RU2687137C1 - Strain of heterotrophic bacteria klebsiella pneumonia is an associate for producing a microbial protein mass - Google Patents
Strain of heterotrophic bacteria klebsiella pneumonia is an associate for producing a microbial protein mass Download PDFInfo
- Publication number
- RU2687137C1 RU2687137C1 RU2018136037A RU2018136037A RU2687137C1 RU 2687137 C1 RU2687137 C1 RU 2687137C1 RU 2018136037 A RU2018136037 A RU 2018136037A RU 2018136037 A RU2018136037 A RU 2018136037A RU 2687137 C1 RU2687137 C1 RU 2687137C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- methane
- strain
- bacteria
- klebsiella pneumonia
- protein mass
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к штамму гетеротрофных бактерий Klebsiella pneumonia 1-17 для получения белковой биомассы ассоциативной культурой, включающей метанокисляющие бактерии и бактерии-гетеротрофы. Микробная белковая масса может быть использована в сельском хозяйстве для кормления животных, а также в качестве сырья для глубокой переработки.The invention relates to the microbiological industry, namely to the strain of heterotrophic bacteria Klebsiella pneumonia 1-17 for obtaining protein biomass by an associative culture, including methane-oxidizing bacteria and heterotrophic bacteria. Microbial protein mass can be used in agriculture for feeding animals, as well as raw materials for deep processing.
На сегодняшний день общая картина в России по производству кормовых белков не благоприятна. Согласно подписанной президентом России доктрины, для обеспечения собственным продовольствием на 80-90%, дефицит кормовых продуктов может составить не менее 2 млн тонн в год.To date, the overall picture in Russia for the production of feed proteins is not favorable. According to the doctrine signed by the President of Russia, in order to provide 80-90% of their own food, the shortage of feed products may be at least 2 million tons per year.
Основным источником белкового продукта является соевый шрот. Однако природные условия нашей страны не подходят для выращивания сои в достаточных количествах. Специалистам приходится искать другие способы производства кормового белка.The main source of protein product is soybean meal. However, the natural conditions of our country are not suitable for growing soybeans in sufficient quantities. Professionals have to look for other ways to produce feed protein.
Среди продуцентов кормовой биомассы известны различные микроорганизмы, относящиеся к различным таксономическим группам, способные расти на различных субстратах.Among the producers of fodder biomass, various microorganisms belonging to different taxonomic groups are known that can grow on different substrates.
Использование бактерий в качестве продуцентов кормового белка является более эффективным, так как бактерии накапливают до 79% белка по массе, в то время как дрожжи - не более 60%.The use of bacteria as producers of feed protein is more efficient, since bacteria accumulate up to 79% of protein by weight, while yeast does not exceed 60%.
В качестве продуцентов белка и биомассы применяют штаммы бактерий, известные как продуценты белка на основе метанола и относящиеся к роду Acetobacter. Acetobactermethylicum ВСБ-924 ЦМПМ В-2942 (патент РФ N 116363, C12N 15/00, 1984); Acetobactermethylicum ВСБ-867 ЦМПМ В-1947 (патент РФ N 925112, C12N 15/00, 1982); Acetobactermethylovorans ВСБ-914 ЦМПМ В-2479 (патент РФ N 1070916, C12N 15/00, 1983). Все штаммы характеризуются содержанием белка до 76% по АСВ.Bacterial strains known as producers of protein based on methanol and belonging to the genus Acetobacter are used as producers of protein and biomass. Acetobactermethylicum BCB-924 CMPM B-2942 (RF Patent No. 116363, C12N 15/00, 1984); Acetobactermethylicum BCB-867 CMPM B-1947 (RF patent N 925112, C12N 15/00, 1982); Acetobactermethylovorans VSB-914 CMPM B-2479 (RF patent N 1070916, C12N 15/00, 1983). All strains are characterized by a protein content of up to 76% by DIA.
Штаммы различаются чувствительностью к типовым фагам и термоустойчивостью: оптимальный рост у Acetobactermethylicum ВСБ-867 при 28-30°С, у Acetobactermethylicum ВСБ-924 - 30-36°С и Acetobactermethylovorans ВСБ-914 при 36-40°С.The strains differ in their sensitivity to typical phages and heat resistance: the optimal growth in Acetobactermethylicum BCE-867 at 28-30 ° C, in Acetobactermethylicum BCE-924 - 30-36 ° C and Acetobactermethylovorans BWA-914 at 36-40 ° C.
Однако, при их нестерильном культивировании в ферментере на ферментолизатах отрубей и/или муки в кислой среде при рН ниже 6,0 происходит, как показали опыты, быстрое инфицирование дрожжами и грибами и вытеснение продуцента из процесса на 30-40% и более от общего числа клеток. В результате в получаемом продукте в сильной степени снижается содержание белка.However, when they are non-sterile cultivated in fermenter on bran enzymes and / or flour in an acidic medium at a pH below 6.0, as shown by experiments, rapid infection with yeast and fungi and the exclusion of the producer from the process by 30-40% or more of the total cells. As a result, the protein content is greatly reduced in the resulting product.
Одним из перспективных путей получения полноценного белкового кормового продукта является использование метанокисляющих бактерий. Метанотрофные бактерии в подходящих условиях активно перерабатывают метан природного газа, быстро размножаются и наращивают биомассу, богатую ценным белком, витаминами и иными биологически активными соединениями.One of the promising ways to obtain a complete protein feed product is the use of methane-oxidizing bacteria. Under suitable conditions, methanotrophic bacteria actively process natural gas methane, multiply rapidly and increase biomass rich in valuable protein, vitamins and other biologically active compounds.
Использование метана природного газа для получения белка одноклеточных имеет ряд преимуществ по сравнению с жидкими углеводородами и другими субстратами, а именно: большие запасы природного газа, хорошая его транспортабельность, возможность получения кормового продукта без дополнительной очистки от субстрата.The use of methane of natural gas for the production of single-cell protein has several advantages compared with liquid hydrocarbons and other substrates, namely: large reserves of natural gas, good transportability, the possibility of obtaining a feed product without further purification from the substrate.
