RU2705763C1 - Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола - Google Patents
Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705763C1 RU2705763C1 RU2018145576A RU2018145576A RU2705763C1 RU 2705763 C1 RU2705763 C1 RU 2705763C1 RU 2018145576 A RU2018145576 A RU 2018145576A RU 2018145576 A RU2018145576 A RU 2018145576A RU 2705763 C1 RU2705763 C1 RU 2705763C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ebola virus
- monoclonal antibody
- recombinant
- protein
- strain
- Prior art date
Links
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 title claims abstract description 33
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010026586 Ebola virus nucleoprotein VP40 Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030820 Ebola disease Diseases 0.000 description 2
- 108010088468 Ebola virus envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 241000615866 Antho Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000932 Marburg Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011013 Marburg hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000711513 Mononegavirales Species 0.000 description 1
- 208000031662 Noncommunicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 241000053227 Themus Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- FXAGBTBXSJBNMD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O FXAGBTBXSJBNMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000012615 aggregate Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003616 anti-epidemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- HJMZMZRCABDKKV-UHFFFAOYSA-N carbonocyanidic acid Chemical compound OC(=O)C#N HJMZMZRCABDKKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- YKCWQPZFAFZLBI-UHFFFAOYSA-N cibacron blue Chemical compound C1=2C(=O)C3=CC=CC=C3C(=O)C=2C(N)=C(S(O)(=O)=O)C=C1NC(C=C1S(O)(=O)=O)=CC=C1NC(N=1)=NC(Cl)=NC=1NC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O YKCWQPZFAFZLBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000013154 diagnostic monitoring Methods 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- -1 diethylaminoethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000013504 emergency use authorization Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описано моноклональное антитело, применяемое в иммуноферментном анализе для идентификации вируса Эбола. Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола и продуцируемое гибридомой 1B1, штамм которой депонирован в специальной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» ФБГУН Институт цитологии РАН под № РККК(П) 788Д, полученное иммунизацией мыши рекомбинантным фьюжн-белком rBs с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, связывающееся с рекомбинантным белком eGP вируса Эбола с равновесной константой диссоциации (KD) 4,4×10–8 М, применяемое в иммуноферментном анализе для идентификации вируса Эбола. Изобретение позволяет получать моноклональное антитело с высокой специфичностью к рекомбинантному белку eGP вируса Эбола. 5 ил., 2 табл.
Description
Изобретение относится к моноклональным антителам, а именно к моноклональному антителу, применяемому в иммуноферментном анализе для идентификации вируса Эбола.
Вирусные инфекции занимают одно из первых мест среди причин заболеваемости и смертности населения. Опасность представляют как хорошо известные длительное время присутствующие в популяции человека вирусы, такие как вирусы гриппа, так и новые вирусы, вызывающие инфекции с чрезвычайно высоким уровнем летальности, такие как вирус Эбола.
Геморрагическая лихорадка Эбола (далее по тексту – «ГЛЭ») – острая вирусная высококонтагиозная инфекция, вызываемая вирусом Эбола. Вирус был впервые идентифицирован в качестве этиологического агента ГЛЭ в 1976 году. С этого времени было зафиксировано 23 спорадические вспышки заболевания, каждая из которых характеризовалась высочайшей смертностью (до 80%). Вирус Эбола обладает исключительно высокой контагиозностью. Стремительное распространение вируса Эбола среди населения может произойти даже в результате единичного случая преодоления вирусом межвидового барьера [1]. Такие свойства позволили отнести вирус Эбола к патогенам группы А, являющимися потенциальными агентами биотерроризма. Вирус ГЛЭ относится к наиболее патогенным представителям рода Ebolavirus. Вирус Эбола делится на пять подтипов: суданский, заирский, кот-д’ивуарский, рестонский, а также бундибугио. По своим морфологическим свойствам вирус Эбола близок к вирусу Марбург, который относится к роду Marburgvirus, но отличается по антигенным свойствам. Оба рода вирусов относятся к семейству Filoviridae, отряд Mononegavirales.
