RU2745319C2 - Получение антигенспецифических t-клеток - Google Patents
Получение антигенспецифических t-клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2745319C2 RU2745319C2 RU2018136203A RU2018136203A RU2745319C2 RU 2745319 C2 RU2745319 C2 RU 2745319C2 RU 2018136203 A RU2018136203 A RU 2018136203A RU 2018136203 A RU2018136203 A RU 2018136203A RU 2745319 C2 RU2745319 C2 RU 2745319C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- antigen
- specific
- cell
- nanoparticles
- Prior art date
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 263
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 234
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 233
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 233
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 78
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 78
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 62
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 58
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 50
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 39
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 24
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 230000015654 memory Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 79
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 68
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 26
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 13
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 12
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 11
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 claims description 9
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 claims description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 9
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 8
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims description 8
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 6
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 5
- 101001090860 Homo sapiens Myeloblastin Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027735 Hyaluronan mediated motility receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 102100034681 Myeloblastin Human genes 0.000 claims description 3
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 claims description 3
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 claims description 3
- 108010003425 hyaluronan-mediated motility receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 claims description 3
- 229920006022 Poly(L-lactide-co-glycolide)-b-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 108010075283 antigen 106 Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004296 naive t lymphocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 45
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 38
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 26
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 26
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 21
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 20
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 20
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 20
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 17
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 14
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 13
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 13
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 13
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 10
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 10
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 10
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 10
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 10
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 9
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 8
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 8
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 8
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 7
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 7
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 7
- -1 antibodies) Proteins 0.000 description 7
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 7
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 6
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 6
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 6
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 6
- 210000001978 pro-t lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 5
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 5
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 4
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 4
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 4
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 239000002907 paramagnetic material Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 3
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 3
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 3
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 3
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 3
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 208000017805 post-transplant lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 2
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 2
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 2
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 2
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000011398 antitumor immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 229910001947 lithium oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 125000005439 maleimidyl group Chemical class C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 2
- 229910000476 molybdenum oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- GUVRBAGPIYLISA-UHFFFAOYSA-N tantalum atom Chemical compound [Ta] GUVRBAGPIYLISA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001936 tantalum oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 101150079396 trpC2 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000007482 whole exome sequencing Methods 0.000 description 2
- XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetic acid;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound OCC(O)=O.CC(O)C(O)=O XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 5-amino-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulopyranosonic acid Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241000203716 Actinomycetaceae Species 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- 102100024321 Alkaline phosphatase, placental type Human genes 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 102100035526 B melanoma antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000019260 B-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010012919 B-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241001112741 Bacillaceae Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000606662 Bartonellaceae Species 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000335423 Blastomyces Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000189662 Calla Species 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 1
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008803 Chromoblastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 208000015116 Chromomycosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 241000223203 Coccidioides Species 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 206010015108 Epstein-Barr virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000186811 Erysipelothrix Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100038595 Estrogen receptor Human genes 0.000 description 1
- 241000131486 Ewingella Species 0.000 description 1
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000009849 Female Genital Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000589601 Francisella Species 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000207202 Gardnerella Species 0.000 description 1
- 208000021309 Germ cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028970 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 241000228402 Histoplasma Species 0.000 description 1
- 101000874316 Homo sapiens B melanoma antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000986085 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 1
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000764263 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 101710093458 ICOS ligand Proteins 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000051089 Melanotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 108700038051 Melanotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 description 1
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 241001480037 Microsporum Species 0.000 description 1
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000041810 Mycetoma Species 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 108700025701 Retinoblastoma Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000242678 Schistosoma Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010054184 Small intestine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241001149962 Sporothrix Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241001478878 Streptobacillus Species 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 1
- 241000203807 Tropheryma Species 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 102100026890 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 241000607493 Vibrionaceae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 150000001266 acyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 1
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000006707 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087408 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007622 bioinformatic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009172 cell transfer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000037437 driver mutation Effects 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940084434 fungoid Drugs 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 108700010900 influenza virus proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 244000000056 intracellular parasite Species 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007787 long-term memory Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 208000007282 lymphomatoid papulosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 210000003887 myelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940031182 nanoparticles iron oxide Drugs 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 108010055837 phosphocarrier protein HPr Proteins 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 108010031345 placental alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 108040000983 polyphosphate:AMP phosphotransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000015768 polyposis Diseases 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000010322 reactivation of latent virus Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 231100000617 superantigen Toxicity 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007419 viral reactivation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56977—HLA or MHC typing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/001114—CD74, Ii, MHC class II invariant chain or MHC class II gamma chain
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464454—Enzymes
- A61K39/464456—Tyrosinase or tyrosinase related proteinases [TRP-1 or TRP-2]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1079—Screening libraries by altering the phenotype or phenotypic trait of the host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/49—Breast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к получению антигенспецифических T-клеток. Способ получения популяции антигенспецифических цитотоксических T-лимфоцитов (CTL), обладающих фенотипом центральной памяти и эффекторной памяти, включает предоставление образца, содержащего наивные T-клетки от пациента или подходящего донора; обогащение образца CD8+ Т-клетками; приведение образца в контакт с парамагнитными наночастицами, содержащими на своей поверхности: (1) антигенпрезентирующий комплекс ГКГС класса I-пептид, полученный при помощи пассивной нагрузки наночастиц, конъюгированных с ГКГС класса I; и (2) анти-CD28 костимулирующий лиганд, которые находятся в одной или разных популяциях наночастиц; активацию антиген-специфических Т-клеток путем размещения магнитного поля вблизи парамагнитных наночастиц на срок от 5 минут до 2 часов, обогащение антигенспецифическими CD8+ Т-клетками путем извлечения антигенспецифических T-клеток, ассоциированных с парамагнитными частицами, с использованием магнитной колонки, и размножение извлеченных CD8+ Т-клеток в культуре в течение по меньшей мере 5 дней для получения популяции клеток, имеющей по меньшей мере 106антигенспецифических CTL, имеющих указанные фенотипы. Изобретение обеспечивает быструю генерацию большого количества антигенспецифических T-клеток. 15 з.п. ф-лы, 16 ил., 1 пр.
Description
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Экспансия антигенспецифических T-клеток осложняется редкой встречаемостью антигенспецифических наивных предшественников, которых может насчитываться лишь один на миллион. Для генерации больших количеств опухоль-специфических T-клеток для адаптивной терапии (в качестве примера) лимфоциты обычно стимулируют антигеном в течение многих недель, после чего нередко следует отбор T-клеток и субклонирование в трудоемком процессе. Помимо этого, различные способы, применяемые в настоящее время для экспансии лимфоцитов, такие как анти-CD3/анти-CD28 гранулы, ориентированы на то, что в них образуются T-клетки с несколько истощенным фенотипом. См., Sachamitr P. et al., Induced pluripotent stem cells: challenges and opportunities for cancer immunotherapy, Front Immunol. 2014 Apr 17;5:176.
Имеется потребность в технологиях, при помощи которых можно быстро генерировать большие количества и/или высокие частоты антигенспецифических T-клеток, в том числе T-клеток, которые не характеризуются истощенным фенотипом, как для терапевтических, так и для диагностических целей.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном изобретении в различных аспектах предложено магнитное обогащение и/или экспансия антигенспецифических T-клеток, позволяющие идентифицировать и охарактеризовать антигенспецифические T-клетки и их T-клеточные рецепторы (TCR) в терапевтических и/или диагностических целях, а также обеспечить получение антигенспецифических сконструированных T-клеток для терапии. Инкубация парамагнитных нано-иАПК (nano-aAPC) в присутствии магнитного поля во время стадий обогащения и/или экспансии активирует T-клетки путем магнитной кластеризации парамагнитных частиц на поверхности T-клетки.
В различных аспектах в данном изобретении предложены способы экспансии популяций антигенспецифических T-клеток для адаптивной иммунотерапии, в том числе сконструированные T-клетки, которые экспрессируют гетерологичный T-клеточный рецептор или химерный антигенный рецептор (CAR). T-клетки, экспансированные в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, характеризуются поликлональным фенотипом (Tcm, Tem), в противоположность T-клеткам, экспансированным неспецифически с применением анти-CD3/анти-CD28, которые приближены к истощенному фенотипу.
В некоторых вариантах реализации в данном изобретении предложены искусственные антигенпрезентирующие клетки, специально сконфигурированные для магнитного обогащения и экспансии антигенспецифических T-клеток, что включает разделение антигенпрезентирующих комплексов (сигнал 1) и лимфоцитарных костимулирующих сигналов (сигнал 2) (например, анти-CD28) на отдельных гранулах с обеспечением дополнительных уровней контроля и изменчивости способа.
В еще одних аспектах в данном изобретении предложены способы скрининга большого числа антигенов-кандидатов на специфичность реактивности в популяции T-клеток. В способе используется последовательное обогащение антигенспецифических T-клеток при помощи магнитной колонки и парамагнитных иАПК, и негативная фракция используется для последующих стадий обогащения. Несколько антигенов-кандидатов можно сгруппировать в каждой стадии обогащения в результате презентации при помощи коктейля иАПК, презентирующих различные пептидные антигены. Поскольку в каждой стадии обогащения может происходить скрининг множества антигенных пептидов- кандидатов, то способ позволяет тестировать по меньшей мере 75 антигенов без снижения частоты предшественников антигенспецифических T-клеток в исходном образце.
В иллюстративных вариантах реализации изобретения в данном изобретении предложены способы лечения пациентов, имеющих гематологический рак, такой как острый миелогенный лейкоз (AML) или миелодиспластический синдром. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент имеет рецидив после аллогенной трансплантации стволовых клеток. При помощи источника T-клеток от HLA-совместимого донора антигенспецифические T-клетки магнитно обогащали и активировали с применением магнитной колонки с парамагнитными нано-иАПК, презентирующими по меньшей мере 2 или 3 опухоль-ассоциированные пептидные антигены. Пептидные антигены пассивно нагружали на подготовленные нано-иАПК, при этом лиганды были химически конъюгированы с частицами через свободные цистеины, которые были введены в белки возле C-конца Fc-участков иммуноглобулиновых последовательностей. Например, иАПК могут содержать сигнал 1 и сигнал 2 на одних и тех же или разных популяциях наночастиц.
В некоторых вариантах реализации изобретения магнитная активация происходит по меньшей мере в течение 5 минут, например, от 5 минут до 5 часов или от 5 минут до 2 часов с последующей экспансией в культуре в течение по меньшей мере 5 дней и в некоторых вариантах реализации изобретения до 3 недель. Полученные в результате CD8+ T-клетки могут быть фенотипически охарактеризованы с подтверждением того, что они представляют собой фенотип центральной памяти или эффекторной памяти и являются полифункциональными. Экспансированные T-клетки можно вводить пациенту для получения противоопухолевого ответа.
Другие аспекты и варианты реализации данного изобретения будут очевидны из следующего подробного описания.
ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На Фиг. 1 изображен сигнал 1 и 2 в контексте активации T-клеток (левая панель) и конструкция искусственных антигенпрезентирующих клеток на парамагнитных частицах (правая панель). Только когнатные T-клетки активируются иАПК.
На Фиг. 2 изображены различные костимулирующие сигналы (сигнал 2), которые могут быть презентированы на наночастицах в соответствии с вариантами реализации изобретения, и изображен контроль сигнала 2, достигаемый в результате размещения сигнала 2 на отдельных частицах.
На Фиг. 3 изображена кластеризация парамагнитных частиц с T-клеточным корецептором (CD3ε) на поверхности T-клеток в присутствии магнитного поля.
На Фиг. 4 демонстрирует, что наличие магнитного поля усиливает пролиферацию T-клеток с парамагнитными иАПК, и что это усиление зависит от количества сигнала 2, присутствующего на отдельной наночастице.
На Фиг. 5 демонстрирует, что сигнал 1 и сигнал 2 может поддерживать экспансию Т-клеток даже при расположении на отдельных наночастицах (A, левая панель), и что образующиеся в результате CD8 T-клетки являются эквивалентными таковым, активированным иАПК, презентирующими оба сигнала (A, правая панель). На панели B изображены профили секреции цитокинов (число секретируемых цитокинов или эффекторных молекул) T-клеток, активируемых иАПК, презентирующими оба сигнала, по сравнению с таковыми, которые имеют сигналы, презентируемые на отдельных частицах.
На Фиг. 6 изображена кластеризация парамагнитных гранул, содержащих отдельные сигнал 1 и сигнал 2 в присутствии магнитного поля, по сравнению с частицами на основе полистирола, которые не кластеризируются (A), и повышенная экспансия, наблюдаемая в случае системы магнитной экспансии (B).
На Фиг. 7 демонстрирует, что оптимальная экспансия T-клеток наблюдается в случае, когда сигналы 1 и 2 кластеризуются достаточно близко. По мере увеличения размера частиц эффективность подхода на основе S1+S2 снижается (правая панель). В отличие от этого, наночастицы, содержащие оба сигнала, характеризуются противоположным эффектом (левая панель).
На Фиг. 8 демонстрирует, что оба типа костимуляции можно варьировать для подбора профиля активации.
На Фиг. 9 изображена схема гейтинга, используемая для очистки клеток перед секвенированием их клонотипического T-клеточного рецептора. Изначально наивные T-клетки отбирали и стимулировали нано-иАПК с использованием системы О+Э. На 7-й день клетки собирали и анализировали при помощи проточной цитометрии. На левой панели изображено общее число событий, наблюдаемых в культуре и гейтированных по отношению к популяции лимфоцитов. На средней панели изображено, что живые/мертвые клетки окрашивали и гейтировали исключительно по отношению к живым клеткам, и на правой панели изображено, что ГКГС_Ig-димер, нагруженный пептидом trp-2, использовали для окрашивания, и сортировали только позитивные клетки (примерно 18,3%). Эти клетки затем отправляли на секвенирование TCR, а результаты изображены на фигуре 10.
На Фиг. 10 изображено число продуктивных и непродуктивных клонов на основании анализа секвенирования TCR.
На Фиг. 11 изображено сравнение частот топ-клонов (идентифицируемых в виде частоты >0,1% и >100 прочтений в Carreno et al, Science 15;348(6236):803-8 (2015)) (Panel A), по сравнению с частотами продуктивных клонов после магнитного обогащения и экспансии (панель B).
На Фиг. 12 изображены частоты клонотипов T-клеток на основании процента общих прочтений.
На Фиг. 13 изображена трехмерная гистограмма частоты спаривания V и J для всех клонов.
На Фиг. 14 изображена трехмерная гистограмма частоты спаривания V и J для топ-10 клонов на основании всех прочтений.
На Фиг. 15 изображена генерация функционально активных человеческих неоантигенспецифических CD-8+ T-клеток от здорового донора. Три неоэпитопа из рака молочной железы MCF-7 тестировали одновременно при помощи способа магнитного обогащения и экспансии.
