RU2708636C1 - Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных - Google Patents
Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2708636C1 RU2708636C1 RU2019124600A RU2019124600A RU2708636C1 RU 2708636 C1 RU2708636 C1 RU 2708636C1 RU 2019124600 A RU2019124600 A RU 2019124600A RU 2019124600 A RU2019124600 A RU 2019124600A RU 2708636 C1 RU2708636 C1 RU 2708636C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- erythrocyte
- drying medium
- tularemia
- diagnosticums
- diagnosticum
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Раскрыта универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных, используемая также в качестве разводящей жидкости, состоящая из 50 мл полиглюкина с добавлением 1,6 мл 2,0% раствора твин-80, приготовленного в 0,9% растворе натрия хлорида, и 5 мг азида натрия с последующим перемешиваем до полного растворения компонентов при температуре (22±4)°С. Изобретение позволяет упростить постановку реакции за счет использования среды для высушивания в качестве разводящей жидкости, увеличить срок годности эритроцитарного диагностикума с сохранением его первоначальных характеристик после регидратации и расширить температурный диапазон транспортировки потребителям в сравнении с жидкой формой препаратов. 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и в частности, к разработке универсальной среды высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных, используемой также в качестве разводящей жидкости при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).
Метод лиофилизации (сублимации) применяют для производства препаратов, которые нестабильны при изменениях температуры и при длительном хранении. Препараты в лиофилизированной форме становятся более устойчивыми к факторам внешнего воздействия с сохранением первоначальных свойств. Процесс лиофилизации состоит из предварительного замораживания препарата, первичного высушивания, досушивания, укупорки ампул (флаконов) с высушенным препаратом. Для сохранения исходных свойств препаратов в процессе замораживания, лиофильной сушки и последующем хранении используют различные защитные среды (стабилизаторы). Для каждого препарата подбирается индивидуальная среда высушивания, она должна обеспечивать получение качественного сухого материала, иметь структурообразующий эффект, а также позволять проводить постановку РНГА с восстановленным диагностикумом без использования разводящей жидкости с сохранением первоначальных свойств. Качество лиофилизатов можно оценить по следующим основным показателям: характерная структура высушенного материала без признаков микрооттаивания; потеря в массе при высушивании, не превышающая 3%; быстрая растворимость препарата (1-2 мин); исходная вязкость препарата после растворения; рН среды; сохранение активности, специфичности и других свойств препаратов.
В качестве сред высушивания возможно применение желатина, сахарозы, поливинилпирролидона, обеспечивающих мелкопористую, достаточно плотную структуру. В качестве разводящей жидкости при постановке РНГА применяют сыворотку крови животных: нормальную лошадиную сыворотку (НЛС) или нормальную кроличью сыворотку (НКС), растворы неионных поверхностно-активных веществ (ПАВ) и др.
Известен способ сублимационного высушивания диагностикума эритроцитарного туляремийного иммуноглобулинового, осуществляемый с использованием защитной среды, со следующим составом (мас. %): сахароза - 10; бычий сывороточный альбумин - 1; натрий тетраборнокислый - 1; янтарная кислота - 0,3; натрия азид - 0,1; дистиллированная вода - остальное [1]. Полученный диагностикум обладает высокой активностью, специфичностью, стабильностью. Недостатком представленного способа является многокомпонентный состав среды с чувствительностью полученного диагностикума не выше 3,12×106 м.к./мл.
Известен способ получения защитной среды для лиофилизации эритроцитарных диагностикумов, состоящий из получения раствора реополиглюкина 15 мас. % и сахарозы 7,5 мас. % в дистиллированной воде [2]. Полученные диагностикумы обладают высокой активностью, стабильностью. Однако, существенным недостатком применения указанной среды высушивания, не имеющей в составе консерванта при наличии высокого содержания углеводов, может стать невозможность продолжительного хранения препарата после восстановления из-за создания благоприятных условий для микробного пророста. Так же в составе среды отсутствуют необходимые для постановки РНГА растворы неионных ПАВ или сыворотки крови животных.
Наиболее близкой к заявляемой универсальной среде можно считать среду высушивания эритроцитарных диагностикумов, также используемую в качестве разводящей жидкости, полученную из раствора белка куриного яйца в 5%-ном растворе натрия фосфорнокислого трехзамещенного 12-водного (Na3PO4×12H2O) (1:2) с последующим кипячением на водяной бане в течение 10 мин, разведением 1:1000 в дистиллированной воде и добавлением азида натрия до 0,001% [3]. Полученные диагностикумы обладают высокой чувствительностью, стабильностью. Недостатком данной среды высушивания является применение в качестве основного компонента биологического материала, такого как, белок куриного яйца, качество и стандартные показатели которого могут изменяться в зависимости от категории и сорта.
