RU2744231C1 - Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах - Google Patents

Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах Download PDF

Info

Publication number
RU2744231C1
RU2744231C1 RU2020115945A RU2020115945A RU2744231C1 RU 2744231 C1 RU2744231 C1 RU 2744231C1 RU 2020115945 A RU2020115945 A RU 2020115945A RU 2020115945 A RU2020115945 A RU 2020115945A RU 2744231 C1 RU2744231 C1 RU 2744231C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
drug
valerian
valerenic acid
acid
tincture
Prior art date
Application number
RU2020115945A
Other languages
English (en)
Inventor
Наталия Петровна Антонова
Елена Павловна Шефер
Артем Михайлович Калинин
Наталья Евгеньевна Семенова
Светлана Степановна Прохватилова
Игорь Михайлович Моргунов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России)
Priority to RU2020115945A priority Critical patent/RU2744231C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2744231C1 publication Critical patent/RU2744231C1/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/84—Valerianaceae (Valerian family), e.g. valerian
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/38—Flow patterns

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способу количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки», или в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», или в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой» методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), включающему использование спирта этилового 50 % в качестве растворителя для приготовления растворов испытуемого образца лекарственного препарата «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», и фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой», колонки для ВЭЖХ с октадецилсилилсиликагельным сорбентом, градиентный способ элюирования с двумя подвижными фазами: ацетонитрилом и фосфорной кислоты концентрированной раствором 5,0 г/л в воде, спектрофотометрическое детектирование при длине волны 220 нм, использование валереновой кислоты в качестве стандартного образца. Способ позволяет количественно определять действующие вещества в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки», или в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», или в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой». 3 табл., 5 ил.

Description

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к способам количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки», в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой» и в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой». Изобретение может быть использовано для контроля качества перечисленных лекарственных средств по показателю качества «Количественное определение».
По данным литературы корневища с корнями валерианы содержат эфирное масло (от 0,5 до 2,4 %), главными компонентами которого являются борнилизовалерианат, борнеол, пинен, терпинеол, сесквитерпеноиды (валереналь, валеренон, валереновая кислота); от 0,8 до 2,5 % валепотриатов (иридоиды: валтрат, изовалтрат, ацевалтрат, дигидровалтрат, валередин, валехлорин и др.); тритерпеновые гликозиды; дубильные вещества; алкалоиды (валерин, хатинин); органические кислоты (валериановая, изовалериановая кислоты) и свободные амины [1].
Фармакологическое действие валерианы обусловлено комплексом действующих веществ, локализованных в корневищах и корнях валерианы. Седативное действие валерианы обусловлено в основном эфирным маслом. Другой группой биологически активных веществ считаются валепотриаты. Валепотриаты являются нестойкими соединениями, в процессе сушки и хранения корневищ они подвергаются ферментативному расщеплению с образованием свободной изовалериановой кислоты и иридоида – балдриналя, придающих сырью специфический запах [1–4].
Для количественной оценки действующих веществ валерианы используется нормирование по индивидуальным веществам, сумме веществ в пересчете на индивидуальное вещество, содержанию эфирных масел или экстрактивных веществ.
Лекарственное растительное сырье и препараты валерианы, а также способы количественной оценки действующих веществ описаны в Государственной фармакопее СССР ХI издания (ГФ ХI), Европейской, Британской, Американской, Японской, Индийской, Украинской и Белорусской фармакопеях.
Аналогом заявляемого изобретения является методика, приведенная в Фармакопейной статье «Валерианы настойка» (ранее ФС 42-3865-99) [5]. Из лекарственного препарата смесью хлороформ-спирт (5:1) экстрагируют сумму сложных эфиров карбоновых кислот. Полученный фильтрат упаривают под вакуумом до сухого остатка. Далее проводят цветную реакцию с гидроксиламином, хлористоводородной кислотой и железа (III) хлоридом. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 512 нм. Недостатками данной методики являются низкие специфичность и селективность, отсутствие четко выраженного максимума поглощения на спектре испытуемого раствора при длине волны 512 нм, оценка по удельному показателю поглощения без использования стандартного образца [5].