Учитывая, что в России большие газовые запасы недр, по некоторым данным они составляют до 40% мировых, внедрение микробиологического производства белка одноклеточных на российских предприятиях сулит не только экономический эффект, но и способно обеспечить продовольственную безопасность страны.Considering that in Russia large gas reserves of the subsoil, according to some data, they make up to 40% of the world’s, the introduction of single-cell microbiological production of protein in Russian enterprises promises not only an economic effect, but also is capable of ensuring the country's food security.
Облигатные метанокисляющие бактерии, содержат фермент метанмонооксигеназу, который не является субстратспецифичным и может окислять не только метан, но и гомологи метана (например, этан, пропан и бутан), содержащиеся в природном газе.Obligate methane-oxidizing bacteria contain the enzyme methane monooxygenase, which is not a substrate-specific and can oxidize not only methane, but also homologues of methane (for example, ethane, propane and butane) contained in natural gas.
В зависимости от состава природного газа, видовых особенностей метанокисляющих бактерий и условий культивирования среди продуктов неполного окисления метана и его гомологов могут присутствовать в разных соотношениях в среде культивирования метанол, формальдегид, формиат, этанол, ацетальдегид, ацетат, пропионовый альдегид, пропионовая кислота, масляный альдегид. Данные продукты при их накоплении в среде культивирования в определенной концентрации оказывают ингибирующее воздействие на метанокисляющую культуру, на окисление метана.Depending on the composition of natural gas, the specific characteristics of methane-oxidizing bacteria and the cultivation conditions among the products of incomplete oxidation of methane and its homologues may be present in different ratios in the cultivation medium methanol, formaldehyde, formate, ethanol, acetaldehyde, acetate, propionaldehyde, propionic acid, oily aldehyde . These products in their accumulation in the culture medium at a certain concentration have an inhibiting effect on the methane-oxidizing culture, on the oxidation of methane.
Стабильное непрерывное культивирование на природном газе возможно только при использовании ассоциативной культуры метанокисляющих микроорганизмов и гетеротрофных микроорганизмов - спутников, использующих продукты неполного окисления гомологов метана, возможно и продуктов автолиза клеток микроорганизмов.Stable continuous cultivation on natural gas is possible only with the use of an associative culture of methane-oxidizing microorganisms and heterotrophic microorganisms - satellites that use products of partial oxidation of methane homologues, possibly also products of autolysis of microorganism cells.
В настоящее время установлено, что даже при использовании моносубстрата, в случае накопления в среде продуктов неполного окисления, целесообразно использовать не чистую культуру, а ассоциативную. При культивировании ассоциативной культуры заметно повышается активность роста основной культуры и ее устойчивость к стрессовым воздействиям некоторых физико-химических параметров.It has now been established that even when using a monosubstrate, in the case of accumulation of products of incomplete oxidation in the medium, it is advisable to use not pure culture, but associative culture. When an associative culture is cultivated, the growth activity of the main culture and its resistance to the stress effects of certain physicochemical parameters increase markedly.
Известен штамм Klebsiella pneumoniae ГИСК №214 продуцент фермента дезоксирибонуклеазы, на основе которого могут быть созданы лекарственные препараты (патент РФ №2057178). ДНК-азу получают путем выращивания штамма на жидкой или плотной питательной среде, осаждением биомассы, ультразвуковой дезинтеграцией и центрифугированием. Из надосадочной жидкости извлекают дезоксирибонуклеазу.Known strain of Klebsiella pneumoniae HISS No. 214, a producer of the deoxyribonuclease enzyme, on the basis of which drugs can be created (RF Patent No. 2057178). DNA-ase is obtained by growing the strain on a liquid or solid nutrient medium, biomass precipitation, ultrasonic disintegration and centrifugation. From the supernatant extract deoxyribonuclease.
Известен штамм Klebsiella azeanae ВКМ В-2008Д продуцент эндонуклеазы рестрикции (патент РФ №2044055). Данный фермент узнает и расщепляет последовательность нуклеотидов 5/-PuGGNC1CPy-3/. Рестриктаза, продуцируемая штаммом может найти применение в генно-инженерных исследованиях.A known strain of Klebsiella azeanae VKM B-2008D producing restriction endonuclease (RF patent №2044055). This enzyme recognizes and cleaves the nucleotide sequence 5 / -PuGGNC1CPy-3 / . The restriction enzyme produced by the strain can be used in genetic engineering research.
Известен штамм Klebsiella pneumoniae ГИСК №215, используемый в качестве референс-штамма для определения каталазной активности микроорганизмов при дифференциации патогенных и непатогенных микроорганизмов (патент РФ №2070923).Known strain Klebsiella pneumoniae GISK No. 215 used as a reference strain to determine the catalase activity of microorganisms in the differentiation of pathogenic and non-pathogenic microorganisms (RF patent №2070923).
Известен штамм Klebsiella pneumoniae ВКПМ В-7001, который содержит конъюгативную плазмиду рВК1, детерминирующую устойчивость данного сообщества микроорганизмов к соединениям мышьяка. Использование предложенного штамма позволяет получить штаммы бактерий-биодеструкторов соединений, содержащих мышьяк (патент РФ №2260044).A known strain of Klebsiella pneumoniae VKPM B-7001, which contains a conjugative plasmid pBK1, determining the resistance of this community of microorganisms to arsenic compounds. The use of the proposed strain allows to obtain strains of biodestructive bacteria compounds containing arsenic (RF patent No. 2260044).
