RU2714403C1 - Способ получения корневой культуры in vitro potentilla alba l. - продуцента флавоноидов - Google Patents
Способ получения корневой культуры in vitro potentilla alba l. - продуцента флавоноидов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2714403C1 RU2714403C1 RU2019108252A RU2019108252A RU2714403C1 RU 2714403 C1 RU2714403 C1 RU 2714403C1 RU 2019108252 A RU2019108252 A RU 2019108252A RU 2019108252 A RU2019108252 A RU 2019108252A RU 2714403 C1 RU2714403 C1 RU 2714403C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- roots
- medium
- producer
- vitro
- hours
- Prior art date
Links
- 241000210050 Potentilla alba Species 0.000 title claims abstract description 24
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 title claims abstract description 15
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 title claims abstract description 15
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 36
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 10
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 41
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- YVZQFSNXOYLGMJ-UHFFFAOYSA-L chloro(2-hydroxyethyl)mercury;1-hexadecylpyridin-1-ium;bromide Chemical compound [Br-].OCC[Hg]Cl.CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YVZQFSNXOYLGMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940088530 claforan Drugs 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 claims 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims 2
- GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N cefotaxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)/C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract 2
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 11
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M cefotaxime sodium Chemical compound [Na+].N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002515 isoflavone derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 4
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 4
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 4
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 4
- 241001426527 Rhaponticum Species 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 3
- 150000002061 ecdysteroids Chemical group 0.000 description 3
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 240000000103 Potentilla erecta Species 0.000 description 2
- 235000016551 Potentilla erecta Nutrition 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 2
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 description 2
- 241001533869 Silene linicola Species 0.000 description 2
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000379547 Trifolium medium Species 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- HKQYGTCOTHHOMP-UHFFFAOYSA-N formononetin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O HKQYGTCOTHHOMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- -1 iridoids Chemical class 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 2
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 2
- 235000013526 red clover Nutrition 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 2
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 2
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 2
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 241000214032 Hedysarum Species 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MGJLSBDCWOSMHL-WFMNFSIZSA-N Ononin Natural products O(C)c1ccc(C=2C(=O)c3c(OC=2)cc(O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O2)cc3)cc1 MGJLSBDCWOSMHL-WFMNFSIZSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001092489 Potentilla Species 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- RIKPNWPEMPODJD-UHFFFAOYSA-N formononetin Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC=CC=C2C1=O RIKPNWPEMPODJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- MGJLSBDCWOSMHL-UHFFFAOYSA-N ononoside Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)=CC=C2C1=O MGJLSBDCWOSMHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229930195732 phytohormone Natural products 0.000 description 1
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 description 1
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 description 1
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000006016 thyroid dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения корневой культуры in vitro Potentilla alba L. - продуцента флавоноидов, характеризующийся тем, что семена Potentilla alba L. обезжиривают, просушивают, стерилизуют, тщательно промывают стерильной дистиллированной водой, помещают на среду AS (Стрита), проращивают в темноте, переносят в отдельные емкости со средой того же состава и помещают на свет до образования молодых листьев (эксплантов растений), отделяют от корней надземную часть проростков, разрезают листья, подсемядольное колено и гипокотиль на сегменты размером 1,0-1,5 см, накалывают иглой инсулинового шприца вдоль жилки по листу, вдоль эпикотиля и гипокотиля, до сосудистой системы растений, дикий (не модифицированный) штамм Agrobacterium rhizogenes (А 4) наращивают на питательной среде YEV в течение 48 часов в темноте при температуре 26°С, либо при температуре 32°С в течение 24 часов на качалке с круговым движением, подготовленные экспланты растений переносят на среду YEV с нарощенными агробактириями, выдерживают в магнитной ванночке 10-100 секунд и инкубируют 12-24 ч, отмывают стерильной питательной средой MS 
N, переносят на питательную агаризованную среду Мурасиге и Скуга MS
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой и фармацевтической промышленности.
В последние годы усиливается интерес к лекарственным растениям с целью создания лечебных средств и биологически активных добавок нового поколения. Они направлены не только на поддержание общего состояния здоровья, но для целевого использования в лечении самых тяжелых заболеваний: сердечно-сосудистой системы, онкологии, сахарного диабета и т.д.