Прототипом заявляемого изобретения является способ определения сесквитерпеновых кислот методом ВЭЖХ в пересчете на валереновую кислоту с использованием в качестве стандартного образца валереновой кислоты в лекарственном растительном сырье «Валерианы лекарственной корневища с корнями» [6]. Недостатком прототипа является невозможность использования его для количественного определения действующих веществ в препаратах в лекарственной форме «настойки», лекарственной форме «таблетки, покрытые, пленочной оболочкой» и в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой», используемой для их приготовления. Лекарственное растительное сырье «Валерианы корневища и корни» представляет собой или цельные корневища и корни, или измельченные кусочки корней и корневищ, или порошок. Для проведения количественного определения действующих веществ в данном лекарственном растительном сырье, действующие вещества необходимо извлечь, для чего в пробоподготовке прототипа предусмотрены стадии взятия навески образца на весах и экстракции при нагревании с обратным холодильником. Настойки – это жидкая лекарственная форма, представляющая собой извлечения из лекарственного растительного сырья. Стадии взятия навески образца и экстракция при нагревании с обратным холодильником из методики пробоподготовки прототипа являются неприменимыми для препаратов в лекарственной форме «настойки». Аналогичным образом в данном случае стадия экстракции при нагревании с обратным холодильником является неприменимой для препаратов в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой» и фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой».
Задачей изобретения является разработка способа количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки», в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой» и в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой».
Поставленная задача решается благодаря:
- созданию нового способа пробоподготовки для приготовления растворов испытуемого образца заявляемых лекарственных средств, что позволяет проводить в них количественное определение суммы сесквитерпеновых кислот методом ВЭЖХ;
- созданию нового способа пробоподготовки для приготовления рабочих растворов стандартного образца валереновой кислоты так, чтобы их концентрация совпадала с концентрацией растворов испытуемого образца, что позволяет уменьшить погрешность определения;
- использованию исходного раствора стандартного образца валереновой кислоты длительного хранения, из которого в дальнейшем готовятся рабочие растворы стандартного образца с небольшим сроком годности, что позволяет сократить время пробоподготовки;
- использованию в качестве единого стандартного образца валереновой кислоты для заявляемых лекарственных средств, что позволяет проводить стандартизацию разных лекарственных препаратов и фармацевтической субстанции по одной группе активных веществ.
В заявляемом изобретении способ количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах реализуется следующим образом.
Пробоподготовка
Приготовление исходного раствора стандартного образца валереновой кислоты (общее для всех заявляемых лекарственных средств): около 0,005 г (точная навеска) стандартного образца валереновой кислоты растворяют в спирте этиловом 96 % в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают (срок годности раствора 1 мес.).
I. Для лекарственного препарата «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки».
Приготовление рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты: 5,0 мл исходного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают. Раствор используют без фильтрования (срок годности раствора 24 ч).
Приготовление раствора испытуемого образца: 5,0 мл лекарственного препарата фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), первые 1–2 мл фильтрата отбрасывают.
II. Для лекарственного препарата «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой».
Приготовление рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты: 1,0 мл исходного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают. Раствор используют без фильтрования (срок годности раствора 24 ч).
Приготовление раствора испытуемого образца: около 1 г (точная навеска) лекарственного препарата, предварительно измельченного в ступке, помещают в коническую колбу объемом 25 мл, прибавляют 10 мл спирта этилового 50 %, тщательно перемешивают и помещают на УЗ-баню на 15 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), первые 1–2 мл фильтрата отбрасывают.
III. Для фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой».
Приготовление рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты: 2,0 мл исходного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают. Раствор используют без фильтрования (срок годности раствора 24 ч).
Приготовление раствора испытуемого образца: около 1 г (точная навеска) фармацевтической субстанции помещают в мерную колбу объемом 50 мл, прибавляют 35 мл спирта этилового 50 %, тщательно перемешивают и помещают на УЗ-баню на 15 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора спиртом этиловым 50 % до метки и фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), первые 1–2 мл фильтрата отбрасывают.
Методика
Фосфорная кислота концентрированная, раствор 5,0 г/л в воде
Аликвоту фосфорной кислоты концентрированной, взятую по массе или по объему, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят водой для хроматографии до метки и перемешивают. Проводят дегазацию и фильтрацию через мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.
