RU2689849C1 - Безыгольный инъектор и способ введения днк в целевую область инъекции с его применением - Google Patents
Безыгольный инъектор и способ введения днк в целевую область инъекции с его применением Download PDFInfo
- Publication number
- RU2689849C1 RU2689849C1 RU2018101198A RU2018101198A RU2689849C1 RU 2689849 C1 RU2689849 C1 RU 2689849C1 RU 2018101198 A RU2018101198 A RU 2018101198A RU 2018101198 A RU2018101198 A RU 2018101198A RU 2689849 C1 RU2689849 C1 RU 2689849C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- injector
- antigen
- injection
- solution
- Prior art date
Links
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 53
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 claims abstract description 35
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000007906 compression Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000006835 compression Effects 0.000 claims abstract description 12
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 claims description 16
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 abstract 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 83
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 25
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 21
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 13
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 12
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 9
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 8
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- -1 titanium hydride Chemical compound 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 4
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 4
- AXZAYXJCENRGIM-UHFFFAOYSA-J dipotassium;tetrabromoplatinum(2-) Chemical compound [K+].[K+].[Br-].[Br-].[Br-].[Br-].[Pt+2] AXZAYXJCENRGIM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 229910001487 potassium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 102000046158 human CTAG1B Human genes 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N Zirconium Chemical compound [Zr] QCWXUUIWCKQGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 229910052726 zirconium Inorganic materials 0.000 description 2
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFGKGUXTPFWHIX-UHFFFAOYSA-N 6-[2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]acetyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 DFGKGUXTPFWHIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- QPLDLSVMHZLSFG-UHFFFAOYSA-N Copper oxide Chemical compound [Cu]=O QPLDLSVMHZLSFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005751 Copper oxide Substances 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYNKUCOQLYEJPH-UHFFFAOYSA-N [K][Ti] Chemical compound [K][Ti] KYNKUCOQLYEJPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-KVTDHHQDSA-N aldehydo-D-mannose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009285 allergic inflammation Effects 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229910000416 bismuth oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229910000431 copper oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- TYIXMATWDRGMPF-UHFFFAOYSA-N dibismuth;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Bi+3].[Bi+3] TYIXMATWDRGMPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229910000476 molybdenum oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- PQQKPALAQIIWST-UHFFFAOYSA-N oxomolybdenum Chemical compound [Mo]=O PQQKPALAQIIWST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229910000048 titanium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D1/00—Surgical instruments for veterinary use
- A61D1/02—Trocars or cannulas for teats; Vaccination appliances
- A61D1/025—Vaccination appliances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D7/00—Devices or methods for introducing solid, liquid, or gaseous remedies or other materials into or onto the bodies of animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
- A61K39/001188—NY-ESO
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
- A61M5/178—Syringes
- A61M5/20—Automatic syringes, e.g. with automatically actuated piston rod, with automatic needle injection, filling automatically
- A61M5/2046—Media being expelled from injector by gas generation, e.g. explosive charge
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
- A61M5/178—Syringes
- A61M5/30—Syringes for injection by jet action, without needle, e.g. for use with replaceable ampoules or carpules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской технике, а именно к способу введения ДНК, содержащей участок, кодирующий опухолевый антиген, в организм живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора. Безыгольный инъектор выполнен с возможностью инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения инъекционной иглы. Инъектор включает в себя блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК. Инъектор имеет устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой. Устройство воспламенения содержит продукт горения, сжижаемый за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого является сниженным относительно количества, представленного до сжижения. Инъектор включает блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции. Инъектор содержит поршень и плунжер. Температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК в результате горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК. Техническим результатом является продуцирование антитела, вызывание продуцирования которого является благоприятным, и не продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, то есть, безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в целях селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора. 4 з.п. ф-лы, 6 ил.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001] Настоящее изобретение относится к безыгольному инъектору и способ введения ДНК, основанному на его применении.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] В случае безыгольного инъектора, который выполняет инъекцию без применения какой-либо инъекционной иглы, иногда выбирают такую структуру, чтобы инъекционный компонент осуществлял выпуск в результате приложения давления к камере для размещения, в которой размещен инъекционный раствор, посредством сжатого газа или пружины. Например, в случае безыгольного инъектора, описанного в патентной литературе 1, выбрана следующая структура. А именно, на внутренней стороне основного блока инъектора формируют множество сопловых отверстий, и поршень, который приводят в действие для осуществления выпуска, приспособлен соответствующим образом для каждого из сопловых отверстий. На основании данной структуры предполагают реализовать однородное инъецирование в отношении цели путем одновременного впрыскивания инъекционного раствора через множество сопловых отверстий.
[0003] Кроме того, известна такая форма, в которой сжатый газ применяют в качестве источника энергии для выпуска инъекционного раствора посредством безыгольного инъектора. Например, в случае безыгольных инъекторов, описанных в патентной литературе 2 и 3, иллюстрируется такая форма со сжатием, в которой мгновенно выполняют сжатие в большой степени на начальной стадии выпуска, и затем сила сжатия постепенно уменьшается в течение от 40 до 50 мс.
[0004] С другой стороны, в патентной литературе 4 описан способ для вызывания иммунного ответа в отношении белкового антигена, предназначенного для вызывания in vivo, посредством применения безыгольного устройства для инъекций эмиссионного типа в целях введения ДНК, препарата ДНК и/или другого полинуклеотида для осуществления введения генетической вакцины, переноса генов и генной терапии. В частности, описан способ, в котором иммунный ответ в отношении полинуклеотидной вакцины вызывают в животном посредством применения безыгольного инъектора (производства BIOJECTOR (торговая марка)). Кроме того, в его типовом варианте осуществления описано, что когда ДНК-вакцину вводили в мускулы подопытного животного посредством применения безыгольного инъектора, наблюдался иммунный ответ, который был более значимым по сравнению со случаем применения оборудованного иглой инъектора.
[0005] Однако, при иммунном ответе в некоторых случаях продуцируется некоторое антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным. Неизвестны какие-либо ДНК или препараты ДНК, а также способы их введения в живой организм, при которых продуцируется антитело, вызывание продуцирования которого является благоприятным, тогда как антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, не продуцируется.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА
[0006] Патентная литература 1: выложенная заявка на патент Японии No. 2004-358234
Патентная литература 2: патент США No. 5399163
Патентная литература 3: публикация заявки на патент США No. 2005/0010168
Патентная литература 4: выложенная заявка на патент Японии No. 2002-511396 (PCT)
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ЗАДАЧИ, КОТОРЫЕ РЕШАЕТ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0007] Настоящее изобретение было сделано с учетом обстоятельств, описанных выше, и его целью является предоставление такого безыгольного инъектора, чтобы продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого является благоприятным, и не продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, то есть, безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в целях селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора.