Известен штамм Methylococcus capsulatus ВСБ-874 - продуцент кормовой биомассы. Штамм хранится в коллекции культур института «ВНИИгенетика» под коллекционным номером ЦМПМ В-1743 (авт. свид. СССР №770200). В качестве источника углерода и энергии штамм использует метан как чистый, так и в составе природного газа. Недостатком данного штамма является его чувствительность к продуктам, образующимся при соокислении гомологов метана, которые неизменно, в большем или меньшем количестве, присутствуют в природном газе. Образующиеся продукты ингибируют рост продуцента.A known strain of Methylococcus capsulatus BWA-874 - producing fodder biomass. The strain is stored in the collection of cultures of the institute "VNIgenetika" under the collection number CMPM B-1743 (ed. Mon. USSR №770200). As a source of carbon and energy, the strain uses methane both as pure and as part of natural gas. The disadvantage of this strain is its sensitivity to products formed during the co-oxidation of methane homologs, which are invariably, in greater or lesser quantity, present in natural gas. The resulting products inhibit the growth of the producer.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является штамма метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus ГБС-15 регистрационный номер ВКПМ В-12549 во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов для получения микробной белковой массы (патент РФ №2613365).The closest in technical essence and the achieved result is the strain of methane-oxidizing bacteria Methylococcus capsulatus GBS-15 registration number VKPM B-12549 in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms to obtain microbial protein mass (RF patent №2613365).
Целью изобретения является повышение производительности и достижение высокой продуктивности при культивировании на природном газеметанокисляющих бактерий в присутствии гетеротрофных бактерий в качестве ассоцианта продуцента микробной белковой массы.The aim of the invention is to increase productivity and achieve high productivity when cultivated on natural gas-methane-oxidizing bacteria in the presence of heterotrophic bacteria as an associant of the producer of microbial protein mass.
Техническим результатом изобретения является выявление нового штамма, который является ассоциантом метанокисляющих бактерий и способен использовать продукты соокисления гомологов метана, присутствующие в природном газе, а также может использовать белки, аминокислоты и полисахариды, выделяющиеся в процессе лизиса бактерий.The technical result of the invention is to identify a new strain that is an associant of methane-oxidizing bacteria and is able to use the products of co-oxidation of methane homologs present in natural gas, and can also use proteins, amino acids and polysaccharides released during the process of lysis of bacteria.
Технический результат достигнут при использовании штамма гетеротрофных бактерий Klebsiella pneumonia 1-17, депонированного в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - ОБОЛЕНСК» под регистрационным номером В-8465, в качестве компонента ассоциативной культуры метанокисляющих бактерий для получения микробной белковой массы.The technical result was achieved using the strain of heterotrophic bacteria Klebsiella pneumonia 1-17, deposited in the State collection of pathogenic microorganisms and cell cultures "GKPM - OBOLENSK" under registration number B-8465, as a component of the associative culture of methane-oxidizing bacteria to obtain microbial protein mass.
Обозначение штамма, присвоенное депозитором 1-17.The designation of the strain assigned by the depositor 1-17.
Штамм Klebsiella pneumoniae 1-17 используется в качестве одного из компонентов ассоциативной культуры метанокисляющих бактерий для промышленного получения на основе природного газа кормовой биомассы для кормления животных, а также в качестве сырья для глубокой переработки.The strain Klebsiella pneumoniae 1-17 is used as one of the components of an associative culture of methane-oxidizing bacteria for industrial production of feed biomass for animals based on natural gas, and also as a raw material for deep processing.
Источник выделения штамма: заявляемый гетеротрофный штамм Klebsiella pneumoniae 1-17 выделен из ассоциации, включающей метанокисляющие бактерии Methylococcus capsulatus ГБС-15. Для селекции быстрорастущей смешанной культуры бактерий была использована смесь активных накопительных культур, выделенных из подземных вод ряда газо- и нефтеносных районов Российской Федерации. В результате проведенной селекции получен штамм, который при культивировании метанокисляющих бактерий в промышленных условиях на природном газе может быть использован в составе различных ассоциаций. При ферментации штамм растет как ассоциант основного продуцента метанокисляющих бактерий на минеральной среде и при физико-химических условиях, оптимальных для продуцента, потребляет продукты соокисления гомологов метана, присутствующие в природном газе, а также продукты метаболизма основного продуцента.Source of strain isolation: the claimed heterotrophic strain Klebsiella pneumoniae 1-17 is isolated from an association comprising the methane-oxidizing bacteria Methylococcus capsulatus GBS-15. For the selection of a rapidly growing mixed culture of bacteria, a mixture of active storage cultures isolated from the groundwater of a number of gas and oil bearing regions of the Russian Federation was used. As a result of the selection, a strain was obtained, which, when cultivated with methane-oxidizing bacteria under industrial conditions on natural gas, can be used as part of various associations. During fermentation, the strain grows as an associant of the main producer of methane-oxidizing bacteria on the mineral medium and under physico-chemical conditions that are optimal for the producer, consumes products of co-oxidation of methane homologs present in natural gas, as well as metabolic products of the main producer.
Штамм не является генетически модифицированным.The strain is not genetically modified.
Информация о биологической опасности (безопасности) штамма: вид Klebsiella pneumoniae значится в списке IV группа патогенности (Приложение 1 «Классификация микроорганизмов - возбудителей инфекционных заболеваний…» к Санитарно-эпидемиологическим правилам СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами», в ред. Дополнений и изменений N 2, утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 29.06.2011 N 86).Information on the biological hazard (safety) of the strain: the Klebsiella pneumoniae species is listed in the IV pathogenicity group (Appendix 1 “Classification of microorganisms - infectious diseases…” to the Sanitary-Epidemiological Rules of JV 1.3.2322-08 “Safety of work with microorganisms”, in red Additions and changes N 2, approved by the Resolution of the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation of June 29, 2011 N 86).
Другие сведения о патогенности или вирулентности штамма: штамм Klebsiellapneumoniae 1-17 является авирулентным, не токсигенным, не токсичным и безвредным.Other information about the pathogenicity or virulence of the strain: Klebsiellapneumoniae strain 1-17 is avirulent, non-toxigenic, non-toxic and harmless.
ХАРАКТЕРНЫЕ ПРИЗНАКИ:CHARACTERISTIC SIGNS:
Обозначение штамма, присвоенное депозитором Klebsiella pneumoniae 1-17.The designation of the strain assigned by the Klebsiella pneumoniae depositor 1-17.
