-OCBXBXKTSA-N etoposide phosphate Chemical compound COC1=C(OP(O)(O)=O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 LIQODXNTTZAGID-OCBXBXKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000752 etoposide phosphate Drugs 0.000 description 2
- ODKNJVUHOIMIIZ-RRKCRQDMSA-N floxuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 ODKNJVUHOIMIIZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 2
- YLRFCQOZQXIBAB-RBZZARIASA-N fluoxymesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1CC[C@](C)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O YLRFCQOZQXIBAB-RBZZARIASA-N 0.000 description 2
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229940069042 gamunex Drugs 0.000 description 2
- 229960002584 gefitinib Drugs 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 2
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000004120 green S Substances 0.000 description 2
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229960001507 ibrutinib Drugs 0.000 description 2
- XYFPWWZEPKGCCK-GOSISDBHSA-N ibrutinib Chemical compound C1=2C(N)=NC=NC=2N([C@H]2CN(CCC2)C(=O)C=C)N=C1C(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 XYFPWWZEPKGCCK-GOSISDBHSA-N 0.000 description 2
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- FABUFPQFXZVHFB-PVYNADRNSA-N ixabepilone Chemical compound C/C([C@@H]1C[C@@H]2O[C@]2(C)CCC[C@@H]([C@@H]([C@@H](C)C(=O)C(C)(C)[C@@H](O)CC(=O)N1)O)C)=C\C1=CSC(C)=N1 FABUFPQFXZVHFB-PVYNADRNSA-N 0.000 description 2
- BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N lapatinib Chemical compound O1C(CNCCS(=O)(=O)C)=CC=C1C1=CC=C(N=CN=C2NC=3C=C(Cl)C(OCC=4C=C(F)C=CC=4)=CC=3)C2=C1 BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 2
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 2
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 2
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 2
- 210000004296 naive t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229950004847 navitoclax Drugs 0.000 description 2
- JLYAXFNOILIKPP-KXQOOQHDSA-N navitoclax Chemical compound C([C@@H](NC1=CC=C(C=C1S(=O)(=O)C(F)(F)F)S(=O)(=O)NC(=O)C1=CC=C(C=C1)N1CCN(CC1)CC1=C(CCC(C1)(C)C)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CSC=1C=CC=CC=1)CN1CCOCC1 JLYAXFNOILIKPP-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 2
- HHZIURLSWUIHRB-UHFFFAOYSA-N nilotinib Chemical compound C1=NC(C)=CN1C1=CC(NC(=O)C=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)=CC(C(F)(F)F)=C1 HHZIURLSWUIHRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002653 nilutamide Drugs 0.000 description 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 2
- 108010046821 oprelvekin Proteins 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N pamidronate Chemical compound NCCC(O)(P(O)(O)=O)P(O)(O)=O WRUUGTRCQOWXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 2
- CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N pazopanib Chemical compound C1=CC2=C(C)N(C)N=C2C=C1N(C)C(N=1)=CC=NC=1NC1=CC=C(C)C(S(N)(=O)=O)=C1 CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010044644 pegfilgrastim Proteins 0.000 description 2
- WBXPDJSOTKVWSJ-ZDUSSCGKSA-L pemetrexed(2-) Chemical compound C=1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2C=1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C([O-])=O)C=C1 WBXPDJSOTKVWSJ-ZDUSSCGKSA-L 0.000 description 2
- FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N pentostatin Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC[C@H]2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- VJZLQIPZNBPASX-OJJGEMKLSA-L prednisolone sodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COP([O-])([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VJZLQIPZNBPASX-OJJGEMKLSA-L 0.000 description 2
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 2
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N raloxifene Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(C(=O)C=2C=CC(OCCN3CCCCC3)=CC=2)C2=CC=C(O)C=C2S1 GZUITABIAKMVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- 108010017584 romiplostim Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 2
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960000235 temsirolimus Drugs 0.000 description 2
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 2
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 2
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 2
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 2
- 229960001183 venetoclax Drugs 0.000 description 2
- LQBVNQSMGBZMKD-UHFFFAOYSA-N venetoclax Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C=1CC(C)(C)CCC=1CN(CC1)CCN1C(C=C1OC=2C=C3C=CNC3=NC=2)=CC=C1C(=O)NS(=O)(=O)C(C=C1[N+]([O-])=O)=CC=C1NCC1CCOCC1 LQBVNQSMGBZMKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDQAABAKXDWYSZ-PNYVAJAMSA-N vinblastine sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.C([C@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 KDQAABAKXDWYSZ-PNYVAJAMSA-N 0.000 description 2
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 2
- WAEXFXRVDQXREF-UHFFFAOYSA-N vorinostat Chemical compound ONC(=O)CCCCCCC(=O)NC1=CC=CC=C1 WAEXFXRVDQXREF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 2
- XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N zoledronic acid Chemical compound OP(=O)(O)C(P(O)(O)=O)(O)CN1C=CN=C1 XRASPMIURGNCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JARGNLJYKBUKSJ-KGZKBUQUSA-N (2r)-2-amino-5-[[(2r)-1-(carboxymethylamino)-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid;hydrobromide Chemical compound Br.OC(=O)[C@H](N)CCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCC(O)=O JARGNLJYKBUKSJ-KGZKBUQUSA-N 0.000 description 1
- NAALWFYYHHJEFQ-ZASNTINBSA-N (2s,5r,6r)-6-[[(2r)-2-[[6-[4-[bis(2-hydroxyethyl)sulfamoyl]phenyl]-2-oxo-1h-pyridine-3-carbonyl]amino]-2-(4-hydroxyphenyl)acetyl]amino]-3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Chemical compound N([C@@H](C(=O)N[C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)C(C(N1)=O)=CC=C1C1=CC=C(S(=O)(=O)N(CCO)CCO)C=C1 NAALWFYYHHJEFQ-ZASNTINBSA-N 0.000 description 1
- VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N (3e)-3-(1h-imidazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C/C1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N (8S)-3-(2-deoxy-beta-D-erythro-pentofuranosyl)-3,6,7,8-tetrahydroimidazo[4,5-d][1,3]diazepin-8-ol Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NCC2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 1
- LKJPYSCBVHEWIU-KRWDZBQOSA-N (R)-bicalutamide Chemical compound C([C@@](O)(C)C(=O)NC=1C=C(C(C#N)=CC=1)C(F)(F)F)S(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LKJPYSCBVHEWIU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- HJTAZXHBEBIQQX-UHFFFAOYSA-N 1,5-bis(chloromethyl)naphthalene Chemical compound C1=CC=C2C(CCl)=CC=CC2=C1CCl HJTAZXHBEBIQQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHRSUDSXCMQTMA-UHFFFAOYSA-N 11,17-dihydroxy-17-(2-hydroxyacetyl)-6,10,13-trimethyl-7,8,9,11,12,14,15,16-octahydro-6h-cyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound CC12C=CC(=O)C=C1C(C)CC1C2C(O)CC2(C)C(O)(C(=O)CO)CCC21 VHRSUDSXCMQTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMIZONYLXCOHEF-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=NC=CN1 NMIZONYLXCOHEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- WUIABRMSWOKTOF-OYALTWQYSA-N 3-[[2-[2-[2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3s,4r)-4-[[(2s,3r)-2-[[6-amino-2-[(1s)-3-amino-1-[[(2s)-2,3-diamino-3-oxopropyl]amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[(2r,3s,4s,5s,6s)-3-[(2r,3s,4s,5r,6r)-4-carbamoyloxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)ox Chemical compound OS([O-])(=O)=O.N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1NC=NC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C WUIABRMSWOKTOF-OYALTWQYSA-N 0.000 description 1
- ZHSKUOZOLHMKEA-UHFFFAOYSA-N 4-[5-[bis(2-chloroethyl)amino]-1-methylbenzimidazol-2-yl]butanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.ClCCN(CCCl)C1=CC=C2N(C)C(CCCC(O)=O)=NC2=C1 ZHSKUOZOLHMKEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTQGHKVYLQBJLO-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenesulfonate;(4-methyl-1-oxo-1-phenylmethoxypentan-2-yl)azanium Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1.CC(C)CC(N)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 QTQGHKVYLQBJLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 5-Azacytidine Natural products O=C1N=C(N)N=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-ZVCIMWCZSA-N 9-cis-retinoic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(\C)/C=C/C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-ZVCIMWCZSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010012934 Albumin-Bound Paclitaxel Proteins 0.000 description 1
- 102100022014 Angiopoietin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 101100452478 Arabidopsis thaliana DHAD gene Proteins 0.000 description 1
- 101001084702 Arabidopsis thaliana Histone H2B.10 Proteins 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 229940123189 CD40 agonist Drugs 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000006332 Choriocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021906 Cyclin-O Human genes 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010019673 Darbepoetin alfa Proteins 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUGHGUXZJWAIAS-QQYBVWGSSA-N Daunorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 GUGHGUXZJWAIAS-QQYBVWGSSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074604 Epoetin Alfa Proteins 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 101710189104 Fibritin Proteins 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N Folinic acid Natural products NC1=NC2=C(N(C=O)C(CNc3ccc(cc3)C(=O)NC(CCC(=O)O)CC(=O)O)CN2)C(=O)N1 MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220592904 Gamma-aminobutyric acid receptor-associated protein-like 2_C94A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220592894 Gamma-aminobutyric acid receptor-associated protein-like 2_C94S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 101150046249 Havcr2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000753291 Homo sapiens Angiopoietin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000897441 Homo sapiens Cyclin-O Proteins 0.000 description 1
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 1
- BGSOJVFOEQLVMH-UHFFFAOYSA-N Hydrocortisone phosphate Natural products O=C1CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)COP(O)(O)=O)C4C3CCC2=C1 BGSOJVFOEQLVMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102100030694 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- XOGTZOOQQBDUSI-UHFFFAOYSA-M Mesna Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCS XOGTZOOQQBDUSI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M Methylprednisolone sodium succinate Chemical compound [Na+].C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)COC(=O)CCC([O-])=O)CC[C@H]21 FQISKWAFAHGMGT-SGJOWKDISA-M 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- LKJPYSCBVHEWIU-UHFFFAOYSA-N N-[4-cyano-3-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[(4-fluorophenyl)sulfonyl]-2-hydroxy-2-methylpropanamide Chemical compound C=1C=C(C#N)C(C(F)(F)F)=CC=1NC(=O)C(O)(C)CS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LKJPYSCBVHEWIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005890 Neuroma Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000417 Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102000004020 Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091006014 Strep-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- IWEQQRMGNVVKQW-OQKDUQJOSA-N Toremifene citrate Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.C1=CC(OCCN(C)C)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\CCCl)C1=CC=CC=C1 IWEQQRMGNVVKQW-OQKDUQJOSA-N 0.000 description 1
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 230000028654 Type IV pili-dependent aggregation Effects 0.000 description 1
- FPVRUILUEYSIMD-RPRRAYFGSA-N [(8s,9r,10s,11s,13s,14s,16r,17r)-9-fluoro-11-hydroxy-17-(2-hydroxyacetyl)-10,13,16-trimethyl-3-oxo-6,7,8,11,12,14,15,16-octahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(OC(C)=O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O FPVRUILUEYSIMD-RPRRAYFGSA-N 0.000 description 1
- 229940028652 abraxane Drugs 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- XQEJFZYLWPSJOV-XJQYZYIXSA-N acetic acid;(4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosa Chemical compound CC(O)=O.C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 XQEJFZYLWPSJOV-XJQYZYIXSA-N 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 229940064305 adrucil Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940042992 afinitor Drugs 0.000 description 1
- 229940060238 agrylin Drugs 0.000 description 1
- 229940060236 ala-cort Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960005310 aldesleukin Drugs 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229940110282 alimta Drugs 0.000 description 1
- 229960001445 alitretinoin Drugs 0.000 description 1
- 229940098174 alkeran Drugs 0.000 description 1
- 229960001097 amifostine Drugs 0.000 description 1
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001694 anagrelide Drugs 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003092 anti-cytokine Effects 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002682 anti-psoriatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 208000034615 apoptosis-related disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 229940115115 aranesp Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 229940078010 arimidex Drugs 0.000 description 1
- 229940087620 aromasin Drugs 0.000 description 1
- 229940014583 arranon Drugs 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- 229960002707 bendamustine Drugs 0.000 description 1
- YTKUWDBFDASYHO-UHFFFAOYSA-N bendamustine Chemical compound ClCCN(CCCl)C1=CC=C2N(C)C(CCCC(O)=O)=NC2=C1 YTKUWDBFDASYHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002938 bexarotene Drugs 0.000 description 1
- 229960000997 bicalutamide Drugs 0.000 description 1
- 229940108502 bicnu Drugs 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 229940112133 busulfex Drugs 0.000 description 1
- KVUAALJSMIVURS-ZEDZUCNESA-L calcium folinate Chemical compound [Ca+2].C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C([O-])=O)C=C1 KVUAALJSMIVURS-ZEDZUCNESA-L 0.000 description 1
- 235000008207 calcium folinate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011687 calcium folinate Substances 0.000 description 1
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 1
- 229940088954 camptosar Drugs 0.000 description 1
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 description 1
- 229940001981 carac Drugs 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 229940097647 casodex Drugs 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- ALEXXDVDDISNDU-JZYPGELDSA-N cortisol 21-acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O ALEXXDVDDISNDU-JZYPGELDSA-N 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 229940088547 cosmegen Drugs 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 239000000409 cytokine receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 239000000430 cytokine receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 229940059359 dacogen Drugs 0.000 description 1
- 229960003109 daunorubicin hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229940107841 daunoxome Drugs 0.000 description 1
- 229940026692 decadron Drugs 0.000 description 1
- 229960003603 decitabine Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229940027008 deltasone Drugs 0.000 description 1
- 108010017271 denileukin diftitox Proteins 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 229940070968 depocyt Drugs 0.000 description 1
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 229960003657 dexamethasone acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960002344 dexamethasone sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- PLCQGRYPOISRTQ-FCJDYXGNSA-L dexamethasone sodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)COP([O-])([O-])=O)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O PLCQGRYPOISRTQ-FCJDYXGNSA-L 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 229940115080 doxil Drugs 0.000 description 1
- 229940075117 droxia Drugs 0.000 description 1
- GVGYEFKIHJTNQZ-RFQIPJPRSA-N ecgonine benzoate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@H]2CC[C@@H](C1)N2C)C(O)=O)C(=O)C1=CC=CC=C1 GVGYEFKIHJTNQZ-RFQIPJPRSA-N 0.000 description 1
- 229940099302 efudex Drugs 0.000 description 1
- 229940087477 ellence Drugs 0.000 description 1
- 229940120655 eloxatin Drugs 0.000 description 1
- 229940073038 elspar Drugs 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 229940000733 emcyt Drugs 0.000 description 1
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 229940082789 erbitux Drugs 0.000 description 1
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 229960001842 estramustine Drugs 0.000 description 1
- FRPJXPJMRWBBIH-RBRWEJTLSA-N estramustine Chemical compound ClCCN(CCCl)C(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 FRPJXPJMRWBBIH-RBRWEJTLSA-N 0.000 description 1
- IIUMCNJTGSMNRO-VVSKJQCTSA-L estramustine sodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].ClCCN(CCCl)C(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)OP([O-])([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 IIUMCNJTGSMNRO-VVSKJQCTSA-L 0.000 description 1
- ICZPANLPYRTVSF-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-8-(1,1,2,2,2-pentafluoroethyl)-3h-1-benzazepine-4-carboxylate Chemical compound N1=C(N)CC(C(=O)OCC)=CC2=CC=C(C(F)(F)C(F)(F)F)C=C21 ICZPANLPYRTVSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098617 ethyol Drugs 0.000 description 1
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 description 1
- 229940085363 evista Drugs 0.000 description 1
- 229960000255 exemestane Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 229940043168 fareston Drugs 0.000 description 1
- 229940087861 faslodex Drugs 0.000 description 1
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 229940087476 femara Drugs 0.000 description 1
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229960000961 floxuridine Drugs 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- 229960005304 fludarabine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229940064300 fluoroplex Drugs 0.000 description 1
- 229960001751 fluoxymesterone Drugs 0.000 description 1
- 229960002074 flutamide Drugs 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229960002258 fulvestrant Drugs 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 108010044804 gamma-glutamyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 229940020967 gemzar Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030414 genetic transfer Effects 0.000 description 1
- 208000003884 gestational trophoblastic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940080856 gleevec Drugs 0.000 description 1
- 229940084910 gliadel Drugs 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229960002913 goserelin Drugs 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 229940083461 halotestin Drugs 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 229940003183 hexalen Drugs 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229940088013 hycamtin Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229940096120 hydrea Drugs 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 229950000785 hydrocortisone phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229960004204 hydrocortisone sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229960001401 hydrocortisone sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- VWQWXZAWFPZJDA-CGVGKPPMSA-N hydrocortisone succinate Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COC(=O)CCC(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VWQWXZAWFPZJDA-CGVGKPPMSA-N 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 229940099279 idamycin Drugs 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940090411 ifex Drugs 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 1
- 229960003685 imatinib mesylate Drugs 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 229940084651 iressa Drugs 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960002014 ixabepilone Drugs 0.000 description 1
- 229940111707 ixempra Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960004891 lapatinib Drugs 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 1
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 1
- 229960002293 leucovorin calcium Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229940063725 leukeran Drugs 0.000 description 1
- 229940087875 leukine Drugs 0.000 description 1
- GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N leuprolide Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010078259 luprolide acetate gel depot Proteins 0.000 description 1
- 229940087857 lupron Drugs 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000005001 male reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940087732 matulane Drugs 0.000 description 1
- 229940087412 maxidex Drugs 0.000 description 1
- QZIQJVCYUQZDIR-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine hydrochloride Chemical compound Cl.ClCCN(C)CCCl QZIQJVCYUQZDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002868 mechlorethamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229940064748 medrol Drugs 0.000 description 1
- 229940090004 megace Drugs 0.000 description 1
- 229960001786 megestrol Drugs 0.000 description 1
- 229960004296 megestrol acetate Drugs 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 229940101533 mesnex Drugs 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- DASQOOZCTWOQPA-GXKRWWSZSA-L methotrexate disodium Chemical compound [Na+].[Na+].C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C([O-])=O)C=C1 DASQOOZCTWOQPA-GXKRWWSZSA-L 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940087004 mustargen Drugs 0.000 description 1
- 229940090009 myleran Drugs 0.000 description 1
- 239000003158 myorelaxant agent Substances 0.000 description 1
- LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(z)-(5-fluoro-2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940086322 navelbine Drugs 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- IXOXBSCIXZEQEQ-UHTZMRCNSA-N nelarabine Chemical compound C1=NC=2C(OC)=NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O IXOXBSCIXZEQEQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229940071846 neulasta Drugs 0.000 description 1
- 229940082926 neumega Drugs 0.000 description 1
- 229940029345 neupogen Drugs 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003176 neuroleptic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000701 neuroleptic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000842 neuromuscular blocking agent Substances 0.000 description 1
- 229940080607 nexavar Drugs 0.000 description 1
- 229940099637 nilandron Drugs 0.000 description 1
- 229960001346 nilotinib Drugs 0.000 description 1
- 229940109551 nipent Drugs 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 description 1
- 229960001494 octreotide acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 229940100027 ontak Drugs 0.000 description 1
- 229960001840 oprelvekin Drugs 0.000 description 1
- 229940003515 orapred Drugs 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940046231 pamidronate Drugs 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940096763 panretin Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000639 pazopanib Drugs 0.000 description 1
- 229940097097 pediapred Drugs 0.000 description 1
- HQQSBEDKMRHYME-UHFFFAOYSA-N pefloxacin mesylate Chemical compound [H+].CS([O-])(=O)=O.C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCN(C)CC1 HQQSBEDKMRHYME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001373 pegfilgrastim Drugs 0.000 description 1
- 108010092851 peginterferon alfa-2b Proteins 0.000 description 1
- 229940106366 pegintron Drugs 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229960005079 pemetrexed Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960002340 pentostatin Drugs 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000004526 pharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940063179 platinol Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229940096111 prelone Drugs 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- 229940029359 procrit Drugs 0.000 description 1
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229940117820 purinethol Drugs 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 229960004622 raloxifene Drugs 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 229940120975 revlimid Drugs 0.000 description 1
- 229940061969 rheumatrex Drugs 0.000 description 1
- 229960004262 romiplostim Drugs 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229940072272 sandostatin Drugs 0.000 description 1
- 108700014314 sandostatinLAR Proteins 0.000 description 1
- 229960002530 sargramostim Drugs 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 1
- WUWDLXZGHZSWQZ-WQLSENKSSA-N semaxanib Chemical compound N1C(C)=CC(C)=C1\C=C/1C2=CC=CC=C2NC\1=O WUWDLXZGHZSWQZ-WQLSENKSSA-N 0.000 description 1
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 229940088542 solu-cortef Drugs 0.000 description 1
- 229940087854 solu-medrol Drugs 0.000 description 1
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 1
- 229940068117 sprycel Drugs 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229940034785 sutent Drugs 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940095374 tabloid Drugs 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 229940120982 tarceva Drugs 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940099419 targretin Drugs 0.000 description 1
- 229940069905 tasigna Drugs 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-XAZOAEDWSA-N taxol® Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(CC(C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3(C21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-XAZOAEDWSA-N 0.000 description 1
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 description 1
- 229940061353 temodar Drugs 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N temsirolimus Natural products C1CC(O)C(OC)CC1CC(C)C1OC(=O)C2CCCCN2C(=O)C(=O)C(O)(O2)C(C)CCC2CC(OC)C(C)=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C(OC)C(O)C(C)=CC(C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 description 1
- 229940034915 thalomid Drugs 0.000 description 1
- 229940110675 theracys Drugs 0.000 description 1
- 229940022511 therapeutic cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940035307 toposar Drugs 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- 229960005026 toremifene Drugs 0.000 description 1
- XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N toremifene Chemical compound C1=CC(OCCN(C)C)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\CCCl)C1=CC=CC=C1 XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 1
- 229940100411 torisel Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229940066958 treanda Drugs 0.000 description 1
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 1
- 229940111528 trexall Drugs 0.000 description 1
- 229940086984 trisenox Drugs 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 229940094060 tykerb Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000003741 urothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229940099039 velcade Drugs 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
- 229940061389 viadur Drugs 0.000 description 1
- 229940065658 vidaza Drugs 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- 229960004982 vinblastine sulfate Drugs 0.000 description 1
- AQTQHPDCURKLKT-JKDPCDLQSA-N vincristine sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C=O)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 AQTQHPDCURKLKT-JKDPCDLQSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-IELIFDKJSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-IELIFDKJSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- CILBMBUYJCWATM-PYGJLNRPSA-N vinorelbine ditartrate Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC CILBMBUYJCWATM-PYGJLNRPSA-N 0.000 description 1
- 229960002166 vinorelbine tartrate Drugs 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-IWWDSPBFSA-N vinorelbinetartrate Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC(C23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-IWWDSPBFSA-N 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 229960000237 vorinostat Drugs 0.000 description 1
- 229940069559 votrient Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000013389 whole blood assay Methods 0.000 description 1
- 229940053867 xeloda Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940053890 zanosar Drugs 0.000 description 1
- 229940033942 zoladex Drugs 0.000 description 1
- 229960004276 zoledronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940061261 zolinza Drugs 0.000 description 1
- 229940002005 zometa Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/22—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a Strep-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/35—Fusion polypeptide containing a fusion for enhanced stability/folding during expression, e.g. fusions with chaperones or thioredoxin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153 or CD154
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к белку-агонисту рецептора CD40, и может быть использовано в медицине. Полученный белок-агонист рецептора CD40, содержащий два одноцепочечных слитых полипептида, содержащих три растворимых домена CD40L слитых с Fc-фрагментом антитела, может быть использован для эффективного лечения или диагностики заболеваний, ассоциированных с CD40L. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 10 ил., 12 табл., 11 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
В настоящем изобретении представлены специфические белки-агонисты рецептора CD40, содержащие три растворимых домена CD40L и один Fc-фрагмент, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие белки-агонисты рецептора CD40, и их применение. Белки-агонисты рецептора CD40 практически не подвержены агрегации и пригодны для терапевтического, диагностического и/или исследовательского применения.
