RU2676099C1 - Способ идентификации дрожжей рода pichia на основе пцр в реальном времени с использованием taqman зонда - Google Patents
Способ идентификации дрожжей рода pichia на основе пцр в реальном времени с использованием taqman зонда Download PDFInfo
- Publication number
- RU2676099C1 RU2676099C1 RU2017139641A RU2017139641A RU2676099C1 RU 2676099 C1 RU2676099 C1 RU 2676099C1 RU 2017139641 A RU2017139641 A RU 2017139641A RU 2017139641 A RU2017139641 A RU 2017139641A RU 2676099 C1 RU2676099 C1 RU 2676099C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- yeast
- genus pichia
- identification
- time pcr
- taqman probe
- Prior art date
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 241000235648 Pichia Species 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 22
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 description 8
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 241000235048 Meyerozyma guilliermondii Species 0.000 description 2
- 241000235061 Pichia sp. Species 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004565 5.8S Ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000235036 Debaryomyces hansenii Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192348 [Candida] palmioleophila Species 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000033629 detection of yeast Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 210000001069 large ribosome subunit Anatomy 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56961—Plant cells or fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии и предназначено для идентификации дрожжей рода Pichia. Осуществляют предварительное обогащение дрожжей, осаждение их центрифугированием, выделение ДНК с проведением ПЦР в реальном времени. Для амплификации используются праймеры и Taqman зонд. Логарифмическое повышение уровня флюоресценции в канале FAM амплификатора свидетельствует о наличии штамма дрожжей рода Pichia. Изобретение обеспечивает повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа присутствия дрожжей рода Pichia. 1 ил., 1 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к микробиологии и касается способов измерения, использующих микроорганизмы, а именно, нуклеиновые кислоты. Данное изобретение может быть использовано в пищевой промышленности при идентификации дрожжей рода Pichia в как во входящем сырье пищевого предприятия, так и на разных этапах производства, включая конечную продукцию.
Раннее обнаружение дрожжей рода Pichia является актуальной задачей в масложировой промышленности ввиду широкого распространения этой группы микроорганизмов в данных видах продуктов, что приводит к их порче. Важность раннего обнаружения Pichia sp.позволит пищевым предприятиям быстро выявлять произведенную продукцию и входящее сырье предприятия, обсемененную этим видом дрожжей и вовремя ее браковать. Предварительно нами было выявлены многочисленные случаи загрязнения дрожжами рода Pichia пищевых продуктов с высоким содержанием жиров. Размножение этой группы организмов приводит к порче произведенной продукции и ее не соответствию требованиям СанПина.
На данный момент идентификацию дрожжей рода Pichia в большинстве случаев проводят по морфологическим признакам, что является сложной задачей, которую способен решить только высококвалифицированный микробиолог. Также, вывить данный организм{ можно с помощью секвенирования консервативных участков генома. Зачастую необходимо быстро выявить присутствие данной таксономической группы дрожжей ввиду их быстрого роста в продуктах с высоким содержанием жиров (например, майонез), чтобы выявить продукцию, а также входящее сырье, содержащие данную группу организмов для дальнейшей ее отбраковки.
Рядом авторов были разработаны молекулярно-генетические методы идентификации некоторых представителей рода Pichia молекулярно-генетическими методами. Был разработан молекулярно-генетический метод идентификации Pichia guilliermondii (MotaA.J. etal. Molecular identification of Pichia guilliermondii, Debary omyceshansenii and Candida palmioleophila. Genetics and Molecular Biology. 2012, 35(1): 122-125); молекулярно-генетический метод идентификации дрожжей, обсеменяющих винные продукты (Pramateftaki P.V. et al. Molecular identification of wine yeasts at species or strain level: a case study with strains from two vine-growing areas of Greece. JournalofAppliedMicrobiology. 2000, 89(2):236-248); молекулярно-генетический метод идентификации дрожжей, которые могут содержаться в крови (ChangH.C. etal. Rapid identification of yeasts in positive blood cultures by a multiplex PCR method. Journal of Clinical Microbiology.2001, 39:3466-3471); молекулярно-генетический метод идентификации дрожжей, значимых для ветеринарии (Garner C.D. et al. Molecular Identification of Veterinary Yeast Isolates by Use of Sequence-Based Analysis of the D1/D2 Region of the Large Ribosomal Subunit. Journal of Clinical Microbiology. 2010, 48(6):2140-2146) и др. Перечисленные молекулярно-генетические методы узкоспециальные и не имеют отношения к масложировой промышленности.
Известен способ определения наличия определенных микроорганизмов в биологическом образце (патент RU 2435865, МПК C12Q 1/68, G01N 33/569, G01N 33/543, опубл. 10.12.2011), взятый за прототип, включающий иммобилизацию биологического организма и его; ДНК с последующей идентификацией на основе ПЦР с генотипирующими праймерами. Недостатком данного способа является низкая видоспецифичность ввиду того, что одни лишь праймеры не обеспечивают высокой специфичности анализа, что может привести к ложноположительным результатам.