Перспективным сырьем для фармацевтической промышленности является такое лекарственное растение, как лапчатка белая (Potentilla alba L., семейство Розоцветные - Rosaceae). Из литературных источников известно, что подземная часть растения (корневище с корнями) содержит углеводы (крахмал), иридоиды, сапонины, фенолкарбоновые кислоты, флавоноиды (кверцетин), дубильные вещества (до 17%). Надземная часть растения содержит иридоиды, сапонины, фенолкарбоновые кислоты, флавоноиды (рутин), дубильные вещества (до 6%). В листьях обнаружены фенолкарбоновые кислоты и их производные, флавоноиды (Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова. - СПб.; М., 1991. - Т. 1. - 736 с.). В традиционной медицине лапчатку белую используют для лечения различных заболеваний, в частности, связанных с дисфункцией щитовидной железы.
Природная сырьевая база лапчатки белой крайне незначительна. Велика опасность уничтожения всех имеющихся запасов лапчатки белой в природе, если не позаботиться заранее об их восстановлении (Накопление биологически активных веществ в подземных частях лапчатки белой (Potentilla alba L.) в зависимости от срока культивирования / В.М. Косман и др. // Химия растительного сырья. - 2013. - №2. - С. 139-146.).
Крупных плантаций лапчатки белой пока не существует. Целесообразно размножать лапчатку вегетативным путем. В условиях культуры растения пригодны для заготовки на второй-третий год. Объемы биомассы культивируемой лапчатки белой превышает таковой в природных условиях за это же время в 4-5 раз уже на втором году жизни растения после посадки.
Новым решением является использование в качестве альтернативного источника возобновляемого экологически чистого сырья культур клеток и органов (бородатых корней, hairy roots) высших растений, относящихся к классу Dicotyledones.
Из уровня техники известен способ генетической трансформации растений селекционно-ценных образцов клевера лугового (патент РФ №2420060, опубл. 10.06.2011), согласно которому образцы морфогенной ткани с побегами клевера лугового разрезают на части размером 3-5 мм, которые помещают на среду Гамборга В5 с 2 мг/л 6-бензиламинопурина. Верхнюю поверхность среза эксплантов инокулируют агробактерией. Кокультивирование (совместное культивирование клеток in vitro) осуществляют в течение 48 часов, после чего экспланты отмывают от остатка агробактерий на среде Гамборга В5 того же состава с добавлением 50 мг/л канамицина и 500 мг/л цефотаксима. Регенерацию растений с корнями производят на среде того же состава, но без цефотаксима при отсутствии проявления агробактериальной инфекции.
В качестве недостатков известного изобретения следует признать необходимость использования дорогостоящих регуляторов роста для стабильного роста культуры in vitro.
Известна культура корня Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - продуцент изофлавонов (патент РФ №2360964, опубл. 10.07.2009), обладающая всеми признаками pRi Т-ДНК трансформированных корней, а именно интенсивным ростом на питательных средах простого состава, не содержащих фитогормоны, плагиотропным ветвлением корней, а также генетической и биохимической стабильностью, способностью к синтезу видоспецифичных изофлавонов. Химический анализ вторичных метаболитов подтверждает, что он сохраняет способность к синтезу изофлавонов - ононина, гликозида тексазина, малонилононина, формононетина, характерных для корней целого растения.
Недостатком известного способа является низкий уровень содержания целевого продукта (изофлавонов).
Описан процесс агробактериальной трансформации корневой системы Rhaponticum carthamoides при инокулировании стерильных проростков штаммами Agrobacterium rhizogenes. У Rhaponticum carthamoides через месяц после заражения наблюдается образование корней или опухолей, из которых начинается спонтанная регенерация модифицированных растений. За 4 недели масса бородчатых корней увеличивается в 4-6 раз. Состав экдистероидов, в сумме составляющая 0,02-0,03%, различен в сравнении с корневищами природных растений (Получение культуры трансформированных корней Rhaponticum carthamoides / И.В. Орлова и др. Физиология растений. - 1998. - Т. 45. - №3. - С. 397-400).
