RU2743036C1

RU2743036C1 - Микрокапсула, включающая пептид, обладающий аффинностью связывания клеточного рецептора, и косметическая композиция, содержащая ее

Info

Publication number: RU2743036C1
Application number: RU2020111634A
Authority: RU
Inventors: Санг Кеун ХАН; Хиун Соок ЛИ; Еун Ах КИМ; Сеунг Мин ХИУН; Хиеонг ЧОИ; Со Йоон БАЕК; Дзае Хва ХОНГ; Чае Ми ЛИМ; Да Дзеонг БАК; Хие Дзин ДЗО; Хак Сунг ЛИ; Дзи Хун ПАРК; Еун Йоунг ЛИ
Original assignee: Колмар Корея Ко., Лтд.
Priority date: 2017-08-24
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2021-02-12
Also published as: CA3072042C; JP2020530860A; JP6946565B2; KR20190022306A; MX2020001910A; AU2021240300B2; CN110167953B; JP2021130686A; AU2018320089A1; MY191670A; AU2018320089B2; JP2021130684A; PH12020500313A1; US20200190143A1; US11242366B2; JP7129141B2; JP7129140B2; CA3072042A1; WO2019039676A1; KR102026220B1

Abstract

Изобретение относится к пептидам, обладающим способностью связываться с клеточными рецепторами, микрокапсуле, включающей пептид, связанный с ней, и косметической композиции, содержащей микрокапсулу. Пептиды демонстрирует высокую аффинность селективного связывания с мишенью, и микрокапсула обладает улучшенной физико-химической стабильностью. Косметическая композиция, содержащая микрокапсулу, с которой связан пептид, демонстрирует высокую эффективность доставки активного ингредиента, включенного в капсулу, к клеткам-мишеням, тем самым демонстрируя лучшие эффекты улучшения состояния кожи. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 11 табл., 7 пр., 10 ил.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0001] Настоящее изобретение относится к пептиду, обладающему способностью связывать клеточный рецептор, микрокапсуле, включающей пептид, связанный с ней, и к косметической композиции, содержащей микрокапсулу.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] Микрокапсулы представляют собой базовую технологию, используемую в различных областях, таких как области фармацевтики, красок, электроники и косметики, и особенно привлекает внимание в фармацевтической и косметической областях в качестве наилучшего инструмента для поддержания исходного титра активного ингредиента (Journal of Controlled Release, 58, 9, 1999).

[0003] Однако при применении для организма человека косметическая композиция, содержащая микрокапсулы, известные на настоящий момент, не демонстрирует заметно улучшенного эффекта по сравнению косметической композицией без использования микрокапсул.

[0004] В последнее время продолжается разработка доставки микрокапсул к клеткам-мишеням на основе принципа систем доставки лекарственных средств. Однако способы, известные на настоящий момент, все еще являются неудовлетворительными вследствие молекулярной нестабильности микрокапсулы, проблем, касающихся аффинности связывания с клетками-мишенями, и т.п.

[0005] [Список литературы]

[0006] (Патентный документ 1) KR 10-1051557 B1

Описание

Техническая проблема

[0007] Задачей настоящего изобретения является предоставление пептида, обладающего высокой аффинностью связывания с клетками-мишенями.

[0008] Другой задачей настоящего изобретения является точная и стабильная доставка активного ингредиента в клетки-мишени.

[0009] Другой задачей настоящего изобретения является предоставление косметической композиции, имеющей повышенную эффективность доставки активного ингредиента в кожу.

Техническое решение

[0010] Аспект настоящего изобретения относится к пептиду, обладающему способностью связывать клеточный рецептор, где пептид включает любую из последовательностей SEQ ID NO: 1-3.

[0011] Другой аспект настоящего изобретения относится к микрокапсуле, включающей пептид, связанный с ее поверхностью.

[0012] Другой аспект настоящего изобретения относится к косметической композиции, содержащей микрокапсулу.

Преимущественные эффекты

[0013] Согласно одному аспекту настоящего изобретения пептид обладает лучшей аффинностью селективного связывания с мишенью. В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения микрокапсула имеет улучшенную физико-химическую стабильность. Таким образом, косметическая композиция, содержащая микрокапсулу, связанную с пептидом, может демонстрировать высокую эффективность доставки активного ингредиента, включенного в капсулу, к клеткам-мишеням, тем самым проявляя лучшие эффекты улучшения состояния кожи.

Краткое описание чертежей

[0014] На фиг. 1 представлены результаты определения аффинности связывания капсулы по настоящему изобретению с мишенью (клетками-мишенями) (фиг. 1a: капсула 1, фиг. 1b: капсула 2, фиг. 1c: капсула 3).

[0015] На фиг. 2 представлены изменения экспрессии коллагена 1 (фиг. 2a), коллагена 2 (фиг. 2b) и эластина (фиг. 2c) при обработке капсулами 1 по настоящему изобретению.

[0016] На фиг. 3 представлен эффект сокращения морщин вокруг глаз после применения ампулы, содержащей капсулы по настоящему изобретению.

[0017] На фиг. 4 представлена препятствование способности к связыванию альфа-MSH (фиг. 4a) и способности к ингибированию синтеза меланина (фиг. 4b) при обработке капсулами (капсулы 2) по настоящему изобретению.

[0018] На фиг. 5 представлен отбеливающий эффект после применения тоника, содержащего капсулу по настоящему изобретению.