Уровень техники
Известно, что для эффективного связывания и активации рецептора требуется тримеризация цитокинов надсемейства TNF (TNFSF). Однако тримерные комплексы цитокинов надсемейства TNF трудно получить из рекомбинантных мономерных единиц.
В WO 01/49866 и WO 02/09055 раскрыты рекомбинантные слитые белки, содержащие цитокин TNF и мультимеризационный компонент, в частности, белок из семейства белков C1q или коллектин. Однако недостатком этих слитых белков является то, что тримеризационный домен обычно имеет большую молекулярную массу и/или что тримеризация не очень эффективна.
В Schneider et al. (J Exp Med 187 (1989), 1205-1213) описано, что тримеры цитокинов TNF стабилизируются расположенными с N-конца стабилизирующими мотивами. У CD95L стабилизация тримера рецептор-связывающего домена предположительно вызывается N-концевыми аминокислотными участками, которые располагаются возле цитоплазматической мембраны.
В Shiraishi et al. (Biochem Biophys Res Commun 322 (2004), 197-202) описано, что рецептор-связывающий домен CD95L может стабилизироваться с помощью N-концевых искусственных α-спиральных мотивов типа закрученной спирали (лейциновой молнии). Однако оказалось, что трудно предсказать ориентацию полипептидных цепей относительно друг друга, например, это параллельная или антипараллельная ориентация. К тому же трудно определить оптимальное количество гептадных повторов в мотиве молнии типа закрученной спирали. Кроме того, структуры типа закрученной спирали имеют тенденцию к образованию макромолекулярных агрегатов при изменении рН и/или ионной силы.
В WO 01/25277 описаны одноцепочечные олигомерные полипептиды, которые связываются с внеклеточным лиганд-связывающим доменом клеточного рецептора, причем такой полипептид содержит по меньшей мере три сайта связывания с рецептором, из которых по крайней мере один способен связываться с лиганд-связывающим доменом клеточного рецептора и по меньшей мере один не способен эффективно связываться с лиганд-связывающим доменом клеточного рецептора, поэтому одноцепочечные олигомерные полипептиды способны связываться с рецептором, но неспособны его активировать. К примеру, мономеры получают из цитокиновых лигандов семейства TNF, в частности, из TNF-α.
В WO 2005/103077 описаны одноцепочечные слитые полипептиды, содержащие по меньшей мере три мономера лиганда из семейства TNF и по меньшей мере два пептидных линкера, которые связывают мономеры лиганда из семейства TNF друг с другом. Однако недавние эксперименты показали, что эти одноцепочечные слитые полипептиды проявляют нежелательную агрегацию.
В WO 2010/010051 описаны одноцепочечные слитые полипептиды, содержащие три растворимых домена цитокинов семейства TNF и по меньшей мере два пептидных линкера. Описанные слитые полипептиды практически не подвержены агрегации.
Недавние исследования показали, что F(ab′)2-фрагменты mAb против CD40, которые в настоящее время изучаются в клинике, не являются агонистами без дальнейшего сшивания (см. Vonderheide R.H. and M.J. Glennie (2013). "Agonistic CD40 antibodies and cancer therapy". Clin Cancer Res. 19(5): 1035-1043.
В этой области существует потребность в новых агонистах рецептора CD40, проявляющих высокую биологическую активность независимо от перекрестной сшивки Fc-γ-R in vivo, высокую стабильность и позволяющих их эффективное получение рекомбинантными методами.
Сущность изобретения
Настоящим изобретением предусмотрены специфические белки-агонисты рецептора CD40, которые имитируют взаимодействие CD40:CD40L in vivo, проявляют слабое протеолитическое расщепление и продленный период полужизни in vivo.
Белки-агонисты рецептора CD40 по настоящему изобретению обычно включают: (i) первый растворимый домен цитокина CD40L; (ii) первый пептидный линкер; (iii) второй растворимый домен CD40L; (iv) второй пептидный линкер; (v) третий растворимый домен CD40L; (vi) третий пептидный линкер (например, шарнирный линкер) и (vii) Fc-фрагмент антитела.
В одном воплощении Fc-фрагмент (vi) антитела располагается N-терминально к первому домену CD40L (i) и/или C-терминально к третьему домену CD40L (v). В другом воплощении Fc-фрагмент антитела расположен C-терминально к третьему домену CD40L (v). В одном воплощении полипептид практически не подвержен агрегации. В другом воплощении второй и/или третий растворимый домен CD40L является N-терминально укороченным доменом, который необязательно содержит мутации в аминокислотной последовательности.
В одном воплощении по меньшей мере один из растворимых доменов CD40L, в частности, по меньшей мере один из растворимых доменов CD40L (iii) и (v), является растворимым доменом CD40L с N-концевой последовательностью, которая начинается с аминокислоты Gln121 или Ile122 CD40L человека и в которой Gln121 может быть заменен нейтральной аминокислотой, например, Ser или Gly. В другом воплощении по меньшей мере один из растворимых доменов CD40L, в частности, по меньшей мере один из растворимых доменов CD40L (iii) и (v), является растворимым доменом CD40L с N-концевой последовательностью, выбранной из (a) Gln121-Ile122 и (b) (Gly/Ser)121-Ile122. В одном воплощении растворимый домен CD40L заканчивается аминокислотой Leu261 в CD40L человека и/или необязательно содержит одну или несколько мутаций в положениях E129, A130, S132, K133, T134, E142, Y145, Y146, C178, C194, R200, F201, C218, Q220, N240. В одном воплощении растворимые домены CD40L (i), (iii) и (v) включают аминокислоты Gln121-Leu261 из CD40L человека в соответствии с SEQ ID NO: 1.
В одном воплощении первый и второй пептидный линкер (ii) и (iv) независимо имеют длину в 3-8 аминокислот, в частности, длину в 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот и предпочтительно являются глицин/сериновыми линкерами, необязательно содержащими остаток аспарагина, который может быть гликозилирован. В одном воплощении первый и второй пептидный линкер (ii) и (iv) состоят из аминокислотной последовательности по SEQ ID NO: 2. В другом воплощении полипептид дополнительно содержит N-концевой домен сигнального пептида, например, по SEQ ID NO: 17, который может содержать сайт расщепления протеазой и/или дополнительно содержит С-концевой элемент, который может включать и/или соединяться с доменом распознавания/очистки, например, Strep-тегом, прикрепленным к сериновому линкеру по SEQ ID NO: 18.
В одном воплощении Fc-фрагмент (vii) антитела слит с растворимым доменом CD40L (i) и/или (v) через шарнирный линкер, предпочтительно по SEQ ID NO: 16. В другом воплощении Fc-фрагмент (vii) антитела состоит из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 13 или 14.
В одном воплощении одноцепочечный слитый полипептид настоящего изобретения включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 и 25-35.
В одном воплощении настоящим изобретением предусмотрен белковый агонист рецептора CD40, содержащий два одноцепочечных слитых полипептида, каждый из которых имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 27. В одном воплощении эти два полипептида ковалентно связаны тремя межцепочечными дисульфидными связями, образующимися между остатками цистеина 453, 459 и 462 у каждого полипептида.
В одном воплощении один или несколько остатков аспарагина в положениях 147 и 296 зрелого полипептида по SEQ ID NO: 27, 28, 29, 30, 32 или 34 являются N-гликозилированными. В другом воплощении остатки аспарагина в обоих положениях 147 и 296 этих полипептидов являются N-гликозилированными.
В одном воплощении полипептид/полипептиды подвергаются дальнейшей посттрансляционной модификации. В другом воплощении посттрансляционная модификация включает превращение N-концевого глутамина в пироглутамат.
В другом аспекте настоящим изобретением предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая описанный здесь белок-агонист рецептора CD40 и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей и/или адъювантов.
В другом аспекте настоящим изобретением предусмотрена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующей белок-агонист рецептора CD40. В одном воплощении настоящим изобретением предусмотрен экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты. В другом воплощении настоящим изобретением предусмотрена клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты. В следующем воплощении клетка является эукариотической клеткой. В другом воплощении клетка является клеткой млекопитающих. В другом воплощении клетка представлена клеткой яичников китайского хомячка (CHO). В других воплощениях клетка выбрана из группы, состоящей из клеток CHO-DBX11, CHO-DG44, CHO-S и CHO-K1. В других воплощениях клетка выбрана из группы, состоящей из клеток Vero, BHK, HeLa, COS, MDCK, HEK-293, NIH-3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT20, T47D, NS0, CRL7030, HsS78Bst, PER.C6, SP2/0-Agl4 и гибридомы.
В другом аспекте настоящим изобретением предусмотрен способ лечения лиц, страдающих связанными с CD40L заболеваниями, причем способ включает введение им эффективного количества белка-агониста рецептора CD40. В одном воплощении белок-агонист рецептора CD40 вводится сам по себе. В другом воплощении белок-агонист рецептора CD40 вводится до, одновременно или после введения второго средства. В другом воплощении заболевание входит в группу, содержащую: опухоли, инфекционные заболевания, воспалительные заболевания, метаболические заболевания, аутоиммунные заболевания, дегенеративные заболевания, заболевания, связанные с апоптозом, и отторжение трансплантатов. В одном воплощении опухоли представляют собой твердые опухоли. В одном воплощении опухоли входят в группу раковых заболеваний, состоящую из саркомы, рака пищевода и рака желудка. В другом воплощении опухоли возникают при саркоме Юинга или фибросаркоме. В другом воплощении опухоли входят в группу раковых заболеваний, состоящую из немелкоклеточной карциномы легких (NSCLC), рака поджелудочной железы, колоректального рака, рака молочной железы, рака яичников, рака головы и шеи и мелкоклеточного рака легких (SCLC). В другом воплощении опухоли представляют собой лимфатические опухоли. В одном воплощении опухоли представляют собой гематологические опухоли. В другом воплощении опухоли возникают при неходжкинской лимфоме, лейкемии, острой лимфобластной лейкемии (ALL), острой миелоидной лейкемии (AML), B-клеточной лимфоме, лимфоме Беркитта, хронической миелоцитарной лейкемии (CML), хронической лимфоцитарной лейкемии (CLL) или волосистоклеточной лейкемии. В другом воплощении аутоиммунные заболевания представлены ревматоидными заболеваниями, артритными заболеваниями либо ревматоидными и артритными заболеваниями. В следующем воплощении заболевание представлено ревматоидным артритом. В другом воплощении дегенеративные заболевания представлены нейродегенеративными заболеваниями. В следующем воплощении нейродегенеративное заболевание представлено рассеянным склерозом.
В одном воплощении второе средство представляет собой средство химиотерапии, радиотерапии или биологическое средство. В одном воплощении второе средство выбирают из группы, состоящей из дувелисиба, ибрутиниба, навитоклакса и венетоклакса. В другом воплощении второе средство представлено апоптотическим средством. В одном воплощении второе апоптотическое средство выбирают из группы, состоящей из бортезомиба, азацитидина, дазатиниба и гефитиниба. В одном предпочтительном воплощении раскрытые здесь фармацевтические композиции вводятся пациентам внутривенно или подкожно. В других воплощениях раскрытые здесь фармацевтические композиции вводятся пациентам перорально, парентерально, внутримышечно, внутрисуставно, интрабронхиально, интраабдоминально, интракапсулярно, интракартилагинально, внутриполостно, интрацелиально, интрацеребеллярно, интрацеребровентрикулярно, интраколикально, интрацервикально, внутрижелудочно, внутрипеченочно, интрамиокардиально, интраостеально, интрапельвикально, интраперикардиально, интраперитониально, интраплеврально, интрапростатически, внутрилегочно, интраректально, внутрипочечно, интраретинально, интраспинально, интрасиновиально, интраторакально, внутриматочно, внутрипузырно, болюсом, вагинально, ректально, буккально, подъязычно, интраназально или трансдермально.
В одном воплощении белок-агонист рецептора CD40 вводится в виде однократного болюса. В другом воплощении белок-агонист рецептора CD40 может вводиться в виде нескольких дробных доз. Белок-агонист рецептора CD40 можно вводить в дозе 0,1-100 мг/кг. В одном воплощении белок-агонист рецептора CD40 можно вводить в дозе, выбранной из группы, состоящей из: 0,1-0,5, 0,1-1, 0,1-10, 0,1-20, 0,1-50, 0,1-75, 1-10, 1-15, 1-7,5, 1,25-15, 1,25-7,5, 2,5-7,5, 2,5-15, 5-15, 5-7,5, 1-20, 1-50, 7-75, 1-100, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-50, 5-75, 10-20, 10-50, 10-75 и 10-100 мг/кг. В других воплощениях белок-агонист рецептора CD40 присутствует в фармацевтических композициях в количестве 0,1-100 мг/мл. В одном воплощении белок-агонист рецептора CD40 присутствует в фармацевтических композициях в количестве, выбранном из группы, состоящей из: 0,1-0,5, 0,1-1, 0,1-10, 0,1-20, 0,1-50, 0,1-75, 1-10, 1-20, 1-50, 1-75, 1-100, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-50, 5-75, 10-20, 10-50, 10-75 или 10-100 мг/мл. В других воплощениях субъектам вводится терапевтически эффективное количество белка-агониста рецептора CD40. В другом воплощении субъектам вводится профилактически эффективное количество белка-агониста рецептора CD40.
Краткое описание фигур
Фиг. 1. Доменная структура одноцепочечного слитого полипептида, содержащего три домена CD40L. I., II., III. - растворимые домены CD40L.
Фиг. 2. Схематическое представление общей структуры CD40L.
■ ■ ■ Клеточная мембрана, N-конец располагается внутри клетки,
1. антипараллельная β-складка рецептор-связывающего домена (RBD),
2. интерфейс между RBD и клеточной мембраной,
3. сайт расщепления протеазой.
Фиг. 3. Одноцепочечный слитый полипептид, содержащий дополнительный Fab-фрагмент антитела.
Фиг. 4. Димеризация двух слитых по С-концам полипептидов scFc через три дисульфидных мостика.
