RU2695075C1 - Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro - Google Patents
Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2695075C1 RU2695075C1 RU2019109698A RU2019109698A RU2695075C1 RU 2695075 C1 RU2695075 C1 RU 2695075C1 RU 2019109698 A RU2019109698 A RU 2019109698A RU 2019109698 A RU2019109698 A RU 2019109698A RU 2695075 C1 RU2695075 C1 RU 2695075C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- temperature
- sponge
- minutes
- test system
- test
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 238000000576 coating method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 13
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 title abstract 5
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims abstract description 57
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 25
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 20
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 11
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000499 gel Substances 0.000 abstract description 10
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 abstract description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 abstract 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 abstract 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 abstract 1
- 238000012332 laboratory investigation Methods 0.000 abstract 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 abstract 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 14
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 12
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 12
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 10
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 10
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 229920001661 Chitosan Chemical class 0.000 description 6
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 6
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 6
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000219422 Urtica Species 0.000 description 5
- 235000009108 Urtica dioica Nutrition 0.000 description 5
- ZNOZWUKQPJXOIG-XSBHQQIPSA-L [(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[[(1r,3s,4r,5r,8s)-3,4-dihydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]oxy]-4-[[(1r,3r,4r,5r,8s)-8-[(2s,3r,4r,5r,6r)-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-sulfonatooxyoxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl]oxy]-5-hydroxy-2-( Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H]2OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H]4OC[C@H]3O[C@H](O)[C@@H]4O)[C@@H]1O)OS([O-])(=O)=O)[C@@H]2O ZNOZWUKQPJXOIG-XSBHQQIPSA-L 0.000 description 5
- 238000012733 comparative method Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Chemical class 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Chemical class 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- -1 for example Chemical class 0.000 description 2
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 2
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 2
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000013169 thromboelastometry Methods 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 206010020608 Hypercoagulation Diseases 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUJDSEJGGMCXSG-UHFFFAOYSA-N Thiopental Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=S)NC1=O IUJDSEJGGMCXSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- SXTGIAYWYXVNLT-NRFANRHFSA-N benzyl n-[2-[[2-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]carbamate Chemical compound N([C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NC1=CC=2OC(=O)C=C(C=2C=C1)C)C(=O)CNC(=O)CNC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SXTGIAYWYXVNLT-NRFANRHFSA-N 0.000 description 1
- 108010079115 benzyloxycarbonyl-glycyl-glycyl-arginine-4-methylcoumaryl-7-amide Proteins 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Chemical class 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Chemical class 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940045110 chitosan Drugs 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 239000000515 collagen sponge Substances 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000003027 hypercoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000023 hypocoagulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000020971 positive regulation of blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229960003279 thiopental Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical class [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к тест-системам для проведения лабораторных исследований гемостатических свойств раневых покрытий. Раскрыта тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro, содержащая исследуемый материал, при этом в качестве исследуемого материала она содержит губку, адгезивно связанную с микропробиркой объемом от 0,1 до 15,0 мл, полученную из растворов, гелей, суспензий или других жидких лекарственных форм непосредственно в микропробирке путем замораживания исследуемого материала при атмосферном давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 мин, затем при температуре -50,0°С в течение 255 мин, последующей сублимационной сушки при давлении 90 мкбар и температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин с досушиванием полученных губок при давлении 90 мкбар, при температуре +35,0°С в течение 660 минут, обеспечивающей губке стандартный объем, вес, пористость и контактную поверхность, идентичную губкам большого размера, применяемым в экспериментах in vivo. Изобретение обеспечивает создание тест-системы для проведения лабораторных исследований гемостатических свойств раневых покрытий в форме губки in vitro с получением достоверной информации о показателях гемостаза и гемостатической активности, которые невозможно получить при исследовании гемостатической губки in vivo, за счет исключения структурных повреждений губки и активных компонентов. 4 з.п. ф-лы, 8 табл., 8 пр.
Description
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к тест-системам для проведения лабораторных исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro, дополняющих результаты экспериментов in vivo.
В настоящее время в уровне техники не представлены тест-системы для проведения лабораторных исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro, состоящие из микропробирки и адгезивно связанных с ней исследуемых образцов покрытий в форме губки. Такие системы, как правило, изготавливаются на месте в лабораториях путем помещения навески исследуемого покрытия в форме губки, содержащего основу или основу и активные вещества, в микропробирку на клеевую основу. Однако при приготовлении навесок невозможно стандартизировать образцы, повреждается структура губки и в микропробирке присутствует постороннее клеевое вещество, что приводит к увеличению погрешности при проведении исследований.
