RU2692917C1 - Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента - Google Patents

Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента Download PDF

Info

Publication number
RU2692917C1
RU2692917C1 RU2018123300A RU2018123300A RU2692917C1 RU 2692917 C1 RU2692917 C1 RU 2692917C1 RU 2018123300 A RU2018123300 A RU 2018123300A RU 2018123300 A RU2018123300 A RU 2018123300A RU 2692917 C1 RU2692917 C1 RU 2692917C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
biomaterial
reagent
dialdehyde
water
volume
Prior art date
Application number
RU2018123300A
Other languages
English (en)
Inventor
Дарья Геннадьевна Рыкова
Анна Сергеевна Сапега
Светлана Константиновна Толмачева
Original Assignee
Дарья Геннадьевна Рыкова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дарья Геннадьевна Рыкова filed Critical Дарья Геннадьевна Рыкова
Priority to RU2018123300A priority Critical patent/RU2692917C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2692917C1 publication Critical patent/RU2692917C1/ru

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается технологии фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента. Способ фиксации и хранения биоматериала включает промывание водой биоматериала с последующей фиксацией его путем полного погружения в 10% водный раствор диальдегида по объему, превышающему объем биоматериала не менее чем в 10 раз, с заменой реагента на 7, 14 и 21 сутки каждый раз промывая биоматериал после удаления реагента проточной водой. На 14-е сутки производят замену реагента, имеющего следующий состав исходных компонентов (мас.%): диальдегид – 24,97%, дистиллированная вода – 74,93%, эозин K – 0,0032%, карбоксиметилцеллюлоза – 0,0968%, с выдержкой последнего в растворе диальдегида не менее 12 часов. На 21-е сутки производят замену реагента, имеющего следующий состав исходных компонентов (мас.%): диальдегид – 24,271%, дистиллированная вода – 72,813%, эозин K – 0,0031%, глицерин - 2,9129%, причем каждый раз биоматериал заливают реагентом, превышая объем биоматериала в 10 раз, предварительно промывая его после удаления реагента проточной водой. Предлагаемый способ фиксации и хранения биоматериала обеспечивает увеличение срока хранения органов любых размеров, а также позволяет сохранить цвет и органолептические свойства мягких тканей препаратов. 1 табл., 2 пр.