Фиг. 5. Хроматограммы при аналитической SEC гексавалентных слитых белков scCD40L-RBD-FC: белка A, белка B и белка C.
Фиг. 6. Гель-электрофорез в SDS-PAGE экспрессированных белков A, B и C в невосстановительных и восстановительных условиях. Дорожка 1: белок A, невосстановительный; 2: белок A, восстановительный; 3: маркеры молекулярного веса; 4: белок B, невосстановительный; 5: белок B, восстановительный; 6: холостая; 7, белок C, невосстановительный; 8: белок C, восстановительный.
Фиг. 7. Экспрессирующие CD40 клетки Ramos B инкубировали с белком X (c), белком A (d), белком B (e) или белком C (f), а активность связывания представлена в единицах флуоресценции. (a) только клетки; (b) только клетки, инкубированные с флуоресцентно меченым антителом.
Фиг. 8. Экспрессирующие CD40 клетки Ramos B инкубировали с белком X при 1 мкг/мл (b), белком X при 10 мкг/мл (c), белком A при 1 мкг/мл (d) или белком A при 10 мкг/мл (e), а активность связывания представлена по экспрессии CD86, нормированной по (а), который не инкубировался с агонистами рецептора CD40.
Фиг. 9. Инкубировали 2 мл крови с белком X при 1 мкг/мл (b), белком X при 50 мкг/мл (c), белком A при 1 мкг/мл (d) или белком A при 50 мкг/мл (e). Определяли содержание CD83-положительных клеток и нормировали по контрольному образцу (а), который не инкубировался с агонистами рецептора CD40.
Фиг. 10. Схематическое представление гексавалентного одноцепочечного слитого белка-агониста рецептора CD40 по изобретению. Углеводы (5), присутствующие на участках внутренней поверхности CH2, в норме стерически прикрывают субдомен СН2 (2) от протеаз при “переходе к открытой Fc-конформации”, при этом восстанавливаются шарнирные межцепочечные дисульфидные связи (4) и разрушается ковалентная связь между цепями. Это способствует диссоциации СН2 и открывает участки внутренней поверхности и верхний шарнирный лизин K223 (6) к воздействию протеаз. Ассоциация димеров на “открытой стадии” не нарушается из-за высокого сродства доменов CH3 (3) друг к другу. (1) scCD40L-RBD; (2) домен CH2; (3) домен CH3; (4) шарнирные цистеины (слева: окисленные в дисульфидные мостики; справа: восстановленные до свободных тиолов); (5) углеводы в CH2, присоединенные в положении N297 (нумерация EU); (6) верхний шарнирный лизин (K223).
Раскрытие сущности изобретения
Авторы изобретения обнаружили, что при слиянии одноцепочечного рецептор-связывающего домена CD40L с происходящим из антител димеризационным доменом получается гексавалентный агонист рецептора CD40, обладающий высокой биологической активностью в сочетании с хорошей стабильностью. Соответственно, предусмотрен одноцепочечный слитый полипептид, содержащий по меньшей мере три растворимых домена CD40L, соединенных двумя пептидными линкерами, и димеризационный домен антител в N-концевом и/или C-концевом положении.
Предпочтительно одноцепочечный слитый полипептид не подвержен агрегации. Термин “не подвержен агрегации” означает содержание мономера в препарате ≥ 50%, предпочтительно ≥ 70% и более предпочтительно ≥ 90%. Соотношение между содержанием мономера и содержанием агрегатов можно определить путем изучения степени образования агрегатов методом эксклюзионной хроматографии (SEC). Стабильность в отношении агрегации можно определить методом SEC после определенного периода времени, например, от нескольких дней до нескольких недель или месяцев при различных условиях хранения, например, при 4°C или 25°C. Для классификации слитого белка как практически не подверженного агрегации предпочтительно содержание “мономера” должно быть таким, как определено выше, по прошествии времени в несколько дней, например, 10 дней, более предпочтительно после нескольких недель, например, 2, 3 или 4 недель, и наиболее предпочтительно после нескольких месяцев, например, 2 или 3 месяцев хранения при 4°C или 25°C. Что касается определения “мономера” в случае Fc-слитых белков, то сборка двух полипептидных цепей управляется Fc-частью, а функциональная единица образовавшегося собранного белка состоит из двух цепей. Эта единица определяется как “мономер” в случае Fc-слитых белков независимо от того, что они представляет собой димеризованные одноцепочечные слитые полипептиды.
Одноцепочечный слитый полипептид может содержать дополнительные домены, которые могут располагаться на N- и/или C-концах. Примерами дополнительных слитых доменов являются, например, N-концевой домен сигнального пептида, который может содержать сайт расщепления протеазой, или C-концевой элемент, который может включать и/или соединяться с доменом распознавания/очистки. В соответствии с предпочтительным воплощением, слитый полипептид содержит Strep-тег на С-конце, который пришит через линкер. Типичный Strep-тег, включающий короткий сериновый линкер, представлен в SEQ ID NO: 18.
Белок-агонист рецептора CD40 по настоящему изобретению содержит три растворимых домена, происходящих из CD40L. Предпочтительно эти растворимые домены происходят из CD40L млекопитающих, в особенности человека, включая их аллельные варианты и/или производные. Растворимые домены включают внеклеточную часть CD40L, включая рецептор-связывающий домен без мембранных доменов. Как и другие белки из надсемейства TNF, CD40L прикрепляется к мембране через N-концевую часть из 15-30 аминокислот, так называемый стебелек. Стебелек способствует тримеризации и обеспечивает определенное расстояние до клеточной мембраны. Однако стебелек не входит в состав рецептор-связывающего домена (RBD).
Важно отметить, что RBD характеризуется определенной локализацией своих N- и C-концевых аминокислот. Данные аминокислоты являются непосредственно смежными и располагаются центрально к оси тримера. Первые N-концевые аминокислоты RBD образуют антипараллельную бета-цепь с С-концевыми аминокислотами RBD (фиг. 2).
Таким образом, антипараллельная бета-цепь RBD образует интерфейс с клеточной мембраной, который связан с ней и заякорен в клеточной мембране через аминокислоты стебелька. Очень предпочтительно, чтобы растворимые домены CD40L белка-агониста рецептора CD40 содержали рецептор-связывающий домен CD40L, лишенный каких-либо аминокислот из стебелька. В противном случае потребуется длинный линкер, соединяющий С-конец одного из растворимых доменов с N-концом следующего растворимого домена, чтобы компенсировать N-концевой стебелек следующего растворимого домена, что могло бы привести к неустойчивости и/или образованию агрегатов.
Дополнительным преимуществом таких растворимых доменов является то, что N- и C-концевые аминокислоты RBD недоступны для любых антител против лекарств. Предпочтительно одноцепочечный слитый полипептид способен образовывать упорядоченную тримерную структуру, содержащую по меньшей мере один функциональный сайт связывания соответствующего рецептора для CD40L.
Белок-агонист рецептора CD40 содержит три функциональных сайта связывания рецептора CD40, то есть аминокислотные последовательности, способные образовывать комплекс с рецептором CD40. Таким образом, растворимые домены способны связываться с соответствующим рецептором CD40. В одном воплощении по меньшей мере один из растворимых доменов способен активировать рецептор, что может повлиять на апоптотическую и/или пролиферативную активность. В другом воплощении один или несколько растворимых доменов не обладают способностью к активации рецептора.
Растворимые домены CD40L могут происходить из CD40L человека, как показано в SEQ ID NO: 1. Предпочтительно растворимые домены CD40L происходят из CD40L человека, в частности, начиная с аминокислоты 121 или 122, и предпочтительно включают в себя аминокислоты 121-261 или 122-261 по SEQ ID NO: 1. Необязательно аминокислота Gln121 по SEQ ID NO: 1 может быть заменена незаряженной аминокислотой, например, Ser или Gly.
Таблица 1. Последовательность белка CD40L дикого типа человека
SEQ ID NO: | Последовательность |
1 | MIETYNQTSPRSAATGLPISMKIFMYLLTVFLITQMIGSALFAVYLHRRLDKIEDERNLHEDFVFMKTIQRCNTGERSLSLLNCEEIKSQFEGFVKDIMLNKEETKKENSFEMQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL |
Как указано выше, растворимые домены CD40L могут включать последовательности дикого типа, приведенные в SEQ ID NO: 1. Однако следует отметить, что в один или несколько из этих растворимых доменов можно вводить мутации, например, мутации, которые изменяют (например, повышают или уменьшают) связывающие свойства растворимых доменов. В одном воплощении выбирают такие растворимые домены, которые не могут связываться с соответствующим рецептором цитокинов.
В следующем воплощении изобретения растворимый домен CD40L (i) содержит мутантный CD40L или его рецептор-связывающий домен, что приводит к снижению сродства и/или уменьшению активации рецептора CD40.
Связывание и/или активность мутанта можно определить, к примеру, методами, описанными в An et al. (2011, J Biol Chem. 286(13): 11226-11235); Singh et al. (1998, Protein Sci. 7(5): 1124-1135); Kim et al., J Biol Chem. 286(13): 11226-11235; или Singh et al. (1998, Protein Sci. 7(5): 1124-1135).
Мутации можно получить любым способом, известным специалистам. Замены могут затрагивать по меньшей мере одну аминокислоту в CD40L, например, CD40L человека (например, SEQ ID NO: 1), или в его рецептор-связывающем домене, как описано здесь. При этом предпочтительные замены затрагивают по меньшей мере одну из следующих аминокислот в CD40L человека по SEQ ID NO: 1: E129, S132, T134, E142, Y145, Y146, R200, F201, Q220, как-то E129G, S132E, S132N, T134E, T134N, E142G, E142S, Y145S, Y146S, R200S, Q220E и Q220S; в особенности E129G и E142G.
Замены аминокислот могут повлиять на связывание и/или активность CD40L, например, CD40L человека, на связывание с CD40 либо на индуцированные CD40 сигналы. Связывание и/или активность CD40 могут подвергаться положительному влиянию, то есть в сторону усиления, большей избирательности или большей специфичности связывания и/или большей активации рецептора. С другой стороны, связывание и/или активность CD40 могут подвергаться отрицательному влиянию, то есть в сторону ослабления, меньшей избирательности или меньшей специфичности связывания и/или меньшей активации или отсутствия активации рецептора.
Примеры мутаций в CD40L с заменами аминокислот по изобретению, влияющими на связывание и/или активацию CD40, приведены, к примеру, на фиг. 1 в работе An et al. (см. выше).
Так, одно из воплощений составляет белок-агонист рецептора CD40, как описано здесь, у которого по меньшей мере один из растворимых доменов включает мутантный CD40L или его рецептор-связывающий домен, который связывает и/или активирует CD40 в меньшей степени, чем CD40L дикого типа.
Другие примеры мутаций CD40L, вызывающих снижение индуцированной CD40L агрегации рецепторов и/или снижение сигнализации, представлены S132E и T134E.
Одно из воплощений составляет белок-агонист рецептора CD40, как описано здесь, у которого в участок последовательности, определяемый E129-S136, введен по меньшей мере один искусственный консенсусный сайт N-гликозилирования, что ведет к снижению агрегации рецепторов и/или снижению сигнализации. Примеры мутаций CD40L, ведущих к появлению искусственного консенсусного сайта N-гликозилирования в этом участке, представлены E129N, A130N, S132N, K133N и T134N.
В другом воплощении изобретения один или несколько растворимых доменов (i), (iii) и (v) CD40L могут включать мутации CD40L или его рецептор-связывающего домена, ведущие к уменьшению аутоагрегации и/или продлению стабильности in vivo. При этом предпочтительные замены затрагивают по меньшей мере одну из следующих аминокислот CD40L человека по SEQ ID NO: 1: C178, C194, C218, N240; как-то C178(A,S,G), C194(A,S,G), F201(G,S,T,D), C218(A,S,G) и N240(E,S,D,T). Мутации у каждого домена CD40L могут быть одинаковыми или разными.
Одноцепочечная слитая молекула настоящего изобретения включает три растворимых домена CD40L, а именно компоненты (i), (iii) и (v). Устойчивость одноцепочечного слитого полипептида CD40L к агрегации повышается, если второй и/или третий растворимый домен CD40L будет укороченным с N-конца и необязательно содержит мутации аминокислотной последовательности. Так, предпочтительно и второй, и третий растворимый домен CD40L являются укороченными с N-конца и необязательно содержат мутации аминокислотной последовательности в N-концевых участках, предпочтительно в пределах первых пяти аминокислот с N-конца растворимого домена CD40L. Эти мутации могут включать замены основных аминокислот на нейтральные аминокислоты, в частности на серин или глицин.
В противоположность этому, выбор первого растворимого домена CD40L не столь важен. При этом можно использовать растворимый домен, имеющий полноразмерную N-концевую последовательность. Однако следует отметить, что и первый растворимый домен CD40L тоже может иметь укороченную с N-конца и необязательно мутантную последовательность.
В следующем предпочтительном воплощении настоящего изобретения растворимые домены (i), (iii) и (v) CD40L представлены растворимыми доменами CD40L человека. Первый растворимый домен (i) CD40L может быть выбран из нативных, укороченных и/или мутантных последовательностей. Так, первый растворимый домен (i) CD40L может иметь N-концевую последовательность, которая начинается с аминокислоты Gln121 или Ile122 в CD40L человека, при этом Gln121 может быть заменен на нейтральную аминокислоту, например, на Ser или Gly. Второй и третий растворимые домены (iii) и (v) CD40L имеют укороченную с N-конца последовательность, которая предпочтительно начинается с аминокислоты Gln120 или Ile122 в CD40L человека, при этом Gln121 может быть заменен на другую аминокислоту, например, Ser или Gly.
Предпочтительно N-концевая последовательность растворимых доменов (iii) и (v) CD40L выбирается из:
(a) Gln121 или Ile122,
(b) (Gly/Ser)121.
Растворимые домены CD40L предпочтительно заканчиваются аминокислотой Leu261 в CD40L человека. В некоторых воплощениях такие домены CD40L могут включать внутренние мутации, как описано выше.
Компоненты (ii) и (iv) белка-агониста рецептора CD40 представлены пептидными линкерами, которые располагаются между компонентами (i) и (iii) либо (iii) и (v), соответственно. Гибкие линкеры имеют длину в 3-8 аминокислот, в особенности 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот. Линкерами предпочтительно являются глицин/сериновые линкеры, то есть пептидные линкеры, в основном состоящие из аминокислот глицина и серина. В тех случаях, когда растворимый домен цитокина начинается с S или G (N-конец), линкер заканчивается перед этим S или G.
Следует отметить, что линкер (ii) и линкер (iv) не обязательно должны иметь одинаковую длину. Для того, чтобы уменьшить потенциальную иммуногенность, предпочтительно можно использовать более короткие линкеры. Кроме того, оказалось, что более короткие линкеры приводят к получению одноцепочечных молекул с пониженной тенденцией к образованию агрегатов. В то же время линкеры, значительно более длинные, чем раскрытые здесь, могут проявлять неблагоприятные свойства агрегации.
Если потребуется, линкер может содержать остаток аспарагина, который может образовывать сайт гликозилирования Asn-Xaa-Ser. В некоторых воплощениях один из линкеров, например, линкер (ii) или линкер (iv), содержит сайт гликозилирования. В других воплощениях оба линкера (ii) и (iv) содержат сайты гликозилирования. Для того, чтобы повысить растворимость белков-агонистов CD40L и/или уменьшить потенциальную иммуногенность, предпочтительно линкер (ii) или линкер (iv) либо оба должны содержать сайт гликозилирования.
Предпочтительные последовательности линкеров представлены в таблице 2. Предпочтительным является линкер GSGSGNGS (SEQ ID NO: 2).
Таблица 2. Примеры последовательностей линкеров
SEQ ID NO: | Последовательность |
2 | GSGSGNGS |
3 | GSGSGSGS |
4 | GGSGSGSG |
5 | GGSGSG |
6 | GGSG |
7 | GGSGNGSG |
8 | GGNGSGSG |
9 | GGNGSG |
10 | GSGSGS |
11 | GSGS |
12 | GSG |
Белок-агонист рецептора CD40 дополнительно содержит домен Fc-фрагмента антител, который может располагаться с N-конца к первому домену (i) CD40L и/или с С-конца к третьему домену (v) CD40L. Предпочтительно, домен Fc-фрагмента антител вызывает снижение способности к взаимодействию с рецепторами Fc-γ-R in vivo. Предпочтительно домен Fc-фрагмента антител содержит или состоит из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 13 или 14. Примеры доменов Fc-фрагмента представлены в таблице 3.
Таблица 3. Примеры доменов Fc-фрагмента
SEQ ID NO: | Последовательность |
13 | PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
14 | PAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
Общее количество гликозидов и положения индивидуальных углеводов в трех измерениях влияют на стабильность белков-агонистов рецептора CD40 in vivo. Кроме того, распознавание углеводов зависит от локальной плотности концевых сахаридов, разветвленности углеводного древа и относительного положения самих углеводов.
Для того, чтобы избежать сшивки на основе Fc-рецептора in vivo и потенциальной токсичности при образовании суперкластера CD40L-рецептор, необходимо истощение углеводов домена CH2. Кроме того, при частичной деградации углеводов уменьшается период полужизни белков-агонистов рецептора CD40 in vivo через механизмы, связанные с лектинами. При уменьшении общего числа сайтов гликозилирования на молекуле получается соединение, менее доступное для этих механизмов, что повышает период полужизни. Соответственно, в одном воплощении уменьшали общее количество гликозидов у белков-агонистов рецептора CD40 по настоящему изобретению за счет истощения гликосайтов CH2, получая белки-агонисты рецептора CD40, содержащие эквивалентные N297S мутации SEQ ID NO: 15 (белки A) (по системе нумерации EU), создающие домены aglycosI-CH2.
Гликосайты CH2, присутствующие на участках внутренней поверхности, в норме прикрывают этот субдомен от протеаз при “переходе к открытой Fc-конформации”, когда восстанавливаются шарнирные межцепочечные дисульфидные связи и разрушается ковалентная связь между цепями (фиг. 10). Это способствует диссоциации СН2 и открывает участки внутренней поверхности к воздействию протеаз.
Следовательно, белки-агонисты рецептора CD40, содержащие эквивалентные N297S мутации SEQ ID NO: 15 (белки A) (по системе нумерации EU), создающие aglycosI-CH2, должны быть менее устойчивы к протеолизу, чем эквивалентные структуры с гликозилированием CH2 дикого типа. Это должно повлиять на стабильность соединения при USP/DSP/хранении, когда присутствуют протеазы клеток хозяина, которые имеют долгосрочный доступ к структуре. Соответственно, в некоторых воплощениях агонисты рецептора CD40 не содержат гликосайтов CH2, но содержат гликосайты в последовательностях линкеров у каждой полипептидной цепи (например, GSGSGNGS, SEQ ID NO: 2). В некоторых типичных воплощениях агонисты рецептора CD40 содержат пять гликосайтов на 1 полипептидную цепь, в общей сложности по 10 гликосайтов на димер.
