RU2699029C1 - Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке - Google Patents
Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке Download PDFInfo
- Publication number
- RU2699029C1 RU2699029C1 RU2018143623A RU2018143623A RU2699029C1 RU 2699029 C1 RU2699029 C1 RU 2699029C1 RU 2018143623 A RU2018143623 A RU 2018143623A RU 2018143623 A RU2018143623 A RU 2018143623A RU 2699029 C1 RU2699029 C1 RU 2699029C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stem cells
- cells
- mesenchymal stem
- matrix
- tissue
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/44—Vessels; Vascular smooth muscle cells; Endothelial cells; Endothelial progenitor cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для улучшения состояния рубца на матке. Для этого вводят мезенхимальные стволовые клетки, полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека. Указанные клетки наносят на матрицу на основе геля из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты в конечной концентрации 1,5*106/мл. Затем матрицу размещают в области рубца в дозе 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя. Изобретение обеспечивает стимуляцию регенерации рубца на матке. 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, биотехнологии, регенеративной медицине, фармакологии и может быть использовано при создании клеточного продукта, используемых в тканевой инженерии при пластике или замещении дефектов тканей организма с обеспечением стимуляции их регенерации.
В настоящее время в связи с увеличивающимся объемом разработок клеточных препаратов, особое значение приобретает разработка скаффолдов (матриц) для клеточных культур, которая будет обеспечивать фиксацию клеток в месте нанесения, и создавать благоприятные условия для клеточной адгезии, транспортировки питательных веществ, кислорода, и продуктов обмена.
Определенными условиями для матрицы является ее биосовместимость и замещение регенерирующими тканями, которые будут сохранять функциональную структуру требуемой ткани и нетоксичность.
Известно много различных видов матриц, которые пытаются использовать в клеточной трансплантологии. Они подразделяются на матрицы с использованием фрагментов биологических тканей и синтетические скаффолды (Ларионов П.М., Терещенко В.П., Кирилова И.А. МЕТОДЫ СОЗДАНИЯ МАТРИЦ-НОСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ТКАНЕВЫХ ЭКВИВАЛЕНТОВ КОСТНОЙ ТКАНИ // Успехи современного естествознания. - 2015. - №9-1. - С. 117-121; Uemura Т., Dong Y., Wang Y. et al. Transplantation of cultured bone cells using combinations of scaffolds and culture techniques. Biomaterials 2003; 24: 2277-86; Фомина Г.А., Масгутов Р.Ф., Штырлин В.Г. и др. Гидрогелевый матрикс на основе биосовместимых карбомеров для восполнения дефектов нервной ткани. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2007; II (4): 63-7; Бухарова Т.Б., Антонов Е.Н., Попов В.К. и др. Биосовместимость тканеинженерных конструкций на основе пористых полилактидных носителей, полученных методом селективного лазерного спекания, и мультипотентных стромальных клеток костного мозга; Клеточные технологии в биологии и медицине 2010; 1: 40-6; Мелихова B.C., Сабурина И.Н., Орлов А.А. и др. Моделирование функционального остеогенеза с использованием биодеградируемого матрикса и аутогенных стромальных клеток подкожной жировой ткани. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2009; IV (1): 59-68; Бармашева А.А., Шарутина И.А., Николаенко Н.С. и др. Культивирование стромальных клеток костного мозга крысы на коллагене I типа разного происхождения. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2009; IV (4): 41-7; КОЛЛАГЕН-ХИТОЗАНОВАЯ МАТРИЦА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В КЛЕТКИ НЕЙРОНАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ. МАРКЕРНЫЙ АНАЛИЗ // Фундаментальные исследования. - 2012. - №1. - С. 18-23; Волков А.В. Краткий обзор коммерчески доступных клеточных продуктов для восстановления кожных покровов. Гены и клетки. - 2006; 1 (4): 62-65).