Крупнейшей из всех ранее известных эпидемией ГЛЭ считалась вспышка 1976 года (318 подтвержденных случаев заболевания, из них 280 смертельных). Однако последняя к настоящему времени эпидемия, начавшаяся в 2013 году, превосходит ее на порядки. По данным на начало 2015 года официальное число инфицированных составило более 20000 человек, при этом число смертельных исходов – около 8000 [2]. Вспышка ГЛЭ преимущественно затронула страны Западной Африки. Случаи заболевания в США и Европейских странах относятся только к медицинскому персоналу и миссионерам. Нераспространение эпидемии за пределы Африки объясняется, в том числе, применением комплексных противоэпидемических мероприятий.
Расширение технических возможностей общества повышает опасность распространения инфекционных заболеваний. В частности, по данным доклада управления верховного комиссара ООН по делам беженцев, в 2014 году, число зарегистрированных беженцев превысило 51 миллион человек, что является самым высоким числом беженцев в мире после окончания Второй мировой войны. При этом по оценке ООН, в России находится более 13 миллионов мигрантов, что составляет приблизительно 9% населения Российской Федерации. Прогнозы, публикуемые в средствах массовой информации в отношении вероятности переноса ГЛЭ в другие страны, включая Россию и Финляндию, основаны на статистических расчетах пассажиропотоков из неблагополучных по заболеваемости африканских стран. Очевидно, что скорость распространения ГЛЭ по миру в первую очередь определяется жесткостью карантинных мер в первичных очагах распространения заболевания и контролем на транспортных узлах. Однако эпидемиологическая практика свидетельствует, что для высококонтагиозных инфекций с длительным инкубационным периодом эти меры имеют только временный успех.
При появлении новой инфекции или возвращении ранее известной остро встает вопрос о диагностическом мониторинге. Быстрая лабораторная диагностика является одним из основных условий обеспечения инфекционной безопасности, выявления групп инфицированных лиц, проведения карантинных мероприятий и, главное, принятия быстрых решений по предписанию эффективной и своевременной терапии.
Для диагностики ГЛЭ можно использовать общепринятые методы выявления вирусных инфекций (Таблица 1): выделение вируса в клеточных культурах, электронную микроскопию, иммуноферментный анализ (далее по тексту – «ИФА»), методы на основе полимеразной цепной реакции (далее по тексту – «ПЦР»).
Таблица 1 – Общепринятые методики выявления вирусных инфекций
Однако на диагностику ГЛЭ накладывается ряд ограничений, связанных с медико-биологическими и социально-экономическими особенностями протекания заболевания. Прежде всего, образцы, взятые у пациентов с подозрением на ГЛЭ, представляют чрезвычайно высокую биологическую опасность, и работа с неинактивированным материалом должна проводиться в лабораториях 4 уровня биобезопасности (BSL-4) [3]. Методы диагностики ГЛЭ значительно отличаются на ранней и поздней стадиях заболевания и зависят от того, имеет ли ГЛЭ единичный или эпидемический характер распространения. Кроме того методы диагностики ГЛЭ будут различны в странах, отличающихся уровнем развития систем здравоохранения.
Классическим способом вирусологической диагностики ГЛЭ является метод выделения вируса в клеточной культуре Vero или Vero E6 [4, 5].
Метод является одним из самых точных и чувствительных, так как позволяет восстановить даже следовые количества вируса. Однако процесс выделения занимает несколько дней и может быть осуществлен только в лабораториях, соответствующих уровню BSL-4, что делает невозможным его использование в рутинной диагностике.
На ранних стадиях ГЛЭ в крови и тканях пациентов присутствуют высокие титры вирусных частиц, поэтому основными рекомендуемыми подходами к диагностике ГЛЭ являются выявление вирусных РНК методами ПЦР и/или вирусных антигенов методами ИФА [6]. ПЦР является быстрой, простой и высокочувствительной методикой молекулярной диагностики, позволяющей выявить в анализируемой пробе даже следовые количества вирусной РНК. В литературе представлен целый ряд методов диагностики ГЛЭ, основанных как на традиционных методах ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени, так и их различных модификациях [4]. Следует отметить, что большинство из немногих имеющихся в настоящее время валидированных систем in vitro диагностики ГЛЭ основано именно на методе ПЦР в режиме реального времени [6].
Методы ИФА, рекомендованные для диагностики ГЛЭ, хотя и уступают методам ПЦР в чувствительности, являются более простыми в реализации. В научной литературе описаны различные варианты ИФА для чувствительной и специфической детекции вирусных антигенов с использованием поли- и моноклональных антител (далее по тексту – «МКА»), полученных против рекомбинантных белков вируса Эбола [4]. Были также разработаны системы ИФА для выявления вирус-специфических IgG и IgM, которые могут быть использованы преимущественно на поздних стадиях заболевания.