Description

Изобретение относится к медицине и касается технологии фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента. Изобретение обеспечивает увеличение срока хранения органов любых размеров, а также позволяет сохранить цвет и органолептические свойства мягких тканей препаратов.
Известен способ консервации тела человека или животного (патент РФ №2415572, А01N 1/00, опубл. 2011), в котором применяется по меньшей мере одно соединение формулы (I):
Figure 00000001
, в которой R и R', одинаковые или разные, означают линейный или разветвленный алкильный радикал, включающий от 1 до 5 атомов углерода, и n представляет собой индекс, имеющий значение, включающее от 1 до 8, и/или формулы (II):
где R2, R3, R4 и R5 означают, независимо, линейный или разветвленный алкильный радикал, включающий от 1 до 8 атомов углерода, или R2 и R5 и/или R3 и R4 вместе и с двумя атомами кислорода, с которыми они связаны, образуют насыщенный или ненасыщенный 5- или 6-членный гетероцикл, возможно, замещенный одной или несколькими группами, выбираемыми среди ОН, СН2ОН или линейного или разветвленного алкильного радикала, включающего от 1 до 8 атомов углерода; и R1 означает группу CH-R6-CH, где R6 образует связь или означает линейный или разветвленный алкиленовый радикал, включающий от 1 до 5 атомов углерода, или насыщенный или ненасыщенный карбоцикл, включающий от 3 до 8 атомов углерода; или R1 означает насыщенный или ненасыщенный карбоцикл, включающий от 3 до 8 атомов углерода; для консервации тела человека или животного и/или для бальзамирования мертвых тел. Консервация осуществляется путем введения в труп композиции, содержащей указанные соединения и глицерин.
Недостатком известного способа является дороговизна данной композиции в сравнении с заявляемым реагентом и невозможность длительного хранения консервированного тела человека и/или животного более 6 дней.
Известен способ, в котором используют жидкость (см. патент US №20030206884 A1, Кл.A01N 1/00, 2003), состоящую из водорастворимого полимера (на основе полисахаридов каррагенана, целлюлозы), нетоксичного дезинфектанта (поливинилпирролидон-йодина, солей хлоргексидина, гексахлоррофена, цетримида, триклозана), красителя кармина, смягчителя (глицерина, этиленгликоля, пропиленгликоля), комплексообразователя (ЭДТА, солей фосфорной кислоты, солей лимонной кислоты, солей угольной кислоты), антикоагулянта цитрата натрия, ароматизирующего вещества (масло розы, сандалового дерева, герани).
Недостатком известного аналога является необходимость хранения тела бальзамированного трупа при температуре 12-14°С, невозможность хранения более 21 суток, невозможность замены жидкости после проявления процессов разложения по истечению 21 суток.
Известен способ консервирования влажных музейных препаратов (см. патент РФ №2180480, Кл.A01N 1/02, 2002) с использованием раствора содержащего 69,99% воды, 15% формалина, 10% 95(спирта, 5% глицерина, 0,01% весового состава хлороформа. Это позволяет увеличить срок сохранения растворов и препаратов без снижения демонстрационных качеств. Предложенный раствор обладает длительным консервирующим свойством, не изменяя демонстрационных качеств препаратов, препараты выдерживают температуру до -5°С, по мере производственной необходимости из музейного препарата можно вырезать нужный участок для проведения гистоморфологических исследований.
Недостатками известного аналога является использование формалина, контакт с формалином оказывает заметное негативное воздействие на глаза, дыхательные пути, кожные покровы, репродуктивные органы, необходимо специальное помещение для работы с формалином. Более того, сам формалин при фиксации имеет ограниченную проникающую способность и очень высокие дубящие свойства, что негативно влияет на зафиксированные препараты.
Известен способ консервации биологических органов (см. патент РФ №2362299, Кл. A01N 1/02, 2009), которые предназначены для трансплантации. Способ консервирования биологических органов включает сохранение в контейнере емкости с биологическим органом, снабженным перфузатом. Контейнер изготавливают из материала с модулем Юнга не менее 216 ГПа, стенки которого имеют толщину с пределом прочности 0,15-0,85 ГПа, при этом контейнер на 80-85% его объема заливают дистиллированной водой, помещают заполненную перфузатом и выполненную из полимерного материала, например полиэтилена, емкость с биологическим объектом в центре верхней трети объема контейнера, доливают дистиллированную воду до полного объема контейнера, герметизируют и охлаждают до температуры -20 - -22°С в течение 1-1,5 часа со скоростью 0,3-0,5 град/мин.
Недостатками известного способа является применение специальной емкости с указанными техническими характеристиками, что требует дополнительных затрат при осуществлении способа.
Известен способ изготовления и хранения музейных анатомических влажных макропрепаратов (см. патент РФ №2566648, Кл. A01N 1/02, 2015), выбранный в качестве прототипа. Способ включает промывание препарата водой с дальнейшей фиксацией препарата путем полного погружения в емкость с раствором химического реагента, с последующей заменой реагента на свежий. При приготовлении макропрепарата фиксацию осуществляют путем его погружения в 10% водный раствор глиоксаля по объему, который превышает объем макропрепарата не менее, чем в 10 раз. Замена реагента производится трижды на 7, 14, 21 сутки, каждый раз промывая макропрепарат после удаления реагента проточной водой, для музейных экспонатов, фиксация которых осуществлялась 10% раствором формалина, формалин сливают, а перезаливку на 14, 28 и 42 сутки проводят 10% водным раствором глиоксаля.