Проверка пригодности хроматографической системы
Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются следующие условия:
- значение асимметрии пиков валереновой кислоты на хроматограммах раствора испытуемого образца и рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты должно быть не более 2,0;
- эффективность колонки по пику валереновой кислоты на хроматограммах раствора испытуемого образца и рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты должно быть не менее 2000 теоретических тарелок;
- относительное стандартное отклонение площади пика валереновой кислоты на хроматограммах рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты для 6 определений должно быть не более 5,0 %.
Испытание проводят в условиях градиентного элюирования.
Условия хроматографирования:
Колонка Размер 125 × 4,6 мм, сорбент октадецилсилилсиликагель (С18), 5 мкм
Подвижная фаза А – ацетонитрил;
В – фосфорная кислота концентрированная, раствор 5,0 г/л в воде.
Способ элюирования программа градиента
Время, мин А, об. % В, об. %
0–5 47 53
5–7 47→50 53→50
7–9 50 50  
9–16 50→60 50→40
16–20 60 40
20–25 60→100 40→0
25–30 100→47 0→53
30–45 47 53
Скорость потока, мл/мин 1
Температура
колонки, °С		 25
Детектор спектрофотометрический или диодная матрица
Длина волны, нм 220
Объем вводимой пробы, мкл 10
Время удерживания пика валереновой кислоты – около 13 мин.
Относительное время удерживания пика ацетоксивалереновой кислоты – 0,45.
Хроматографируют рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты, получая не менее 6 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».
Хроматографируют попеременно раствор испытуемого образца и рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты.
Расчет содержания суммы сесквитерпеновых кислот проводят методом внешнего стандарта. Обсчету подлежат основной пик валереновой кислоты и пик ацетоксивалереновой кислоты.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки» в процентах (Х) вычисляют по формуле (1):
Figure 00000001
S – сумма площадей пиков валереновой и ацетоксивалереновой кислот на хроматограмме раствора испытуемого образца;
а о – навеска стандартного образца валереновой кислоты, г;
5 – аликвота исходного раствора стандартного образца, используемая для приготовления рабочего раствора стандартного образца, мл;
Р – содержание основного вещества в стандартном образце валереновой кислоты, %;
S о – площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме рабочего раствора стандартного образца;
25 – разведение исходного раствора стандартного образца;
10 – разведение рабочего раствора стандартного образца;
100 – коэффициент, переводящий содержание основного вещества в стандартном образце из % в г/г;
100 – коэффициент, переводящий результат расчета в %.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой» в мг/таб (Х) вычисляют по формуле (2):
Figure 00000002
S – сумма площадей пиков валереновой и ацетоксивалереновой кислот на хроматограмме раствора испытуемого образца;
а о – навеска стандартного образца валереновой кислоты, г;
10 – разведение испытуемого раствора;
1 – аликвота исходного раствора стандартного образца, используемая для приготовления рабочего раствора стандартного образца, мл;
Р – содержание основного вещества в стандартном образце валереновой кислоты, %;
G – средняя масса таблетки, г;
1000 – коэффициент пересчета г в мг;
S о – площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме рабочего раствора стандартного образца;
a – навеска испытуемого образца, г;
25 – разведение исходного раствора стандартного образца;
10 – разведение рабочего раствора стандартного образца;
100 – коэффициент, переводящий содержание основного вещества в стандартном образце из % в г/г.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой» в процентах (Х) вычисляют по формуле (3):
Figure 00000003
S – сумма площадей пиков валереновой и ацетоксивалереновой кислот на хроматограмме раствора испытуемого образца;
а о – навеска стандартного образца валереновой кислоты, г;
50 – разведение испытуемого раствора;
2 – аликвота исходного раствора стандартного образца, используемая для приготовления рабочего раствора стандартного образца, мл;
Р – содержание основного вещества в стандартном образце валереновой кислоты, %;
S о – площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме рабочего раствора стандартного образца;
a – навеска испытуемого образца, г;
25 – разведение исходного раствора стандартного образца;
10 – разведение рабочего раствора стандартного образца;
100 – коэффициент, переводящий содержание основного вещества в стандартном образце из % в г/г;
100 – коэффициент, переводящий результат расчета в %.