Помимо традиционных методов ПЦР и ИФА для выявления вирусных РНК и антигенов и вирус-специфических антител в перспективе можно также использовать современные высокопроизводительные методы анализа, такие как олигонуклеотидные и белковые микрочипы [7] и высокопроизводительное секвенирование (NGS) [8]. Однако все эти методы были разработаны в рамках научно-исследовательских работ и не были реализованы на практике.
Также известны МКА 4А2, продуцируемые гибридомой 4А2 (субкласс иммуноглобулинов IgG1) и МКА 1C1, продуцируемые гибридомой 1C1 (субкласс иммуноглобулинов IgG1) [9]. МКА 4A2, продуцируемое штаммом гибридных клеток животного Mus musculus L. 4A2 (субкласс иммуноглобулинов IgG1, имеющих тяжелую 55 кДа и легкую 25 кДа цепи), и МКА 1C1, продуцируемое штаммом гибридных клеток животного Mus musculus L. 1C1 (субкласс иммуноглобулинов IgG1, имеющих тяжелую 55 кДа и легкую 25 кДа цепи), совместно используются в иммуноферментной системе формата «сэндвич» для выявления матриксного белка VP40 вируса Эбола, субтип Заир (штамм Mainga).
Известно МКА, связывающееся с гликопротеином вируса Эбола [11]. Данное МКАселективно связывает гликопротеин вируса Эбола с константой диссоциации комплекса 2,6×10–9 М. Специфичность МКА к гликопротеину вируса Эбола подтверждена методами иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга, а также установлены аминокислотная и нуклеотидная последовательности вариабельных доменов МКА.
Известны МКА 1B2, продуцируемые штаммом гибридных клеток животного Mus musculus L. 1B2, и МКА 7В11, продуцируемые штаммом гибридных клеток животного Rattus Norvegicus 7B11 [12]. МКА 1B2, продуцируемое штаммом гибридных клеток животного Mus musculus L. 1B2 (субкласс иммуноглобулинов IgG1, имеющих тяжелую 55 кДа и легкую 25 кДа цепи), а также МКА 7В11, продуцируемое штаммом гибридных клеток животного Rattus Norvegicus 7B11 (субкласс иммуноглобулинов IgG), используются совместно в иммуноферментной системе формата «сэндвич» для выявления нуклеопротеина вируса Эбола, субтип Заир (штамм Mainga). В качестве прототипа выбрано МКА 1B2.
Недостатком вышеприведенных технических решений и прототипа является относительно низкая специфичность к рекомбинантному белку eGP вируса Эбола.
Технический результат заключается в получении моноклонального антитела с высокой специфичностью к рекомбинантному белку eGP вируса Эбола.
Технический результат достигается путем получения МКА, специфичного к вирусу Эбола и продуцируемого гибридомой 1B1, штамм которой депонирован в специальной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» ФБГУН Институт цитологии РАН под № РККК(П) 788Д, полученного иммунизацией мыши рекомбинантным фьюжн-белком rBs с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, связывающегося с рекомбинантным белком eGP вируса Эбола с равновесной константой диссоциации (KD) 4,4×10–8 М, применяемого в иммуноферментном анализе для идентификации вируса Эбола.
Заявляемое МКАполучено следующим образом.
Мыши линии BALB/c были проиммунизированы рекомбинантным фьюжн-белком rBs (SEQ ID NO:1), состоящим из фрагмента NS1-124 вируса гриппа А/PR8, фрагментов GP1/GP2 вируса Эбола и гистидинового тега. Мышей иммунизировали двукратно, с интервалом 3 недели, белок вводили внутримышечно в дозе 40 мкг с адъювантом гидроксидом алюминия 500 мкг. Через 3 недели после 2-й иммунизации была проведена внутрибрюшинно бустер-иммунизация рекомбинантным фьюжн-белком rBs, растворённым в PBS, в дозе 30 мкг/мышь (за три дня до слияния).