В соответствии с одним предпочтительным воплощением изобретения, домен Fc-фрагмента антител пришивается через линкер шарнирного типа. Линкер шарнирного типа имеет длину в 10-30 аминокислот, предпочтительно в 15-25 аминокислот, например, в 22 аминокислоты. Линкер шарнирного типа предпочтительно включает последовательность шарнирного участка иммуноглобулина, который именуется здесь как “шарнирный участок Ig”. Термин “шарнирный участок Ig” обозначает любой полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая идентична или аналогична по последовательности той части последовательности шарнирного участка натурального Ig, которая включает те остатки цистеина, по которым дисульфидные связи соединяют две тяжелые цепи иммуноглобулина.
Можно получить производные и аналоги шарнирного участка при помощи мутаций. В настоящем изобретении производное или аналог означает полипептид, включающий аминокислотную последовательность, которая идентична или аналогична полноразмерной последовательности дикого типа (или встречающегося в природе белка), за исключением того, что он имеет одно или несколько отличий по аминокислотной последовательности, обусловленных удалением, вставкой и/или заменой. Однако в соответствии с настоящим изобретением термин “шарнирный линкер” не ограничивается такими линкерами, которые содержат шарнирный участок Ig или его производное, но охватывает любые линкеры, достаточно длинные для того, чтобы домены, скрепленные линкером шарнирного типа, приобретали биологически активную конформацию.
Количество молекул с открытой Fc-конформацией у индивидуальных белков-агонистов рецептора CD40 зависит от числа межцепочечных дисульфидных связей, присутствующих в шарнирном участке. Соответственно, в одном воплощении в шарнирный участок белков-агонистов рецептора CD40 по настоящему изобретению вводили третий цистеин, чтобы улучшить эффект истощения гликосайтов CH2.
На связанность межцепочечных дисульфидов шарнирной области, стабилизирующих гомодимер гексавалентного белка-агониста рецептора CD40, также будут влиять свободные тиоловые группы субпоследовательностей CD40L (в целом шесть на 1 димер). Это также ведет к вышеупомянутой открытой Fc-конформации вследствие самовосстановления шарнирных дисульфидных мостиков этой структуры эндогенными свободными тиолами препарата. Поэтому следует ожидать, что одноцепочечные слитые белки CD40L-Fc, содержащие шесть свободных тиолов, будут менее стабильными при получении и хранении, когда имеет место длительное воздействие кислорода и протеаз.
Поэтому, чтобы обеспечить получение гексавалентного агониста рецептора CD40, остаток C194 предпочтительно подвергают мутации на другую аминокислоту, не влияющую на связывание с рецептором.
Кроме того, белки-агонисты рецептора CD40 по изобретению дополнительно содержат мутацию верхнего шарнирного лизина на глицин, чтобы уменьшить протеолитический процессинг в этом месте. Соответственно, в одном воплощении белки-агонисты рецептора CD40 по изобретению дополнительно содержат мутацию верхнего шарнирного лизина (K223 по системе нумерации EU) на глицин, чтобы уменьшить протеолитический процессинг в этом месте, тем самым повышая общую стабильность слитого белка. Сочетание вышеприведенного введения третьего цистеина (C225 по системе нумерации EU) с вышеупомянутой мутацией лизина на глицин (K223G по системе нумерации EU) в пределах шарнирной области приводит к общей стабилизации белка-агониста рецептора CD40 по изобретению.
Особенно предпочтительный линкер шарнирного типа содержит или состоит из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 16 (таблица 4), которая включает вышеупомянутый цистеин С225 и мутацию лизина на глицин K223G.
Белок-агонист рецептора CD40 может дополнительно включать N-концевой домен сигнального пептида, который позволяет процессинг, например, внеклеточную секрецию, в подходящих клетках хозяина. Предпочтительно N-концевой домен сигнального пептида содержит сайт расщепления протеазой, например, сайт расщепления сигнальной пептидазой, поэтому он может быть удален после или во время экспрессии с получением зрелого белка. Особенно предпочтительный N-концевой домен сигнального пептида включает аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17 (таблица 4).
Кроме того, белок-агонист рецептора CD40 может дополнительно включать С-концевой элемент, имеющий длину, например, в 1-50, предпочтительно 10-30 аминокислот, которые могут включать в себя или соединяться с доменом распознавания/очистки, например, доменом FLAG, доменом Strep-тег или Strep-tag-II и/или доменом poly-His. В особенно предпочтительном воплощении слитый полипептид содержит Strep-тег, пришитый к С-концу через короткий сериновый линкер, как показано в SEQ ID NO: 18 (таблица 4).
Типичный линкер шарнирного типа (SEQ ID NO: 16, 19-24), N-концевой домен сигнального пептида (SEQ ID NO: 17) и сериновый линкер-Strep-тег (SEQ ID NO: 18) представлены в таблице 4.
Таблица 4. Типичные домены и линкеры
SEQ ID NO: | Последовательность |
16 | GSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPC |
17 | METDTLLVFVLLVWVPAGNG |
18 | SSSSSSAWSHPQFEK |
19 | GSGSSSSSSGSCDKTHTCPPC |
20 | GSGSSSSSSSGSCDKTHTCPPC |
21 | GSGSSSSSGSCDKTHTCPPC |
22 | GSGSSSGSCDKTHTCPPC |
23 | GSGSSSGSCDKTHTCPPCGS |
24 | GSGSSSGSCDKTHTCPPCGSGS |
В одном воплощении изобретения слитый полипептид включает три растворимых домена CD40L, слитых пептидными линкерами по SEQ ID NO: 2. Первый растворимый домен CD40L (i) состоит из аминокислот 121-261 CD40L человека по SEQ ID NO: 1 и растворимые домены CD40L (iii) и (v) состоят из аминокислот 121-261 CD40L человека по SEQ ID NO: 1.
Кроме того, слитый полипептид содержит домен Fc-фрагмента антител по SEQ ID NO: 13, который пришит с C-конца к растворимому домену CD40L (v) через шарнирный линкер по SEQ ID NO: 16. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что именно этот слитый полипептид обеспечивает улучшение биологической активности и является особенно стабильным. Аминокислотная последовательность типичного воплощения белка-агониста рецептора CD40 по изобретению приведена в SEQ ID NO: 27.
Кроме того, слитый полипептид может содержать N-концевой домен сигнального пептида, например, по SEQ ID NO: 17. Конкретный пример белка-агониста рецептора CD40 по изобретению представлен в SEQ ID NO: 25.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением, слитый полипептид может дополнительно содержать С-концевой Strep-тег, пришитый к полипептиду по изобретению через короткий сериновый линкер, как показано в SEQ ID NO: 18. В соответствии с этим аспектом изобретения, Fc-фрагмент предпочтительно состоит из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 13 или 14. Кроме того, Fc-фрагмент может состоять из более короткого Fc-фрагмента, к примеру, включающего аминокислоты 1-217 по SEQ ID NO: 13. Особенно предпочтительные примеры слитых полипептидов, содержащих C-концевой Strep-тег, представлены в SEQ ID NO: 15 (БЕЛОК A).
Типичные белки-агонисты рецептора CD40, представленные в SEQ ID NO: 15, 25 и 26, содержат N-концевой домен сигнального пептида. Домен сигнального пептида включает аминокислоты 1-20. В каждом случае зрелый белок начинается с аминокислоты 21. Типичные зрелые белки-агонисты рецептора CD40 (без сигнального пептида) по настоящему изобретению представлены в SEQ ID NO: 27-30, 32 и 34. Типичные белки-агонисты рецептора CD40, описанные выше, показаны в таблице 5.
В одном воплощении изобретения одноцепочечный слитый полипептид CD40L включает три растворимых домена CD40L, сшитых пептидными линкерами SEQ ID NO: 2. Растворимые домены CD40L (i), (iii) и (v) состоят из аминокислот 121-261 CD40L человека SEQ ID NO: 1 с мутацией C194S. Этот одноцепочечный полипептид CD40L, содержащий вышеприведенные мутеины CD40L 121-261 C194S, представлен в SEQ ID: NO: 36 и хорошо подходит для получения слитых белков по N- или C-концу с повышенной стабильностью по сравнению с диким типом. В предпочтительном воплощении домен Fc-фрагмента антител по SEQ ID NO: 13 пришит с C-конца к растворимому домену CD40L (v) по SEQ ID: 36 через шарнирный линкер согласно SEQ ID NO: 16.
Агонист рецептора CD40, приведенный в SEQ ID NO: 27, имеет меньшее общее число сайтов гликозилирования (мутация N297S в области CH2, дающая агликозилированный домен CH2), большее число межцепочечных дисульфидных связей в шарнирной области и мутацию верхнего шарнирного лизина на глицин. Эти изменения приводят к снижению потенциальной деградации и суперкластеризации рецепторов CD40L (вместе с сопутствующей токсичностью). В некоторых воплощениях N-концевой глутамин подвергается модификации в пироглутамат (Liu et al., 2011, J. Biol. Chem., 286: 11211-11217).
Таблица 5. Типичные белки-агонисты рецептора CD40
SEQ ID NO: | Последовательность |
25 БЕЛОК A без Strep-тега |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
15 БЕЛОК A |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSSSSSSAWSHPQFEK |
26 CD40L дикого типа +SEQ14 (FC) |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
27 CD40L д.т. +SEQ13 (FC) без SP без Strep-тега |
QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
28 | QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSSSSSSAWSHPQFEK |
29 | QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
30 | QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSSSSSSAWSHPQFEK |
31 БЕЛОК B |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSSSSSSAWSHPQFEK |
32 БЕЛОК B без SP |
QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSSSSSSAWSHPQFEK |
33 БЕЛОК B без Strep-тега |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
34 БЕЛОК B без SP без Strep-тега |
QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
35 БЕЛОК C |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLALKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLALKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLALKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSSSSSSSGSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYSSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSSSSSSAWSHPQFEK |
36 | QIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSGNGSQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLSLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL |
Следующий аспект настоящего изобретения касается молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих белок-агонист рецептора CD40, как описано здесь. Молекула нуклеиновой кислоты может представлять собой молекулу ДНК, например, молекулу двухцепочечной или одноцепочечной ДНК, либо молекулу РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может кодировать белок-агонист рецептора CD40 или его предшественник, например, про- или препро-форму белка-агониста рецептора CD40, которая может содержать сигнальную последовательность или другие гетерологичные аминокислотные участки для секреции или очистки, которые предпочтительно располагаются на N- и/или С-конце белка-агониста рецептора CD40. Гетерологичные аминокислотные участки могут соединяться с первым и/или вторым доменом через сайт расщепления протеазой, например, сайт расщепления из фактора X3, тромбина или IgA. Конкретный пример последовательности нуклеиновой кислоты по изобретению представлен в таблице 6 в виде SEQ ID NO: 37. Эта молекула нуклеиновой кислоты кодирует слитый полипептид SEQ ID NO: 25.
Таблица 6. Нуклеотидная последовательность типичного белка-агониста рецептора CD40
SEQ ID NO: | Последовательность |
37 | AAGCTTTAGGGATAACAGGGTAATAGCCGCCACCATGGAGACTGACACCCTGCTGGTGTTCGTGCTGCTGGTCTGGGTGCCTGCAGGAAATGGACAGATCGCAGCTCATGTGATAAGTGAGGCAAGCTCGAAGACGACTAGCGTATTGCAGTGGGCAGAGAAGGGGTACTACACCATGTCCAACAACCTCGTCACGCTGGAGAACGGCAAACAGCTCACCGTCAAGCGACAGGGCCTGTACTACATCTACGCACAAGTCACCTTCTGTTCTAACCGAGAGGCTTCCAGTCAAGCACCCTTCATTGCTTCCCTGTGCCTGAAATCCCCTGGTCGATTCGAGAGGATACTGCTCAGGGCAGCTAACACTCACTCCAGTGCTAAGCCTTGCGGTCAGCAGAGTATCCACCTCGGCGGCGTATTCGAGCTGCAACCAGGAGCTTCCGTCTTTGTGAACGTGACTGACCCTTCTCAAGTCTCTCACGGAACAGGATTCACCTCTTTCGGGCTCCTAAAGCTGGGTTCCGGAAGCGGTAATGGTAGTCAAATCGCTGCCCATGTAATTTCCGAGGCTTCGTCAAAGACTACGTCTGTTCTACAATGGGCCGAGAAAGGCTACTATACCATGTCAAATAATCTCGTCACTCTTGAGAACGGGAAGCAGCTTACCGTTAAACGTCAGGGACTTTACTACATTTATGCCCAAGTCACTTTCTGCTCAAATCGAGAGGCAAGCTCCCAAGCACCGTTCATAGCATCACTCTGCCTCAAGTCCCCTGGAAGGTTTGAACGAATACTACTTAGGGCCGCTAATACACATTCGAGTGCAAAGCCTTGCGGACAGCAAAGCATTCATTTAGGTGGAGTCTTCGAGCTTCAACCAGGAGCCTCTGTATTCGTCAACGTAACGGACCCATCGCAAGTATCCCACGGCACTGGTTTCACCTCATTCGGTTTGCTGAAGTTAGGAAGCGGCAGTGGAAACGGTTCCCAAATAGCTGCCCATGTCATCTCGGAAGCCTCAAGCAAGACGACAAGTGTCTTGCAATGGGCCGAAAAGGGTTATTATACTATGTCTAATAACCTAGTGACCCTAGAGAACGGTAAACAACTTACTGTTAAGCGCCAGGGACTTTATTATATATATGCTCAGGTAACATTCTGCTCGAATCGGGAAGCATCTTCACAGGCTCCTTTTATCGCTAGTTTATGTCTGAAGAGCCCCGGACGATTTGAGAGGATATTGCTTAGAGCCGCGAATACACACAGTTCAGCCAAACCTTGTGGACAACAGAGTATTCACTTAGGTGGCGTGTTTGAATTACAACCAGGGGCATCAGTGTTCGTAAACGTAACAGATCCCAGTCAGGTCTCGCACGGGACGGGATTTACTTCCTTTGGTTTGCTGAAATTAGGCTCGGGATCCTCGAGTTCATCGTCCTCATCCGGCTCATGTGATAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGTCCTGCCCCTGAGCTGCTGGGCGGACCTTCTGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCAGGACCCCTGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCTCACGAAGATCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTCCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGGGAGGAGCAGTACAGCTCCACCTACCGGGTGGTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGAAAGGAGTATAAGTGTAAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCTCCTAGCAGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCTGTGCTGGACTCTGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGTCCCTGTCTCTGAGTCCGGGCAAATAATAGGCGCGCC |
Молекула нуклеиновой кислоты может быть функционально связана с контролирующей экспрессию последовательностью, например, такой контролирующей экспрессию последовательностью, которая позволяет экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты в нужных клетках хозяина. Молекула нуклеиновой кислоты может находиться в векторе, например, в плазмиде, бактериофаге, вирусном векторе, встраивающемся в хромосомы векторе и т.д. Примеры подходящих контролирующих экспрессию последовательностей и векторов описаны, к примеру, в Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press; и Ausubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons; или более поздних изданиях таковых.
Для экспрессии последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белки-агонисты рецептора CD40 по настоящему изобретению, можно использовать различные системы экспрессирующих векторов/клеток хозяина. Подходящими клетками хозяина являются, без ограничения, прокариотические клетки типа бактерий, например, E. coli, эукариотические клетки хозяина типа дрожжевых клеток, клеток насекомых, растительных клеток или клеток животных, предпочтительно клеток млекопитающих, более предпочтительно клеток человека. Кроме того, изобретение касается и других организмов, кроме человека, трансформированных или трансфецированных молекулами нуклеиновой кислоты, как описано выше. Такие трансгенные организмы могут быть получены известными методами генетического переноса, включая гомологическую рекомбинацию.
Следующий аспект настоящего изобретения касается фармацевтических или диагностических композиций, включающих в качестве активного средства по меньшей мере один белок-агонист рецептора CD40, соответствующую кодирующую его нуклеиновую кислоту либо трансформированные или трансфецированные клетки, как описано здесь.
Термин “связанное с CD40L заболевание или расстройство” в настоящем изобретении означает любое заболевание или расстройство, которое может быть улучшено добавлением агониста рецептора CD40. По меньшей мере один белок-агонист рецептора CD40, соответствующая кодирующая его нуклеиновая кислота или трансформированные либо трансфецированные клетки, все, как описано здесь, могут использоваться в терапии, например, при профилактике и/или лечении заболеваний, вызванных, связанных с и/или сопровождающихся дисфункцией CD40L, в особенности пролиферативных заболеваний, как-то опухолей, например, твердых или лимфатических опухолей; инфекционных заболеваний; воспалительных заболеваний; метаболических заболеваний; аутоиммунных заболеваний, например, ревматоидных и/или артритных заболеваний; дегенеративных заболеваний, например, нейродегенеративных заболеваний типа рассеянного склероза; связанных с апоптозом заболеваний или отторжения трансплантатов.
Термин “дисфункция CD40L” в настоящем изобретении понимается как такая функция или экспрессия CD40L, которая отличается от нормальной функции или экспрессии CD40L, например, гиперэкспрессия гена или белка CD40L, снижение или устранение экспрессии гена или белка CD40L по сравнению с нормальным физиологическим уровнем экспрессии CD40L, повышение активности CD40L, снижение или устранение активности CD40L, усиление связывания CD40L с какими-либо партнерами по связыванию, например, с рецептором, в частности, с рецептором CD40L или другой молекулы цитокина, снижение или устранение связывания с каким-либо партнером по связыванию, например, с рецептором, в частности, с рецептором CD40L или другой молекулы цитокина, по сравнению с нормальной физиологической активностью или связыванием CD40L.
В различных воплощениях предусмотрен способ диагностики и/или лечения лиц, страдающих заболеваниями, которые можно диагностировать и/или лечить путем воздействия на рецепторы CD40L, включающий введение им раскрытого здесь белка-агониста рецептора CD40 с тем, чтобы у них был агонистический эффект на активность мишени или мишеней, ослабление одного или нескольких симптомов и/или происходило лечение. Предусмотренные здесь белки-агонисты рецептора CD40 могут применяться для диагностики и/или лечения лиц, страдающих первичным или метастатическим раком, включая карциномы молочной железы, толстой кишки, прямой кишки, легких (например, мелкоклеточным раком легких “SCLC” и немелкоклеточным раком легких “NSCLC”), ротоглотки, подглоточника, пищевода, желудка, поджелудочной железы, печени, желчного пузыря и желчных протоков, тонкого кишечника, мочевыводящих путей (в том числе почек, мочевого пузыря и уротелия), женских половых путей (в том числе шейки матки, матки и яичников, а также хориокарциномы и гестационной трофобластической болезни), мужских половых путей (в том числе простаты, семенных пузырьков, семенников и опухолей зародышевых клеток), эндокринных желез (в том числе щитовидной железы, надпочечников и гипофиза) и кожи, а также гемангиомы, меланомы, саркомы (в том числе из костных и мягких тканей, а также саркомы Капоши), опухоли головного мозга, нервов, глаз и мозговых оболочек (включая астроцитомы, глиомы, глиобластомы, ретинобластомы, невромы, нейробластомы, шванномы и менингиомы), опухоли, возникающие при гемопоэтических раковых заболеваниях, острой лейкемии, острой лимфобластной лейкемии (ALL), острой миелоидной лейкемии (AML), B-клеточной лимфоме, лимфоме Беркитта, хронической миелоцитарной лейкемии (CML), хронической лимфоцитарной лейкемии (CLL), волосистоклеточной лейкемии, лимфоме Ходжкина и неходжкинской лимфоме, DLBCL, фолликулярной лимфоме, гемопоэтических раковых заболеваниях, саркоме Капоши, злокачественной лимфоме, злокачественном гистиоцитозе, злокачественной меланоме, множественной миеломе, паранеопластическом синдроме/злокачественной гиперкальциемии или солидные опухоли.