Наиболее близким к заявляемому способу является способ получения культуры изолированных корней из растения, относящегося к классу Dicotyledones - Silene linicola K 1601 - продуцента экдистероидов (патент РФ №2605912, опубл. 27.12.2016), предусматривающий бактериальную трансформацию экспланта корня ювенильного растения Silene linicola агробактериальным штаммом R-1601 A. rhizogenes. Трансформированные корни от экспланта отделяют и культивируют. Изолированные корни культивируют первые два пассажа на среде Гамборга с добавлением 250 мг/л цефотаксима, последующие пассажи выращивают на среде Гамборга с добавлением 500 мг/л гидролизата казеина.
Недостатком данного способа является медленный прирост биомассы, незначительный уровень содержания целевого продукта (в данном случае - экдистероидов) в конечном продукте.
Техническая задача, решаемая использованием разработанного способа, состоит в получении биохимически стабильной культуры изолированных корней Potentilla alba L. (класс Dicotyledones).
Технический результат, достигаемый при реализации разработанного способа, состоит в обеспечении постоянного высокого темпа роста изолированных корней Potentilla alba L. на безгормональных питательных средах при высоком уровне биосинтеза флавоноидов.
В предлагаемом способе технический результат достигается тем, что осуществляют стерилизацию и проращивание семян Potentilla alba L. на питательной среде AS (Стрита), культивирование агробактериального штамма A. rhizogenes (А 4) на питательной среде YEV, инкубацию эксплантов растения в суспензии агробактерии, отделение трансформированных корней от экспланта и их последующее выращивание на безгормональной питательной среде Гамборга В-5.
Способ осуществляют следующим образом.
На первом этапе семена Potentilla alba L. обезжиривают, погружая их на несколько минут в 96%-й этиловый спирт, и просушивают на фильтровальной бумаге либо в токе воздуха в ламинарном боксе. Стерилизацию семян проводят в стерильном ламинарном боксе. В качестве стерилизатора используют диоцид.
По окончании стерилизации семена тщательно промывают стерильной дистиллированной водой (4-5 промываний), помещают в чашки Петри на среду AS (Стрита) и проращивают в темноте при температуре +26°С. Проклюнувшиеся семена переносят в отдельные пробирки или специальные стеклянные банки со средой того же состава и помещают на свет до образования молодых листьев (эксплантов растений).
Второй этап включает подготовку питательных сред для культивирования агробактерий и растительного материала.
Для инокуляции эксплантов растений используют дикий (не модифицированный) штамм Agrobacterium rhizogenes (А 4), который наращивают на питательной среде YEV течение 48 часов в темноте при температуре 26°С (либо при температуре 32°С в течение 24 часов) на качалке с круговым движением (амплитуда 5-10 см, скорость вращения 90 об./мин.).
Затем готовят питательную среду Мурасиге и Скуга MS 
N, которую разливают в 2 колбы по 500 мл. Одну колбу оставляют без введения агара, во вторую вводят агар. Обе колбы автоклавируют 20 минут при 2 атм. Слегка остужают до температуры 60°С и разливают питательную среду с агаром по чашкам Петри.
На третьем этапе помещают часть выросших микроорганизмов (А. Rhizogenes (А 4)) в стерильную воду (объем 100 мл). Подготавливают биоматериал: после появления пары настоящих листьев отделяют от корней надземную часть проростков; разрезают листья, подсемядольное колено и гипокотиль на сегменты размером 1,0-1,5 см. После этого осторожно накалывают иглой инсулинового шприца воль жилки по листу, вдоль эпикотиля и гипокотиля, стараясь достать иглой до центра, где проходит сосудистая система растений.
Затем переносят экспланты в среду для бактерий YEV и выдерживают в магнитной ванночке 10-100 секунд для более эффективной трансформации. Инкубируют экспланты в течение 48 часов, либо 24 часов, либо 12 часов. После 48-часовой (либо 24-часовой, либо 12 часовой) инкубации эксплантов с агробактерией растительный материал продолжительно отмывают стерильной питательной средой MS N (продолжительность инкубации эксплантов выбирают в зависимости от требуемого количества биологически активных веществ (вторичных метаболитов) фенольной природы в корневых культурах). Переносят отмытые экспланты на агаризованную среду того же состава, содержащую (250 мг/0,5 л) клафорана для элиминирования А. rhizogenes. Чашки Петри с эксплантами выставляют в «световую» комнату», в которой они находятся до образования трансформированных корней.
