KR20190022305A

KR20190022305A - 세포 수용체 결합능이 있는 펩티드를 포함하는 마이크로 캡슐 및 이를 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20190022305A
Application number: KR1020180070676A
Authority: KR
Inventors: 한상근; 이현숙; 김은아; 현승민; 최형; 백소윤; 홍재화; 임채미; 박다정; 조혜진; 이학성; 박지훈; 이은영
Original assignee: 한국콜마주식회사
Priority date: 2017-08-24
Filing date: 2018-06-20
Publication date: 2019-03-06
Also published as: CN110167953A; KR102026220B1; JP2020530860A; MX2020001910A; JP2021130684A; CN110167953B; CN115925787A; CN115850369A; KR101917854B1; RU2743036C1; US20200190143A1; WO2019039676A1; SG11202001576SA; KR20190022306A; JP2021130686A; PH12020500313A1; KR102026221B1; AU2018320089B2; CA3072042C; JP7129140B2

Abstract

본 명세서에는 세포 수용체 결합능이 있는 펩타이드, 상기 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐 및 이를 포함하는 화장료 조성물이 개시된다. 본 발명의 일 측면인 펩티드는 타겟에 대한 선별적 결합력이 우수하며, 마이크로 캡슐은, 물리화학적 안정성이 우수하다. 따라서, 상기 펩티드와 결합된 마이크로 캡슐을 포함하는 화장료 조성물은, 캡슐 내에 포함되어 있는 유효성분의 타겟 세포에 대한 전달 효율이 우수하여, 피부 상태 개선 효과가 우수하다.

Description

세포 수용체 결합능이 있는 펩티드를 포함하는 마이크로 캡슐 및 이를 포함하는 화장료 조성물{PEPTIDES HAVING CAPACITY OF BINDING TO CELL RECEPTOR AND COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE SAME}

본 명세서에는 세포 수용체 결합능이 있는 펩타이드, 상기 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐 및 이를 포함하는 화장료 조성물이 개시된다.

마이크로 캡슐은 의약품, 도료, 전자산업 및 화장품 등 다양한 분야에서 사용되는 기반기술로서, 특히 유효성분의 초기 역가를 유지하는 가장 좋은 도구로서 의약품 및 화장품 분야에서 각광받고 있다(Journal of controlled release, 58, 9, 1999).

그러나, 지금까지 알려진 마이크로 캡슐을 함유한 화장료 조성물은, 인체에 적용하였을 때, 마이크로 캡슐을 사용하지 않은 화장료 조성물과 비교하여 눈에 띄개 개선된 효과를 얻지 못하고 있다.

이에 최근 약물 전달 시스템 원리를 이용하여, 표적 세포에 마이크로 캡슐을 전달하고자 하는 개발이 계속되고 있다. 그러나, 지금까지 알려진 것들은, 마이크로 캡슐의 분자적 불안정성, 표적세포와의 결합력 문제 등으로 인해 아직까지 만족할 만한 효과를 얻지 못하고 있는 실정이다.

KR 10-1051557 B1

일 측면에서, 본 발명의 목적은 표적세포와의 결합력이 우수한 펩타이드를 제공하는 것이다.

일 측면에서, 본 발명의 목적은 유효성분을 표적세포로 정확하고 안정적으로 전달하는 것이다.

일 측면에서, 본 발명의 목적은 유효성분의 피부로의 전달력이 개선된 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

일 측면에서, 본 발명은 세포 수용체 결합능이 있는 펩티드로서, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나의 서열을 포함하는 펩티드를 제공한다.

일 측면에서, 본 발명은 상기 펩티드가 표면 상에 연결된 마이크로 캡슐을 제공한다.

또한, 일 측면에서, 본 발명은 상기 마이크로 캡슐을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 측면인 펩티드는 타겟에 대한 선별적 결합력이 우수하다. 또한, 본 발명의 일 측면인 마이크로 캡슐은, 물리화학적 안정성이 우수하다. 따라서, 상기 펩티드와 결합된 마이크로 캡슐을 포함하는 화장료 조성물은, 캡슐 내에 포함되어 있는 유효성분의 타겟 세포에 대한 전달 효율이 우수하여, 피부 상태 개선 효과가 우수하다.