[0019] На фиг. 6 представлены изменения экспрессии кератина 1 (фиг. 6a), кератина 5 (фиг. 6b) и филагрина (фиг. 6C) при обработке капсулами (капсулы 3) по настоящему изобретению.

[0020] На фиг. 7 представлен эффект улучшения кожного барьера (плотность кожи, толщина кожи) после применения питательного крема, содержащего капсулы по настоящему изобретению.

[0021] На фиг. 8 схематично представлена микрокапсула по настоящему изобретению, организованная так, чтобы избыток гидрофильного биоактивного материала стабилизировался в многослойной структуре, состоящей из липидной части.

[0022] На фиг. 9 схематично представлена микрокапсула, включающая пептид.

[0023] На фиг. 10 представлена фотография, демонстрирующая образец концентрированной композиции, произведенной с использованием способа интеллектуального инкапсулирования по настоящему изобретению.

Наилучший способ

[0024] Далее приведено подробное описание настоящего изобретения.

[0025]

[0026] Аспект настоящего изобретения относится к пептиду, обладающему способностью связываться с клеточным рецептором, где пептид включает любую последовательность SEQ ID NO: 1-3.

[0027] Как используют в рамках изобретения, термин "способность связывания с клеточным рецептором" означает способность связываться с рецепторами, образовавшимися на клетках.

[0028] Аминокислотные последовательности пептидов SEQ ID NO: 1-3 представлены в таблице 1 ниже.

[0029]

[0030] [Таблица 1]

[0031]

SEQ ID NO:	Аминокислотная последовательность
1	Ala-Lys-Ser-Thr
2	Glu-Gly-His-Lys-Ile-Phe-Pro-Ser-Trp-Tyr
3	Ala-Asp-Gly-Ser-Pro

[0032] В таблице 1, Ala означает аланин, Asp означает аспарагиновую кислоту, Glu означает глутаминовую кислоту, Gly означает глицин, His означает гистидин, Ile означает изолейцин, Lys означает лизин, Phe означает фенилаланин, Pro означает пролин, Ser означает серин, Trp означает триптофан, Tyr означает тирозин и Thr означает треонин.

[0033] В одном аспекте клетки, на которые нацелен пептид, могут включать меланоциты, кератиноциты или фибробласты.

[0034] Также клеточный рецептор может включать рецептор фактора роста фибробластов, рецептор интегрина или рецептор меланокортина. В частности, рецептор меланокортина может представлять собой рецептор меланокортина 1 (MC1R).

[0035] В иллюстративном варианте осуществления пептид SEQ ID NO:1 нацелен на фибробласты и может связываться с рецептором фактора роста фибробластов.

[0036] Также в иллюстративном варианте осуществления пептид SEQ ID NO: 2 нацелен на меланоциты и может связываться с рецептором меланокортина.

[0037] Также в иллюстративном варианте осуществления пептид SEQ ID NO: 3 нацелен на кератиноциты и может связываться с рецептором интегринов, особенно рецептором интегринов семейства бета-1.

[0038] В одном аспекте пептиды не связываются с клетками, отличными от соответствующих клеток-мишеней, или их рецепторами, и их аффинность связывания является высокой. Таким образом, когда с пептидом связан заданный компонент, можно ожидать высокой эффективности его доставки.

[0039] Другой аспект настоящего изобретения относится к микрокапсуле, включающей пептид, связанный с ее поверхностью. Пептид также может быть связан с микрокапсулой посредством связывания гидрофильной группы на микрокапсуле, например, карбоксильной группы, с N-концом на пептиде, однако способ связывания не ограничен, и оно может быть осуществлено различными способами, хорошо известными специалистам в данной области.

[0040] Микрокапсула может включать широкое множество полимеров, примеры которых включают полимеры, температурочувствительные полимеры, светочувствительные полимеры, магнитные полимеры, pH-чувствительные полимеры, чувствительные к соли полимеры, химически чувствительные полимеры, электролиты полимеров, полисахариды, пептиды, белки и/или пластмассы, но они не ограничиваются ими. Примеры полимера включают, но не ограничиваются ими, поли(N-изопропилакриламид) (PNIPAAm), поли(стиролсульфонат) (PSS), поли(аллиламин) (PAAm), поли(акриловую кислоту) (PAA), поли(этиленимин) (PEI), поли(диаллилметиламмонийхлорид) (PDADMAC), поли(пиррол) (PPy), поли(винилпирролидон) (PVPON), поли(винилпиридин) (PVP), поли(метакриловую кислоту) (PMAA), поли(метилметакрилат) (PMMA), полистирол (PS), поли(тетрагидрофуран) (PTHF), поли(фталальдегид) (PTHF), поли(гексилвиологен) (PHV), поли(L-лизин) (PLL), поливиниловый спирт (PVA), поли(L-аргинин) (PARG), и сополимер молочной и гликолевой кислоты (PLGA).

[0041] В иллюстративном варианте осуществления капсула может быть предоставлена в форме бислоя, в котором наружный слой может включать поливиниловый спирт и внутренний слой может включать сополимер молочной и гликолевой кислоты (PLGA).

[0042] Также микрокапсула может включать по меньшей мере один материал, способный генерировать эффективный нейтральный заряд, отрицательный заряд или положительный заряд на наружном слое капсулы. В некоторых случаях заряд капсулы может способствовать предупреждению или усилению агрегации или кластеризации частиц.