Недостатком указанного прототипа является низкая скорость проникновения реагента на всю глубину ткани биоматериала, низкая эластичность препарата после использования реагента, уменьшение размеров препарата.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа для фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента, применение которого позволяет сохранить целостность биоматериала, в том числе биологические форму и его цвет, сохраняя при этом естественный вид раствора.
Под нетоксичным реагентом понимается последовательное применение 3-ех растворов, содержащих водный раствор диальдегида с функциональными добавками.
Поставленная задача решается тем, что способ включает промывание водой биоматериала с последующей фиксацией его путем полного погружения в 10% водный раствор диальдегида по объему, превышающему объем биоматериала не менее, чем в 10 раз, с заменой реагента на 7 сутки, промывая биоматериал после удаления реагента проточной водой. В отличие от прототипа на 14-е и 21 сутки производят замену реагента, заливая биоматериал раствором, представляющий собой водный раствор диальдегида с функциональными добавками, превышающим объем биоматериала в 10 раз, предварительно промывая биоматериал после удаления реагента проточной водой.
На 14-е сутки производят замену реагента, заливая биоматериал раствором, содержащим Эозин К и карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ), с выдержкой КМЦ в растворе диальдегида не менее 12 часов, при следующем соотношении исходных компонентов, масс.%:
Диальдегид - 24,97%
Дистиллированная вода - 74,93%
Эозин К - 0,0032%
КМЦ - 0,0968%
Для приготовления указанного раствора была использована следующая схема приготовления
• растворение диальдегида в воде.
• растворение КМЦ в растворе диальдегида, при перемешивании (до отсутствия взвешенных частиц и неоднородностей в растворе), время набухания - не мене 12 часов.
Для увеличения водоудержания и повышения вязкости (в пределах нормы) был добавлен КМЦ в раствор с диальдегидом.
На 21-е сутки производят замену реагента, заливая биоматериал раствором, содержащим Эозин К и глицерин, превышающим объем биоматериала в 10 раз, предварительно промывая биоматериал после удаления реагента проточной водой при следующем соотношении исходных компонентов, масс.%:
Диальдегид - 24,271%
Дистиллированная вода - 72,813%
Эозин К- 0,0031%
глицерин - 2,9129%
Для приготовления указанного раствора была использована следующая схема приготовления средства:
• Растворение красителя Эозина К в воде
• Смешение раствора красителя с глицерином
• Смешение раствора глицерина и красителя с диальдегидом.
Со временем биоматериал теряет свой цвет, что мешает исследованию. Следовательно, было принято решение добавить краситель в состав раствора для поддержания внешнего вида биоматериала. А также для поддержания эластичности кожных покровов был добавлен глицерин в состав.
Пример конкретного использования способа приведен ниже:
Пример 1
В качестве биоматериала было использовано человеческое сердце, изъятое после вскрытия трупа, промытое проточной водой 1-2 минуты до «чистых вод». После промывания объект помещают в емкость и заливают 10% раствором диальдегида до полного погружения объекта в раствор. При этом объем раствора должен превышать объем биологического объекта не менее, чем в 10 раз. Далее, через 7 дней после помещения объекта в емкость с раствором, раствор сливают для утилизации, промывают емкость и объект проточной водой до чистоты и вновь заливают десятикратным по объему водным раствором диальдегида, далее, перезаливку реагента вышеописанным образом осуществляют на 14 и 21 сутки, после чего емкость герметично закрывают. На 14-е сутки производят замену реагента, заливая сердце раствором содержащим Эозин К и карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ), превышающим объем сердцав 10 раз, предварительно промыв его проточной водой при следующем соотношении исходных компонентов, масс.%: диальдегид - 24,97%, дистиллированная вода - 74,93%, Эозин К - 0,0032%, КМЦ - 0,0968%. На 21-е сутки производят замену реагента, заливая сердце раствором, содержащим Эозин К и глицерин, превышающим объем сердца в 10 раз, предварительно промыв его после удаления проточной водой при следующем соотношении исходных компонентов, масс.%: диальдегид - 24,271%, дистиллированная вода - 72,813%, Эозин К- 0,0031%, глицерин - 2,9129%.
Пример 2
По аналогии с примером 1 для реализации заявленного способа в качестве биоматериала были использованы печень, почки, и головной мозг.
В таблице 1 проведена сравнительная характеристика качества фиксации биологического материала (см. в графической части).
В качестве объектов исследования были взяты: паренхиматозные органы человека (печень, почки), сердце и головной мозг. Органы промывали 2 минуты под проточной водой, затем заливали реагентом до полного погружения. Раствор при этом превышал объем органа в 10 раз. Через 7 дней после помещения органов в раствор старый раствор утилизировали, а органы промывали проточной водой и повторяли процедуру. Контроль макроструктуры органов осуществляли визуально и тактильно через 2 недели, 1 месяц, 3 месяца.
Фиксация биологических объектов в реагенте в течение периода наблюдения признана отвечающей требованиям к изготовлению и хранению влажных музейных и учебных препаратов. Следует отметить, что проникающая способность средства оказалась выше по сравнению с раствором диальдегида без функциональных добавок.
Преимуществом заявленного изобретения является разработка малоопасного реагента для фиксации биоматериала, не оказывающего канцерогенное воздействие на человека, обладающего высокой проникающей способностью и обеспечивающего сохранение исходной формы и цвета биоматериала, снижение токсикологической нагрузки на окружающую среду и персонал.