Известна тест-система для оценки функционального состояния гемостаза, содержащая термостатированную ячейку, в которую погружают пластинчатые электроды, соединенные с частотным генератором и блоком регистрации, и измеряют электропроводность помещенной в ячейку пробы крови при пропускании через нее переменного тока с частотой 200 Гц, по полученному изображению функциональной кривой электрокоагулограммы определяют следующие показатели: t1 - время, прошедшее от поступления порции крови в кювету до изменения амплитуды функциональной кривой в сторону ее уменьшения на 20 относительных единиц проводимости, t2 - время снижения амплитуды функциональной кривой на 100 ед., Т - время формирования фибрин-тромбоцитарной структуры сгустка и К=(t2-t1)/100 - интенсивность тромбинообразования, сравнивают их значения с нормой, которая составляет t1=8-14 мин, t2=22-28 мин, Т=54-65 мин, при снижении величины показателей относительно нормы определяют состояние гиперкоагуляции, при повышении величины показателей относительно нормы определяют состояние гипокоагуляции. Данный способ обеспечивает исследования лишь тромбинообразования и является недостаточно «чувствительным» вследствие того, что не все стороны гемостатического процесса исследуемого гемостаза возможно проанализировать за счет данной тест-системы.
Наиболее близким аналогом является тест-система для оценки гемостатических свойств хирургических материалов, содержащая кювету с фиксированной фибриновым клеем к ее дну коллагеновой губки, применяемой для аппликационного гемостаза, объемом 2 мм3. При этом для исследования используют метод электрокоагулографии нативной донорской крови. Анализ полученных данных проводится на основе сравнительной оценки процента укорочения времени конца свертывания крови (%ук Т2) по отношению к контрольному опыту (электрокоагулография нативной донорской крови в кювете без материалов). Статистически достоверно большая величина %ук Т2 при сравнительном исследовании аппликационных средств гемостаза свидетельствует о более выраженных гемостатических свойствах. Изобретение обеспечивает точность оценки (RU 2373532, 20.11.2009). К недостаткам данной тест-системы относится то, что при ее использовании не решена проблема повреждения структуры исследуемой губки и ее недостаточная стандартизация для процесса исследования, отчего страдает достоверность и точность проводимых исследований. Интенсивное механическое воздействие со стороны измерительной ячейки электрокоагулографа на форменные элементы крови приводит к их деструкции, тем самым способствует выходу веществ, участвующих в процессе свертывания крови. Вместе с тем, за счет механического воздействия, вследствие разрушения нитей фибрина, нарушается формирование фибриновой сети, что значительно снижает чувствительность, воспроизводимость и точность электрокоагулографии, делает невозможным выявление тонких сдвигов в сложной системе [Липатов В.А. К вопросу о методологии сравнительного изучения степени гемостатической активности аппликационных кровоостанавливающих средств / В.А. Липатов, С.В. Лазаренко, К.А. Сотников, Д.А. Северинов, М.П. Ершов // Новости хирургии - 2018. - Т. 26 - №1 - 81-95 с.].
Технический результат заключается в создании тест-системы, обеспечивающей проведение лабораторных исследований гемостатических свойств раневых покрытий в форме губки in vitro с большим объемом достоверной информации о показателях гемостаза и гемостатической активности исследуемых образцов стандартного объема, веса и пористости, полученных одновременно, за счет исключения структурных повреждений губки и активных компонентов.
Технический результат достигается тем, что создана тест-система для проведения лабораторных исследований гемостатических свойств раневых покрытий в форме губки in vitro, содержащая исследуемый материал, при этом в качестве исследуемого материала она содержит губку, адгезивно связанную с микропробиркой, объемом от 0,1 до 15,0 мл, полученную непосредственно в микропробирке путем замораживания исследуемого материала при атмосферном давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 мин, затем при температуре -50,0°С в течение 255 мин, с последующей сублимационной сушкой при давлении 90 μбар и температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин, с последующим досушиванием полученных губок при давлении 90 μбар при температуре +35,0°С в течение 660 мин, обеспечивающей исследуемой губке стандартный объем, вес, пористость и контактную поверхность идентичную губкам, применяемым в экспериментах in vivo.