Методы и результаты идентификации: масс-спектрометрия MALDI Biotyper (Score Value 2,561), VITEK 2 (Вероятность 98%), секвенирование последовательности гена 16S - р РНК (99%), полногеномное секвенирование.Identification methods and results: mass spectrometry MALDI Biotyper (Score Value 2.561), VITEK 2 (Probability 98%), sequencing of the 16S gene sequence - p RNA (99%), full-genome sequencing.
Морфологические признаки: грамотрицательные палочки размером 0,5-0,9×1,0-1,2 мкм, неподвижные, спор не образуют.Morphological features: gram-negative rods 0.5-0.9 × 1.0-1.2 μm in size, immobile, do not form a spore.
Культуральные особенности: на питательном агаре ГРМ №1 (ФБУН ГНЦ ПМБ) образует гладкие, полупрозрачные, слизистые колонии, 3-4 мм в диаметре.Cultural features: on nutrient agar timing No. 1 (FBUN SSC SMB) forms smooth, translucent, mucous colonies, 3-4 mm in diameter.
Биохимические свойства: VITEK 2 Systems: 06.01 (bioMerieux) (табл. 1):Biochemical properties: VITEK 2 Systems: 06.01 (bioMerieux) (Table 1):
Вирулентность для лабораторных животных: ЛД50 Для мышей линии BALB/c - 3,2×108КОЕVirulence for laboratory animals: LD 50 For BALB / c mice - 3.2 × 10 8 CFU
Устойчивость (чувствительность) к антибактериальным препаратам(табл. 2)Resistance (sensitivity) to antibacterial drugs (Table 2)
Генетические характеристики: сделано полногеномное секвенирование на платформе Illumina MiSeq. Количество полученных ридов - 2 087 324, количество проанализированных нуклеотидов - 469 180 422, количество контигов (программа SPAdes 3.11.1) - 531, общая длина полученных контигов - 5627276 пар нуклеотидов, средняя глубина покрытия - 88, GC состав - 57,01%.Genetic characteristics: complete genome sequencing done on the Illumina MiSeq platform. The number of reads obtained was 2,087,324, the number of nucleotides analyzed was 469,180,422, the number of contigs (the SPAdes 3.11.1 program) was 531, the total length of the obtained contigs was 56,27276 base pairs, the average depth of coverage was 88, the GC composition was 57.01% .
В сборке контигов определена последовательность гена 16Sp РНК и проанализирована в базе данных BLAST Nucleotide collection (nr/nt) (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Гомология гена 16SpPHK исследуемого штамма с геном 16S рРНК референсного штамма Klebsiella pneumonia subsp. Pneumonia HS11286 (CP003200.1) составляет 99% (1526/1527).In the assembly of contigs, the 16Sp RNA gene sequence is determined and analyzed in the BLAST Nucleotide collection (nr / nt) database (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Homology of the 16SpPHK gene of the studied strain with the 16S rRNA gene of the reference strain Klebsiella pneumonia subsp. Pneumonia HS11286 (CP003200.1) is 99% (1526/1527).
Последовательность участка гена 16Sp РНК штамма Klebsiella pneutnonia 1-17:The sequence of the 16Sp RNA gene region of the Klebsiella pneutnonia strain 1-17:
Условия культивирования: плотная или жидкая питательная среда- ГРМ №1, ГРМ-бульон, питательный агар или питательный бульон, 34°С, 24 часа; минеральная среда, в которую в качестве источника углерода вносят либо метанол, либо этанол, либо пропанол, 40°С, 36-48 часов.Cultivation conditions: solid or liquid nutrient medium - timing No. 1, timing broth, nutrient agar or nutrient broth, 34 ° C, 24 hours; mineral medium in which as a carbon source contribute either methanol or ethanol, or propanol, 40 ° C, 36-48 hours.
Питательный агар, состав (в пересчете на 1 л готовой среды): гидролизат ферментативный белковый, сухой - 10,5 г; пептон ферментативный, сухой - 10,5 г; экстракт автолизированных дрожжей осветленный - 2,0 г; натрий хлористый - 5,0 г; агар микробиологический - 12,0 г. Стерилизовать при температуре 121°С в течение 15 мин.Nutrient agar, composition (in terms of 1 l of the prepared medium): enzymatic protein hydrolyzate, dry - 10.5 g; enzymatic peptone, dry - 10.5 g; clarified autolyzed yeast extract - 2.0 g; sodium chloride - 5.0 g; Microbiological agar - 12.0 g. Sterilize at 121 ° С for 15 min.
Питательный бульон, состав (в пересчете на 1 л готовой среды): гидролизат фермативный белковый, сухой - 9,1 г; пептон ферментативный сухой - 9,9 г; экстракт автолизированных дрожжей осветленный - 4,7 г; натрия хлористый - 5,0 г; натрий углекислый - 0,3 г. Стерилизовать при температуре 121°С в течение 15 мин.Nutrient broth, composition (in terms of 1 l of the prepared medium): hydrolyzed fermentative proteinaceous, dry - 9.1 g; enzymatic dry peptone - 9.9 g; extract autolyzed yeast clarified - 4.7 g; sodium chloride - 5.0 g; sodium carbonate - 0.3 g. Sterilize at 121 ° C for 15 minutes.
ГРМ-№1 (состав среды, г/л): панкреатический гидролизат рыбной муки - 15,0, панкреатический гидролизат казеина - 10,0, дрожжевой экстракт - 2,0, натрия хлорид - 3,5, Д-глюкоза -1,0, агар 10,0±2.ГРМ-№1 (medium composition, g / l): pancreatic hydrolyzed fish meal - 15.0, pancreatic hydrolyzed casein - 10.0, yeast extract - 2.0, sodium chloride - 3.5, D-glucose -1, 0, agar 10.0 ± 2.