После достижения определенных размеров образовавшиеся корни пересаживают на свежую питательную среду Гамборга В-5 без гормонов для полного элиминирования бактерии A. Rhizogenes (А 4). Корни доращивают в «темновой» комнате (температура 26°С, влажность 60-70%).
При первой пересадке образовавшихся корней лучше сохранять часть ювенильного растения, из которой был инициирован их рост. Это обеспечит сохранение хорошей ростовой активности корневого инокулята. После 3-5 последующих пересадок непосредственно корневых эксплантов на агаризованную среду и достижения полной асептичности культуры корни переносят в жидкую питательную среду того же состава.
Полученные pRi Т-ДНК трансформированные корни, так называемые hairy roots, выращивают в условиях качания (90 об./мин) в темноте при температуре 26°С.
Пересадку полученных корней проводят через каждые 6-8 недель, используя для этого корневую культуру массой 500-750 мг, которую надо помещать в колбы с 50 мл жидкой питательной среды Гамборга В-5 (без гормонов).
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
Семена Potentilla alba L. обезжиривают, погружая их на несколько минут в 96%-й этиловый спирт, и просушивают на фильтровальной бумаге либо в токе воздуха в ламинарном боксе. Стерилизацию семян проводят в стерильном ламинарном боксе. В качестве стерилизатора используют диоцид: обезжиренные семена помещают в стерильную колбу с раствором диоцида на 15-20 минут. Для лучшего соприкосновения семян со стерилизующим веществом колбу периодически встряхивают.
По окончании стерилизации семена тщательно промывают стерильной дистиллированной водой (4-5 промываний), помещают в чашки Петри на среду AS (Стрита) и проращивают в темноте при температуре +26°С. Проклюнувшиеся семена переносят в отдельные пробирки или специальные стеклянные банки со средой того же состава и помещают на свет до образования молодых листьев (эксплантов растений).
Для инокуляции эксплантов проростков используют дикий (не модифицированный) штамм Agrobacterium rhizogenes (А 4), который наращивают на питательной среде YEV течение 48 часов в темноте при температуре 26°С (либо при температуре 32°С в течение 24 часов) на качалке с круговым движением (амплитуда 5-10 см, скорость вращения 90 об./мин.). Состав питательной среды для культивирования A. Rhizogenes (А 4) (1000 мл): мясной бульон + пептон - 5 г; дрожжевой экстракт - 1 г; сахароза - 6,6 г; MgSO4⋅7H2O - 3 г.
Затем готовят питательную среду Мурасиге и Скуга MS N. Состав среды MS N (1000 мл): сахароза - 20 г; макросоли по MS N - 50 мл; витамины по MS - 1 мл; микроэлементы по MS - 1 мл; Fe-хелат - 5 мл; мезоинозит - 5 мл; агар-агар - 7 г, рН 5,6-5,8. Состав солей (1000 мл): NH4NO3 - 16,5 г; KNO3 - 19,0 г; CaCl2 - 13,2 г; MgSO4⋅7H2O - 7,4 г; KH2PO4 - 3,4 г. Состав микроэлементов (1000 мл): MnSO4⋅4H2O - 22,3 г; Н3ВО3 - 6,2 г; ZnSO4⋅7H2O - 11,5 г; Na2MoO4⋅2H2O - 0,25 г; CuSO4⋅5H2O - 0,025 г; CoCl2⋅6H2O - 0,025 г; KI - 0,825 г. Состав витаминов (1000 мл): тиамин - 0,1 г; пиридоксин - 0,1 г; никотиновая кислота - 0,5 г. Питательную среду MS N разливают в 2 колбы по 500 мл. Одну колбу оставляют без введения агара, во вторую вводят агар. Обе колбы автоклавируют 20 минут при 2 атм. Слегка остужают и разливают питательную среду с агаром по чашкам Петри.
На следующем этапе помещают часть выросших микроорганизмов (А. Rhizogenes (А 4)) в стерильную воду (объем 100 мл). Подготавливают биоматериал: после появления пары настоящих листьев отделяют от корней надземную часть проростков; разрезают листья, подсемядольное колено и гипокотиль на сегменты размером 1,0-1,5 см. После этого осторожно накалывают иглой инсулинового шприца воль жилки по листу, вдоль эпикотиля и гипокотиля, стараясь достать иглой до центра, где проходит сосудистая система растений.