В предпочтительном варианте исследуемая губка включает как минимум один гемостатически активный компонент.
В предпочтительном варианте исследуемая губка получена из раствора.
В предпочтительном варианте исследуемая губка получена из геля.
В предпочтительном варианте исследуемая губка получена из суспензии.
Тест-система создана следующим образом.
Для создания тест-системы используют губки, которые получают на основе природных или искусственных полимерных или белковых соединений, например, солей альгиновой кислоты или хитозана, или каррагинана, или целлюлозы, и других полимеров, из которых готовят растворы, гели, суспензии и другие жидкие лекарственные формы и помещают их в микропробирки для лиофильной сушки. Состав губок может включать в качестве активных веществ белки крови, соли и соединения на основе металлов, растительные экстракты, минеральные вещества, ингибиторы фибринолиза, факторы свертывания крови и другие. Значение рН итоговой смеси компонентов может варьироваться от 0,5 до 13,5.
Для создания тест-системы также предусмотрено использование микропробирок, применяемых в современной лабораторной практике, изготовленных из стекла, кварцевого стекла, полистирола или полипропилена, или других синтетических полимеров, применяемых в медицине, с коническим, круглым или плоским дном, градуированных или неградуированных, с защелкивающейся или винтовой крышкой, или пробкой, бесцветных или окрашенных, стерильных или нестерильных, объемом от 0,1 до 15,0 мл, в том числе и пробирок типа «эппендорф».
Заполненные с помощью пипеток-дозаторов одинаковыми объемами растворов или гелей, или суспензий, или других жидких лекарственных форм микропробирки помещают в лиофилизатор и подвергают оптимальному режиму заморозки с последующей вакуумной сушкой и досушиванием. В результате в микропробирках получают одинаковые по объему, массе и пористости губки, с контактной поверхностью, идентичной губкам, применяемым в экспериментах in vivo, используемые в дальнейшем для проведения тестов in vitro в условиях высокой достоверности показателей гемостаза без побочных эффектов.
Важнейшими параметрами при лиофильной сушке являются давление и температура. Процесс создания тест-системы проводят в три этапа: замораживание, первичную сушку и вторичную сушку. Каждый этап предъявляет конкретные требования к давлению и температуре. Первоначально продукт замораживают при температуре, достаточно низкой для того, чтобы обеспечить полную заморозку. На первичной стадии сушки должны быть созданы условия, благоприятные для лиофилизации. В то же время важным является сохранение характеристик продукта, поэтому необходимо, чтобы температура оставалась ниже определенного значения, которое называют критической температурой, составляющей -45°С. При температуре выше этого значения структура продукта разрушается, что приводит к усадке и растрескиванию. В идеале лиофильная сушка проводится при температурах чуть ниже критической -50°С. Давление в сушильной камере понижают, чтобы активировать процесс сушки.
Лиофилизация вызывает образование водяного пара в сушильной камере. Если пар не удалять из системы, он насыщается, и частицы льда перестают сублимироваться. Частицы пара удаляются посредством ледового конденсора. Главная задача ледового конденсора - собирать водяной пар и другие конденсируемые газы. Молекулы воды естественным образом перемещаются к ледовому конденсору, чему способствует разница значений давления пара.
Раствор, или гель, или суспензию, или другие жидкие лекарственные формы, изготовленные на основе природных или синтетических полимеров с добавлением или без добавления активных веществ, объемом от 0,1 до 15,0 мл с помощью пипетки-дозатора помещают в микропробирки. В частности, требуемое для экспериментов количество микропробирок помещают в лиофилизатор CS 15-0.7. Затем производят замораживание при атмосферном давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 мин, затем при температуре -50,0°С в течение 255 мин. После окончания режима замораживания производят лиофилизацию при давлении 90 μбар при температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин. После окончания режима лиофилизации производят досушивание полученных губок при давлении 90 μбар при температуре +35,0°С в течение 660 мин. В результате получают тест-системы, содержащие одинаковые по объему, весу и пористости образцы раневых покрытий в форме губки, с контактной поверхностью, идентичной губкам, применяемым в экспериментах in vivo, используемые в дальнейшем для проведения сравнительных методов исследования гемостатических свойств образцов раневых покрытий in vitro.
Представленные ниже примеры не являются ограничением объема прав в отношении тест-системы, поскольку она может содержать для проведения коагулологических исследований гемостатические губки, полученные также и из других природных (различные виды целлюлозы, крахмал, шелк, кератин и др.) и синтетических (полиакрилаты, поливинилалкоголь, поливинилпирролидон, полиуретан и др.) полимеров.
