RU2691648C1 - Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота - Google Patents
Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота Download PDFInfo
- Publication number
- RU2691648C1 RU2691648C1 RU2018119578A RU2018119578A RU2691648C1 RU 2691648 C1 RU2691648 C1 RU 2691648C1 RU 2018119578 A RU2018119578 A RU 2018119578A RU 2018119578 A RU2018119578 A RU 2018119578A RU 2691648 C1 RU2691648 C1 RU 2691648C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- surfactant
- chloroform
- flow
- centrifugation
- methanol
- Prior art date
Links
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 title claims abstract description 14
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 15
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 10
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.ClC(Cl)Cl SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 abstract 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 abstract 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 27
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 25
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 206010003598 Atelectasis Diseases 0.000 description 10
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 10
- 208000007123 Pulmonary Atelectasis Diseases 0.000 description 10
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 10
- 230000036541 health Effects 0.000 description 8
- 239000003580 lung surfactant Substances 0.000 description 8
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 5
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 4
- 206010006475 bronchopulmonary dysplasia Diseases 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 208000004221 Multiple Trauma Diseases 0.000 description 3
- 208000023637 Multiple injury Diseases 0.000 description 3
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 229940026289 infasurf Drugs 0.000 description 3
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 3
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000008745 Healthcare-Associated Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010028974 Neonatal respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 2
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 229940125369 inhaled corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 208000018773 low birth weight Diseases 0.000 description 2
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 2
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 229940063649 survanta Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 208000009079 Bronchial Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000014181 Bronchial disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 208000032571 Infant acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010001053 acute respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000001601 blood-air barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000009267 bronchiectasis Diseases 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 1
- 230000001269 cardiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009519 contusion Effects 0.000 description 1
- 229940092456 curosurf Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002389 essential drug Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 230000003434 inspiratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 201000002652 newborn respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000007114 proinflammatory cascade Effects 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002644 respiratory therapy Methods 0.000 description 1
- 208000026425 severe pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N suramin Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(S(O)(=O)=O)=C2C(NC(=O)C3=CC=C(C(=C3)NC(=O)C=3C=C(NC(=O)NC=4C=C(C=CC=4)C(=O)NC=4C(=CC=C(C=4)C(=O)NC=4C5=C(C=C(C=C5C(=CC=4)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)C)C=CC=3)C)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 FIAFUQMPZJWCLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/42—Respiratory system, e.g. lungs, bronchi or lung cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/02—Solvent extraction of solids
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D21/00—Separation of suspended solid particles from liquids by sedimentation
- B01D21/26—Separation of sediment aided by centrifugal force or centripetal force
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к получению сурфактанта из легких крупного рогатого скота. Для этого легкие крупного рогатого скота, освобождают от бронхов, разрезают на куски размером 30×30×30 мм, измельчают на роторно-статорном дезинтеграторе, полученный экстракт центрифугируют на проточной центрифуге при низких оборотах, после чего надосадочную жидкость выдерживают при +4°С в течение часа и повторно центрифугируют на проточной центрифуге при 22000-250000g, осадок ресуспендируют в воде, еще раз центрифугируют при 10000-15000g и осадок экстрагируют смесями хлороформа и метанола в системе хлороформ-метанол-вода 1:2:0.8. К полученному экстракту добавляют водный раствор хлористого калия, перемешивают и оставляют на 1 час при комнатной температуре, отбирают нижний и промежуточный слои, к которым добавляют равный первоначальному объем хлороформа, перемешивают и удаляют органические растворители на ротационном испарителе, остаток ресуспендируют в воде. После определения в полученной эмульсии липидного фосфора ее расфасовывают по флаконам и лиофилизируют. Изобретение обеспечивает получение целевого продукта в течение 5 рабочих дней в количестве 2,5 г из 1 кг сырья. 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к получению лекарственных препаратов из природного сырья, и может найти применение в промышленном производстве природных легочных сурфактантов.
Легочный сурфактант представляет собой природный комплекс веществ, состоящий из фосфолипидов, нейтральных липидов и сурфактант-ассоциированных белков. Он синтезируется в альвеолоцитах второго типа и экскретируется ими на внутреннюю поверхность альвеол, создавая, таким образом, высокоспецифичную легочную "смазку".
Легочный сурфактант является чрезвычайно эффективным средством профилактики и лечения синдрома дыхательных расстройств и бронхо-легочной дисплазии новорожденных.
В нашей стране в последние годы легочный сурфактант находит все более широкое применение при лечении дыхательной недостаточности некардиогенной природы у взрослых в критических состояниях, под которыми подразумевают острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), а также тяжелые двусторонние пневмонии.