ГРМ - бульон (состав среды, г/л): панкреатический гидролизат рыбной муки - 8,0, пептон сухой ферментативный - 8,0, натрия хлорид - 4,0GRM - broth (medium composition, g / l): pancreatic hydrolyzed fish meal - 8.0, enzymatic dry peptone - 8.0, sodium chloride - 4.0
Минеральная среда (состав среды, г/л): (NH4)2SO4 - 0,52; MgSO4 - 0,02; K2SO4 - 0,06; NH4H2PO4 - 1,53. Раствор микроэлементов (готовится отдельно) (г/л): ZnSO4 - 0,43; MnSO4 - 0,88; CuSO4 - 0,78; H3BO3 - 0,4; Na2MoO4×2H2O - 0,25; CoSO4×7H2O - 0,25; FeSO4×7H2O - 4,97.Mineral medium (medium composition, g / l): (NH 4 ) 2 SO 4 - 0.52; MgSO 4 - 0.02; K 2 SO 4 - 0.06; NH 4 H 2 PO 4 - 1.53. The solution of trace elements (prepared separately) (g / l): ZnSO 4 - 0.43; MnSO 4 - 0.88; CuSO 4 - 0.78; H 3 BO 3 - 0.4; Na 2 MoO 4 × 2H 2 O — 0.25; CoSO 4 × 7H 2 O — 0.25; FeSO 4 × 7H 2 O - 4.97.
1 мл приготовленного раствора микроэлементов добавить на 1000 мл минеральной среды. Стерилизовать при температуре 121°С в течение 15 мин. рН доводят до 6.0-6,2. В качестве субстрата (источника углерода и энергии) могут быть использованы - метанол (до 1,5% об.), этанол (до 2% об.), пропанол (до 1% об.). Температура культивирования 40°С; аэробные условия.Add 1 ml of the prepared trace element solution to 1000 ml of mineral medium. Sterilize at 121 ° C for 15 minutes. The pH is adjusted to 6.0-6.2. As a substrate (carbon source and energy) can be used - methanol (up to 1.5% vol.), Ethanol (up to 2% vol.), Propanol (up to 1% vol.). Cultivation temperature 40 ° C; aerobic conditions.
Условия хранения: штамм хранят на питательном агаре (при температуре 4±2°С), пересевы осуществляются 1 раз в 3 месяца, возможно хранение штамма в лиофильно высушенном состоянии, а также в жидком азоте.Storage conditions: the strain is stored on nutrient agar (at a temperature of 4 ± 2 ° C), reseeding is carried out 1 time in 3 months, it is possible to store the strain in a lyophilized state, as well as in liquid nitrogen.
Таким образом, для заявляемого штамма характерны: устойчивый продуктивный рост на средах различного состава; способность длительно сохранять активность в лиофилизированном состоянии; отсутствие вирулентности, токсигенности, токсичности и безвредностьThus, for the claimed strain are characteristic: steady productive growth on media of different composition; ability to maintain activity for a long time in a lyophilized state; lack of virulence, toxigenicity, toxicity and harmlessness
Штамм Klebsiella pneumoniae 1-17 используется в качестве компонента ассоциативной культуры метанокисляющих бактерий для промышленного получения кормовой биомассы на основе природного газа, а также в качестве сырья для глубокой переработки.The strain Klebsiella pneumoniae 1-17 is used as a component of an associative culture of methane-oxidizing bacteria for the industrial production of forage biomass based on natural gas, as well as a raw material for deep processing.
Гетеротрофные бактерии Klebsiella pneumoniae 1-17используют образующиеся продукты (метанол, этанол, пропанол) в качестве источника углерода, тем самым снимая ингибирующее действие на основной продуцент. Кроме того, гетеротроф может использовать белки, аминокислоты и полисахариды, выделяющиеся в процессе лизиса бактерий.Heterotrophic bacteria Klebsiella pneumoniae 1-17 use the resulting products (methanol, ethanol, propanol) as a carbon source, thereby removing the inhibitory effect on the main producer. In addition, the heterotroph can use proteins, amino acids and polysaccharides released during the process of lysis of bacteria.
Метанокисляющие бактерии развиваются за счет метана природного газа, а другой компонент ассоциативной культуры - за счет продуктов соокисления гомологов метана в природном газе и за счет продуктов жизнедеятельности метанотрофа.Methane-oxidizing bacteria develop due to methane of natural gas, and another component of associative culture is due to the products of co-oxidation of homologues of methane in natural gas and due to the products of methanotroph activity.
В процессе совместного выращивания их содержание независимо от величины засева находится на уровне, определяемом количеством используемых продуктов, образующихся в результате соокисления газообразных гомологов метана, находящихся в природном газе, так как на минеральной среде эти продукты являются единственным доступным источником углерода для не использующего метан компонента ассоциативной культуры. В результате такой саморегуляции содержания культур в процессе выращивания начальное соотношение клеток культур в засевном материале не имеет существенного значения, но рекомендуется вносить не окисляющих метан микроорганизмов не менее 0,1%) и не более 15% от общего числа клеток. Отклонение от этих значений в ту или иную сторону может привести в первом случае к задержке развития метанокисляющих бактерий, а во втором к задержке роста гетеротрофных бактерий. В смеси с подобранными не использующими метан бактериями выход биомассы увеличивается в 3-5 раз по сравнению с чистой культурой метанокисляющих бактерий. Таким образом, добавление к метанокисляющим бактериям подобранных не использующих метан гетеротрофов, растущих за счет продуктов соокисления гомологов метана, может повысить выход биомассы на метане. Добавление не окисляющих метан гетеротрофных бактерий не влияет на качество биомассы, так как даже при введении в высокой концентрации гетеротрофов, не использующих метан, их содержание в растущей культуре ограничивается количеством доступного источника углерода, которым являются продукты соокисления гомологов метана, и обычно не превышает 1-15% от общего числа клеток.In the process of co-cultivation, their content, regardless of the seeding size, is at the level determined by the number of products used, resulting from the co-oxidation of gaseous methane homologs in natural gas, since in the mineral medium these products are the only available carbon source for the non-methane associative component culture. As a result of such self-regulation of the content of cultures in the process of growing, the initial ratio of the cells of the cultures in the seed material is not significant, but it is recommended to introduce microorganisms not oxidizing methane (not less than 0.1%) and not more than 15% of the total number of cells. Deviation from these values in one direction or another can lead in the first case to a delay in the development of methane-oxidizing bacteria, and in the second to a delay in the growth of heterotrophic bacteria. In a mixture with selected bacteria that do not use methane, the biomass yield increases by a factor of 3-5 compared with the pure culture of methane-oxidizing bacteria. Thus, the addition of selected heterotrophs that do not use methane to methane-oxidizing bacteria, growing due to the co-oxidation products of methane homologs, can increase the biomass yield on methane. The addition of heterotrophic bacteria not oxidizing methane does not affect the quality of the biomass, since even with the introduction of heterotrophs that do not use methane in high concentrations, their content in the growing culture is limited by the amount of available carbon source, which are the products of co-oxidation of methane homologs, and usually does not exceed 1- 15% of the total number of cells.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
ПРИМЕР 1. Штамм Klebsiella pneumoniae 1-17 выращивают на жидкой минеральной среде, содержащей (г/л): (NH4)2SO4 - 0,52; MgSO4 - 0,02; K2SO4 - 0,06; NH4H2PO4 - 1,53.EXAMPLE 1. The strain Klebsiella pneumoniae 1-17 is grown on liquid mineral medium containing (g / l): (NH 4 ) 2 SO 4 - 0.52; MgSO 4 - 0.02; K 2 SO 4 - 0.06; NH 4 H 2 PO 4 - 1.53.
