RU2690943C1 - Способ моделирования хеликобактериоза - Google Patents
Способ моделирования хеликобактериоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2690943C1 RU2690943C1 RU2018117831A RU2018117831A RU2690943C1 RU 2690943 C1 RU2690943 C1 RU 2690943C1 RU 2018117831 A RU2018117831 A RU 2018117831A RU 2018117831 A RU2018117831 A RU 2018117831A RU 2690943 C1 RU2690943 C1 RU 2690943C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- helicobacter pylori
- bacteria
- stomach
- 11rif
- rifampicin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004088 simulation Methods 0.000 title 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 claims abstract description 81
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 claims abstract description 54
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 37
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 21
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 18
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 claims abstract description 16
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 13
- KRCQSTCYZUOBHN-UHFFFAOYSA-N rabeprazole sodium Chemical compound [Na+].COCCCOC1=CC=NC(CS(=O)C=2[N-]C3=CC=CC=C3N=2)=C1C KRCQSTCYZUOBHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229940126409 proton pump inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000000612 proton pump inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 5
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims abstract description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims abstract description 3
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims abstract 2
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 claims abstract 2
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims abstract 2
- MYVIATVLJGTBFV-UHFFFAOYSA-M thiamine(1+) chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N MYVIATVLJGTBFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 21
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 claims description 17
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 15
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 10
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 10
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 4
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims 1
- 108010042854 bacteria histone-like protein HU Proteins 0.000 claims 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002688 persistence Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 abstract 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 13
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 13
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 7
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 7
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 5
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 5
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 4
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 3
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 3
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 3
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N Chloramine Chemical compound ClN QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000590017 Helicobacter felis Species 0.000 description 1
- 241001495142 Helicobacter heilmannii Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010030216 Oesophagitis Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003470 adrenal cortex hormone Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001262 anti-secretory effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 150000001621 bismuth Chemical class 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 1
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 1
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006881 esophagitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000006213 negative regulation of lymphocyte proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229960000381 omeprazole Drugs 0.000 description 1
- 210000001711 oxyntic cell Anatomy 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Computational Mathematics (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Algebra (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Mathematical Physics (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Educational Administration (AREA)
- Educational Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к способу моделирования хеликобактериоза. Для этого перорально вводят белым мышам один раз в сутки 52 мкг препарата Париет, являющегося ингибитором протонного насоса в желудке, с последующим введением животным через 1-1,5 ч перорально однократно в сутки суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11Rifна изотоническом растворе хлорида натрия в объеме 0,2 мл, содержащем 1×10микробных клеток, причем введение суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11Rifпродолжают в течение 10 суток, ежедневно отбирая фекалии для определения количества хеликобактерий, выводимых из организма животных, путем высева фекалий на селективную плотную питательную среду с рифампицином 150 мкг×млв чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч в микроаэрофильных условиях, затем обрабатывают полученные результаты высева фекалий, основываясь на количестве выросших колоний, и выносят суждение о выживаемости и приживаемости бактерий Helicobacter pylori KM-11RifR в желудке, исходя из величины доли жизнеспособных бактерий Helicobacter pylori KM-11RifR от числа введенных перорально животным, а также о начале бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11RifR с фекалиями животных, интенсивности, длительности и продолжительности бактериовыделения Helicobacter pylori KM-11RifR на основании подсчета колоний, выросших в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С при ежедневном отборе и посеве отобранных фекалий белых мышей на селективную плотную питательную среду с рифампицином при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: пептон 20,0; дрожжевой экстракт 5,0; натрий хлористый 10,0; глюкоза 5,0; тиамина хлорид 0,008; кальция пантотенат 0,008; натрия сульфит 0,5; гемин 0,01; агар-агар 12,0; твин-80 1,0; рифампицин 150 мкг⋅мл; дистиллированная вода остальное, рН среды 7,3±0,2 ед. рН. Изобретение позволяет изучить приживаемость, колонизирующую способность и персистенции в организме бактерий Helicobacter pylori и вызываемых ими патологических изменений в желудке и в начальных отделах кишечника, а также оценить эффективность новых средств лечения и профилактики хеликобактериоза. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине, медицинской микробиологии и инфектологии и может быть использовано для изучения приживаемости, колонизирующей способности и персистенции в организме млекопитающих бактерий Helicobacter pylori и вызываемых ими патологических изменений в желудке, а также для оценки эффективности новых средств лечения и профилактики хеликобактериоза.