Известно несколько препаратов сурфактанта: синтетические (Exosurf, Glaxo-Wellcome, США-Великобритания; ALEC, Britanica, Великобритания), полусинтетические (Surfactant-TA, Tokyo Tanabe, Tokyo, Япония; Survanta Ross/Abbout Lab, Chicago, США) и природные (Curosurf, Chiesi Farmaceutici Farma, Италия; Альвеофакт, Лиомарк Фарма, Гмбх, Германия; Infasurf, ONY Inc, Buffalo, NY, США; CLSE, Rochester, NY, США; Newfactant, Seoul, Korea и Сурфактант-БЛ, «ООО Биосурф, Россия).
Каждый из известных сурфактантов имеет свой специфический способ получения.
Наиболее близким к предлагаемому является способ по RU патенту №2198670, 2002 г., взятый нами в качестве прототипа, являющийся усовершенствованием описанных ранее способов по патентам 2066197 и 2066198.
Способ заключается в том, что легкие крупного рогатого скота в физиологическом растворе измельчают разрезанием на кусочки со сторонами не более 5 мм с одновременным проточным экстрагированием, фильтруют, фильтрат центрифугируют на проточной центрифуге при 100-150g и скорости протока 5-6 л/мин, надосадочную жидкость подвергают повторному проточному центрифугированию при 15000-20000g со скоростью протока 1-1.5 л/мин, осадок ресуспендируют в дистиллированной воде, образовавшуюся суспензию центрифугируют при 10000-15000g в течение 45-60 мин., к осадку добавляют дистиллированную воду, экстрагируют смесью хлороформа и метанола в соотношении 1:1-3:1 в атмосфере аргона, экстракт промывают 0.1% раствором хлорида калия или кальция, суспензию оставляют до разделения фаз, затем нижнюю фазу отбирают и удаляют из нее органические растворители.
Способ обеспечивает получение целевого продукта (сурфактанта-БЛ) в течение 7 рабочих дней в количестве 2 г из 1 кг сырья.
К недостаткам прототипа следует отнести то, что он достаточно длительный, трудоемкий и обеспечивает относительно невысокий выход целевого продукта.
Технический результат настоящего изобретения состоит в сокращении времени получения целевого продукта и с более высоким выходом.
Этот результат достигается тем, что в известном способе, включающем измельчение сырья в физиологическом растворе разрезанием на кусочки с одновременным проточным экстрагированием, фильтрование полученного экстракта, центрифугирование его на проточной центрифуге при низких оборотах и скорости протока 5-6 л/мин, повторное проточное центрифугирование надосадочной жидкости со скоростью протока 1 л/мин, ресуспендирование полученного осадка в дистиллированной воде и дополнительное центрифугирование образовавшейся суспензии при 10000-15000g в течение 45-60 мин. с последующим экстрагированием полученной после ресуспендирования осадка в дистиллированной воде суспензии смесью хлороформа и метанола в атмосфере аргона, промывание полученного экстракта раствором хлористого калия и выдерживание смеси до разделения фаз с последующим отделением нижней фазы и отгонку из нее органических растворителей, согласно изобретению, легкие крупного рогатого скота предварительно освобождают от бронхов, разрезают на кусочки размером 30×30×30 мм, измельчают их в физиологическом растворе при температуре +4°С на роторно-статорном дезинтеграторе, надосадочную жидкость после центрифугирования при низких оборотах выдерживают при +4°С в течение 1 часа, повторное проточное центрифугирование выполняют при 22000-25000g, экстрагирование полученной после дополнительного центрифугирования суспензии выполняют в соотношении хлороформ : метанол : вода 1:2:0.8, для промывания полученного экстракта используют 0,2% раствор хлористого калия, оставляя смесь на 1 час при комнатной температуре, после чего отбирают нижний и промежуточный слои, добавляют к ним хлороформ в объеме, равном первоначальному его объему, смесь перемешивают и на роторном испарителе удаляют органические растворители, осадок ресуспендируют в дистиллированной воде, в полученной эмульсии определяют липидный фосфор, после чего расфасовывают ее по флаконам и лиофилизируют.
Разрезание легкого на кусочки 30×30×30 мм с последующим измельчением их на роторно-статорном дезинтеграторе обеспечивает получение практически лаважной жидкости, при этом совмещение нарезки сырья с проточным экстрагированием значительно уменьшает загрязнение экстракта балластными веществами.