Рассасывающиеся силикагели известны из уровня техники. Так, например, в немецкой заявке на патент DE 19609551 С1 (C08L 83/00; D01D 5/00; D01F 9/08; D01F 9/20) описаны биологически расщепляющиеся и рассасывающиеся волокна. Подобные волокна могут быть изготовлены с помощью зольгель технологии, в соответствии с которой из прядильной массы вытягивают нити, при необходимости подвергаемые последующей сушке. Прядильная масса содержит одно или несколько частично или полностью гидролитически конденсированных соединений кремния, образующихся в результате гидролитической конденсации мономеров общей формулы SiX4. Недостаток предлагаемых в цитируемой заявке волокон состоит в том, что их испытание на цитотоксичность при расщеплении, осуществляемом непосредственно по завершении процесса прядения, не приводит к оптимальным результатам, в связи с чем указанные волокна следует считать в определенной степени цитотоксичными. Подобная токсичность волокон, проявляющаяся при их применении в медицине или медицинской технике, например, в сфере заживления ран, как правило, является нежелательной. Кроме того, предлагаемый в цитируемой заявке способ изготовления волокон страдает недостатком, состоящим в том, что смесь, образующаяся на стадии гидролитической конденсации после удаления растворителя, является многофазной, и для удаления твердого вещества приходится осуществлять ее фильтрование. Помимо этого вследствие образования твердой фазы и необходимости фильтрования теряют значительную часть пригодного для прядения золя. В соответствии с предлагаемым в цитируемой заявке способом не удается также надежно предотвращать происходящее во время созревания образование довольно значительного количества твердой фазы, прежде всего гелеобразование. Подобное образование твердой фазы обусловливает дополнительное сокращение количества пригодной для прядения зольмассы.
Основной недостаток натуральных матриц является непредсказуемая резорбция и нежелательная защитная реакция макрофагов, что существенно замедляет образование новой ткани. Также аллогенные и ксеногенные трансплантаты несут с собой иммунологический и инфекционный риск.
Недостатком синтетических матриц чаще всего является их плохая биосовместимость, токсичность и отсутствие питательной среды для культуры помещенных на нее клеток.
Целью нашего изобретения является создание более эффективного способа использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке за счет использования матрицы с клеточной культурой, которая будет представлять собой синтетический комплекс со свойствами биологически совместимой матрицы. Скаффолд будет отвечать необходимым условиям, а именно, отсутствие токсичности, возможность адгезии, пролиферации и дифференцировки помещенных клеток и резорбция обычными биологическими путями.
Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке мезенхимальные стволовые клетки, полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека, перед применением наносят на матрицу на основе геля из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты конечной концентрации 1,5*106/мл, и затем матрицу размещают в области рубца в дозе 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя.
В качестве клеточной культуры были взяты мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека. Данный вид клеток является оптимальным клеточным источником, ввиду своих свойств. Это плюрипотентность и способность дифференцироваться в клетки мезенхимального ряда, а так же видимый иммунофенотипический профиль МСК, позволяющий избегать отторжения иммунной системой хозяина.
В качестве скоффолда был взят гидрогель на основе натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроната натрия.
Натрий карбоксиметилцеллюлоза (КМЦ) является анионным водорастворимым полимером, полученным из целлюлозы и обладает следующими функциями и свойствами: действует в качестве связующего вещества, стабилизатора, защитного коллоида и вещества, контролирующего реологию или поток. Вещество физиологически инертно и является анионным полиэлектролитом. Растворы всех типов КМЦ демонстрируют псевдопластичные свойства.
Гиалуронат натрия - это полисахарид, состоящий из дисахаридных повторяющихся цепей. Является производным от глюкозамина несульфированного, который входит в состав эпителиальной, соединительной и нервной ткани и является главным элементом матрикса клетки.
Он создает физиологическую среду для деления и дифференциации клеток, участвует в создание оптимальных условий для нормального клеточного и тканевого гомеостаза, обеспечивает выведение продуктов жизнедеятельности, транспортировку питательных веществ.
Также гиалуронат натрия обладает следующими свойствами: участвует в синтезе коллагена и эластина, выполняет пластическую функцию, способствует понижению показателей эндогенной интоксикации, способствует предотвращению образования рубцовой ткани и равномерному заполнению дефектов новообразовавшейся тканью.
Изобретение поясняется фиг. 1 и 2. На фиг. 1 показана область рубца группы, где МСК вводились на растворе NaCl 0,9% (физиологический раствор).
На рисунке А мы видим выраженное преобладание соединительной ткани (1) над мышечной тканью (2). Отмечается слабая инвазия миоцитов в область рубца. Большинство сосудов (3) (рисунок В) тонкие, с несостоятельной стенкой. Пласты мышечной ткани (рисунок С) разделены грубыми, толстыми соединительнотканными септами (4).
На фиг. 2 показано состояние области рубца после введения в нее МСК на гелевой матрице, что позволило им воздействовать именно в месте нанесения. На рисунке D, мы видим преобладание мышечной ткани (2) над соединительной (1). Область характеризуется высокой степенью инвазии миоцитов. Много толстых сосудов (3) (рисунок Е) с полноценной мышечной стенкой. Соединительнотканные септы (4) тонкие (рисунок F).