[0043] В одном аспекте пептид может быть включен в плотности 0,1-10 пептидов/мкм² в расчете на общую площадь поперечного сечения микрокапсулы, и плотность пептида предпочтительно составляет 0,3-8 пептидов/мкм², и наиболее предпочтительно 0,4-7 пептидов/мкм². Плотность пептида может означать количество пептидных цепей, присутствующих на единицу площади поверхности микрокапсулы.

[0044] Например, если плотность пептида на микрокапсуле составляет менее 0,1 пептида/мкм² или превышает 10 пептидов/мкм², это может приводить к эффекту улучшения состояния кожи, сходному с эффектом микрокапсулы, с которой пептид не связан, и в случае приведенного выше диапазона плотностей может достигаться хорошая аффинность связывания с клетками-мишенями и эффективность доставки активного ингредиента.

[0045] В одном аспекте микрокапсула, кроме того, включает активный ингредиент, инкапсулированный в капсулу, и активный ингредиент может включать по меньшей мере один активный ингредиент, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, белков растительного происхождения или их гидролизатов, и дрожжевых ферментов, их лизатов или их фильтратов. Также активный ингредиент, инкапсулированный в капсулу, может включать различные экстракты растений и экстракты их плодов. В частности, экстракт растения может включать экстракт луковицы Narcissus tazetta, экстракт луковицы Leucojum aestivum и т.д. и экстракт плода может включать экстракт плода Hylocereus undatus.

[0046] Также аминокислоты не ограничиваются и могут включать аргинин, аланин, глутамин, глицин, изолейцин, лейцин, лизин, гистидин, пролин, тирозин, серин, валин, фенилаланин, триптофан, треонин, аспарагиновую кислоту и т.п.

[0047] В иллюстративном варианте осуществления белок растительного происхождения может включать белок люпина, и дрожжи могут включать Pichia pastoris. В одном иллюстративном варианте осуществления фермент дрожжей может представлять собой фильтрат лизата ферментов Pichia.

[0048] В описанном выше аспекте каждый из белков растительного происхождения или их гидрата, и фермента дрожжей, его лизата или его фильтрата может содержаться в количестве от 0,0001 до 30 масс. % в расчете на общую массу активного ингредиента. Если его количество составляет менее 0,0001 масс. %, его эффекты могут стать незначительными. С другой стороны, если его количество превышает 30 масс. %, могут возникать проблемы стабильности, такие как проблемы обесцвечивания и запаха. Каждый из белка растительного происхождения или его гидролизата, и дрожжевого фермента, его лизата или его фильтрата предпочтительно содержится в количестве от 0,01 до 30 масс. %, более предпочтительно от 0,01 до 25 масс. %, в расчете на общую массу активного ингредиента.

[0049] Аминокислоты могут содержаться в количестве от 0,00001 до 0,1 масс. %, предпочтительно от 0,0001 до 0,1 масс. %, и более предпочтительно от 0,0001 до 0,05 масс. %, и экстракт растений или экстракт плодов может содержаться в количестве от 0,0001 до 30 масс. %. Каждый из растительного экстракта и экстракта плодов предпочтительно содержится в количестве от 0,001 до 20 масс. %, и наиболее предпочтительно от 0,001 до 15 масс. %.

[0050] Если количество аминокислоты составляет менее 0,00001 масс. %, ее эффекты могут стать незначительными. С другой стороны, если их количество превышает 0,1 масс. %, могут возникнуть проблемы, связанные с нестабильной вязкостью конечного состава.

[0051] Если количество растительного экстракта или экстракта плодов составляет менее 0,0001 масс. %, его эффекты могут стать незначительными. С другой стороны, если его количество превышает 30 масс. %, могут возникнуть проблемы, связанные с обесцвечиванием, запахом и нестабильной вязкостью конечного состава.

[0052] Когда количества компонентов, приведенных выше, находятся в указанных выше диапазонах, является возможным достижение эффектов превосходного увлажнения, усиления кожного барьера, отбеливания, сокращения морщин и повышения эластичности кожи.

[0053] Другой аспект настоящего изобретения относится к косметической композиции, содержащей микрокапсулу. Композицию можно использовать для увлажнения, усиления кожного барьера, отбеливания, сокращения морщин или повышения эластичности кожи.

[0054] В настоящем описании "усиление кожного барьера" означает стимуляцию дифференцировки кожных кератиноцитов, таким образом, укрепляя внешний слой кожи, тем самым улучшая состояние кожи.

[0055] В одном аспекте композиция может стимулировать синтез кератина 1, кератина 5, кератина 10, кератина 14, филагрина, лорикрина, эластина, коллагена и т.п.

[0056] В одном аспекте количество микрокапсул в косметической композиции может составлять от 0,0001 до 30 масс. %, предпочтительно от 0,001 до 20 масс. %, и наиболее предпочтительно от 0,01 до 10 масс. %.

[0057] Если количество микрокапсул в косметической композиции составляет менее 0,0001 масс. %, их эффекты являются незначительными. С другой стороны, если их количество превышает 30 масс. %, способность капсул диспергироваться в композиции может снижаться и вязкость конечной косметической композиции может изменяться.