Хеликобактериоз - инфекционное заболевание с фекально-оральным механизмом передачи, вызываемое бактериями Helicobacter pylori, имеющими выраженную тропность к эпителию слизистой оболочки желудка. Уровень инфицирования хеликобактером детей составляет около 10%, в то время как взрослое население инфицировано практически на 100%. В настоящее время Helicobacter pylori рассматривается как один из факторов, вызывающих хроническое воспаление желудка - хеликобактериоз и способствующих развитию гастрита, язвенной болезни и новообразований желудка (Goodwin C.S., Armstrong J.A., Marshall B.J. Campylobacter pyloris, gastritis, and peptic ulcer // J. Clin. Pathol. - 1986. - Vol. 39. - P. 353-365). Хеликобактер приспособился к длительному пребыванию в желудке, в антральной части которого он скапливается в большом количестве. Именно здесь относительно мало клеток, секретирующих соляную кислоту, что способствует выживанию хеликобаетера на поверхности эпителия желудка.
К роду Helicobacter в настоящее время относится до 10 видов бактерий: Helicobacter pylori, Helicobacter heilmannii, Helicobacter mustalae, Helicobacter felis и др. Основным возбудителем заболевания у людей является Helicobacter pylori. Это грамотрицательные, короткие извитые, S- образные бактерии средних размеров, подвижные, имеющие 4-5 жгутиков, лофотрохи. Не растут на питательных средах, содержащих глицерин, желчные соли и хлорид натрия. Оксидазо- и каталазоположительные, проявляют выраженную уреазную активность, обладают фосфатазой, образуют сероводород, не свертывают молоко. Уреаза Helicobacter pylori (мочевинная амидогидролаза) определяет основные звенья патогенеза хеликобактариоза, начиная от адгезии и колонизации слизистой оболочки желудка вплоть до формирования преканцероза желудка (Mobley Н. The role of Helicobacter pylori urease in the pathogenesis of gastritis and peptic ulceration // Alim. Pharmacol. Ther. -1996. -Vol. 10 (Suppl. 1). - P. 57-64). Фермент обладает абсолютной специфичностью в отношении единственного субстрата - мочевины, которую он расщепляет гидролитическим путем до аммиака и угольной кислоты. Уреаза совместно с другими ферментами Helicobacter pylori (фосфолипазами, протеазами, муциназами) разрушают защитный слизистый барьер желудка и воздействуют на мембраны эпителиоцитов. Данные электронной микроскопии свидетельствуют о том, что при этом клеточные мембраны переходят из гидрофобного состояния в гидрофильное. Такая структурная перестройка снижает резистентность клеток желудочного эпителия к соляной кислоте. Важно при этом отметить, что аммиак, образующийся под влиянием Helicobacter pylori, соединяется с соляной кислотой желудка с образованием цитотоксических продуктов, в том числе гидроксиламина и монохлорамина. Последние усугубляют повреждения клеток желудочного эпителия (Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. - М.: Триада - X. -1998.- 496 с; Шкитин В.А., Шкирина А.И., Старовойтов Г.Н. Роль Helicobacter pylori в патологии человека // Клин. микробиол. и антимикроб, химиотерапия. - 2002. - Т. 4, №2. - С. 128-145.). Высокая степень корреляции уреазной активности Helicobacter pylori с гистологическими признаками хронического гастрита продемонстрированы F. Morris (Morris F., Maher К., Thomsen L. et al. Distribution of Campylobacter pylori in the human stomach obtained at postmortem // Scand. J. Gastroenterol. -1988. - Vol. 23. - P. 257-264). Наконец, уреаза, обладающая прямым воздействием на эпителиальные тканевые структуры желудка, рассматривается в качестве потенциального промотора предраковых изменений слизистой оболочки кишечника (Tsujii М, Kawano S., Tsujii S. et al. Ammonia: a possible promotor in Helicobacter pylori - related gastric carcinogenesis // Cancer Lett. - 1992. -Vol. 65.-P. 15-18). Можно констатировать, что свойства уреазы Helicobacter pylori уникальны, позволяющие бактериям колонизировать желудок и выживать в организме хозяина. Длительная персистенция Helicobacter pylori в слизисто -бикарбонатном барьере патологической биопленки создает известные трудности в диагностике и лечении хликобактериоза (Нижевич А.А., Хасанов Р.Ш. Helicobacter pylori: введение в патогенез и патобиохимию гастрита // Материалы VIII тематической сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori, 18 мая 1999 г, Уфа./ www.Helicobacter.ru/index.php?i=59; Helicobacter pylori - инфекция: современные аспекты диагностики и терапии (пособие для врачей) / НИИ физико-химической медицины МЗ РФ, Научно-производственная фирма «Литех», Научный Центр Здоровья Детей, Центральная Клиническая Больница МЦ УД Президента РФ. - М.: - 2004. - 41 с.). Очевидно, что именно этим обстоятельством можно объяснить данные статистики, согласно которым полное выздоровление наблюдается лишь у 15% больных хеликобактериозом, и, как ни странно, далеко не все пациенты, инфицированные Helicobacter pylori, заболевают раком желудка.