Последующее выдерживание надосадочной жидкости после центрифугирования при низких оборотах при +4°С в течение часа приводит к образованию агрегатов липопротеидов сурфактанта, что уменьшает время очистки препарата, снижает его потери, обеспечивая максимальный выход сурфактанта при экстрагировании.
Повторное проточное центрифугирование надосадочной жидкости при 22000-25000 g обеспечивает полное осаждение промежуточного продукта со значительно меньшим количеством примесей.
Использование для экстрагирования образованного осадка смеси хлороформ : метанол : вода в соотношении 1:2:0.8 с последующим промыванием экстракта 0,2% водным раствором хлорида калия обеспечивает максимальную экстракцию фосфолипидов, нейтральных липидов, холестерина и его эфиров, а также всего набора гидрофобных сурфактант-ассоциированных белков групп "В", "С" и "G", обеспечивая нативность получаемого препарата и его высокую терапевтическую активность.
Разработанные режимы получения препарата позволяют получать сурфактант (сурфактант-БЛ) в течение 5 рабочих дней и с выходом более 2,5 г из 1 кг сырья.
Сущность способа поясняется примерами.
ПРИМЕР 1.
10 кг легкого крупного рогатого скота отмывали холодной водой от крови, освобождали от бронхов, нарезали на кусочки 30×30×30 мм, загружали в реактор, снабженный роторно-статорным измельчителем, добавляли 50 л холодного +4°С физиологического раствора, измельчение совмещали с одновременным экстрагированием при +4°С. Полученный экстракт фильтровали через сетчатый фильтр. Осадок выбрасывали, а фильтрат центрифугировали на проточной центрифуге при 150 g и скорости протока 6 л/мин. Надосадочную жидкость (50 л) охлаждали до +4°С и выдерживали при этой температуре в течение часа. Суспензию подвергали повторному проточному центрифугированию при 22000 g со скоростью протока 1 л/мин, осадок ресуспендировали в 6 л дистиллированной воды и центрифугировали при 15000g.
К полученному осадку (28 г) добавляли 800 мл дистиллированной воды, перемешивали и экстрагировали 3000 мл смеси хлороформа и метанола в соотношении 1:2 (1000 мл хлороформа и 2000 мл метанола) [с учетом 800 мл воды, в которой ресуспендировали осадок, соотношение хлороформ-метанол-вода составляло 1000:2000:800 или 1:2:0,8], экстракцию продолжали в течение 30 минут. Гомогенат фильтровали через плотный бумажный фильтр и к полученной смеси добавляли 1000 мл хлороформа, перемешивали и добавляли 1000 мл 0,2% раствора КCL. Суспензию перемешивали и оставляли на 1 час при комнатной температуре. Нижнюю (хлороформенную) фазу и промежуточный слой отбирали и удаляли органические растворители. Было получено 25,5 г препарата, т.е. 2,55 г из 1 кг исходного сырья. Сухой остаток ресуспендировали в 850 мл дистиллированной воды. После определения содержания фосфолипидов, которая составила 30,0 мг/мл, полученную эмульсию разливали по 2,5 мл во флаконы (по 75 мг фосфолипидов в каждом флаконе) и лиофилизировали. Всего было получено 340 флаконов сурфактанта-БЛ.
Качество полученного препарата оценивали по содержанию фосфолипидов по Васьковскому и белка - по Лоури. Количество белка в каждом флаконе составляло 1.7 мг, фосфолипидов - 75 мг, т.е. препарат отвечал требованиям Фармакопейной статьи предприятия (ФПС) на сурфактант-БЛ, Р №003383/01 - 230710 (от 23.07.2010 г.), согласно которой содержание фосфолипидов должно быть от 68 до 82 мг, белка -от 1,5 до 2,3 мг во флаконе.
ПРИМЕР 2.
20 кг легких крупного рогатого скота обрабатывали аналогично примеру 1, добавляя для загрузки в реактор 100 л холодного (+4°С) физраствора. Все стадии получения препарата выполняли аналогично примеру 1, осуществляя повторное центрифугирование надосадочной жидкости при 25000g. Осадок ресуспендировали в 12 л дистиллированной воды и центрифугировали при 10000g. К полученному осадку (60 г) добавляли 1,6 л дистиллированной воды, 2 л хлороформа и 4 л метанола. Получили 50 г препарата (2,5 г сурфактанта из 1 кг легкого). Его суспендировали в 1,6 л дистиллированной воды. Содержание фосфолипидов составило 31,25 мг/мл. Полученную эмульсию разлили по 2,5 мл по флаконам. Получили 640 флаконов. С содержанием белка - 2,1 мг, фосфолипидов - 78,1 мг в каждом флаконе. Препарат отвечал требованиям Фармакопейной статьи предприятия (ФПС) на сурфактант-БЛ, Р №003383/01 - 230710 (от 23.07.2010 г.), согласно которой содержание фосфолипидов должно быть от 68 до 82 мг, белка - от 1,5 до 2,3 мг во флаконе.