Гибридомы получали по методике Гальфре и Мильстейна. Культуру мышиной миеломы Х63Аg8.653 поддерживали в логарифмической фазе роста путём ежедневных рассевов в среде RPMI-1640 с 10% сывороткой крупного рогатого скота (далее по тексту «СКРС»). Гибридизацию спленоцитов гипериммунизированных мышей с клетками мышиной миеломы осуществляли в суспензии в соотношении 10:1 в присутствии 50% ПЭГ-1000 (“Sigma-Aldrich”, США). Затем клетки переносили в селективную ГАТ-среду, приготовленную на основе RPMI-1640 и 20% СКРС с добавлением гипоксантина (10–4 М), аминоптерина (4×10–7 М) и тимидина (1,6×10–5 М) производства “Sigma-Aldrich” (США), а также 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия (“Sigma-Aldrich”, США), 1 мг/л амфотерицина В и 50 мг/л гентамицина. Суспензию распределяли по ячейкам 96-луночных планшетов, содержащих трёхсуточную культуру мышиных макрофагов. После 10 суток культивирования ГАТ-среду заменяли на более щадящую ГТ-среду, а после 20 суток культуры поддерживали на среде RPMI-1640 с СКРС. Для удаления Ig, секретированных не слившимися спленоцитами мышей, культуральную жидкость из ячеек с растущими гибридами отбирали на 5–6, затем на 10–12 и на 16–17 дни после слияния.
Культивирование всех клеток осуществляли в пластиковых культуральных планшетах или во флаконах производства Sarstedt или Nunc. Клетки содержали при +37°С и 100% влажности в атмосфере с 6–7% СО2. Базовая культуральная среда содержала 90% RPMI-1640 и 10% СКРС производства фирмы «Биолот» (Санкт-Петербург).
Основным приёмом тестирования культуральных жидкостей был твердофазный ИФА с очищенными рекомбинантными белками rBs, rNS и eGP, в качестве отрицательного контроля использовали лизат бактериальных клеток E. coli. Часть клеток первичных (до этапа клонирования) позитивных культур временно замораживали, а часть клонировали 3–4 раза методом лимитирующих разведений в 96-луночных планшетах на фидерном слое из мышиных перитонеальных макрофагов. После каждого клонирования гибридомы тестировали методом ИФА и положительные культуры закладывали на хранение в криобанк. Клонированные гомогенные гибридомные штаммы наращивали в культуре, собирали надосадочную жидкость для изучения свойств МКА, а клетки криоконсервировали. Для криоконсервирования клеток использовали среду, состоящую из 90% СКРС и 10% ДМСО (“Sigma-Aldrich”, США). Предварительно охлажденные до –80°С в парах азота криопробирки с клетками помещали в жидкий азот (для многолетнего хранения). Криоконсервированию подвергали культуры гибридомных клеток, находящиеся в логарифмической фазе роста, образующие сплошной монослой. Перед замораживанием клетки подвергали микроскопическому исследованию на отсутствие контаминации микрофлорой. Количество живых клеток оценивали по эксклюзии трипанового синего.
Для пассирования гибридом мышам-реципиентам линии BALB/c за 10–14 дней до прививки внутрибрюшинно вводили 0,5 мл пристана (“Sigma-Aldrich”, США). Клетки в количестве 5–10 млн инокулировали в брюшную полость. После образования асцита делали прокол брюшной стенки и собирали оттекающую жидкость. После центрифугирования асцитов надосадочная жидкость служила источником МКА, а клетки гибридом, прошедшие пассирование на мышах, криоконсервировали.
Антигенами, разведёнными карбонатно-бикарбонатным буфером до концентрации 1 мкг/мл, сенсибилизировали планшеты в течение 18 часов при 4°С. После отмывания несвязавшегося антигенного материала 0,01 М PBS с добавлением 0,05% Tween 20 (PBS-T), рН 7.2 вносили МКА в PBS-Т в разведениях 10-2–10-6 и инкубировали 1 час при 37°С. Связавшиеся с антигеном МКА детектировали с помощью пероксидазных конъюгатов антител к IgG мыши (“Sigma-Aldrich”, США) в PBS-Т в течение 1 часа при 37°С. Пероксидазную реакцию проявляли добавлением субстратной смеси, содержащей 0,1 мг/мл 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина и 0,03% Н2О2 в ацетат-цитратном буфере, рН 5,0. После остановки реакции 2N H2SO4 оптическую плотность измеряли на фотометре Anthos-2010 при длине волны 450 нм (ОП450). Специфическая активность препаратов МКА (eGP) была определена в ИФА. Результаты непрямого неконкурентного ИФА представлены на Фиг. 1, где по оси ординат представлены относительные единицы значения поглощения (OD) при длине волны 450 нм, а по оси абсцисс представлены значения соответствующих концентраций сорбированного белка eGP (рекомбинантного белка eGP) в нг/мл. По результатам данного ИФА была составлена таблица 2.