[0058] В настоящем описании микрокапсулу, в которой активный ингредиент смешан с оптимальным количеством и инкапсулирован, называют "CellActive Code". Также с использованием композиции, содержащей микрокапсулу, можно производить различные составы, такие как тоники, ампулы, сыворотки, кремы для глаз, питательные кремы и лосьоны. Инкапсулирование активного ингредиента в микрокапсулу называют интеллектуальным инкапсулированием. Также способы точной доставки композиции, содержащей микрокапсулу (интеллектуальную капсулу), включающую инкапсулированный в нее активный ингредиент, в клетки-мишени называют "CellActive Technology".

[0059]

[0060] Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приведены следующие примеры получения и примеры. Эти примеры получения и примеры приведены только для иллюстрации настоящего изобретения, но их не следует считать ограничивающими объем настоящего изобретения.

[0061]

[0062] [Примеры получения]

[0063] [Пример получения 1] Получение пептида

[0064] Пептиды SEQ ID NO: 1-3, представленные в таблице 1, синтезировали с использованием твердофазного способа FMOC с использованием автоматизированного устройства для синтеза (PeptrEx-R48, Peptron, Daejeon, Корея). Пептиды, синтезированные таким образом, очищали и анализировали посредством обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (Prominence LC-20AB, Shimadzu, Япония) с использованием колонок RP (Shiseido Capcell Pak), и идентифицировали с использованием масс-спектрометра (HP 1100 Series LC/MSD, Hewlett-Packard, Roseville, США).

[0065]

[0066] [Пример получения 2] Получение микрокапсулы

[0067] [Пример получения 2-1] Получение микрокапсулы, с которой не связан пептид

[0068] Часть в виде липидного концентрата (церамид, холестерин, гидрогенизированный лецитин) помещали в отдельную емкость для растворения и нагревали до 70°C и, таким образом, растворяли, и гидрофильную биологически активную часть (пантенол, рафиноза, ниацинамид, вода листьев Camellia sinensis) помещали в отдельную емкость для растворения и нагревали до 45°C и, таким образом, растворяли. Часть в виде липидного концентрата, полученную, как описано выше, помещали в емкость для растворения, содержавшую часть в виде стабилизатора липидов, и встряхивали в течение 5 мин при скорости 1500 об/мин с использованием устройства для встряхивания при 50°C, и к ней добавляли гидрофильную часть в виде биологически активного материала, встряхивали в течение 5 мин при скорости 1500 об/мин с использованием устройства для встряхивания и гомогенизировали, таким образом, получая первую фазу концентрата, в которой избыток гидрофильного активного ингредиента был в основном гомогенизирован. Более того, первую фазу концентрата встряхивали в течение 1 ч при низкой скорости 500 об/мин с использованием устройства для встряхивания при 50°C, посредством чего первая фаза концентрата была в достаточной степени гидратирована. Первую фазу концентрата, гидратированную таким образом, помещали в устройство для эмульгирования высокого давления при 50°C и обрабатывали два раза под давлением 9000 бар, тем самым формируя вторую фазу концентрата, в которой избыток гидрофильного биологически активного материала был помещен в водную фазу, образованную между внутренней водной фазой и липидным бислоем, и концентрировали и инкапсулировали до наноразмера. Затем вторую фазу концентрата охлаждали до 28°C при осторожном встряхивании при скорости 500 об/мин с использованием устройства для встряхивания и, таким образом, стабилизировали, тем самым получая микрокапсулу, с которой не связан пептид. Диаметр микрокапсулы, полученной таким образом, составлял приблизительно 0,2 микрометра.

[0069]

[0070] [Пример получения 2-2] Получение микрокапсулы, с которой связан пептид

[0071] Пептид согласно примеру получения 1 связывали с микрокапсулой, произведенной в примере получения 2-1.

[0072] Пептид согласно примеру получения 1 связывали с поверхностью микрокапсулы путем связывания N-конца пептида с карбоксильной группой на поверхности микрокапсулы, с которой не связан пептид. В частности, микрокапсулы, с которыми не связан пептид, ресуспендировали в забуференном солевом растворе MES (2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота) (pH 5,5) и позволяли реагировать с EDAC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид) и NHS (N-гидроксисукцинимид) в течение приблизительно 1 ч. После этого микрокапсулы центрифугировали при приблизительно 15000 об/мин в течение приблизительно 1 ч, таким образом, удаляя EDAC и NHS, тем самым активируя поверхность микрокапсул, с которыми не связан пептид. После этого микрокапсулы суспендировали приблизительно в 100 мл PBS (фосфатно-солевой буфер), а затем позволяли им реагировать приблизительно с 0,1 г пептида SEQ ID NO: 1 при комнатной температуре. После этого, не вступивший в реакцию пептид удаляли путем промывания буфером PBS. Микрокапсулы, с которыми связан пептид, получали с использованием пептидов SEQ ID NO: 2 и 3 аналогично тому, как описано выше, за исключением того, что количество добавляемых реагентов изменяли соответствующим образом. Связывание пептида с микрокапсулой оценивали с использованием теста Кайзера. Кроме того, с использованием сканирующего электронного микроскопа было измерено, что плотность пептида на поверхности микрокапсулы составляла приблизительно 2 пептида/мкм² (JSM-7100F).

[0073] Микрокапсула, с которой был связан пептид SEQ ID NO: 1, упоминается как микрокапсула 1, микрокапсула, с которой связан пептид SEQ ID NO: 2, упоминается как капсула 2, и микрокапсула, с которой связан пептид SEQ ID NO: 3, упоминается как капсула 3.