Задачей настоящего изобретения является разработка высокоспецифичного и оперативного способа идентификации присутствия дрожжей рода Pichia.
Технический результат заключается в разработке высокочувствительного способа и сокращении времени анализа присутствия дрожжей рода Pichia с 5 суток до 1 суток (в 5 раз).
Технический результат достигается тем, что в «способе идентификации дрожжей рода Pichia в майонезах на основе ПЦР в реальном времени, включающем предварительное обогащение дрожжей, осаждение их центрифугированием, выделение ДНК с проведением ПЦР в реальном времени, согласно изобретению, для амплификации используются праймеры PichUn-f GATCTCTTGGTTCTCGCATC и PichUn-r GCGTTCAAGAACTCGATGA, а также Taqman зонд PichUn-p FAM TCACACTAGGTATCGCATTTCGCTGC BHQ1, где логарифмическое повышение уровня флюоресценции свидетельствует о наличии штама дрожжей рода Pichia.
Предварительно проведен анализ нуклеотидной последовательности участка ДНК, включающего гены 18S рРНК, 5.8S рРНК и 28S рРНК и межгенные участки ITS1 и ITS2 для значимых в пищевой промышленности дрожжей рода Pichia. Установлены консервативные участки для данной группы организмов, которые позволяют разработать метод экспресс-идентификации дрожжей на основе ПЦР в реальном времени с использованием Taqman зонда, который представляет собой олигонуклеотид, к которому присоединены молекула флуорофора и молекула гасителя флуоресценции. При проведении ПЦР гибридизованный с ДНК зонд расщепляется ДНК-полимеразой (вследствие ее экзонуклеазной активности) и высвобождается флуоресцентная метка. Таким образом, наблюдается повышение уровня флуоресценции.
На фиг. 1 приведены кривые флуоресценции ДНК из 5 проб майонеза, полученные в ходе проведения ПЦР в реальном времени.
Способ идентификации дрожжей рода Pichia с помощью проведения ПЦР в реальном времени с использованием Taqman зонда в представленном способе реализуется следующим образом:
1. Производится сбор биологического материала (майонез, входящее сырье и др.). Для анализа используется 1 мл биологического материала.
2. Проводится предварительное 18-часовое обогащение образца в среде для культивирования дрожжей и плесени (например, бульон Сабуро). Объемное соотношение майонез/среда обогащения составляет не менее 1:10.
3. Проводится осаждение клеток дрожжей с помощью центрифугирования (например, 10000 g, 5 мин), супернатант вместе с майонезом удаляется.
4. Производится выделение ДНК из осажденных клеток, выделение ДНК можно осуществлять как с помощью коммерческих наборов («БиоСилика»,«ДНК-технологии», «Праймтех», «Zymоresearch» и др.), так и методами органической экстракции.
5. Проводят ПЦР. Используют следующие температурные циклы: 94°С 4 мин, 35 циклов (94°С 30 сек, 54°С 30 сек, 72°С 30 сек.)
Используется следующиепраймеры и зонд:
Прямой GATCTCTTGGTTCTCGCATC
Зонд FAM TCACACTAGGTATCGCATTTCGCTGC BHQ1
Обратный GCGTTCAAGAACTCGATGA
Данные праймеры амплифицируют продукт ПЦР длиной 114 п.н., который содержит нуклеотидные полиморфизмы, характерные только для дрожжей рода Pichia, с которыми взаимодействует Taqman зонд.
6. В случае, если наблюдается логарифмическое повышение уровня флуоресценции в канале FAM амплификатора, это означает, что продукт обсеменен дрожжами Pichia sp.
Предлагаемый способ является высокочувствительным, хорошо воспроизводимым и экономичным. Анализ можно проводить в лабораториях, имеющих амплификатор в реальном времени, центрифугу, сопутствующие реактивы и расходные материалы.
Способ поясняется примером:
После предварительного обогащения и выделения ДНК из 5 проб майонеза был проведен ПЦР в реальном времени (фиг. 1). В одной из проб (№1) наблюдался логарифмическое повышения уровня флуоресценции в канале FAM амплификатора, при этом в других пробах (№2-5) не наблюдалось повышение флуоресценции. Следовательно, проба майонеза №1 содержит дрожжи рода Pichia.