Таблица 2 – Зависимость значений относительных единиц поглощения (OD) при длине волны 450 нм от концентрации сорбированного белка eGP (рекомбинантного белка eGP) в нг/мл.
Из данных таблицы следует, что наиболее специфичным является МКА 1B1, которое было выбрано для дальнейшей работы.
Препараты мышиных МКА перед очисткой представляли собой асцитные жидкости мышей, содержащие МКА, секретируемые клетками отобранной гибридомы. Асцитную жидкость, содержащую МКА, размораживали на ледяной бане и фильтровали через шприцевой фильтр-насадку с диаметром пор 0,45 мкм, материал мембраны PES (“Sartorius”, Германия). Полученный фильтрат переводили методом обессаливания на хроматографическом картридже Bio-Scale Mini Bio-Gel P6 в буферный раствор для хроматографии А (20 мМ Трис гидрохлорид, 50 мМ натрия хлорид, pH 7.3, 0,01% натрия азид) и хранили при +4°С не более суток.
На первой стадии хроматографической очистки был использован сорбент Affi-Gel DEAE Blue (“Bio-Rad”, США), который представляет собой иммобилизованную на агарозной матрице смешанную фазу на основе красителя Cibacron blue F3GA и диэтиламиноэтиловой группы. Хроматографию проводили на приборе AKTA start (“GE Healthcare”, США). Две хроматографические колонки Bio-Scale Mini Affi-Gel DEAE Blue (“Bio-Rad”, США) объёмом 5 мл каждая соединяли тандемно, предварительно регенерировали согласно инструкции производителя. Далее колонки уравновешивали 30 мл буфера А на скорости потока 2 мл/мин. Фильтрат асцитной жидкости вносили в колонку на скорости 2 мл/мин из расчёта 1 мл фильтрата на 1 мл сорбента. Далее колонку отмывали 10 мл буфера А. Несвязавшийся материал, содержащий МКА чистотой около 80–90% (по данным электрофореза), собирали и хранили при +4°С. Колонку регенерировали согласно инструкции производителя.
На второй стадии выделения был использован сорбент CHT I, представляющий собой синтетические макропористые гранулы фосфата кальция (гидроксиапатита) и позволяющий разделять белки в широком диапазоне их поверхностных зарядов и изоэлектрических точек. Данный сорбент используется для удаления из раствора остатков белков асцитной жидкости и неактивных форм IgG (димеров, агрегатов и фрагментов лёгких и тяжёлых цепей). Хроматографию проводили на приборе AKTA start (“GE Healthcare”, США). Хроматографическую колонку Bio-Scale Mini CHT Type I Cartridge (“Bio-Rad”, США) объёмом 5 мл уравновешивали 25 мл буферного раствора для хроматографии Б (10 мМ натрия фосфат, 50 мМ натрия хлорид, pH 7.3, 0,01% натрия азид) на скорости потока 5 мл/мин.
К раствору МКА, полученному на первой стадии очистки, добавляли 500 мМ раствор натрия фосфата, pH 7.3, до конечной концентрации 10 мМ, перемешивали и вносили в колонку на скорости потока 5 мл/мин. Далее колонку отмывали 5 объёмами буфера Б и элюировали IgG линейным градиентом буфера В (10 мМ натрия фосфат, 1 М натрия хлорид, pH 7.3, 0,01% натрия азид). Объём градиента составил 75 мл, скорость элюции — 5 мл/мин. Основной пик, содержащий мономерную форму IgG, отбирали и хранили при +4°С. Хроматографическую колонку регенерировали, последовательно промывая 25 мл 500 мМ раствора натрия фосфата, pH 7.3 и 25 мл 1 М раствора натрия хлорида.