Проявления хеликобактериоза весьма индивидуальны, но они затрудняют жизнь больного и заставляют обращаться к врачу. Начиная лечение, врач исходит из стандартной тройной схемы эрадикационной терапии, рекомендованной Российской Гастроэнтерологической Ассоциацией, а именно с первой линии лечения: ингибиторы протонной помпы, антибиотики кларитромицин и амоксициллин или метронидазол (Рекомендация Российской Гастроэнтерологической Ассоциации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых / В.Т. Ивашкин, И.В. Маев, Т.Л. Лапина, А.А. Шептуллин - Комитет по подготовке проекта рекомендации. Методические рекомендации: РЖГГК - №1. - С. 87-89). Для более адекватного терапевтического воздействия на возбудителя хеликобактериоза целесообразно в эксперименте на лабораторных животных выявить факторы и условия, способствующие длительной персистенции бактерий в желудке и поддержанию хронического воспаления. Экспериментальный хиликобактериоз для изучения характера патологических изменений стенки желудка лабораторных животных, а также для обоснования лечебных режимов, нуждается в определенном обосновании и установлении последовательности действий, направленных на уничтожение (эрадикацию) Helicobacter pylori в слизистой оболочке желудка с целью создания благоприятных условий для заживления язвы и предупреждения ее перерождения в раковую опухоль. То, что эрадикация Helicobacter pylori возможна, свидетельствует успешный опыт одного из авторов открытия бактерий Helicobacter pylori B.J. Marshall по самозаражению возбудителем и излечению приобретенного хеликтобактериозного гастрита в результате двухнедельного курсового приема метронидозола и солей висмута. В последующем именно этот метод лег в основу современной эрадикации Helicobacter pylori. Это тем более важно, что полученные в ходе экспериментов на лабораторных животных результаты можно в последующем экстраполировать на организм человека как в плане профилактики, так и лечения хеликобактериоза.
До настоящего времени вопрос о моделировании хеликобактериоза не решен. В доступной литературе нет описания специальных исследований, выполненных в данном направлении. Имеются лишь сведения о прогрессирующей атрофии слизистой оболочки желудка, у взятых в эксперименты крыс, вследствие продолжительного введения в желудок аммиака. Последующая малигнизация тканей желудка развилась на фоне усиленной клеточной пролиферации с постепенным формированием низкодифференцированных аденокарцином (Tsujii М., Kawano S., Tsujii S. et al. Cell kinetics of mucosal atrophy in rat stomach induced by long-term administration of ammonia // Gastroenterology.- 1933. - Vol. - 104. - P. 769-801.; Tsujii M., Kawano S., Tsujii S. et al. Mechanism for ammonia-induced promotor of gastric carcinogenesis in rats // Carcinogenesis. - 1995. - Vol. 16. - P. 563-566). Возможным объяснением трудностей, возникающих в связи с попытками моделирования хеликобактериоза, является тот факт, о котором 20.06.2015 г.сообщил информационно-аналитический портал «Русская Планета», что животные практически никак не реагируют на хеликобактера и не страдают связанными с ним болезнями. И эта констатация фактически переводит хеликобактериоз в разряд антропонозов, что с очевидностью усложняет проблему моделирования данной инфекции, но при этом делает ее более интересной.
Целью изобретения является разработка способа, позволяющего моделировать хеликобактериоз у лабораторных животных.