[0074]

[0075] [Пример получения 3] Контроль плотности пептида на микрокапсуле

[0076] Микрокапсулу получали аналогично примеру получения 2 за исключением того, что добавляемое количество пептида и плотность пептида на микрокапсуле изменяли. Экспериментальные группы разделяли следующим образом в зависимости от плотности.

[0077] [Таблица 2]

[0078]

Экспериментальная группа	Капсула 1-1 Капсула 2-1 Капсула 3-1	Капсула 1-2 Капсула 2-2 Капсула 3-2	Капсула 1-3 Капсула 2-3 Капсула 3-3	Капсула 1-4 Капсула 2-4 Капсула 3-4	Капсула 1-5 Капсула 2-5 Капсула 3-5	Капсула 1-6 Капсула 2-6 Капсула 3-6
Плотность пептида	0,05 пептида/мкм²	0,1 пептида/мкм²	2 пептида/мкм²	7 пептидов/мкм²	10 пептидов/мкм²	10,5 пептида/мкм²

[0079] [Примеры]

[0080] [Пример 1] Испытание цитотоксичности

[0081] Клетки меланомы B16 обрабатывали микрокапсулами 1-3 в каждом случае в концентрации 10 мкМ и оценивали жизнеспособность клеток. Контрольную группу обрабатывали койевой кислотой и арбутином. В результате жизнеспособность клеток практически не изменялась при обработке капсулами по настоящему изобретению, что указывает на то, что цитотоксичность отсутствовала.

[0082]

[0083] [Пример 2] Испытание селективности связывания с клетками-мишенями

[0084] Для оценки того, были ли капсулы 1-3 способны связываться с другими клетками, отличными от соответствующих клеток-мишеней, определяли связывание с различными типами клеток. В результате было подтверждено, что капсулы 1-3 практически не связывались с клетками, отличными от соответствующих клеток-мишеней.

[0085]

[0086] [Пример 2-1] Капсула 1

[0087] Аффинность связывания капсул 1 с клетками оценивали с использованием проточной цитометрии (FACS) посредством иммуноанализа флуоресценции. Использованные клетки представляли собой фибробласты, кератиноциты, лимфоциты, моноциты, меланоциты, дендритные клетки и нейроны кожи. Исходя из результатов определения, уровень связывания капсул 1 с фибробластами, которые являются клетками-мишенями, составлял приблизительно 75%, однако аффинность их связывания с клетками, отличными от клеток-мишеней, была очень низкой (фиг. 1a).

[0088]

[0089] [Пример 2-2] Капсула 2

[0090] Капсулы 2 тестировали аналогично тому, как в примере 2-1. В результате аффинность связывания капсул 2 с меланоцитами в качестве клеток-мишеней составляла приблизительно 70%, однако уровень их связывания с другими клетками был очень низким (фиг. 1b).

[0091]

[0092] [Пример 2-3] Капсула 3

[0093] Капсулы 3 тестировали аналогично тому, как в примере 2-3. В результате уровень связывания капсул 3 с кератиноцитами в качестве клеток-мишеней составлял приблизительно 85%, однако уровень их связывания с другими клетками был очень низким (фиг. 1c).

[0094]

[0095] [Пример 3] Эффект микрокапсул, с которыми связан пептид, против старения (капсула 1-3)

[0096] [Пример 3-1] Аффинность связывания фибробластов и капсул (сравнение аффинности связывания в зависимости от присутствия или отсутствия пептида)

[0097] Проводили сравнение аффинности связывания микрокапсул, поверхность которых была связана с пептидом, и микрокапсул, поверхность которых не была связана с пептидом, с фибробластами и сравнивали способность к всасыванию активного ингредиента.

[0098] Процесс связывания замедлялся при культивировании капсул 1 и клеток-мишеней вместе при 4°C в течение 1 ч, после чего определяли аффинность связывания микрокапсул с поверхностью которых был связан пептид, и микрокапсул, с поверхностью которых не был связан пептид, с фибробластами. Аффинность связывания для капсул 1 с фибробластами была приблизительно в 4 раза выше аффинности связывания микрокапсул, с которыми пептид не был связан.

[0099]

[00100] [Пример 3-2] Сравнение продуцирования коллагена и эластина

[00101] Микрокапсулы, поверхность которых была связана с пептидом, подвергали реакции с фибробластами и определяли количество эластина и коллагена, которые продуцировались.

[00102] При использованием капсул, с которыми пептид не был связан, количество продуцированного коллагена было незначительным, однако при использовании капсул 1, с которыми был связан пептид, продуцирование коллагена 1 типа и 3 типа возрастало по меньшей мере приблизительно в 1,7 раза по сравнению с капсулами, с которыми пептид не был связан (фиг. 2a и 2b).

[00103] Через 7 суток после реакции с капсулами наблюдалось максимальное увеличение продуцирования эластина в 9 раз или более при использовании капсул 1, с которыми был связан пептид, по сравнению с использованием капсул, с которыми пептид не был связан (фиг. 2c).

[00104]

[00105] [Пример 3-3] Панельный тест сокращения морщин на коже

[00106] Изготавливали ампулу, содержавшую 30 масс. % капсул 1 в расчете на общую массу, и содержимое ампулы равномерно наносила два раза в сутки на лицо каждая из 21 женщин в возрасте от 35 до 65 лет, не имевших заболеваний кожи, в течение 28 дней, и определяли степень сокращения морщин вокруг глаз. В результате был подтвержден эффект сокращения морщин вокруг глаз приблизительно на 10% (фиг. 3).