Затем переносят экспланты в среду для бактерий YEV и выдерживают в магнитной ванночке 10-100 секунд для более эффективной трансформации. Инкубируют экспланты в течение 48 часов. После инкубации эксплантов с агробактерией растительный материал продолжительно отмывают стерильной питательной средой MS N. Переносят отмытые экспланты на агаризованную среду того же состава, содержащую (250 мг/0,5 л) клафорана для элиминирования A. Rhizogenes (А 4). Чашки Петри с эксплантами выставляют в «световую» комнату», в которой они находятся до образования трансформированных корней.
После достижения определенных размеров образовавшиеся корни пересаживают на свежую питательную среду Гамборга В-5 без гормонов для полного элиминирования бактерии A. Rhizogenes (А 4). Состав питательной среды Гамборга В-5 (1000 мл): сахароза - 20 г; макросоли по Гамборгу В-5 - 100 мл; витамины по Гамборгу В-5 - 10 мл; микроэлементы по Гамборгу В-5 - 1 мл; Fe-хелат - 5 мл. Состав макросолей (1000 мл): NaH2PO4⋅2H2O - 1,69 г; KNO3 - 25 г; (NH4)2SO4 - 1,34 г; MgSO4⋅7H2O - 2,5 г; CaCl2 - 1,5 г. Состав микросолей (1000 мл): H3BO3 - 3 г; ZnSO4⋅7H2O - 2 г; Na2MoO4⋅2H2O - 0,25 г; CoCl2⋅6H2O - 0,25 г; CuSO4⋅5H2O - 0,025 г; KI - 0,75 г. Состав витаминов (100 мл): тиамин - 1 г; пиридоксин - 0,1 г; никотиновая кислота - 0,1 г; мезоинозит - 10 г. Корни доращивают в «темновой» комнате (температура 26°С, влажность 60-70%).
При первой пересадке образовавшихся корней лучше сохранять часть ювенильного растения, из которой был инициирован их рост. Это обеспечит сохранение хорошей ростовой активности корневого инокулята. После 3-5 последующих пересадок непосредственно корневых эксплантов на агаризованную среду и достижения полной асептичности культуры корни переносят в жидкую питательную среду того же состава.
Полученные pRi Т-ДНК трансформированные корни, так называемые hairy roots, выращивают в условиях качания (90 об/мин) в темноте при температуре 26°С.
Пересадку полученных корней проводят через каждые 6-8 недель, используя для этого корневую культуру массой 500-750 мг, которую надо помещать в колбы с 50 мл жидкой питательной среды Гамборга В-5 (без гормонов).
Пример 2
Аналогичен примеру 1, но совместное инкубирование эксплантов с агробактерией осуществляют в течение 24 часов.
Пример 3
Аналогичен примеру 1, но совместное инкубирование эксплантов с агробактерией осуществляют в течение 12 часов.
Показано, что трансформированные корни имеют большие размеры и имеют другой оттенок, что может быть вызвано системой питания в регулируемом режиме питательных сред и формированием вторичных метаболитов в другом составе и количестве, нежели в природной среде (фиг. 1).
Показано, что в результате реализации способа культура изолированных корней Potentilla alba L. растет стабильно, образует массу переплетенных корней (фиг. 2).
Из фиг. 3 следует, что индекс роста при продолжительности культивирования 12 ч составляет 28,7; при продолжительности культивирования 24 ч - 36,7; при продолжительности культивирования 48 ч - 36,0.
В полученных корневых культурах определяли содержание биологически активных веществ (вторичных метаболитов) фенольной природы. Результаты определения содержания флавоноидов и дубильных веществ в корневых культурах Potentilla alba L. представлены в таблице 1.
Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что содержание флавоноидов в полученных согласно настоящему изобретению корневых культурах превышает данное значение для корневища интактного растения в 10,0 раз, а содержание дубильных веществ - в 1,5 раза.