Пример 1.
Для получения тест-системы 0,1-2,0% раствор альгината натрия в дистиллированной воде объемом 0,1 мл с помощью пипетки-дозатора помещают в микропробирки объемом 0,2 мл. Требуемое для исследований количество микропробирок с 0,1-2,0% раствором альгината натрия в дистиллированной воде объемом 0,1 мл помещают в лиофилизатор CS 15-0.7. Затем производят замораживание при атмосферном давлении 1 бар при температуре +2,0°С в течение 330 минут, затем при температуре -50,0°С в течение 255 минут. После окончания режима замораживания производят лиофилизацию при давлении 90 μбар при температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин. После окончания режима лиофилизации проводят досушивание полученных губок при давлении 90 μбар, при температуре +35,0°С в течение 660 минут. В результате получены тест-системы, содержащие гемостатическую губку, адгезивно связанную с микропробиркой и одинаковые по объему (0,08-0,1 мл), весу (0,04-0,06 г) и пористости (50-100), с контактной поверхностью, идентичной губке, применяемой в экспериментах in vivo и используемые в дальнейшем для проведения сравнительных методов исследования гемостатических свойств образцов раневых покрытий in vitro.
Пример 2.
Для получения тест-системы 0,5-2,0% гель каппа-каррагинана в дистиллированной воде (ДВ) объемом 2,0 мл с помощью пипетки-дозатора помещают в микропробирки объемом 2,0 мл. Требуемое для исследований количество микропробирок с 0,5-2,0% гелем каппа-каррагинана в дистиллированной воде объемом 2,0 мл помещают в лиофилизатор CS 15-0.7. Затем производят замораживание при давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 минут, затем при температуре -50,0°С в течение 255 минут. После окончания режима замораживания производят лиофилизацию при давлении 90 μбар при температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин. После окончания режима лиофилизации проводят досушивание полученных губок при давлении 90 μбар, при температуре +35,0°С в течение 660 минут. В результате получены тест-системы, содержащие гемостатическую губку, адгезивно связанную с микропробиркой и одинаковые по объему (1,8-2,0 мл), весу (0,8-1 г) и пористости (50-100), с контактной поверхностью, идентичной губке, применяемой в экспериментах in vivo и используемые в дальнейшем для проведения сравнительных методов исследования гемостатических свойств образцов раневых покрытий in vitro.
Пример 3.
Для получения тест-системы 0,5-2,0% раствор хитозана в 0,5% уксусной кислоте объемом 0,2 мл с помощью пипетки-дозатора помещают в микропробирки объемом 0,2 мл. Требуемое для исследований количество микропробирок с 0,5-2,0% раствором хитозана в 0,5% уксусной кислоте объемом 0,2 мл помещают в лиофилизатор CS 15-0.7. Затем производят замораживание при давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 минут, затем при температуре -50,0°С в течение 255 минут. После окончания режима замораживания производят лиофилизацию при давлении 90 μбар при температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,° °С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин. После окончания режима лиофилизации проводят досушивание полученных губок при давлении 90 μбар, при температуре +35,0°С в течение 660 минут В результате получены тест-системы, содержащие гемостатическую губку, адгезивно связанную с микропробиркой, одинаковые по объему (0,18-0,2 мл), весу (0,08-0,1 г) и пористости (50-100), с контактной поверхностью, идентичной губке, применяемой в экспериментах in vivo и используемые в дальнейшем для проведения сравнительных методов исследования гемостатических свойств образцов раневых покрытий in vitro.
Пример 4.
Для получения тест-системы суспензию порошка крапивы в 2,0% растворе альгината натрия в дистиллированной воде объемом 5,0 мл с помощью пипетки-дозатора помещают в микропробирки объемом 5,0 мл. Требуемое для исследований количество микропробирок с суспензией порошка крапивы в 2,0% растворе альгината натрия объемом 5,0 мл помещают в лиофилизатор CS 15-0.7. Затем производят замораживание при давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 минут, затем при температуре -50,0°С в течение 255 минут. После окончания режима замораживания производят лиофилизацию при давлении 90μбар при температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин. После окончания режима лиофилизации проводят досушивание полученных губок при давлении 90 μбар, при температуре +35,0°С в течение 660 минут. В результате получены тест-системы, содержащие гемостатическую губку, адгезивно связанную с микропробиркой и одинаковые по объему (4,8-5,0 мл), весу (2,1-2,5 г) и пористости (50-100), с контактной поверхностью, идентичной губке, применяемой в экспериментах in vivo и используемые в дальнейшем для проведения сравнительных методов исследования гемостатических свойств образцов раневых покрытий in vitro.