Технический результат, который может быть достигнут при использовании данного способа, заключается в том, что у лабораторных животных можно проследить этапность развития инфекции, вызванной бактериями Helicobacter pylori, начиная от адгезии и колонизации бактериями слизистой оболочки кишечника и до хронического воспаления желудка, изъязвления или до новообразования. Другим аспектом решения указанной проблемы является возможность изучения длительности пребывания возбудителя Helicobacter pylori в тканях желудка и выделения из организма с кишечным содержимым, а также оценки терапевтической эффективности эрадикации Helicobacter pylori при использовании существующих и создаваемых средств и методов лечения и профилактики хеликобактериоза.
Технический результат достигается:
- формированием хеликобактериоза путем перорального введения лабораторным животным суспензии бактерий Helicobacter pylori на фоне медикаментозного подавления финальной стадии секреции соляной кислоты под действием ингибиторов протонного насоса в желудке;
- формированием хеликобактериоза путем перорального введения лабораторным животным суспензии бактерий Helicobacter pylori на фоне иммуносупрессивного эффекта от внутримышечного введения Дексаметазона.
Согласно инструкции (Инструкция по медицинскому применению препарата Париет. Производитель «ЭсаиКо», ЛТД, Япония. Регистрационный номер П NO 118890/01), препарат Париет подавляет секрецию желудочного сока путем специфического ингибирования H7R+-АТФазы на секреторной поверхности париетальных клеток желудка. В наших экспериментах (Чичерин И.Ю., Лундовских И.А., Погорельский И.П., Гаврилов К.Е., Янов С.Н., Дармов И.В. Влияние подавления секреции желудочного сока препаратом Париет на приживаемость бифидобактерий и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных // Журн. международной медицины. - 2012. - №1 (1). - С. 98-104) эти данные получили полное подтверждение. Таким же ингибитором протонного насоса в желудке, блокирующим финальную стадию продукции соляной кислоты, является препарат Омепразол (производитель АО «АКРИХИН», Россия). Оба препарата создают условия в организме лабораторных животных, фактически устраняющие кислотный барьер в желудке, конкуренцию кишечной микробиоты, и способствующие приживлению бактерий Helicobacter pylori прежде всего в антральном отделе желудка.
Дексаметазон (производитель KRKA, Словения), согласно инструкции по применению, является мощным синтетическим глюкокортикоидным препаратом, содержащим гормоны коры надпочечников и их синтетические аналоги, который предназначен для регуляции белкового, углеводного и минерального обмена. Иммуносупрессивный эффект дексаметазона обусловлен вызываемой им инволюцией лимфоидной ткани, угнетением пролиферации лимфоцитов (особенно Т-лимфоцитов), подавлением миграции В-клеток и взаимодействия Т- и В-лимфоцитов, торможением миграции цитокинов (интерлейкина 1, интерлейкина 2, интерферона гамма) из лимфоцитов и макрофагов, снижением образования антител.
Суточные дозы вводимых белым мышам препаратов с учетом переводного коэффициента составили: для препарата Париет 52 мкг, а для Дексаметазона - 40 мкг на одно животное.
Важным элементом исследований является установление количества бактерий Helicobacter pylori, адгезированных на эпителиоцитах слизистой оболочки желудка. Исследуют мазки-отпечатки слизистой оболочки желудка, полученные у пациентов при эндоскопии из участков, где обнаружены визуальные отклонения от нормы (отек, гиперемия). Одну часть полученных мазков высушивают, окрашивают и просматривают под микроскопом при увеличении ×360; другую часть мазков используют для окраски «кампи-теста» или для посева на плотную питательную среду, на которой подсчитывают количество выросших при оптимальной температуре колоний Helicobacter pylori. Во всех случаях - либо при микроскопии окрашенных препаратов, либо по времени изменения окраски «кампи-теста», либо при подсчете выросших на плотной питательной среде колоний Helicobacter pylori, определяют обсемененность бактериями слизистой оболочки желудка. Условно выделяют 3 степени обсемененности хеликобактером слизистой оболочки желудка: слабая обсемененность - (+), что соответствует 20 микробам в поле зрения или 10 выросшим на плотной питательной среде колониям, либо изменению окраски «кампи-теста», в течение 24 часов; средняя обсемененность - (++), что соответствует 20-40 микробам в поле зрения или 10-20 выросшим на плотной питательной среде колониям, либо изменению окраски «кампи-теста» в течение 2-3 часов; высокая обсемененность - (+++),что соответствует 40 и более микробам в поле зрения или свыше 50 выросшим на плотной питательной среде колониям, либо изменению окраски «кампи-теста» в течение 1 часа.