Задачей изобретения является получение универсальной среды высушивания, используемой также в качестве разводящей жидкости для постановки РНГА. Это позволит упростить постановку реакции, увеличить срок годности эритроцитарного диагностикума с сохранением его первоначальных характеристик (специфической активности и высокой чувствительности) после регидратации, и расширить температурный диапазон транспортировки потребителям в сравнении с жидкой формой препаратов, выпускаемых ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора по ТУ 9388-023-01897080-2010, 9388-022-01897080-2010.
Поставленная задача решается приготовлением среды высушивания, представляющей собой раствор, имеющий в составе: полиглюкин, представляющий собой 6% коллоидный раствор полимера декстрана с молекулярной массой 60000±10000, который предохраняет эритроцитарные диагностикумы от разрушения во время замораживания и позволяет получить мелкопористую структуру материала с хорошей растворимостью; неионный ПАВ (раствор твин-80), позволяющий после растворения препарата проводить постановку РНГА с использованием 0,9% раствора натрия хлорида, исключив приготовление разводящей жидкости; азид натрия - дает возможность использовать препарат длительное время после растворения (более 1 мес. - срок наблюдения). Следующим этапом является подготовка препарата к лиофилизации: в осадок отцентрифугированного эритроцитарного диагностикума вводят подготовленный раствор с последующим розливом, замораживанием, сублимационным высушиванием, герметизацией и маркировкой ампул с полученным продуктом.
На заключительном этапе лиофилизаты подвергают контрольным исследованиям для подтверждения соответствия требованиям, заложенным в нормативных документах на готовую продукцию.
Технический результат изобретения заключается в приготовлении среды высушивания диагностикумов эритроцитарных туляремийных, используемой также в качестве разводящей жидкости при постановке реакции, которую готовят следующим образом: к 50 мл полиглюкина (ЛС-001462 от 31.03.2006 г.) добавляют 1,6 мл 2,0% раствора твин-80 (Sigma-Aldrich, США) приготовленного в 0,9% растворе натрия хлорида и 5 мг азида натрия (ГОСТ 84-1420-77), перемешивают до полного растворения компонентов. Затем колбу с раствором выдерживают 15-20 мин при (22±4)°С. При подготовке к лиофилизации диагностикумы эритроцитарные туляремийные, приготовленные в качестве экспериментальных серий в соответствии с утвержденными нормативными документами центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин, образовавшийся осадок ресуспендируют в равном объеме свежеприготовленного раствора среды высушивания при встряхивании 15-20 мин.
Разработанная среда высушивания позволит создать оптимальные условия для предотвращения агрегации эритроцитов, сохранить первоначальные свойства диагностикумов эритроцитарных туляремийных в течение всего срока хранения (не менее 1 года - срок наблюдения 18 мес.), не зависимо от условий транспортировки, и проводить реакцию, после регидратации содержимого ампул с препаратом, в 0,9% растворе натрия хлорида без введения в реакцию разводящей жидкости.
При отработанных параметрах были получены препараты с чувствительностью в РНГА 1×105 м.к./мл для иммуноглобулинового диагностикума и 1:40000 - для антигенного, при отсутствии перекрестных реакций с контрольными гетерологичными штаммами и сыворотками, что полностью удовлетворяет требованиям нормативной документации на эритроцитарные диагностикумы.
Для контроля использовали штаммы из лаборатории «Коллекция патогенных микроорганизмов» (Francisella (F.) tularensis 15 НИИЭГ, F. tularensis F. tularensis 144/713, F. tularensis 319/38, F. tularensis 122, Brucella abortus 19 BA, Yersinia enterocolitica 383, Salmonella typhymurium 9640, Escherihia coli 113-3) и коммерческие сыворотки (сыворотка диагностическая туляремийная сухая, сыворотка диагностическая холерная 01 адсорбированная сухая, сыворотка диагностическая сальмонеллезная О-поливалентная редких групп, сыворотка диагностическая бруцеллезная поливалентная жидкая).
Возможность практического применения изобретения иллюстрируется примерами его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.