[00107]

[00108] [Пример 4] Отбеливающий эффект микрокапсул, связанных с пептидом (капсулы 2-3)

[00109] [Пример 4-1] Препятствование связыванию меланоцитов и альфа-MSH

[00110] После обработки 10 мкМ микрокапсулами, поверхность которых была связана с пептидом (капсула 2), и микрокапсулами, поверхность которых не была связана с пептидом, определяли аффинность связывания между меланоцитами и альфа-меланоцитстимулирующим гормоном (MSH). В результате при использовании капсул 2 было обнаружено, что аффинность связывания меланоцитов и альфа-MSH снижалась на 95% или более (фиг. 4a).

[00111]

[00112] [Пример 4-2] Способность ингибировать синтез меланина

[00113] После обработки 10 мкМ микрокапсулами, поверхность которых связана с пептидом, и микрокапсулами, поверхность которых не связана с пептидом, проводили сравнения количеств меланина, который синтезировался. В результате было обнаружено, что при введении капсул 2 продуцирование меланина из меланоцитов значительно снижалось (фиг. 4b).

[00114]

[00115] [Пример 4-3] Панельный тест эффекта отбеливания кожи

[00116] Тоник, содержавший 15% капсул 2, равномерно наносила на лицо два раза в сутки на лицо каждая из 21 женщин в возрасте от 35 до 55 лет, не имевших заболеваний кожи, в течение 14 дней, и проводили оценку отбеливающего эффекта. В результате, когда наносили тоник, содержавший капсулы 2, был подтвержден значительно улучшенный отбеливающий эффект (фиг. 5).

[00117]

[00118] [Пример 5] Улучшение эффекта кожного барьера для микрокапсул, с которыми связан пептид (капсула 3-3)

[00119] [Пример 5-1] Кератин 1 и кератин 5, и эффект усиления экспрессии

[00120] Для оценки эффекта улучшения кожного барьера для капсул 3, с которыми был связан пептид, определяли эффект повышения экспрессии кератина. После обработки 10 мкМ микрокапсулами, поверхность которых была связана с пептидом, и микрокапсулами, поверхность которых не была связана с пептидом, определяли степень экспрессии указанных выше факторов. В результате, экспрессированные количества кератина 1 и кератина 5 возрастали приблизительно в два раза при использовании капсул 3 по сравнению с капсулами, с которыми пептид не был связан (фиг. 6a и 6b, последовательно).

[00121]

[00122] [Пример 5-2] Эффект усиления синтеза филагрина

[00123] Обработку капсулами проводили аналогично тому, как в примере 5-1, и определяли эффект на синтез филагрина. В результате была подтверждена экспрессия филагрина, увеличенная приблизительно в 5 раз, при использовании капсул 3 по сравнению с использование капсул, с которыми пептид не был связан (фиг. 6c).

[00124]

[00125] [Пример 6] Панельный тест эффекта усиления кожного барьера

[00126] Питательный крем, содержавший 20% капсул 3, равномерно наносила два раза в сутки на лицо каждая из 20 женщин в возрасте от 35 до 55 лет, не имевших заболеваний кожи в течение 14 дней, и проводили определение плотности дермы кожи и толщины кожи. В результате, когда наносили питательный крем, содержавший капсулы 3, плотность кожи и толщина кожи значительно увеличивались и, таким образом, был подтвержден эффект улучшения кожного барьера (фиг. 7).

[00127]

[00128] [Пример 7] Различие эффекта в зависимости от плотности пептида

[00129] Экспериментальные группы, представленные в таблице 2, тестировали как в примерах 3-6. Эффект применения капсул 1-3, 2-3 и 3-3 (плотность пептида: 2 пептида/мкм²) был определен как 10, и результаты отдельных экспериментальных групп представляли в качестве величин относительно капсул 1-3, 2-3 и 3-3.

[00130] В таблице 3 ниже представлены результаты экспериментов, соответствующих примеру 3, в таблице 4 ниже представлены результаты экспериментов, соответствующих примеру 4, и в таблице 5 ниже представлены результаты экспериментов, соответствующих примеру 6.

[00131]

[00132] [Таблица 3]

[00133]

Экспериментальная группа	Капсула 1-1	Капсула 1-2	Капсула 1-3	Капсула 1-4	Капсула 1-5	Капсула 1-6	Не связанная с пептидом капсула
Аффинность связывания с фибробластами	2	7	10	9,5	7,5	3,5	1
Продуцирование коллагена	1,5	7,5	10	9	7	3,5	1
Продуцирование эластина	2,5	8	10	9	7	3,5	1
Сокращение морщин на коже и повышение эластичности	1,5	6,5	10	9	8	3	1

[00134] [Таблица 4]

[00135]

Экспериментальная группа	Капсула 2-1	Капсула 2-2	Капсула 2-3	Капсула 2-4	Капсула 2-5	Капсула 2-6	Капсула, с которой не связан пептид
Препятствование связыванию меланоцитов и альфа-MSH	3	7,5	10	10	7	3	1
Ингибирование синтеза меланина	2	8	10	9	7,5	3,5	1
Отбеливание кожи	2,5	8,5	10	9	7	3	1

[00136] [Таблица 5]

[00137]

Экспериментальная группа	Капсула 3-1	Капсула 3-2	Капсула 3-3	Капсула 3-4	Капсула 3-5	Капсула 3-6	Капсула, с которой не связан пептид
Экспрессия кератина	3,5	6,5	10	10	7,5	3	1
Синтез филагрина	2	5	10	9,5	7	2,5	1
Улучшение кожного барьера	3,5	6,5	10	8	7,5	2	1

[00138] В результате, было обнаружено, что, когда плотность пептида не находилась в диапазоне от 0,1 до 10 пептидов/мкм², эффект улучшения состояния кожи был незначительным.