Гемостатические исследования проводили in vivo на экспериментальных животных, в частности, на кроликах, породы Шиншилла, которые являются стандартными объектами для доклинических испытаний и рекомендуются для данных экспериментов в нормативном документе «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Часть первая. - М.: Гриф иК, 2012, с. 453-479.
Животные приобретались в филиале «Электрогорский» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России. Прием животных в биоклинику производили при наличии ветеринарного свидетельства.
Подбор животных в группы осуществляли произвольно методом «случайных чисел», используя в качестве критерия массу тела, которая составляла 3000-5000 г. Данные острые эксперименты на кроликах проводили под тиопенталовым наркозом. Время остановки кровотечения определяли по секундомеру. Критерием оценки момента остановки кровотечения являлось полное отсутствие проникновения крови через поверхность фиксированной на ране губки 25 мм в диаметре, применяемой in vivo. В течение эксперимента животные находились под глубоким наркозом и ощущения боли не испытывали. Животных выводили из эксперимента медленным внутривенным введением высокой дозы указанного наркотического средства.
Основным критерием эффективности образцов в форме губки в экспериментах in vivo была принята гемостатическая активность (ГА) как среднее арифметическое двух показателей: ГА по времени остановки кровотечения (ВОК) и ГА по объему кровопотери. Гемостатическая активность по объему кровопотери и по ВОК для марлевого тампона (контроль) составляла 0%. Гемостатическую активность по ВОК (ГAt, %) определяли по формуле 1:
где t2 - ВОК при наложении образца, с; t1 - ВОК при наложении контроля, с. Гемостатическую активность по объему кровопотери (ГАV, %) определяли по формуле 2:
где V2 - объем кровопотери при наложении образца, мл; V1 - объем кровопотери при наложении контроля, мл.
Гемостатическую активность (ГА, %) определяли как среднее арифметическое значение между гемостатической активностью по ВОК и по объему кровопотери (Формула 3):
ГА определяли для каждой опытной точки. За окончательный результат испытаний принимали среднее арифметическое результатов пяти испытаний каждого из образцов.
Методы сравнительных коагулологических исследований in vitro гемостатических губок, применяемых in vivo, и аналогичных губок, полученных по примерам 1, 2, 3, 4.
1. Подсчет количества тромбоцитов в крови проводили с помощью гематологического анализатора MEK-7222 J/K («Nihon Kohden»);
2. Оценка концентрации фибриногена в плазме крови по Clauss проводилась с помощью набора реагентов «Тех-Фибриноген-тест» (фирма «Технология-Стандарт») на автоматическом коагулометре «Sysmex СА-1500» (фирма «Sysmex Corporation»);
3. Интегральная оценка системы гемостаза изучалась по данным калиброванной тромбографии [Hemker Н., Giesen P., Al Dieri R. et al. Calibrated automated thrombin generation measurement in clotting plasma. // Pathophysiol. Haemost. Thromb. - 2003. - Vol. 33, №1. - P. 4-15.] (синоним - тест генерации тромбина (ТГТ)). Для выполнения ТГТ использовался планшетный флюориметр Fluoroskan Ascent (фирма «ThermoFisher SCIENTIFIC»), оснащенный диспенсером, с программным обеспечением «Thrombinoscope 3.0.0.26». Коагуляция исследуемой плазмы крови осуществлялась в присутствии 5 пмоль тканевого фактора и 4 мкмоль фосфолипидов (набор реагентов PPP-Reagent 5 рМ, Thrombin Calibrator, FluCa-Kit). Генерация тромбина в бедной тромбоцитами плазме крови регистрировалась посредством измерения сигнала флуорогенного субстрата (Z-Gly-Gly-Arg-AMC) (здесь и далее по тексту):
- Lagtime - (время запаздывания, мин) - характеризует начало образования тромбина, достаточного для образования первых нитей фибрина;
- ЕТР - эндогенный тромбиновый потенциал - площадь кривой генерации тромбина, учитывающей особенности инактивации этого фермента;
- Peak thrombin - пиковая концентрация тромбина, нмоль/л - максимальная концентрация тромбина в единицу времени;
- ttPeak - время достижения пика тромбина в минутах;
4. Тромбоэластометрия (ТЭМ) проводилась с применением тромбоэластометра 4-канального Rotem Gamma, фирмы «фирма Tem Innovations GmbH» и реагента «star-ТЕМ» в режиме «Natem», (фирма «Pentapharm GmbH»).
Определяемые в эксперименте параметры (здесь и далее по тексту):
- СТ, с - активация факторов свертывания крови (время в с до амплитуды 2 мм)
- Угол-альфа, градус - скорость образования сгустков фибрина
- MCF, мм - максимальная плотность сгустка (максимальная амплитуда)
- CFT, с - время превращения фибриногена в фибрин (время в с от амплитуды в 2 мм до амплитуды в 20 мм)
- А10, мм - плотность сгустка через 10 мин (амплитуда через 10 мин)
Пример 5.
Проведен сравнительный анализ гемостатических свойств губки, фиксированной на ране in vivo и полученной по примеру 1 тест-системы на основе 0,5-2,0% раствора альгината натрия в дистиллированной воде объемом 0,1 мл. Результаты приведены в таблице 1а,б. 
*ГА - гемостатическая активность
**ДВ - дистиллированная вода 
*ГА - гемостатическая активность
**ДВ - дистиллированная вода
Как видно из таблицы 1 а,б, полученная по примеру 1 тест-система на основе 0,5-2,0% раствора альгината натрия в дистиллированной воде объемом 0,1 мл обеспечивает достоверную информацию, получаемую одновременно в отношении большого количества показателей гемостаза и гемостатической активности. В частности, в исследуемой крови обнаружено снижение количества тромбоцитов, СТ, уменьшение угла-альфа, увеличение ЕТР по отношению к контролю. То есть при коагулологических исследованиях заявленная тест-система, содержащая губку на основе 0,5-2,0% альгината натрия, непосредственно созданная в микропробирке путем сублимационной сушки, аналогичной по структуре губке, применяемой in vivo, позволяет избежать структурных повреждений губки и активных компонентов и показывает высокую достоверность гемостатической активности данной тест-системы. Такие данные невозможно получить при исследовании непосредственно гемостатической губки in vivo.
Пример 6.
Проведен сравнительный анализ гемостатических свойств аналогичной губки большого размера, используемой in vivo и полученной по примеру 2 тест-системы на основе 0,5-2,0% геля на основе каппа-каррагинана объемом 2,0 мл. Результаты приведены в таблице 2 а,б. 
Как видно из таблицы 2 а,б, полученная по примеру 2 тест-система на основе 0,5-2,0% геля каппа-каррагинана в дистиллированной воде объемом 2,0 мл, обеспечивает достоверную информацию, получаемую одновременно в отношении большого количества показателей гемостаза и гемостатической активности. В частности, в исследуемой крови обнаружено уменьшение количества тромбоцитов, СТ, CFT по отношению к контролю. То есть при коагулологических исследованиях заявленная тест-система, содержащая губку на основе 0,5-2,0% геля каппа-каррагинана в дистиллированной воде объемом 2,0 мл, непосредственно созданная в микропробирке путем сублимационной сушки, аналогичной по структуре губке, применяемой in vivo, позволяет избежать структурных повреждений губки и активных компонентов и показывает высокую достоверность гемостатической активности данной тест-системы. Такие данные невозможно получить при исследовании непосредственно гемостатической губки in vivo.
Пример 7.
Проведен сравнительный анализ гемостатических свойств аналогичной губки большого размера, используемой in vivo и полученной по примеру 3 тест-системы на основе 0,5-2,0% раствора хитозана в 0,5% уксусной кислоте объемом 0,2 мл. Результаты приведены в таблице 3 а,б.
*УК - уксусная кислота 
*УК - уксусная кислота
Как видно из таблицы 3 а,б, полученная по примеру 3 тест-система на основе 0,5-2,0% раствора хитозана в 0,5% уксусной кислоте объемом 0,2 мл, также позволяет получить одновременно большое количество показателей гемостаза и гемостатической активности. Исследование данного образца крови показало уменьшение количества тромбоцитов, увеличение угла-альфа, снижение CFT по отношению к контролю. Таким образом, данная тест-система, содержащая губку на основе 0,5% и 2,0% раствора хитозана в 0,5% уксусной кислоте, непосредственно созданная в микропробирке путем сублимационной сушки, аналогичной по структуре губке, применяемой in vivo, позволяет избежать структурных повреждений губки и активных компонентов и показывает высокую достоверность гемостатической активности данной тест-системы. Такие данные невозможно получить при исследовании непосредственно гемостатической губки in vivo.