Claims (1)

  1. Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента, включающий промывание водой биоматериала с последующей фиксацией его путем полного погружения в 10% водный раствор диальдегида по объему, превышающему объем биоматериала не менее чем в 10 раз, с заменой реагента на 7 сутки, промывая биоматериал после удаления реагента проточной водой, отличающийся тем, что на 14-е сутки производят замену реагента, при следующем соотношении исходных компонентов, мас.%: диальдегид – 24,97%, дистиллированная вода – 74,93%, эозин K – 0,0032%, карбоксиметилцеллюлоза – 0,0968%, с выдержкой последнего в растворе диальдегида не менее 12 часов, и на 21-е сутки производят замену реагента, при следующем соотношении исходных компонентов, мас.%: диальдегид – 24,271%, дистиллированная вода – 72,813%, эозин K – 0,0031%, глицерин - 2,9129%, причем каждый раз биоматериал заливают реагентом, превышая объем биоматериала в 10 раз, предварительно промывая его после удаления реагента проточной водой.
RU2018123300A 2018-06-27 2018-06-27 Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента RU2692917C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018123300A RU2692917C1 (ru) 2018-06-27 2018-06-27 Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018123300A RU2692917C1 (ru) 2018-06-27 2018-06-27 Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2692917C1 true RU2692917C1 (ru) 2019-06-28

Family

ID=67251734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018123300A RU2692917C1 (ru) 2018-06-27 2018-06-27 Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2692917C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2814723C1 (ru) * 2023-11-23 2024-03-04 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ заключения биоматериала в желатиновую среду для временного сохранения и последующего сканирования на компьютерном томографе