Концентрацию белка в полученном растворе МКАопределяли на спектрофотометре NanoDrop ND-1000 (“Thermo Scientific”, США), полагая значение А280 для 0,1% раствора белка равным 14,5. Далее раствор концентрировали на центрифужном концентраторе VivaSpin Turbo 15, Cut-off 30 кДа, материал фильтра PES (“Sartorius”, Германия), до конечной концентрации 5 мг/мл и переводили в буфер PBS, содержащий 0,01% азид натрия, методом обессаливания на хроматографическом картридже Bio-Scale Mini Bio-Gel P6 (“Bio-Rad”, США). Полученный препарат представлял собой раствор активной формы IgG чистотой 98–99% по данным электрофореза и аналитической гель-фильтрации.
Электрофореграмма конечного препарата представлена на фиг. 2, где на дорожке 1 нанесены маркеры молекулярного веса, а на дорожке 2 нанесён очищенный препарат МКА. Идентификацию конечных препаратов МКА проводили методом электрофореза в ПААГ по методу Лэммли с добавлением восстанавливающего агента (2-меркаптоэтанол). К 10-мкл аликвотам препаратов в нужной концентрации добавляли по 4 мкл 4-кратного буфера Лэммли и 2 мкл PBS, прогревали 15 мин в твердотельном термостате при 99°С, затем по 15 мкл готовой смеси вносили в лунки геля. Электрофорез проводили при постоянном напряжении 200 В в течение 40 минут. Гель окрашивали коллоидным раствором Кумасси G-250 и визуализировали при помощи системы гель-документации ChemiDoc MP System (“Bio-Rad”, США) с последующим денситометрическим анализом. Денситограмма представлена на фиг. 3. На денситограмме присутствуют бэнды молекулярной массой 51,8 и 21,4 кДа, что соответствует тяжёлой и лёгкой цепям молекулы IgG.
Аналитическую хроматографию проводили на приборе AKTA pure на колонке Superdex 200 Increase 10/300 GL (“GE Healthcare”, США). Для этого в колонку, предварительно уравновешенную 50 мл буфера PBS, вносили 100 мкл препарата и элюировали буфером PBS на скорости потока 0,75 мл/мин. Мониторинг проводили по оптической плотности на длине волны 280 нм. Полученные данные сравнивали с хроматограммой стандартных растворов для гель-фильтрации и анализировали при помощи программного обеспечения Unicorn 6.0 (“GE Healthcare”, США). В данном конкретном примере пик №5 имеет объём элюции 11,63 мин, что соответствует нативной форме молекулы IgG. Содержание нативной формы IgG в препарате составила 98,41% по результатам аналитической гель-фильтрации, которая представлена на фиг. 4.Заявляемое изобретение поясняется примером.
Исследование взаимодействия рекомбинантного белка eGP вируса Эбола и МКА1B1 было проведено с использованием оптического биосенсора Biacore на основе поверхностного плазмонного резонанса. Наличие шести гистидиновых остатков у лиганда (eGP) являлись идеальным фрагментом для иммобилизации в силу высокой связываемости с иммобилизированной нитрилоуксусной кислотой на поверхности используемого сенсорного чипа NTA. Связывание лиганда с анализируемой парой МКА было изучено путем мониторинга изменения значений резонансной единицы (RU) в ходе построения сенсограммы взаимодействия во времени. Сенсограмма взаимодействия рекомбинантного белка eGP с парой МКА 1B1 представлена на Фиг. 5. Полученные кривые взаимодействия были обработаны с использованием программного обеспечения Biacore. Данное взаимодействие было описано кинетикой Лэнгмюра и получены константы ассоциации и диссоциации полученного комплекса антиген-антитело. Так, рассчитанная по данному приближению равновесная константа диссоциации составила KD = 4,4Ч10–8 М, что свидетельствует о высокоаффинном взаимодействии рекомбинантного белка eGP с парой МКА 1B1.
Список источников
1. Genomic surveillance elucidates Ebola virus origin and transmission during the 2014 outbreak. Gire S.K., Goba A., Andersen K.G. et al. Science. 2014 Sep; 12;345(6202):1369-72. doi: 10.1126/science.1259657. Epub 2014 Aug 28.