Среду стерилизуют при температуре 121°С в течение 15 мин.The medium is sterilized at 121 ° C for 15 minutes.
Раствор микроэлементов (готовят и стерилизуют отдельно) (г/л): ZnSO4 - 0,43; MnSO4 - 0,88; CuSO4 - 0,78; Н3ВО3 - 0,4; Na2MoO4×H2O - 0,25; CoSO4×7H2O - 0,25; FeSO4×7H2O - 4,97. 1 мл приготовленного раствора микроэлементов добавляют на 1000 мл минеральной среды. рН доводят до 6.0-6,2. В качестве субстрата (источника углерода и энергии) используют метанол - 1,0%.The solution of trace elements (prepared and sterilized separately) (g / l): ZnSO 4 - 0.43; MnSO 4 - 0.88; CuSO 4 - 0.78; H 3 BO 3 - 0.4; Na 2 MoO 4 × H 2 O — 0.25; CoSO 4 × 7H 2 O — 0.25; FeSO 4 × 7H 2 O - 4.97. 1 ml of the prepared solution of trace elements is added to 1000 ml of mineral medium. The pH is adjusted to 6.0-6.2. Methanol is used as a substrate (carbon and energy source) - 1.0%.
Культивирование штамма проводят в периодическом режиме в колбах из термостойкого стекла, объемом 1 л при коэффициенте заполнения 0,3-0,4 в термостатируемой качалке. Культивирование проводят в течение 48 ч при 34°С и рН 6,0. По окончании культивирования концентрация сухих веществ 8,2 г АСВ/л. Полученную культуру используют в качестве инокулята для последующего выращивания бактерий в автоматизированном ферментационном комплексе объемом 10 л (рабочий объем 7 л) или в ферментере эжекционного типа объемом 40 л (рабочий объем 28 л).The cultivation of the strain is carried out in a periodic mode in flasks of heat-resistant glass, with a volume of 1 l with a fill factor of 0.3-0.4 in a thermostatted shaker. Cultivation is carried out for 48 h at 34 ° C and pH 6.0. At the end of the cultivation, the concentration of dry substances of 8.2 g DIA / L. The resulting culture is used as an inoculum for the subsequent cultivation of bacteria in an automated fermentation complex of 10 l (working volume 7 l) or in an ejection-type fermenter of 40 l (working volume 28 l).
ПРИМЕР 2. Культивирование штамма проводят аналогично Примеру 1, но в качестве источника углерода и энергии используют этанол - 1,6%. Физико-химические условия и время культивирования те же, концентрация сухих веществ - 10 г АСВ/л.EXAMPLE 2. The cultivation of the strain is carried out similarly to Example 1, but ethanol is used as a source of carbon and energy - 1.6%. The physico-chemical conditions and cultivation time are the same, the concentration of dry substances is 10 g DIA / l.
ПРИМЕР 3. Культивирование штамма проводят аналогично Примеру 1, но в качестве источника углерода и энергии используют пропанол - 0,5%. Физико-химические условия и время культивирования те же, концентрация сухих веществ - 3,0 г АСВ/л.EXAMPLE 3. The cultivation of the strain is carried out similarly to Example 1, but propanol is used as a source of carbon and energy - 0.5%. The physico-chemical conditions and cultivation time are the same, the concentration of dry substances is 3.0 g DIA / l.
ПРИМЕР 4. Ассоциативную культуру, состоящую из метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus ГБС-15 и гетеротрофных бактерий Klebsiella pneumonia 1-17 выращивают в автоматизированном ферментационном комплексе объемом 10 л (рабочий объем 7 л) на минеральной среде следующего состава (г/л): H3PO4 (80%) - 17,2; K2SO4 - 5,0; MgSO4×7H2O - 4,0; FeSO4×7H2O - 0,21; CuSO4 - 0,78; MnSO4×4H2O - 0,38; ZnSO4×7H2O - 0,06; Н3ВО3 - 0,25; Na2MoO4×2H2O - 0,009; CoSO4×7H2O - 0,0095.EXAMPLE 4. An associative culture consisting of methane-oxidizing bacteria Methylococcus capsulatus GBS-15 and heterotrophic bacteria Klebsiella pneumonia 1-17 is grown in an automated fermentation complex of 10 l (working volume 7 l) on a mineral medium of the following composition (g / l): H 3 PO 4 (80%) - 17.2; K 2 SO 4 - 5.0; MgSO 4 × 7H 2 O — 4.0; FeSO 4 × 7H 2 O — 0.21; CuSO 4 - 0.78; MnSO 4 × 4H 2 O — 0.38; ZnSO 4 × 7H 2 O — 0.06; H 3 BO 3 - 0,25; Na 2 MoO 4 × 2H 2 O — 0.009; CoSO 4 × 7H 2 O - 0.0095.
