RU2683500C1 - Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/сингапур/2016/3571 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей - Google Patents
Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/сингапур/2016/3571 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2683500C1 RU2683500C1 RU2018119821A RU2018119821A RU2683500C1 RU 2683500 C1 RU2683500 C1 RU 2683500C1 RU 2018119821 A RU2018119821 A RU 2018119821A RU 2018119821 A RU2018119821 A RU 2018119821A RU 2683500 C1 RU2683500 C1 RU 2683500C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- singapore
- vaccine
- influenza
- strain
- adults
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм вируса гриппа А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2), депонированный в Государственную коллекцию вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, под №2861. Изобретение может использоваться для получения живой гриппозной интраназальной гриппозной вакцины для взрослых и для детей. 5 табл.
Description
Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики заболеваемости гриппом среди взрослых и детей с помощью живой гриппозной интраназальной вакцины А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2), полученной из вируса гриппа семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus А А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), clade 3С.2а, subclade 3C.2a1.
В результате появления в циркуляции нового эпидемического штамма вируса гриппа А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), известный вакцинный штамм А/17/Гонконг/2014/8296 (H3N2) - прототип (Патент РФ №2606019 от 10.03.16. - Опубл. БИ. - 2017. - №1) - утратил антигенную актуальность и, вследствие этого, не может вызвать защитную реакцию во время эпидемии, вызванной штаммами вируса гриппа подобными А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2).
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение антигенно актуального вакцинного штамма для взрослых и для детей на основе холодоадаптированного донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и нового вируса А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2).
Применяемые в настоящее время штаммы для живых гриппозных вакцин получают методом генетической реассортации антигенно актуальных эпидемических вирусов с всесторонне исследованными холодоадаптированными штаммами носителями аттенуирующих свойств, так называемыми донорами аттенуации (Александрова Г.И. Применение метода генетической рекомбинации для получения вакцинных штаммов вируса гриппа // Вопр. Вирусол. - 1977. - №4. - С. 387-395).
Донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - холодоадаптированный (ca) и температурочувствительный (ts) штамм вируса гриппа - разрешен для получения безвредных живых интраназальных вакцин для взрослых и детей (Александрова Г.И. Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л., 1968. - С. 0606-83).
Цель реассортации - получить штамм с вакцинной формулой генома 6:2. Гены, кодирующие поверхностные белки вируса гриппа гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA), наследуются от антигенно актуального циркулирующего эпидемического штамма, а шесть генов, кодирующих внутренние и неструктурные белки (РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS) -от безвредного донора аттенуации.
Получение вакцинного штамма. Вакцинный штамм А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2) с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) путем одновременного инфицирования развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ) смесью родительских вирусов в эквивалентных инфекционных дозах, с последующей селекцией клонов с заданными свойствами при пониженной до 26°С температуре инкубации в присутствии овечьей антисыворотки к донору аттенуации. Клоны дополнительно очищены тремя последовательными клонированиями методом предельных разведений в присутствии антисыворотки к донору при пониженной (26°С) и оптимальной (32°С) температурах инкубации. Чистый клон проверен по фенотипическим характеристикам (ts- и са-фенотип) и по формуле генома на соответствие вакцинному штамму.
Антигенная характеристика вакцинного штамма.
Изучение антигенных свойств вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) показало, что:
- ответственный за антигенную специфичность поверхностный белок вакцинного штамма гемагглютинин (НА) в РТГА с гомологичной сывороткой антигенно идентичен эпидемическому вирусу А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), поскольку показатели взаимодействия реассортанта А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) и родительского штамма А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2) с крысиной антисывороткой, полученной к вирусу А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), полностью совпадали (табл. 1).
- Второй ответственный за антигенную специфичность поверхностный белок вакцинного штамма нейраминидаза (NA) проверен методом частичного секвенирования, а также полногеномным секвенированием. Он также идентичен вирусу А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2).
1 Гипериммунная крысиная антисыворотка.
Анализ состава генома.
Для определения состава генома полученных реассортантов использовали метод пиросеквенирования на оборудовании PyroMark Q24.
С помощью компьютерной программы PSQ Assay Design были разработаны специфические праймеры, позволяющие оценивать наличие специфических мутаций. Результаты изучения свидетельствуют, что вакцинный реассортант унаследовал гены НА и NA от эпидемического вируса А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), а гены, кодирующие внутренние и неструктурные белки - от донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Сводные данные суммированы в таблице 2, а на рисунке 1, в качестве примера, представлены результаты пиросеквенирования гена РВ1, подтверждающие идентичность профиля участка этого гена у вакцинного реассортанта А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) и донора аттенуации А/Ленинград/134/57 (H2N2) и несовпадение их нуклеотидной последовательности с профилем соответствующего участка гена эпидемического родительского вируса.
Формула генома 6:2 соответствует требованиям, предъявляемым к штаммам живой гриппозной вакцины: гены, кодирующие поверхностные белки гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA) принадлежат эпидемическому родительскому вирусу А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), гены, кодирующие внутренние и неструктурные белки (РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS), принадлежат донору аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2).