2. Global status report on noncommunicable diseases 2014. WHO. 2014; ISBN: 978 92 4 156485 4.
3. Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures. Krisztina Janosko, Michael R. Holbrook, Ricky Adams et al. J Vis Exp. 2016; (116): 52317. doi: 10.3791/52317.
4. Laboratory Diagnostic Systems for Ebola and Marburg Hemorrhagic Fevers Developed with Recombinant Proteins. Masayuki Saijo, Masahiro Niikura, Tetsuro Ikegami, Ichiro Kurane, Takeshi Kurata, Shigeru Morikawa. Clin Vaccine Immunol. 2006 Apr; 13(4): 444–451. doi: 10.1128/CVI.13.4.444-451.2006.
5. Towards Detection and Diagnosis of Ebola Virus Disease at Point-of-Care. Ajeet Kaushik,a, Sneham Tiwari, Rahul Dev Jayant, Aileen Marty, Madhavan Nair. Biosens Bioelectron. 2016 Jan 15; 75: 254–272; doi: 10.1016/j.bios.2015.08.040.
6. U.S. FDA, «2014 Ebola Virus Emergency UseAuthorizations»; Vogel, 2014.
7. Laboratory guidance for the diagnosis of Ebola virus disease : interim recommendations: September 2014/ World Health Organization, URL: http://www.who.int/iris/handle/10665/134009#sthash.5HKgzZSc.dpuf; дата обращения – 26.09.2018.
8. Kamata K, et al. (2014) The N-terminus and Tudor domains of Sgf29 are important for its heterochromatin boundary formation function. J Biochem 155(3):159-71.
9. Köhler O., Benros M.E., Nordentoft M., Farkouh M.E., Iyengar R.L., Mors O., Krogh J., Effect of anti-inflammatory treatment on depression, depressive symptoms, and adverse effects: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials. JAMA Psychiatry. 2014 Dec 1;71(12):1381-91. doi: 10.1001/jamapsychiatry.2014.1611.
10. Штамм гибридных клеток животного Mus musculus L. - продуцент моноклональных антител для выявления белка VP40 вируса Эбола, субтип Заир (штамм Mainga) (варианты), моноклональное антитело, продуцируемое штаммом (варианты), и набор для иммуноферментной тест-системы формата "сэндвич" для выявления белка VP40 вируса Эбола, субтип Заир (штамм Mainga): патент № 2395577, Российская Федерация, заявка № RU2008150265, заявл. 18.12.2008, опубл. 27.07.2010.
11. Моноклональное антитело, связывающееся с гликопротеином вируса эбола, фрагменты днк, кодирующие указанное антитело, и антигенсвязывающий фрагмент: патент № 2630304, Российская Федерация, RU2015157142, заявл. 31.12.2015, опубл. 06.09.2017.
12. Штамм гибридных клеток животного Mus musculus L.1B2 - продуцент моноклональных антител для выявления нуклеопротеина вируса эбола, субтип Заир (штамм Mainga) (варианты), моноклональное антитело, продуцируемое штаммом (варианты), набор для иммуноферментной тест-системы формата "сэндвич" для выявления нуклеопротеина вируса Эбола, субтип Заир (штамм Mainga): патент № 2395576, Российская Федерация, заявка № RU2008149653, заявл. 16.12.2008, опубл. 27.07.2010.