Предлагаемый способ разработан авторами для получения сурфактанта-БЛ, единственного из известных препаратов сурфактанта, разрешенного Министерством здравоохранения РФ и Росздравнадзором РФ для применения его как у новорожденных, так и у взрослых, в то время как все другие известные препараты сурфактанта имеют разрешение для применения только у новорожденных.
Высокая эффективность сурфактанта-БЛ обусловлена тем, что в отличие от всех других препаратов сурфактанта, как выше сказано, он является полностью нативным и содержит 2% сурфактант-ассоциированных белков.
Доказано, что синтетические препараты сурфактанта менее эффективны при лечении РДС новорожденных и неэффективны при лечении ОРДС у взрослых, хотя они, безусловно, более доступны. Синтетические препараты сурфактанта не содержат сурфактант-ассоциированных белков. Наличие же в составе природных препаратов легочного сурфактанта, так называемых сурфактант-ассоциированных белков, чрезвычайно важно для проявления множества функций этого природного комплекса. Снижение силы поверхностного натяжения на поверхности легочных альвеол, осуществляемое фосфолипидами в кооперации с сурфактант-ассоциированными белками, облегчает процесс раскрытия альвеол во время вдоха, уменьшая необходимое для этого усилие мышц грудной клетки. С сурфактант-ассоциированными белками мы связываем антибактериальную и антивирусную активность сурфактантов, способность этих белков проявлять активность хемиатрактантов по отношению к альвеолярным макрофагам, стимулировать комплемент-зависимый и антитело-зависимый захват патогенных бактерий и вирусов альвеолярными макрофагами и т.д. Они, кроме того, подавляют in vitro способность полиморфно-ядерных лейкоцитов и альвеолярных макрофагов к экскреции (освобождению) цитокинов - молекулярных компонентов провоспалительного каскада. Последние повреждают альвеолокапиллярную мембрану - основное структурное и функциональное звено легочного газообмена.
Наиболее частыми причинами ОРДС являются сепсис, тяжелая множественная травма, массивные переливания крови, ожоги дыхательных путей и различные токсические состояния. Развитие ОРДС может происходить вследствие прямого повреждения легочной паренхимы (пневмония, аспирация желудочного содержимого (АЖС), вдыхание дыма, горячего пара или воздуха, токсических жидкостей и газов, контузия легкого) или при системном поражении организма (сепсис, множественная травма, например, автомобильная, синдром сдавления, острое лучевое поражение, длительная ИВЛ, осложнения после кардиохирургических операций с длительным применением искусственного кровообращения, посттрансфузионный и реперфузионный синдромы). Смертность от ОРДС чрезвычайно высока и зависит от фона, на котором он развивается. При множественной травме и синдроме сдавления смертность составляет 50-60%, при сепсисе до 90%.
Основой лечения таких больных долгие годы было применение ИВЛ, обычно с жесткими параметрами, т.е. высоким парциальным давлением кислорода во вдыхаемой смеси (FiO2=0.8-1.0), высоким пиковым давлением на вдохе (больше 35-40 см водн. ст.), большими объемами подаваемой газовой смеси (12-15 мл/кг массы тела) и обязательным положительным давлением в конце выдоха. Эти, так называемые жесткие параметры ИВЛ, являются дополнительными мощными факторами повреждения легких, они нередко приводят к развитию вентилятор-индуцированной и нозокомиальной пневмоний и увеличивают смертность при ОРДС на 30% и более. В 2000 - 2015 годы в лечении ОРДС дополнительно к ИВЛ мы стали использовать препарат легочного сурфактанта сурфактант-БЛ, хорошо зарекомендовавший себя при лечении синдрома дыхательных расстройств новорожденных. Реаниматологи в настоящее время придерживаются концепции "безопасной" ИВЛ (концентрация кислорода менее 60%, пиковое давление менее 30 см водн. ст., дыхательный объем 4-6 мл/кг вместо 12-15 мл/кг). Как нами показано, именно использование сурфактанта-БЛ позволяет быстро переходить на режимы "безопасной" ИВЛ.