Важным показателем, характеризующим размножение хеликобактера в желудке и его дальнейшее проникновение в кишечник, является выделение бактерий Helicobacter pylori из фекалий животных. Данное исследование на людях не проводится ввиду невозможности отличить хеликобактер от представителей кишечной микробиоты. В этой связи необходимо отметить важную особенность заявляемого способа, которая заключается в том, что в работе для перорального введения животным используют маркированный по признаку устойчивости к антибиотику рифампицину штамм Helicobacter pylori КМ-11 (RifR). Маркерный признак обеспечивает возможность идентификации хеликобактера Helicobacter pylori в фекалиях животных при их высеве на селективную плотную питательную среду с рифампицином в концентрации 150 мкг×мл-1, на которой бактерии кишечной микрофлоры и другие бактерии не растут (Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Погорельский И.П., Лундовских И.А., Янов С.Н. Способ оценки выживаемости бифидо- и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных. Патент №2528867. Российская Федерация, опубл. 20.09.2014. Бюл. №26. Номер охранного документа МПК C12Q 1/04, МПК C12Q 1/06).
Для выращивания бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR), полученных из мазков-отпечатков слизистой оболочки желудков павших животных, а также установления факта возможного выделения с фекалиями животных бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) и их количественной оценки, суспензию фекалий белых мышей высевают на селективную питательную среду с рифампицином (150 мкг×мл-1) и выращивают в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С. Пропись селективной питательной среды включает следующие компоненты при их количественном соотношении, г/л:
| - пептон | 20,0 |
| - дрожжевой экстракт | 5,0 |
| - натрий хлористый | 10,0 |
| - глюкоза | 5,0 |
| - тиамина хлорид | 0,008 |
| - кальция пантотенат | 0,008 |
| - натрия сульфит | 0,5 |
| - гемин | 0,01 |
| - агар-агар | 12,0 |
| - твин-80 | 1,0 |
| - рифампицин | 150 мкг⋅мл-1 |
| - дистиллированная вода | остальное |
рН среды 7,3±0,2 ед. рН
Плотная питательная среда приведенной прописи обеспечивает рост бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR), маркированных по признаку устойчивости к рифампицину - RifR, уже через 24 ч инкубации в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С в отличие от традиционно используемого колумбийского агара с кровью, на котором хеликобактер растет 5 суток (Колумбийский агар (основа). Кат. № TN 1247 (для культивирования требовательных микроорганизмов и выявления гемолиза) Производитель: SIFIN Institute fur Immunpraparate und Nahrmedien Gmb H, Берлин, Германия).
Гистологическое исследование желудка у павших лабораторных животных проводят после фиксации ткани в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживают в изопропаноле и заливают в парафин. Приготовленные на микротоме препараты желудка окрашивают гематоксилином Эрлиха и эозином, просматривают на микроскопе «Микмед-2» (ООО «ЛОМО», Россия) при увеличении ×200, ×1000, после чего выносят суждение о выраженности патологического процесса. Пример 1
Выращивают культуру бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С в течение 24 ч, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия исходя из расчета 1×105 микробных клеток в объеме 0,2 мл.
Берут необходимое количество прошедших акклиматизацию белых мышей массой 18 - 20 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. Ежедневно отбирают от каждого животного фекалии, взвешивают их, после чего суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на селективную плотную питательную среду с рифампицином (150 мкг×мл-1) в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч в микроаэрофильных условиях. С учетом массы фекалий, полученных от каждого животного, делают перерасчет числа бактерий на 1 г фекалий (КОЕ×г-1).
Готовят суспензию препарата Париет на дистиллированной воде из расчета 52 мкг в 0,2 мл воды (оптимальный объем для перорального введения белым мышам).
Ежедневно белым мышам вводят перорально препарат Париет на дистиллированной воде. Через 1-1,5 ч, в течение которых развивается антисекреторный эффект препарата Париет, животным вводят перорально один раз в сутки 0,2 мл суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) на изотоническом растворе хлорида натрия. Введение суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) продолжают в течение 10 суток, ежедневно отбирая фекалии для определения количества хеликобактерий, выводимых их организма животных.
Обрабатывают полученные результаты высева фекалий на селективную питательную среду с рифампицином, основываясь на количестве выросших колоний, и выносят суждение о приживаемости бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) в стенке желудка, о начале бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) с фекалиями животных, интенсивности, длительности и продолжительности бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (RifR).
Заявленный способ позволяет установить приживаемость хеликобактера в желудке, долю выживших маркированных (RifR) бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR), введенных перорально белым мышам и прошедших через желудочно-кишечный тракт. Полученные результаты свидетельствуют, что в фекалиях животных хеликобактер появляется уже на 3 день после начала перорального введения белым мышам; на 4 день количество бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) достигает 25000 КОЕ.г-1 и в последующем снижается к 10 дню эксперимента до 180 КОЕ.г-1, а после прекращения перорального введения - стабилизируется на уровне 190-195 КОЕ.г-1 на 16 день эксперимента. Приведенные данные созвучны опубликованным результатам, согласно которым только около 10% клеток Helicobacter pylori, обитающих в желудке, находятся в адгезированном состоянии, остальные эвакуируются из желудка в кишечник. Но даже этого количества адгезированных на слизистой оболочке желудка бактерий достаточно для развития болезни (Пиманов С.И. Эзофагит, гастрит и язвенная болезнь. - М: Мед. книга - 2000. - 378 с.).
В случае летального исхода заболевания у одного или нескольких подопытных животных проводят патологоанатомическое и гистологическое исследование желудка и начальных отделов кишечника, а также бактериологическое исследование биоптатов разных участков слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Макропрепарат слизистой оболочки желудка при развившемся хеликобактериозе на фоне перорального введения препарата Париет, где 1 - норма, а 2 - патология, представлен на фигуре 1. Гистологическое исследование срезов желудков белых мышей, павших от инфицирования бактериями хеликобактера на фоне перорального введения препарата Париет показало, что основными мишенями воздействия Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) в слизистой оболочке желудка являются эпителиоциты, подвегающиеся трансформации с последующими изменениями в виде дистрофии, атрофии, кишечной метаплазии и распространения воспалительного процесса из антрального (пилорического) отдела на тело желудка с преобладанием атрофических процессов в слизистой оболочке и формированием диффузного атрофического пангастрита.
Пример 2
Выращивают культуру бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С в течение 24 ч, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия, исходя из расчета 1×105 микробных клеток в объеме 0,2 мл.
Готовят раствор Дексаметазона из расчета 40 мкг в 0,1 мл дистиллированной воды на одно животное.
Берут необходимое количество прошедших акклиматизацию белых мышей массой 18 - 20 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. Ежедневно отбирают от каждого животного фекалии, взвешивают их, после чего суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на селективную плотную питательную среду с рифампицином (150 мкг×мл-1) в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч в микроаэрофильных условиях. С учетом массы фекалий от каждого животного делают перерасчет числа бактерий на 1 г фекалий (КОЕ×г-1).
Вводят 0,1 мл раствора Дексаметазона белым мышам внутримышечно в течение 10 дней.
Через 2 ч после внутримышечного введения раствора Дексаметазона животным вводят перорально один раз в сутки 0,2 мл суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) на изотоническом растворе хлорида натрия. Введение суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) продолжают в течение 10 суток, ежедневно отбирая фекалии для определения количества хеликобактерий, выводимых их организма животных.
Обрабатывают полученные результаты высева фекалий на селективную питательную среду с рифампицином, основываясь на количестве выросших колоний, и выносят суждение о приживаемости бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) в стенке желудка, о начале бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) с фекалиями животных, интенсивности, длительности и продолжительности бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (RifR).
Заявленный способ позволяет установить приживаемость хеликобактера в желудке, долю выживших маркированных (RifR) бактрий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR), введенных перорально белым мышам и прошедших через желудочно-кишечный тракт.Полученные результаты свидетельствуют, что в фекалиях животных единичные бактерии хеликобактера появляются на 3 день после начала перорального введения белым мышам; на 4 день количество бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) достигает 28000 КОЕ×г-1 и в последующем снижается к 10 дню эксперимента до 190 КОЕ×г-1, а после прекращения перорального введения -стабилизируется на уровне 210-215 КОЕ×г-1 на 16 день эксперимента. Таким образом, после адгезии хеликобактер интенсивно размножается, колонизирует слизистую оболочку антрального отдела желудка, вызывая ее повреждение, воспаление и утяжеление течения болезни (Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. - М.: Мед. лит.- Т. 1. - 1999. - 560 с.).
В случае летального исхода заболевания у одного или нескольких подопытных животных проводят патологоанатомическое и гистологическое исследование желудка и начальных отделов кишечника, а также бактериологическое исследование биоптатов разных участков слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. При инициации хеликобактериоза внутримышечным введением белым мышам Дексаметазона развивается выраженное прогрессирующее повреждение слизистой оболочки желудка с участками изъязвления. Макропрепарат слизистой оболочки желудка при развившемся хеликобактериозе на фоне внутримышечного введения раствора препарата Дексаметазона, где 1 - норма, а 2 - патология представлен на фигуре 2. В дне и по краям изъязвленных участков отмечается рубцовая ткань, нарушающая трофику новообразованной слизистой оболочки и, по-видимому, способствующая рецидивированию язвы. Одновременно наблюдается желудочная метаплазия эпителия кишки, которая способствует проникновению бактерий хеликобактера в кишечник, где выявляются эпителиоциты с соответствующими рецепторами для Helicobacter pylori КМ-11 (RifR). При этом отмечается чередование процессов изъязвления и регенерации с формированием хронической дуоденальной язвы, для которой характерна высокая степень обсемененности Helicobacter pylori КМ-11 (RifR) начала двенадцатиперстной кишки.
Claims (5)
1. Способ моделирования хеликобактериоза, включающий пероральное введение белым мышам один раз в сутки 52 мкг препарата Париет, являющегося ингибитором протонного насоса в желудке, с последующим введением животным через 1-1,5 ч перорально однократно в сутки суспензии бактерий Helicobacter pylori KM-HRfR на изотоническом растворе хлорида натрия в объеме 0,2 мл, содержащем 1×105 микробных клеток, причем введение суспензии бактерий Helicobacter pylori KM-11RifR продолжают в течение 10 суток, ежедневно отбирая фекалии для определения количества хеликобактерий, выводимых из организма животных, путем высева фекалий на селективную плотную питательную среду с рифампицином 150 мкг × мл-1 в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч в микроаэрофильных условиях, затем обрабатывают полученные результаты высева фекалий, основываясь на количестве выросших колоний, и выносят суждение о выживаемости и приживаемости бактерий Helicobacter pylori KM-11RifR в желудке, исходя из величины доли жизнеспособных бактерий Helicobacter pylori KM-11RifR от числа введенных перорально животным, а также о начале бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11RifR с фекалиями животных, интенсивности, длительности и продолжительности бактериовыделения Helicobacter pylori KM-11RifR на основании подсчета колоний, выросших в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С при ежедневном отборе и посеве отобранных фекалий белых мышей на селективную плотную питательную среду с рифампицином при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
рН среды 7,3±0,2 ед. рН.
2. Способ моделирования хеликобактериоза по п. 1, отличающийся тем, что бактерии Helicobacter pylori KM-11RifR в количестве 1×105 микробных клеток в объеме 0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия вводят перорально один раз в сутки белым мышам на фоне иммуносупрессивного эффекта от внутримышечного введения синтетического глюкокортикоидного препарата Дексаметазона в дозе 40 мкг в сутки на одну белую мышь.
3. Способ моделирования хеликобактериоза по п. 1, отличающийся тем, что в работе для перорального введения белым мышам используют маркированный по признаку устойчивости к антибиотику рифампицину штамм Helicobacter pylori KM-11RifR, при этом маркированные бактерии штамма Helicobacter pylori KM-11RifR получают путем их выращивания на плотной питательной среде с повышающимися концентрациями антибиотика, начиная с 10 мкг × мл-1 до 150 мкг × мл-1, причем выросшие колонии спонтанных мутантов, сохраняющих видовые признаки, отбирают и повторно высевают на плотную питательную среду с более высокой концентрацией антибиотика вплоть до 150 мкг × мл-1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018117831A RU2690943C1 (ru) | 2018-05-14 | 2018-05-14 | Способ моделирования хеликобактериоза |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018117831A RU2690943C1 (ru) | 2018-05-14 | 2018-05-14 | Способ моделирования хеликобактериоза |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2690943C1 true RU2690943C1 (ru) | 2019-06-07 |
Family
ID=67037900
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018117831A RU2690943C1 (ru) | 2018-05-14 | 2018-05-14 | Способ моделирования хеликобактериоза |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2690943C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2748123C1 (ru) * | 2020-08-04 | 2021-05-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кировский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Кировский ГМУ Минздрава России) | Способ расчета дозы дексаметазона для разработки биологической модели иммуносупрессии на мышах |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5985243A (en) * | 1994-09-28 | 1999-11-16 | Chiron S.P.A. | Mouse model for Helicobacter pylori infection |
| RU2401463C1 (ru) * | 2009-06-09 | 2010-10-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО ОрГМА Росздрава) | Способ моделирования экспериментального рака желудка |
-
2018
- 2018-05-14 RU RU2018117831A patent/RU2690943C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5985243A (en) * | 1994-09-28 | 1999-11-16 | Chiron S.P.A. | Mouse model for Helicobacter pylori infection |
| RU2401463C1 (ru) * | 2009-06-09 | 2010-10-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО ОрГМА Росздрава) | Способ моделирования экспериментального рака желудка |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| TSUJII М. et al. Cell kinetics of mucosal atrophy in rat stomach induced by long-term administration of ammonia // Gastroenterology.- 1933. - Vol. - 104. - P. 769-801. D. WERAWATGANON. Simple animal model of Helicobacter pylori infection // World J Gastroenterol. 2014 Jun 7, Vol. 20(21), P. 6420-6424. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2748123C1 (ru) * | 2020-08-04 | 2021-05-19 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кировский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Кировский ГМУ Минздрава России) | Способ расчета дозы дексаметазона для разработки биологической модели иммуносупрессии на мышах |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| El-Omar et al. | Low prevalence of Helicobacter pylori in inflammatory bowel disease: association with sulphasalazine. | |
| Goodwin et al. | Prevention of nitroimidazole resistance in Campylobacter pylori by coadministration of colloidal bismuth subcitrate: clinical and in vitro studies. | |
| Figura | Helicobacter pylori exotoxins and gastroduodenal diseases associated with cytotoxic strain infection. | |
| US8092793B2 (en) | Treating inflammatory bowel disease with live bacteria | |
| Atherton et al. | Detection of the intragastric sites at which Helicobacter pylori evades treatment with amoxycillin and cimetidine. | |
| Costerton et al. | Biofilms and device‐related infections | |
| Cruz et al. | Nocardiosis: Nocardial osteomyelitis and septicemia | |
| DK2415475T3 (en) | PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING A PROTON PUMP INHIBITOR AND A prebiotic, FOR THE TREATMENT OF ulcerative lesions of the stomach and duodenum | |
| Rosenow | The etiology of cholecystitis and gallstones and their production by the intravenous injection of bacteria | |
| RU2690943C1 (ru) | Способ моделирования хеликобактериоза | |
| Jitmuang | Human Chromobacterium violaceum infection in Southeast Asia: case reports and literature review | |
| CN113975387A (zh) | 一种抗幽门螺旋杆菌卵黄抗体包埋凝胶颗粒的制备方法 | |
| UA73912C2 (en) | A method for the cultivation of bacteria lawsonia intracellularis (variants), a strain lawsonia intracellularis, intended for producing vaccine (variants), a method for the determination of antibodies and a vaccine for induction of immune response to said bacteria by animals | |
| Bai et al. | Vasoactive intestinal polypeptide plays a key role in the microbial-neuroimmune control of intestinal motility | |
| CN111729076B (zh) | 重组人溶菌酶的应用 | |
| RU2746590C1 (ru) | Способ эрадикации бактерий Helicobacter pylori при экспериментальном хеликобактериозе у конвенциональных белых мышей и средство для его осуществления | |
| CN116492374A (zh) | 酪丁酸梭菌在用于制备治疗坏死性小肠结肠炎的益生菌培养物的应用 | |
| RU2745654C1 (ru) | Способ исследования желудочной и кишечной микробиоты при подавлении колонизационной резистентности слизистой оболочки желудка экспериментальных животных | |
| JP6435462B2 (ja) | 微生物の培養方法 | |
| CN117180242A (zh) | 龙血素a在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用 | |
| Bhowmik | Role of Diagnostic procedures in managing human Bacterial infections: A comprehensive overview | |
| RU2713154C1 (ru) | Антихеликобактерное средство и способ его применения | |
| CN109180698A (zh) | 一种用于抑制或杀灭幽门螺旋菌的化合物 | |
| Moosa et al. | Inhibition of Helicobacter pylori by commercial honey | |
| Mitchell et al. | Pneumonia due to Legionella bozemanii: first report of a case in Europe |