Пример 1. При подготовке к лиофилизации 50 мл 5% диагностикума эритроцитарного иммуноглобулинового туляремийного приготовленного в качестве экспериментальной серии согласно утвержденным нормативным документам (ПР №01897080-15-10) центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин и образовавшийся осадок растворяют в свежеприготовленном растворе среды высушивания, состоящем из 50 мл полиглюкина с добавлением 1,6 мл 2,0% раствора твин-80, приготовленного в 0,9% растворе натрия хлорида, имеющей температуру (22±4)°С и 5 мг азида натрия, перемешивают до полного растворения содержимого. Колбу с раствором выдерживают 15-20 мин при (22±4)°С, замораживают при температуре минус 40°С и лиофилизируют в соответствии с разработанными протоколами сублимационного высушивания. После проведения контрольных исследований полученных экспериментальных серий, проводят испытания по определению стабильности показателей качества препарата, в условиях, отличающихся от традиционных условий хранения (5±3)°С. Для этого образцы изготовленного диагностикума эритроцитарного иммуноглобулинового туляремийного сухого выдерживали при различных температурных режимах (22±4°С, 37±1°С и минус 4±1°С) и контролировали каждые 3 месяца в течение 18 мес. (срок наблюдения) на соответствие показателей качества требованиям нормативной документации. При постановке РНГА (макрометодом по традиционной схеме, без использования разводящей жидкости) с испытуемыми экспериментальными сериями отмечается полное сохранение первоначальных физико-химических свойств препарата (при встряхивании - гомогенная взвесь коричневого цвета без признаков конгломерации), его активности и специфичности. Отрицательного влияния вышеуказанных температур на результаты контролируемых показателей не выявлено. Активность диагностикума эритроцитарного иммуноглобулинового туляремийного в РНГА с контрольными штаммами вида Francisella tularensis составила 1×105 м.к./мл. При контроле специфичности отмечалось отсутствие перекрестных реакций с гетерологичными штаммами.
Пример 2. Выполняли аналогично примеру 1, за исключением того, что получали экспериментальные серии диагностикума эритроцитарного антигенного туляремийного в соответствии с утвержденными нормативными документами (ПР №01897080-14-10). Получены результаты, аналогичные примеру 1. Активность диагностикума эритроцитарного антигенного туляремийного сухого с контрольной сывороткой туляремийной в РНГА составила 1:40000. При контроле специфичности отмечалось отсутствие перекрестных реакций с гетерологичными сыворотками.
Таким образом, с целью стабилизации основных свойств жидких форм эритроцитарных препаратов была разработана универсальная среда высушивания для получения лиофилизированных форм эритроцитарных диагностикумов туляремийных, позволяющая сохранять первоначальные свойства препарата в течение установленного срока хранения (не менее 1 года - срок наблюдения), не зависимо от температурных условий транспортировки. Описанная среда высушивания может с успехом быть использована в качестве разводящей жидкости в РНГА, упрощая постановку реакции при увеличении срока годности (не менее 1 мес. - срок наблюдения) регидратированных препаратов с сохранением их специфической активности. При отработанных параметрах получены диагностикумы эритроцитарные туляремийные (иммуноглобулиновые/антигенные) с высокой специфической активностью, что полностью удовлетворяет установленным требованиям нормативной документации.
Список литературы
1. Кузнецов С.Л., Левчук Б.А., Пекшев А.В., Пятков В.А. Способ получения противотуляремийной гипериммунной сыворотки и способ получения диагностикума эритроцитарного туляремийного иммуноглобулинового сухого. Патент №2240822 от 27.11.2004.
2. Пушкарь В.Г., Новицкая И.В., Кулаков М.Я., Павлова К.А., Степурина A.M. Способ лиофильной сушки эритроцитарного диагностикума. Патент №2476791 от 27.02.2013.
3. Жарникова И.В., Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н., Зайцев А.А., Жарникова Т.В., Левченко Н.В., Кочарян А.С. Способ получения раствора, используемого в качестве разводящей жидкости и среды высушивания эритроцитарных и латексных диагностикумов. Патент №2395094. Опубликовано 20.07.2010. Бюл. №20.