С использованием сурфактанта-БЛ нами совместно с врачами различных клиник проведено лечение более 14000 новорожденных с первичным и вторичным РДС и более 1500 новорожденных низкой и экстремально низкой массой тела при рождении, которые получали сурфактант-БЛ ингаляционно для профилактики бронхолегочной дисплазии (БЛД) (Патент №2012129772, 2014 год). Дети экстремально низкой массой тела (менее 1000 г) при рождении, получавшие лечение РДС итальянским препаратом Куросурф и после этого задержавшиеся на ИВЛ более 3 суток в результате получения дополнительно ингаляций сурфактанта-БЛ, быстро (в течение 5 суток), были сняты с ИВЛ и у 80% детей не развивалась бронхолегочная дисплазия, приводящая к инвалидизации. Кроме того, проведено лечение ОРДС взрослых около 7000 больных и пострадавших в чрезвычайных ситуациях (взрывы и пожары в Московском и Минском метро, кафе «Хромая лошадь - 2009 г) (Патенты №2149016 - 2000 г - Способ лечения респираторного дистресс-синдрома взрослых; Патент №2238757 - Способ лечения ингаляционных поражений - 2004 год), при этом значительно, более чем вдвое, сокращалось время пребывания больного на ИВЛ и в 3-4 раза снижалась летальность.
Сурфактан-БЛ используют и для лечения дыхательной недостаточности при критических состояниях у детей (Патент 2149017), что позволяет достаточно быстро добиться ее купирования. При этом значительно сокращается время нахождения детей на жестких параметрах ИВЛ - до 2-12 часов (от 12 часов до 13 суток в известных способах), обеспечивается быстрое устранение ятрогенных (врачебных) факторов повреждения легких, а также факторов повреждения, связанных с течением ОРДС, что является очень важным для профилактики фиброзировання легких -наиболее частого осложнения у выживших больных, число которых, как показывает наш опыт, составляет более 90%. При этом удается снизить количество вводимого сурфактанта-БЛ до 1,5-2 г на курс лечения, в то время как в известных способах лечения дыхательной недостаточности при критических состояниях используется 18-24 г природных сурфактантов (Infasurf) и 32-64 г полусинтетических (Survanta). Если учесть высокую стоимость известных препаратов сурфактанта, то уменьшение количества используемого сурфактанта-БЛ существенно снижает стоимость лечения ОРДС, Стоимость курса лечения с использованием, например, природного сурфактанта Infasurf оценивается в 35000 $ США [Timmons O.D. et al., J. Pediatrics, 1991, V. 119, 896-899].
Сурфактант-БЛ использован нами ранее и при лечении острых бронхопневмоний (ОБПН), осложненных ателектазом (AT) (Патент 2149014). Частота возникновения AT как осложнения ОБПН у детей составляет 16,7% от всех ОБПН. Экстраполяция на население России позволяет считать, что около 15000 детей ежегодно страдают ОБПН, осложненными AT. При этом традиционные методы лечения стойких AT позволяют лишь в 57-60% случаев добиться полного разрешения AT и требуют для этого многократных (5-6) санационных бронхо- или фибробронхоскопий, что чрезвычайно травматично, а у детей до 10 лет требуется применения общего наркоза. Длительное существование AT нередко (в 10-12% случаев) приводит к инфицированию зоны ателектаза, формированию бронхоэктазов и требует хирургического иссечения сегмента или доли легкого.
Нам удалось с применением сурфактанта-БЛ получить положительные результаты в виде полного, в течение 3-5 дней, расправления AT после о дно- двукратного введения нашего препарата в количестве 100-300 мг путем селективной фибробронхоскопий при сроке существования AT до 45 суток.
Таким образом, к настоящему времени при критических состояниях с использованием сурфактанта-БЛ прошло лечение более 14000 новорожденных РДС и 7000 взрослых с ОРДС с получением положительных результатов.
Сурфактант-БЛ нашел применение для профилактики пневмоний и ОРДС при аспирации желудочного содержимого (АЖС) (Патент 2149018). Тяжелые пневмонии и ОРДС, развивающиеся вследствие АЖС, являются критическими состояниями, обусловленными дыхательной недостаточностью некардиогенной природы, и требуют для лечения больных применения всего арсенала реанимационных мероприятий, в том числе ИВЛ. И только применение больному, находящемуся на ИВЛ, Сурфактанта-БЛ сразу, после снятия возникшего у него бронхоспазма, болюсно или в виде аэрозоля с помощью ингаляции в течение 4-6 часов ежедневно в течение 2-3 дней не позднее 12 часов после случившейся АЖС позволяет предотвратить развитие пневмонии и ОРДС и тем самым повысить выживаемость.