Пример 8.
Проведен сравнительный анализ гемостатических свойств аналогичной губки большого размера, используемой in vivo и полученной по примеру 4 тест-системы на основе суспензии порошка крапивы в 2,0% растворе альгината натрия в дистиллированной воде объемом 5,0 мл. Результаты приведены в таблице 4 а, б.
Как видно из таблицы 4 а,б, полученная по примеру 4 тест-система на основе суспензии порошка крапивы в 2,0% растворе альгината натрия в дистиллированной воде объемом 5,0 мл, обеспечивает одновременное получение большого количества показателей гемостаза и гемостатической активности. Исследование данного образца крови показало уменьшение количества тромбоцитов, увеличение угла-альфа, снижение CFT по отношению к контролю. Таким образом, в результате коагулологических исследований заявленная тест-система, содержащая губку на основе суспензии из раствора альгината натрия 2,0%+лиофильно высушенного порошка крапивы (100 и 200 мг) в дистиллированной воде, непосредственно созданная в микропробирке путем сублимационной сушки, аналогичной по структуре губке, применяемой in vivo, позволяет избежать структурных повреждений губки и активных компонентов и показывает высокую достоверность гемостатической активности данной тест-системы. Такие данные невозможно получить при исследовании непосредственно гемостатической губки in vivo, несмотря на ее большие размеры.
Полученные результаты позволяют сделать вывод, что такие тест-системы обладают высокой достоверностью, обеспечивают одновременное получение большого количества оцениваемых показателей гемостаза и гемостатической активности, протекающей на поверхности губок, и могут быть использованы для проведения коагулологических исследований образцов губок, полученных также и из других природных (различные виды целлюлозы, крахмал, шелк, кератин и др.) и синтетических (полиакрилаты, поливинилалкоголь, поливинилпирролидон, полиуретан и др.) полимеров.
Claims (5)
1. Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro, содержащая исследуемый материал, отличающаяся тем, что в качестве исследуемого материала она содержит губку, адгезивно связанную с микропробиркой объемом от 0,1 до 15,0 мл, полученную непосредственно в микропробирке путем замораживания исследуемого материала при атмосферном давлении 1 бар, при температуре +2,0°С в течение 330 мин, затем при температуре -50,0°С в течение 255 мин, последующей сублимационной сушки при давлении 90 мкбар и температуре -50,0°С в течение 60 мин, затем при температуре -20,0°С в течение 1850 мин, затем при температуре +5,0°С в течение 780 мин с досушиванием полученных губок при давлении 90 мкбар, при температуре +35,0°С в течение 660 минут, обеспечивающей губке стандартный объем, вес, пористость и контактную поверхность, идентичную губкам, применяемым в экспериментах in vivo.
2. Тест-система по п. 1, отличающаяся тем, что исследуемая губка включает как минимум один гемостатически активный компонент.
3. Тест-система по п. 1, отличающаяся тем, что исследуемая губка получена из раствора.
4. Тест-система по п. 1, отличающаяся тем, что исследуемая губка получена из геля.