В качестве источника азота и титрующего агента подают аммиачную воду. Процесс ведут при температуре 40-45°С, рН 5,4-5,8 и непрерывной подаче газовой смеси, содержащей метан и кислород. При достижении концентрации биомассы 9 г АСВ/л переходят на непрерывный процесс культивирования с коэффициентом разбавления среды D=0,25 ч-1. Доминирование метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus ГБС-15 составляло 93% при концентрации биомассы 18,5 г АСВ/л.Ammonia water is supplied as a nitrogen source and titrating agent. The process is carried out at a temperature of 40-45 ° C, pH 5.4-5.8 and continuous supply of a gas mixture containing methane and oxygen. When reaching a biomass concentration of 9 g DIA / l, they are transferred to a continuous cultivation process with a dilution factor D = 0.25 h -1 . The dominance of methane-oxidizing bacteria Methylococcus capsulatus GBS-15 was 93% at a biomass concentration of 18.5 g DIA / l.
ПРИМЕР 5. Ассоциативную культуру, состоящую из метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus ГБС-15 и гетеротрофных бактерий Klebsiella pneumonia 1-17 выращивают в ферментере эжекционного типа объемом 40 л (рабочий объем 28 л) на минеральной среде следующего состава (г/л): H3PO4 (80%) - 17,2; K2SO4 - 5,0; MgSO4×7H2O - 4,0; FeSO4×7H2O - 0,21; CuSO4 - 0,78; MnSO4×4H2O - 0,38; ZnSO4×7H2O - 0,06; Н3ВО3 - 0,25; Na2MoO4×2H2O - 0,009; CoSO4×7H2O - 0,0095.EXAMPLE 5. An associative culture consisting of methane-oxidizing bacteria Methylococcus capsulatus GBS-15 and heterotrophic bacteria Klebsiella pneumonia 1-17 is grown in an ejection-type fermenter of 40 l (working volume 28 l) in a mineral medium of the following composition (g / l): H 3 PO 4 (80%) - 17.2; K 2 SO 4 - 5.0; MgSO 4 × 7H 2 O — 4.0; FeSO 4 × 7H 2 O — 0.21; CuSO 4 - 0.78; MnSO 4 × 4H 2 O — 0.38; ZnSO 4 × 7H 2 O — 0.06; H 3 BO 3 - 0,25; Na 2 MoO 4 × 2H 2 O — 0.009; CoSO 4 × 7H 2 O - 0.0095.
В качестве источника азота и титрующего агента подают аммиачную воду. Процесс ведут при температуре 41-45°С, рН 5,4-5,7 и непрерывной подаче газовой смеси, содержащей метан и кислород. При достижении концентрации биомассы 9-10 г АСВ/л осуществляют постепенное повышение давления до 0,8 МПа. С увеличением давления постепенно увеличивают подачу газообразных источников питания микроорганизмов. При этом показатели процесса были следующими: D=0,30 ч-1, концентрация биомассы 37 г АСВ/л, доминирование метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus ГБС-15 93%.Ammonia water is supplied as a nitrogen source and titrating agent. The process is carried out at a temperature of 41-45 ° C, pH 5.4-5.7 and continuous supply of a gas mixture containing methane and oxygen. When reaching a biomass concentration of 9-10 g DIA / l, a gradual increase in pressure to 0.8 MPa is carried out. With increasing pressure, the supply of gaseous microorganism supply sources is gradually increased. The process indicators were as follows: D = 0.30 h -1 , biomass concentration 37 g DIA / l, the dominance of methane-oxidizing bacteria Methylococcus capsulatus GBS-15 is 93%.
Claims (1)
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018136037A RU2687137C1 (en) | 2018-10-11 | 2018-10-11 | Strain of heterotrophic bacteria klebsiella pneumonia is an associate for producing a microbial protein mass |
| EA201900129A EA037039B1 (en) | 2018-10-11 | 2019-03-28 | Strain of heterotrophic bacterium klebsiella pneumonia 1-17, associate for producing microbial protein mass |
| JP2019115158A JP2020058339A (en) | 2018-10-11 | 2019-06-21 | Strain of heterotrophic bacterium klebsiella pneumonia 1-17, associate for producing microbial protein |
| PCT/RU2019/050163 WO2020076191A1 (en) | 2018-10-11 | 2019-10-01 | Klebsiella pneumonia strain for producing microbial biomass |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018136037A RU2687137C1 (en) | 2018-10-11 | 2018-10-11 | Strain of heterotrophic bacteria klebsiella pneumonia is an associate for producing a microbial protein mass |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2687137C1 true RU2687137C1 (en) | 2019-05-07 |
Family
ID=66430660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018136037A RU2687137C1 (en) | 2018-10-11 | 2018-10-11 | Strain of heterotrophic bacteria klebsiella pneumonia is an associate for producing a microbial protein mass |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2020058339A (en) |
| EA (1) | EA037039B1 (en) |
| RU (1) | RU2687137C1 (en) |
| WO (1) | WO2020076191A1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2717991C1 (en) * | 2019-07-22 | 2020-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ГИПРОБИОСИНТЕЗ"ООО " ГИПРОБИОСИНТЕЗ" | Protein feed supplement for farm animals and fish |
| RU2720121C1 (en) * | 2019-10-29 | 2020-04-24 | Ооо "Гипробиосинтез" | Method of producing microbial protein based on hydrocarbon material |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1788965A3 (en) * | 1991-03-26 | 1993-01-15 | Poctobckий-Ha-Дohу Haучho-Иccлeдobateльckий Иhctиtуt Эпидemиoлoгии, Mиkpoбиoлoгии, Пapaзиtoлoгии И Гигиehы | Strain of bacteria klebsiella pneumonia usable for lipopolysaccharide preparation |
| CN104774792B (en) * | 2015-04-13 | 2017-12-19 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | The Methyldmonas of one plant of enduring high-concentration methanol and its application |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5221591B2 (en) * | 1973-12-26 | 1977-06-11 | ||