도 1은 본 발명의 캡슐의 타겟(타겟 세포)와의 결합력을 확인한 결과이다(도 1a: 캡슐 1, 도 1b: 캡슐 2, 도 1c; 캡슐 3)
도 2는 본 발명의 캡슐 1을 처리했을 때, 콜라겐 1(도 2a), 콜라겐 2(도 2b) 및 엘라스틴(도 2c)의 발현변화를 보이는 도이다.
도 3는 본 발명의 캡슐을 함유한 앰플을 사용한 후 눈가 주름 개선 효과를 확인한 도이다.
도 4는 본 발명의 캡슐(캡슐 2)을 처리했을 때 알파-MSH의 결합 방해능(도 4a)과 멜라닌 합성 저해능(도 4b)를 보이는 도이다.
도 5는 본 발명의 캡슐을 함유한 토너를 사용한 후 미백 효과를 확인한 도이다.
도 6은 본 발명의 캡슐(캡슐 3)을 처리했을 때 케라틴 1(도 6a), 케라틴 5(도 6b),
및 필라그린(도 6C)의 발현 변화를 확인한 도이다.
도 7은 본 발명의 캡슐을 함유한 영양크림을 사용한 후 피부 장벽(진피 치밀도, 피부두께)개선 효과를 확인한 도이다.
도 8은 본 발명의 과량의 친수성 생리활성물질을 지질부로 이루어진 다층구조상에 안정화한 마이크로 캡슐의 모식도를 나타내는 도면이다.
도 9는 펩티드를 포함하는 마이크로캡슐의 모식도를 나타내는 도면이다.
도 10는 본 발명의 스마트캡슐레이션 제조 기술을 통해 만들어진 농축 조성물 시료의 사진이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은, 일 측면에서, 세포 수용체 결합능이 있는 펩티드로서, 상기 펩티드는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나의 서열을 포함하는 펩티드이다.

본 명세서에서, 세포 수용체 결합능이란, 세포 상에 형성되어 있는 수용체들에 결합할 수 있는 능력을 의미한다.

상기 서열번호 1 내지 3의 펩타이드의 아미노산 서열은 하기 표 1에 기재된 바와 같다.

서열번호	아미노산 서열
1	Ala-Lys-Ser-Thr
2	Glu-Gly-His-Lys-Ile-Phe-Pro-Ser-Trp-Tyr
3	Ala-Asp-Gly-Ser-Pro

상기 표 1에서, Ala는 알라닌, Asp는 아스파르트산, Glu는 글루탐산, Gly는 글리신, His는 히스티딘, Ile는 이소루신, Lys는 리신, Phe는 페닐알라닌, Pro는 프롤린, Ser는 세린, Trp는 트립토판, Tyr은 티로신, Thr은 트레오닌을 의미한다.

일 측면에서, 상기 펩티드의 타겟이 되는 세포는 멜라닌 세포(melanocytes), 케라틴 세포(keratinocyte) 또는 섬유아세포(fibroblast)를 포함할 수 있다.

또한, 상기 세포 수용체는 섬유아세포 성장 인자 수용체(fibroblast growth factor receptor), 인테그린 수용체 또는 멜라노코르틴 수용체(melanocortin receptor)를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 멜라노코르틴 수용체는 멜라노코르틴 1 수용체(melanocortin 1 receptor, MC1R)일 수 있다.

일 구현예에서, 상기 서열번호 1의 펩티드는 섬유아세포를 타겟으로 하는 것으로서, 섬유아세포 성장 인자 수용체와 결합하는 것일 수 있다.

또한, 일 구현예에서, 상기 서열번호 2의 펩티드는 멜라닌 세포를 타겟으로 하는 것으로서, 멜로노코르틴 수용체와 결합하는 것일 수 있다.

또한, 일 구현예에서, 상기 서열번호 3의 펩티드는 케라틴 세포를 타겟으로 하는 것으로서, 인테그린 수용체, 특히 인테그린 수용체의 베타1 패밀리와 결합하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 측면인, 상기 펩티드들은, 각각이 타겟으로 하는 세포 또는 그 리셉터 외 다른 세포와는 결합하지 않고, 그 결합력도 우수하기 때문에, 펩티드에 다른 성분을 연결시켰을 때 타겟으로의 높은 전달력을 기대할 수 있다.

본 발명은, 일 측면에서, 상기 펩티드가 표면상에 연결된 마이크로 캡슐이다. 상기 펩티드는, 마이크로 캡슐 상의 친수성 기, 예컨대 카르복실 기와 펩티드 상의 N-말달을 결합시켜, 마이크로 캡슐 상에 연결될 수 있으나, 연결 방법은 제한되지 않고, 당업자에게 잘 알려진 다양한 방법에 의할 수 있다.

마이크로 캡슐은 광범위하고 다양한 중합체를 포함할 수 있으며, 이들은 중합체, 열 민감성 중합체, 광 민감성 중합체, 자성 중합체, pH 민감성 중합체, 염 민감성 중합체, 화학적 민감성 중합체, 고분자 전해질, 다당류, 펩티드, 단백질 및/또는 플라스틱을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 중합체는 폴리(N-이소프로필아크릴아미드)(PNIPAAm), 폴리(스티렌 설포네이트)(PSS), 폴리(알릴 아민)(PAAm), 폴리(아크릴산)(PAA), 폴리(에틸렌 이민)(PEI), 폴리(디알릴메틸-염화암모늄)(PDADMAC), 폴리(피롤)(PPy), 폴리(비닐피롤리돈)(PVPON), 폴리(비닐 피리딘)(PVP), 폴리(메타크릴산)(PMAA), 폴리(메틸 메타크릴레이트)(PMMA), 폴리스티렌(PS), 폴리(테트라히드로퓨란)(PTHF), 폴리(프탈알데히드)(PTHF), 폴리(헥실 비올로젠)(PHV), 폴리(L-리신)(PLL), 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리(L-아르기닌)(PARG), 폴리(락트산-글리콜산 공중합체)(PLGA)와 같은 물질을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

일 구현예에서, 상기 캡슐은 2중층일 수 있고, 이 때 외각에 위치한 층은 폴리비닐 알코올을 포함할 수 있고, 내면에 위치한 층은 폴리(락트산-글리콜산 공중합체)(PLGA)을 포함할 수 있다.