Заявляемая матрица была апробирована на 40 лабораторных самках альбиноса серых крыс породы Wistar, массой тела 200-230 г.
Для введения животным использовали мезенхимные стволовые клетки периваскулярного пространства пупочного канатика человека. Образцы (фрагмент пуповины 5-10 см) использовали в экспериментах только после получения подписанного информированного согласия родителей ребенка. Клетки выделяли согласно методике, описанной ранее, в условиях сертифицированного чистого помещения с соблюдением процедур контроля качества - подтверждением кариотипа, иммунофенотипа, отсутствия инфекций, генетической идентификацией методом STR-типирования (Айзенштадт и др., 2018 - 2018 Характеристики мезенхимных стромальных клеток пупочного канатика человека при длительном культивировании in vitro. Айзенштадт А.А., Сказина М.А., Котелевская Е.А., Елсукова Л.В., Золина Т.Л., Пономарцев Н.В., Галактионов Н.К., Галембо И.А., Иволгин Д.А., Масленникова И.И., Енукашвили Н.И. Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова, том 10, №1, с. 11-19; 2017 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ИЗ ПЕРИВАСКУЛЯРНОГО ПРОСТРАНСТВА ВЕНЫ ПУПОЧНОГО КАНАТИКА Авторы: Багаева В.В., Айзенштадт А.А., Александрова Л.В., Енукашвили Н.И., Адылов Ш.Ф., Золина Т.Л., Урусова М.Е. патент РФ №2620981). Клетки культивировали без использования материалов животного происхождения. В день эксперимента клетки снимали с подложки, обрабатывая раствором трипсина (0,25%) с добавлением ЭДТА до 0,02%, затем отмывали от остатков трипсина и ресуспендировали в физиологическом растворе или в геле из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты конечной концентрации 1,5*106/мл. Каждому животному вводили 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя
Модель: травма неизмененной мышцы матки, нанесенная скальпелем. После в шов на левом роге матки у 20 крыс вводилась культура МСК на физиологическом растворе, другим 20 животным в шов на матке инъецировались МСК на основе геля с натрием гиалуроната и натрием карбоксиметилцеллюлозы, рана на правом роге матки во всех 40 случаях дополнительному воздействию не подвергалась и являлась контрольной для дальнейшего сравнения сформированных рубцов. Выведение из эксперимента проводилось на 14-е сутки после операции.
На фиг. 1, рисунок А, мы видим выраженное преобладание соединительной ткани (1) над мышечной тканью (2). Отмечается слабая инвазия миоцитов в область рубца. Большинство сосудов (3) (рисунок В) тонкие, с несостоятельной стенкой. Пласты мышечной ткани (рисунок С) разделены грубыми, толстыми соединительнотканными септами (4).
На фиг. 2 показано состояние области рубца после введения в нее МСК на гелевой матрице, что позволило им воздействовать именно в месте нанесения. На рисунке D, мы видим преобладание мышечной ткани (2) над соединительной (1). Область характеризуется высокой степенью инвазии миоцитов. Много толстых сосудов (3) (рисунок Е) с полноценной мышечной стенкой. Соединительнотканные септы (4) тонкие (рисунок F).
Оценка результатов исследования проводилась с помощью разработанной шкалы гистологических изменений, которая оценивала степень восстановления поврежденных миоцитов, а именно, учитывала соотношение мышечной и соединительной ткани в области рубца, толщину фиброзных септ, степень инвазии миоцитов в область рубца, количество сосудов, а также толщину сосудистой стенки и калибр сосудов.
Сравнительная характеристика матриц, на которую были нанесены МСК, показала большую эффективность воздействия клеточной культуры при использовании геля на основе натрия гиалуроната и натрия карбоксиметилцеллюлозы. Предположительно это связано с более плотной структурой и адгезивными свойствами геля, который позволил клеткам воздействовать именно в той области, на которую они были нанесены.