Claims (1)
- Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных, используемая одновременно в качестве разводящей жидкости и среды высушивания диагностикумов, состоящая из 50 мл полиглюкина с добавлением 1,6 мл 2,0% раствора твин-80, приготовленного в 0,9% растворе натрия хлорида, и 5 мг азида натрия, с последующим перемешиванием при температуре (22±4)°С до полного растворения компонентов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019124600A RU2708636C1 (ru) | 2019-07-30 | 2019-07-30 | Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019124600A RU2708636C1 (ru) | 2019-07-30 | 2019-07-30 | Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2708636C1 true RU2708636C1 (ru) | 2019-12-10 |
Family
ID=68836698
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019124600A RU2708636C1 (ru) | 2019-07-30 | 2019-07-30 | Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2708636C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2749355C1 (ru) * | 2020-07-17 | 2021-06-09 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ лиофилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0862219A (ja) * | 1994-08-19 | 1996-03-08 | Dainabotsuto Kk | 還元型抗原に対する抗体アッセイ試薬及びそれを使用した測定方法 |
RU2240822C2 (ru) * | 2002-07-17 | 2004-11-27 | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Способ получения противотуляремийной гипериммунной сыворотки и способ получения диагностикума эритроцитарного туляремийного иммуноглобулинового сухого |
RU2395094C1 (ru) * | 2009-05-14 | 2010-07-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения раствора, используемого в качестве разводящей жидкости и среды высушивания эритроцитарных и латексных диагностикумов |
RU2658434C1 (ru) * | 2017-03-28 | 2018-06-21 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения диагностикума эритроцитарного сапного иммуноглобулинового моноклонального |
-
2019
- 2019-07-30 RU RU2019124600A patent/RU2708636C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0862219A (ja) * | 1994-08-19 | 1996-03-08 | Dainabotsuto Kk | 還元型抗原に対する抗体アッセイ試薬及びそれを使用した測定方法 |
RU2240822C2 (ru) * | 2002-07-17 | 2004-11-27 | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Способ получения противотуляремийной гипериммунной сыворотки и способ получения диагностикума эритроцитарного туляремийного иммуноглобулинового сухого |
RU2395094C1 (ru) * | 2009-05-14 | 2010-07-20 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения раствора, используемого в качестве разводящей жидкости и среды высушивания эритроцитарных и латексных диагностикумов |
RU2658434C1 (ru) * | 2017-03-28 | 2018-06-21 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения диагностикума эритроцитарного сапного иммуноглобулинового моноклонального |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЖАРНИКОВА И.В. Методологические подходы и разработка биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей // Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук, Ставрополь, 2004. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2749355C1 (ru) * | 2020-07-17 | 2021-06-09 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ лиофилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Fonseca et al. | Collapse Temperature of Freeze‐Dried Lactobacillus bulgaricusSuspensions and Protective Media | |
Stamp | The preservation of bacteria by drying | |
US4072570A (en) | Preparation of a tuberculosis test medium by reconstituting a storage stabilized dry powdered Lowenstein-Jensen medium | |
RU2708636C1 (ru) | Универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных | |
CN103933012B (zh) | 一种改性明胶胶囊 | |
JPH03135927A (ja) | 低分子量有機化合物の乾燥組成物の調整方法 | |
CN108107210A (zh) | 一种髓过氧化物酶冻干校准品的制备方法及冻干保护液 | |
Ambros et al. | The concept of microwave foam drying under vacuum: A gentle preservation method for sensitive biological material | |
US10905113B2 (en) | Compositions and method for storing liquid biospecimens | |
CN103656661B (zh) | 猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用 | |
US4622222A (en) | Process for the preparation of a lyophilized vaccine against duck virus hepatitis | |
JP2003505024A (ja) | 微生物、細胞、および組織の貯蔵 | |
Poole | Stability of a modified, live panleucopenia virus stored in liquid phase | |
CN116694581A (zh) | 哈维氏弧菌噬菌体v-ydf132的冻干保护剂及其保藏方法 | |
RU2549971C1 (ru) | Способ консервации иммунопероксидазного конъюгата | |
US7604807B2 (en) | Use of pullulan to isolate and preserve biological material | |
RU2749355C1 (ru) | Способ лиофилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных | |
Phillips et al. | A study of water binding in lyophilized viral vaccine systems | |
RU2395094C1 (ru) | Способ получения раствора, используемого в качестве разводящей жидкости и среды высушивания эритроцитарных и латексных диагностикумов | |
Davies et al. | The preservation of Brucella abortus (strain 544) in liquid nitrogen and its virulence when subsequently used as a challenge | |
Aylward et al. | The concentration and drying of plasma | |
Sezer et al. | Evaluation of long-and short-term storage conditions and efficiency of a novel microencapsulated Salmonella phage cocktail for controlling Salmonella in chicken meat | |
CN115261354B (zh) | 一种肌酸激酶同工酶质控品及其制备方法、检测试剂盒 | |
CN108374057B (zh) | 一种人员防护装备防护性能评价用病毒标准物质及其制备方法 | |
RU2109290C1 (ru) | Стабилизирующий состав для получения лиофилизированных препаратов на основе конъюгата антииммуноглобулина g и пероксидазы хрена |