Claims (1)
- Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола, продуцируемое гибридомой 1B1, штамм которой депонирован в специальной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» ФБГУН Институт цитологии РАН под № РККК(П) 788Д, полученное иммунизацией мыши рекомбинантным фьюжн-белком rBs с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, связывающееся с рекомбинантным белком eGP вируса Эбола с равновесной константой диссоциации (KD) 4,4×10–8 М, применяемое в иммуноферментном анализе для идентификации вируса Эбола.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018145576A RU2705763C1 (ru) | 2018-12-21 | 2018-12-21 | Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018145576A RU2705763C1 (ru) | 2018-12-21 | 2018-12-21 | Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2705763C1 true RU2705763C1 (ru) | 2019-11-12 |
Family
ID=68579780
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018145576A RU2705763C1 (ru) | 2018-12-21 | 2018-12-21 | Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2705763C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2395577C1 (ru) * | 2008-12-18 | 2010-07-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L.- ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БЕЛКА VP40 ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БЕЛКА VP40 ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) |
| EP3254691A1 (en) * | 2016-06-07 | 2017-12-13 | Abivax | Polyclonal antibodies for use in the prevention and/or treatment of ebola virus disease |
| RU2686630C1 (ru) * | 2017-12-22 | 2019-04-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Штаммы гибридных клеток животных Mus. Musculus - продуценты моноклональных антител к белку GP вируса Эбола (subtype Zaire) и моноклональные антитела к белку GP вируса Эбола (subtype Zaire) |
-
2018
- 2018-12-21 RU RU2018145576A patent/RU2705763C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2395577C1 (ru) * | 2008-12-18 | 2010-07-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L.- ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БЕЛКА VP40 ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БЕЛКА VP40 ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) |
| EP3254691A1 (en) * | 2016-06-07 | 2017-12-13 | Abivax | Polyclonal antibodies for use in the prevention and/or treatment of ebola virus disease |
| RU2686630C1 (ru) * | 2017-12-22 | 2019-04-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Штаммы гибридных клеток животных Mus. Musculus - продуценты моноклональных антител к белку GP вируса Эбола (subtype Zaire) и моноклональные антитела к белку GP вируса Эбола (subtype Zaire) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Link et al. | Immunoglobulins and measles antibodies in subacute sclerosing panencephalitis: demonstration of synthesis of oligoclonal IgG with measles antibody activity within the central nervous system | |
| EP3045914B1 (en) | Method for measuring influenza b virus | |
| Guthmiller et al. | An efficient method to generate monoclonal antibodies from human B cells | |
| CN111704666B (zh) | 新型冠状病毒n蛋白的配对单克隆抗体及其应用 | |
| JP2021184710A (ja) | 重症熱性血小板減少症候群ウイルスの外膜糖タンパク質に結合する抗体及びその用途 | |
| EP4112722B1 (en) | Anti-vim carbapenemase hybridoma cell strain, monoclonal antibody, and application | |
| CN108474017B (zh) | 用于检测呼吸道合胞病毒抗原p的单克隆抗体 | |
| CN113912710B (zh) | 抗新型冠状病毒n蛋白的单克隆抗体及其应用 | |
| CN110684740B (zh) | 一种抗人泛素羧基末端水解酶-1(uch-l1)的单克隆抗体及其应用 | |
| Skornicka et al. | Pregnancy zone protein is a carrier and modulator of placental protein-14 in T-cell growth and cytokine production | |
| US9244072B2 (en) | Anti-human norovirus GII antibody | |
| EP4112723A1 (en) | Anti-kpc type carbapenemase hybridoma cell line, monoclonal antibody and application thereof | |
| JP2013060367A (ja) | 抗インフルエンザ抗体及びインフルエンザ検出用デバイス | |
| RU2705763C1 (ru) | Моноклональное антитело, специфичное к вирусу Эбола | |
| JPWO2011096302A1 (ja) | 薬剤耐性インフルエンザウイルス特異的抗体及びその用途 | |
| CN109280644B (zh) | 抗人IgG单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用 | |
| KR20090058327A (ko) | 마이코플라즈마 뉴모니아성 폐렴 진단을 위한 재조합단백질 및 이를 이용한 진단 키트 | |
| RU2733379C1 (ru) | Тест-система для диагностики возбудителей острых респираторных вирусных инфекций | |
| RU2491338C2 (ru) | Применение моноклональных антител для идентификации ямагатской или викторианской эволюционных линий вируса гриппа типа в, штамм гибридомы 4н7 для получения моноклональных антител, предназначенных для определения вирусов гриппа в ямагатской ветви, штамм гибридомы в/4н1 для получения моноклональных антител, предназначенных для определения вирусов гриппа в викторианской ветви | |
| GB2547603B (en) | Specific monoclonal antibodies of the antigen M of the human metapneumovirus (HMPV) and use thereof in a diagnostic method | |
| Fasihi-Ramandi et al. | Production and characterization of monoclonal and polyclonal antibody against recombinant outer membrane protein | |
| US20200319206A1 (en) | Methods and compositions relating to diagnosis and treatment of cardiac disorders | |
| WO2022079359A1 (en) | Sars-cov-2 coronavirus-neutralizing antibody | |
| TWI737918B (zh) | 抗登革病毒抗體及其應用 | |
| JP5448424B2 (ja) | ヒトＩｇＧのＦｃを含有するタンパク質の測定試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201222 |