Claims (1)
- Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке, отличающийся тем, что мезенхимальные стволовые клетки, полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека, перед применением наносят на матрицу на основе геля из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты конечной концентрации 1,5*106/мл и затем матрицу размещают в области рубца в дозе 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018143623A RU2699029C1 (ru) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018143623A RU2699029C1 (ru) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2699029C1 true RU2699029C1 (ru) | 2019-09-03 |
Family
ID=67851753
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018143623A RU2699029C1 (ru) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2699029C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2781150C1 (ru) * | 2021-11-02 | 2022-10-06 | Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Дагестанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Даггосмедуниверситет | Способ активизации тканевой регенерации и заживления послеоперационной раны на матке при кесаревом сечении |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2133623C1 (ru) * | 1996-05-21 | 1999-07-27 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ профилактики эндометрита после кесарева сечения |
US20110256186A1 (en) * | 2008-10-10 | 2011-10-20 | Histocell, S.L. | biomaterial based on wharton's jelly from the human umbilical cord |
WO2015193737A1 (en) * | 2014-06-17 | 2015-12-23 | Igenomix S.L. | Stem cell therapy in endometrial pathologies |
RU2620981C2 (ru) * | 2015-11-18 | 2017-05-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" | Способ получения культуры мезенхимных стволовых клеток человека из периваскулярного пространства вены пупочного канатика |
-
2018
- 2018-12-10 RU RU2018143623A patent/RU2699029C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2133623C1 (ru) * | 1996-05-21 | 1999-07-27 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ профилактики эндометрита после кесарева сечения |
US20110256186A1 (en) * | 2008-10-10 | 2011-10-20 | Histocell, S.L. | biomaterial based on wharton's jelly from the human umbilical cord |
WO2015193737A1 (en) * | 2014-06-17 | 2015-12-23 | Igenomix S.L. | Stem cell therapy in endometrial pathologies |
RU2620981C2 (ru) * | 2015-11-18 | 2017-05-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" | Способ получения культуры мезенхимных стволовых клеток человека из периваскулярного пространства вены пупочного канатика |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
DAZHI FAN et al., Umbilical cord mesenchyme stem cell local intramuscular injection for treatment of uterine niche, Medicine (Baltimore), 2017, Nov; 96(44): e8480. PMID: 29095305. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2781150C1 (ru) * | 2021-11-02 | 2022-10-06 | Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Дагестанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Даггосмедуниверситет | Способ активизации тканевой регенерации и заживления послеоперационной раны на матке при кесаревом сечении |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2956075C (en) | Modified alginates for anti-fibrotic materials and applications | |
CN106075598B (zh) | 一种光交联丝胶蛋白水凝胶及其制备方法和应用 | |
EP1456357B1 (en) | Pluripotent embryonic-like stem cells derived from teeth and uses thereof | |
US7601525B2 (en) | Alginate gel scaffold having a plurality of continuous parallel microtubular copper capillaries | |
KR20200130685A (ko) | 가교된 히알루론산 및 prp/bmc와의 조합물 | |
JP6633628B2 (ja) | 口腔粘膜を再生するためのバイオマテリアル足場材料 | |
SG185279A1 (en) | Method for preparing porous scaffold for tissue engineering, cell culture and cell delivery | |
CN105536055B (zh) | 一种形状记忆型高弹性活性纳米纤维支架及其应用 | |
TWI673103B (zh) | 可注射型自組裝微球凝膠、其用途及可注射型自組裝微球凝膠的製備方法 | |
US20100158982A1 (en) | Sheet for guiding regeneration of mesenchymal tissue and production method thereof | |
KR20100086439A (ko) | 방사선 융합 기술을 이용한 생체조직공학용 베타-글루칸 기반 지지체 및 이의 제조방법 | |
CN111407921A (zh) | 一种医用水凝胶敷料、其制备方法及应用 | |
RU2483756C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОДЕГРАДИРУЕМОГО КОМПОЗИТНОГО МАТРИКСА НА ОСНОВЕ РЕГЕНЕРИРОВАННОГО ФИБРОИНА ШЕЛКА Bombyx mori И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | |
CN115501393B (zh) | 用于修复神经缺损的水凝胶及其制备方法和用途 | |
CN115501253A (zh) | 联合干细胞和水凝胶生物材料制备及其在脊髓损伤的应用 | |
RU2530622C2 (ru) | Биотрансплантат для восстановления объема костной ткани при дегенеративных заболеваниях и травматических пвореждениях костей и способ его получения | |
CN114316162A (zh) | 光交联可注射纳米纤维-水凝胶复合物及其制备方法与应用 | |
RU2699029C1 (ru) | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке | |
US20120003176A1 (en) | Hydrogel-forming composition comprising natural and synthetic segments | |
CN111214710B (zh) | 一种促进皮肤再生的复合支架及其制备方法 | |
CN110680949A (zh) | 一种基于母乳的创伤敷料的制备方法和应用 | |
CN113559324B (zh) | 纳米复配液在软骨细胞自体修复及再生医学美学中的应用 | |
CN115607729B (zh) | 一种生物墨水、3d打印水凝胶支架及制备方法和应用 | |
TWI839378B (zh) | 交聯玻尿酸及與prp/bmc的組合 | |
CN112891630B (zh) | 一种用于骨修复的可植入血块凝胶组合物及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201211 |