На Фиг. 16 демонстрирует, что пассивная нагрузка пептида на наночастицы, характеризующаяся сайт-направленной конъюгацией ГКГС, обеспечивает повышенную экспансию через 1 неделю.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В данном изобретении в различных аспектах предложено магнитное обогащение и/или магнитная экспансия антигенспецифических T-клеток, позволяющие идентифицировать и охарактеризовать антигенспецифические T-клетки и их T-клеточные рецепторы (TCR) в терапевтических и/или диагностических целях, а также обеспечить получение антигенспецифических сконструированных T-клеток для терапии. Магнитное обогащение относится к использованию парамагнитных наночастиц, имеющих на своей поверхности антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид, таким образом, что антигенспецифические T-клетки можно отделить от популяции T-клеток при помощи магнитной колонки, в то время как другие клетки (в том числе некогнатные T-клетки) просеиваются. Экспансия обогащенных T-клеток может происходить в присутствии и в отсутствии магнитного поля. Магнитно обогащенная экспансия относится к экспансии и/или активации T-клеток при помощи парамагнитных наночастиц, имеющих на своей поверхности антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид и один или несколько лимфоцитарных костимулирующих лигандов (которые могут находиться на одних и тех же или разных частицах), таким образом, что наличие магнитного поля индуцирует магнитную кластеризацию наночастиц и TCR, тем самым направляя активацию и последующую экспансию фракции антигенспецифических T-клеток. Магнитная кластеризация нанодиапазонных искусственных аантигенпрезентирующих клеток с экспансией T-клеток раскрыта в патенте США № 2016/0051698, который включен в данный документ посредством ссылки. В различных вариантах реализации изобретения способ обогащения и экспансии включает магнитную активацию, в которой парамагнитые нано-иАПК, несущие сигнал 1 и сигнал 2 (либо на одной и тоже либо на разных популяциях наночастиц), инкубируют в присутствии магнитного поля. Инкубация в присутствии магнитного поля обычно происходит в течение по меньшей мере 5 минут, или по меньшей мере 10 минут, или по меньшей мере 15 минут, или по меньшей мере 30 минут, или по меньшей мере одного часа, или по меньшей мере 2 часов. Например, инкубация в присутствии магнитного поля может происходить в течение от 5 минут до приблизительно 2 часов или от приблизительно 10 минут до приблизительно 1 часа.
В различных аспектах в данном изобретении предложены способы экспансии популяций антигенспецифических T-клеток для адаптивной иммунотерапии, в том числе сконструированные T-клетки, которые экспрессируют гетерологичный T-клеточный рецептор или химерный антигенный рецептор (CAR). Адаптивная иммунотерапия включает в себя активацию и экспансию иммунных клеток ex vivo, при этом полученные в результате клетки переносят пациенту для лечения заболевания, такого как рак. Индукция ответов со стороны антигенспецифических цитотоксических (CD8+) лимфоцитов (CTL), например, посредством адаптивного переноса, могла бы быть перспективной терапией, если бы достаточное количество и частоту активированных и антигенспецифических CTL можно было бы генерировать за сравнительно короткое время, в том числе из редких клеток-предшественников. Этот подход в некоторых вариантах реализации изобретения мог бы даже приводить к генерации долговременной памяти, которая предупреждает повторное развитие заболевания. Помимо противоопухолевой иммунотерапии и видов иммунотерапии, включающих CTL, данное изобретение находит применение в случае других иммунных клеток, в том числе CD4+ T-клеток и регуляторных T-клеток, и, таким образом, является широко применимым к иммунотерапии инфекционного заболевания и аутоиммунного заболевания, в числе прочих. Кроме того, T-клетки, экспансированные в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, характеризуются поликлональным фенотипом (Tcm, Tem), в противоположность T-клеткам, экспансированным неспецифически с применением анти-CD3/анти-CD28, которые приближены к истощенному фенотипу.
В некоторых вариантах реализации изобретения T-клетки, имеющие фенотип центральной памяти (Tcm) или эффекторной памяти (Tem), получают в соответствии со следующим раскрытием, и затем химерный антигенный рецептор или гетерологичный TCR вводят в клетку с получением CAR-T-клетки для адаптивной терапии. Такие клетки можно активировать и экспансировать in vivo при помощи способов, описанных в данном документе.
В еще одних вариантах реализации изобретения наночастица содержит лиганды, которые взаимодействуют с CAR-T-рецептором, такие как CD19, в качестве сигнала 1. Наночастицы в соответствии с этими вариантами реализации способствуют магнитной активации и последующей экспансии CAR-T-клеток.
Например, в различных вариантах реализации CD8+ лимфоциты, экспансированные в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, содержат следующие фенотипы: низкая экспрессия PD-1; фенотип центральной памяти (CD3+, CD44+, CD62L+); и фенотип эффекторной памяти (CD3+, CD44+, CD62L-). В некоторых вариантах реализации изобретения CD8+ лимфоциты, обогащенные и экспансированные в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, продуцируют провоспалительные маркеры, такие как IFNγ, TNFα, IL-2, MIP-1β, GrzB и/или перфорин при стимуляции иАПК, нагруженными когнатным антигеном.
В некоторых аспектах в данном изобретении предложен способ быстрой генерации больших количеств антигенспецифических T-клеток, которые можно охарактеризовать фенотипически и/или генотипически с идентификацией продуктивных и эффективных антигенспецифических TCR. Например, в данном аспекте в данном изобретении предложен способ идентификации антигенспецифического T-клеточного рецептора (TCR). Способ включает магнитное обогащение и/или магнитное экспансирование гетерогенной популяции T-клеток при помощи парамагнитных частиц, имеющих антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид на поверхности, как описано более подробно в данном документе. Экспансированные T-клетки затем сортируют (например, при помощи проточной цитомерии) при помощи лиганда ГКГС-пептид, с получением популяции Т-клеток, которая является высокообогащенной на предмет антигенспецифических TCR. Затем репертуар TCR можно секвенировать и/или профилировать. Наряду с функциональной характеристикой экспансированных T-клеток, за короткое время можно идентифицировать TCR с определенными аффинностями. Такие TCR находят применение для гетерологичной экспрессии в целях генерации сконструированных T-клеток для адаптивной терапии.
Данное изобретение в данном аспекте способствует генерации достаточных количеств T-клеток для секвенирования всего за несколько дней. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения магнитно обогащенные клетки экспансируют в культуре в течение от приблизительно 2 дней до 9 недель, или в некоторых вариантах реализации изобретения - от 5 дней до приблизительно 2 недель (например, приблизительно 1 недели). Секвенирование ДНК можно проводить при помощи любого известного способа, в том числе пиросеквенирования, секвенирования нового поколения (NGS; секвенирования ДНК или РНК) или секвенирования путем синтеза. Секвенирование, как правило, включает альфа- и/или бета-цепи TCR, в том числе участки, определяющие комплементарность TCR, например, CDR3 бета-цепи рецептора, образованные V-, D- и J-генными участками.
В другом аспекте в данном изобретении предложен способ скрининга популяции T-клеток на реактивность по отношению к библиотеке антигенных пептидов-кандидатов. В различных вариантах реализации способ включает магнитное обогащение и магнитное экспансирование антигенспецифических T-клеток в популяции при помощи коктейля парамагнитных наночастиц, каждая из которых имеет антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид на своей поверхности, который презентирует антигенный пептид-кандидат. Способ дополнительно включает фенотипическую оценку обогащенных и экспансированных T-клеток, например, на предмет их реактивности по отношению к пептидам-кандидатам.
В некоторых вариантах реализации изобретения последовательное магнитное обогащение выполняют с применением проточной фракции из исходной стадии магнитного обогащения, при этом в каждом последующем обогащении используется другой антигенный пептид, представляющий интерес, или другая совокупность антигенных пептидов. Например, в некоторых вариантах реализации выполняют по меньшей мере 6, или по меньшей мере 10, или по меньшей мере 20 последовательных магнитных обогащений. Поскольку в каждой стадии последовательного обогащения можно проводить скрининг от 5 до приблизительно 20 антигенных пептидов-кандидатов, то способ позволяет тестировать от 30 до 400 антигенов. В различных вариантах реализации изобретения тестируют по меньшей мере 50 антигенов, или тестируют по меньшей мере 75 антигенов, или тестируют по меньшей мере 100 антигенов, или тестируют по меньшей мере 150 антигенов, или тестируют по меньшей мере 200 антигенов, или тестируют по меньшей мере 300 антигенов без снижения частоты предшественников антигенспецифических Т-клеток в исходном образце.
В других аспектах в данном изобретении предложены способы экспансии T-клеток, содержащих гетерологичный или сконструированный T-клеточный рецептор (TCR). Способ включает магнитное обогащение и магнитное экспансирование популяции T-клеток, которая содержит T-клетки, экспрессирующие гетерологичный или сконструированный T-клеточный рецептор (TCR). Обогащение и экспансию проводят при помощи парамагнитных наночастиц, имеющих антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид, распознаваемый гетерологичным или сконструированным T-клеточным рецептором (TCR) на поверхности частиц. В некоторых вариантах реализации изобретения, начиная с антигенспецифических частот, составляющих от приблизительно 10% до приблизительно 40% (например, по меньшей мере приблизительно 20%), в способе продуцируется высокая частота и количество анигенспецифических T-клеток в течение приблизительно 10-14 дней.
В других аспектах в данном изобретении предложен способ получения популяции антигенспецифических T-клеток при помощи магнитного обогащения и экспансии, при этом комплекс ГКГС-пептид получают при помощи пассивной нагрузки наночастиц, конъюгированных с ГКГС. Пассивная нагрузка наночастиц отличается от рефолдинга ГКГС в присутствии пептида, после чего следует конъюгация или присоединение антигенпрезентирующего комплекса к поверхности частиц. При получении серий частиц, которые являются некомитированными по отношению к определенным антигенным частицам, производственный процесс и затраты на процесс значительно нормализуются. Как раскрыто в патенте США № 6734013, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, активная нагрузка пептидного антигена на ГКГС-Ig при помощи щелочного срыва, быстрой нейтрализации и рефолдинга в присутствии пептида, приводила к образованию лигандов, которые были в 10-100 раз более активными при окрашивании T-клеток, чем соответствующий пассивно нагруженный ГКГС-Ig. Однако в вариантах реализации данного изобретения предложены надежное обогащение и экспансия антигенспецифических T-клеток с лучшими функциональными свойствами с применением даже пассивно загруженных лигандов на основе HLA-Ig. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения наночастицы, конъюгированные с ГКГС, пассивно нагружают в течение по меньшей мере 2 дней при помощи инкубации с избытком пептидного антигена.
В то время как магнитное обогащение и экспансия были описаны в случае с иАПК, которые содержат как сигнал 1 (комплекс ГКГС-пептид), так и сигнал 2 (например, анти-CD28), в различных аспектах данного изобретения иАПК в некоторых вариантах реализации изобретения содержат только сигнал 1. Вторую частицу, имеющую лимфоцитарный костимулирующий лиганд, конъюгированный со своей поверхностью, добавляют во время стадии обогащения или во время экспансии извлеченных T-клеток. Помещая «сигнал 2» (например, лимфоцитарный костимулирующий фактор) на отдельную частицу, можно контролировать время и тип стимула. Вторая частица также может быть парамагнитной, способствуя тому, что вторая частица магнитно кластеризуется с первыми наночастицами, презентирующими антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид. В этих вариантах реализации изобретения наночастицы предпочтительно поддерживают небольшими, такими как менее чем приблизительно 200 нм, менее чем приблизительно 100 нм или менее чем приблизительно 50 нм. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения вторая наночастица является парамагнитной и вторую наночастицу добавляют во время экспансии T-клеток, извлеченных во время стадии(стадий) обогащения.
В некоторых вариантах реализации изобретения вторая наночастица не является парамагнитной и ее добавляют во время магнитного обогащения антигенспецифических T-клеток. Поскольку наночастица с сигналом 2 не будет магнитно связываться с колонкой, то наночастицы с сигналом 2 не будут приводить к магнитному захвату неспецифических T-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения подход на основе непарамагнитных частиц используется для последовательного обогащения, чтобы избежать потерю или нежелательное удерживание некогнатных T-клеток в каждой стадии обогащения. Вторая наночастица может содержать любой непарамагнитный материал, в том числе любой из известных полимерных материалов, в том числе полистироловые или латексные частицы или частицы, которые содержат PLGA, PLGA-PEG, PLA или PLA-PEG.
В еще одних аспектах в данном изобретении предложен способ генерации T-клетки, экспрессирующей химерный антигенный рецептор (CAR), при этом способ включает в себя магнитное обогащение и экспансирование популяции T-клеток при помощи парамагнитных наночастиц, имеющих антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид на своей поверхности, в целях получения тем самым популяции обогащенных и экспансированных атигенспецифических T-клеток; и трансформации популяции T-клеток при помощи химерного антигенного рецептора (CAR).
В различных вариантах реализации изобретения пациент представляет собой пациента, больного раком, и экспансированные CAR-T-клетки можно адаптивно переносить пациенту, необязательно с применением реактивации путем введения биосовместимых иАПК. В некоторых вариантах реализации изобретения способ включает поддержку/усиление при помощи фармацевтической композиции, содержащей искусственную антигенпрезентирующую клетку (иАПК), презентирующую антигенпрезентирующий комплекс ГКГС-пептид и лимфоцитарный костимулирующий лиганд, в целях тем самым экспансии и реактивации CAR-T-клеток in vivo. Подходящие иАПК для терапевтического применения описаны в международной заявке № 2016/105542, которая включена посредством ссылки во всей своей полноте.
В связанном варианте реализации изобретения в данном изобретении предложен способ экспансии T-клетки, экспрессирующей CAR, в целях усиления процесса продукции. Например, способ может включать получение популяции T-клеток, экспрессирующих CAR, как описано выше, и магнитное обогащение и/или экспансирование популяции T-клеток в присутствии парамагнитных наночастиц, имеющих антигенпрезентирующий комплекс на основе ГКГС на своей поверхности.
Иллюстративные CAR включают в себя слияния одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv), происходящих из моноклональных антител, слитых с CD3-зета-трансмембранным доменом или эндодоменом или другим TCR-сигнальным доменом. CAR может целенаправленно воздействовать на злокачественные B-клетки в результате нацеливания на CD19, к примеру.
В различных аспектах в данном изобретении используются искусственные антигенпрезентирующие клетки (иАПК), которые захватывают и доставляют стимулирующие сигналы к иммунным эффекторным клеткам, таким как антигенспецифические T-лимфоциты, такие как CTL. Сигналы, присутствующие на иАПК, которые поддерживают активацию T-клеток, включают в себя сигнал 1, антигенный пептид, презентированный в контексте главного комплекса гистосовместимости (ГКГС), класса I или класса II, и которые связывают антигенспецфические T-клеточные рецепторы (TCR); и сигнал 2, один или несколько костимулирующих лигандов, которые модулируют T-клеточный ответ. Как описано в данном документе, сигнал 1 и сигнал 2 можно доставлять на отдельных частицах, и выбор материала частицы для сигнала 2 (например, парамагнитный или непарамагнитный) может придавать способам дополнительные функциональные характеристики. Лиганды на основе сигнала 1 и сигнала 2 можно химически конъюгировать с наночастицами сайт-направленным образом, таким образом, что лиганды поддерживают функциональную ориентацию на частицах.
В некоторых вариантах реализации этой системы сигнал 1 обеспечивается мономерной, димерной или многомерной конструкцией на основе ГКГС. Димерную конструкцию создают в некоторых вариантах реализации изобретения в результате слияния с вариабельным участком или CH1- или CH2-участком последовательности иммуноглобулиновой тяжелой цепи. Комплекс ГКГС нагружают одним или несколькими антигенными пептидами. Сигнал 2 представляет собой либо B7.1 (природный лиганд для T-клеточного рецептора CD28), либо активирующее антитело против CD28. Лиганды на основе сигнала 1 и сигнала 2 могут включать в себя вариации в гликозильных группах или модификации свободных сульфгидрильных групп цистеина.