Существенные отличительные признаки заявляемого изобретения:
1. Обеспечение возможности применения метода ВЭЖХ для количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту и стандартизации заявляемых лекарственных препаратов и фармацевтической субстанции, для которых раньше он не применялся, за счет создания уникальной пробоподготовки.
2. Сокращение времени пробоподготовки за счет возможности длительного хранения исходного раствора стандартного образца (тем самым минуя стадии взятия навески и разведения), из которого в дальнейшем готовятся рабочие растворы стандартного образца с небольшим сроком годности.
3. Обеспечение возможности сравнения разных лекарственных средств по количественному содержанию суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту за счет использования одной методики для их стандартизации.
4. Уменьшение погрешности определения благодаря одинаковым концентрациям растворов испытуемого образца и рабочего раствора стандартного образца.
Краткое описание чертежей и иных материалов:
Фиг. 1. Хроматограмма рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты (для лекарственного препарата «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки»).
Фиг. 2. Хроматограмма рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты (для фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой»).
Фиг. 3. Хроматограмма раствора испытуемого образца лекарственного препарата «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки».
Фиг. 4. Хроматограмма раствора испытуемого образца лекарственного препарата «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой».
Фиг. 5. Хроматограмма раствора испытуемого образца фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой».
На Фиг. 3–5 сравнение с хроматограммами рабочих растворов стандартного образца валереновой кислоты показывает, что присутствие сопутствующих веществ не влияет на время удерживания пика валереновой кислоты, а также пики ацетоксивалереновой кислоты и валереновой кислоты, учитываемые в расчетах, обладают удовлетворительными показателями асимметрии и разрешения. Следовательно, предлагаемые способы приготовления растворов в предлагаемых условиях хроматографирования являются пригодными для определения суммы сесквитерпеновых кислот в заявляемых лекарственных средствах.
Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами:
Пример 1. Определение суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки» заявляемым способом.
Приготовление исходного раствора стандартного образца валереновой кислоты: 0,00509 г стандартного образца валереновой кислоты растворяют в спирте этиловом 96 % в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают.
Приготовление рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты соответствует описанию изобретения.
Приготовление раствора испытуемого образца: 3 раза по 5,0 мл испытуемого образца лекарственного препарата фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), первые 2 мл фильтрата отбрасывают.
Методика и условия хроматографирования соответствуют описанию изобретения.
Хроматографируют рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты. Получают 6 хроматограмм. Результаты считают достоверными, так как выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Хроматограмма рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты представлена на Фиг. 1.
Хроматографируют попеременно раствор испытуемого образца и рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты. Хроматограмма раствора испытуемого образца представлена на Фиг. 3.
Расчет содержания суммы сесквитерпеновых кислот проводят методом внешнего стандарта. Обсчету подлежат основной пик валереновой кислоты и пик ацетоксивалереновой кислоты.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту вычисляют по формуле (1).
Расчеты:
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
где Х1, Х2, Х3 – содержание суммы сесквитерпеновых кислот в перечете на валереновую кислоту в испытуемом образце лекарственного препарата; в расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Результаты количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в испытуемом образце лекарственного препарата «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки» приведены в Таблице 1.
Таблица 1
Определяемая величина Стандартный образец валереновой кислоты Испытуемый образец
Валереновая
кислота		 Ацетоксивалереновая кислота
Площадь пика 3419,457
3421,181
3420,543
3422,855
3416,755
3420,219
Среднее значение: 3420,168		 3450,746
3447,116		 2449,916
2446,163
3440,127
3456,691		 2442,859
2453,689
3438,789
3438,088		 2440,570
2438,638
Сумма сесквитерпеновых кислот, % 0,01743
0,01743
0,01737
Среднее значение суммы сесквитерпеновых кислот, % 0,017
RSD, % 0,20
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в испытуемом образце лекарственного препарата составило 0,017 % (RSD = 0,20 %).
По результатам проведенного исследования показана пригодность использования заявляемого способа для количественного определения содержания суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки».
Пример 2. Определение суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой» заявляемым способом.