Claims (1)
- Способ идентификации дрожжей рода Pichia на основе ПЦР в реальном времени с использованием Taqman зонда, включающий предварительное обогащение дрожжей, осаждение их центрифугированием, выделение ДНК с проведением ПЦР в реальном времени, отличающийся тем, что для амплификации используются праймеры: прямой GATCTCTTGGTTCTCGCATC и обратный GCGTTCAAGAACTCGATGA, а также Taqman зонд FAM TCACACTAGGTATCGCATTTCGCTGC BHQ1, причем логарифмическое повышение уровня флюоресценции в канале FAM амплификатора в реальном времени свидетельствует о наличии штамма дрожжей рода Pichia.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017139641A RU2676099C1 (ru) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | Способ идентификации дрожжей рода pichia на основе пцр в реальном времени с использованием taqman зонда |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017139641A RU2676099C1 (ru) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | Способ идентификации дрожжей рода pichia на основе пцр в реальном времени с использованием taqman зонда |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2676099C1 true RU2676099C1 (ru) | 2018-12-26 |
Family
ID=64753716
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017139641A RU2676099C1 (ru) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | Способ идентификации дрожжей рода pichia на основе пцр в реальном времени с использованием taqman зонда |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2676099C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2435865C2 (ru) * | 2006-01-23 | 2011-12-10 | Рочестер Инвестмент Партнерс | Способ обнаружения наличия микроорганизмов в биологическом образце |
-
2017
- 2017-11-14 RU RU2017139641A patent/RU2676099C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2435865C2 (ru) * | 2006-01-23 | 2011-12-10 | Рочестер Инвестмент Партнерс | Способ обнаружения наличия микроорганизмов в биологическом образце |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LATIFAH ANWARIAH S. et al. Perancangan Primer Spesifik untuk Mendeteksi Dini Jamur Pangan Ektomikoriza Pelawan. Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Biologi. 2013; 40 h. * |
| PRAMATEFTAKI P.V. et al. Molecular identification of wine yeasts at species or strain level: a case study with strains from two vine-growing areas of Greece. J Appl Microbiol. 2000 Aug; 89(2): 236-48. * |
| PRAMATEFTAKI P.V. et al. Molecular identification of wine yeasts at species or strain level: a case study with strains from two vine-growing areas of Greece. J Appl Microbiol. 2000 Aug; 89(2): 236-48. LATIFAH ANWARIAH S. et al. Perancangan Primer Spesifik untuk Mendeteksi Dini Jamur Pangan Ektomikoriza Pelawan. Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Biologi. 2013; 40 h. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pincus et al. | Yeast identification—past, present, and future methods | |
| Cocolin et al. | Molecular detection and identification of Brettanomyces/Dekkera bruxellensis and Brettanomyces/Dekkera anomalus in spoiled wines | |
| Ivey et al. | Detection and identification of microorganisms in wine: a review of molecular techniques | |
| JP5935803B2 (ja) | カビの検出方法、ｐｃｒ用反応液、及びカビ検出用担体 | |
| González et al. | Enumeration and detection of acetic acid bacteria by real‐time PCR and nested PCR | |
| Mirhendi et al. | Differentiation of Candida glabrata, C. nivariensis and C. bracarensis based on fragment length polymorphism of ITS1 and ITS2 and restriction fragment length polymorphism of ITS and D1/D2 regions in rDNA | |
| Weller et al. | Detection of root mat associated Agrobacterium strains from plant material and other sample types by post‐enrichment TaqMan PCR | |
| RU2010144789A (ru) | Процесс и способ мониторинга желудочно-кишечной микрофлоры | |
| de Souza Liberal et al. | Contaminant yeast detection in industrial ethanol fermentation must by rDNA‐PCR | |
| Kennedy et al. | Fingerprinting the fungal community | |
| Cimaglia et al. | An innovative oligonucleotide microarray to detect spoilage microorganisms in wine | |
| Kong et al. | Direct colony PCR-SSCP for detection of multiple pythiaceous oomycetes in environmental samples | |
| Tristezza et al. | An optimized protocol for the production of interdelta markers in Saccharomyces cerevisiae by using capillary electrophoresis | |
| JP5048622B2 (ja) | 乳酸菌検出用ｐｃｒプライマー | |
| RU2676099C1 (ru) | Способ идентификации дрожжей рода pichia на основе пцр в реальном времени с использованием taqman зонда | |
| Sudhan et al. | Identification of Candida Species in the Clinical Laboratory: A review of conventional, commercial and molecular techniques | |
| CN114134239B (zh) | 一种pcr法快速评价哺乳动物细胞质量的试剂盒及其检测方法 | |
| JP4648023B2 (ja) | ジャガイモそうか病原因菌種の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子若しくは１６ＳｒＲＮＡ遺伝子からＩＴＳ領域間を増幅するための新規プライマー対、及びそれらを用いたジャガイモそうか病原因菌種の検出・識別方法 | |
| Zara et al. | Detection, quantification, and identification of yeast in winemaking | |
| Naeimipour et al. | Subtilisin Gene Activity in Dermatophytes: A study on the Presence of the Subtilisin Gene in Trichophyton verrucosum and Microsporum gypseum in Clinical and Nonclinical Samples in Tehran, Iran | |
| CN107012253B (zh) | 一种鉴定栽培燕麦母本的方法 | |
| RU2682041C1 (ru) | Способ идентификации осмотолерантных дрожжей Zygosaccharomyces rouxii на основе ПЦР в реальном времени | |
| CN110846434A (zh) | 一种鉴别茶树品种的引物、试剂盒及其鉴别方法 | |
| RU2583924C1 (ru) | СПОСОБ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР-ДЕТЕКЦИИ Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens И Eggerthella spp. В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ | |
| CN114164296B (zh) | 一种用于检测寡雄腐霉菌的引物探针组合物、试剂盒及应用和检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20200116 Effective date: 20200116 |