Работами В.В. Ерохина с соавт. (Сурфактантная система при туберкулезе легких. РАМН, Москва, ФГБУ «ЦНИИТ», «НЬЮ ТЕРРА», 2013, 260 стр. ) была доказана существенная роль повреждения легочного сурфактанта при туберкулезе легких. Нами совместно с врачами ЦНИИТ РАМН, Москва, были проведены многоцентровые клинические испытания при лечении туберкулеза легких, где сурфактант-БЛ был использован в качестве патогенетического средства в комплексном лечении на фоне специфической антибиотико- и химиотерапии (Патент №2195313, 2002 год). По этому патенту получили лечение более 8000 больных. Использование сурфактанта-БЛ в комплексном лечении туберкулеза легких позволило достичь в 83% случаев абациллирования (исчезновение микобактерии туберкулеза в мокроте больного), что делает больного безопасным для окружающих, в 100% случаев отмечалось уменьшение или исчезновение инфильтратов в легких и в 73% случаев закрытие каверн до 3 см. в диаметре. В дополнительных исследованиях было показано, что каверны величиной более 3 см (до 8 см в диаметре) при проведении курса сурфактант-терапии с использованием сурфактанта-БЛ на фоне специфической химио- и антибиотикотерапии уменьшаются в 4-12 раз. У больных туберкулезом легких при проведении курса сурфактант-терапии сурфактантом-БЛ на фоне правильно подобранной химиотерапии через 3-5 ингаляций (ежедневно) увеличивается количество мокроты, уменьшается болезненность кашля, затем он исчезает, увеличивается переносимость физической нагрузки и в большом проценте случаев происходит полное излечение туберкулеза. Наконец, в течение последних 5-6 лет препарат сурфактант-БЛ мы начали применять для лечения бронхиальной астмы (Патент №2611406), хронической обструктивной болезни легких (Патент №2600833), внебольничнной пневмонии - (Патент №2611414) и хронического обструктивного бронхита - (Патент №2600822). В настоящее время получили лечение более 40 больных бронхиальной астмой, 12 больных ХОБЛ, 26 больных хроническим обструктивным бронхитом и 8 - внебольничной пневмонией. Больные бронхиальной астмой уже после 2-3 ингаляций субъективно отмечают возможность выполнения глубокого вдоха и более свободного выдоха в сравнении с предшествующим состоянием. Больные отмечают увеличение времени выдоха с помощью пикфлюометра, через 3-5 ингаляций (по 10-20 мг ежедневно) увеличивается количество мокроты, затем ее количество уменьшается, исчезает шумное дыхание, ночные приступы удушья, а затем и резко уменьшается частота дневных приступов удушья, увеличивается переносимость физической нагрузки. Ряд больных прекращает прием ингаляционных глюкокортикостероидов (иГКС), а у большинства из них удается снизить дозу иГКС вдвое. У более чем 70% больных после получения курса сурфактант-терапии сурфактантом-БЛ отмечены ремиссии на 2-4 года.
Подводя итоги вышеописанному, можно констатировать, что сурфактант-терапия с использованием сурфактанта-БЛ при критических состояниях имеет решающее значение для профилактики и лечения возникающих при них ОРДС и возникающих при этом осложнений: вентилятор-индуцированных и нозокомиальных пневмоний, а в последствии и развития фиброза легких. Основные достоинства такой сурфактант-терапии заключаются в том, что именно она обеспечивает сокращение срока нахождения больного на ИВЛ до 7 суток (против 20-40 без его применения); купирование ОРДС в 85% случаев (против 40% при традиционном лечении); летальность больных, отвечающих на введение сурфактанта, а их большинство (86%) составляет 16% - 20% (а по литературным данным - от 34% - до 50%).
В настоящее время сурфактант-БЛ производится в нашей стране только в ООО "Биосурф" (СПб, пос. Песочный, ул. Ленинградская, д. 70).
В предлагаемом способе получения сурфактанта-БЛ решена задача получения его с высоким выходом из природного сырья, сохраняющего нативные свойства и высокую терапевтическую (специфическую) активность. Указанные свойства обуславливают возможность его эффективного использования в медицинской практике как при острой дыхательной недостаточности критических состояний новорожденных и взрослых, так и при других острых и хронических заболеваниях легких.