또한, 마이크로캡슐은 캡슐의 외각 층에 유효 중성 전하, 음전하 또는 양전하를 생성할 수 있는 하나 이상의 물질을 포함할 수 있다. 어떤 경우에, 캡슐의 전하는 입자의 응집 또는 클러스터링(clustering)을 방지하거나 촉진하는 것을 도울 수 있다.

일 측면에서, 상기 펩티드는, 마이크로 캡슐의 총 단면적을 기준으로, 0.1~10 peptides/㎛²의 밀도로 포함될 수 있고, 상기 펩티드의 밀도는, 바람직하게는 0.3~8 peptides/㎛², 가장 바람직하게는 0.4~7 peptides/㎛²일 수 있다. 펩티드의 밀도란, 마이크로 캡슐의 단위 표면적을 기준으로 존재하는 펩티드의 가닥수를 의미할 수 있다.

예컨대, 상기 마이크로 캡슐 상의 펩티드의 밀도가 0.1 peptides/㎛²미만인 경우나, 10 peptides/㎛²를 초과하는 경우에는, 펩티드가 연결되지 않은 마이크로 캡슐과 유사한 정도의 피부 상태 개선 효과를 보여, 상기 밀도 범위에서 우수한 표적 세포에의 결합력과, 유효성분 전달력이 있다.

일 측면에서, 상기 마이크로 캡슐은, 캡슐 내 봉입된 유효성분을 더 포함하고, 상기 유효성분은, 아미노산류; 식물 유래 단백질 또는 그 가수분해물; 및 효모 발효물, 그 용해물 또는 그 여과물 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 또한, 캡슐에 봉입되는 유효성분으로는 다양한 식물 추출물과 그 열매 추출물을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 식물추출물에는 수선화비늘줄기 추출물, 서머스노플레이크 비늘줄기 추출물 등이 포함될 수 있고, 열매 추출물은 용과 추출물을 포함될 수 있다.

또한, 상기 아미노산류는 제한되지 않고, 아르기닌, 알라닌, 글루타민, 글리신, 이소류신, 류신, 리신, 히스티딘, 프롤린, 티로신, 세린, 발린, 페닐알라닌, 트립토판, 트레오닌, 아스파르트산 등을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 상기 식물 유래 단백질은 루핀 단백질을 포함할 수 있고, 상기 효모는 피키아 페스토리스(Pichia pastoris)를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 효모 발효물은, 피키아 발효 용해 여과물일 수 있다.

상기와 같은 측면에서, 식물 유래 단백질 또는 그 가수물과, 효모 발효물, 그 용해물 또는 그 여과물은, 유효성분의 총 중량을 기준으로, 각각 0.0001~30 중량%, 로 포함될 수 있다. 0.0001 중량% 미만일 경우 효능이 미미하며 30중량% 초과일 경우 변색과 변취등의 안정성 문제가 있을 수 있다. 상기 식물 유래 단백질 또는 그 가수분해물; 효모 발효물; 및 그 용해물 또는 그 여과물은 유효성분의 총 중량을 기준으로, 각각 바람직하게, 0.01~30 중량%, 더욱 바람직하게 0.01~25 중량%씩 포함될 수 있다.

상기 아미노산류는 0.00001~0.1 중량%로 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.0001~0.1중량%, 더욱 바람직하게는 0.0001~0.05 중량%로 포함될 수 있고, 상기 식물 추출물 또는 열매 추출물은 0.0001~30 중량%로 포함될 수 있다. 상기 식물 추출물과 열매 추출물은, 각각 바람직하게는 0.001~20 중량%, 가장 바람직하게는 0.001~15 중량%로 포함될 수 있다.

아미노산류의 함량이 0.00001 중량% 미만일 경우 효능이 미미하며, 0.1중량% 초과일 경우, 제형의 점도 안정도에 있어서 문제가 있을 수 있습니다.

식물 추출물 및 열매추출물이 0.0001 중량% 미만일 경우 효과가 미미하며, 30중량% 초과 포함할 경우 변색, 변취 및 제형의 점도 안정도에 있어서 문제가 있을 수 있습니다.

상기 나열된 성분들이 상기 함량범위 내로 포함될 때 가장 우수한 보습, 피부 장벽 강화, 미백, 주름 개선 및 피부 탄력 개선 효과를 얻을 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 상기 마이크로 캡슐을 포함하는 화장료 조성물이다. 상기 조성물은, 보습용, 피부 장벽 강화용, 미백용, 주름 개선용 또는 피부 탄력 개선용일 수 있다.

본 명세서에서, 피부 장벽 강화란, 피부 각질 세포의 분화를 촉진하여, 피부의 최외각 층을 강화하여, 피부 상태를 개선하는 것을 의미할 수 있다.