Предусмотрены фармацевтические композиции, включающие приведенные здесь белки-агонисты рецептора CD40 и фармацевтически приемлемые носители. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство для лечения заболевания. Например, дополнительным средством может быть терапевтическое средство, химиотерапевтическое средство; средство визуализации, цитотоксическое средство, ингибитор ангиогенеза, ингибитор киназы (включая, без ограничения, ингибиторы KDR и TIE-2), модулятор костимулирующей молекулы или ингибитор контрольной точки иммунитета (включая, без ограничения, антитело против B7.1, против B7.2, против B7.3, против B7.4, против CD28, против B7RP1, Ig к CTLA4, антитело против CTLA-4, против PD-1, против PD-L1, против PD-L2, против ICOS, против LAG-3, против Tim3, против VISTA, против HVEM, против BTLA, слитый белок LIGHT, антитело против CD137, против CD137L, против OX40, OX40L, против CD70, против CD27, против GAL9, против A2AR, против KIR, против IDO-1, против CD20), модулятор дендритных клеток/антигенпрезентирующих клеток (включая, без ограничения, антитело против CD40, против CD40L, против DC-SIGN, против Dectin-1, против CD301, против CD303, против CD123, против CD207, против DNGR1, против CD205, против DCIR, против CD206, против ILT7), модулятор Toll-подобных рецепторов (включая, без ограничения, антитело против TLR-1, против TLR-2, против TLR-3, против TLR-4, против TLR-5, против TLR-6, против TLR-7, против TLR-8, против TLR-9), блокатор молекул адгезии (включая, без ограничения, антитело против LFA-1, антитело против селектина E/L, низкомолекулярные ингибиторы), антитело против цитокина или его функциональный фрагмент (включая, без ограничения, антитело против IL-18, антитело против TNF или антитело против рецептора IL-6/цитокинов), биспецифичное переадресуемое цитотоксическое средство для T-клеток или NK-клеток (включая, без ограничения, BiTE®), терапевтическое средство на основе химерного T-клеточного рецептора (CAR-T), средство на основе T-клеточного рецептора (TCR), терапевтическую противораковую вакцину, метотрексат, циклоспорин, рапамицин, FK506, детектируемую метку или репортер, антагонист TNF, противоревматическое средство, миорелаксант, наркотическое средство, нестероидный противовоспалительный препарат (NSAID), анальгетик, анестетик, седативное средство, местный анестетик, нервно-мышечный блокатор, противомикробное, антипсориатическое средство, кортикостероид, анаболический стероид, эритропоэтин, иммунизация, иммуноглобулин, иммунодепрессант, гормон роста, гормон-замещающий препарат, радиофармацевтический препарат, антидепрессант, нейролептик, стимулятор, лекарство от астмы, бета-агонист, ингаляционный стероид, адреналин или его аналог, цитокин или антагонист цитокина.
В одном воплощении при лечении рака или при профилактике или подавлении метастазов из описанных здесь опухолей, белки-агонисты рецептора CD40 могут применяться по отдельности или в сочетании с одним или несколькими дополнительными средствами, например, средствами химиотерапии, радиотерапии или биологическими средствами. В некоторых воплощениях к таким средствам могут относиться следующие: 13-цис-ретиноевая кислота; 2-CdA; 2-хлордезоксиаденозин; 5-азацитидин; 5-фторурацил; 5-ФУ; 6-меркаптопурин; 6-МП; 6-ТГ; 6-тиогуанин; абраксан; Accutane®; актиномицин D; Adriamycin®; Adrucil®; Afinitor®; Agrylin®; Ala-Cort®; алдеслейкин; алемтузумаб; Alimta; алитретиноин; Alkaban-AQ®; Alkeran®; полностью транс-ретиноевая кислота; альфа-интерферон; алтретамин; аметоптерин; амифостин; аминоглютетимид; анагрелид; Anandron®; анастрозол; арабинозилцистеин; Ara-C; Aranesp®; Aredia®; Arimidex®; Aromasin®; Arranon®; триоксид мышьяка; Arzerra™; аспарагиназа; ATRA; Avastin®; азацитидин; БЦЖ; BCNU; бендамустин; бевацизумаб; бексаротен; Bexxar®; бикалутамид; BiCNU; Blenoxane®; блеомицин; бортезомиб; бусульфан; Busulfex®; C225; лейковорин кальций; Campath®; Camptosar®; камптотецин-11; капецитабин Carac™; карбоплатин; кармустин; кармустин в облатках; Casodex®; CC-5013; CCI-779; CCNU; CDDP; CeeNU; Cerubidine®; цетуксимаб; хлорамбуцил; цисплатин; цитроворум-фактор; кладрибин; кортизон; Cosmegen®; CPT-11; циклофосфамид; Cytadren®; цитарабин; цитарабин в липосомах; Cytosar-U®; Cytoxan®; дакарбазин; дакоген; дактиномицин; дарбепоэтин-альфа; дасатиниб; дауномицин; даунорубицин; даунорубицин гидрохлорид; даунорубицин в липосомах; DaunoXome®; декадрон; децитабин; Delta-Cortef®; Deltasone®; денилейкин; дифтитокс; DepoCyt™; дексаметазон; дексаметазон ацетат; дексаметазон-фосфат натрия; дексазон; Dexrazoxane; DHAD; DIC; диодекс; доцетаксель; Doxil®; доксорубицин; доксорубицин в липосомах; Droxia™; DTIC; DTIC-Dome®; Duralone®; дувелисиб; Efudex®; Eligard™; Ellence™; Eloxatin™; Elspar®; Emcyt®; эпирубицин; эпоэтин-альфа; эрбитукс; эрлотиниб; L-аспарагиназа Erwinia; эстрамустин; этиол Etopophos®; этопозид; этопозид фосфат; Eulexin®; Everolimus; Evista®; эксеместан; Fareston®; Faslodex®; Femara®; филграстим; флоксуридин; Fludara®; флударабин; Fluoroplex®; фторурацил; фторурацил (крем); флуоксиместерон; флутамид; фолиновая кислота; FUDR®; фулвестрант; гефитиниб; гемцитабин; гемтузумаб озогамицин; Gemzar; Gleevec™; Gliadel® в облатках; GM-CSF; госерелин; колониестимулирующий фактор гранулоцитов (G-CSF); колониестимулирующий фактор гранулоцитов-макрофагов (G-MCSF); Halotestin®; Herceptin®; гексадрол; Hexalen®; гексаметилмеламин; НММ; Hycamtin®; Hydrea®; Hydrocort Acetate®; гидрокортизон; гидрокортизон-фосфат натрия; гидрокортизон-сукцинат натрия; гидрокортизон фосфат; гидроксикарбамид; ибрутиниб; ибритумомаб; ибритумомаб тиуксетан; Idamycin®; идарубицин Ifex®; альфа-интерферон; альфа-интерферон-2b (конъюгат с ПЭГ); ифосфамид; интерлейкин-11 (IL-11); интерлейкин-2 (IL-2); иматиниб мезилат; имидазол-карбоксамид; Intron A®; ипилимумаб, Iressa®; иринотекан; изотретиноин; иксабепилон; Ixempra™; Kadcycla®; Kidrolase™, Lanacort®; лапатиниб; L-аспарагиназа; LCR; леналидомид; летрозол; лейковорин; лейкеран; Leukine™; лейпролид; лейрокристин; Leustatin™; лирилумаб; липосомный Ara-C; Liquid Pred®; ломустин; L-РАМ; L-сарколизин; Lupron®; Lupron Depot®; Matulane®; максидекс; мехлорэтамин; мехлорэтамин гидрохлорид; Medralone®; Medrol®; Megace®; мегестрол; мегестрол ацетат; ингибиторы MEK; мелфалан; меркаптопурин; Mesna™; Mesnex™; метотрексат; метотрексат натрия; метилпреднизолон; Meticorten®; митомицин; митомицин С; митоксантрон; M-Prednisol®; MTC; MTX; Mustargen®; мустин; Mutamycin®; Myleran®; Mylocel™; Mylotarg®; Navitoclax®; Navelbine®; неларабин; Neosar®; Neulasta™; Neumega®; Neupogen®; Nexavar®; Nilandron®; нилотиниб; нилутамид; Nipent®; азотный иприт Novaldex®; ниволюмаб; Novantrone®; Nplate; октреотид; октреотид ацетат; офатумумаб; Oncospar®; Oncovin®; Ontak®; Onxal™; опрельвекин; Orapred®; Orasone®; оксалиплатин; паклитаксел; паклитаксел на белке; памидронат; панитумумаб; Panretin®; Paraplatin®; пазопаниб; Pediapred®; ПЭГ-интерферон; ПЭГ-аспаргаза; ПЭГ-филграстим; PEG-Intron™; ПЭГ-L-аспарагиназа; пеметрексед; пембролизумаб; пентостатин; пертузумаб; фенилаланиновый иприт; пидилизумаб; Platinol®; Platinol-AQ®; преднизолон; преднизон; Prelone®; прокарбазин; Procrit®; Proleukin®; Prolifeprospan 20 с имплантатом кармустина; Purinethol®; ингибиторы BRAF; ралоксифен; Revlimid®; Rheumatrex®; Rituxan®; ритуксимаб; Roferon-A®; ромиплостим; Rubex®; рубидомицин гидрохлорид; Sandostatin®; Sandostatin LAR®; сарграмостим; Solu-Cortef®; Solu-Medrol®; сорафениб; Sprycel™; STI-571; Stivagra™, стрептозоцин; SU11248; сунитиниб; Sutent®; тамоксифен Tarceva®; Targretin®; Tasigna®; Taxol®; Taxotere®; Temodar®; темозоломид темсиролимус; тенипозид; TESPA; талидомид; Thalomid®; TheraCys®; тиогуанин; тиогуанин Tabloid®; тиофосфамид; Thioplex®; тиотепа; TICE®; Toposar®; топотекан; торемифен; Torisel®; тоситумомаб; трастузумаб; Treanda®; тремелимумаб; третиноин; Trexall™, Trisenox®; TSPA; Tykerb®; урелумаб; VCR; Vectibix™; Velban®; Velcade®; Venetoclax®; VePesid®; Vesanoid®; Viadur™; Vidaza®; винбластин; винбластин сульфат; Vincasar Pfs®; винкристин; винорелбин; винорелбин тартрат; VLB; VM-26; вориностат; Votrient®; VP-16; Vumon®; Xeloda®; Zanosar®; Zevalin™; Zinecard®; Zoladex®; золедроновая кислота; Zolinza®; или Zometa® и/или любые другие средства, не представленные в этом списке, которые нацелены на такие же пути.
При использовании двух или нескольких веществ или начал в составе комбинированного режима лечения их можно вводить одним и тем же способом введения или разными способами введения, практически в одно и то же время или в различное время (например, практически одновременно, последовательно или по чередующейся схеме). При введении этих веществ или начал одновременно одним и тем же способом введения их можно вводить в виде различных фармацевтических форм или композиций или же в составе комбинированной фармацевтической формы или композиции, что должно быть ясно специалистам.
Также при использовании двух или нескольких активных веществ или начал в составе комбинированного режима лечения каждое из веществ или начал можно вводить в таком же количестве и по той же схеме, что и при использовании соединения или начала самого по себе, причем такое комбинированное применение может и не давать синергического эффекта. Однако, если комбинированное применение двух или нескольких активных веществ или начал дает синергический эффект, то можно и уменьшить количество одного, нескольких или всех веществ или начал, подлежащих введению, и в то же время получить требуемое терапевтическое действие. Это может быть полезным, например, для предотвращения, ограничения или уменьшения каких-либо нежелательных побочных эффектов, связанных с использованием одного или нескольких веществ или начал при их применении в обычном количестве, получая при этом требуемый фармацевтический или терапевтический эффект.
Эффективность используемой схемы лечения по изобретению можно определить и/или отследить любым способом, известным per se для данного заболевания или расстройства, как это должно быть ясно врачам. Врач также сможет, при необходимости и в каждом конкретном случае, изменить или модифицировать конкретный режим лечения с тем, чтобы получить требуемый терапевтический эффект, предотвратить, ограничить или уменьшить нежелательные побочные эффекты и/или добиться соответствующего баланса между получением требуемого терапевтического эффекта, с одной стороны, и предотвращением, ограничением или уменьшением нежелательных побочных эффектов, с другой стороны.
Как правило, режим лечения должен выполняться до получения требуемого терапевтического эффекта и/или пока нужно сохранить требуемый терапевтический эффект. Опять же, это определяется врачом.
В различных воплощениях предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие один или несколько белков-агонистов рецептора CD40, самих по себе либо в комбинации с профилактическими средствами, терапевтическими средствами и/или фармацевтически приемлемыми носителями. В различных воплощениях неограничительные примеры применения приведенных здесь фармацевтических композиций включают диагностику, выявление и/или мониторинг заболеваний, предотвращение, лечение, ведение и/или облегчение заболеваний либо одного или нескольких симптомов таковых и/или в исследованиях. Составление фармацевтических композиций, самих по себе либо в комбинации с профилактическими средствами, терапевтическими средствами и/или фармацевтически приемлемыми носителями, известно специалистам в данной области (US Patent Publication No. 2009/0311253 A1).
В различных воплощениях лекарственная форма может содержать одну или несколько аминокислот, один или несколько полисахаридов и/или полисорбат и белок-агонист рецептора CD40, присутствующий в концентрации от 0,1 до 100 мг/мл, включая конечные точки (например, 0,1-10, 1-10, 0,01-50, 1-50, 1-100, 10-100, 25-100, 25-50 или 50-100 мг/мл), причем данная форма имеет значение рН от 5,0 до 7,0, включая конечные точки (например, рН 5,0-6,0, 5,5-6,0, 5,0-6,5, 5,5-6,5 или 6,0-7,0). В одном воплощении по меньшей мере одна аминокислота в рецептуре представлена гистидином и присутствует в концентрации 10-20 мМ, 10-15 мМ, 15-20 мМ или примерно 15 мМ. В одном воплощении по меньшей мере один полисахарид в рецептуре представлен сахарозой и присутствует в концентрации от 0 до 8,0% (масс./объем). В одном воплощении полисорбат в рецептуре представлен полисорбатом 80 и присутствует в концентрации 0-0,06% масс./об. В одном воплощении по меньшей мере одна аминокислота в рецептуре представлена аргинином и присутствует в концентрации 0-1,5% масс./об (например, 0,5-1,5, 1,0-1,5 или 0,5-1,0 масс./об.). В одном воплощении белок-агонист рецептора CD40 присутствует в рецептуре в концентрации 0,1-100 мг/мл (например, 1-100 мг/мл или 1-15 мг/мл или 1-7,5 мг/мл или 2,5-7,5 мг/мл или 5-7,5 мг/мл или 25-100 мг/мл или 20-60 мг/мл или 25-50 мг/мл или примерно 25 мг/мл или 50 мг/мл или же 0,1-60 мг/мл или 0,1-25 мг/мл или 1,0-60 мг/мл или 0,5-60 мг/мл или 0,1-2,0 мг/мл или 0,5-2,0 мг/мл или 1-5 мг/мл или 1-7,5 мг/мл или 1-15 мг/мл или примерно 0,5 мг/мл или 1,0 мг/мл).
В настоящем изобретении выражение “эффективное количество” означает такое количество белка-агониста CD40L, которое приводит к заметному улучшению (например, по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% или больше от исходного уровня) одного или нескольких параметров, связанных с дисфункцией CD40L либо с заболеванием или расстройством, связанным с CD40L.
В различных воплощениях лекарственная форма представляет собой водный состав, лиофилизованный состав либо лиофилизованный и регидратируемый состав. В одном воплощении гидратирующий раствор представляет собой раствор декстрозы и/или физиологический раствор (например, декстроза в концентрации около 5% масс./об. и/или физиологический раствор в концентрации около 0,9% масс./об.). В одном воплощении лекарственная форма содержит около 15 мМ гистидина, 0,03% (масс./об.) полисорбата 80, 4% (масс./об.) сахарозы и 0,1-25 мг/мл белка-агониста рецептора CD40 либо 1-15 мг/мл белка-агониста рецептора CD40 и имеет значение рН около 6. В одном воплощении данная форма дополнительно содержит по меньшей мере еще одно средство.
В различных воплощениях применяется рецептура, содержащая 25 мг/мл белка-агониста рецептора CD40, 15 мМ гистидина, 0,03% полисорбата 80 (масс./об.) и 4,0% сахарозы (масс./об.) со значением рН около 6,0. В некоторых воплощениях рецептура не содержит аргинина. В некоторых воплощениях эта рецептура вне ожидания проявляет улучшение стабильности при замораживании-оттаивании, стабильности жидкого состава и/или стабильности лиофилизованного состава по сравнению с другими рецептурами, включающими другие компоненты или концентрации.
Способы введения представленных здесь терапевтических средств включают, без ограничения, пероральное введение, парентеральное введение (например, интрадермальное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное и подкожное), эпидуральное введение, внутриопухолевое введение, мукозальное введение (например, интраназальным или пероральным способом) и внутрилегочное введение (например, введение соединений в виде аэрозоля с помощью ингалятора или распылителя). Составление фармацевтических композиций для конкретных способов введения, а также необходимые материалы и методы для различных способов введения доступны и известны специалистам в данной области (US Patent Publication No. 2009/0311253 A1).
В различных воплощениях схемы дозировки можно корректировать с тем, чтобы обеспечить оптимальную желательную реакцию (например, терапевтическую или профилактическую реакцию). Например, можно вводить одним болюсом, вводить несколько дробных доз по времени или же пропорционально уменьшать или повышать дозу в соответствии с требованиями терапевтической ситуации. В некоторых воплощениях парентеральные композиции составляют в стандартной дозовой форме для легкости введения и единообразия дозировки. Термин “стандартная дозовая форма” относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве унифицированной дозировки для подлежащих лечению субъектов-млекопитающих, причем каждая единица содержит предустановленное количество активного соединения, рассчитанное на получение требуемого терапевтического эффекта в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем.
Типичный, без ограничения, диапазон для терапевтически или профилактически эффективного количества предусмотренного здесь белка-агониста рецептора CD40 составляет 0,1-100 мг/кг (например, 0,1-0,5, 0,1-1, 0,1-10, 0,1-20, 0,1-50, 0,1-75, 1-10, 1-15, 1-7,5, 1,25-15, 1,25-7,5, 2,5-7,5, 2,5-15, 5-15, 5-7,5, 1-20, 1-50, 7-75, 1-100, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-50, 5-75, 10-20, 10-50, 10-75 или 10-100 мг/кг или любая концентрация между ними). В некоторых воплощениях белок-агонист рецептора CD40 в фармацевтической композиции присутствует в терапевтически эффективной концентрации, например, в концентрации 0,1-100 мг/мл (например, 0,1-0,5, 0,1-1, 0,1-10, 0,1-20, 0,1-50, 0,1-75, 1-10, 1-20, 1-50, 1-75, 1-100, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-50, 5-75, 10-20, 10-50, 10-75 или 10-100 мг/мл или любой концентрации между ними). Отметим, что значения дозировки могут варьироваться в зависимости от типа и/или тяжести подлежащего лечению заболевания. Также следует иметь в виду, что для любого конкретного субъекта можно корректировать конкретные схемы дозировки по времени в соответствии с индивидуальными потребностями и/или профессиональным суждением лица, осуществляющего или контролирующего введение композиций, а приведенные здесь диапазоны доз служат только для примера и не должны ограничивать объем или практическое применение заявленной композиции.
Примеры
Пример 1. Получение белка-агониста рецептора CD40
1.1. Структура полипептида
A) Аминокислоты Met1-Gly20
Сигнальный пептид Ig-каппа, предполагаемый сайт отщепления сигнальной пептидазой после аминокислоты Gly20.
B) Аминокислоты Gln21-Leu161
Первый растворимый домен цитокинового лиганда CD40L человека (CD40L, аминокислоты 121-261 по SEQ ID NO: 1).
C) Аминокислоты Gly162-Ser169
Первый пептидный линкер по SEQ ID NO: 2.
D) Аминокислоты Gln170-Leu310
Второй растворимый домен цитокинового лиганда CD40L человека (CD40L, аминокислоты 121-261 по SEQ ID NO: 1).
E) Аминокислоты Gly311-Ser318
Второй пептидный линкер по SEQ ID NO: 2.
F) Аминокислоты Gln319-Leu459
Третий растворимый домен цитокинового лиганда CD40L человека (CD40L, аминокислоты 121-261 по SEQ ID NO: 1).
G) Аминокислоты Gly460-Cys482
Линкер шарнирного типа по SEQ ID NO: 16.
H) Аминокислоты Pro483-Lys700
Домен Fc-фрагмента антител по SEQ ID NO: 13.
Вышеуказанный белок-агонист рецептора CD40 представлен в SEQ ID NO: 25.
Указанные линкеры могут быть заменены другими предпочтительными линкерами, например, приведенными в SEQ ID NO: 3-12.
Указанный линкер шарнирного типа может быть заменен другими предпочтительными шарнирными линкерами, например, приведенными в SEQ ID NO: 19 и 20.
Следует отметить, что первый и второй пептидные линкеры не обязательно должны быть идентичными.
Последовательность сигнального пептида (А) может быть заменена любой другой подходящей, например, последовательностью сигнального пептида млекопитающих.
1.2. Генная кассета, кодирующая полипептид
Синтетический ген может быть оптимизирован с учетом его употребительности кодонов для экспрессии в подходящих клетках хозяина, например, в клетках насекомых или клетках млекопитающих. Предпочтительная нуклеотидная последовательность приведена в SEQ ID NO: 37.
Пример 2. Экспрессия и очистка
2.1. Клонирование, экспрессия и очистка слитых полипептидов
Вышеприведенные слитые белки экспрессировали рекомбинантно в двух разных эукариотических клетках хозяина.
Для первоначального анализа вышеприведенных слитых белков-агонистов рецептора CD40 клетки Hek293T, выращенные в DMEM + GlutaMAX (GibCo) с добавлением 10% FBS, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, подвергали краткосрочной трансфекции плазмидой, содержащей экспрессионную кассету для слитого полипептида и соответствующий селектирующий маркер, например, функциональную экспрессионную кассету, содержащую ген резистентности к бластицидину, пуромицину или гигромицину. В тех случаях, когда для получения конечного продукта требуется несколько полипептидных цепей, экспрессионные кассеты либо объединяли в одной плазмиде, либо размещали в разных плазмидах во время трансфекции. Через три дня после трансфекции собирали супернатанты клеточных культур, содержащие рекомбинантные слитые полипептиды, и осветляли центрифугированием при 300×g с последующим фильтрованием через стерильный фильтр на 0,22 мкм.
Для крупномасштабной экспрессии слитых белков-агонистов рецептора CD40, предназначенных для использования in vivo, синтетические кассеты с ДНК, кодирующей вышеприведенные белки, вставляли в эукариотические экспрессионные векторы, содержащие соответствующие селектирующие маркеры (например, функциональную экспрессирующую кассету, содержащую ген резистентности к бластицидину, пуромицину или гигромицину) и генетические элементы, пригодные для повышения числа транскрипционно активных сайтов встраивания в геноме клеток хозяина. Проверенные по последовательности экспрессионные векторы вводили методом электропорации в адаптированные к суспензии клетки яичников китайского хомячка (CHO-S, Invitrogen). Через три дня после трансфекции к трансфецированным клеткам применяли соответствующее давление отбора. Выжившие клетки, несущие полученные из вектора гены резистентности, получали при последующем культивировании под давлением отбора. При стабильном росте отобранных клеточных пулов в химически определенной среде (PowerCHO2-CD, Lonza) при 37°C в атмосфере 7% CO2 в инкубаторе с круговой качалкой (100 об/мин, размах качания 50 мм) индивидуальные супернатанты анализировали методом ELISA для выявления вышеприведенных белков, а пулы клеток с максимальной удельной продуктивностью перед получением белка подвергали экспансии в качалочных колбах (круговая качалка, 100 об/мин, размах качания 50 мм).
Для получения белка в лабораторных масштабах индивидуальные клеточные пулы культивировали в течение 7-12 дней в химически определенной среде (PowerCHO2-CD, Lonza) при 37°C в атмосфере 7% CO2 в биореакторе 20/50 EHT типа Wave (GE Healthcare). Основная среда - PowerCHO2-CD с добавлением 4 мМ Glutamax. Культивирование типа Wave запускали при концентрации жизнеспособных клеток в 0,3-0,4×106 клеток/мл при следующих настройках (для мешка в 5 или 10 л): частота качания 18 об/мин, угол качания 7°, поток газа 0,2-0,3 л/мин, 7% CO2, 36,5°C. За один рабочий цикл Wave культуру клеток подпитывали дважды с помощью PowerFeed A (Lonza), обычно на 2-й день (подпитка 20%) и 5-й день (подпитка 30%). После второй подпитки повышали частоту качания до 22 об/мин, а угол качания до 8°.
Биореактор обычно убирали между 7-м и 12-м днем, когда жизнеспособность клеток падала ниже 80%. Сначала супернатант культуры осветляли с помощью ручной системы глубинной фильтрации (Millipore Millistak Pod, MC0HC 0,054 м2). Для белков со Strep-тегом добавляли авидин до конечной концентрации 0,5 мг/л. Наконец, супернатант культуры, содержащий слитый белок-агонист рецептора CD40, стерилизовали фильтрованием с помощью бутылочного фильтра (0,22 мкм, PES, Corning) и хранили при 2-8°C до дальнейшей обработки.
Для аффинной очистки набивали колонку сефарозой Streptactin (слой геля 1 мл), уравновешивали 15 мл буфера W (100 мМ трис-HCl, 150 мМ NaCl, pH 8,0) или PBS, pH 7,4 и наносили на колонку супернатант клеточной культуры со скоростью потока в 4 мл/мин. Затем промывали колонку 15 мл буфера W и элюировали связавшийся полипептид путем ступенчатого добавления 7×1 мл буфера E (100 мМ трис HCl, 150 мМ NaCl, 2,5 мМ детиобиотина, pH 8,0). С другой стороны, для этой операции можно использовать PBS pH 7,4, содержащий 2,5 мМ детиобиотина.
В качестве альтернативы методу на основе сефарозы Streptactin аффинную очистку проводили на колонке с иммобилизованным белком A в качестве аффинного лиганда на хроматографической установке Akta (GE Healthcare). В качестве твердой фазы был выбран материал с высоким сродством к Fc-домену слитого белка: MABSelect Sure™ (GE Healthcare). Вкратце, осветленный супернатант клеточной культуры наносили на колонку HiTrap MabSelectSure (CV = 5 мл), уравновешенную промывочным буфером-1 (20 мМ Pi, 95 мМ NaCl, pH 7,2), не превышая нагрузку в 10 мг слитого белка на 1 мл носителя. Колонку промывали 10 колоночными объемами (10CV) вышеприведенного уравновешивающего буфера, а затем 4 колоночными объемами (4CV) промывочного буфера-2 (20 мМ Pi, 95 мМ NaCl, pH 8,0), чтобы истощить белки и ДНК клеток хозяина. Затем колонку элюировали элюирующим буфером (20 мМ неорганического фосфата, 95 мМ NaCl, pH 3,5) и собирали элюат в виде десяти фракций, причем каждая фракция имела объем, равный объему носителя на колонке (5 мл). Каждую фракцию нейтрализовали равным объемом вышеприведенного промывочного буфера-2. При проведении аффинной хроматографии линейную скорость устанавливали равной 150 см/ч и поддерживали на этом уровне.
Во фракциях элюата определяли содержание белка, а пиковые фракции концентрировали ультрафильтрацией и подвергали дополнительной очистке методом эксклюзионной хроматографии (SEC).
SEC проводили на колонках Superdex 200 10/300 GL или HiLoad 26/60, используя хроматографическую установку Akta (GE Healthcare). Колонки уравновешивали фосфатно-солевым буфером и наносили на них концентрированный, прошедший аффинную очистку полипептид загружали в колонку SEC при объеме образца, не превышающем 2% (об/об) общего объема колонки. В случае колонок Superdex 200 10/300 GL (GE Healthcare) скорость потока составляла 0,5 мл/мин. В случае колонок HiLoad 26/60 Superdex 200 скорость потока составляла 2,5 мл в минуту. Профиль элюирования полипептида отслеживали по поглощению при 280 нм.
Хроматограммы при аналитической SEC гексавалентных слитых с scCD 40L-RBD-FC белков: БЕЛКА A, БЕЛКА B и БЕЛКА C представлены на фиг. 5.
Для определения кажущейся молекулярной массы очищенных слитых полипептидов в нативных условиях на колонку Superdex 200 наносили стандартные белки с известной молекулярной массой. Исходя из объема элюирования стандартных белков, строили калибровочную кривую и определяли кажущуюся молекулярную массу очищенных слитых полипептидов. Содержащие Fc-домен слитые белки-агонисты рецептора CD40 обычно элюируются из колонок Superdex200 с кажущейся молекулярной массой ок. 160-180 кДа, подтверждая гомодимеризацию зрелых слитых белков-агонистов рецептора CD40 под действием Fc-домена.
Пример 3. Результаты SDS-PAGE димерных белков, экспрессированных из белков A, B и C
Белки A, B и C экспрессировали и очищали в соответствии с примерами 1 и 2. Три очищенных белка либо не восстанавливали (дорожки 1, 4, и 7), либо восстанавливали дитиотреитолом (дорожки 2, 5, 8) и проводили гель-электрофорез SDS-PAGE в 4-12% бис-трис. Результаты представлены на фиг. 6. На дорожке 1 видно, что в невосстановительных условиях белок, экспрессированный из белка A, содержит полосы и мономера (85 кДа), и димера (170 кДа), что указывает на самовосстановление межцепочечных шарнирных дисульфидов эндогенными свободными тиолами, присутствующими в самом полипептиде. Напротив, на дорожках 4 и 7 видно, что в восстановительных условиях белки, экспрессированные из белка B и белка C, содержат только полосу димера (170 кДа), что означает отсутствие аутовосстановительных свойств у самих полипептидов, поэтому межцепочечные дисульфидные мостики в шарнирной области остаются невредимыми.
Пример 4. Тривалентный контрольный белок
Чтобы сравнить уровень связывания между гексавалентными слитыми белками-агонистами рецептора CD40 и тривалентным CD40, стабилизированным бактериофагом RB69-FOLDON, экспрессировали белок X (SEQ ID NO: 38) в клетках CHO-S и очищали, как описано в предыдущем разделе. Очищенный методом SEC белок служил в качестве контроля в следующих примерах. Последовательность белка X (SEQ ID NO: 38) представлена в таблице 7. Аминокислоты 1-20 белка X представляют сигнальный пептид, а зрелые белки начинаются с аминокислоты Gln21. Этот белок состоит из трех идентичных полипептидов, каждый из которых содержит один растворимый домен CD40L (Q121-L261 по SEQ ID NO: 1); эта сборка стабилизирована тримеризационным доменом фибритина бактериофага RB69, слитым через гибкий линкер с С-концом CD40L.
Таблица 7. Тривалентные контрольные белки, включая сигнальный пептид
SEQ ID NO: | Последовательность |
38 БЕЛОК X |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSGSSGSSGSSGSGYIEDAPSDGKFYVRKDGAWVELPTASGPSSSSSSAWSHPQFEK |
39 БЕЛОК X2 |
METDTLLVFVLLVWVPAGNGQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKLGSSSSSSAWSHPQFEK |
Пример 5. Клеточные анализы
5A. Анализ клеточного связывания для демонстрации связывания агонистов рецептора CD40 со своим нативным рецептором CD40 на поверхности B-клеток Ramos
Для того, чтобы дополнить наши данные по сродству агонистов рецептора CD40, полученные с помощью кварцевых микровесов (QCM), мы хотели исследовать, могут ли наши агонисты рецептора CD40 связываться со своим нативным рецептором на поверхности клеток. Поскольку B-клетки зависят от сигнализации CD40 для полной активации, для этого анализа использовали линию B-клеток Ramos человека. Известно, что клетки Ramos экспрессируют CD40 на своей поверхности, поэтому после инкубации с агонистами рецептора CD40 должен обнаруживаться C-концевой StrepTag II, связавшийся с нашими агонистами рецептора CD40, с помощью антитела. Затем это антитело, в свою очередь, можно детектировать с помощью флуоресцентного антитела и анализировать клетки на проточном цитометре.
B-клетки Ramos, экспрессирующие CD40 на своей поверхности, инкубировали с белком X (c), белком A (d), белком B (e) или белком C (f) на льду в течение 30 минут, чтобы прошло связывание рецептора с лигандами. Клетки промывали ледяным промывочным буфером, после чего инкубировали с поликлональным кроличьим антителом против StrepTagII на льду в течение 30 мин для выявления агонистов рецептора CD40, застрявших на поверхности клеток. Fc-рецепторы блокировали добавлением 1% IgG человека (Gamunex) в буферы для окрашивания и промывки. Клетки опять промывали ледяным промывочным буфером, а затем инкубировали с поликлональным помеченным Alexa488 козьим антителом против кролика на льду и в темноте в течение 20 мин. После этого клетки обрабатывали для проточной цитометрии путем промывки ледяным PBS. Клетки анализировали на проточном цитометре Guava Easycyte и регистрировали флуоресценцию на зеленом канале. В конечном счете, из первичных данных по проточной цитометрии получали средние значения флуоресценции с помощью программного обеспечения FlowJo путем настройки на живые клетки и анализа флуоресценции Alexa488 в пределах этого сектора (gate). В качестве контроля служили одни лишь клетки (a) и клетки, инкубированные только со вторичным козьим антителом против кролика (b).
Как видно из фиг. 7, все агонисты рецептора CD40 вызывают значительное повышение флуоресценции клеток по сравнению с одними лишь клетками или с клетками, инкубированными только со вторичным флуоресцентным антителом. При этом белок B давал самый большой сигнал флуоресценции (e), указывая на то, что белок B лучше связывается с клетками Ramos. По уровню сигнала за белком B следовал белок A (d) и белок X (c), а белок C (f) давал самый слабый сигнал. В целом из этих данных можно предположить, что все агонисты рецептора CD40 связываются со своим нативным рецептором в клеточном контексте in vitro, причем лучше всех связывается белок B.
5B. Повышающая регуляция CD86 на B-клетках как показатель запуска сигнализации CD40 агонистами рецептора CD40
CD86 является маркером активации на B-клетках человека и служит лигандом для CD28 и CTLA4 на T-клетках. Экспрессия CD86 на поверхности часто служит средством для описания активационного состояния B-клеток. Поскольку B-клетки нуждаются в нескольких сигналах для полной активации, включая B-клеточный рецептор и связывание лигандов CD40, мы задались вопросом, могут ли агонисты рецептора CD40 вызывать повышающую регуляцию поверхностной экспрессии CD86.
Для этого клетки B-клетки Ramos инкубировали с 1 мкг/мл белка X (b), 10 мкг/мл белка X (c), 1 мкг/мл белка A (d) или 10 мкг/мл белка A (e) в 24-луночных планшетах в течение ночи при 37°C и 5% CO2. Необработанные клетки служили контролем (a). На следующий день все образцы инкубировали с помеченным PE антителом против CD86 человека в течение 30 мин на льду и в темноте. Fc-рецепторы блокировали добавлением 1% IgG человека (Gamunex) в буферы для окрашивания и промывки. После этого образцы обрабатывали для проточной цитометрии на проточном цитометре Guava Easycyte. Из первичных данных по проточной цитометрии в конечном счете получали средние значения флуоресценции с помощью программного обеспечения FlowJo путем настройки на живые клетки и анализа флуоресценции PE в пределах этого сектора (gate). Средние значения флуоресценции использовали для выражения уровня CD86 на поверхности, причем эти значения нормировали по контрольному образцу, который не инкубировался с агонистами рецептора CD40 (а).
Как видно из фиг. 8, все агонисты рецептора CD40 вызывают повышение экспрессии CD86 на поверхности, указывая на то, что все соединения запускают сигнализацию CD40. Важно отметить, что это повышение было зависимым от дозы, если сравнить столбики b и c или d и e (1 мкг/мл против 10 мкг/мл того же соединения, соответственно). Кроме того, повышающая регуляция CD86 была сильнее у белка A, который является гексавалентным. Это означает четкий эффект авидности по сравнению с белком X, который является лишь тривалентным. Результаты показывают, что использовавшиеся при этом агонисты рецептора CD40 проявляют биологическую активность зависимым от дозы образом.
5C. Анализ цельной крови, показывающий стимуляцию иммунных клеток одновременно с повышающей регуляцией CD83 агонистами рецептора CD40
CD83 - поверхностная молекула, которая подвергается повышающей регуляции в процессе пролиферации и созревания иммунных клеток человека. CD83 встречается в основном на дендритных клетках и T-клетках и может использоваться в качестве маркера стимуляции иммунных клеток. Как показано в Chowdhury et al. (Cancer Immunology Research, 2013, doi: 10.1158/2326-6066.CIR-13-0070), повышающая регуляция CD83 может использоваться в качестве средства для изучения активации иммунных клеток после связывания CD40 антителами. Поэтому мы задались вопросом, могут ли наши агонисты рецептора CD40 также вызывать повышающую регуляцию CD83 при анализе на цельной крови.