Таким образом, заявленный способ получения биохимически стабильной культуры изолированных корней растений класса двудольные позволяет обеспечить постоянный высокий темп роста изолированных корней на безгормональных питательных средах и высокий уровень биосинтеза флавоноидов.
Claims (5)
1. Способ получения корневой культуры in vitro Potentilla alba L. - продуцента флавоноидов, характеризующийся тем, что семена Potentilla alba L. обезжиривают, просушивают, стерилизуют, тщательно промывают стерильной дистиллированной водой, помещают на среду AS (Стрита), проращивают в темноте, переносят в отдельные емкости со средой того же состава и помещают на свет до образования молодых листьев (эксплантов растений), отделяют от корней надземную часть проростков, разрезают листья, подсемядольное колено и гипокотиль на сегменты размером 1,0-1,5 см, накалывают иглой инсулинового шприца вдоль жилки по листу, вдоль эпикотиля и гипокотиля, до сосудистой системы растений, дикий (не модифицированный) штамм Agrobacterium rhizogenes (А 4) наращивают на питательной среде YEV в течение 48 часов в темноте при температуре 26°С, либо при температуре 32°С в течение 24 часов на качалке с круговым движением, подготовленные экспланты растений переносят на среду YEV с нарощенными агробактериями, выдерживают в магнитной ванночке 10-100 секунд и инкубируют 12-24 ч, отмывают стерильной питательной средой MS 
N, переносят на питательную агаризованную среду Мурасиге и Скуга MS 
N с добавлением клафорана (250 мг/0,5 л) для элиминирования А. Rhizogenes (А 4), выставляют в «световую» комнату до образования трансформированных корней, корни пересаживают на свежую питательную среду Гамборга В-5 без гормонов для полного элиминирования бактерий А. Rhizogenes (А 4) и доращивают в «темновой» комнате в условиях качания.
2. Способ получения корневой культуры in vitro Potentilla alba L. - продуцента флавоноидов по п. 1, отличающийся тем, что стерилизацию семян проводят в стерильном ламинарном боксе с использованием диоцида.
3. Способ получения корневой культуры in vitro Potentilla alba L. - продуцента флавоноидов по п. 1, отличающийся тем, что питательную агаризованную среду Мурасиге и Скуга MS 
N перед переносом на нее эксплантов растений автоклавируют 20 мин при 2 атм и остужают до 60°С.
4. Способ получения корневой культуры in vitro Potentilla alba L. - продуцента флавоноидов по п. 1, отличающийся тем, что при первой пересадке образовавшихся корней сохраняют часть ювенильного растения, из которой был инициирован их рост, после 3-5 последующих пересадок непосредственно корневых эксплантов на агаризованную среду Мурасиге и Скуга MS 
N и достижения полной асептичности культуры корни переносят в жидкую питательную среду того же состава.
5. Способ получения корневой культуры in vitro Potentilla alba L. - продуцента флавоноидов по п. 1, отличающийся тем, что пересадку полученных корней проводят через каждые 6-8 недель, используя для этого корневую культуру массой 500-750 мг, которую помещают в колбы с 50 мл жидкой питательной среды Гамборга В-5 (без гормонов).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019108252A RU2714403C1 (ru) | 2019-03-22 | 2019-03-22 | Способ получения корневой культуры in vitro potentilla alba l. - продуцента флавоноидов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019108252A RU2714403C1 (ru) | 2019-03-22 | 2019-03-22 | Способ получения корневой культуры in vitro potentilla alba l. - продуцента флавоноидов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2714403C1 true RU2714403C1 (ru) | 2020-02-14 |
Family
ID=69625798