일 측면에서, 상기 조성물은, 케라틴 1, 케라틴 5, 케라틴 10, 케라틴 14, 필라그린, 로리크린, 엘라스틴, 콜라겐 등의 합성을 촉진할 수 있다.

일 측면에서, 상기 화장료 조성물 내 마이크로 캡슐의 함량은, 0.0001~30중량% 일수있고, 바람직하게는 0.001~20중량%, 가장 바람직하게는 0.01~10중량%일 수 있다.

화장료 조성물 내 마이크로 캡슐의 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우, 효과가 미미하며, 30중량%을 초과하여 포함할 경우, 조성물 내 캡슐의 분산도가 떨어지고, 화장료 조성물로서의 점성을 잃을 수 있다.

본 명세서에서 상기 유효성분을 최적의 함량으로 배합하고, 이 유효성분이 봉입된 마이크로 캡슐을'CellActive Code'라 한다. 또한 이를 포함하는 조성물을 이용하여 다양한 제형, 예컨대, 토너, 앰플, 세럼, 아이크림, 영양크림 및 로션 등으로 제조할 수 있다. 상기 유효성분을 마이크로 캡슐 내에 봉입시키는 것을 스마트 캡슐레이션이라고 한다. 또한, 상기 유효성분이 봉입된 마이크로 캡슐(스마트 캡슐)을 포함하는 조성물을 타겟 세포로 정확히 전달하는 기술을 'CellActive Technology'라고 한다.

이하, 제조예와 실시예를 통하여 본 발명을 설명한다. 하기 제조예와 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐, 이를 통해 본 발명의 권리범위를 한정하여 해석하여서는 아니된다.

[제조예]

[제조예 1] 펩타이드의 제조

상기 표 1의 서열번호 1 내지 3의 펩타이드는 자동화합성기(PeptrEx-R48, 펩트론사, 대전, 대한민국)를 이용하여 FMOC 고체-상 방법(FMOC solid-phase method)으로 합성하였다. 합성된 펩타이드는 RP 컬럼(Shiseido capcell pak)을 사용한 역상 고속액체크로마토그래피(reverse-phase HPLC) (Prominence LC-20AB, Shimadzu사, 일본)로 정제 및 분석하였으며, 질량분석기(HP 1100 Series LC/MSD, Hewlett-Packard사, Roseville, 미국)를 이용하여 동정하였다.

[제조예 2] 마이크로 캡슐의 제조

[제조예 2-1] 펩타이드 미부착 마이크로 캡슐의 제조

별도의 용해조에 지질농축부(세라마이드, 콜레스테롤, 하이드로제네이티드레시틴)를 투입하여 70℃로 가온하여 용해시키고, 별도의 용해조에 친수성 생리활성물질부(판테놀, 라피노오스, 나이아신아마이드, 녹차수)를 투입하여 45℃로 가온하여 용해시켜 준비하였다. 그리고, 지질안정화부가 들어있는 용해조에 상기 준비한 지질농축부를 투입하여 50℃로 유지하면서 교반기(Agitator)를 사용하여 1,500rpm의 속도로 5분간 교반하고, 여기에 친수성 생리활성물질부를 투입하고 교반기(Agitator)를 사용하여 1,500rpm의 속도로 5분간 교반하여 균일화시켜 과량의 친수성활성성분을 벌키(Bulky)하게 균일화한 제 1 농축상을 준비하였다. 그리고, 상기의 제 1 농축상을 50℃의 온도로 유지하면서, 교반기(Agitator)를 이용하여 저속인 500rpm으로 1시간동안 교반하여 상기의 제 1 농축상을 충분히 수화(Hydration)시켰다. 그리고, 상기의 수화된 제 1 농축상을 50℃에서 고압형 유화기에 투입하여 9,000바의 압력으로 2회 처리하여 과량의 친수성 생리활성물질이 최내상의 수상 및 지질 이중층(Bilayer)사이에 형성된 수상에 위치하면서 나노사이즈로 농축캡슐화하여 제 2 농축상을 형성시켰다. 그리고, 이를 28℃까지 교반기(Agitator)에서 500rpm의 속도로 서서히 교반하면서 냉각시켜 안정화하여 펩타이드 미결합 상태의 마이크로 캡슐을 제조하였다. 제조된 마이크로 캡슐의 직경은 약 0.2 마이크로 미터였다.

[제조예 2-2] 펩타이드 부착 마이크로 캡슐의 제조

제조예 1의 펩타이드를 제조예 2-1에서 제조한 마이크로 캡슐에 마이크로 캡슐에 부착하였다.