В некоторых аспектах в данном изобретении предложен способ получения популяции антигенспецифических T-клеток для адаптивного переноса. В этих аспектах T-клетки происходят от пациента или подходящего донора. иАПК могут презентировать антигены, которые являются распространенными для заболевания, представляющего интерес (например, опухолевого типа), или могут презентировать один или несколько антигенов, выбранных на персонализированной основе. Стадия экспансии может осуществляться в течение от приблизительно 3 дней до приблизительно 2 недель в некоторых вариантах реализации изобретения, или от приблизительно 5 дней до приблизительно 10 дней (например, приблизительно 1 недели). Процесс обогащения и экспансии затем можно повторять один или несколько раз в целях оптимальной экспансии (или дополнительной чистоты) антигенспецифических клеток. Для последующих циклов обогащения и экспансии к Т-клеткам можно добавлять дополнительные иАПК для поддержания экспансии более крупной популяции антигенспецифических Т-клеток в образце. В определенных вариантах реализации изобретения конечный цикл (например, цикл 2, 3, 4 или 5) экспансии происходит in vivo, в котором биосовместимые нано-АПК добавляют к популяции экспансированных T-клеток и затем вводят пациенту.
В определенных вариантах реализации изобретения способ предусматривает приблизительно 1000-10000-кратную экспансию (или больше) антигенспецифических T-клеток, при этом генерируется более чем приблизительно 108 антигенспецифических T-клеток в течение, например, менее чем приблизительно месяца, или менее чем приблизительно трех недель, или менее чем приблизительно двух недель, или в течение приблизительно одной недели. Полученные в результате клетки можно вводить пациенту для лечения заболевания. В некоторых вариантах реализации изобретения иАПК можно вводить пациенту совместно с полученным препаратом на основе антигенспецифических T-клеток.
При отборе T-клеточных антигенов на персонализированной основе, проводят скрининг библиотеки иАПК, каждая из которых презентирует антигенный пептид-кандидат, совместно с Т-клетками от субъекта или пациента, и определяют или количественно определяют ответ T-клеток на каждый пептид иАПК. В некоторых вариантах реализации изобретения T-клеточный ответ можно количественно определить молекулярным образом, например, при помощи количественного определения экспрессии цитокинов или экспрессии другого суррогатного маркера активации Т-клеток (например, при помощи иммуногистохимического анализа или амплификации экспрессируемых генов, например, при помощи ОТ-ПЦР). В некоторых вариантах реализации изобретения стадию количественного определения осуществляют в культуре между приблизительно 15 часами и 48 часами. В других вариантах реализации изобретения T-клеточный ответ определяют при помощи детекции внутриклеточной передачи сигнала (например, передачи сигнала с участием Ca2+ или другой передачи сигнала, которая происходит рано во время активации T-клеток), и, таким образом, его можно определить в пределах от приблизительно 15 минут до приблизительно 5 часов (например, в пределах от приблизительно 15 минут до приблизительно 2 часов) после культивирования с нано-иАПК. Пептиды, проявляющие самые устойчивые ответы, отбирают для иммунотерапии, в том числе в некоторых вариантах реализации изобретения для подхода на основе адаптивной иммунотерапии, описанного в данном документе. В некоторых вариантах реализации изобретения и, в частности, для иммунотерапии рака, опухоль пациента генетически анализируют (например, при помощи секвенирования нового поколения), и опухолевые антигены прогнозируют исходя из уникальной сигнатуры опухолевых мутаций пациента (например, содержащей уникальные мутации в ДНК опухоли пациента, которые не встречаются в неопухолевых клетках). Эти предполагаемые антигены («неоантигены») синтезируют и подвергают скринингу по отношению к T-клеткам пациента при помощи платформы на основе иАПК, описанной в данном документе. После идентификации/подтверждения реактивных антигенов иАПК можно получать для протокола обогащения и экспансии, описанного в данном документе, или в некоторых вариантах реализации изобретения иАПК можно непосредственно вводить пациенту.
В некоторых аспектах T-клетки субъекта или пациента подвергают скринингу по отношению к массиву или библиотеке парамагнитных нано-иАПК (как описано в данном документе), в которых каждая парамагнитная нано-иАПК презентирует пептидный антиген. На каждый из них определяют или количественно определяют Т-клеточные ответы, получая полезную информацию относительно репертуара Т-клеток человека, и, тем самым, состояния субъекта или пациента. Например, количество и идентичность Т-клеточных противоопухолевых ответов по отношению к мутировавшим белкам, сверхэкспрессируемым белкам и/или другим опухоль-ассоциированным антигенам можно использовать в качестве биомаркера для классификации риска, и в некоторых вариантах реализации изобретения можно включать в компьютеризированный алгоритм классификатора для классификации профиля ответа по отношению к устойчивости к лекарственным препаратом или чувствительности к лекарственным препаратом, или классификации профиля ответа в качестве кандидата для иммунотерапии (например, терапии на основе ингибиторов контрольных точек или терапии на основе адаптивного переноса Т-клеток). Например, число и интенсивность таких T-клеточных ответов могут быть обратно пропорциональными высокому риску прогрессирования заболевания, и/или могут быть непосредственно связаны с вероятным ответом пациента на иммунотерапию, которая может включать в себя одно или несколько из терапии на основе ингибиторов контрольных, адаптивного переноса T-клеток или другой иммунотерапии рака.
В еще одних аспектах и вариантах реализации изобретения T-клетки пациента подвергают скринингу по отношению к массиву или библиотеке парамагнитных нано-АПК, каждая из которых презентирует пептидный антиген-кандидат. Например, массив или библиотека могут презентировать опухоль-ассоциированные антигены, или могут презентировать аутоантигены, или могут презентировать T-клеточные антигены, связанные с различными инфекционными заболеваниями. При инкубировании массива или библиотеки с T-клетками пациента, а также в присутствии магнитного поля для содействия кластеризации T-клеточных рецепторов, можно быстро определить наличие T-клеточных ответов и/или число или интенсивность этих T-клеточных ответов. Эта информация является полезной для диагностики, например, субклинической опухоли, аутоиммунного или иммунного заболевания или инфекционного заболевания, и может обеспечить исходное понимание биологии заболевания, в том числе потенциальных патогенных или терапевтических T-клеток, T-клеточных антигенов, и понимание Т-клеточных рецепторов, представляющих интерес, которые представляют собой мишени лекарственной терапиии или иммунотерапии.
В данном изобретении предложена иммунотерапия рака и других заболеваний, в которых детекция, обогащение и/или экспансия антигенспецифических иммунных клеток ex vivo является терапевтически или диагностической желательной. Данное изобретение в целом применимо для детекции, обогащения и/или экспансии антигенспецифических T-клеток, в том числе цитотокических T-лимфоцитов (CTL), хелперных T-клеток и регуляторных T-клеток, а также NKT-клеток или даже B-клеток, в случае которых соответствующий лиганд был презентирован на поверхности иАПК.
В некоторых вариантах реализации пациентом является пациент, больной раком. Обогащение и экспансия антигенспецифических CTL ex vivo для адаптивного переноса пациенту обеспечивает устойчивый противоопухолевый ответ. Виды рака, которые можно лечить или оценивать в соответствии со способами, включают в себя виды рака, которые исторически вызывают слабые иммунные ответы или имеют высокую частоту повторного развития. Иллюстративные виды рака включают в себя различные типы солидных опухолей, в том числе карциномы, саркомы и лимфомы. В различных вариантах реализации рак представляет собой меланому (в том числе метастатическую меланому), рак толстой кишки, рак двенадцатиперстной кишки, рак предстательной железы, рак молочной железы, рак яичника, протоковый рак молочной железы, рак печени, рак поджелудочной железы, рак почек, рак эндометрия, рак яичка, рак желудка, дисплазию слизистой полости рта, полипоз, рак головы и шеи, инвазивный рак полости рта, немелкоклеточную карциному легкого, мелкоклеточный рак легкого, мезотелиому, переходноклеточную и плоскоклеточную карциному мочевыводящих путей, рак головного мозга, нейробластому и глиому.
В некоторых вариантах реализации рак представляет собой гематологический рак, в том числе лейкоз, лимфому или миелому. Например, гематологический рак может представлять собой острый миелоидный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, острый лейкоз у детей, неходжкинские лимфомы, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, миелодиспластический синдром, злокачественную T-клеточную лимфому кожи, фунгоидный микоз, не относящийся к ФМ T-клеточную лимфому кожи, лимфоматоидный папулез и лимфоидную гиперплазию кожи с высоким содержанием T-клеток.
В различных вариантах реализации изобретения рак представляет собой рак I стадии, II стадии, III стадии или IV стадии. В некоторых вариантах реализации рак является метастатическим и/или рецидивирующим. В некоторых вариантах реализации рак является доклиническим, и детектируется в системе скрининга, описанной в данном документе (например, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы или другой рак, которая сложно детектировать на ранней стадии).
В некоторых вариантах реализации пациент имеет инфекционное заболевание. Инфекционное заболевание может представлять собой таковое, при котором обогащение и экспансия антигенспецифических иммунных клеток (таких как CD8+ или CD4+ T-клеток) ex vivo для адаптивного переноса пациенту могли бы усилить или обеспечить продуктивный/защитный иммунный ответ. Инфекционные заболевания, которые можно лечить, включают в себя таковые, вызванные бактериями, вирусами, прионами, грибами, паразитами, гельминтами и др. Такие заболевания включают в себя СПИД, гепатит B/C, инфекци, вызванную ЦМВ, и посттрансплантационное лимфопролиферативное расстройство (ПТЛР). Например, ЦМВ является самым распространенным вирусным патогеном, обнаруженным у пациентов после трансплантации органов, и является основной причиной заболеваемости и смертности у пациентов, перенесших трансплантацию костного мозга или стволовых клеток периферической крови. Это обусловлено ослабленным иммунологическим статусом этих пациентов, который способствует реактивации латентного вируса у серопозитивных пациентов или оппортунистической инфекции у серогенативных индивидуумов. Полезной альтернативной этим видам лечения является профилактический иммунотерапевтический режим, включающий в себя генерацию специфических по отношению к вирусу CTL, происходящих от пациента или подходящего донора до начала процедуры трансплантации. ПТЛР появляется у значительной доли пациентов после трансплантации и происходит в результате инфекции, вызываемой вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ). Считается, что инфекция, вызываемая ВЭБ, присутствует примерно у 90% взрослого населения в Соединенных Штатах Америки. Острая вирусная репликация и инфекция контролируется иммунной системой, однако, как в случае с ЦМВ, индивидуумы с ослабленным иммунитетом вследствие трансплантационной терапии утрачивают контроль над популяциями Т-клеток, что способствует реактивации вируса. Это представляет собой серьезное препятствие трансплантационным протоколам. ВЭБ может также участвовать в опухолевой активации в ряде гематологических и негематологических видов рака. В случае инфекционных заболеваний, включающих биопленки, или поддерживаемых матриксом для размножения бактерий в непланктонном состоянии, CD8+ T-клетки могут быть важны для выздоровления. Антигенспецифические ответы, в которых происходит рекрутинг активированных CD8+ T-клеток, которые инфильтрируют матрикс биопленки, могли бы оказаться эффективными для устранения инфекции, вызываемой микроорганизмами, устойчивыми к антибиотикам.
В некоторых вариантах реализации изобретения пациент имеет аутоиммунное заболевание, при котором обогащение и экспансия регуляторных T-клеток (например, CD4+, CD25+, Foxp3+) ex vivo для адаптивного переноса пациенту могли бы ослаблять вредный иммунный ответ. Аутоиммунные заболевания, которые можно лечить, включают в себя системную красную волчанку, ревматоидный артрит, сахарный диабет I типа, рассеянный склероз, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, миастению гравис, синдром Гудпасчера, базедову болезнь, вульгарную пузырчатку, болезнь Аддисона, герпетиформный дерматит, целиакию и тиреоидит Хашимото. В некоторых вариантах реализации у пациента предполагается наличие аутоиммунного заболевания или иммунного состояния (такого, как таковые, описанные в предыдущем предложении), и оценка T-клеточных ответов по отношению к библиотеке парамагнитных нано-иАПК, описанных в данном документе, полезна для идентификации или подтверждения иммунного состояния.
Таким образом, в различных вариантах реализации данное изобретение включает обогащение и экспансию антигенспецифических T-клеток, таких как цитотоксические T-лимфоциты (CTL), хелперные T-клетки или регуляторные T-клетки. В некоторых вариантах реализации данное изобретение включает обогащение и экспансию антигенспецифических CTL. Т-клетки-предшественники можно получить от пациента или от подходящего совместимого по системе HLA донора. Т-клетки-предшественники можно получить из ряда источников, в том числе мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), костного мозга, ткани лимфатических узлов, ткани селезенки и опухолей. В некоторых вариантах реализации изобретения образец представляет собой образец МКПК от пациента. В некоторых вариантах реализации образец МКПК используется для выделения популяции T-клеток, представляющих интерес, таких как CD8+, CD4+ или регуляторные T-клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения Т-клетки-предшественники получают из единицы крови, собранной от субъекта, при помощи любого количества методик, известных специалисту в данной области, таких как фиколл-разделение. Например, Т-клетки-предшественники из циркулирующей крови индивидуума можно получить при помощи афереза или лейкафереза. Продукт афереза обычно содержит лимфоциты, в том числе T-клетки и T-клетки-предшественники, гранулоциты, B-клетки, другие ядросодержащие лейкоциты и тромбоциты. Лейкаферез представляет собой лабораторную процедуру, при которой лейкоциты отделяют от образца крови.
Клетки, собранные при помощи афереза, можно промывать с удалением плазменной фракции и помещать в подходящий буфер или среды для последующих стадий обработки. Стадии промывания можно осуществлять при помощи способов, известных специалистам в данной области, таких как использование полуавтоматической «проточной» центрифуги (например, клеточного процессора Cobe 2991) в соответствии с инструкциями производителя. После промывания клетки можно ресуспендировать в ряде биосовместимых буферов, таких как, например, бескальциевый, безмагниевый PBS. Альтернативно нежелательные компоненты образца после афереза можно удалять и клетки непосредственно ресуспендировать в среде для культивирования.
При необходимости T-клетки-предшественники можно выделить из лимфоцитов периферической крови при помощи лизирования эритроцитов и истощения моноцитов, например, при помощи центрифугирования в градиенте PERCOLL™.
При необходимости субпопуляции T-клеток можно отделить от других клеток, которые могут присутствовать. Например, специфические популяции T-клеток, таких как CD28+, CD4+, CD8+, CD45RA+ и CD45RO+T-клетки, можно дополнительно выделять при помощи методик позитивной и негативной селекции. Другие методики обогащения включают в себя сортировку клеток и/или селекцию путем негативной магнитной иммунной адгезии или проточной цитометрии, например, с применением коктейля моноклональных антител, направленных на маркеры клеточной поверхности, присутствующие на клетках, которые были негативно селектированы.