СРЕДСТВА ДЛЯ РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ
[0008] В результате тщательных исследований изобретатели по настоящему изобретению обнаружили, что безыгольный инъектор, описанный ниже, может достичь приведенной выше цели в результате уделения вниманию характеристике продукта горения, создаваемого порошковым воспламенителем, а также давлению, прилагаемому к раствору ДНК посредством воспламенения, и температуре продукта горения, посредством применения устройства воспламенения, основанного на применении порошкового воспламенителя для безыгольного инъектора, в результате чего изобретатели выполнили настоящее изобретение. Настоящее изобретение включает в себя следующее.
[0009] <1> Безыгольный инъектор для инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения какой-либо инъекционной иглы, при этом безыгольный инъектор включает в себя:
блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК;
устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой, и продукт горения является сжижаемым за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения, или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого снижено относительно количества, представленного до сжижения; и
блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции, при этом:
температура предварительно заданного продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК.
<2> Безыгольный инъектор в соответствии с <1>, в котором температура продукта горения, обеспечиваемая в течение сжатия, изменяется до температуры близкой к комнатной температуре в пределах 10 мс после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска.
<3> Способ введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в организм живого млекопитающего (за исключением человека) посредством применения безыгольного инъектора, в соответствии с определенным в <1> или <2>.
<4> Способ по п. <3>, в котором ДНК находится в форме вакцины.
<5> Способ по п. <3> или <4>, в котором млекопитающее (за исключением человека) является мышью.
<6> Способ по любому из п. <3>-<5>, в котором антиген представляет собой антиген NY-ESO-1.
ПОЛЕЗНЫЙ ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0010] Согласно настоящему изобретению является возможным предоставление безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген для селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего, посредством применения безыгольного инъектора.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0011] На фиг. 1 показана схематическая структура инъектора согласно первому изобретению по настоящему изобретению.
На фиг. 2 показан график, иллюстрирующий зависимость силы выпуска раствора ДНК от времени в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 3A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между размером опухоли и числом дней, прошедших после трансплантации опухоли, в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 3B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между размером опухоли и числом дней, прошедших после трансплантации опухоли, в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 4A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 4B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 5A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 5B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 6A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
На фиг. 6B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.
ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ДЛЯ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0012] Настоящее изобретение включает в себя первое изобретение, которое относится к изобретению безыгольного инъектора, и второе изобретение, которое относится к изобретению способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в организм живого млекопитающего (за исключением человека) посредством применения безыгольного инъектора.
[0013] <Первое изобретение>
Первое изобретение по настоящему изобретению заключается в безыгольном инъекторе для инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения какой-либо инъекционной иглы; безыгольный инъектор включает в себя блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК; устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения такой характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой, и продукт горения сжижается за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения, или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого снижено по сравнению с количеством, представленным до сжижения; и блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжимаемого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции; при этом температура продукта горения, которая обеспечивается в течение сжатия, изменяется до температуры близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс после того, как давление, которое прилагается к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК.
[0014] В инъекторе согласно первому изобретению по настоящему изобретению, термин "сторона переднего конца" означает сторону, на которой расположено выпускное отверстие для выпуска целевого вещества инъекции из инъектора, и термин "сторона ближнего конца" означает сторону, которая является противоположной стороне переднего конца. Эти термины не относятся к какому-либо заданному месту или какому-либо заданному положению в смысле какого-либо ограничения.
[0015] В инъекторе согласно первому изобретению по настоящему изобретению блок привода использует в качестве энергии выпуска энергию горения топлива или взрывчатого вещества, воспламеняемого устройством воспламенения. Следует отметить, что когда энергия горения топлива используется, например, в качестве энергии выпуска, топливо может представлять собой любое топливо из топлива, содержащего цирконий и перхлорат калия (ZPP), топлива, содержащего гидрид титана и перхлорат калия (THPP), топлива, содержащего титан и перхлорат калия (TiPP), топлива, содержащего алюминий и перхлорат калия (APP), топлива, содержащего алюминий и оксид висмута (ABO), топлива, содержащего алюминий и оксид молибдена (AMO), топлива, содержащего алюминий и оксид меди (ACO), и топлива, содержащего алюминий и оксид железа (AFO), или топлива, состоящего из комбинации множества указанных видов топлива. Характеристики этих видов топлива следующие. Продукт их горения не содержит газовый компонент при комнатной температуре, даже если продукт горения представляет собой газ в высокотемпературном состоянии. Таким образом, продукт горения сжижается непосредственно после воспламенения. Соответственно, может допускаться изменение температуры предварительно заданного продукта горения, которая обеспечивается в течение сжатия, до значения около комнатной температуры в течение короткого периода времени после того, как давление, которое прилагается к раствору ДНК в за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начального пикового давления выпуска, в течение процесса сжатия для выпуска раствора ДНК. Время (период времени) обычно находится в пределах 20 мс и, предпочтительно, в пределах 10 мс. В результате, как описано ниже, когда ДНК, содержащую участок, кодирующий антиген, вводят в живой организм, существует возможность селективного вызывания иммунного ответа. Кроме того, когда энергия, выработанная продуцирующим газ веществом, используется в качестве энергии выпуска, также существует возможность использования в качестве продуцирующего газ вещества одноосновного бездымного топлива, а также множества продуцирующих газ веществ, используемых в качестве генератора газа для воздушных подушек безопасности и генератора газа для натяжителя ремня безопасности.
[0016] Энергия выпуска, которая выдается блоком привода, передается через поршень на плунжер, и плунжер перемещается в камере загрузки. Соответственно, раствор ДНК, который размещен в камере загрузки, вытесняется вдоль канала, формируемого блоком горловины. Раствор ДНК в итоге выпускается из выпускного отверстия в целевую область инъекции.
[0017] В данном контексте, в случае инъектора согласно первому изобретению по настоящему изобретению, раствор ДНК не размещают в камере загрузки с самого начала. Раствор размещают путем засасывания раствора ДНК в камеру загрузки с помощью горловины, имеющей выпускное отверстие. Таким образом реализуют структуру, которой требуется операция загрузки для выполнения загрузки в камеру загрузки. Соответственно, существует возможность инъецирования произвольного требуемого раствора ДНК. Ввиду этого, в случае инъектора согласно первому изобретению по настоящему изобретению, шприцевой блок и основной блок инъектора соединены съемным образом.
[0018] Ниже будет приведено объяснение со ссылкой на чертеж инъектора 1 по первому варианту осуществления первого изобретения по настоящему изобретению. Структура или конструкция приведенного ниже варианта осуществления представлена в качестве примера, и первое изобретение по настоящему изобретению не ограничено структурой или конструкцией данного варианта осуществления. Следует отметить, что «сторона переднего конца» и «сторона ближнего конца» используются как термины для представления относительного взаимного расположения в продольном направлении инъектора 1. «Сторона переднего конца» представляет положение, которое отклонено в сторону переднего конца инъектора 1 в соответствии с описанным ниже, то есть, отклонено в направлении выпускного отверстия 31a. «Сторона ближнего конца» представляет направление, противоположное «стороне переднего конца» в продольном направлении инъектора 1, то есть, направление на стороне блока привода 7.