[00139]

[00140] [Пример составления]

[00141] [Пример составления 1] Тоник (для осветления)

[00142] [Таблица 6]

[00143]

Компонент		Количество (масс. %)
Активный ингредиент в капсуле	Гидролизованный белок люпина	1,5
	Фильтрат лизата фермента Pichia	1,5
	Экстракт плодов Hylocereus undatus	12,0
	Аминокислоты (глутаминовая кислота, глицин, гистидин, лизин, изолейцин, фенилаланин, пролин, серин, триптофан, тирозин)	0,0015
Другие ингредиенты	Растворимый в воде увлажнитель	20,0
	Ниацинамид	2,0
	Лизат ферментов Bifida	3,0
	Микроэмульсия (гидрогенизированный лецитин, церамид NP, токоферил ацетат, холестерин, каприловый/каприновый триглицерид, вода листьев Camellia sinensis, многоатомный спирт)	5,0
	Смесь экстракта цветков/листьев Ocimum basilicum, воды плодов Pyrus malus, экстракта Houttuynia cordata, экстракта цветков Chamomilla recutita, экстракта листьев/корней Althaea officinalis, экстракта цветков/листьев/стеблей Lavandula angustifolia, экстракта Rosmarinus officinalis, экстракта листьев Foeniculum vulgare	10,0
	Вода листьев Camellia sinensis и другие стабилизаторы	до 100

[00144] [Пример составления 2] Ампула (против старения)

[00145] [Таблица 7]

[00146]

Компонент		Количество (масс. %)
Активный ингредиент в капсуле	Олигопептид-1	0,001
	Гидролизованный белок люпина	3,0
	Фильтрат лизата ферментов Pichia	3,0
	Экстракт луковицы Leucojum aestivum	26,0
	Аминокислоты (аланин, лизин, серин, треонин)	0,003
Другие ингредиенты	Растворимый в воде увлажнитель	25,0
	Пальмитоилпентапептид-4	0,001
	Бисаболол	0,5
	Ниацинамид	2,0
	Аденозин	0,04
	Карнозин	0,5
	Экстракт цветков Bellis perennis	1,0
	Холестериновый жидкий кристалл (дигидрохолестерилбутират и дигидрохолестерилолеат и холестерилбутират и фитостерилолеат)	1,0
	Вода листьев Camellia sinensis и другие стабилизаторы	До 100

[00147] [Пример составления 3] Сыворотка (против старения)

[00148] [Таблица 8]

[00149]

Компонент		Количество (масс. %)
Активный ингредиент в капсуле	Олигопептид-1	0,001
	Гидролизованный белок люпина	2,0
	Фильтрат лизата ферментов Pichia	2,0
	Экстракт луковицы Leucojum aestivum	16,0
	Аминокислоты (аланин, лизин, серин, треонин)	0,002
Другие ингредиенты	Гидрогенизированный лецитин	4,0
	Растворимое в масле смягчающее вещество	20,0
	Растворимый в воде увлажнитель	10,0
	Токоферилацетат	1,0
	Аденозин	0,04
	Смесь экстракта цветков/листьев Ocimum basilicum, и воды плодов Pyrus malus, и экстракта Houttuynia cordata, и экстракта цветков Chamomilla recutita, и экстракта листьев/корней Althaea officinalis, и экстракта цветков/листьев/стеблей Lavandula angustifolia, и экстракта Rosmarinus officinalis, и экстракта листьев Foeniculum vulgare	10,0
	Пальмитоилпентапептид-4	0,001
	Вода листьев Camellia sinensis и другие стабилизаторы	До 100

[00150] [Пример составления 4] Крем для кожи вокруг глаз (против старения)

[00151] [Таблица 9]

[00152]

Компонент		Количество (масс. %)
Активный ингредиент в капсуле	Олигопептид-1	0,001
	Гидролизованный белок люпина	2,0
	Фильтрат лизата ферментов Pichia	2,0
	Экстракт луковицы Leucojum aestivum	16,0
	Аминокислоты (аланин, лизин, серин, треонин)	0,002
Другие ингредиенты	Растворимое в масле смягчающее вещество	25
	Растворимый в воде увлажнитель	15
	Ниацинамид	2,0
	Аденозин	0,04
	Гиалуронат натрия	0,1
	Пальмитоилпентапептид-4	0,001
	Токоферилацетат	0,2
	Вода листьев Camellia sinensis и другие стабилизаторы	до 100

[00153] [Пример составления 5] Лосьон (для эластичности кожи)

[00154] [Таблица 10]

[00155]