В определенных вариантах реализации изобретения лейкоциты собирают при помощи лейкафереза и затем обогащают CD8+ T-клетками при помощи известных способов, таких как использование колонок магнитного обогащения, которые имеются в продаже. Затем CD8-обогащенные клетки дополнительно обогащают антигенспецифическими T-клетками при помощи магнитного обогащения с применением реагента для иАПК. В различных вариантах реализации изобретения по меньшей мере приблизительно 105, или по меньшей мере приблизительно 106, или по меньшей мере приблизительно 107 CD8-обогащенных клеток выделяют для обогащения антигенспецифическими T-клетками.
В различных вариантах реализации изобретения образец, содержащий иммунные клетки (например, CD8+ T-клетки), приводят в контакт с искусственной антигенпрезентирующей клеткой (иАПК), имеющей магнитные свойства. Парамагнитные материалы имеют незначительную положительную восприимчивость к магнитным полям. Эти материалы притягиваются к магнитному полю и материал не сохраняет магнитные свойства в случае если внешнее поле удаляют. Иллюстративные парамагнитные материалы включают, но не ограничиваясь этим, магний, молибден, литий, тантал и оксид железа. Парамагнитные гранулы, подходящие для магнитного обогащения, имеются в продаже (DYNABEADSTM, MACS MICROBEADSTM, Miltenyi Biotec). В некоторых вариантах реализации изобретения частица, представляющая собой иАПК, представляет собой гранулу на основе декстрана и железа (например, покрытую декстрановой оболочкой гранулу из оксида железа).
Антигенпрезентирующие комплексы содержат антигенсвязывающую щель, которая несет антиген для презентации T-клетке или Т-клетке-предшественнику. Антигенпрезентирующие комплексы могут представлять собой, например, молекулы ГКГС I класса или II класса и могут быть соединены или связаны с получением димерного или многомерного ГКГС. В некоторых вариантах реализации изобретения ГКГС являются мономерными, однако их близкая ассоциация на наночастице является достаточной для авидности и активации. В некоторых вариантах реализации изобретения ГКГС являются димерными. Конструкции на основе димерного ГКГС I класса можно сконструировать при помощи слияния последовательностей иммуноглобулиновой тяжелой цепи с последовательностями иммуноглобулиновой легкой цепи, которые затем ассоциируют путем одной или нескольких дисульфидных связей (и с ассоциированными легкими цепями). В некоторых вариантах реализации изобретения комплекс на основе сигнала 1 представляет собой неклассическую ГКГС-подобную молекулу, такую как член семейства CD1 (например, CD1a, CD1b, CD1c, CD1d и CD1e). Многомерные ГКГС можно создавать при помощи прямого связывания посредством пептида или химических линкеров, или они могут быть многомерными в результате ассоциации со стрептавидином посредством фрагментов биотина. В некоторых вариантах реализации изобретения антигенпрезентирующие комплексы представляют собой молекулярные комплексы на основе ГКГС I класса или ГКГС II класса, включающие слияния с иммуноглобулиновыми последовательностями, которые являются чрезвычайно стабильными и легкими для получения, на основании стабильности и эффективности секреции, обусловленной иммуноглобулиновым остовом.
Молекулярные комплексы на основе ГКГС I класса, имеющие иммуноглобулиновые последовательности, описаны в патенте США 6268411, который включен в данный документе посредством ссылки во всей своей полноте. Эти молекулярные комплексы на основе ГКГС I класса могут образовываться конформационно интактным образом на концах иммуноглобулиновых тяжелых цепей. Молекулярные комплексы на основе ГКГС I класса, с которыми связываются антигенные пептиды, могут стабильно связываться с рецепторами антигенспецифических лимфоцитов (например, T-клеточными рецепторами). В различных вариантах реализации изобретения последовательность иммуноглобулиновой тяжелой цепи не является полноразмерной, однако содержит шарнирный участок Ig и один или несколько CH1-, CH2- и/или CH3-доменов. Последовательность Ig может содержать или может не содержать вариабельный участок, однако в случае, когда присутствуют последовательности вариабельного участка, вариабельный участок может быть полным или частичным. Комплекс может дополнительно содержать иммуноглобулиновые легкие цепи. Лиганды на основе ГКГС класса I (например, HLA-Ig), не имеющие последовательностей вариабельной цепи, могут быть использовать для сайт-направленной конъюгации с частицами, как описано в международной заявке № 2016/105542, которая включена в данный документе посредством ссылки во всей своей полноте.
Иллюстративные молекулярные комплексы на основе ГКГС I класса содержат по меньшей мере два слитых белка. Первый слитый белок содержит первую α-цепь ГКГС I класса и первую иммуноглобулиновую тяжелую цепь (или ее участок, содержащий шарнирный участок), и второй слитый белок содержит вторую α-цепь ГКГС I класса и вторую иммуноглобулиновую тяжелую цепь (или ее участок, содержащий шарнирный участок). Первая и вторая иммуноглобулиновые тяжелые цепи ассоциируются с образованием молекулярного комплекса на основе ГКГС I класса, который содержит две пептидсвязывающие щели ГКГС I класса. Иммуноглобулиновая тяжелая цепь может представлять собой тяжелую цепь IgM, IgD, IgG1, IgG3, IgG2β, IgG2α, IgG4, IgE или IgA. В некоторых вариантах реализации изобретения используется тяжелая цепь IgG для образования молекулярных комплексов на основе ГКГС I класса. Если требуются многовалентные молекулярные комплексы на основе ГКГС I класса, то можно использовать тяжелые цепи IgM или IgA для получения пентавалентных или тетравалентных молекул соответственно.
Иллюстративные молекулы I класса включают в себя HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E и они могут быть использованы по отдельности или в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения антигенпрезентирующий комплекс представляет собой лиганд на основе HLA-A2. Термин ГКГС, используемый в данном документе, в каждом случае можно заменить HLA.
Иллюстративные молекулярные комплексы на основе ГКГС II класса описаны в патенте США 6458354, патенте США 6015884, патенте США 6140113 и патенте США 6448071, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Молекулярные комплексы на основе ГКГС II класса содержат по меньшей четыре два слитых белка. Два первых слитых белка содержат (i) иммуноглобулиновую тяжелую цепь (или ее участок, содержащий шарнирный участок) и (ii) внеклеточный домен β-цепи ГКГС II класса. Два вторых слитых белка содержат (i) иммуноглобулиновую κ- или λ-легкую цепь (или ее участок) и (ii) внеклеточный домен α-цепи ГКГС II класса. Два первых и два вторых слитых белка ассоциируются с образованием молекулярного комплекса на основе ГКГС II класса. Внеклеточный домен β-цепи ГКГС II класса каждого первого слитого белка и внеклеточный домен α-цепи ГКГС II класса каждого второго слитого белка образуют пептидсвязывающую щель ГКГС II класса.
Иммуноглобулиновая тяжелая цепь может представлять собой тяжелую цепь IgM, IgD, IgG3, IgG1, IgG2β, IgG2α, IgG4, IgE или IgA. В некоторых вариантах реализации изобретения тяжелую цепь IgG1 используют для образования двухвалентных молекулярных комплексов, содержащих две антигенсвязывающих щели. Необязательно можно включать вариабельный участок тяжелой цепи. Можно использовать тяжелые цепи IgM или IgA для получения пентавалентных или тетравалентных молекулярных комплексов соответственно.
Слитые белки молекулярного комплекса ГКГС II класса могут содержать пептидный линкер, вставленный между иммуноглобулиновой цепью и внеклеточным доменом полипептида ГКГС II класса. Длина линкерной последовательности может варьировать в зависимости от требуемой гибкости в целях регуляции степени связывания антигенов и перекрестного сшивания рецепторов.
Иммуноглобулиновые последовательности в некоторых вариантах реализации изобретения представляют собой последовательности гуманизированных моноклональных антител.
Сигнал 2, как правило, представляет собой молекулу, воздействующую на T-клетку, т.е., молекулу, которая оказывает биологический эффект на Т-клетку-предшественник или на антигенспецифическую T-клетку. Такие биологические эффекты включают, например, дифференциацию Т-клетки-предшественника в CTL, хелперную T-клетку (например, Th1, Th2) или регуляторную T-клетку; и/или пролиферацию T-клеток. Таким образом, молекулы, воздействующие на T-клетку, включают в себя костимулирующие молекулы Т-клеток, адгезивные молекулы, факторы роста T-клеток и молекулы-индукторы регуляторных Т-клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения иАПК содержит по меньшей мере один такой лиганд; необязательно иАПК содержит по меньшей мере два, три или четыре таких лиганда.
В определенных вариантах реализации изобретения сигнал 2 представляет собой костимулирующую молекулу Т-клеток. Костимулирующие молекулы T-клеток содействуют активации антигенспецифических T-клеток. Такие молекулы включают в себя, но не ограничиваясь этим, молекулы, которые специфические связываются с CD28 (в том числе антитела), CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), B7-H3, 4-1BB, 4-1BBL, CD27, CD30, CD134 (OX-40L), B7h (B7RP-1), CD40, LIGHT, антитела, которые специфически связываются с HVEM, антитела, которые специфически связываются с CD40L, и антитела, которые специфически связываются с OX40. В некоторых вариантах реализации изобретения костимулирующая молекула (сигнал 2) представляет собой антитело (например, моноклональное антитело) или его участок, такой как F(ab')2, Fab, scFv или одноцепочечное антитело, или другой антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело или его участок, имеющий антигенсвязывающую активность, или представляет собой полностью человеческое антитело или его участок, имеющий антигенсвязывающую активность.
Комбинации костимулирующих лигандов, которые можно использовать (на одних и тех же или разных наночастицах) включают в себя анти-CD28/анти-CD27 и анти-CD28/анти-41BB. Соотношения этих костимулирующих лигандов может варьировать в целях воздействия на экспансию.
Иллюстративные лиганды на основе сигнала 1 и сигнала 2 описаны в международной заявке № 2014/209868, в которой описаны лиганды, имеющие свободный сульфгидрил (например, неспаренный цистеин), таким образом, что константный участок можно связать с подложками наночастицы, имеющими соответствующую химическую функциональную группу.
Адгезивные молекулы, пригодные для нано-иАПК, можно использовать для опосредования адгезии нано-иАПК с T-клеткой или T-клеткой-предшественником. Пригодные молекулы адгезии включают в себя, например, ICAM-1 и LFA-3.
В некоторых вариантах реализации изобретения сигнал 1 представлен комплексами HLA-пептид-A2, а сигнал 2 представлен B7.1-Ig или анти-CD28. Иллюстративное анти-CD28 моноклональное антитело представляет собой 9.3 мАТ (Tan et al., J. Exp. Med. 1993 177:165), которое может быть гуманизированным в определенных вариантах реализации и/или конъюгированным с гранулой в виде полностью интактного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
В некоторых вариантах реализации используются факторы роста T-клеток, которые влияют на пролиферацию и/или дифференциацию T-клеток. Примеры факторов роста T-клеток включают в себя цитокины (например, интерлейкины, интерфероны) и суперантигены. При необходимости цитокины могут присутствовать в молекулярных комплексах, содержащих слитые белки или могут быть инкапсулированы при помощи иАПК. Особенно пригодные цитокины включают в себя IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, гамма-интерферон и CXCL10. Необязательно цитокины представлены исключительно средовыми компонентами во время стадий экспансии.
Наночастицы могут быть изготовлены из любого материала, и материалы можно подходящим образом выбрать в отношении необходимого магнитного свойства, и они могут представлять собой, например, металлы, такие как железо, никель, кобальт, или сплав редкоземельного металла. Парамагнитные материалы также включают в себя магний, молибден, литий, тантал и оксид железа. Парамагнитые гранулы, подходящие для обогащения материалов (в том числе клеток) имеются в продаже и включают в себя гранулы на основе декстрана и железа, такие как покрытые декстрановой оболочкой гранулы с оксидом железа. В аспектах данного изобретения, в которых не требуются магнитные свойства, наночастицы также могут быть изготовлены из неметаллических или органических (например, полимерных) материалов, таких как целлюлоза, керамика, стекло, нейлон, полистирол, резина, пластик или латекс. В иллюстративном материале для получения наночастиц присутствует сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) или PLA и его сополимеры, которые можно использовать в связи с этими вариантами реализации. Другие материалы, в том числе полимеры и сополимеры, которые можно использовать, включают таковые, описанные в патнте США № 2014/25889, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах реализации изобретения магнитные частицы являются биосовместимыми. Это является особенно важным в вариантах реализации изобретения, в которых иАПК будут вводить пациенту в ассоциации с обогащенными и экспансированными клетками. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения магнитные частицы являются биосовместимыми парамагнитными гранулами на основе декстрана и железа.
В различных вариантах реализации изобретения частица имеет размер (например, средний размер) в пределах от приблизительно 10 до приблизительно 500 нм, или в пределах от приблизительно 20 до приблизительно 200 нм. Особенно в вариантах реализации изобретения, в которых иАПК будут вводить пациентам, микроразмерные иАПК являются слишком крупными для перенесения лимфатической системой, и при введении подкожно остаются в месте инъекции. При введении внутривенно они оседают на капиллярных ложах. Фактически неэффективная миграция микроразмерных гранул исключило исследование того, куда иАПК должна мигрировать для оптимальной иммунотерапии. Миграция и биораспределение нано-иАПК, по-видимому, являются более эффективными, чем микроразмерных иАПК. Например, два потенциальных участка, в которых иАПК могла быть наиболее эффективной, представляют собой лимфатический узел, в котором располагаются наивные Т-клетки и T-клетки памяти, и сама опухоль. Наночастицы с диаметром от приблизительно 50 до приблизительно 200 нм могут захватываться лимфатической системой и транспортироваться к лимфатическим узлам, тем самым гейтируется доступ к более крупному пулу T-клеток. Как описано в патенте США № 2014/25889, который включен в данный документ посредством ссылки, подкожная инъекция нано-иАПК приводила к меньшему опухолевому росту, чем в случае контроля или внутривенно вводимых гранул.
Для магнитной кластеризации предпочтительно, что наночастицы имеют размер в диапазоне от 10 до 250 нм, или в некоторых вариантах реализации изобретения от 20 до 100 нм. Взаимодействия рецептор-лиганд на границе раздела клетки и наночастицы полностью непонятны. Однако связывание наночастиц и клеточная активация являются чувствительными к пространственной организации мембраны, которая является особенно важной во время активации T-клеток, и можно использовать магнитные поля для манипуляции связанных в кластеры наночастиц с усилением активации. Например, активация T-клеток индуцирует состояние постоянно усиленной наноразмерной кластеризации TCR и наночастицы являются чувствительными к этой кластеризации в отношении, не характерном для более крупных частиц.
Кроме того, взаимодействия наночастиц с кластерами TCR можно использовать для усиления стимуляции рецепторов. Активация T-клеток опосредована агрегацией сигнальных белков, при этом сотни «сигнальных кластеров» нанометровых размерностей изначально образуются на периферии контактного сайта Т-клетка-АПК и мигрируют внутрь. Как описано в данном документе, можно использовать внешние магнитные поля в целях обогащения антигенспецифических T-клеток (в том числе редких наивных клеток) и регуляции агрегации магнитной нано-иАПК, связанной с TCR, приводящей к агрегации кластеров TCR и усиленной активации наивных T-клеток. Магнитные поля могут вызывать соответственно сильные влияния на парамагнитные частицы, однако в ином отношении являются биологически инертными, делая их эффективным средством контроля поведения частиц. T-клетки, связанные с парамагнитными нано-иАПК, активируются в присутствии прилагаемого извне магнитного поля. Нано-иАПК сами по себе намагничиваются и притягиваются как к источнику поля, так и к ближайшим наночастицам в поле, индуцируя агрегацию гранул и тем самым TCR в целях повышения иАПК-опосредованной активации.