펩타이드의 N-말단과 펩타이드 미결합 상태의 마이크로 캡슐 표면의 카르복실기를 연결하여 마이크로 캡슐의 표면에 제조예 1의 펩타이드를 각각 부착시켰다. 구체적으로, 펩타이드 미결합 상태의 마이크로 캡슐을, MES(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid) 버퍼 살린(MES buffered saline, pH 5.5) 상에서 재현탁시키고, EDAC(1-Ethyl-3-(3-Dimethylaminopropyl)carbodiimide) 및 NHS(N-Hydroxysuccinimide)와 함께 약 1시간 반응시켰다. 그 후 마이크로 캡슐을 약 15000rpm에서 한시간 가량 원심분리하여 EDAC와 NHS를 제거하여 펩타이드 미결합 마이크로 캡슐의 표면을 활성화시켰다. 그 후, 약 100ml의 PBS(phosphate-buffered saline)에 마이크로 캡슐을 부유시킨 후, 실온에서 약 0.1g의 서열번호 1의 펩타이드와 마이크로 캡슐을 반응시켰다. 그 후, PBS 버퍼로 세척하여, 미반응 펩타이드는 제거하였다. 서열번호 2 및 3의 펩타이드 역시 상기와 동일한 방법으로, 시약의 투여량을 조절하여, 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐을 제조하였다. 마이크로 캡슐 상에 펩타이드가 부착되었는지 여부는 Kaiser test로 확인하였다. 또한, 주사 전자 현미경(JSM-7100F)이용하여, 마이크로 캡슐 표면 상의 펩타이드의 밀도를 측정하였고, 대략적으로 2 peptides/㎛²의 밀도를 보였다.

서열번호 1의 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐은, 캡슐 1이라고 하고, 서열번호 2의 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐은 캡슐 2라고 하고, 서열번호 3의 펩타이드가 연결된 마이클고 캡슐은 캡슐 3이라고 한다.

[제조예 3] 마이크로 캡슐 상의 펩타이드 밀도 조절

제조예 2와 동일하게 마이크로 캡슐을 제조하되, 펩타이드의 투여량을 조절하여, 마이크로 캡슐 상의 펩타이드 밀도를 조절하였다. 밀도에 따라서, 실험군을 아래와 같이 나누었다.

실험군	캡슐 1-1 캡슐 2-1 캡슐 3-1	캡슐 1-2 캡슐 2-2 캡슐 3-2	캡슐 1-3 캡슐 2-3 캡슐 3-3	캡슐 1-4 캡슐 2-4 캡슐 2-4	캡슐 1-5 캡슐 2-5 캡슐 3-5	캡슐 1-6 캡슐 2-6 캡슐 3-6
펩타이드 밀도	0.05peptides/㎛²	0.1peptides/㎛²	2peptides/㎛²	7peptides/㎛²	10peptides/㎛²	10.5 peptides/㎛²

[실시예]

[실시예 1] 세포 독성 테스트

B16 melanoma cell에 캡슐 1~3 각각을 10μM씩 처리하고, 세포 생존율을 확인하였다. 대조군으로서는 코지산과 알부틴을 처리하였다. 그 결과, 본 발명의 캡슐을 처리한 경우에 세포 생존율이 거의 변화하지 않아, 세포 독성이 없음을 확인할 수 있었다.

[실시예 2] 타겟 세포와의 결합 선택도(selectivity) 테스트

캡슐 1~3 각각이 타겟 세포 외에 다른 세포와도 결합하는지 여부를 확인하기 위하여 다양한 종류의 세포들과의 결합 여부를 확인해보았다. 그 결과, 캡슐 1 내지 3 각각은 각각의 표적 세포 외의 세포와는 거의 결합하지 않음을 확인할 수 있었다.

[실시예 2-1] 캡슐 1

캡슐 1의 세포와의 결합력을 형광면역법을 통해 유세포분석기(Flow Cytometry, FACS)를 이용하여 확인하였다. 사용된 세포는, 섬유아세포(fibroblasts)와 케라틴 세포 (keratinocytes), 림프구 (lymphocyte), 단핵구 (monocytes), 멜라닌 세포 (melanocytes), 수지상 세포 (dendritic cells) 및 피부 뉴런 (skin neuron)이었다. 측정 결과, 캡슐 1과 타겟세포인 섬유아세포의 결합률은 약 75% 를 나타낸 것에 비해 타겟 세포 이외의 세포들과의 결합력은 현저히 낮은 것을 확인하였다(도 1a).

[실시예 2-2] 캡슐 2

캡슐 2에 대해서도 실시예 2-1과 동일한 방법으로 실험을 진행하였다. 그 결과, 캡슐 2는 타겟세포인 멜라닌 세포와는 약 70%의 결합력을 보인 반면에, 다른 세포와의 결합률은 현저히 낮음을 확인할 수 있었다(도 1b).

[실시예 2-3] 캡슐 3

캡슐 3에 대해서도 실시예 2-3과 동일한 방법으로 실험을 진행하였다. 그 결과, 캡슐 3은 타겟 세포인 케라틴 세포와의 결합율은 약 85%인데 반하여, 다른 세포와의 결합률은 현저히 낮음을 확인할 수 있었다(도 1c).

[실시예 3] 펩티드 연결된 마이크로 캡슐의 항노화 효과(캡슐 1-3)

[실시예 3-1] 섬유아세포와 캡슐의 결합력(펩타이드 유무에 따른 결합력 비교)

캡슐 표면에 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐과 연결되지 않은 마이크로 캡슐의 섬유아세포와의 결합력과, 유효성분의 흡수력을 비교하였다.

캡슐 1을 4℃에서 타겟 세포와 함께 1시간 동안 배양하여, 결합 프로세스를 지연시킨 후, 캡슐 표면에 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐과 연결되지 않은 마이크로 캡슐의 섬유아세포와의 결합력을 측정하였다. 캡슐 1의 섬유아세포와의 결합력은 펩타이드가 연결되지 않은 마이크로 캡슐의 결합력에 비해 약 4배 정도 우수하였다.

[실시예 3-2] 콜라겐 및 엘라스틴 생성력 비교

캡슐 표면에 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐을 섬유아세포와 반응시키고, 엘라스틴과 콜라겐 생성량을 관찰하였다.

펩타이드가 연결되지 않은 캡슐을 사용한 경우에는 콜라겐 생성량이 미미한 반면, 펩타이드가 연결된 캡슐 1을 사용한 경우에는, 펩타이드가 연결되지 않은 캡슐에 비하여 콜라겐 타입 1과 3의 생성량이 약 1.7배 이상 증가하였다(도 2a, 도 2b).

엘라스틴 생성량의 경우, 캡슐을 반응시킨 후 7일 경과시에, 펩타이드 결합된 캡슐1이 펩타이드 연결되지 않은 캡슐을 사용한 경우에 비하여 최대 9배 이상의 엘라스틴 생성량을 보였다(도 2c).

[실시예 3-3] 피부 주름 개선 패널 테스트

캡슐 1이 총 중량 대비 30wt%로 포함된 앰플을 제조하여, 피부 질환이 없는 35세~65세의 여성 21명 각각에 대하여 상기 앰플을 하루 2회씩 얼굴 전면에 고르게, 28일 동안 바르고, 눈가 주름 개선 정도를 확인하였다. 그 결과, 대체적으로 약 10%의 눈가 주름 개선 효과를 확인할 수 있었다(도 3).

[실시예 4] 펩티드 연결된 마이크로 캡슐의 미백 효과(캡슐 2-3)

[실시예 4-1] 멜라닌 세포와 알파-MSH의 결합 방해능

캡슐 표면에 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐(캡슐 2)과 연결되지 않은 마이크로 캡슐을 10uM씩 처리하고, 멜라닌 세포와 알파-멜라닌세포 자극 호르몬(MSH) 간의 결합력을 측정하였다. 그 결과, 캡슐 2를 사용한 경우에, 멜라닌 세포와 알파-MSH의 결합력이 95% 이상 감소함을 알 수 있었다(도 4a).

[실시예 4-2] 멜라닌 합성 저해능

캡슐 표면에 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐과 연결되지 않은 마이크로 캡슐을 10uM씩 처리하고, 멜라닌의 합성량을 비교하였다. 그 결과, 캡슐 2를 투여한 경우에, 멜라닌 세포로부터의 멜라닌의 생성량이 크게 감소함을 알 수 있었다(도 4b).

[실시예 4-3] 피부 미백 효과 패널 테스트

피부 질환이 없는 35~55세의 여성 21명에 대해서, 캡슐 2가 15% 포함된 토너를 얼굴 전면에 고르게 하루 2회씩 14일간 피부에 도포하고, 미백 효과를 확인하였다. 그 결과, 캡슐 2를 포함하는 토너를 바른 경우, 현저히 개선된 미백 효과를 확인할 수 있었다(도 5).

[실시예 5] 펩티드 연결된 마이크로 캡슐의 피부 장벽 개선 효과(캡슐 3-3)

[실시예 5-1] 케라틴 1, 및 케라틴 5 및 발현 증진 효과

펩티드가 연결된 캡슐 3의 피부 장벽 개선 효과를 알아보기 위하여, 케라틴의 발현증진 효과를 알아보았다. 캡슐 표면에 펩타이드가 연결된 마이크로 캡슐과 연결되지 않은 마이크로 캡슐을 10μM씩 처리하고, 상기 인자들의 발현 정도를 확인하였다. 그 결과, 캡슐 3을 사용한 경우는, 펩타이드가 연결되지 않은 캡슐을 사용한 경우에 비하여 케라틴 1, 및 케라틴 5의 발현양이 2배 정도 높았다(차례대로 도 6a, 6b).

[실시예 5-2] 필라그린 합성 증진 효과

실시예 5-1과 동일한 방법으로 캡슐을 처리하고 필라그린 합성 효과를 확인하였다.그 결과, 캡슐 3을 사용한 경우, 펩타이드가 연결되지 않은 캡슐을 사용한 경우와 비교하여, 약 5배의 필라그린 발현양을 확인할 수 있었다(도 6c).

[실시예 6] 피부 장벽 강화 효과 패널 테스트

피부 질환이 없는 35~55세의 여성 20명에 대해서, 캡슐 3가 20% 포함된 영양크림을 얼굴 전면에 고르게 하루 2회씩 14일간 피부에 도포하고, 피부 진피치밀도와 피부두께를 확인하였다. 그 결과, 캡슐 3을 포함하는 영양크림을 바른 경우, 진피치밀도와 피부 두께가 현저히 개선되어 피부 장벽 개선 효과를 확인할 수 있었다(도 7).

[실시예 7] 펩타이드의 밀도에 따른 효과 차이

표 2에 기재되어 있는 실험군들에 대하여, 실시예 3내지 6의 실험을 동일하게 하였다. 캡슐 1-3, 2-3, 3-3을 포함할 경우(밀도가 2peptides/㎛²일 경우)의 효과를 10이라하고, 각 실험군의 결과는 캡슐 1-3, 2-3, 3-3에 대한 상대적인 값으로 표시하였다.

표 3은 실시예 3의 실험에 대응된 실험 결과 값을 기록한 것이고, 표 4는 실시예 4, 표 5는 실시예 6에 대응된 실험 결과값을 기록한 것이다.

실험군	캡슐 1-1	캡슐 1-2	캡슐 1-3	캡슐 1-4	캡슐 1-5	캡슐 1-6	펩타이드 미연결 캡슐
섬유아세포와의 결합력	2	7	10	9.5	7.5	3.5	1
콜라겐 생성	1.5	7.5	10	9	7	3.5	1
엘라스틴 생성	2.5	8	10	9	7	3.5	1
피부 주름 개선 및 탄력 개선	1.5	6.5	10	9	8	3	1

실험군	캡슐 2-1	캡슐 2-2	캡슐 2-3	캡슐 2-4	캡슐 2-5	캡슐 2-6	펩타이드 미연결 캡슐
멜라닌 세포와 알파-MSH의 결합 방해능	3	7.5	10	10	7	3	1
멜라닌 합성 저해능	2	8	10	9	7.5	3.5	1
피부 미백 효과	2.5	8.5	10	9	7	3	1

실험군	캡슐 3-1	캡슐 3-2	캡슐 3-3	캡슐 3-4	캡슐 3-5	캡슐 3-6	펩타이드 미연결 캡슐
케라틴 발현	3.5	6.5	10	10	7.5	3	1
필라그린 합성	2	5	10	9.5	7	2.5	1
피부 장벽 개선	3.5	6.5	10	8	7.5	2	1

그 결과, 펩타이드의 밀도가 0.1~10peptides/㎛²범위를 벗어날 경우, 피부 상태 증진 효과가 미미함을 알 수 있었다.

[제형예]

[제형예 1] 토너(브라이트닝용)

성분		함량(중량%)
캡슐 내 유효성분	하이드롤라이즈드루핀프로테인	1.5
	피키아발효용해여과물	1.5
	용과추출물	12.0
	아미노산류(글루탐산, 글리신, 히스티딘, 리신, 이소루신, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트립토판, 티로신)	0.0015
기타 성분	수용성 보습제	20.0
	나이아신아마이드	2.0
	비피다발효용해물	3.0
	마이크로 에멀젼 (하이드로제네이티드레시틴, 세라마이드엔피, 토코페릴아세테이트, 콜레스테롤, 카프릴릭/카프릭트리슬리세라이드, 녹차수, 폴리올)	5.0
	바실꽃/잎추출물, 사과수, 어성초추출물, 캐모마일꽃추출물, 마시멜로잎/뿌리추출물, 라벤더꽃/잎/줄기추출물, 로즈마리추출물, 회향잎추출물의 혼합물	10.0
	녹차수 및 기타 안정화제	TO 100

[제형예 2] 앰플(노화개선용)

성분		함량(중량%)
캡슐 내 유효성분	올리고펩타이드-1	0.001
	하이드롤라이즈드루핀프로테인	3.0
	피키아발효용해여과물	3.0
	서모스노플레이크비늘줄기추출물	26.0
	아미노산류(알라닌, 리신, 세린, 트레오닌)	0.003
기타 성분	수용성 보습제	25.0
	팔미토일펜타펩타이드-4	0.001
	비사볼올	0.5
	나이아신아마이드	2.0
	아데노신	0.04
	카르노신	0.5
	데이지꽃추출물	1.0
	콜레스테릭 액정 (디하이드로콜레스테릴부티레이트 & 디하이드로콜레스테릴올리에이트 & 콜레스테릴부티레이트 & 피토스테릴올리에이트)	1.0
	녹차수 및 기타 안정화제	TO 100

[제형예 3] 세럼(노화개선용)

성분		함량(중량%)
캡슐 내 유효성분	올리고펩타이드-1	0.001
	하이드롤라이즈드루핀프로테인	2.0
	피키아발효용해여과물	2.0
	서모스노플레이크비늘줄기추출물	16.0
	아미노산류(알라닌, 리신, 세린, 트레오닌)	0.002
기타 성분	하이드로제네이티드레시틴	4.0
	유용성 에몰리언트	20.0
	수용성 보습제	10.0
	토코페릴아세테이트	1.0
	아데노신	0.04
	바실꽃/잎추출물 & 사과수 & 어성초추출물 & 캐모마일꽃추출물 & 마시멜로잎/뿌리추출물 & 라벤더꽃/잎/줄기추출물 & 로즈마리추출물 & 회향잎추출물 혼합물	10.0
	팔미토일펜타펩타이드-4	0.001
	녹차수 및 기타 안정화제	TO 100

[제형예 4] 아이크림(노화개선용)

성분		함량(중량%)
캡슐 내 유효성분	올리고펩타이드-1	0.001
	하이드롤라이즈드루핀프로테인	2.0
	피키아발효용해여과물	2.0
	서모스노플레이크비늘줄기추출물	16.0
	아미노산류(알라닌, 리신, 세린, 트레오닌)	0.002
기타 성분	유용성 에몰리언트	25
	수용성 보습제	15
	나이아신아마이드	2.0
	아데노신	0.04
	소듐하이알루로네이트	0.1
	팔미토일펜타펩타이드-4	0.001
	토코페릴아세테이트	0.2
	녹차수 및 기타 안정화제	TO 100

[제형예 5] 로션(탄력용)

성분		함량(중량%)
캡슐 내 유효성분	하이드롤라이즈드루핀프로테인	1.0
	피키아발효용해여과물	1.0
	수선화비늘줄기추출물	8.0
	아미노산류(알라닌, 아스파르트산, 글리신, 세린, 프롤린)	0.001
기타 성분	유용성 에몰리언트	15.0
	수용성 보습제	13.0
	토코페릴아세테이트	0.5
	알로에베라잎 추출물	5.0
	녹차수 및 기타안정화제	TO 100

[제형예 6] 영양크림(탄력용)

성분		함량(중량%)
캡슐 내 유효성분	하이드롤라이즈드루핀프로테인	2.0
	피키아발효용해여과물	2.0
	수선화비늘줄기추출물	16.0
	아미노산류(알라닌, 아스파르트산, 글리신, 세린, 프롤린)	0.002
기타 성분	유용성 에몰리언트	20.0
	수용성 보습제	30.0
	팔미토일펜타펩타이드-4	0.001
	비피다발효용해물	5.0
	아데노신	0.04
	바실꽃/잎추출물 & 사과수 & 어성초추출물 & 캐모마일꽃추출물 & 마시멜로잎/뿌리추출물 & 라벤더꽃/잎/줄기추출물 & 로즈마리추출물 & 회향잎추출물 혼합물	10.0
	녹차수 및 기타안정화제	TO 100

<110> KOLMAR KOREA <120> PEPTIDES HAVING CAPACITY OF BINDING TO CELL RECEPTOR AND COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE SAME <130> PF170257 <150> KR 10-2017-0107511 <151> 2017-08-24 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide of binding to fibroblast <400> 1 Ala Lys Ser Thr 1 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide of binding to fibroblast <400> 2 Glu Gly His Lys Ile Phe Pro Ser Trp Tyr 1 5 10 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide of binding to keratinocytes <400> 3 Ala Asp Gly Ser Pro 1 5

Claims

세포 수용체 결합능이 있는 펩티드로서,
상기 펩티드는, 서열번호 2의 서열로 구성되는, 펩티드.
제1항에 있어서,
세포는, 멜라닌 세포(melanocytes) 를 포함하는, 펩티드.
제1항에 있어서,
상기 세포 수용체는,
멜라노코르틴 수용체(melanocortin receptor)를 포함하는, 펩티드.
제3항에 있어서,
상기 멜라노코르틴 수용체는, 멜라노코르틴1 수용체(melanocortin 1 receptor, MC1R)인, 펩티드.
제1항의 펩티드가 표면 상에 연결된 마이크로 캡슐.
제5항에 있어서,
상기 펩티드는, 마이크로 캡슐의 총 단면적을 기준으로, 0.1~10 peptides/㎛²의 밀도로 포함되는, 마이크로 캡슐.
제5항에 있어서,
상기 마이크로 캡슐은 캡슐 내 봉입된 유효성분을 더 포함하고,
상기 유효성분은, 아미노산류; 식물 유래 단백질 또는 그 가수분해물; 효모 발효물, 그 용해물 또는 그 여과물; 및 식물 추출물 중 하나 이상을 포함하는, 마이크로 캡슐.
제7항에 있어서,
상기 식물 유래 단백질은 루핀 단백질을 포함하고,
상기 효모는 피키아 페스토리스(Pichia pastoris)를 포함하는, 마이크로 캡슐.
제7항에 있어서,
상기 아미노산류는, 유효성분의 총 중량을 기준으로 0.00001~0.1 중량%로 포함될 수 있고,
상기 식물 유래 단백질 또는 그 가수물, 효모 발효물, 그 용해물 또는 그 여과물,및 식물 추출물 각각은, 유효성분의 총 중량을 기준으로, 각각 0.0001~30중량%로 포함되는, 마이크로 캡슐.
제5항 내지 제9항 중 어느 한 항의 마이크로 캡슐을 포함하는, 화장료 조성물.
제10항에 있어서,
상기 조성물은, 미백용인, 화장료 조성물.