Данные, полученные при первичном отборе вакцинного кандидата, подтверждены полным секвенированием его генома. Все кодирующие нуклеотидные замены, охарактеризованные для донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2), как ответственные за его аттенуацию, присутствуют во внутренних генах реассортантного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) (табл. 3).
Таким образом, полное секвенирование генома вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) показало генетическую стабильность характерных для донора аттенуации аттенуирующих мутаций.
1 Лен17 - ген принадлежит донору аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2);
2 Сингапур - ген принадлежит эпидемическому вирусу A/Cингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2).
Генетическую стабильность кодирующих мутаций вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) изучали также сравнением сохранности кодирующих мутаций до и после пятикратного пассирования вакцинного штамма, подготовленного на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 в развивающихся куриных эмбрионах, с помощью частичного секвенирования ДНК копий генов (Isakova-Sivak I. et. al. Development and pre-clinical evaluation of two LAIV strains against potentially pandemic H2N2 influenza virus. PLoS One. 2014. Vol. 9. №7. P. e102339).
Секвенирование участков генов, в которых находятся специфичные для донора аттенуации мутации, показало, что нуклеотидная последовательность вакцинного штамма АЛ7/Сингапур/2016/3571 (H3N2) до и после его пятикратного пассирования, осталась неизменной, в том числе, в ответственных за аттенуирующий фенотип генах полимеразного комплекса (РВ2, РВ1, РА) (табл. 3).
На фиг. 1 представлены результаты пиросеквенирования фрагмента гена РВ1 вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) в сравнении с эпидемическим вирусом А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2) и донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2)
Оценку фенотипических свойств вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2), проводили путем его параллельного титрования в РКЭ при разных температурах. Установлено, что вакцинный штамм А/17/Сингапур/2016/3 571 (H3N2) является температурочувствительным (ts фенотип) - его инфекционная активность при температуре 40°С была менее 1,2 lg ЭИД50/мл, и холодоадаптированным (са фенотип) - инфекционная активность при пониженной до 26°С температуре инкубации достигала 5,5 lg ЭИД50/мл (табл. 4). По этим показателям он идентичен температурочувствительному и холодоадаптированному донору аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2), что свидетельствует о безвредности вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) для человека.
Сохранность фенотипических характеристик вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) после пяти пассажей в РКЭ (табл. 4) соответствует его высокой генетической стабильности.
1 в сравнении с «диким» предшественником донора аттенуации: А/Ленинград/134/57 (H2N2);
2 ген NP донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) не содержит аттенуирующих мутаций.
Безвредность для мышей. Доклинические исследования острой токсичности вакцинного штамма А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) проводили на белых беспородных мышах в соответствии с Методическими рекомендациями по доклиническим испытаниям новых иммунобиологических препаратов (Методические рекомендации «Доклинические испытания эффективности и безопасности новых иммунобиологических лекарственных препаратов». М.: 2010. 39 с.) и с Правилами лабораторной практики (Приказ Минздрава РФ «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики» http://docs.cntd.ru/document/420350679) от 1.04.2016 №199н). Животным вводили однократно 0,5 мл вакцинного вируса внутрибрюшинно в дозе 7.0 lg ЭИД50/0.2 мл. Животным контрольной группы вводили внутрибрюшинно физиологический раствор. Ежедневно в течение всего исследования (7 дней) проводился контроль общего состояния каждого животного.
Данные физиологического исследования показали, что внутрибрюшинное введение вакцинного штамма не вызывало гибели экспериментальных животных (табл. 5) и не приводило к изменению их внешнего вида, поведения, не отражалось на потреблении ими пищи и воды, что свидетельствует о безвредности вакцинного препарата.
1 ВШ - вакцинный штамм А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2).
Заключение
В результате проведенных доклинических исследований установлено, что заявляемый вакцинный штамм живой гриппозной вакцины А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью эпидемического вируса А/Сингапур/INFIMH-16-0019/2016 (H3N2), структурой генома 6:2, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, а также характерной для донора аттенуации температурочувствительностью и холодоадаптированностью и безвредностью для лабораторных животных, что коррелирует с аттенуацией для человека.
Образец паспорта на вакцинный штамм А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) прилагается.
Таким образом, вакцинный штамм А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) по основным биологическим свойствам, изученным в доклинических экспериментах in vitro и in vivo, соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей (ФСП: Р N003224/01-270313) на Ультравак®, вакцину гриппозную аллантоисную живую для интраназального применения для взрослых и для детей.
Полученный штамм А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2) депонирован 18.01.2018 года в Государственную коллекцию вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России Институт вирусологии им. Д.И.Ивановского (Россия RU, 123098, город Москва, улица Гамалеи, 16) под №2861 и имеет характеристики, представленные в паспорте штамма.