[0019](Структура инъектора 1)
На фиг. 1 показана схематическая структура инъектора 1, иллюстрирующая вид в сечении, также сделанном вдоль продольного направления инъектора 1. Инъектор 1 сформирован таким образом, что узел инъектора 10, который получают путем сборки как единого целого подузла, сформированного из шприцевого блока 3 и плунжера 4, и подузла, сформированного основным блоком инъектора 6, поршня 5 и блока привода 7, прикреплен к корпусу (корпусу инъектора) 2.
[0020] Как описано выше, узел инъектора 10 сформирован таким образом, что узел инъектора 10 может быть отсоединен от корпуса 2. Раствор ДНК загружают в камеру загрузки 32, которая размещена между шприцевым блоком 3 и плунжером 4, входящим в состав узла инъектора 10. Таким образом, узел инъектора 10 представляет собой блок, который используют однократно и выбрасывают каждый раз после выпуска раствора ДНК. С другой стороны, батарея 9, которая обеспечивает электропитанием воспламенитель 71, входящий в состав блока привода 7 узла инъектора 10, входит в состав части корпуса 2. Электропитание подается из батареи 9 через проводное соединение между электродом, размещенным на стороне корпуса 2, и электродом, размещенным на стороне блока привода 7 узла инъектора 10, в соответствии с операцией, выполняемой пользователем путем нажатия кнопки 8, размещенной на корпусе 2. Следует отметить, что как для электрода, размещенного на стороне корпуса 2, так и для электрода, размещенного на стороне блока привода 7 узла инъектора 10, форма и расположение обоих электродов спроектированы таким образом, чтобы оба электрода автоматически приводились в контакт друг с другом, когда узел инъектора 10 прикрепляют к корпусу 2. Кроме того, корпус 2 является блоком, который может быть использован многократно, при условии что электроэнергия, которая подается к блоку привода 7, сохраняется в батарее 9. Следует отметить, что касается корпуса 2, когда электроэнергия батареи 9 исчерпана, можно заменить только батарею 9, а корпус 2 можно продолжать использовать.
[0021] Кроме того, любой дополнительный топливный компонент не обязательно размещают конкретно в основном блоке инъектора 6, показанном на фиг. 1. Однако, в целях настройки передачи или изменения давления, прилагаемого к инъецируемому раствору посредством поршня 5, продуцирующее газ вещество и т.п., которое продуцирует газ в результате горения посредством продукта горения, продуцируемого посредством воспламенения топлива в устройстве воспламенения 71, также может быть размещено в воспламенителе 71 или в сквозном отверстии в основном блоке инъектора 6. Структура, в которой продуцирующее газ вещество размещают в воспламенителе 71, находится в пределах ранее известной методики, в соответствии с изложенным, например, в международной публикации No. 01-031282 и выложенной заявке на патент Японии No. 2003-25950. Кроме того, пример продуцирующего газ вещества поясняется одноосновным бездымным топливом, состоящим на 98% по массе из нитроцеллюлозы, на 0,8% по массе из дифениламина и на 1,2% по массе из сульфата калия. Кроме того, также существует возможность использования множества продуцирующих газ веществ, используемых в качестве генератора газа для воздушных подушек безопасности и генератора газа для натяжителя ремня безопасности. Также существует возможность изменения времени завершения горения продуцирующего газ вещества путем настройки измерений, размера и формы, в частности, формы поверхности продуцирующего газ вещества, размещенного в сквозном отверстии. Соответственно, передача давления, которое будет приложено к инъекционному раствору, может представлять собой требуемую передачу, то есть, передачу, с помощью которой инъекционный раствор может быть должным образом доставлен к целевой области инъекции. В первом изобретении по настоящему изобретению продуцирующее газ вещество и т.п., которое используется опционально, также включено в блок привода 7.
[0022] <Второе изобретение>
Второе изобретение по настоящему изобретению относится к способу введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в организм живого млекопитающего (за исключением человека) посредством применения безыгольного инъектора по первому изобретению.
[0023](Антитело)
Как указано в описанных ниже примерах, когда выполняют способ введения, в результате продуцируется антитело, вызывание продуцирования которого является благоприятным, тогда как антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, не продуцируется. То есть, существует возможность селективного вызывания иммунного ответа. Тип, подтип и т.п., соответственно, антитела в соответствии с описанным выше специально не ограничены. Однако в данном случае объяснение будет сделано на примерах антитела IgG1 и антитела IgG2.
[0024] Известно, что Т-клетки-хелперы 0 типа (клетки Th0), которые представляют собой клетки-предшественники Т-клеток-хелперов, дифференцируются в Т-клетки-хелперы 1 типа (клетки Th1) или Т-клетки-хелперы 2 типа (клетки Th2), при этом клетки Th1 способствуют клеточному иммунитету, и клетки Th2 способствуют гуморальному иммунитету. Иммунная система устанавливается посредством равновесия между клетками Th1 и клетками Th2.
[0025] Клетки Th1 участвуют в активации цитотоксических Т-клеток (Т-клетки-киллеры, CTL), которые обеспечивают защиту от инфекций и оказывают иммунное воздействие на раковые клетки. Ввиду этого также разработана иммунотерапия против раковых клеток, в которой используются клетки Th1. Однако, когда имеется избыток клеток Th1 и имеется недостаток клеток Th2, возникает аутоиммунное заболевание, в котором также подвергаются атаке аутологичные клетки.
С другой стороны, клетки Th2 особенно влияют на B-клетки, которые продуцируют антитело. Клетки Th2 могут демонстрировать иммунный эффект в широком диапазоне в живом организме. Однако клетки Th2 также участвуют в аллергическом воспалении, и клетки Th2 секретируют различные интерлейкины. В результате B-клетки дифференцируются в клетки, продуцирующие антитело IgE, и/или B-клетки способствуют дегрануляции и активации эозинофилов. Известно, что B-клетки в результате вызывают аллергические заболевания, включая, например, атопическую бронхиальную астму и аллергический ринит. Ввиду этого является нежелательным, чтобы имелся недостаток клеток Th1 и избыток клеток Th2.
Как описано выше, в живом организме состояние, в котором одни из клеток Th1 и клеток Th2 являются преобладающими, не является благоприятным, и является благоприятным наличие равновесия. Однако в случае терапии рака является благоприятным, чтобы имелся избыток клеток Th1 и недостаток клеток Th2, как в случае терапии, разработанной в соответствии с описанным выше.