Компонент		Количество (масс. %)
Активный ингредиент в капсуле	Гидролизованный белок люпина	1,0
	Фильтрат лизата ферментов Pichia	1,0
	Экстракт луковицы Narcissus tazetta	8,0
	Аминокислоты (аланин, аспарагиновая кислота, глицин, серин, пролин)	0,001
Другие ингредиенты	Растворимое в масле смягчающее вещество	15,0
	Растворимый в воде увлажнитель	13,0
	Токоферилацетат	0,5
	Экстракт листьев Aloe barbadensis	5,0
	Вода листьев Camellia sinensis и другие стабилизаторы	До 100

[00156] [Пример составления 6] Питательный крем (для эластичности кожи)

[00157] [Таблица 11]

[00158]

Компонент		Количество (масс. %)
Активный ингредиент в капсуле	Гидролизованный белок люпина	2,0
	Фильтрат лизата ферментов Pichia	2,0
	Экстракт луковицы Narcissus tazetta	16,0
	Аминокислоты (аланин, аспарагиновая кислота, глицин, серин, пролин)	0,002
Другие ингредиенты	Растворимое в масле смягчающее вещество	20,0
	Растворимый в воде увлажнитель	30,0
	Пальмитоилпентапептид-4	0,001
	Лизат ферментов Bifida	5,0
	Аденозин	0,04
	Смесь экстракта цветков/листьев Ocimum basilicum, и воды плодов Pyrus malus, и экстракта Houttuynia cordata, и экстракта цветков Chamomilla recutita, и экстракта листьев/корней Althaea officinalis, и экстракта цветков/листьев/стеблей Lavandula angustifolia, и экстракта Rosmarinus officinalis, и экстракта листьев Foeniculum vulgare	10,0
	Вода листьев Camellia sinensis и другие стабилизаторы	До 100

Свободный текст списка последовательностей

[00159] SEQ ID NO: 1 (Ala-Lys-Ser-Thr) представляет собой последовательность пептида, который нацелен на фибробласты, и пептид SEQ ID NO: 1 способен связываться с рецептором фактора роста фибробластов.

[00160] SEQ ID NO: 2 (Glu-Gly-His-Lys-Ile-Phe-Pro-Ser-Trp-Tyr) представляет собой последовательность пептида, который нацелен на меланоциты, и пептид SEQ ID NO: 2 способен связываться с рецептором меланокортина.

[00161] SEQ ID NO: 3 (Ala-Asp-Gly-Ser-Pro) представляет собой последовательность пептида, который нацелен на кератиноциты, и пептид SEQ ID NO: 3 способен связываться с рецептором интегринов, особенно с рецептором интегринов семейства бета-1.

[00162]

--->

Перечень последовательностей

<110> KOLMAR KOREA

<120> ПЕПТИДЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ СПОСОБНОСТЬЮ СВЯЗЫВАТЬСЯ С КЛЕТОЧНЫМ РЕЦЕПТОРОМ, И КОСМЕТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩИЯ ИХ

<130> PF170257

<150> KR 10-2017-0107511

<151> 2017-08-24

<150> KR 10-2018-0006114

<151> 2018-01-17

<160> 3

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> пептид, связывающийся с фибробластом

<400> 1

Ala Lys Ser Thr

1

<210> 2

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> пептид, связывающийся с фибробластом

<400> 2

Glu Gly His Lys Ile Phe Pro Ser Trp Tyr

1 5 10

<210> 3

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> пептид, связывающийся с кератиноцитами

<400> 3

Ala Asp Gly Ser Pro

1 5

<---

Claims

1. Пептид, обладающий способностью связываться с клеточным рецептором, где пептид выбран из любой из SEQ ID NO: 1-3.

2. Пептид по п. 1, где клетка включает меланоцит, кератиноцит или фибробласт.

3. Пептид по п. 1, где клеточный рецептор включает рецептор фактора роста фибробластов, рецептор интегрина или рецептор меланокортина.

4. Пептид по п .3, где рецептор меланокортина представляет собой рецептор меланокортина 1 (MC1R).

5. Микрокапсула для доставки активного ингредиента, содержащая пептид по п. 1, связанный с ее поверхностью, где пептид содержится при плотности от 0,1 до 10 пептидов/мкм² в расчете на общую площадь поперечного сечения микрокапсулы, и активный ингредиент инкапсулирован в капсулу.

6. Микрокапсула по п. 5, где активный ингредиент включает по меньшей мере один активный ингредиент, выбранный из группы, состоящей из аминокислот; белка растительного происхождения или его гидролизата; фермента дрожжей, его лизата или его фильтрата; и растительного экстракта.

7. Микрокапсула по п. 6, где белок растительного происхождения включает белок люпина и дрожжи включают Pichia pastoris.

8. Микрокапсула по п. 6, где аминокислоты содержатся в количестве от 0,00001 до 0,1 мас.% в расчете на общую массу активного ингредиента и каждый из белка растительного происхождения или его гидролизата; фермента дрожжей, его лизата или его фильтрата; и растительного экстракта, его или его фильтрата, и растительного экстракта содержится в количестве от 0,0001 до 30 мас.% в расчете на общую массу активного ингредиента.

9. Косметическая композиция для увлажнения, усиления кожного барьера, отбеливания, сокращения морщин и повышения эластичности кожи, содержащая 15-30 мас.% микрокапсул по любому из пп. 5-8.

10. Применение косметической композиции по п. 9 для увлажнения, усиления кожного барьера, отбеливания, сокращения морщин и повышения эластичности кожи.