Нано-иАПК связывают больше TCR и индуцируют более высокую активацию ранее активированных Т-клеток по сравнению с наивными Т-клетками. Кроме того, использование внешнего магнитного поля индуцирует агрегацию нано-иАПК на наивных клетках, усиливая пролиферацию T-клеток как in vitro, так и после адаптивного переноса in vivo. Важно, что в модели адаптивной иммунотерапии меланомы T-клетки, активированные нано-иАПК в магнитном поле, опосредуют отторжение опухоли. Таким образом, использование применяемых магнитных полей способствует активации популяции наивных T-клеток, которые иначе слабовосприимчивы к стимуляции. Это является важной особенностью иммунотерапии, поскольку, как было показано, наивные T-клетки являются более эффективными, чем более дифференцированные подтипы, для иммунотерапии рака, при этом имеется более высокая пролиферативная активность и более высокая способность к генерации сильных длительных T-клеточных ответов. Таким образом, нано-иАПК можно использовать для усиленной магнитными полями активации T-клеток в целях повышения выхода и активности антигенспецифических T-клеток, экспансированных из наивных предшественников, совершенствуя клеточную терапию, например, для пациентов с инфекционными заболеваниями, раком или аутоиммунными заболеваниями, или в целях обеспечения профилактической защиты для пациентов с ослабленным иммунитетом.
Молекулы можно непосредственно связывать с наночастицами при помощи адсорбции или при помощи прямого химического связывания, в том числе ковалентного связывания. См. Hermanson, BIOCONJUGATE TECHNIQUES, Academic Press, New York, 1996. Сама молекула может быть непосредственно активирована рядом химических функциональных групп, в том числе, нуклеофильными группами, уходящими группами или электрофильными группами. Активирующие функциональные группы включают в себя алкил- и ацилгалиды, амины, сульфгидрилы, альдегиды, ненасыщенные связи, гидразиды, изоцианаты, изотиоцианаты, кетоны и другие группы, которые, как известно, активируют химическое связывание. Альтернативно молекула может быть связана с наночастицей посредством использования низкомолекулярного связывающего реагента. Неограничивающие примеры связывающих реагентов включают в себя карбодиимиды, малеимиды, сложные эфиры н-гидросукцинимида, бисхлорэтиламины, бифункциональные альдегиды, такие как глутаральдегид, ангидриды и т.п. В других вариантах реализации изобретения молекула может быть связана с наночастицей при помощи аффинности связывания, такой как связывание или спаривание при помощи биотина и стрептавидина, как известно в данной области. Например, стрептавидин может быть связан с наночастицей путем ковалентного или нековалентного присоединения, и биотинилированная молекула может быть синтезирована при помощи способов, которые хорошо известны в данной области.
В случае, если предполагается ковалентное связывание с наночастицей, то подложку можно покрыть полимером, который содержит один или несколько химических фрагментов или функциональных группы, которые доступны для ковалентного присоединения с подходящим реагентом, обычно при помощи линкера. Например, аминокислотные полимеры могут иметь группы, такие как ε-аминогруппа лизина, доступная для ковалентного связывания молекулы при помощи подходящих линкеров. Данное раскрытие также предусматривает размещение второй оболочки на наночастицу для получения этих функциональных групп.
Можно использовать активирующие химические структуры для обеспечения специфического стабильного присоединения молекул к поверхности наночастиц. Существует множество способов, которые используются для присоединения белков к функциональным группам. Например, обычный кросс-линкер глутаральдегид используется для присоединения аминогрупп к аминированной поверхности наночастицы в двустадийном процессе. Полученная в результате связь является гидролитически стабильной. Другие способы включают использование кросс-линкеров, содержащих сложные эфиры н-гидроксисукцинимида (NHS), которые реагируют с аминами на белках, кросс-линкеров, содержащих активные галогены, которые реагируют с амино-, сульфгидрил- или гистидинсодержащими белками, кросс-линкеры, содержащие эпоксиды, которые реагируют с аминами или сульфгидрильными группами, конъюгацию между малеимидными группами и сульфгидрильными группами и образование белковых альдегидных групп при помощи окисления периодатом боковых фрагментов сахаров с последующим восстановительным аминированием.
В некоторых вариантах реализации изобретения лиганды на основе сигнала 1 и/или сигнала 2 химически конъюгируют с частицами при помощи свободного цистеина, сконструированного в Fc-участке иммуноглобулиновых последовательностей.
Соотношение определенных лигандов при одновременном использовании на одних и тех же или разных частицах можно варьировать в целях повышения эффективности частицы при презентации антигенов или костимулирующих пептидов. Например, наночастицы могут быть связаны с HLA-A2-Ig и анти-CD28 (или другими лигандами на основе сигнала 2) при множестве соотношений, таких как приблизительно 30:1, приблизительно 25:1, приблизительно 20:1, приблизительно 15:1, приблизительно 10:1, приблизительно 5:1, приблизительно 3:1, приблизительно 2:1, приблизительно 1:1, приблизительно 0,5:1, приблизительно 0,3:1; приблизительно 0,2:1, приблизительно 0,1:1 или приблизительно 0,03:1. В некоторых вариантах реализации соотношение составляет от 2:1 до 1:2. Общее содержание белка, связанного с подложками может составлять, например, приблизительно 250 мг/мл, приблизительно 200 мг/мл, приблизительно 150 мг/мл, приблизительно 100 мг/мл или приблизительно 50 мг/мл частиц. Поскольку эффекторные функции, такие как высвобождение цитокинов и рост, могут характеризоваться другими требованиями в случае сигнала 1 в зависимости от сигнала 2, чем активация и дифференциация T-клеток, то эти функции можно определить отдельно.
Конфигурация наночастиц может варьировать от неправильной формы до сферической и/или от неровной или искривленной поверхности до гладкой поверхности. Несферические иАПК описаны в международной заявке № 2013/086500, которая включена посредством ссылки во всей своей полноте.
В определенных вариантах реализации изобретения иАПК представляют собой парамагнитные частицы в диапазоне от 50 до 100 нм (например, примерно 85 нм) с PDI (распределением размеров) менее чем 0,2 или в некоторых вариантах реализации изобретения - менее чем 0,1. иАПК могут иметь поверхностный заряд от 0 до -10 мВ, например, от приблизительно -2 до -6 мВ. иАПК могут иметь от 10 до 120 лигандов на частицу, например, от приблизительно 25 до приблизительно 100 лигандов на частицу, при этом лиганды конъюгированы с частицей при помощи свободного цистеина, введенного в Fc-участке иммуноглобулиновых последовательностей. Частицы могут содержать димер HLA:анти-CD28 в соотношении приблизительно 1:1, который может присутствовать на одних и тех же или разных популяциях частиц. Наночастицы обеспечивают эффективную экспансию когнатных T-клеток, при этом не оказывают стимуляции на некогнатные TCR, даже в случае пассивной нагрузки пептидного антигена. Частицы являются стабильными в лиофилизированной форме в течение по меньшей мере двух или трех лет.
иАПК презентируют антиген T-клеткам и, таким образом, могут использоваться как для обогащения, так и для экспансии антигенспецифических T-клеток, в том числе из наивных T-клеток. Пептидные антигены будут выбраны на основании требуемой терапии, например, рака, типа рака, инфекционного заболевания и т.п. В некоторых вариантах реализации изобретения осуществляют способ лечения пациента, больного раком, и неоантигены, специфические для пациента, идентифицируют и синтезируют для нагрузки на иАПК. В некоторых вариантах реализации изобретения в процессе генетического анализа опухоли идентифицируют от трех до десяти неоантигенов (например, секвенирования нуклеиновой кислоты) с последующим прогностическим биоинформационным анализом. Как показано в данном документе, несколько антигенов можно использовать совместно (на отдельных иАПК) без потери функциональных свойств способа. В некоторых вариантах реализации изобретения антиген представляют собой природные, немутировавшие раковые антигены, многие из которых являются известными. Данный способ идентификации антигенов на персонализированной основе более подробно описан ниже.
Ряд антигенов можно связать с антигенпрезентирующими комплексами. Природа антигенов зависит от типа антигенпрезентирующего комплекса, который используется. Например, пептидные антигены можно связывать с пептидсвязывающими щелями ГКГС I класса и II класса. Неклассические ГКГС-подобные молекулы можно использовать для презентации непептидных антигенов, таких как фосфолипиды, сложные углеводы и т.п. (например, компоненты мембраны бактерий, такие как миколовая кислота и липоарабиноманнан). Любой пептид, способный к индукции иммунного ответ, может быть связан с антигенпрезентирующим комплексом. Антигенные пептиды включают в себя опухоль-ассоциированные антигены, аутоантигены, аллогены и антигены инфекционных агентов.
«Опухоль-ассоциированные антигены» включают в себя уникальные опухолевые антигены, экспрессируемые исключительно опухолью, из которой они происходят, общие опухолевые антигены, экспрессируемые во многих опухолях, но не в нормальных тканях взрослых (онкофетальные антигены), и тканеспецифические антигены, экспрессируемые нормальной тканью, из которой опухоль произошла. Опухоль-ассоциированные антигены могут представлять собой, например, эмбриональные антигены, антигены с нарушенными посттрансляционными модификациями, дифференцировочные антигены, продукты мутировавших онкогенов или супрессоров опухолевого роста, слитые белки или онковирусные белки.
Ряд опухоль-ассоцииированных антигенов известен в данной области и многих из них имеются в продаже. Онкофетальные и эмбриональные антигены включают в себя карциноэмбриональный антиген и альфа-фетопротеин (обычно высокоэкспрессируемый только в развивающихся эмбрионах, но часто высокоэкспрессируемый опухолями печени и толстой кишки соответственно), MAGE-1 и MAGE-3 (экспрессируемые при мелономе, раке молочной железы и глиоме), плацентарная щелочная фосфатаза, сиалил-Lewis X (экспрессируемые при аденокарциноме), CA-125 и CA-19 (экспрессируемые при желудочно-кишечных, печеночных и гинекологических опухолях), TAG-72 (экспрессируемый при опухолях толстой кишки), эпителиальный гликопротеин 2 (экспрессируемый при многих карциномах), панкреатический онкофетальный антиген 5T4 (экспрессируемый при карциноме желудка), рецептор альфа-фетопротеина (экспрессируемый при многих типах опухолей, в частности, опухолях молочной железы) и M2A (экспрессируемый при новообразовании зародышевых клеток).
Опухоль-ассоциированные дифференцировочные антигены включают в себя тирозиназу (экспрессируемую при меланоме) и определенные поверхности иммуноглобулины (экспрессируемые при лимфомах).
Продукты мутировавших онкогенов и генов-супрессоров опухолевого роста включают в себя Ras и p53, оба из которых экспрессируются во многих типах опухолей, Her-2/neu (экспрессируемый при раке молочной железы и гинекологических видах рака), EGF-R, эстрогеновый рецептор, прогестероновый рецептор, продукт гена ретинобластомы, myc (ассоциированный с раком легкого), ras, p53, немутантный, ассоциированный с опухолями молочной железы, MAGE-1 и MAGE-3 (ассоциированные с меланомой, раком легкого и другими видами рака). Слитые белки включают в себя BCR-ABL, который экспрессируется при хроническом миелоидном лейкозе. Онковирусные белки включают в себя ВПЧ 16, E6 и E7 типа, которые встречаются при карциноме шейки матки.
Тканеспецифические антигены включают в себя меланотрансферрин и MUC1 (экспрессируемые при раке поджелудочной железы и раке молочной железы); CD10 (ранее известный как антигенный маркер острого лимфобластного лейкоза, или CALLA) или поверхностный иммуноглобулин (экспрессируемый при лейкозах и лимфомах B-клеток); α-цепь рецептора IL-2, T-клеточный рецептор, CD45R, CD4+/CD8+ (экспрессируемый при лейкозах и лимфомах T-клеток); простатический специфический антиген и простатическая кислая фосфатаза (экспрессируемые при карциноме предстательной железы); GP 100, MelanA/Mart-1, тирозин, gp75/brown, BAGE и S-100 (экспрессируемые при меланоме); цитокератины (экспрессируемые при различных карциномах); и CD19, CD20 и CD37 (экспрессируемые при лимфоме).
Опухоль-ассоциированые антигены также включают измененные гликолипидные и гликопротеиновые антигены, такие как гликосфинголипиды, содержащие нейраминовую кислоту (например, GM2 и GD2, экспрессируемые при меланомах и некоторых опухолях головного мозга); антигены групп крови, в частотности, T- и сиалированные Tn-антигены, которые могут аберрантно экспрессироваться при карциномах; и муцины, такие как CA-125 и CA-19-9 (экспрессируемые при карциномах яичника) или недоглюкозированный MUC-1 (экспрессируемый при карциномах молочной железы и поджелудочной железы).
Например, в некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак мочевого пузыря, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из NY-ESO-1, MAGE-A10 и MUC-1. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак головного мозга, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из NY-ESO-1, сурвивина и ЦМВ. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак молочной железы, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из MUC-1, сурвивина, WT-1, HER-2 и CEA. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак шейки матки, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена ВПЧ. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак толстой кишки, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из NY-ESO-1, сурвивина, WT-1, MUC-1 и CEA. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак пищевода, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена NY-ESO-1. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак головы и шеи, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена ВПЧ. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак почки или печени, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена NY-ESO-1. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак легкого, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из NY-ESO-1, сурвивина, WT-1, MAGE-A10 и MUC-1. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет меланому, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких из NY-ESO-1, сурвивина, MAGE-A10, MART-1 и GP-100. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак яичника, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из NY-ESO-1, WT-1 или мезотелина. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет рак предстательной железы, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из сурвивина, hTERT, PSA, PAP и PSMA. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет саркому, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена NY-ESO-1. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет лимфому, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена ВЭБ. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет множественную миелому, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи одного или нескольких антигенов из NY-ESO-1, WT-1 или SOX2. В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет лимфому, и T-клетки обогащают и экспансируют при помощи антигена ВЭБ.
В некоторых вариантах реализации изобретения пациент, подлежащий лечению, имеет острый миелогенный лейкоз или миелодиспластический синдром, и T-клетки обогащают и экспансируют одним или несколькими антигенами из (в том числе 1, 2, 3, 4 или 5 из) сурвивина, WT-1, PRAME, RHAMM и PR3.
«Антигены инфекционных агентов» включают в себя компоненты простейших, бактерий, грибов (как одноклеточных, так и многоклеточных), вирусов, прионов, внутриклеточных паразитов, гельминтов и других инфекционных агентов, которые могут вызывать иммунный ответ.