Приготовление исходного раствора стандартного образца валереновой кислоты: 0,00500 г стандартного образца валереновой кислоты растворяют в спирте этиловом 96 % в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают.
Приготовление рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты соответствует описанию изобретения.
Приготовление раствора испытуемого образца: три навески (1,01302 г, 1,00900 г, 1,00872 г) испытуемого образца лекарственного препарата, предварительно измельченного в ступке, помещают в три конические колбы объемом 25 мл, прибавляют по 10 мл спирта этилового 50 %, тщательно перемешивают и помещают на УЗ-баню на 15 мин. Полученные растворы охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), первые 1–2 мл фильтрата отбрасывают.
Методика и условия хроматографирования соответствуют описанию изобретения.
Хроматографируют рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты. Получают 6 хроматограмм. Результаты считают достоверными, так как выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».
Хроматографируют попеременно раствор испытуемого образца и рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты. Хроматограмма раствора испытуемого образца представлена на Фиг. 4.
Расчет содержания суммы сесквитерпеновых кислот проводят методом внешнего стандарта. Обсчету подлежат основной пик валереновой кислоты и пик ацетоксивалереновой кислоты.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в мг/таб (Х) вычисляют по формуле (2).
Расчеты:
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
где Х1, Х2, Х3 – содержание суммы сесквитерпеновых кислот в перечете на валереновую кислоту в испытуемом образце лекарственного препарата; в расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Результаты количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в испытуемом образце лекарственного препарата «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой» приведены в Таблице 2.
Таблица 2
Определяемая величина Стандартный образец валереновой кислоты Испытуемый образец
Валереновая
кислота		 Ацетоксивалереновая кислота
Площадь пика 713,738
711,977
712,554
709,483
709,888
708,074
Среднее значение: 710,952		 110,607
110,529		 553,267
551,009
112,305
113,418		 554,131
555,759
111,571
111,128		 552,311
552,897
Сумма сесквитерпеновых кислот, мг/таб 0,02058
0,02082
0,02071
Среднее значение суммы сесквитерпеновых кислот, мг/таб 0,021
RSD, % 0,58
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в испытуемом образце лекарственного препарата составило 0,021 мг/таб (RSD = 0,58 %).
По результатам проведенного исследования показана пригодность использования заявляемого способа для количественного определения содержания суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой».
Пример 3. Определение суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой» заявляемым способом.
Приготовление исходного раствора стандартного образца валереновой кислоты: 0,00500 г стандартного образца валереновой кислоты растворяют в спирте этиловом 96 % в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки и перемешивают.
Приготовление рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты соответствует описанию изобретения.
Приготовление раствора испытуемого образца: три навески (1,01615 г, 1,02956 г, 1,02305 г) испытуемого образца фармацевтической субстанции помещают в три мерные колбы объемом 50 мл, прибавляют по 35 мл спирта этилового 50 %, тщательно перемешивают и помещают на УЗ-баню на 15 мин. Полученные растворы охлаждают до комнатной температуры, доводят объем растворов спиртом этиловым 50 % до метки и фильтруют через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), первые 1–2 мл фильтрата отбрасывают.
Методика и условия хроматографирования соответствуют описанию изобретения.
Хроматографируют рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты. Получают 6 хроматограмм. Результаты считают достоверными, так как выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Хроматограмма рабочего раствора стандартного образца валереновой кислоты представлена на Фиг. 2.
Хроматографируют попеременно раствор испытуемого образца и рабочий раствор стандартного образца валереновой кислоты. Хроматограмма раствора испытуемого образца представлена на Фиг. 5.
Расчет содержания суммы сесквитерпеновых кислот проводят методом внешнего стандарта. Обсчету подлежат основной пик валереновой кислоты и пик ацетоксивалереновой кислоты.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в процентах (Х) вычисляют по формуле (3).
Расчеты:
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
где Х1, Х2, Х3 – содержание суммы сесквитерпеновых кислот в перечете на валереновую кислоту в испытуемом образце фармацевтической субстанции; в расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Результаты количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в испытуемом образце фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой» приведены в Таблице 3.