5. Тест-система по п. 1, отличающаяся тем, что исследуемая губка получена из суспензии.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019109698A RU2695075C1 (ru) | 2019-04-02 | 2019-04-02 | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro |
| EA201900453A EA201900453A3 (ru) | 2019-04-02 | 2019-09-27 | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro |
| EA201900454A EA201900454A3 (ru) | 2019-04-02 | 2019-09-27 | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019109698A RU2695075C1 (ru) | 2019-04-02 | 2019-04-02 | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2695075C1 true RU2695075C1 (ru) | 2019-07-19 |
Family
ID=67309506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019109698A RU2695075C1 (ru) | 2019-04-02 | 2019-04-02 | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (2) | EA201900454A3 (ru) |
| RU (1) | RU2695075C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4153512A (en) * | 1976-04-07 | 1979-05-08 | Fisher Scientific Company | Storage stable antibiotic susceptibility test kit and method of testing |
| RU2373532C1 (ru) * | 2008-09-09 | 2009-11-20 | Андрей Алексеевич Нетяга | Способ сравнительной оценки гемостатических свойств хирургических материалов |
| US20110204084A1 (en) * | 1998-11-16 | 2011-08-25 | Aronowitz Jack L | Sample Collection System and Method for Use Thereof |
-
2019
- 2019-04-02 RU RU2019109698A patent/RU2695075C1/ru active
- 2019-09-27 EA EA201900454A patent/EA201900454A3/ru unknown
- 2019-09-27 EA EA201900453A patent/EA201900453A3/ru unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4153512A (en) * | 1976-04-07 | 1979-05-08 | Fisher Scientific Company | Storage stable antibiotic susceptibility test kit and method of testing |
| US20110204084A1 (en) * | 1998-11-16 | 2011-08-25 | Aronowitz Jack L | Sample Collection System and Method for Use Thereof |
| RU2373532C1 (ru) * | 2008-09-09 | 2009-11-20 | Андрей Алексеевич Нетяга | Способ сравнительной оценки гемостатических свойств хирургических материалов |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЛИПАТОВ В.А. и др. К ВОПРОСУ О МЕТОДОЛОГИИ СРАВНИТЕЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ СТЕПЕНИ ГЕМОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АППЛИКАЦИОННЫХ КРОВООСТАНАВЛИВАЮЩИХ СРЕДСТВ // Новости хирургии, 2018, Т.26, стр.81-95. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201900454A3 (ru) | 2020-12-30 |
| EA201900453A3 (ru) | 2020-12-30 |
| EA201900453A2 (ru) | 2020-10-30 |
| EA201900454A2 (ru) | 2020-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8097403B2 (en) | Freeze-dried platelets, method of making and method of use as a diagnostic agent | |
| Cappiello et al. | A novel in vitro wound healing assay to evaluate cell migration | |
| US20060035383A1 (en) | Dry platelet preparations for use in diagnostics | |
| US20110183311A1 (en) | Dry platelet preparations for use in diagnostics | |
| JPH07506897A (ja) | 血液凝固および溶解期間中に凝血弾性係数，収縮力発生および赤血球柔軟性を評価する装置および方法 | |
| JP2017520757A (ja) | 線維素溶解及び線溶亢進を検出するための方法及び試薬 | |
| JP2017075960A (ja) | 凝固制御剤およびそれを含む装置 | |
| US20230112136A1 (en) | Canine blood platelet preparations | |
| CN109541242A (zh) | 一种高岭土试剂质控品及其制备方法和应用 | |
| Fields et al. | Good platelets gone bad: the effects of trauma patient plasma on healthy platelet aggregation | |
| Kamyszek et al. | The effect of pathogen inactivation on cryoprecipitate: a functional and quantitative evaluation | |
| Chernyshenko et al. | Preparation of highly-concentrated autologous platelet-rich plasma for biomedical use | |
| RU2695075C1 (ru) | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro | |
| Brambel | THROMBOPLASTIC REAGENT: DEVELOPMENT OF A MORE SUITABLE PREPARATION FOR MEASURING ACCELERATED CLOTTING TENDENCY AND FOR USE FOLLOWING ADMINISTRATION OF DICOUMARIN (3, 3′-METHYLENE-BIS-[4-HYDROXYCOUMARIN]) | |
| EA040347B1 (ru) | Тест-система для проведения исследований гемостатических свойств локальных раневых покрытий in vitro | |
| RU2701195C1 (ru) | Способ получения искусственных губок в микропробирках для проведения лабораторных исследований in vitro | |
| JP4105793B2 (ja) | 生物系による試験法 | |
| US3293134A (en) | Diagnostic reagent composition for determining blood coagulation factors and method of use | |
| Lorenz et al. | Platelet function in the newborn | |
| Loreth et al. | Comparison of two different blood sample tubes for platelet function analysis with the Multiplate® system | |
| Mischke | Laboratory evaluation and interpretation of haemostasis in small animals | |
| Nygren et al. | Different kinetics of the respiratory burst response in granulocytes, induced by serum from blood coagulated in contact with polymer materials | |
| US20230358769A1 (en) | Clot retraction assay for quality monitoring of platelet products | |
| Fernández-Simón et al. | RhoA/ROCK2 signalling is enhanced by PDGF-AA in fibro-adipogenic progenitor cells in DMD | |
| Petzoldt et al. | A rapid quantitative method based on motility of bull sperm cells for in vitro toxicity testing of biomaterials |