Бактериальные антигены включают в себя антигены грамположительных кокков, грамположительных бацилл, грамотрицательных бактерий, анаэробных бактерий, таких как организмы семейств Actinomycetaceae, Bacillaceae, Bartonellaceae, Bordetellae, Captophagaceae, Corynebacteriaceae, Enterobacteriaceae, Legionellaceae, Micrococcaceae, Mycobacteriaceae, Nocardiaceae, Pasteurellaceae, Pseudomonadaceae, Spirochaetaceae, Vibrionaceae и организмы родов Acinetobacter, Brucella, Campylobacter, Erysipelothrix, Ewingella, Francisella, Gardnerella, Helicobacter, Levinea, Listeria, Streptobacillus и Tropheryma.
Антигены инфекционных агентов, относящихся к простейшим, включают в себя антигены малярийных плазмодиев, видов Leishmania, видов Trypanosoma и видов Schistosoma.
Антигены грибов включают в себя антигены Aspergillus, Blastomyces, Candida, Coccidioides, Cryptococcus, Histoplasma, Paracoccicioides, Sporothrix, организмов порядка Mucorales, организмов, вызывающих хромомикоз и мицетому, и организмов родов Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton и Malassezia.
Вирусные пептидные антигены включают в себя, но не ограничиваясь этим, таковые аденовируса, вируса простого герпеса, вируса папилломы, респиратного-синцитального вируса, поксвирусов, ВИЧ, вирусов гриппа и ЦМВ. Особенно пригодные вирусные пептидные антигены включают в себя белки ВИЧ, такие как белки gag (в том числе, но не ограничиваясь этим, мембранный якорный (MA) белок, коровый капсидный (CA) белок и нуклеокапсидный (NC) белок), полимеразу ВИЧ, матриксный (M) белок вируса гриппа и нуклеокапсидный белок (NP) вируса гриппа, поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg), коровый белок вируса гепатита B (HBcAg), белок гепатита e (HBeAg), ДНК-полимеразу вируса гепатита B, антигены вируса гепатита C и т.п.
Антигены, в том числе антигенные пептиды, могут связываться с антигенсвязывающей щелью антигенпрезентирующего комплекса, как активно, так и пассивно, как описано в патенте США № 6268411, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Необязательно антигенный пептид может ковалентно связываться с пептидсвязывающей щелью.
При необходимости можно использовать пептидную связь для связывания антигенного пептида с пептидсвязывающей щелью. Например, кристаллографические анализы молекул ГКГС I класса указывают на то, что аминоконец β2M расположен очень близко, на расстоянии примерно 20,5 ангстрем от карбоксиконца антигенного пептида, расположенного в пептидсвязывающей щели ГКГС. Таким образом, при помощи сравнительно короткой линкерной последовательности, составляющей примерно 13 аминокислоту в длину, можно связать пептид с аминоконцом β2M. В случае, если последовательность является подходящей, то этот пептид будет связываться со связывающей бороздой ГКГС (см. патент США № 6268411).
Антигенспецифические Т-клетки, которые связываются с иАПК, можно отделить от клеток, которые не связываются, при помощи магнитного обогащения или другой методики сортировки или захвата клеток. Другие способы, которые можно использовать для этой цели, включают в себя проточную цитометрию и другие хроматографические средства (например, включающие иммобилизацию антигенпрезентирующего комплекса или другого лиганда, описанного в данном документе). В одном варианте реализации изобретения антигенспецифические T-клетки выделяют (или обогащают) при помощи инкубации с гранулами, например, парамагнтитными гранулами, конъюгированными с антигенпрезентирующим комплексом/анти-CD28 (например, DYNABEADS®), в течение периода времени, достаточного для позитивной селекции требуемых антигенспецифичесих T-клеток.
В некоторых вариантах реализации изобретения популяцию T-клеток можно достаточно истощить от ранее активных T-клеток при помощи, например, антитела к CD44, покидающего популяцию, обогащенную наивными T-клетками. Связывание нано-иАПК с этой популяцией не достаточно активировало бы наивные T-клетки, однако способствовало бы их очистке.
В еще одних вариантах реализации изобретения лиганды, которые целенаправленно воздействуют на NK-клетки, NKT-клетки или B-клетки (или другие иммунные эффекторные клетки), можно включить в парамагнитную наночастицу и использовать для магнитного обогащения этих клеточных популяций, необязательно при помощи экспансии в культуре, описанной ниже. Дополнительные иммунные эффекторные клеточные лиганды описаны в патенте США № 2014/25889, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Не ограничиваясь теорией, удаление нежелательных клеток может снижать конкуренцию за цитокины и сигналы роста, приводить к удалению супрессорных клеток или может просто обеспечивать физическое пространство для экспансии клеток, представляющих интерес.
Обогащенные T-клетки затем экспансируют в культуре, необязательно вблизи магнита, в течение периода времени в целях получения магнитного поля, которое усиливает кластеризацию T-клеточных рецепторов связанных с иАПК клеток. Культуры можно стимулировать в течение различных периодов времени, например, от приблизительно 5 минут до приблизительно 72 часов (например, приблизительно 0,5, 2, 6, 12, 36, 48 или 72 часов, а также при непрерывной стимуляции) при помощи нано-иАПК. Можно определить эффект стимуляции в культурах высокообогащенных антигенспецифических T-клеток. Антигенспецифические T-клетки можно помещать обратно в культуру и анализировать на предмет клеточного роста, скорости пролиферации, различных эффекторных функций и т.п., как хорошо известно в данной области. Такие условия могут варьировать в зависимости от требуемого антигенспецифического T-клеточного ответа. В некоторых вариантах реализации изобретения T-клетки экспансируют в культуре от приблизительно 2 дней до приблизительно 3 недель, или в некоторых вариантах реализации изобретения - от приблизительно 5 дней до приблизительно 2 недель, или от приблизительно 5 дней до приблизительно 10 дней. В некоторых вариантах реализации изобретения T-клетки экспансируют в культуре в течение приблизительно 1 недели, после этого времени необязательно выполняют вторую стадию обогащения и экспансии. В некоторых вариантах реализации изобретения выполняют 2, 3, 4 или 5 циклов обогащения и экспансии.
После одного или нескольких циклов обогащения и экспансии (например, приблизительно 7 дней) антигенспецифический T-клеточный компонент образца будет составлять по меньшей мере приблизительно 1% от T-клеток, или в некоторых вариантах реализации изобретения - по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, или по меньшей мере приблизительно 20%, или по меньшей мере приблизительно 25% от T-клеток в культуре. Кроме того, эти T-клетки, как правило, характеризуются активированным состоянием. Из исходного образца, выделенного от пациента, антигенспецифические T-клетки в различных вариантах реализации изобретения экспансируют (в течение приблизительно 7 дней) от приблизительно 100 раз до приблизительно 10000 раз, например, по меньшей мере приблизительно в 100 раз или по меньшей мере приблизительно в 200 раз. Через 2 недели антигенспецифические T-клетки экспансируют в различных вариантах реализации изобретения по меньшей мере в 1000 раз, или по меньшей мере приблизительно в 2000 раз, по меньшей мере приблизительно в 3000 раз, по меньшей мере приблизительно в 4000 раз или по меньшей мере приблизительно в 5000 раз. В некоторых вариантах реализации изобретения через две недели антигенспецифические T-клетки экспансируют более чем в 5000 раз или более чем в 10000 раз. После одного или нескольких циклов обогащения и экспансии (одна или две недели) получают по меньшей мере приблизительно 106, или по меньшей мере приблизительно 107, или по меньшей мере приблизительно 108, или по меньшей мере приблизительно 109 антигенспецифических T-клеток.
Влияние нано-иАПК на экспансию, активацию и дифференцировку T-клеток-предшественников можно определить в любом количестве способов, известных специалистам в данной области. Быстрое определение функции можно достичь при помощи анализа пролиферации, при определении увеличения числа CTL, хелперных T-клеток или регуляторных T-клеток в культуре при помощи маркеров детекции, специфических по отношению к каждому типу T-клетки. Такие маркеры известны в данной области. CTL можно детектировать при помощи определения продукции цитокинов или цитолитической активности при помощи анализов высвобождения хрома.
Помимо генерации антигенспецифических T-клеток с соответствующими эффекторными функциями, другим параметром эффективности антигенспецифических T-клеток является экспрессия «хоуминг»-рецепторов, которые обеспечивают миграцию T-клеток к поврежденным участкам (Sallusto et al., Nature 401, 708-12, 1999; Lanzavecchia & Sallusto, Science 290, 92-97, 2000).
Например, эффективность эффекторных CTL была связана со следующими фенотипами «хоуминг»-рецепторов, CD62L+, CD45RO+ и CCR7-. Таким образом, индуцированная нано-иАПК и/или экспансированная популяция CTL может быть охарактеризована на предмет экспрессии этих «хоуминг»-рецепторов. Экспрессия «хоуминг»-рецепторов является сложной характеристикой, связанной с исходными условиями стимуляции. Предположительно, она контролируется как костимулирующими комплексами, так и цитокиновым окружением. Одним важным цитокином, который участвовал в этом, является IL-12 (Salio et al., 2001). Как обсуждается ниже, нано-иАПК предлагают возможности для варьирования индивидуально отделенных компонентов (например, эффекторных молекул T-клеток и антигенпрезентирующих комплексов) в целях оптимизации параметров биологического исхода. Необязательно цитокины, такие как IL-12, могут быть включены в исходные индукционные культуры в целях воздействия на профили «хоуминг»-рецепторов в популяции антиген-специфических T-клеток.
Необязательно клеточную популяцию, содержащую антигенспецифические T-клетки, можно продолжать инкубировать либо с одной и той же нано-иАПК, либо со второй нано-иАПК, в течение периода времени, достаточного для образования второй клеточной популяции, содержащей повышенное количество антигенспецифических T-клеток по отношению к количеству антигенспецифических T-клеток в первой клеточной популяции. Обычно такие инкубации проводят в течение 3-21 дней, предпочтительно 7-10 дней.
Подходящие условия инкубации (среда для культивирования, температура и т.д.) включают в себя таковые, используемые для культивирования T-клеток или T-клеток-предшественников, а также таковые, известные в данной области для индуцирования образования антигенспецифических T-клеток при помощи DC или искусственных антигенпрезентирующих клеток. См., например, Latouche & Sadelain, Nature Biotechnol.18, 405-09, April 2000; Levine et al., J. Immunol.159, 5921-30, 1997; Maus et al., Nature Biotechnol. 20, 143-48, February 2002. См. также конкретные примеры ниже.
В целях определения величины пролиферативного сигнала популяции антигенспецифических T-клеток можно метить CFSE и анализировать на предмет скорости и числа клеточных делений. T-клетки можно метить CFSE через один-два цикла стимуляции нано-иАПК, с которыми антиген связан. В этот момент времени антигенспецифические T-клетки должны представлять 2-10% от всей клеточной популяции. Антигенспецифические T-клетки можно детектировать при помощи антигенспецифического окрашивания таким образом, что частоту и число делений антигенспецифических T-клеток можно отслеживать по потере CFSE. В различные момент времени (например, через 12, 24, 36, 48 и 72 часа) после стимуляции клетки можно анализировать как на предмет окрашивания антигенпрезентирующего комплекса, так и на предмет CFSE. Стимуляцию нано-иАПК, с которыми антиген не был связан, можно использовать для определения исходных уровней пролиферации. Необязательно пролиферацию можно детектировать при помощи контроля включения 3H-тимидина, как известно в данной области.
Антигенспецифические T-клетки, полученные при помощи нано-иАПК, можно вводить пациентам при помощи подходящих способов, в том числе внутривенного введения, внутриартериального введения, подкожного введения, интрадермального введения, внутрилимфатического введения и интратуморального введения. Пациенты включают в себя как пациентов-людей, так и пациентов ветеринарного назначения.
Антигенспецифические регуляторные T-клетки можно использовать для достижения иммуносупрессорного эффекта, например, для лечения или предупреждения реакции «трансплантат против хозяина» у пациентов после трансплантации, или для лечения или предупреждения аутоимунных заболеваний, таких как таковые, перечисленные выше, или аллергический реакций. Применения регуляторных T-клеток раскрыты, например, в патентах США №№ 2003/0049696, 2002/0090724, 2002/0090357, 2002/0034500 и 2003/0064067, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Антигенспецифические T-клетки, полученные в соответствии с этими способами, можно вводить пациентам в дозах, варьирующих от приблизительно 5-10×106 CTL/кг массы тела (~7 x108 CTL/лечение) до приблизительно 3,3×109CTL/кг массы тела (~6×109 CTL/лечение) (Walter et al., New England Journal of Medicine 333, 1038-44, 1995; Yee et al., J Exp Med 192, 1637-44, 2000). В других вариантах реализации изобретения пациенты могут получать приблизительно 103, приблизительно 5×103, приблизительно 104, приблизительно 5×104, приблизительно 105, приблизительно 5×105, приблизительно 106, приблизительно 5×106, приблизительно 107, приблизительно 5×107, приблизительно 108, приблизительно 5×108, приблизительно 109, приблизительно 5×109 или приблизительно 1010 клеток на дозу, вводимую внутривенно. В еще одних вариантах реализации изобретения пациенты могут получать внутриузловые инъекции, например, приблизительно из 8×106 или приблизительно из 12×106 клеток в 200 мкл болюсе. Дозы нано-АПК, которые необязательно вводят с клетками, включают по меньшей мере приблизительно 103, приблизительно 5×103, приблизительно 104, приблизительно 5×104, приблизительно 105, приблизительно 5×105, приблизительно 106, приблизительно 5×106, приблизительно 107, приблизительно 5×107, приблизительно 108, приблизительно 5×108, приблизительно 109, приблизительно 5×109, приблизительно 1010, приблизительно 5×1010, приблизительно 1011, приблизительно 5×1011 или приблизительно 1012 нано-иАПК на дозу.
В иллюстративном варианте реализации процесс обогащения и экспансию выполняют повторно на одном и том же образце, взятом от пациента. Популяцию T-клеток обогащают и активируют на 0-й день с последующим подходящим периодом времени (например, приблизительно 3-20 дней) культивирования. Затем нано-иАПК можно использовать для повторного обогащения и экспансировании по отношению к антигену, представляющему интерес, дополнительно повышая популяционную частоту и обеспечивая дополнительный стимул для дальнейшей экспансии T-клеток. Смесь нано-иАПК и обогащенных T-клеток затем можно повторно культивировать in vitro в течение подходящего периода времени или незамедлительно реинфузировать пациенту для дополнительной экспансии и терапевтического эффекта in vivo. Обогащение и экспансию можно повторять любое количество раз до достижения требуемой экспансии.
В некоторых вариантах реализации изобретения коктейль из нано-иАПК, каждая из которых направлена против различного антигена, можно использовать сразу для обогащения и экспансии антигенспецифических T-клеток против нескольких антигенов одновременно. В этом варианте реализации изобретения ряд различных серий нано-иАПК, каждая из которых несет различный пептид ГКГС, будут комбинировать и использовать для одновременного обогащения T-клеток против каждого из антигенов, представляющих интерес. Полученный в результате пул T-клеток будет обогащен и активирован против каждого из этих антигенов и ответы против нескольких антигенов могут быть получены таким образом одновременно. Эти антигены могут быть связаны с одним терапевтическим мероприятием; например, несколько антигенов присутствует на одной опухоли.