Для этого отбирали цельную кровь у здоровых доноров в пробирки с ЭДТА. 2 мл крови инкубировали с 1 мкг/мл белка X (b), 50 мкг/мл белка X (c), 1 мкг/мл белка A (d) или 50 мкг/мл белка A (e) в 24-луночных планшетах в течение 4 часов при 37°C и 5% CO2. Необработанная кровь служила контролем (а). Через 4 часа все образцы инкубировали с помеченным PerCP/Cy5.5 антителом против CD83 человека в течение 20 мин при комнатной температуре и в темноте. После этого образцы обрабатывали для проточной цитометрии путем фиксации и лизиса эритроцитов с помощью лизирующего раствора BD FACS в соответствии с инструкциями производителя. Образцы анализировали на проточном цитометре Guava Easycyte и засекали популяции клеток (гранулоциты, лимфоциты и моноциты) по профилю светорассеяния. Для каждой популяции регистрировали флуореценцию в дальнем красном канале и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo. Определяли процент CD83-положительных клеток и нормировали по контрольному образцу, который не инкубировался с агонистами рецептора CD40.
Как видно из фиг. 9, как белок X, так и белок A вызывают появление новой CD83-положительной популяции по сравнению с необработанными клетками крови (a). Эта новая CD83-положительная популяция появилась у всех анализируемых клеточных популяций (лимфоциты, моноциты и гранулоциты) и была наиболее заметной в случае лимфоцитов. Важно отметить, что процентная доля CD83-положительных клеток была зависимой от дозы, если сравнить столбики b и c или d и e (1 мкг/мл по сравнению с 50 мкг/мл одного и того же соединения, соответственно). Кроме того, величина CD83-положительной популяции была больше у гексавалентного белка A по сравнению с белком X в тех же дозах. Результаты свидетельствуют о четком эффекте авидности у гексавалентного белка A по сравнению с тривалентным белком X. Результаты также свидетельствуют, что использовавшиеся при этом агонисты рецептора CD40 проявляют биологическую активность зависимым от дозы образом на свежей крови человека.
Пример 6. Анализ связывания in vitro с иммобилизованным рецептором CD40
Рассчитывали равновесные константы связывания (KD) тривалентных конструкций CD40L (например, белка X) и гексавалентных конструкций CD40L (например, белка A, белка B и белка C) с CD40 по кинетическим данным связывания (kon и koff), которые определяли с помощью автоматизированной биосенсорной системы (Attana A100). A100 позволяет исследовать молекулярные взаимодействия в реальном времени на основе метода кварцевых микровесов (QCM).
Для этого CD40-Fc человека, приобретенный у Enzo (кат. номер: ALX-522-016-C050), иммобилизировали на поверхности карбоксил-активированного чипа для QCM. В качестве растворимого аналита использовали тримерные и гексамерные конструкции CD40L в концентрациях 1, 5 и 10 мкг/мл. Анализировали константы связывания (kon) и диссоциация (koff). Измерения в реальном времени и рассчитанные из них значения KD показали сравнимую связывающую активность у всех гексавалентных белков A, B и C, но лучшее связывание гексавалентных белков в сравнении с тривалентным белком X.
Таблица 8. Показатели связывания
Соединение | kon | koff | KD [моль] |
Белок X | 9,87e4 | 8,93e-4 | 9,05e-9 |
Белок A | 1,75e6 | 2,92e-4 | 1,67e-10 |
Белок B | 1,91e6 | 2,90e-4 | 1,52e-10 |
Белок C | 1,82e6 | 3,21e-4 | 1,76e-10 |
Пример 7. Определение времени полужизни
Молекулы белка A/белка B/белка C состоят из двух полипептидов, соединенных ковалентно тремя межцепочечными дисульфидными связями, и все они содержат мутацию N297S в положении 297 Fc-области (по системе EU), что приводит к агликозилированию домена CH2. Цистеины на внешней поверхности растворимых доменов CD40L заменяли на серин (эквивалентные C194 положения в CD40L, как показано в SEQ ID NO: 1), получая SEQ ID NO: 31 (белок B) с C94S, C243S, C392S по сравнению с SEQ ID NO: 15 (белок A). С другой стороны, цистеины на внешней поверхности растворимых доменов CD40L заменяли на аланин (эквивалентные C194 положения в CD40L, как показано в SEQ ID NO: 1), получая SEQ ID NO: 35 (белок C) с C94A, C243A, C392A, по сравнению с SEQ ID NO: 15 (белок A). Для оценки эффекта, вызванного этими изменениями, определяли время полужизни полученных слитых с Fc белков.
Самки мышей NMRI получали 1,0 мг/кг каждого соединения (белка A/белка B/белка C) в виде однократной внутривенной инъекции болюсом. Собирали цельную кровь перед введением (до препаратов) и вплоть до 312 часов после введения исследуемых препаратов. Готовили сыворотку и хранили образцы при -80°C до определения их концентрации в сыворотке.
Определение концентрации белка A/белка B/белка C в сыворотке мышей проводили методом ELISA, определяющим индивидуальные агонисты CD40, приведенные в таблице 7. Планшеты покрывали CD40-Fc. Затем детектировали конструкции CD40-лиганд, специфически связавшиеся со своим рецептором CD40 через их Strep-теги, с помощью StrepTactin-HRP. Проводили анализы методом ELISA, используя белок A или белок B или белок C в качестве калибровочных и контрольных образцов. Данные от измерений при стандартных концентрациях использовали для построения калибровочных кривых с подгонкой по 5 параметрам. Это позволяло определить неизвестные концентрации белка A или белка B или белка C в соответствующих образцах сыворотки мышей.
Фармакокинетические параметры рассчитывали, используя средние концентрации в сыворотке и программу фармакокинетической оценки PK Solutions версии 2.0 для некомпартментного анализа фармакокинетических данных (Summit Research Services, Montrose, CO). PK Solutions представляет собой автоматизированное приложение на основе Excel, которое вычисляет фармакокинетические параметры из данных типа концентрация-время, полученных при анализе, например, биологических образцов после внутривенного или внесосудистого введения. PK Solutions рассчитывает результаты без принятия какой-либо конкретной компартментной модели.
Результаты оценки фармакокинетики приведены в таблице 9.
Таблица 9. Результаты поискового исследования PK на мышах NMRI: однократная внутривенная доза 1 мг/кг белка A/белка B/белка C
Белок A | Белок B | Белок C | |
tmax (ч) | 0,083 | 0,083 | 0,083 |
Cmax (мкг/мл) | 8,22 | 10,23 | 9,74 |
tlast (ч) | 192 | 312 | 144 |
Clast (мкг/мл) | 0,286 | 0,122 | 0,242 |
t1/2 E (ч) | 70,85 | 79,25 | 60,46 |
t1/2 E (д) | 2,95 | 3,30 | 2,52 |
AUC0-t (мкг·ч/мл) | 178 | 273 | 134 |
AUC0-inf (мкг·ч/мл) | 222 | 287 | 155 |
Результаты показывают, что белок B, который содержит субпоследовательность Q121-L261 с мутацией C194S, проявляет более продолжительную стабильность in vivo по сравнению с диким типом (белок A) или белком C, содержащим мутацию C194A.
Пример 8. Испытание на стабильность/агрегацию (прогностический пример)
Определяли содержание мономеров и агрегатов аналитическим методом SEC, как описано в Примере 2. Для этой конкретной цели проводили анализ в буферах, содержащих физиологические концентрации солей при физиологическом рН (например, 0,9% NaCl, pH 7,4; PBS, pH 7,4). Типичный анализ агрегации проводили на колонке Superdex 200 (GE Healthcare). Эта колонка разделяет белки в диапазоне от 10 до 800 кДа.
Для определения кажущейся молекулярной массы очищенных слитых полипептидов в нативных условиях на колонку Superdex 200 наносили стандартные белки с известной молекулярной массой. Исходя из объема элюирования стандартных белков, строили калибровочную кривую и рассчитывали кажущуюся молекулярную массу очищенных слитых белков с неизвестной молекулярной массой на основе объема элюирования.
При анализе методом SEC растворимого, неагрегированного белка обычно проявляется отчетливый одиночный пик белка при определенном объеме элюирования (который измеряется по OD при 280 нм или OD при 214 нм). Этот объем элюирования соответствует кажущейся нативной молекулярной массе данного белка. Что касается определения “мономера” в случае слитых с Fc белков, то сборка из двух полипептидных цепей управляется Fc-частью белка, а функциональной единицей служит белок, состоящий из двух цепей. Эта единица, содержащая две соединенные с Fc полипептидные цепи, определяется как “мономер” в случае слитых с Fc белков независимо от того, что они представляют собой димеризованные одноцепочечные слитые полипептиды.
Если происходит агрегация белка, то при анализе методом SEC появляются дополнительные пики белка с меньшими объемами удерживания. В качестве зародышей агрегации могут служить белки-олигомеры, а высокое содержание олигомеров может приводить к агрегации белка. Олигомеры с большой молекулярной массой и агрегаты элюируются в пустом объеме колонки Superdex 200 и их невозможно анализировать методом SEC в отношении их нативной молекулярной массы.
Очищенные препараты слитых белков-агонистов рецептора CD40 предпочтительно должны содержать только заданный мономерный белок и лишь очень небольшое количество олигомерного белка. Степень агрегации/олигомеризации конкретного препарата слитого белка-агониста рецептора CD40 определяется на основании анализа SEC путем вычисления площади пиков на графике OD280 для данного мономера и фракции олигомеров/агрегатов, соответственно. Исходя из общей площади пиков, содержание мономера данного белка рассчитывается следующим образом:
содержание мономера [%] = [площадь пика мономерного белка]/[общая площадь пиков] ×100.
В настоящем изобретении под определение растворимого белка подходят белковые препараты очищенных белков-агонистов рецептора CD40 в буфере с физиологической концентрацией солей при физиологическом рН, которые имеют содержание заданного растворимого белка > 90% в типичном диапазоне концентрации белка от 0,2 до 10,0 мг/мл.
Пример 9. Запуск сигнализации CD40 агонистами рецептора CD40 повышает экспрессию маркеров активации на M2-поляризованных макрофагах
Макрофаги типа M2 характеризуются слабой экспрессией таких маркеров активации/молекул активации T-клеток, как CD83, CD86 и HLA, и сильной экспрессией таких иммунорегуляторных молекул, как IL-10. Поэтому макрофаги типа M2 часто называют проопухолевыми в отличие от “противоопухолевых” макрофагов типа M1. Мы решили проверить, может ли обработка белком B (SEQ ID NO: 31) усилить развитие макрофагов типа M1 в обычных условиях M2-поляризации. Для этого выделяли и очищали мононуклеарные клетки периферической крови человека (PBMCs) из лейкоцитной пленки, полученной от здоровых добровольцев, используя Ficoll-Hypaque (Sigma) в соответствии с инструкциями производителя. Выделяли моноциты при культивировании РВМСs в среде RPMI в 12-луночных планшетах в течение 2 ч при 37°C. Моноциты инкубировали в условиях M2-поляризации, в присутствии IL-4 (50 нг/мл) и IL-10 (50 нг/мл), или в одной лишь среде в течение 3 дней. При этой инкубации в половину лунок добавляли белок B (50 нг/мл) либо контрольную среду. На 3-й день суспензии клеток окрашивали с помощью коктейля из моноклональных антител, включающего CD206, CD163, CD86, CD83, HLA-DR и CD4 (BioLegend, eBioscience или BD Biosciences). Для устранения мертвых клеток из анализа использовали DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндол, дигидрохлорид) (ThermoFisher) в соответствии с инструкциями производителя. Клетки анализировали на проточном цитометре Guava Easycyte 12 (Merck Millipore). Используя изотипичные контроли, проверяли качество антител и проводили стробирование (gating). Для анализа данных по проточной цитометрии использовали программное обеспечение Tree Star FlowJo и Guava InCyte. Экспрессию определяли количественно по секторам (gates) и средней интенсивности флуоресценции (MFI). Обработка IL-4 и IL-10 (M2-поляризация макрофагов) увеличивала экспрессию CD206 и CD163, классических маркеров макрофагов типа M2, на моноцитах (см. таблицу 10). Напротив, одновременная обработка белком B уменьшала экспрессию CD206 и CD163 с 37% до 22%. CD86 (B7.2) является классической костимулирующей T-клетки молекулой и партнером по связыванию CD28, тогда как CD83 является маркером созревания антиген-презентирующих клеток. Важно отметить, что обработка белком B повышала совместную экспрессию CD86 и CD83 с 5% до 20% по сравнению с одними лишь IL-4/IL-10. Кроме того, после обработки белком B повышалась экспрессия HLA-DR,DP с 94 до 162 MFI по сравнению с одними лишь IL-4/IL-10. Эти результаты показывают, что обработка белком B повышает уровень активации M2-поляризованных макрофагов и делает их более сильными антигенпрезентирующими клетками.
Таблица 10. Условия M2-поляризации: IL-4 (50 нг/мл) и IL-10 (50 нг/мл) в течение 3 дней
Нестимулирован-ные моноциты | M2-поляризован- ные моноциты |
M2-поляризован- ные моноциты с 50 нг/мл scCD40L-RBD-Fc |
|
Содержание макрофагов CD206+ и CD163+ (типа M2) | 27% | 37% | 22% |
Содержание макрофагов CD86+ и CD83+ (маркеров активации) | 7% | 5% | 20% |
HLA-DR,DP (MFI) | 82 | 94 | 162 |
Пример 10. Обработанные агонистами рецептора CD40, M2-поляризованные макрофаги являются более сильными антигенпрезентирующими клетками для активации наивных T-клеток CD4+ в аллогенной системе совместного культивирования
Макрофаги типа М2 характеризуются слабой способностью к стимуляции T-клеточных реакций из-за низкой экспрессии HLA и костимулирующих молекул (например, CD86). Мы хотели проверить, может ли обработка белком B повысить эту способность у макрофагов типа M2. Для этого получали макрофаги типа M2, как описано выше, с помощью IL-10 и IL-4 (по 50 нг/мл). Выделяли наивные T-клетки CD4+ из РВМСs от второго (аллогенного) донора с помощью набора для выделения наивных T-клеток CD4+ Kit II (Miltenyi) в соответствии с инструкциями производителя. T-клетки метили с помощью набора CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit (ThermoFisher) в соответствии с инструкциями производителя. К наивным T-клеткам CD4+ добавляли моноциты, прошедшие обработку в течение 3 дней, в соотношении 10 лимфоцитов на 1 моноцит. Через 3 дня измеряли пролиферацию и дробление (рост перед делением клеток) T-клеток, используя CFSE и прямое рассеяние света (FSC), соответственно. Лишь 2% T-клеток, инкубированных в одной лишь среде, проявляли признаки пролиферации (разбавление CFSE) или дробления (повышение FSC) (см. таблицу 11). Напротив, 23% T-клеток, инкубированных с нестимулированными аллогенными моноцитами, проявляли признаки активации. Инкубация T-клеток с M2-поляризованными макрофагами снижала T-клеточный ответ до 16%. Интересно, что добавление белка B в условиях M2-поляризации усиливала способность аллогенных макрофагов и ответ отмечался у 31% T-клеток. Эти данные свидетельствуют, что обработка моноцитов AGP1233 в обычных условиях M2-поляризации ведет к получению более сильных антиген-презентирующих клеток.
Таблица 11. Условия M2-поляризации: IL-4 (50 нг/мл) и IL-10 (50 нг/мл) в течение 3 дней
Только T-клетки CD4+ | T-клетки CD4+ + нестимулированные моноциты | T-клетки CD4+ + M2-поляризованные моноциты | T-клетки CD4+ + M2-поляризованные моноциты с 50 нг/мл scCD40L-RBD-Fc | |
Содержание T-клеток CFSEdim или FSChigh | 2% | 23% | 16% | 32% |
Пример 11. Запуск сигнализации CD40 гексавалентным агонистом рецептора CD40 наиболее эффективно повышает экспрессию маркеров активации и уменьшает развитие макрофагов типа M2 после культивирования с очищенными моноцитами человека
Для проверки эффективности кластеризации рецепторов и нисходящей сигнализации сравнивали гексавалентный агонист белок B по изобретению с двумя гомотримерными тривалентными агонистами рецептора CD40, представляющими распространенные инженерные концепции, известные в данной области. Белок X2 (SEQ ID NO: 39) представляет собой гомотримерный, нестабилизированный CD40L-RBD сам по себе, а белок X (SEQ ID NO: 38) - гомотримерный CD40L-RBD, стабилизированный C-концевым слитым тримеризационным каркасом, происходящим из бактериофага RB69. Поскольку мы показали, что продуктивная сигнализация рецептора CD40 вызывает повышающую регуляцию маркеров активации и усиление развития макрофагов типа M1, мы очищали моноциты человека из лейкоцитной пленки, как описано выше. Очищенные моноциты инкубировали в среде с добавлением трех различных конструкций (см. таблицу 12) при трех различных концентрациях (10, 100 и 1000 нг/мл) в течение 3 дней, а затем проводили анализ клеток методом проточной цитометрии на экспрессию маркеров активации и фенотипа. Обработка гексавалентным белком B при всех трех концентрациях вызывала зависимое от дозы повышение экспрессии CD86 (как по MFI, так и по содержанию положительных) по сравнению с контролем. Напротив, ни одна из концентраций тривалентного белка X2 не вызывала отличий от контроля. В случае стабилизированного каркасом RB69 тривалентного белка X только самая высокая концентрация вызывала небольшое повышение экспрессии CD86. Кроме того, такой же эффект соединения и дозы отмечался и с экспрессией HLA-DR,DP, что подтверждает, что даже небольшие дозы гексавалентной конструкции достаточны для кластеризации рецепторов и продуктивной сигнализации, тогда как тривалентные конструкции не проявляют или проявляют низкую активность при очень высоких концентрациях. Наконец, примерно у 20% моноцитов в среде обычно через 3 дня усиливается экспрессия CD206 и CD163, что указывает на появление макрофагов типа M2. При обработке гексавалентным белком B при всех трех концентрациях это снижалось до менее 3%. В соответствии с данными по маркерам активации, только при высокой концентрации тривалентного белка X проявлялось кое-какое снижение макрофагов типа M2. В совокупности эти данные свидетельствуют о превосходной биологической активности белка B по изобретению.
Таблица 12. Моноциты культивировали 3 дня в указанных условиях
Условия культивирования | Только среда | Белок X2 (нг/мл) | Белок X (нг/мл) | Белок B (нг/мл) | ||||||
10 | 100 | 1000 | 10 | 100 | 1000 | 10 | 100 | 1000 | ||
CD86 (MFI) | 12 | 11 | 12 | 11 | 11 | 11 | 12 | 17 | 39 | 47 |
Содержание макрофагов CD86+ | 8% | 7% | 7% | 8% | 7% | 8% | 16% | 30% | 58% | 64% |
HLA-DR,DP (MFI) | 27 | 26 | 29 | 22 | 26 | 26 | 31 | 39 | 54 | 55 |
Содержание макрофагов HLA-DR,DP+ | 5% | 5% | 7% | 2% | 5% | 6% | 12% | 20% | 35% | 37% |
Содержание макрофагов CD206+ и CD163+ (типа M2) |
23% | 21% | 23% | 21% | 17% | 21% | 10% | 3% | 2% | 1% |
Изобретение также относится к следующим пунктам 1-22
1. Белок-агонист рецептора CD40, включающий полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 и 25-35.