Сурфактант-БЛ разрешен Приказом МЗ РФ 261 от 14.07.2000 г. к медицинскому применению для лечения РДС новорожденных, в 2003 г. для лечения острого респираторного дистресс-синдрома взрослых (Протокол №1 Заседания Государственного Фармкомитета от 03.02.2003 года) и в 2008 г. в качестве патогенетического компонента для лечения туберкулеза легких (Протокол заседания специализированной комиссии НЦ ЭСМП МЗ РФ от 13 апреля 2007 г), на препарат сурфактант-БЛ утверждена ФСП Р №003383/01-230710 (от 23.07.10).
Сурфактант-БЛ включен:
1. в стандарт лечения РДС новорожденных на основании Приказа Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 13 марта 2006 г. N 147,
2. в Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению синдрома дыхательных расстройств (РДС) под ред. академика Н.Н. Володина (2016 г).
3. в «Перечень жизненно-важных и необходимых лекарственных средств», ЖНВЛ, утверждаемый Правительством РФ с 2005 г;
4. в «Региональный стандарт оказания специализированной медицинской помощи в Тюменской области при родах у женщин группы высокого риска по материнской смертности», утвержденный Приказом Департамента здравоохранения Тюменской области №693 от 02.12.2008;
5. в рекомендации по лечению тяжелых больных пневмонией в информационном письме Минздравсоцразвития №24-5/10/2-9533 от 28 ноября 2009 г. «Грипп A/H1N1 и вызванная им пневмония у Беременных. Этиотропная и респираторная терапия»; подписанное зам. министра В.И. Скворцовой. Письмо повторяется с 2009 года ежегодно, в том числе и в 2017 году.
8. в клинический протокол диагностики, лечения и реабилитации детского и взрослого населения с термическими поражениями и их последствиями, утвержденный приказом МЗ Республики Беларусь от 07.08.2009 г. №781/. - Минск, 2009. - 79 С.;
9. в «Формуляр лекарственных средств медицинской службы ВС РФ», 2010 г.;
11. в методически-информационное письмо «Применение препаратов сурфактанта при лечении острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС)», утвержденное главным врачом ГУЗ «Краевая клиническая больница Забайкальского края» 12.07.2011.
12. в Приказ №598 от 26.08.2013 «Об утверждении положения о резерве медицинских ресурсов МЗ РФ для ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций, его номенклатуры и объема»,
13. в Федеральные клинические рекомендации по лечению туберкулеза легких в качестве патогенетического средства в комплексном лечении заболевания на фоне этиотропной терапии 2013 г.;
14. В Федеральные клинические рекомендации Федерального общества анестезиологов и реаниматологов по диагностике и лечению ОРДС, 2015 г.
Производство сурфактанта-БЛ осуществляется в ООО «БИОСУРФ» с 2000 года. Лицензия на производство №12735-ЛС-П от 13.12.2013, бессрочная.
Claims (1)
- Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота, включающий измельчение сырья в физиологическом растворе разрезанием на кусочки с одновременным проточным экстрагированием, фильтрование полученного экстракта, центрифугирование его на проточной центрифуге при низких оборотах и скорости протока 5-6 л/мин, повторное проточное центрифугирование надосадочной жидкости со скоростью протока 1 л/мин, ресуспендирование полученного осадка в дистиллированной воде и дополнительное центрифугирование образовавшейся суспензии при 10000-15000g в течение 45-60 мин с последующим экстрагированием полученной после ресуспендирования осадка в дистиллированной воде суспензии смесью хлороформа и метанола в атмосфере аргона, промывание полученного экстракта раствором хлористого калия и выдерживание смеси до разделения фаз с последующим отделением нижней фазы и отгонку из нее органических растворителей, отличающийся тем, что легкие крупного рогатого скота предварительно освобождают от бронхов, разрезают на кусочки размером 30×30×30 мм, измельчают их в физиологическом растворе при температуре +4°C на роторно-статорном дезинтеграторе, надосадочную жидкость после центрифугирования при низких оборотах выдерживают при +4°C в течение 1 часа, повторное проточное центрифугирование выполняют при 22000-25000g, экстрагирование полученной после дополнительного центрифугирования суспензии выполняют в соотношении хлороформ : метанол : вода 1:2:0.8, для промывания полученного экстракта используют 0.2% раствор хлористого калия, оставляя смесь на 1 час при комнатной температуре, после чего отбирают нижний и промежуточный слои, добавляют к ним хлороформ в объеме, равном первоначальному его объему, смесь перемешивают и на роторном испарителе удаляют органические растворители, осадок ресуспендируют в дистиллированной воде, в полученной эмульсии определяют липидный фосфор, после чего расфасовывают ее по флаконам и лиофилизируют.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018119578A RU2691648C1 (ru) | 2018-05-28 | 2018-05-28 | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018119578A RU2691648C1 (ru) | 2018-05-28 | 2018-05-28 | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2691648C1 true RU2691648C1 (ru) | 2019-06-17 |