В некоторых вариантах реализации изобретения пациент получает иммунотерапию на основе одного или нескольких ингибиторов контрольных точек, перед получением антигенспецифических T-клеток при помощи адаптивного переноса, или перед непосредственным введением аАПК, несущих неоантигены, идентифицированные in vitro в процессе генетического анализа опухоли пациента. В различных вариантах реализации изобретения ингибитор(ингибиторы) контрольных точек направлен(направлены) на одно или несколько из CTLA-4 или PD-1/PD-L1, которые могут включать в себя антитела против таких мишеней, такие как моноклональные антитела или их участки, или их гуманизированные или полностью человеческие варианты. В некоторых вариантах реализации терапия на основе ингибиторов контрольных точек включает ипилимумаб или Кейтруду (пембролизумаб).
В некоторых вариантах реализации пациент получает от приблизительно 1 до 5 циклов адаптивной иммунотерапии (например, один, два, три, четыре или пять циклов). В некоторых вариантах реализации изобретения каждое назначение адаптивной иммунотерапии проводят одновременно с циклом или после цикла (например, через от приблизительно 1 дня до приблизительно 1 недели) терапии на основе ингибиторов контрольных точек. В некоторых вариантах реализации изобретения адаптивная терапия предусмотрена через приблизительно 1 день, приблизительно 2 дня, приблизительно 3 дня, приблизительно 4 дня, приблизительно 5 дней, приблизительно 6 дней или приблизительно 1 неделю после введения дозы ингибитора контрольных точек.
В еще одних вариантах реализации изобретения адаптивный перенос или непосредственная инфузия нано-иАПК пациенту включает, в случае, если лиганд находится на грануле, лиганд, который целенаправленно воздействует на одно или несколько из CTLA-4 или PD-1/PD-L1. В этих вариантах реализации изобретения в результате осуществления способа можно избежать определенных побочных эффектов введения растворимого препарата на основе ингибитора контрольных точек.
В некоторых аспектах в данном изобретении предложены способы персонализированной иммунотерапии рака. Способы сопровождаются использованием иАПК в целях идентификации антигенов, на которые пациент будет реагировать, с последующим введением нагруженной соответствующим пептидом иАПК или с последующим обогащением и экспансией антигенспецифических T-клеток ex vivo.
Полногеномное секвенирование значительно изменило наше понимание биологии рака. Секвенирование видов рака привело к получению важных данных касательно молекулярных процессов, связанных с развитием многих видов рака человека. Были идентифицированы драйверные мутации в основных генах, участвующих в путях, регулирующих три основных клеточных процесса: (1) предопределение клеток, (2) выживание клеток и (3) поддержание генома. Vogelstein et al., Science 339, 1546-58 (2013).
Полногеномное секвенирование также имеет перспективу полностью изменить наш подход к иммунотерапии рака. Данные секвенирования могут предоставить информацию как об общих, так и о персонализированных мишенях для иммунотерапии рака. В принципе мутантные белки являются чужеродными для иммунной системы и предположительными опухоль-специфическими антигенами. Действительно усилия в области секвенирования привели к определению сотен, если не тысяч, потенциальных релевантных иммунных мишеней. Ограниченные исследования показали, что T-клеточные рецепторы против этих неоэпитопов можно обнаружить у пациентов, больных раком, или индуцировать противоопухолевыми вакцинами. Однако частота таких ответов против определенного вида рака и степень, до которой такие ответы являются общими среди пациентов, недостаточно известны. Одна из основных причин нашего ограниченного понимания опухоль-специфических иммунных ответов заключается в том, что современные подходы для валидации потенциальных иммунологически релевантных мишеней являются трудоемкими и занимают много времени.
Таким образом, в некоторых аспектах в данном изобретении предложен подход на основе платформы с высокой пропускной способностью для детекции T-клеточных ответов против неоантигенов при раке. В этом подходе используется платформа на основе иАПК, описанных в данном документе, для детекции T-клеточных ответов против раковых антигенов даже при низкой частоте. Понимание частоты и межиндивидуального различия таких ответов имело бы важное значение для разработки противоопухолевых вакцин и пеорсонализированной иммунотерапии рака.
Несмотря на то, что центральная толерантность подавляет T-клеточные ответы против собственных белков, онкогенные мутации индуцируют неоэпитопы, против которых могут формироваться Т-клеточные ответы. Каталоги мутаций, полученных в результате полноэкзомного секвенирования дают исходную точку для идентификации таких неоэпитопов. При помощи алгоритмов прогноза связывания HLA (Srivastava, PLoS One 4, e6094 (2009), было предсказано, что каждый вид рака может характеризоваться 7-10 неоэпитопами. В аналогичном подходе оценивали сотни опухолевых неоэпитопов. Однако такие алгоритмы могут иметь низкую точность прогноза T-клеточных ответов, и ожидается, что лишь 10% прогнозируемых эпитопов, связывающихся с HLA, связываются в контексте HLA (Lundegaard C, Immunology 130, 309-18 (2010)). Таким образом, прогнозируемые эпитопы должны быть валидированы на наличие T-клеточных ответов против таких потенциальных неоэпитопов.
В определенных вариантах реализации изобретения используется система нано-аАПК для скрининга неоэпитопов, которые индуцируют T-клеточный ответ при множестве видов рака или при рака у конкретного пациента. Виды рака можно анализировать генетически, например, при помощи полноэкзомного секвенирования. Например, из панели из 24 аденокарцином на поздней стадии, в среднем идентифицировали приблизительно 50 мутаций на опухоль. Из примерно 20000 проанализированных генов в 1327 была по меньшей мере одна мутация и в 148 - две или более мутаций. Выявили 974 миссенс-мутации с небольшим дополнительным числом делеций и вставок.
Перечень пептидов-кандидатов можно генерировать из перекрывающихся девяти аминокислотных окон в мутировавших белках. Все девять аминокслотных окон, которые содержат мутировавную аминокислоту и 2 немутировавших «контроля» от каждого белка, будут подвергнуты селекции. Эти пептиды-кандидаты будут оцениваться численно на предмет связывания ГКГС при помощи алгоритмов консенсусного прогноза связывания ГКГС, в том числе Net ГКГС и способа стабилизированной матрицы (SMM). Алгоритмы связывания нано-иАПК и ГКГС были разработаны впервую очередь для аллеля HLA-A2. Предел чувствительности консенсусного прогноза можно подбирать до тех пор, пока не будет идентифицировано поддающееся обработке число пептидов, содержащих мутацию (~500), и немутировавших контрольных пептидов (~50).
Затем синтезируют библиотеку пептидов. иАПК, несущие ГКГС (например, A2), помещают в многолуночные планшеты и пассивно нагружают пептидом. CD8 T-клетки можно отделить от МКПК как A2-позитивных здоровых доноров, так и A2-позитивных пациентов, больных раком. Затем выделенные T-клетки инкубируют с нагруженными иАПК для стадии обогащения. После инкубации планшеты или культуральные флаконы помещают на магтиное поле и удаляют супернатант, содержащий нерелевантные T-клетки, не связанные с иАПК. Оставшиеся T-клетки, которые связаны с иАПК, будут культивировать и экспансировать в течение 7-21 дня. Антигенспецифическую экспансию определяют при помощи рестимуляции иАПК и внутриклеточного флуоресцентного окрашивания IFNγ.
В некоторых вариантах реализации изобретения T-клетки пациента подвергают скринингу по отношению к массиву или библиотеке нано-АПК, а результаты используют для диагностических или прогностических целей. Например, число и идентичность T-клеточных противоопухолевых ответов, сверхэкспрессирующие белки и/или другие опухоль-ассоцииированыне антигены можно использовать в качестве биомаркера в целях классификации риска. Например, число таких T-клеточных ответов может быть обратно пропорциональным риску прогрессирования заболевания или риску устойчивости или невосприимчивости к химиотерапии. В других вариантах реализации T-клетки пациента подвергают скринингу по отншению к массиву или библиотеке нано-АПК и наличие T-клеточных ответов или число или интенсивность этих T-клеточных ответов, определяет, что пациент имеет субклиническую опухоль и/или обеспечивает исходное понимание биологии опухоли.
В некоторых вариантах реализации Т-клетки пациента или субъекта подвергают скринингу в отношении массива или библиотеки парамагнтиных иАПК, каждая из которых презентирует другой кандадитный пептидный антиген. Этот скрининг может предоставить много информации касательно репертуара Т-клеток субъета или пациента, и результаты пригодны для диагностических и прогностических целей. Например, число и идентичность T-клеточных противоопухолевых ответов, сверхэкспрессирующие белки и/или другие опухоль-ассоцииированыне антигены можно использовать в качестве биомаркера в целях классификации риска, в целях контроля эффективности иммунотерапии или прогноза исхода иммунотерапевтического лечения. Кроме того, число или интенсивность таких T-клеточных ответов может быть обратно пропорциональным риску прогрессирования заболевания или может указывать на устойчивость или невосприимчивость к химиотерапии. В других вариантах реализации изобретения Т-клетки субъекта или пациента подвергают скринингу по отношении к массиву или библиотеке нано-иАПК, каждая из которых презентирует пептидный антиген-кандидат, и наличие T-клеточных ответов или число или интенсивность T-клеточных ответов обеспечивает информацию касательно состояния здоровья пациента, например, в результате идентификации аутоиммунного заболевания, или идентификации того, что у пациента имеется субклиническая опухоль. В этих вариантах реализации изобретения при помощи способа не только происходит идентификация состояния потенциального заболевания, но и обеспечивается исходное понимание биология заболевания.
В иллюстративном вариант реализации изобретения пациент имеет гематологический рак, такой как острый миелогенный лейкоз (AML) или миелодиспластический синдром, и в некоторых вариантах реализации изобретения пациент имеет рецидив после аллогенной транасплантации стволовых клеток. При помощи источника T-клеток от HLA-совместимого донора антигенспецифические T-клетки магнитно обогащали и активировали с применением магнитной колонки и парамагнитных нано-иАПК, презентирующих от 2 до 5 опухоль-ассоциированных пептидных антигена, выбранных из сурвивина, WT-1, PRAME, RHAMM и PR3. Антигены пассивно нагружают на полученные нано-иАПК, которые презентируют сигнал 1 и сигнал 2 на одних и тех же или разных популяциях частиц, посредством сайт-направленной конъюгации.
Магнитная активация может происходить в течение от 5 минут до 5 часов, или от 5 минут до 2 часов с последующей экспансией в культуре в течение по меньшей мере 5 дней и до 2 недель или в некоторых вариантах реализации изобретения до 3 недель. Полученные в результате CD8+ T-клетки можно фенотипически охарактеризовать для подтверждения: низкой экспрессии PD-1; фенотипа центральной памяти (CD3+, CD45RA-, CD62L+); и фенотипа эффекторной памяти (CD3+, CD45RA-, CD62L-). Экспансированные T-клетки можно вводить пациенту в количестве от 1 до приблизительно 4 введений для получения противоопухолевого ответа.
Другие аспекты и варианты реализации изобретения будут очевидны специалисту в данной области исходя из следующих иллюстративных примеров.
ПРИМЕРЫ
Искусственные антигенпрезентирующие клетки (иАПК) можно сконструировать на парамагнитных частицах, таких как наночастицы на основе оксида железа с декстрановой оболочкой, в целях активации антигенспецифических T-клеток. ФИГ.1. Наличие сигнала 1, совместно с сигналом 2, приводит к активации и экспансии T-клеток. При помощи парамагнитых частиц кластеризацию сигнала 1 и/или сигнала 2 можно индуцировать при помощи магнитного поля. ФИГ. 3 и ФИГ.6A.
При помощи контроля презентации костимулирующего сигнала (сигнал 2) на отдельных наночастицах можно контролировать и варьировать констимулирующий сигнал. ФИГ. 2. Наличие магнитного поля при использовании парамагнитных частиц усиливает пролиферацию T-клеток, и данный эффект зависит от количества сигнала 2, присутствующего на отдельных наночастицах без сигнала 1. ФИГ.4. Полученные в результате T-клетки, вне зависимости от того, присутствует ли сигнал 1 и 2 на одних и тех же или разных частицах, количественно представляют собой одно и тоже. ФИГ. 5.
Максимальную экспансию антигенспецифических T-клеток наблюдали в случае, когда как сигнал 1, так и сигнал 2 присутствовали на отдельных (парамагнитных или непарамагнитных) гранулах, при этом максимальную экспансию наблюдали в случае, когда обе частицы были парамагнитными. ФИГ. 6.
По мере увеличения размера частиц эффективность подхода на основе S1+S2 снижается. В отличие от этого, наночастицы, содержащие оба сигнала, характеризуются противоположным эффектом. Таким образом, при использовании отдельных наночастиц для сигнала 1 и сигнала 2 размер частиц предпочтительно выдерживают на уровне 200 нм или менее, например, 100 нм или 30 нм, что поддерживало высокие уровни экспансии. ФИГ. 7.
Типы костимуляции можно варьировать для подбора профиля активации в результате размещения каждого сигнала на отдельную гранулу. Например, гранулы с сигналом 2, содержащие 50/50 анти-CD28 и анти-CD27, а также гранулы с сигналом 2, содержащие 25/75 анти-CD28 и анти-41BB, поддерживали высокие уровни экспрессии. ФИГ. 8.
Магнитное обогащение и экспансия приводят к быстрой идентификации новых TCR с требуемой антигенной специфичностью. ФИГ. 9, ФИГ. 10. Обогащенные и экспансированные T-клетки можно сортировать на основании тетрамеров или димеров с генерацией популяции антигенспецифических клеток высокой чистоты для секвенирования TCR. Это является быстрым способом идентификации и генерации достаточного материала для достаточного секвенирования TCR в течение очень короткого времени.
Магнитное обогащение приводило к высоким частотам продуктивных клонотипов. ФИГ. 11, ФИГ. 12. Данные результаты хорошо согласуются с результатами Carreno et al. (ФИГ. 11A), в которых частоты были распределены более равномерно. Клоны можно оценивать на предмет частоты спаривания V и J (ФИГ. 13, ФИГ. 14).
Магнитное обогащение и экспансия способствуют скринингу популяций Т-клеток на предмет реактивности против антигенов-кандидатов, в том числе неоантигенов. Скрининг можно проводить серийным способом. ФИГ. 15. Например, функционально активные человеческие неоантигенспецифические CD-8+ T-клетки идентифицировали от здорового донора. Три неоэпитопа из рака молочной железы MCF-7 тестировали одновременно при помощи способа магнитного обогащения и экспансии. Таким образом, можно выявлять ответ поликлонональной популяции CD8 T-клеток против предполагаемых неоэпитопов из мутировавших антигенов. Поскольку эти популяции T-клеток обычно являются очень редкими, то часто их невозможно выявить при помощи стандартных методик, таких как тетрамерный анализ.
Последовательное обогащение делает этот процесс более эффективным. При помощи последовательного обогащения популяцию негативных клеток, полученную на стадии магнитного обогащения (которая содержит только несвязанные T-клетки, которые были негативными по отношению к требуемому антигену), затем инкубируют с новыми наночастицами, нагруженными другой совокупностью антигенных пептидов. Этот процесс можно повторять много раз (например, по меньшей мере 6 раз) с использованием наночастиц, нагруженных 10-15 различными пептидами, в каждом цикле. Это способствует зондированию одного образца в подходе О+Э как минимум на 90 различных антигенов.