2. Белок-агонист рецептора CD40, включающий два полипептида, каждый из которых имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 27, 28, 29, 30, 32 или 34.
3. Белок-агонист рецептора CD40 по п. 2, при этом два полипептида соединяются ковалентно через три межцепочечные дисульфидные связи, образующиеся между остатками цистеина 453, 459 и 462 каждого полипептида.
4. Белок-агонист рецептора CD40 по п. 2 или 3, при этом один или несколько остатков аспарагина в положениях 147 и 296 полипептида/полипептидов являются N-гликозилированными.
5. Белок-агонист рецептора CD40 по п. 2 или 3, при этом остатки аспарагина в обоих положениях 147 и 296 полипептида/полипептидов являются N-гликозилированными.
6. Белок-агонист рецептора CD40 по п. 1-5, при этом полипептид/полипептиды подвергаются дальнейшей посттрансляционной модификации.
7. Белок-агонист рецептора CD40 по п. 6, при этом посттрансляционная модификация включает превращение N-концевого глутамина в пироглутамат.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая белок-агонист рецептора CD40 по любому из п.п. 1-7 и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей и/или адъювантов.
9. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок-агонист рецептора CD40 по п. 1.
10. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 9.
11. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 9.
12. Клетка по п. 11, которая является эукариотической клеткой.
13. Клетка по п. 11, при этом клетка является клеткой млекопитающих.
14. Клетка по п. 11, при этом клетка является клеткой яичников китайского хомячка (CHO).
15. Способ лечения лица, страдающего заболеванием или расстройством, связанным с CD40L, причем способ включает введение ему эффективного количества белка-агониста рецептора CD40 по любому из п.п. 1-7.
16. Способ по п. 15, при этом заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из: опухолей, инфекционных заболеваний, воспалительных заболеваний, метаболических заболеваний, аутоиммунных заболеваний, дегенеративных заболеваний, заболеваний, связанных с апоптозом, и отторжения трансплантатов.
17. Способ по п. 16, при этом опухоли представляют собой солидные опухоли.
18. Способ по п. 16, при этом опухоли представляют собой лимфатические опухоли.
19. Способ по п. 16, при этом аутоиммунные заболевания представлены ревматоидными заболеваниями или артритными заболеваниями либо ревматоидными и артритными заболеваниями.
20. Способ по п. 16, при этом заболевание представлено ревматоидным артритом.
21. Способ по п. 16, при этом дегенеративное заболевание представлено нейродегенеративным заболеванием.
22. Способ по п. 21, при этом нейродегенеративное заболевание представлено рассеянным склерозом.
Claims (25)
1. Белок-агонист рецептора CD40, содержащий два одноцепочечных слитых полипептида, соединенных дисульфидными связями, где полипептид включает следующие компоненты:
(i) первый растворимый домен CD40L,
(ii) первый пептидный линкер,
(iii) второй растворимый домен CD40L,
(iv) второй пептидный линкер, и
(v) третий растворимый домен CD40L, и
(vi) Fc-фрагмент антитела, причем Fc-фрагмент антитела (vi) состоит из аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 13,
причем первый и второй пептидные линкеры (ii) и (iv) состоят из аминокислотной последовательности по SEQ ID NO: 2, а Fc-фрагмент антитела (vi) слит с С-концом третьего растворимого домена CD40L (v) через шарнирный линкер с последовательностью SEQ ID NO: 16,
где каждый из растворимых доменов CD40L состоит из аминокислот 121-261 в CD40L человека по SEQ ID NO: 1, и где аминокислотная последовательность растворимого домена CD40L необязательно может содержать одну из мутаций C194S и C194A по сравнению с SEQ ID NO: 1,
где указанный белок-агонист рецептора CD40 необязательно может содержать N-концевой домен сигнального пептида,
где указанный белок-агонист рецептора CD40 необязательно может содержать C-концевой Strep-тег,
причем наиболее предпочтительно указанный белок-агонист рецептора CD40 имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 15, 27, 31, 35.
2. Белок-агонист рецептора CD40 по п. 1, который практически не подвержен агрегации.
3. Белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1, 2, в котором в первом и втором пептидных линкерах (ii) и (iv) остаток аспарагина может быть гликозилирован.
4. Белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-3, в котором N-концевой домен сигнального пептида может иметь аминокислотную последовательность по SEQ ID NO: 17, который может содержать сайт расщепления протеазой, а Strep-тег может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
5. Белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-4, включающий два полипептида, каждый из которых имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 27.
6. Белок-агонист рецептора CD40 по п.5, при этом два полипептида, каждый из которых включает аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 27, ковалентно связаны тремя межцепочечными дисульфидными связями, образующимися между остатками цистеина 453, 459 и 462 каждого полипептида.
7. Белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-6, в котором один или несколько остатков аспарагина в положениях 147 и 296 этих полипептидов являются N-гликозилированными.
8. Белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-7, в котором полипептид/полипептиды подвергаются дальнейшей посттрансляционной модификации, где посттрансляционная модификация включает превращение N-концевого глутамина в пироглутамат.
9. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-7.
10. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 9 в функциональной связи с контролирующей экспрессию последовательностью, причем этот вектор подходит для экспрессии в клетках млекопитающих.
11. Клетка для экспрессии белка-агониста рецептора CD40 по любому из пп.1-7, трансформированная или трансфицированная молекулой нуклеиновой кислоты по п. 9 в функциональной связи с контролирующей экспрессию последовательностью или экспрессионным вектором по п. 10, причем клетка представлена, например, прокариотической клеткой или эукариотической клеткой, предпочтительно клеткой млекопитающего или более предпочтительно клеткой человека либо клеткой яичников китайского хомячка (CHO), причем указанная клетка не является клеткой зародышевой линии клеток человека.
12. Фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики заболеваний, ассоциированных с CD40L, содержащая в качестве активного средства белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-8 в терапевтически эффективном количестве, а также включающая один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей и/или адъювантов.
13. Фармацевтическая композиция по п. 12 для применения для лечения и/или профилактики пролиферативных заболеваний, инфекционных заболеваний, воспалительных заболеваний, метаболических заболеваний, аутоиммунных заболеваний или дегенеративных заболеваний.
14. Диагностическая композиция для диагностики заболеваний, ассоциированных с CD40L, содержащая в качестве активного средства белок-агонист рецептора CD40 по любому из пп. 1-8 в эффективном количестве, а также включающая один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей и/или адъювантов.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562156813P | 2015-05-04 | 2015-05-04 | |
US62/156813 | 2015-05-04 | ||
PCT/EP2016/059983 WO2016177771A1 (en) | 2015-05-04 | 2016-05-04 | Single-chain cd40-receptor agonist proteins |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017141727A RU2017141727A (ru) | 2019-06-04 |
RU2017141727A3 RU2017141727A3 (ru) | 2019-11-05 |
RU2745801C2 true RU2745801C2 (ru) | 2021-04-01 |
Family
ID=56087236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017141727A RU2745801C2 (ru) | 2015-05-04 | 2016-05-04 | Одноцепочечные белки-агонисты рецептора cd40 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10793616B2 (ru) |
EP (1) | EP3292143B1 (ru) |
JP (1) | JP6738831B2 (ru) |
KR (1) | KR20170138585A (ru) |
CN (1) | CN107709355B (ru) |
AU (1) | AU2016257000B2 (ru) |
BR (1) | BR112017023646A2 (ru) |
CA (1) | CA2984350A1 (ru) |
ES (1) | ES2754432T3 (ru) |
MX (1) | MX2017014140A (ru) |
RU (1) | RU2745801C2 (ru) |
WO (1) | WO2016177771A1 (ru) |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017197231A1 (en) * | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Medimmune, Llc | Cd40l-fc fusion polypeptides and methods of use thereof |
CA3046337C (en) | 2016-12-09 | 2021-06-01 | Akston Biosciences Corporation | Insulin-fc fusions and methods of use |
EP3781203A4 (en) | 2018-04-20 | 2022-04-13 | Lyvgen Biopharma Co., Ltd. | ANTI-CD40 ANTIBODIES AND USES THEREOF |
US11267862B2 (en) | 2018-06-29 | 2022-03-08 | Akston Biosciences Corporation | Ultra-long acting insulin-Fc fusion proteins and methods of use |
HRP20221418T1 (hr) | 2018-06-29 | 2023-01-06 | Akston Biosciences Corporation | Inzulin-fc fuzijski proteini ultra-dugog djelovanja i postupci uporabe |
CN116063495A (zh) | 2018-09-28 | 2023-05-05 | 礼进生物医药科技(上海)有限公司 | 具有经过工程化的Fc结构域的抗CD40结合分子及其治疗用途 |
CA3114567A1 (en) * | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Lyvgen Biopharma Co., Ltd. | Anti-cd40 binding molecules having engineered fc domains and therapeutic uses thereof |
CN113811547B (zh) * | 2019-03-27 | 2024-06-25 | 国家医疗保健研究所 | 具有cd40激活特性的重组蛋白 |
CN113728008B (zh) | 2019-04-10 | 2024-04-09 | 南开大学 | 抗cd40抗体及其用途 |
CN110760541B (zh) * | 2019-10-31 | 2022-03-29 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 用中国仓鼠卵巢细胞表达外源蛋白时信号肽的选择方法及应用 |
EP4282473A3 (en) | 2019-12-19 | 2024-02-21 | Akston Biosciences Corporation | Ultra-long acting insulin-fc fusion proteins and methods of use |
US11186623B2 (en) | 2019-12-24 | 2021-11-30 | Akston Bioscience Corporation | Ultra-long acting insulin-Fc fusion proteins and methods of use |
KR20220167317A (ko) | 2020-04-10 | 2022-12-20 | 악스톤 바이오사이언시스 코퍼레이션 | Covid-19 융합 단백질에 대한 항원 특이적 면역요법 및 사용 방법 |
US11192930B2 (en) | 2020-04-10 | 2021-12-07 | Askton Bioscences Corporation | Ultra-long acting insulin-Fc fusion protein and methods of use |
US11198719B2 (en) | 2020-04-29 | 2021-12-14 | Akston Biosciences Corporation | Ultra-long acting insulin-Fc fusion protein and methods of use |
EP4149964A2 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Apogenix AG | Multi-specific immune modulators |
WO2023004406A2 (en) | 2021-07-23 | 2023-01-26 | Akston Biosciences Corporation | Insulin-fc fusion proteins and methods of use to treat cancer |
WO2023088876A1 (en) | 2021-11-16 | 2023-05-25 | Apogenix Ag | Multi-specific immune modulators |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010010051A1 (en) * | 2008-07-21 | 2010-01-28 | Apogenix Gmbh | Tnfsf single chain molecules |
US20100303811A1 (en) * | 2008-06-16 | 2010-12-02 | Atsuo Ochi | Recombinant multiple domain fusion protein mitogens and use thereof for inducing enhancement or repression of antigen-specific immunity. |
WO2013136193A2 (en) * | 2012-03-16 | 2013-09-19 | University Health Network | Methods and compositions for modulating toso activity |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AR025984A1 (es) | 1999-10-07 | 2002-12-26 | Maxygen Aps | Polipeptidos oligomericos de cadena simple |
DE19963859A1 (de) | 1999-12-30 | 2001-07-12 | Apotech Res & Dev Ltd | Bi- oder Oligomer eines Di-, Tri-, Quattro- oder Pentamers von rekombinanten Fusionsproteinen |
CA2314199A1 (en) | 2000-07-21 | 2002-01-21 | Robert Simoneau | C-chip |
DE602004022390D1 (de) | 2003-03-26 | 2009-09-17 | Apogenix Gmbh | Verbesserte fc-fusionsproteine |
DE102004014983A1 (de) | 2004-03-26 | 2005-10-20 | Univ Stuttgart | Rekombinante Polypeptide der Mitglieder der TNF Ligandenfamilie und deren Verwendung |
UA94213C2 (ru) * | 2004-09-17 | 2011-04-26 | Домантис Лимитед | Применение полипептида одноцепочечного антитела, который подавляет активность cd40 или cd40l в приготовлении медикамента для лечения аутоиммунного заболевания |
CA2602663A1 (en) | 2005-03-31 | 2006-10-05 | Xencor, Inc. | Fc variants with optimized properties |
JP2008537941A (ja) * | 2005-03-31 | 2008-10-02 | ゼンコー・インコーポレイテッド | 最適化特性を有するFc変異体 |
WO2009060159A1 (en) * | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Medigene Limited | Mutated ilt molecules |
NZ589434A (en) | 2008-06-03 | 2012-11-30 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof |
US10533054B2 (en) * | 2013-01-31 | 2020-01-14 | Thomas Jefferson University | Agonist fusion protein for CD40 and OX40 and methods of stimulating the immune system |
WO2014202773A1 (en) * | 2013-06-20 | 2014-12-24 | Innate Pharma | Enzymatic conjugation of polypeptides |
NO2776305T3 (ru) * | 2014-04-23 | 2018-01-27 |
-
2016
- 2016-05-04 MX MX2017014140A patent/MX2017014140A/es unknown
- 2016-05-04 CN CN201680032719.0A patent/CN107709355B/zh active Active
- 2016-05-04 ES ES16725774T patent/ES2754432T3/es active Active
- 2016-05-04 RU RU2017141727A patent/RU2745801C2/ru active
- 2016-05-04 JP JP2017555643A patent/JP6738831B2/ja active Active
- 2016-05-04 KR KR1020177035006A patent/KR20170138585A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-05-04 WO PCT/EP2016/059983 patent/WO2016177771A1/en active Application Filing
- 2016-05-04 AU AU2016257000A patent/AU2016257000B2/en active Active
- 2016-05-04 EP EP16725774.0A patent/EP3292143B1/en active Active
- 2016-05-04 CA CA2984350A patent/CA2984350A1/en active Pending
- 2016-05-04 BR BR112017023646A patent/BR112017023646A2/pt not_active IP Right Cessation
-
2017
- 2017-10-26 US US15/795,020 patent/US10793616B2/en active Active
-
2020
- 2020-10-05 US US17/063,018 patent/US20210032309A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100303811A1 (en) * | 2008-06-16 | 2010-12-02 | Atsuo Ochi | Recombinant multiple domain fusion protein mitogens and use thereof for inducing enhancement or repression of antigen-specific immunity. |
WO2010010051A1 (en) * | 2008-07-21 | 2010-01-28 | Apogenix Gmbh | Tnfsf single chain molecules |
WO2013136193A2 (en) * | 2012-03-16 | 2013-09-19 | University Health Network | Methods and compositions for modulating toso activity |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
ALLEN R. C. et al., CD40 ligand gene defects responsible for X-linked hyper-IgM syndrome, Science, 1993, V. 259, N. 5097, p.990-993. * |
CHEN X. et al., Fusion protein linkers: property, design and functionality, Advanced drug delivery reviews, 2013, V. 65, N. 10, p.1357-1369. * |
GASSER B. et al., Antibody production with yeasts and filamentous fungi: on the road to large scale?, Biotechnology letters, 2007, V. 29, N. 2, p.201-212. * |
MACCHI P. et al., Characterization of nine novel mutations in the CD40 ligand gene in patients with X-linked hyper IgM syndrome of various ancestry, American journal of human genetics, 1995, V. 56, N. 4, p.898-906. * |
MAEDA Y. et al., Engineering of functional chimeric protein G-VargulaLuciferase, Analytical biochemistry, 1997, V. 249, N. 2, p.147-152. * |
SEYAMA K. et al., Mutations of the CD40 ligand gene and its effect on CD40 ligand expression in patients with X-linked hyper IgM syndrome, Blood, 1998, V. 92, N. 7, p.2421-2434. * |
SEYAMA K. et al., Mutations of the CD40 ligand gene and its effect on CD40 ligand expression in patients with X-linked hyper IgM syndrome, Blood, 1998, V. 92, N. 7, p.2421-2434. ALLEN R. C. et al., CD40 ligand gene defects responsible for X-linked hyper-IgM syndrome, Science, 1993, V. 259, N. 5097, p.990-993. MACCHI P. et al., Characterization of nine novel mutations in the CD40 ligand gene in patients with X-linked hyper IgM syndrome of various ancestry, American journal of human genetics, 1995, V. 56, N. 4, p.898-906. CHEN X. et al., Fusion protein linkers: property, design and functionality, Advanced drug delivery reviews, 2013, V. 65, N. 10, p.1357-1369. MAEDA Y. et al., Engineering of functional chimeric protein G-VargulaLuciferase, Analytical biochemistry, 1997, V. 249, N. 2, p.147-152. ВЫХРИСТЕНКО Л. Р. и др., Первичные иммунодефициты гуморального иммунитета, диагностированные у взрослых, Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2007, N. 1, с.8-18. GASSER B. et al., Antibody * |
ВЫХРИСТЕНКО Л. Р. и др., Первичные иммунодефициты гуморального иммунитета, диагностированные у взрослых, Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2007, N. 1, с.8-18. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2016177771A9 (en) | 2017-06-29 |
CA2984350A1 (en) | 2016-11-10 |
US20180066036A1 (en) | 2018-03-08 |
US10793616B2 (en) | 2020-10-06 |
AU2016257000A1 (en) | 2017-11-23 |
US20210032309A1 (en) | 2021-02-04 |
RU2017141727A (ru) | 2019-06-04 |
CN107709355B (zh) | 2021-09-14 |
WO2016177771A1 (en) | 2016-11-10 |
MX2017014140A (es) | 2018-03-15 |
RU2017141727A3 (ru) | 2019-11-05 |
CN107709355A (zh) | 2018-02-16 |
BR112017023646A2 (pt) | 2018-07-17 |
JP6738831B2 (ja) | 2020-08-12 |
EP3292143B1 (en) | 2019-08-21 |
EP3292143A1 (en) | 2018-03-14 |
AU2016257000B2 (en) | 2020-05-14 |
ES2754432T3 (es) | 2020-04-17 |
KR20170138585A (ko) | 2017-12-15 |
JP2018515072A (ja) | 2018-06-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2745801C2 (ru) | Одноцепочечные белки-агонисты рецептора cd40 | |
US20210246190A1 (en) | Single-chain cd137-receptor agonist proteins | |
US20210061880A1 (en) | Single-chain cd27-receptor agonist proteins | |
US20200331979A1 (en) | Single-chain light receptor agonist proteins | |
US11149075B2 (en) | Single-chain glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR) receptor agonist proteins | |
US10683338B2 (en) | Single-chain TL1A receptor agonist proteins | |
US20180230196A1 (en) | Single-chain ox40-receptor agonist proteins |