Family
ID=66947642
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018119578A RU2691648C1 (ru) | 2018-05-28 | 2018-05-28 | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2691648C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2066197C1 (ru) * | 1995-03-17 | 1996-09-10 | Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт Минздравмедпрома | Способ получения легочного сурфактанта |
| RU2198670C1 (ru) * | 2002-02-19 | 2003-02-20 | ООО "Биосурф" | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота |
| JP2004250459A (ja) * | 1997-04-28 | 2004-09-09 | Scripps Res Inst:The | 希釈した界面活性物質を含有する肺胞洗浄用医薬組成物 |
| WO2006091033A1 (en) * | 2005-02-28 | 2006-08-31 | Kt & G Corporation | Composition for reducing the exudation of serum proteins |
-
2018
- 2018-05-28 RU RU2018119578A patent/RU2691648C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2066197C1 (ru) * | 1995-03-17 | 1996-09-10 | Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт Минздравмедпрома | Способ получения легочного сурфактанта |
| JP2004250459A (ja) * | 1997-04-28 | 2004-09-09 | Scripps Res Inst:The | 希釈した界面活性物質を含有する肺胞洗浄用医薬組成物 |
| RU2198670C1 (ru) * | 2002-02-19 | 2003-02-20 | ООО "Биосурф" | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота |
| WO2006091033A1 (en) * | 2005-02-28 | 2006-08-31 | Kt & G Corporation | Composition for reducing the exudation of serum proteins |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HALL S B et al. Separation of subfractions of the hydrophobic components of calf lung surfactant. Journal of Lipid Research, 1994, 35(8), 1386-94. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Serrano et al. | Liposomal lactoferrin as potential preventative and cure for COVID-19 | |
| US20160354370A1 (en) | Method for treating a protozoal infection | |
| JPH10508602A (ja) | 肺の薬剤デリバリーを促進するための液体フルオロカーボンの使用 | |
| CN110099695B (zh) | 用于治疗进展性bpd的包含肺表面活性物质和类固醇的治疗组合 | |
| RU2691648C1 (ru) | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота | |
| CN106361993A (zh) | 一种防治胃黏膜损伤的药物组合物及其制备方法 | |
| Jargin | Surfactant therapy of pulmonary conditions excluding those with primary surfactant deficiency and bronchoscopy as delivery method: an overview of Russian patents and publications | |
| JPH02264730A (ja) | Ａｔｌｌ治療用吸入剤 | |
| RU2198670C1 (ru) | Способ получения сурфактанта из легких крупного рогатого скота | |
| RU2757360C1 (ru) | Применение фосфолипидной эмульсии, содержащей эффективное количество дигидрокверцетина, лецитин и глицин для лечения воспалительных заболеваний органов дыхания | |
| COHEN et al. | Clinical and pathological observations in fatal bronchial asthma: report of a case treated with the immunosuppressive drug, azathioprine | |
| JP2003530356A (ja) | 急性肺疾患の予防又は早期治療のための肺表面活性物質の新規使用 | |
| Horoz et al. | Surfactant therapy in acute respiratory distress syndrome due to hydrocarbon aspiration | |
| Herxheimer | Influence of cortisone on induced asthma and bronchial hyposensitization | |
| RU2149016C1 (ru) | Способ лечения респираторного дистресс-синдрома взрослых | |
| RU2149017C1 (ru) | Способ лечения дыхательной недостаточности при критических состояниях у детей | |
| RU2149014C1 (ru) | Способ лечения острых бронхопневмоний, осложненных ателектазом | |
| Morgan et al. | Lobar Pneumonia Treated with Sulphamezathine and Sulphadiazine | |
| RU2673555C2 (ru) | Способ применения "Ягель детокс" в качестве средства для лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью | |
| Romanchuk | COVID-19: HOW TO TREAT SAFELY AND EFFECTIVELY? | |
| JPS6238329B1 (ru) | ||
| Koushki et al. | Evaluation of the effectiveness of COVID‐19 treatments performed in Iran in comparison with other countries: a review | |
| Bartelink et al. | Fatal hepatitis after treatment with isoniazid and rifampicin in a patient on anticonvulsant therapy | |
| Zúñiga Lara et al. | Use of convalescent plasma in COVID-19, a bioethical perspective | |
| Yue | Toxin-Blast Composite Injury |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20211020 |