На ФИГ. 16 изображено, что пассивная нагрузка пептида на наночастицы, характеризующаяся сайт-направленной конъюгацией ГКГС, обеспечивала повышенную экспансию через 1 неделю. CD8+ T-клетки выделяли из интактных селезенок мышей C57BL/6 и инкубировали с наночастицами (Kb:Ig-димер/aCD28), нагруженными пептидом Trp2 при концентрации 20 мкл частиц на 107 клеток в течение 1 часа при 4°C. Затем клетки, связанные с наночастицами, выделяли при помощи магнитной колонки и культивировали в 96-луночном планшете в течение 7 дней. На 7-й день клетки собирали, подсчитывали и окрашивали анти-CD8 антителом и Trp2/Kb-пентамером. В качестве контроля использовали Kb-пентамер с нерелевантными пептидами.
Разработка и конструкция наночастиц, в которых сигн. 1 и сигн. 2 ковалентно связаны сайт-направленным способом посредством введенного свободного цистеина на FC-конце молекулы, делает их очень стабильными с длительным сроком хранения. Это способствует получению больших ненагруженных серий, которые позже пассивно нагружают пептидами, представляющими интерес. Например, во время процесса нагрузки ненагруженные частицы инкубируют с избытком пептида при 4° C в течение как минимум 3 дней. После этого несвязанный избыток свободного пептида удаляют промыванием нагруженных наночастиц на магнитной колонке. Парамагнитные частицы будут задерживаться на колонке, а свободный пептид будет вымываться. После тщательного промывания (3-5 раз) магнит будут удалять, а частицы элюируют. Такой подход на основе пассивной нагрузки вносит в систему высокую антигенную гибкость, снижает затраты на производство и способствует применению группирующих подходов для генерации индивидуальных специфических по отношению к пациенту коктейлей с мультиантигенными частицами (5-10 антигенов), а также способствует высокопроизводительному скринингу в целях идентификации неоэпитопов (>50 эпитопов).
В настоящем исполнении используется соотношение примерно 1:1 для сигнала 1 и сигнала 2 (анти-CD28) и высокая плотность белка (80-200 лигандов) на частицу. Частицы находятся в диапазоне от 50 до 150 нм.
Claims (22)
1. Способ получения популяции антигенспецифических цитотоксических T-лимфоцитов (CTL), обладающих фенотипом центральной памяти и эффекторной памяти, включающий:
предоставление образца, содержащего наивные T-клетки от пациента или подходящего донора;
обогащение образца CD8+ Т-клетками;
приведение указанного образца в контакт с первыми наночастицами, которые являются парамагнитными и содержат на своей поверхности: (1) антигенпрезентирующий комплекс ГКГС класса I-пептид, при этом комплекс ГКГС класса I-пептид получают при помощи пассивной нагрузки наночастиц, конъюгированных с ГКГС класса I (сигнал 1); и (2) анти-CD28 костимулирующий лиганд, где антигенпрезентирующий комплекс ГКГС класса I-пептид и анти-CD28 костимулирующий лиганд находятся в одной или разных популяциях наночастиц (сигнал 2);
активацию антиген-специфических Т-клеток путем размещения магнитного поля вблизи парамагнитных наночастиц на срок от 5 минут до 2 часов,
обогащение антигенспецифическими CD8+ Т-клетками путем извлечения антигенспецифических T-клеток, ассоциированных с парамагнитными частицами, с использованием магнитной колонки, и
размножение извлеченных CD8+ Т-клеток в культуре в течение по меньшей мере пяти дней для получения популяции клеток, имеющей по меньшей мере около 106 антигенспецифических CTL, имеющих фенотипы центральной памяти и эффекторной памяти.
2. Способ по п.1, в котором наночастицы, конъюгированные с ГКГС класса I, пассивно нагружают в течение по меньшей мере 2 дней при помощи инкубации с избытком пептидного антигена.
3. Способ по п.2, в котором вторую наночастицу, имеющую лимфоцитарный костимулирующий лиганд на своей поверхности, добавляют во время обогащения или экспансии извлеченных T-клеток.
4. Способ по п.3, в котором указанная вторая наночастица является полимерной и необязательно содержит PLGA, PLGA-PEG, PLA или PLA-PEG.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором образец T-клеток содержит образец мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК).
6. Способ по п.5, в котором образец T-клеток выделяют при помощи лейкафереза.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором Т-клетки экспансируют в культуре в течение от 7 дней до 21 дня.
8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором пациент представляет собой пациента, больного раком.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором популяция клеток имеет по меньшей мере 107 антигенспецифических T-клеток.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором популяция клеток содержит по меньшей мере 108 антигенспецифических Т-клеток.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором Т-клетки и парамагнитные наночастицы инкубируют в присутствии магнитного поля в течение 5 минут.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором наночастицы имеют средний диаметр от 10 до 250 нм.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что комплекс ГКГС класса I-пептид представляет собой антиген, ассоциированный с опухолью.
14. Способ по п.13, в котором антиген, ассоциированный с опухолью, связан с острым миелогенным лейкозом (AML) или миелодиспластическим синдромом (MS).
15. Способ по п.13, в котором антиген, ассоциированный с опухолью, выбран из сурвивина, WT-1, PRAME, RHAMM и PR3.
16. Способ по любому из пп.1-12, в котором комплекс ГКГС класса I-пептид представляет собой антиген, ассоциированный с инфекционным агентом.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662309234P | 2016-03-16 | 2016-03-16 | |
US62/309,234 | 2016-03-16 | ||
PCT/US2017/022663 WO2017161092A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-03-16 | Production of antigen-specific t-cells |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021107053A Division RU2021107053A (ru) | 2016-03-16 | 2017-03-16 | Получение антигенспецифических t-клеток |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018136203A RU2018136203A (ru) | 2020-04-16 |
RU2018136203A3 RU2018136203A3 (ru) | 2020-06-22 |
RU2745319C2 true RU2745319C2 (ru) | 2021-03-23 |
Family
ID=59850933
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018136203A RU2745319C2 (ru) | 2016-03-16 | 2017-03-16 | Получение антигенспецифических t-клеток |
RU2021107053A RU2021107053A (ru) | 2016-03-16 | 2017-03-16 | Получение антигенспецифических t-клеток |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021107053A RU2021107053A (ru) | 2016-03-16 | 2017-03-16 | Получение антигенспецифических t-клеток |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20200291381A1 (ru) |
EP (1) | EP3445399A4 (ru) |
JP (1) | JP7016098B2 (ru) |
KR (1) | KR102470979B1 (ru) |
CN (1) | CN109475620A (ru) |
AU (1) | AU2017233035B2 (ru) |
CA (1) | CA3017615A1 (ru) |
IL (1) | IL261710A (ru) |
RU (2) | RU2745319C2 (ru) |
SG (2) | SG11201807940XA (ru) |
WO (1) | WO2017161092A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MA45491A (fr) * | 2016-06-27 | 2019-05-01 | Juno Therapeutics Inc | Épitopes à restriction cmh-e, molécules de liaison et procédés et utilisations associés |
AU2018337960A1 (en) * | 2017-09-20 | 2020-04-30 | Neximmune, Inc. | Cell compositions comprising antigen-specific T cells for adoptive therapy |
AU2018346765A1 (en) * | 2017-10-06 | 2020-04-16 | Oncotherapy Science, Inc. | Screening of T lymphocytes for cancer-specific antigens |
JP2021527419A (ja) * | 2018-06-20 | 2021-10-14 | ダンマークス テクニスク ユニバーシテットDanmarks Tekniske Universitet | 免疫細胞操作用の安定化されたmhc分子を有するスカフォールド |
WO2020061256A1 (en) * | 2018-09-19 | 2020-03-26 | FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. | Protein l for activation and expansion of chimeric antigen receptor-modified immune cells |
CN109136276A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-04 | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 | 一种rfft2细胞的构建方法 |
WO2020097466A1 (en) | 2018-11-08 | 2020-05-14 | Neximmune, Inc. | T cell compositions with improved phenotypic properties |
EP4110350A4 (en) * | 2020-02-27 | 2024-04-03 | The George Washington University, A Congressionally Chartered Not-For-Profit Corporation | COBRA1/NELF-B USED AS AN EFFECTIVENESS ENHANCER OF CD8+ T CELL THERAPY |
EP4172352A4 (en) * | 2020-06-26 | 2024-07-03 | Univ Johns Hopkins | ADAPTIVE NANOPARTICLE PLATFORMS FOR HIGH-THROUGHPUT DETECTION AND MULTIPLICATION OF ANTIGEN-SPECIFIC T CELLS |
KR20230118166A (ko) * | 2020-12-11 | 2023-08-10 | 메이오 파운데이션 포 메디칼 에쥬케이션 앤드 리써치 | 암 치료를 위한 방법 및 물질 |
WO2023060217A1 (en) * | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Baylor College Of Medicine | Transgenic t cell receptors targeting neoantigens for diagnosis, prevention, and/or treatment of hematological cancers |
WO2023144275A1 (en) * | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Katholieke Universiteit Leuven | Actuation of organoids by magnetic nanoparticles |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2311920C2 (ru) * | 2000-09-20 | 2007-12-10 | Корикса Корпорейшн | Композиции и способы для лечения и диагностики рака легких |
US20090137017A1 (en) * | 2003-05-08 | 2009-05-28 | Invitrogen Corporation | Generation and isolation of antigen-specific t cells |
US20130040836A1 (en) * | 2006-07-05 | 2013-02-14 | F-Star Biotechnologische Forschungs-Und Entwicklungsges.M.B.H. | Methods for engineering t-cell receptors |
WO2015051247A1 (en) * | 2013-10-03 | 2015-04-09 | University Of Maryland, Baltimore | Nanoparticle based artificial antigen presenting cell mediated activation of nkt cells |
CN104619723A (zh) * | 2012-07-13 | 2015-05-13 | 宾夕法尼亚大学董事会 | 评估用于施用的转导t细胞的适用性的方法 |
WO2015153788A1 (en) * | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Sequenta, Llc | Determining antigen-specific t-cells and b-cells |
KR20160016725A (ko) * | 2014-08-05 | 2016-02-15 | 주식회사 유영제약 | 암 세포에 과발현되는 IL13Rα2에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체로 변형된 T 세포 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120128656A1 (en) * | 2008-05-02 | 2012-05-24 | Immunovative Therapies, Ltd. | Vaccine compositions and methods |
CN102168066A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-08-31 | 浙江大学 | 体外诱导乙型肝炎病毒特异性细胞毒性t淋巴细胞的方法 |
CN105431523B (zh) * | 2013-03-14 | 2020-08-21 | 约翰·霍普金斯大学 | 纳米级人工抗原呈递细胞 |
-
2017
- 2017-03-16 EP EP17767506.3A patent/EP3445399A4/en active Pending
- 2017-03-16 KR KR1020187029819A patent/KR102470979B1/ko active IP Right Grant
- 2017-03-16 AU AU2017233035A patent/AU2017233035B2/en active Active
- 2017-03-16 CA CA3017615A patent/CA3017615A1/en active Pending
- 2017-03-16 RU RU2018136203A patent/RU2745319C2/ru active
- 2017-03-16 SG SG11201807940XA patent/SG11201807940XA/en unknown
- 2017-03-16 RU RU2021107053A patent/RU2021107053A/ru unknown
- 2017-03-16 WO PCT/US2017/022663 patent/WO2017161092A1/en active Application Filing
- 2017-03-16 CN CN201780030022.4A patent/CN109475620A/zh active Pending
- 2017-03-16 JP JP2018568171A patent/JP7016098B2/ja active Active
- 2017-03-16 SG SG10202008210XA patent/SG10202008210XA/en unknown
- 2017-03-17 US US16/084,121 patent/US20200291381A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-09-12 IL IL261710A patent/IL261710A/en unknown
-
2023
- 2023-02-21 US US18/111,975 patent/US20230332131A1/en active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2311920C2 (ru) * | 2000-09-20 | 2007-12-10 | Корикса Корпорейшн | Композиции и способы для лечения и диагностики рака легких |
US20090137017A1 (en) * | 2003-05-08 | 2009-05-28 | Invitrogen Corporation | Generation and isolation of antigen-specific t cells |
US20130040836A1 (en) * | 2006-07-05 | 2013-02-14 | F-Star Biotechnologische Forschungs-Und Entwicklungsges.M.B.H. | Methods for engineering t-cell receptors |
CN104619723A (zh) * | 2012-07-13 | 2015-05-13 | 宾夕法尼亚大学董事会 | 评估用于施用的转导t细胞的适用性的方法 |
WO2015051247A1 (en) * | 2013-10-03 | 2015-04-09 | University Of Maryland, Baltimore | Nanoparticle based artificial antigen presenting cell mediated activation of nkt cells |
WO2015153788A1 (en) * | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Sequenta, Llc | Determining antigen-specific t-cells and b-cells |
KR20160016725A (ko) * | 2014-08-05 | 2016-02-15 | 주식회사 유영제약 | 암 세포에 과발현되는 IL13Rα2에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체로 변형된 T 세포 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Chiu Y.-L. et al. HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL // Journal of Visualized Experiments, Nr.50, 2011, P. 1-5. * |
Chiu Y.-L. et al. HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL // Journal of Visualized Experiments, Nr.50, 2011, P. 1-5. Perica K. et al. Enrichment and Expansion with Nanoscale Artificial Antigen Presenting Cells for Adoptive Immunotherapy // ACS Nano, Vol.9, Nr.7, 2015, P. 6861 - 6871. * |
Perica K. et al. Enrichment and Expansion with Nanoscale Artificial Antigen Presenting Cells for Adoptive Immunotherapy // ACS Nano, Vol.9, Nr.7, 2015, P. 6861 - 6871. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3017615A1 (en) | 2017-09-21 |
EP3445399A4 (en) | 2019-10-30 |
SG10202008210XA (en) | 2020-10-29 |
AU2017233035B2 (en) | 2021-08-05 |
KR20190026645A (ko) | 2019-03-13 |
US20200291381A1 (en) | 2020-09-17 |
EP3445399A1 (en) | 2019-02-27 |
KR102470979B1 (ko) | 2022-11-24 |
SG11201807940XA (en) | 2018-10-30 |
CN109475620A (zh) | 2019-03-15 |
IL261710A (en) | 2018-10-31 |
RU2018136203A3 (ru) | 2020-06-22 |
JP2019513412A (ja) | 2019-05-30 |
US20230332131A1 (en) | 2023-10-19 |
AU2017233035A1 (en) | 2018-11-01 |
RU2018136203A (ru) | 2020-04-16 |
WO2017161092A1 (en) | 2017-09-21 |
RU2021107053A (ru) | 2021-08-24 |
JP7016098B2 (ja) | 2022-02-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7204719B2 (ja) | 抗原特異的t細胞を同定、濃縮、及び/または増殖させるための試薬及び方法 | |
RU2745319C2 (ru) | Получение антигенспецифических t-клеток | |
JP5921303B2 (ja) | 独自のクローン形質のリンパ球受容体に結合する試薬および方法 | |
US20230399613A1 (en) | Cell compositions comprising antigen-specific t cells for adoptive therapy | |
EP3876979A1 (en) | T cell compositions with improved phenotypic properties | |
EP4172352A1 (en) | Adaptive nanoparticle platforms for high throughput expansion and detection of antigen-specific t cells |