| RU2083663C1 (en) * | 1994-05-19 | 1997-07-10 | Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии | STRAIN OF BACTERIUM KLEBSIELLA PNEUMONIAE-232 - A PRODUCER OF β --HEMOLYSIN |
| FR2729969B1 (en) * | 1995-01-26 | 1997-04-18 | Bieurope | NEW STRAIN OF KLEBSIELLA PNEUMONIAE, SUBSP. PNEUMONIAE AND PROCESS FOR PRODUCING L-FUCOSE-CONTAINING POLYSACCHARIDE |
| RU2221864C2 (en) * | 2002-02-07 | 2004-01-20 | Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина | Bacterium strain klebsiella pneumoniae deposited in vgnki at = 23 mgavmib-dep for producing vaccine against klebsiellosis in agriculture young stock |
-
2018
- 2018-10-11 RU RU2018136037A patent/RU2687137C1/en active IP Right Revival
-
2019
- 2019-03-28 EA EA201900129A patent/EA037039B1/en active IP Right Revival
- 2019-06-21 JP JP2019115158A patent/JP2020058339A/en active Pending
- 2019-10-01 WO PCT/RU2019/050163 patent/WO2020076191A1/en active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1788965A3 (en) * | 1991-03-26 | 1993-01-15 | Poctobckий-Ha-Дohу Haучho-Иccлeдobateльckий Иhctиtуt Эпидemиoлoгии, Mиkpoбиoлoгии, Пapaзиtoлoгии И Гигиehы | Strain of bacteria klebsiella pneumonia usable for lipopolysaccharide preparation |
| CN104774792B (en) * | 2015-04-13 | 2017-12-19 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | The Methyldmonas of one plant of enduring high-concentration methanol and its application |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ВИНАРОВ А.Ю. "Биореакторное оформление процесса ферментации при получении кормового белка из природного газа"//Современные тенденции развития науки и технологий, Мат-лы ХХI Международной научно-практической конференции, г.Белгород, 28.02.2017. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2717991C1 (en) * | 2019-07-22 | 2020-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "ГИПРОБИОСИНТЕЗ"ООО " ГИПРОБИОСИНТЕЗ" | Protein feed supplement for farm animals and fish |
| WO2021015648A3 (en) * | 2019-07-22 | 2021-05-14 | Общество с ограниченной ответственностью "ГИПРОБИОСИНТЕЗ" | Protein feed additive for livestock animals and fish |
| RU2720121C1 (en) * | 2019-10-29 | 2020-04-24 | Ооо "Гипробиосинтез" | Method of producing microbial protein based on hydrocarbon material |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201900129A1 (en) | 2020-04-30 |
| EA037039B1 (en) | 2021-01-29 |
| JP2020058339A (en) | 2020-04-16 |
| WO2020076191A1 (en) | 2020-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2613365C1 (en) | Strain of methane-oxidizing bacteria methylococcus capsulatus gbs-15 for obtaining of microbial protein mass | |
| Jeevana Lakshmi et al. | Efficient degradation of feather by keratinase producing Bacillus sp. | |
| CN102517235B (en) | Bacillus subtilis | |
| Khamna et al. | L-asparaginase production by actinomycetes isolated from some Thai medicinal plant rhizosphere soils | |
| RU2687136C1 (en) | Heterotrophic bacteria strain stenotrophomonas acidaminiphila gbs-15-2 as associate for producing microbial protein mass | |
| CN109182147B (en) | Penicillium and method for producing fumagillin by using same | |
| RU2687137C1 (en) | Strain of heterotrophic bacteria klebsiella pneumonia is an associate for producing a microbial protein mass | |
| Zakipour-Molkabadi et al. | A new native source of Tannase producer, Penicillium sp. EZ-ZH190: characterization of the enzyme | |
| RU2687135C1 (en) | Strain of heterotrophic bacteria cupriavidus gilardii - associate for producing microbial protein mass | |
| CN108865901B (en) | Aspergillus oryzae strain and application thereof in aflatoxin degradation | |
| CN106635945A (en) | Recombinant strain and preparation method thereof and method for producing L-threonine | |
| RU2745093C1 (en) | Methylococcus capsulatus bf 19-07 methane-oxidizing bacteria strain - producer for obtaining microbial protein mass | |
| CN114015607B (en) | Bacillus amyloliquefaciens for high yield of 5-methyltetrahydrofolic acid and application thereof | |
| KR101898662B1 (en) | Bacillus amyloliquefaciens strain KJ5 and environmentally sustainable food waste processing microbial agent | |
| CN109554321B (en) | Genetically engineered bacterium for high-yield lipopeptide and application thereof | |
| CN113564081A (en) | Devorax SCS-3 for producing vomitoxin degrading enzyme and application thereof | |
| KR101898660B1 (en) | Bacillus licheniformis strain SN1 and environmentally sustainable food waste processing microbial agent | |
| Iftikhar et al. | Isolation, identification of an axenic fungal isolate of aspergillus sp.(mbl-1511) and its subsequent improvement for enhanced extracellular lipolytic potential through monoculture fermentation | |
| RU2773502C1 (en) | Strain of methanol-oxidizing bacteria acidomonas methanolica bf 21-05m is a producer for obtaining microbial protein mass | |
| RU2808127C1 (en) | Bacteria strain methylobacillus methanolivorans gsa, producer of feed protein | |
| Sasaki et al. | Ammonia removal from livestock wastewater by ammonia-assimilating microorganisms immobilized in polyvinyl alcohol | |
| RU2805960C1 (en) | Methylotrophic yeast strain ogataea polymorpha 16 ap (bkm y-3389d) for protein production | |
| CN116121085B (en) | Cold-resistant yeast suitable for low-temperature aquaculture and biocontrol application thereof | |
| CN106834161B (en) | Bacillus subtilis Z12 and application thereof | |
| CN115927115A (en) | Photosynthetic nitrogen-fixing red bacterium new species and application thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201012 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20211006 |