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5968497A (en) * 1995-03-09 1999-10-19 Universidad Complutense De Madrid Compositions containing dialkyl (C1 -C6)-ketone peroxide for the preservation of animal and human dead tissues
RU2415572C1 (ru) * 2006-12-27 2011-04-10 Аркема Франс Применение соединений формул (i) и/или (ii) для консервации тела человека или животного, содержащая их композиция и способ консервации
US8015677B2 (en) * 2000-12-01 2011-09-13 Aard-Balm Limited Embalming fluid
RU2438307C2 (ru) * 2010-04-13 2012-01-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ" Способ окрашивания и хранения костных препаратов, содержащих тонкие нервы
RU2467698C2 (ru) * 2009-12-25 2012-11-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Способ восстановления и сохранения естественной окраски кожных покровов и мягких тканей макропрепаратов
RU2566648C1 (ru) * 2014-11-10 2015-10-27 государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) Способ изготовления и хранения музейных анатомических влажных макропрепаратов
CN105052891A (zh) * 2015-07-16 2015-11-18 内蒙古科技大学包头医学院 解剖学内脏标本的长期保存方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5968497A (en) * 1995-03-09 1999-10-19 Universidad Complutense De Madrid Compositions containing dialkyl (C1 -C6)-ketone peroxide for the preservation of animal and human dead tissues
US8015677B2 (en) * 2000-12-01 2011-09-13 Aard-Balm Limited Embalming fluid
RU2415572C1 (ru) * 2006-12-27 2011-04-10 Аркема Франс Применение соединений формул (i) и/или (ii) для консервации тела человека или животного, содержащая их композиция и способ консервации
RU2467698C2 (ru) * 2009-12-25 2012-11-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Способ восстановления и сохранения естественной окраски кожных покровов и мягких тканей макропрепаратов
RU2438307C2 (ru) * 2010-04-13 2012-01-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ" Способ окрашивания и хранения костных препаратов, содержащих тонкие нервы
RU2566648C1 (ru) * 2014-11-10 2015-10-27 государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) Способ изготовления и хранения музейных анатомических влажных макропрепаратов
CN105052891A (zh) * 2015-07-16 2015-11-18 内蒙古科技大学包头医学院 解剖学内脏标本的长期保存方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2815065C1 (ru) * 2023-02-07 2024-03-11 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Тюменский Государственный Медицинский Университет" Министерства Здравоохранения Российской Федерации Состав для восстановления и консервации препаратов кожного покрова
RU2814723C1 (ru) * 2023-11-23 2024-03-04 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ заключения биоматериала в желатиновую среду для временного сохранения и последующего сканирования на компьютерном томографе

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5071741A (en) Cryoprotective agent and its use in cryopreservation of cellular matter
JPH01246201A (ja) 臓器保存用溶液
JP6244031B2 (ja) 無細胞コラーゲン組織及び無細胞コラーゲン組織を含む人工弁膜の処理方法
JP5796290B2 (ja) 膵島組織保存溶液及びそれを用いる方法
JP4908718B2 (ja) 細胞・組織保存液
JP2004513955A (ja) フラッシュ保存溶液(FlushPreservationSolution)
JP3694730B2 (ja) 組織の冷却保存液
Daniel et al. Extracorporeal perfusion of isolated organs of large animals-Bridging the gap between in vitro and in vivo studies
ES2949014T3 (es) Uso de una disolución que comprende PEG para la conservación de células madre
JP2021534787A (ja) 試料と細胞外氷との直接接触を防ぐのに有効な凍結保存装置
RU2692917C1 (ru) Способ фиксации и хранения биоматериала с использованием высокоэффективного и нетоксичного реагента
RU2566648C1 (ru) Способ изготовления и хранения музейных анатомических влажных макропрепаратов
WO2006057876A2 (en) Methods and solutions for tissue preservation
CA2169272A1 (en) Rinse solutions for organs and tissues
ES2657564T3 (es) Composición para conservar tejidos
CN113854280A (zh) 一种新型的低温保存液及其制备方法和应用
CN103999849A (zh) 一种哺乳动物睾丸组织冷冻保存的抗冻剂及冷冻-解冻方法
EP2154956A2 (de) Lösungen für die perfusion und konservierung von organen und geweben
RU2717657C1 (ru) Консервант для анатомических препаратов
US3551290A (en) Liquid preservative for corneal grafts,its method of preparation and use
CN109867802A (zh) 一种热响应膀胱细胞外基质生物活性水凝胶的制备方法
Harvey Cryobiology and the storage of teleost gametes
EP2991481A1 (en) Formulations containing poly (0-2-hydroxyethyl) starch for increasing the oxygen-content, stability and shelf life of an organ and tissue preservation solution
JP7411223B2 (ja) 被検体の透明化方法および透明化された被検体の製造方法
ES2807924T3 (es) Agente de conservación para órganos o tejidos y método de conservación para órganos o tejidos

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200628