Таблица 3
Определяемая величина Стандартный образец валереновой кислоты Испытуемый образец
Валереновая
кислота		 Ацетоксивалереновая кислота
Площадь пика 1371,316
1372,208
1374,591
1374,247
1371,174
1373,119
Среднее значение: 1372,776		 693,987
693,382		 885,474
886,439
694,871
693,884		 889,262
889,263
692,753
692,241		 885,910
885,388
Сумма сесквитерпеновых кислот, % 0,22490
0,22253
0,22317
Среднее значение суммы сесквитерпеновых кислот, % 0,224
RSD, % 0,55
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в испытуемом образце фармацевтической субстанции составило 0,224 % (RSD = 0,55 %).
По результатам проведенного исследования показана пригодность использования заявляемого способа для количественного определения содержания суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой».
Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат только для цели иллюстрации.
Список литературы
1. Атлас лекарственных растений России. Быков В.А., ред. ВИЛАР, 2006. 345 с.
2. Талашова С.В. Фармакогностическое изучение, стандартизация и комплексная переработка валерианы лекарственной: автореф. дис. … канд. фарм. наук. М., 1996. 24 с.
3. Коновалова О.А., Рыбалко К.С. Биологически активные вещества подземных органов Valeriana officinalis L.s.l. Растительные ресурсы. 1991. Т. 27. Вып. 1. С. 146–169.
4. Коновалова О.А., Шейченко В.И., Рыбалко К.С. О химическом составе корневищ с корнями Valeriana wolgensis из цикла Valeriana officinalis L. Химия природных соединений. 1991. № 1. С. 141–143.
5. Фармакопейная статья «Валерианы настойка», на 07.05.2020 доступна по адресу:
Figure 00000013
6. Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV издания. Фармакопейная статья ФС.2.5.0009.15 «Валерианы лекарственной корневища с корнями» на 07.05.2020 доступна по адресу: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php

Claims (12)

  1. Способ количественного определения суммы сесквитерпеновых кислот в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки», или в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», или в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой» методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), включающий использование спирта этилового 50 % в качестве растворителя для приготовления растворов испытуемого образца лекарственного препарата «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», и фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой», колонки для ВЭЖХ с октадецилсилилсиликагельным сорбентом, градиентный способ элюирования с двумя подвижными фазами: ацетонитрилом и фосфорной кислоты концентрированной раствором 5,0 г/л в воде, спектрофотометрическое детектирование при длине волны 220 нм, использование валереновой кислоты в качестве стандартного образца, где содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в лекарственном препарате «Валерианы настойка» в лекарственной форме «настойки» в процентах (Х) вычисляют по формуле (1)
  2. Figure 00000014
    ,
  3. содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в лекарственном препарате «Валерианы экстракт» в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», в мг/таб (Х) вычисляют по формуле (2)
  4. Figure 00000015
    ,
  5. содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в фармацевтической субстанции «Валерианы экстракт густой» в процентах (Х) вычисляют по формуле (3)
  6. Figure 00000016
    ,
  7. где S – сумма площадей пиков валереновой и ацетоксивалереновой кислот на хроматограмме раствора испытуемого образца;
  8. Figure 00000017
    – навеска стандартного образца валереновой кислоты, г;
  9. Р – содержание основного вещества в стандартном образце валереновой кислоты, %;
  10. S о – площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме рабочего раствора стандартного образца;
  11. Figure 00000018
    – навеска испытуемого образца, г;