[0026] Избыток/недостаток можно определить путем измерения титров антител для антител, в процессе продуцирования которых специфично участвуют соответствующие клетки, до продуцирования антител. Типы антител, в продуцировании которых специфично участвуют соответствующие клетки, являются известными. Однако, например, известно, что клетки Th1 участвуют в продуцировании антитела IgG2 (которое может представлять собой, например, антитело IgG2a, принадлежащее к его подклассу), и клетки Th2 участвуют в продуцировании антитела IgG1. Таким образом, в терапии против рака, в которой является предпочтительным, чтобы имелся избыток клеток Th1 и недостаток клеток Th2, является предпочтительным детектирование антитела IgG2 и отсутствие детектирования антитела IgG1, или чтобы антитело IgG1 не присутствовало в эффективном количестве, даже если антитело IgG1 было детектировано.
[0027] Любой известный способ, который включает, например, способ ELISA, может служить примером способа для обнаружения антитела. Он будет кратко объяснен ниже. Сначала очищенный или частично очищенный антиген адсорбируют на твердофазной поверхности 96-луночного планшета для ELISA и т.п., при этом твердофазная поверхность, на которой не адсорбируется антиген, покрыта белком, не имеющим отношение к антигену, например, бычьим сывороточным альбумином (далее в настоящем описании обозначаемом "BSA"). После промывания поверхности, поверхность приводят в контакт с образцом, подвергаемым поэтапному разведению, в качестве первого антитела, и моноклональное антитело, содержащееся в образце, связывается с антигеном. Далее меченное ферментом антитело против антитела мыши добавляют в качестве второго антитела, с тем чтобы антитело связалось с антителом мыши. После промывки добавляют субстрат для фермента с целью измерения, например, изменения поглощающей способности, вызываемого формированием цвета, основанным на разложении субстрата. Таким образом вычисляют титр антитела.
[0028](Млекопитающее)
Млекопитающее конкретно не ограничивают. Однако, примером млекопитающего является, например, человек, мышь, крыса, морская свинка, хомяк, бык, козел, овца, обезьяна, собака и кошка. Предпочтительно, млекопитающее является человеком, мышью, крысой, быком, собакой или кошкой.
[0029](ДНК)
Не является необходимым, чтобы ДНК во втором изобретении по настоящему изобретению была зафиксирована или иммобилизована на коллоидном золоте, в отличие от обычного способа с применением генной пушки и биобаллистической пушки. Следовательно, подготовка является чрезвычайно легкой по сравнению с обычной методикой. Кроме того, ДНК может присутствовать, например, в стерильной воде и стерильном растворителе, а также в растворителе, который может быть использован для получения иммобилизующего ДНК раствора коллоидного золота, который используется в обычном способе с применением генной пушки и т.п., при условии что ДНК является стабильной и не прилагается вредного воздействия, такого как разрушение клеток, в которые ДНК должна быть введена. Кроме того, также не является необходимым наличие, например, эксципиента и адъюванта, в отличие от любых ДНК-вакцин.
[0030] Кроме того, для ДНК по второму изобретению по настоящему изобретению, ее форма специально не ограничена, при условии что ДНК сконструирована таким образом, что ДНК содержит участок, кодирующий антиген для продуцирования антитела в живом организме и ДНК может экспрессировать предварительно заданный антиген, когда ДНК вводят в живой организм (в клетки) млекопитающего.
Например, в качестве иллюстрации, ДНК может быть сконструирована в форме, в которой ДНК содержит экспрессионную кассету или экспрессионный вектор. Кроме того, например, ДНК может быть поставлена под управление промотора, который подходит для вводимой части и типа млекопитающего, в которого ДНК должна быть введена. Кроме того, также допускается содержание одного или более энхансеров в целях повышения экспрессии антигена.
[0031] Экспрессионный вектор конкретно не ограничен, при условии что предварительно заданный антиген экспрессируется, когда экспрессионный вектор вводят в живой организм (в клетки) млекопитающего. Например, иллюстрацией является плазмидный вектор pcDNA3.1(-) и т.п., который представляет собой экспрессионный вектор млекопитающих. Имеющиеся плазмидные векторы известны специалистам в данной области техники.
[0032] Далее может быть выполнено субклонирование для экспрессионного вектора и рекомбинантного вектора в соответствии с любым известным способом. В данной процедуре прокариотом-хозяином может являться, например, Escherichia coli, Bacillus subtilis и бактериальный штамм, принадлежащий к роду Pseudomonas. В этом случае в качестве промотора можно использовать триптофановый промотор, промотор PL, промотор lac и промотор tac. В качестве маркерного гена можно использовать, например, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Кроме того, способ для извлечения экспрессионного вектора из клеток хозяина также может соответствовать любому способу, известному в технике.
[0033] (Антиген)
ДНК по второму изобретению по настоящему изобретению содержит участок, кодирующий антиген для продуцирования антитела в живом организме, когда ДНК вводят в живой организм (в клетки) млекопитающего.
Антиген по второму изобретению по настоящему изобретению содержит белок, который содержит аминокислотную последовательность, в которой один или несколько, например, от 1 до 10 и, предпочтительно, от 1 до 5 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности антигена заменены, удалены, добавлены и/или вставлены, и которая является функционально эквивалентной антигену, то есть, белок, который обладает активностью антигена. Кроме того, допускается использование полной аминокислотной последовательности антигена. Однако, допускается использование части (в частности, эпитопа), которая, как известно, обладает антигенными свойствами. Таким образом, ДНК, описанная выше, также включает ДНК, которая содержит область, кодирующую белок в соответствии с описанным выше. Кроме того, также допускается использование последовательности оснований, не содержащей интроны, такой как кДНК.
Следует отметить, что является известным, что белок, который имеет аминокислотную последовательность, модифицированную посредством удаления, добавления и/или замены на любую другую аминокислоту, в отношении одного или множества аминокислотных остатков относительно определенной аминокислотной последовательности, сохраняет биологическую активность.
[0034] Антиген конкретно не ограничен, при условии что антитело против антигена продуцируется в живом организме млекопитающего, когда антиген вводят в форме ДНК в живой организм млекопитающего. Однако, антиген предпочтительно представляет собой опухолевый антиген.
В данном случае "опухолевый антиген" означает, что антиген появился недавно, например, не является антигеном гистосовместимости или специфичным для органа/ткани антигеном, полученным материнским клетками при раковом перерождении клеток, и антиген детектируется иммунологическим способом. Опухолевый антиген включает специфичный для опухоли антиген (антиген, который существует только в опухолевых клетках и не обнаруживается в других здоровых клетках) и ассоциированный с опухолью антиген (антиген, который существует в другом органе/ткани или здоровых клетках других типов/других линий, и/или который экспрессируется в процессе роста/дифференциации).
[0035] Тип опухолевого антигена по второму изобретению по настоящему изобретению конкретно не ограничен. Однако, опухолевый антиген предпочтительно представляет собой антиген NY-ESO-1.
ДНК, которая кодирует антиген NY-ESO-1, относится, например, к ДНК, которая кодирует аминокислотную последовательность человеческого антигена NY-ESO-1, в случае человеческого антигена NY-ESO-1. Кроме того, аналогично описанному выше, ДНК также включает ДНК, кодирующую белок, который содержит аминокислотную последовательность, в которой один или несколько, например, от 1 до 10 и, предпочтительно, от 1 до 5 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности заменены, удалены, добавлены и/или вставлены, и которая является функционально эквивалентной человеческому антигену NY-ESO-1, состоящему из данной аминокислотной последовательности, то есть, белку, который обладает такой же активностью, как человеческий антиген NY-ESO-1.
Следует отметить, что антиген предпочтительно представляет собой антиген, происходящий из вида животных, в которой должна быть введена ДНК. Например, когда введение выполняется в человека, является предпочтительным использование человеческого антигена.
[0036] Путь введения ДНК конкретно не ограничен. Однако, является предпочтительным, чтобы путь введения являлся парентеральным. Примерами путей введения являются, например, внутривенный, внутриартериальный, подкожный, внутрикожный, внутримышечный или внутрибрюшинный путь. Предпочтительно, путь введения представляет собой подкожный путь.
Количество вводимой ДНК отличается в зависимости, например, от типа и степени заболевания, различий в поле, возрасте, массе тела млекопитающего, а также от маршрута введения. Однако количество вводимой ДНК конкретно не ограничено, при условии что демонстрируется эффект по второму изобретению по настоящему изобретению. Количество вводимой ДНК обычно составляет от 0,001 мкг до 1000 мг, предпочтительно, от 0,01 мкг до 10 мг, и, более предпочтительно, от 0,1 мкг до 100 мкг за однократное введение.
ДНК также может использоваться в комбинации с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. ДНК могут вводить одновременно с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. Альтернативно, ДНК могут вводить через некоторый промежуток времени. Однако, любой порядок введения может применяться без возникновения проблем.
[0037] (ДНК-вакцина)
ДНК по второму изобретению по настоящему изобретению может иметь форму вакцины, то есть, ДНК-вакцины, в результате соответствующего применения известного способа для формирования вакцины.
В данном случае ДНК может быть смешана, например, с носителем, использование которого допускается для формирования фармацевтической композиции (например, изотонический раствор, содержащий физиологический раствор, глюкозу и другое вспомогательное вещество, в качестве которого можно указать, например, D-сорбитол, D-маннозу, D-маннитол и хлорид натрия, и подходящее вспомогательное вещество для растворения, например, спирт, в частности, этанол, многоатомный спирт, например, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль, и неионное поверхностно-активное вещество, например, полисорбат 80 (TM) и HCO-50 могут быть указаны в качестве примеров, но не ограничены указанным), подходящим эксципиентом и адъювантом, с тем чтобы из ДНК можно было сформировать фармацевтическую композицию, готовую к применению.
[0038] Кроме того, ДНК-вакцина может содержать фармацевтически приемлемый носитель для приготовления эксципиента или носитель, использование которого допускается для формирования фармацевтической композиции. Также допускается содержание биологически совместимого материала, включая, например, силикон, коллаген и желатин. Кроме того, также допускается использование эмульсии, содержащей различные адъюванты. Известно множество адъювантов, и специалисты в данной области техники могут легко выбрать подходящий. Кроме ТОО, в дополнение к адъюванту, описанному выше, также допускается содержание одной или двух, или более добавок для фармацевтической композиции, выбранных, например, из разбавителя, отдушки, антисептика или консерванта, эксципиента, измельчителя, смазывающего вещества, связывающего вещества, эмульгатора и пластификатора.
[0039] Количество вводимой ДНК отличается в зависимости, например, от типа и степени заболевания, различий в поле, возрасте, массе тела млекопитающего, а также от маршрута введения. Однако количество вводимой ДНК конкретно не ограничено, при условии что демонстрируется эффект по второму изобретению по настоящему изобретению. Количество вводимой ДНК обычно составляет от 0,001 мкг до 1000 мг, предпочтительно, от 0,01 мкг до 10 мг, и, более предпочтительно, от 0,1 мкг до 100 мкг за однократное введение.
[0040] ДНК-вакцина также может использоваться в комбинации с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. ДНК-вакцину могут вводить одновременно с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. Альтернативно, ДНК-вакцину могут вводить через некоторый промежуток времени. Однако, любой порядок введения может применяться без возникновения проблем.
ПРИМЕРЫ
[0041] Ниже настоящее изобретение будет объяснено более конкретно в отношении примеров. Однако настоящее изобретение не ограничено примерами, описанными ниже, без отклонения от его сущности и существенных характеристик.
[0042] (Продуцирование плазмидной ДНК)
кДНК человеческого гена NY-ESO-1 была куплена у Origene (Cat#: SC303002), и последовательность гена была субклонирована в pcDNA3.1(-) (Life Technologies) в соответствии с известным способом.
[0043] (Опухолевые клетки)
Клетки CT26, которые стабильно экспрессировали человеческий белок NY-ESO-1, были использованы в качестве опухолевых клеток для трансплантации опухоли, описанной ниже.
Клетки были приготовлены в соответствии со следующей процедурой. Культивированный штамм клеток колоректального рака мыши CT26 промывали PBS, после чего проводили отшелушивание с использованием PBS, содержащего 0,5% трипсина, и восстанавливали с использованием среды RPMI1640, содержащей 10% FBS. После центрифугирования (1200 об/мин, 5 минут, 4°C) супернатант удаляли. Клетки дважды промывали средой OPTI-MEM и культивировали в течение ночи в среде. На следующий день плазмиду со встроенным человеческим геном NY-ESO-1 вводили путем использования реагента для трансфекции Lipofectamine 2000 (Life Technologies), после чего проводили культивирование. Клетки CT26 с введенным геном отшелушивали и восстанавливали посредством обработки трипсином. Клетки культивировали в течение 10 дней в среде RPMI1640, содержащей 10% FBS, содержащий 350 мкг/мл G418, и затем выполняли моноклонирование посредством предельного разведения. Устойчивые клетки CT26, стабильно экспрессирующие человеческий белок NY-ESO-1, культивировали в среде RPMI1640, содержащей 10% FBS.
[0044] [Пример 1] (Оценка силы выпуска безыгольного инъектора)
35 мкл раствора ДНК (растворитель: PBS, конечная концентрация: 1 мкг/мкл) загружали в безыгольный инъектор, показанный на фиг. 1 (диаметр горловины: диаметр 0,1 мм) для оценки давления (силы выпуска) в инъекторе с момента сжатия раствора ДНК, производимого за счет горения порошкового воспламенителя, до состояния, представленного после выпуска. 35 мг топлива (ZPP), содержащего цирконий и перхлорат калия, использовали в качестве топлива.
Силу выпуска измеряли посредством приведенного ниже способа, аналогичного способу измерения, описанному в выложенной заявке на патент Японии No. 2005-21640. То есть, силу выпуска прилагали рассредоточенным образом к диафрагме датчика нагрузки, расположенного в направлении хода потока относительно горловины. Выход из датчика нагрузки дискретизировали или собирали с помощью устройства сбора и отображения данных через усилитель обнаружения, и выходные данные отображали и сохраняли в качестве величины силы выпуска (N) с течением времени.
На фиг. 2 показан график, иллюстрирующий зависимость силы выпуска раствора ДНК от времени. Было обнаружено, что давление возвращалось к давлению, обеспеченному до сжатия, в течение чрезвычайно короткого периода времени после того, как давление, которое было приложено к раствору ДНК, достигало начальной пиковой силы выпуска.
[0045] (Противоопухолевый тест)
[Пример 2-1 (безыгольный инъектор)] 35 мкл раствора ДНК (растворитель: PBS, конечная концентрация: 1 мкг/мкл) загружали в безыгольный инъектор, использованный в описанном выше примере 1, и инъекцию выполняли в побритую правую заднюю часть самки мыши BALB/c (возраст 8 недель, Japan SLC). День первого введения обозначался как день 0, и второе введение выполняли на 8 день.
[0046] На 16 день клетки штамма клеток колоректального рака мыши CT26, в которые был стабильно внедрен ген NY-EXO-1, культивируемые в кювете T75 (Nunc), промывали PBS. После этого клетки отшелушивали с использованием PBS, содержащего 0,5% трипсина, и восстанавливали с использованием 8 мл среды RPMI1640, содержащей 10% FBS. После центрифугирования (1200 об/мин, 5 минут, 4°C) супернатант удаляли. Клетки дважды промывали средой RPMI1640, и клетки ресуспендировали в среде RPMI1640 в концентрации 1×106 клеток/100 мкл. Подкожную трансплантацию выполняли в количестве 100 мкл/субъект в побритую правую часть живота самки мыши BALB/c.
[0047] После трансплантации размер трансплантированной опухоли (длинный диаметр (большая ось) и короткий диаметр (малая ось)) измеряли с течением времени с помощью электронного штангенциркуля. Следует отметить, что в примере 2-1 эксперимент проводили независимо для шести субъектов.
[0048] [Сравнительный пример 2-1 (инъецирование с применением иглы)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 2-1, за исключением того, что для инъекции применяли оборудованный иглой инъектор. Следует отметить, что в сравнительном примере 2-1 эксперимент проводили независимо для пяти субъектов.
[0049] [Сравнительный пример 2-2 (обычная генная пушка)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 2-1, за исключением того, что для инъекции применяли генную пушку (Helios Gene Gun System (Bio-Rad)). Следует отметить, что давление газа в течение инъецирования составляло от 2413 до 2758 килопаскалей (кПа). Плазмидную ДНК вводили в количестве 1 мкг/мышь в форме, покрытой 1 мкм частицами золота (Bio-Rad). Кроме того, в сравнительном примере 2-2 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.
[0050] [Сравнительный пример 2-3 (контроль)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 2-1, за исключением того, что инъекцию не выполняли. Следует отметить, что в сравнительном примере 2-3 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.
[0051] На фиг. 3A показаны графики, иллюстрирующие зависимость измеренного изменения размера опухоли от времени в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 3B показан график, иллюстрирующий изменение среднего значения размера опухоли в соответствующих примерах.
Согласно результатам, было обнаружено, что в случае безыгольного инъецирования увеличение опухоли не становилось меньшим по сравнению с применением обычной генной пушки, но увеличение опухоли становилось значительно меньшим по сравнению с контрольной группой и инъекцией с использованием иглы.
[0052] (Измерение титра антител, тест 1)
[Пример 3-1 (безыгольная инъекция)] 35 мкл раствора ДНК (растворитель: PBS, конечная концентрация: 1 мкг/мкл) загружали в безыгольный инъектор, использованный в описанном выше примере 1, и инъекцию выполняли в побритую правую заднюю часть самки мыши BALB/c (возраст 8 недель, Japan SLC). День первого введения обозначался как день 0, и второе введение выполняли на 8 день.
[0046] На 16 день у мыши собирали кровь и размещали стационарно на ночь при 4°C. После этого выполняли центрифугирование (10000 об/мин, 5 минут) для разделения и получения сыворотки.
[0054] Титр антител для антитела против человеческого NY-ESO-1 (pan-IgG), присутствовавшего в полученной сыворотке, измеряли посредством метода ELISA. Следует отметить, что в примере 3-1 эксперимент проводили независимо для шести субъектов.
Концентрацию белка NY-ESO-1 (Origene, Cat# TP313318) доводили до 0,4 нг/мл, и белок NY-ESO-1 добавляли в 96-луночный планшет с плоским дном MaxiSorp (Nunc) в количестве 50 мкл/лунку и размещали стационарно на ночь при 4°C. Раствор антитела удаляли посредством декантации, после чего выполняли промывание четыре раза отмывочным буфером (PBS, содержащий 0,05% твин 20). Блокирующий буфер (PBS, содержащий 1% BSA) добавляли в количестве, составляющем 200 мкл/лунку, и смесь размещали стационарно на 1 час при комнатной температуре. Образец сыворотки поэтапно разводили в блокирующем буфере. Блокирующий буфер удаляли посредством декантации, и разведенную сыворотку или блокирующий буфер (пустая лунка) добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку, после чего размещали стационарно на 2 часа при комнатной температуре. Разведенную сыворотку удаляли посредством декантации, после чего выполняли промывание четыре раза отмывочным буфером. HRP-меченное антитело против мышиного IgG разводили в 5000 раз в блокирующем буфере, который добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку, и смесь размещали стационарно на 1 час при комнатной температуре. Раствор антитела удаляли посредством декантации, после чего выполняли промывание четыре раза отмывочным буфером. После полного удаления отмывочного буфера раствор TMB добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку. После стационарного размещения на 3 минуты при комнатной температуре, 0,18 M серной кислоты добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку, в целях измерения поглощающей способности на 450 нм посредством считывателя микропланшетов модели 680 (Bio-rad). Численное значение, которое получали путем вычитания значения для пустой лунки из значения для каждой из лунок, использовали в качестве значения для каждой из лунок при выполнении анализа данных. Для каждого образца приготовляли дубликат.
[0055] [Сравнительный пример 3-1 (инъецирование с применением иглы)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что для инъекции применяли оборудованный иглой инъектор. Следует отметить, что в сравнительном примере 3-1 эксперимент проводили независимо для пяти субъектов.
[0056] [Сравнительный пример 3-2 (обычная генная пушка)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что для инъекции применяли генную пушку (Helios Gene Gun System (Bio-Rad)). Следует отметить, что давление газа в течение инъецирования составляло от 2413 до 2758 килопаскалей (кПа). Плазмидную ДНК вводили в количестве 1 мкг/мышь в форме, покрытой 1 мкм частицами золота (Bio-Rad). Кроме того, в сравнительном примере 3-2 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.
[0057] [Сравнительный пример 3-3 (контроль)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что инъекцию не выполняли. Следует отметить, что в сравнительном примере 3-3 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.
[0058] На фиг. 4A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и значением OD450 в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 4B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и средним значением OD450 в соответствующих примерах.
Согласно результатам было обнаружено, что в случае безыгольного инъецирования не наблюдался высокий титр антител по сравнению с применением обычной генной пушки, но наблюдался титр антител, который был значительно выше титров в случаях контрольной группы и инъецирования с применением иглы.
[0059] (Измерение титра антител, тест 2)
[Пример 4-1, сравнительные примеры 4-1-4-3] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого антитела NY-ESO-1 (IgG1), которое было указано в примере 4-1 (безыгольная инъекция).
Аналогично, эксперименты проводили таким же образом, как в сравнительном примере 3-1, сравнительном примере 3-2 и сравнительном примере 3-3, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого антитела NY-ESO-1 (IgG1), которое было указано в сравнительном примере 4-1 (инъекция с применением иглы), сравнительном примере 4-2 (обычная генная пушка) и сравнительном примере 4-3 (контроль), соответственно.
[0060] На фиг. 5A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и значением OD450 в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 5B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и средним значением OD450 в соответствующих примерах.
Согласно результатам, было обнаружено, что в случае применения обычной генной пушки наблюдался высокий титр антител, при этом высокий титр антител не наблюдался в случае безыгольного инъецирования, так же как и в случае контрольной группы.
[0061] (Измерение титра антител, тест 3)
[Пример 5-1, сравнительные примеры 5-1-5-3] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого NY-ESO-1 (IgG2a), которое было указано в примере 5-1 (безыгольная инъекция).
Аналогично, эксперименты проводили таким же образом, как в сравнительном примере 3-1, сравнительном примере 3-2 и сравнительном примере 3-3, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого антитела NY-ESO-1 (IgG2a), которое было указано в примере 5-1 (инъекция с применением иглы), сравнительном примере 5-2 (обычная генная пушка) и сравнительном примере 5-3 (контроль), соответственно.
[0062] На фиг. 6A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и значением OD450 в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 6B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и средним значением OD450 в соответствующих примерах.
Согласно результатам, было обнаружено, что в случае безыгольного инъецирования не наблюдался какой-либо высокий титр антител по сравнению с применением обычной генной пушки, но наблюдался титр антител, который был значительно выше титров, полученных в случаях контрольной группы и инъецирования с применением иглы.
СПИСОК ЦИФРОВЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
[0063] 1: инъектор, 2: корпус, 3: шприцевой блок, 4: плунжер, 5: поршень, 6: основной блок инъектора, 7: блок привода, 8: кнопка, 9: батарея, 10: узел инъектора, 31: блок горловины, 31a: выпускное отверстие, 32: загрузочная камера, 71: воспламенитель.
Claims (12)
1. Способ введения ДНК, содержащей участок, кодирующий опухолевый антиген, в организм живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора,
где безыгольный инъектор выполнен с возможностью инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения инъекционной иглы, при этом безыгольный инъектор включает в себя:
блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК;
устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой, и продукт горения является сжижаемым за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения, или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого является сниженным относительно количества, представленного до сжижения;
блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции;
поршень и
плунжер, при этом:
температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК в результате горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК.
2. Способ по п. 1, в котором температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 10 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором ДНК находится в форме вакцины.
4. Способ по п. 1 или 2, в котором млекопитающее представляет собой мышь.
5. Способ по п. 1 или 2, в котором опухолевый антиген представляет собой антиген NY-ESO-1.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015121046A JP2017000667A (ja) | 2015-06-16 | 2015-06-16 | 無針注射器及びそれを用いた注射対象領域へのｄｎａ導入方法 |
| JP2015-121046 | 2015-06-16 | ||
| PCT/JP2016/067825 WO2016204184A1 (ja) | 2015-06-16 | 2016-06-15 | 無針注射器及びそれを用いた注射対象領域へのｄｎａ導入方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2689849C1 true RU2689849C1 (ru) | 2019-05-29 |
Family
ID=57546046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018101198A RU2689849C1 (ru) | 2015-06-16 | 2016-06-15 | Безыгольный инъектор и способ введения днк в целевую область инъекции с его применением |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11039908B2 (ru) |
| EP (1) | EP3311866B1 (ru) |
| JP (1) | JP2017000667A (ru) |
| CN (1) | CN108136129A (ru) |
| HK (1) | HK1252951A1 (ru) |
| IL (1) | IL256273B (ru) |
| RU (1) | RU2689849C1 (ru) |
| WO (1) | WO2016204184A1 (ru) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116370754A (zh) * | 2018-02-09 | 2023-07-04 | 株式会社大赛璐 | 注入器、以及使用该注入器向注入对象的细胞核内注入包含生物分子的溶液的注入方法 |
| WO2019156238A1 (ja) | 2018-02-09 | 2019-08-15 | 株式会社ダイセル | 注入器及びそれを用いた注入対象への生体分子を含む溶液の注入方法 |
| CN111699011B (zh) * | 2018-02-09 | 2023-07-28 | 株式会社大赛璐 | 注入器 |
| US11992460B2 (en) * | 2018-10-04 | 2024-05-28 | Daicel Corporation | Adapter and injection fluid transfer method |
| EP3892711A4 (en) * | 2018-12-07 | 2022-10-05 | Daicel Corporation | DEVICE FOR INTRODUCING A SUBSTANCE INTO CELLS |
| EP4366693A1 (en) | 2021-07-06 | 2024-05-15 | Daicel Corporation | Personalized vaccine administration |
| WO2023281419A2 (en) | 2021-07-06 | 2023-01-12 | Daicel Corporation | Administration of naked nucleic acid molecule |
| CN114748614A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-07-15 | 上海药明生物医药有限公司 | 一种利用无针注射器进行动物免疫的方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU100578A1 (ru) * | 1954-08-31 | 1954-11-30 | С.Ф. Ерин | Искровой промежуток вентильного разр дника |
| WO2013031882A1 (ja) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | 国立大学法人三重大学 | がん治療用ワクチン製剤 |
| WO2014064534A2 (en) * | 2012-10-05 | 2014-05-01 | Chrontech Pharma Ab | Injection needle, device, immunogenic compositions and method of use |
| US20140200512A1 (en) * | 2010-09-24 | 2014-07-17 | Daicel Corporation | Syringe |
| WO2015050158A1 (ja) * | 2013-10-01 | 2015-04-09 | 国立大学法人三重大学 | 抗原提示を促進するエピトープ間配列を含むｔ細胞誘導ワクチン |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5146792A (ru) * | 1974-10-21 | 1976-04-21 | Asahi Chemical Ind | |
| US4124024A (en) * | 1977-03-03 | 1978-11-07 | Schwebel Paul R | Disposable hypodermic injection ampule |
| US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| BR9505691A (pt) * | 1994-01-21 | 1996-01-16 | Agracetus | Instrumento para transporte de gente acionado por gás |
| JP2002511396A (ja) | 1998-04-14 | 2002-04-16 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | ポリヌクレオチド製剤の無針投与 |
| CZ20021371A3 (cs) | 1999-10-28 | 2002-10-16 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Iniciátor a předpínač elektrického typu |
| US6936303B1 (en) | 1999-10-28 | 2005-08-30 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Electric type initiator and gas generator |
| FR2807946B1 (fr) * | 2000-04-19 | 2002-06-07 | Poudres & Explosifs Ste Nale | Seringue sans aiguille fonctionnant avec un chargement pyrotechnique bicomposition |
| DE10029325A1 (de) * | 2000-06-20 | 2002-01-03 | Peter Lell | Nadellose Injektionsvorrichtung mit pyrotechnischem Antrieb |
| WO2002088619A1 (fr) | 2001-04-27 | 2002-11-07 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Ensemble initiateur et generateur de gaz utilisant cet initiateur |
| JP2003025950A (ja) | 2001-07-19 | 2003-01-29 | Nippon Kayaku Co Ltd | ガス発生器 |
| GB0118266D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Powderject Res Ltd | Silencing device and method for needleless syringe |
| US20040162517A1 (en) * | 2002-12-04 | 2004-08-19 | Otto Furst | Needleless hydpodermic injection device with non-electric ignition means |
| JP2004358234A (ja) | 2003-05-09 | 2004-12-24 | Ryuichi Morishita | 複数のノズル孔を有する針無注射器 |
| JP2005021640A (ja) | 2003-07-01 | 2005-01-27 | Eisuke Fujimoto | 無針注射器のジェツト流の力測定器 |
| WO2007034230A1 (en) * | 2005-09-26 | 2007-03-29 | University Of Leeds | Fuel injector |
| ES2557382T3 (es) | 2010-07-06 | 2016-01-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN |
| JP5794786B2 (ja) * | 2011-02-04 | 2015-10-14 | 株式会社ダイセル | 無針注射器 |
| JP2013059424A (ja) | 2011-09-12 | 2013-04-04 | Daicel Corp | 無針注射器 |
| JP5989039B2 (ja) | 2014-07-02 | 2016-09-07 | 株式会社ダイセル | 注射器 |
-
2015
- 2015-06-16 JP JP2015121046A patent/JP2017000667A/ja active Pending
-
2016
- 2016-06-15 RU RU2018101198A patent/RU2689849C1/ru active
- 2016-06-15 US US15/737,268 patent/US11039908B2/en active Active
- 2016-06-15 EP EP16811658.0A patent/EP3311866B1/en active Active
- 2016-06-15 WO PCT/JP2016/067825 patent/WO2016204184A1/ja active Application Filing
- 2016-06-15 CN CN201680035329.9A patent/CN108136129A/zh active Pending
-
2017
- 2017-12-12 IL IL256273A patent/IL256273B/en unknown
-
2018
- 2018-09-26 HK HK18112307.3A patent/HK1252951A1/zh unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU100578A1 (ru) * | 1954-08-31 | 1954-11-30 | С.Ф. Ерин | Искровой промежуток вентильного разр дника |
| US20140200512A1 (en) * | 2010-09-24 | 2014-07-17 | Daicel Corporation | Syringe |
| WO2013031882A1 (ja) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | 国立大学法人三重大学 | がん治療用ワクチン製剤 |
| WO2014064534A2 (en) * | 2012-10-05 | 2014-05-01 | Chrontech Pharma Ab | Injection needle, device, immunogenic compositions and method of use |
| WO2015050158A1 (ja) * | 2013-10-01 | 2015-04-09 | 国立大学法人三重大学 | 抗原提示を促進するエピトープ間配列を含むｔ細胞誘導ワクチン |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2017000667A (ja) | 2017-01-05 |
| US20180168789A1 (en) | 2018-06-21 |
| IL256273A (en) | 2018-02-28 |
| US11039908B2 (en) | 2021-06-22 |
| EP3311866A1 (en) | 2018-04-25 |
| EP3311866B1 (en) | 2023-10-11 |
| EP3311866A4 (en) | 2018-12-26 |
| HK1252951A1 (zh) | 2019-06-06 |
| WO2016204184A1 (ja) | 2016-12-22 |
| CN108136129A (zh) | 2018-06-08 |
| IL256273B (en) | 2021-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2689849C1 (ru) | Безыгольный инъектор и способ введения днк в целевую область инъекции с его применением | |
| Tao et al. | Induction of IL-4-producing CD4+ T cells by antigenic peptides altered for TCR binding. | |
| JP6637415B2 (ja) | キメラ抗原受容体ｔ細胞スイッチおよびその使用 | |
| Graner et al. | The heat shock response and chaperones/heat shock proteins in brain tumors: surface expression, release, and possible immune consequences | |
| US20120034156A1 (en) | Artificial cells | |
| JP6466327B2 (ja) | 免疫調節ワクチン | |
| EP3185885B1 (en) | Polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of autoimmune disorders | |
| CA2809360A1 (en) | Combined antigen and dna vaccine for preventing and treating autoimmune diseases | |
| KR20220044242A (ko) | T 세포 제조 조성물 및 방법 | |
| Caudill et al. | HSPPC-96: a personalised cancer vaccine | |
| Chen et al. | Restoring immunological tolerance in established experimental arthritis by combinatorial citrullinated peptides and immunomodulatory signals | |
| US20150044244A1 (en) | Combined facilitator, antigen and dna vaccine for preventing and treating autoimmune diseases | |
| Kim et al. | Nanoparticle delivery of recombinant IL-2 (BALLkine-2) achieves durable tumor control with less systemic adverse effects in cancer immunotherapy | |
| RU2664197C2 (ru) | Иммуногенная композиция, включающая ее вакцина, набор для приготовления вышеуказанной композиции и способ лечения заболеваний, связанных с патологией секреции гастрина | |
| Cheng et al. | Recombination monophosphoryl lipid A-derived vacosome for the development of preventive cancer vaccines | |
| Khong et al. | Peptide vaccine formulation controls the duration of antigen presentation and magnitude of tumor-specific CD8+ T cell response | |
| Ahmad et al. | Evaluation of aggregated Ag85B antigen for its biophysical properties, immunogenicity, and vaccination potential in a murine model of tuberculosis infection | |
| Firdessa-Fite et al. | Soluble antigen arrays efficiently deliver peptides and arrest spontaneous autoimmune diabetes | |
| EP3925973A1 (en) | Vaccine compositions and methods for restoring nkg2d pathway function against cancers | |
| RU2769474C2 (ru) | Способы лечения рассеянного склероза с использованием аутологичных т-клеток | |
| Hosoi et al. | Memory Th1 cells augment tumor-specific CTL following transcutaneous peptide immunization | |
| CN116710551A (zh) | T细胞制造组合物和方法 | |
| US20190309044A1 (en) | Polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of autoimmune disorders | |
| Pishesha et al. | Single domain antibody-antigen adducts that target Class II MHC induce antigen-specific tolerance | |
| Li et al. | Oral immunization induces a novel CXCR6+ β7+ intraepithelial lymphocyte subset predominating in the small intestine |