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019108252A RU2714403C1 (ru) | 2019-03-22 | 2019-03-22 | Способ получения корневой культуры in vitro potentilla alba l. - продуцента флавоноидов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2714403C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2811024C1 (ru) * | 2023-04-20 | 2024-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр агробиотехнологий Дальнего Востока им. А.К. Чайки" (ФГБНУ "ФНЦ агробиотехнологий Дальнего Востока им. А.К. Чайки") | Способ повышения флавоноид-образующей способности тканевой культуры in vitro гречихи посевной |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2360964C1 (ru) * | 2008-02-07 | 2009-07-10 | Институт Физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской Академии Наук | КУЛЬТУРА КОРНЯ Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - ПРОДУЦЕНТ ИЗОФЛАВОНОВ |
| RU2605912C1 (ru) * | 2016-03-02 | 2016-12-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" (ТГУ, НИ ТГУ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОРНЕЙ Silene linicola К1601 - ПРОДУЦЕНТА ЭКДИСТЕРОИДОВ |
-
2019
- 2019-03-22 RU RU2019108252A patent/RU2714403C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2360964C1 (ru) * | 2008-02-07 | 2009-07-10 | Институт Физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской Академии Наук | КУЛЬТУРА КОРНЯ Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - ПРОДУЦЕНТ ИЗОФЛАВОНОВ |
| RU2605912C1 (ru) * | 2016-03-02 | 2016-12-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" (ТГУ, НИ ТГУ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОРНЕЙ Silene linicola К1601 - ПРОДУЦЕНТА ЭКДИСТЕРОИДОВ |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| TENEA G.N., Manipulation of root biomass and biosynthetic potential of Glycyrrhiza glabra L. plants by Agrobacterium rhizogenes mediated transformation, Roumanian Biotechnological Letteres, vol.13, N5, 2008, p.3922-3932. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2811024C1 (ru) * | 2023-04-20 | 2024-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр агробиотехнологий Дальнего Востока им. А.К. Чайки" (ФГБНУ "ФНЦ агробиотехнологий Дальнего Востока им. А.К. Чайки") | Способ повышения флавоноид-образующей способности тканевой культуры in vitro гречихи посевной |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Endress et al. | Plant cell biotechnology | |
| US8053238B2 (en) | Isolated population of plant single cells and method of preparing the same | |
| RU2398874C2 (ru) | Клеточные клоны камбия, способ их выделения и консервации | |
| CN101130763A (zh) | 银杏愈伤组织或悬浮细胞的快速繁殖方法 | |
| NOUROZI et al. | Influences of various factors on hairy root induction in Agastache foeniculum (Pursh) Kuntze | |
| EP0380692B1 (en) | Plant tissue culture process | |
| US4431738A (en) | Method of plant tissue and cell culture | |
| RU2360964C1 (ru) | КУЛЬТУРА КОРНЯ Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - ПРОДУЦЕНТ ИЗОФЛАВОНОВ | |
| RU2714403C1 (ru) | Способ получения корневой культуры in vitro potentilla alba l. - продуцента флавоноидов | |
| JP3030782B2 (ja) | ポドフィロトキシン類化合物の製造法 | |
| RU2605912C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ИЗОЛИРОВАННЫХ КОРНЕЙ Silene linicola К1601 - ПРОДУЦЕНТА ЭКДИСТЕРОИДОВ | |
| RU2709175C1 (ru) | Способ культивирования каллусной ткани vaccinium myrtillus l. | |
| CN115786231B (zh) | 一种地黄干细胞的分离、分化培养方法 | |
| CN112154919B (zh) | 一种诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养基及方法 | |
| Nobakht et al. | In vitro mass propagation of Typhonium flagelliforme as affected by plant growth regulators | |
| JP2619546B2 (ja) | ポドフィルム属植物の不定胚の調製方法 | |
| EP0233040A2 (en) | Stigma of crocus sativus L. and method for the production thereof | |
| RU2787746C1 (ru) | Способ получения каллусной культуры Hedysarum alpinum L. | |
| RU2762431C1 (ru) | Способ выделения биологически активных веществ антимикробного действия из клеточных культур элеутерококка колючего eleutherococcus senticosus rupr. maxim. | |
| KR19990080163A (ko) | 수퍼옥사이드 디스뮤타제를 대량 생산하는 형질전환된 식물체,그의 제조방법 및 용도 | |
| JP2873023B2 (ja) | ポドフィロトキシン類化合物の製造方法 | |
| US5217892A (en) | Method of plant tissue culture | |
| JP2545359B2 (ja) | 植物培養細胞 | |
| KR19990074043A (ko) | 생물반응기에 의한 팔레노프시스의 우량유묘 제조방법 | |
| Kuan et al. | CULTIVATING CALLUS TISSUES FROM MENTHA× PIPERITA UNDER IN VITRO CONDITIONS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210209 Effective date: 20210209 |