  12. G – средняя масса таблетки, г.
RU2020115945A 2020-05-15 2020-05-15 Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах RU2744231C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020115945A RU2744231C1 (ru) 2020-05-15 2020-05-15 Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020115945A RU2744231C1 (ru) 2020-05-15 2020-05-15 Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2744231C1 true RU2744231C1 (ru) 2021-03-03

Family

ID=74857738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020115945A RU2744231C1 (ru) 2020-05-15 2020-05-15 Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2744231C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2778287C1 (ru) * 2021-12-27 2022-08-17 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский государственный университет» Способ количественного определения борнеола и его сложных эфиров в масляном экстракте древесной зелени хвойных пород методом газовой хроматографии

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV edition. Pharmacopoeia article FS.2.5.0009.15 "Valerian medicinal rhizomes with roots" on 05/07/2020, found on the Internet http://femb.ru/femb/pharmacopea.php. Konovalova O.A. and etc. " *
Yu.A. Sheryakova et al. "Identification and quantification of the amount of sesquiterpenic acids of rhizomes with valerian roots in drugs by HPLC" Prescription, 1 (99), 2015, pp.94-103. *
Yu.A. Sheryakova et al. "THE USE OF THE HPLC METHOD FOR DETERMINATION OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES VALERIANA AND BLUEUHA IN SYRUP" Bulletin of Pharmacy 3 (69) 2015 PHARMACEUTICAL CHEMISTRY, p. 50-60. *
Ю.А. Шерякова и др. "ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ВЭЖХ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ВАЛЕРИАНЫ И СИНЮХИ В СИРОПЕ" Вестник фармации 3 (69) 2015 ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, с. 50-60. Ю.А. Шерякова и др. "Идентификация и количественное определение суммы сесквитерпеновых кислот корневищ с корнями валерианы в лекарственных средствах методом ВЭЖХ" Рецепт, 1 (99), 2015, с.94-103. Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV издания. Фармакопейная статья ФС.2.5.0009.15 "Валерианы лекарственной корневища с корнями" на 07.05.2020, найдено в Интернет http://femb.ru/femb/pharmacopea.php. Коновалова О.А. и др. "О химическом составе корневищ с корнями Valeriana wolgensis из цикла Valeriana officinalis L." Химия природных соединений. 1991, н.1, с. 141-143. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2778287C1 (ru) * 2021-12-27 2022-08-17 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский государственный университет» Способ количественного определения борнеола и его сложных эфиров в масляном экстракте древесной зелени хвойных пород методом газовой хроматографии

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230213487A1 (en) Fingerprint Detection Method for Pharmaceutical Preparation
Heath et al. Curcumin in plasma and urine: quantitation by high-performance liquid chromatography
Wang et al. Development and validation of a UPLC method for quality control of rhubarb-based medicine: fast simultaneous determination of five anthraquinone derivatives
CN105467059A (zh) 一种治疗血尿的中药组合物的质量检测方法
Xie et al. Simultaneous determination of six main components in Bushen Huoxue prescription by HPLC-CAD
Yu et al. Simultaneous quantification of eight organic acid components in Artemisia capillaris Thunb (Yinchen) extract using high-performance liquid chromatography coupled with diode array detection and high-resolution mass spectrometry
RU2267115C2 (ru) Способ количественного определения состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия
CN104267110A (zh) 一种当归药材的检测方法
CN103645251A (zh) 一种复方阿胶制剂的指纹图谱检测方法
Pellati et al. High-performance liquid chromatography analysis of polyacetylenes and polyenes in Echinacea pallida by using a monolithic reversed-phase silica column
RU2744231C1 (ru) Способ определения суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту методом ВЭЖХ в лекарственных средствах
CN1315495C (zh) 一种丹参提取物、其制备方法、药物制剂及检测方法
CN101766708B (zh) 一种治疗风湿的中药制剂的质量控制方法
CN110243986A (zh) 一种活血消瘿片hplc指纹图谱及其制备方法
CN103776908A (zh) 一种复方丹参片中酚酸类化合物的检测方法
Weon et al. Simultaneous quantification of marker components in Ojeok-san by HPLC–DAD
Braimah et al. Impurity profiling of paracetamol dosage forms used in maiduguri metropolis
Dash et al. Comparative pharmacokinetics profile of Vasa Swaras with vasicine and vasicinone
CN102680593A (zh) 乐脉颗粒的质量检测方法
Xu et al. Multiple heart-cutting two-dimensional liquid chromatography/charged aerosol detector assay of ginsenosides for quality evaluation of ginseng from diverse Chinese patent medicines
Saini et al. Development of a validated HPTLC method for quantification of Esculin in different fractions of Cichorium intybus leaf extract
CN102526128B (zh) 一种中药灵芝颗粒及其制备方法和检测方法
CN101596229A (zh) 猴耳环提取物及其制剂的质量控制方法
Olga et al. The Development of Identification and Quantitative Definition Methodic of Active substances of the Ointment “Allergolic”
CN112843124A (zh) 一种丹参配方颗粒的制备方法及其质量标准