Claims (1)
- Штамм вируса гриппа А/17/Сингапур/2016/3571 (H3N2), депонированный в Государственную коллекцию вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под №2861, для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018119821A RU2683500C1 (ru) | 2018-05-29 | 2018-05-29 | Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/сингапур/2016/3571 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018119821A RU2683500C1 (ru) | 2018-05-29 | 2018-05-29 | Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/сингапур/2016/3571 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2683500C1 true RU2683500C1 (ru) | 2019-03-28 |
Family
ID=66089996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018119821A RU2683500C1 (ru) | 2018-05-29 | 2018-05-29 | Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/сингапур/2016/3571 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2683500C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2734897C1 (ru) * | 2019-12-17 | 2020-10-26 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/БРИСБЕН/2018/3610 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2606019C1 (ru) * | 2016-03-10 | 2017-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/ГОНКОНГ/2014/8296 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
-
2018
- 2018-05-29 RU RU2018119821A patent/RU2683500C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2606019C1 (ru) * | 2016-03-10 | 2017-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/ГОНКОНГ/2014/8296 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| БАЖЕНОВА Е.А., Особенности реассортации современных штаммов вируса гриппа с донорами аттенуации живой гриппозной вакцины, авто диссертации, Москва, 2015. * |
| БАЖЕНОВА Е.А., Особенности реассортации современных штаммов вируса гриппа с донорами аттенуации живой гриппозной вакцины, автореферат диссертации, Москва, 2015. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2734897C1 (ru) * | 2019-12-17 | 2020-10-26 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/БРИСБЕН/2018/3610 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bi et al. | Genesis, evolution and prevalence of H5N6 avian influenza viruses in China | |
| Zhou et al. | The special neuraminidase stalk-motif responsible for increased virulence and pathogenesis of H5N1 influenza A virus | |
| Xu et al. | Phylogenetic classification of hemagglutinin gene of H9N2 avian influenza viruses isolated in China during 2012–2016 and evaluation of selected candidate vaccine strains | |
| Arai et al. | PB2 mutations arising during H9N2 influenza evolution in the Middle East confer enhanced replication and growth in mammals | |
| Prokopyeva et al. | Adaptation of influenza A (H1N1) pdm09 virus in experimental mouse models | |
| Yin et al. | Glycosylation at 11Asn on hemagglutinin of H5N1 influenza virus contributes to its biological characteristics | |
| Song et al. | New reassortant H5N8 highly pathogenic avian influenza virus from waterfowl in Southern China | |
| Qu et al. | Genetic characteristics, pathogenicity and transmission of H5N6 highly pathogenic avian influenza viruses in Southern China | |
| Kang et al. | Characterization of H7 influenza A virus in wild and domestic birds in Korea | |
| Yuan et al. | Reassortment of avian influenza A/H6N6 viruses from live poultry markets in Guangdong, China | |
| RU2683500C1 (ru) | Вакцинный штамм вируса гриппа а/17/сингапур/2016/3571 (h3n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей | |
| RU2746274C2 (ru) | Вакцинный штамм вируса гриппа В/60/Колорадо/2017/1 (Линия Виктория) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей | |
| RU2556833C2 (ru) | Аттенуированный холодоадаптированный штамм вируса гриппа а/рr/8/59/m2 (h1n1), предназначенный для получения вакцинных штаммов вируса гриппа в качестве донора аттенуации, вакцинные штаммы вируса гриппа а/59/м2/калифорния/66/2211 (н2n2) и а/59/м2/токио/67/22111 (н2n2) | |
| Sharshov et al. | First detection of a G1-like H9N2 virus in Russia, 2018 | |
| Lvov et al. | Evolution of H4, H5 influenza A viruses in natural ecosystems in Northern Eurasia (2000–2002) | |
| RU2606019C1 (ru) | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/ГОНКОНГ/2014/8296 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей | |
| Watanabe et al. | Host immune-related gene responses against highly pathogenic avian influenza virus infection in vitro differ among chicken cell lines established from different organs | |
| RU2605926C1 (ru) | ШТАММ ВИРУСА ГРИППА В/60/Пхукет/2013/26 ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЛЯ ДЕТЕЙ | |
| Takayama et al. | Novel reassortant avian influenza A (H5N1) virus in human, Southern Vietnam, 2014 | |
| Wu et al. | Characterization of H7N9 avian influenza viruses isolated from duck meat products | |
| RU2711101C1 (ru) | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/БРИСБЕН/2017/7178 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей | |
| Fallah Mehrabadi et al. | Full-genome characterization and genetic analysis of a H9N2 virus in commercial broilers in Iran, 2017 | |
| RU2605314C1 (ru) | ВАКЦИННЫЙ ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/17/Боливия/2013/6585 (H1N1) pdm09 ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЛЯ ДЕТЕЙ | |
| RU2715674C1 (ru) | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/Швейцария/2017/51 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей | |
| RU2653388C1 (ru) | Вакцинный штамм вируса гриппа А/17/НЬЮ ЙОРК/15/5364 (H1N1) pdm09 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей |