RU2675315C1 - Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала - Google Patents

Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала Download PDF

Info

Publication number
RU2675315C1
RU2675315C1 RU2018114180A RU2018114180A RU2675315C1 RU 2675315 C1 RU2675315 C1 RU 2675315C1 RU 2018114180 A RU2018114180 A RU 2018114180A RU 2018114180 A RU2018114180 A RU 2018114180A RU 2675315 C1 RU2675315 C1 RU 2675315C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lactobacilli
lactobacillus
isolation
stage
medium
Prior art date
Application number
RU2018114180A
Other languages
English (en)
Inventor
Айрат Радикович Мавзютов
Анжела Владимировна Цветкова
Татьяна Вячеславовна Маркушева
Дмитрий Евгеньевич Денисов
Андрей Ханифович Баймиев
Ксения Валерьевна Хлопова
Регина Камилевна Динова
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью Торговый дом "ЭкоФарм сервис"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью Торговый дом "ЭкоФарм сервис" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью Торговый дом "ЭкоФарм сервис"
Priority to RU2018114180A priority Critical patent/RU2675315C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2675315C1 publication Critical patent/RU2675315C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен способ селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp. из клинического материала. Способ включает культивирование посевов лактобактерий в два этапа: на жидкой питательной среде «Бульон MRS для лактобактерий», дополнительно содержащей натрия гидрофосфат и пиобактериофаг поливалентный очищенный, а на втором этапе для пересева используют среду «Лактобакагар», разведенную водой дистиллированной до 1000 мл. Способ обеспечивает селективность выделения аутоштаммов Lactobacillus spp. и повышение выхода биомассы лактобактерий за счет ингибирования роста сопутствующих условно-патогенных микроорганизмов. 2 табл., 2 пр.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp.из клинического материала (отделяемое слизистых влагалища, кал), получения бактерийных препаратов и лечения дисбиотических процессов.
Бактерии рода Lactobacillus являются обязательной и крайне значимой составляющей нормальной микробиоты пищеварительной и репродуктивной систем млекопитающих. В связи с этим культуры Lactobacillus spp.широко используются в качестве действующего начала в составе пробиотиков и синбиотиков [Червинец Ю.В., Червинец В.М., Миронов А.Ю. Симбиотические взаимоотношения лактобацилл и микроорганизмов желудочно-кишечного тракта: монография. Тверь: Ред.-изд. центр Твер. гос. мед. ун-та, 2016.- 214 с; Martin D.H. The microbiota of the vagina and its influence on women's health and disease. Am. J. Med. Sci. 2012; 343(1): 2-9].
Наряду с этим известно, что количественный и качественный состав микробиоты подвержен как эволюционным, так и инволюционным изменениям. С другой стороны - показано, что наибольший терапевтический эффект и, одновременно, в контексте концепции развития персонализированной медицины, могут оказывать аутоштаммы представителей нормобиоты, выделенные непосредственно от пациента [Compare D., Rocco A., Coccoli P., Angrisani D., Sgamato C, Iovine В., Salvatore U., Nardone G. Lactobacillus casei DG and its postbiotic reduce the inflammatory mucosal response: an ex-vivo organ culture model of postinfectious irritable bowel syndrome. BMC Gastroenterology. 2017; 17: 53. DOI 10.1186/s12876-017-0605-x]. He все виды и штаммы бактерий рода Lactobacillus одинаково биологически активны, поэтому показана перспективность разработки и применения комбинированных препаратов пробиотиков, включающих одновременно несколько видов Lactobacillus spp.[Hasannejad Bibalan M, Eshaghi M., Rohani M., Esghaei M., Darban-Sarokhalil D., Pourshafie M.R., Talebi M. Isolates of Lactobacillus plantarum and L. reuteri display greater antiproliferative and antipathogenic activity than other Lactobacillus isolates. J. Med. Microbiol. 2017; 66(10): 1416-1420. doi: 10.1099/jmm.0.000591].
Это актуализирует постоянную необходимость выделения и характеристики новых штаммов Lactobacillus spp., но существенно осложняется при исследовании клинического материала жизнедеятельностью антагонистических представителей микробиоты и многочисленностью видов лактобацилл. Так в настоящее время описано свыше 120 видов бактерий рода Lactobacillus, многие из которых недостаточно изучены, что не исключает их медико-биологического значения для человека (см. табл.1).
Основным способом выделения чистых культур Lactobacillus spp.для диагностики дисбактериоза, изучения штаммов и формирования коллекций указанных микроорганизмов является культуральный. Он основывается на применении питательных сред. Однако их общим недостатком является то, что используемые на данный момент питательные среды не обладают необходимой селективностью для подавления рост сопутствующей бактериальной флоры. Это существенно снижает эффективность проводимых в данном направлении исследований.
Известен способ выделения бактерий рода Lactobacillus из клинического материала, который предполагает приготовление серии 10-кратных разведений исследуемого материала в жидкой селективной питательной среде, обогащение при 39°С, высев из разведений на поверхность плотной селективной питательной среды, дополнительное культивирование посевов 24-48 ч при повышенном содержании углекислого газа (5%) и пониженной концентрации кислорода (16%) в атмосфере культивирования, при этом жидкая селективная питательная среда обогащения имеет достаточно сложный состав (г/л): гидролизат обезжиренного молока жидкий 225,0±25,0, аутолизат дрожжей концентрированный 110,0±10,0, агар 0,8, вода дистиллированная до 1 л, раствор едкого натра 20% до рН среды 5,4±0,1, а затем проводят выделение лактобацилл на плотной селективной питательной среде состава, г/л: гидролизат обезжиренного молока жидкий 225,0±25,0, аутолизат дрожжей концентрированный 110,0±10,0, агар 22,5±2,5, вода дистиллированная до 1 л, раствор едкого натра 20% до рН среды 5,4±0,1 [патент РФ №2154822, 2000 г.]. Несмотря на некоторое улучшение диагностики гинекологических заболеваний, способ отличается сложным составом используемых селективных питательных сред. Не показана его эффективность при исследовании содержимого кишечника
Известен способ выделения бактерий рода Lactobacillus из клинического материала. Состав питательной среды: аутолизат дрожжей концентрированный (аминный азот 580-600 мг %), лактоза, кислота уксусная ледяная, агар, отвар крупы сои (аминный азот 38-40 мг %), раствор едкого натра 20%. Культивирование проводится при температуре 39°С, повышенном содержании углекислого газа - 5% и пониженной концентрации кислорода 16%. Новизна этого способа состоит в том, что для приготовления питательных сред вместо гидролизата молока жидкого используют отвар крупы сои, лактозу и уксусную кислоту. Способ отличается трудоемкостью, технической сложностью, продолжительностью и не показана его эффективность при исследовании содержимого кишечника или отделяемого влагалища [патент РФ №2193060, 2002 г.].
Известен способ выделения бактерий рода Lactobacillus, который предусматривает высев клинического материала на поверхность плотной среды Рогоза следующего состава (в граммах на 1 литр): 25,0 дрожжевого аутолизата обыкновенного; 20,0 агар-агара; 10,0 пептона; 20,0 глюкозы; 1,0 Твин-80; 6,0 KH2PO4; 25,0 ацетата натрия; 2,0 цитрата аммония; 0,575 MgSO4; 0,12 MnSO4⋅2H2O; 0,034 FeSO4⋅7H2O; 1,32 уксусной кислоты ледяной; воды дистиллированной до 1 л; рН среды 5,4±0,1; с последующей инкубацией посевов при температуре 37°С в заполненном углекислым газом анаэростате в течение 4 суток [Ленцнер А.А., Тоом М.А., Воронина М.Н., Микельсаар М.Э. К методике выделения отдельных видов лактобацилл микрофлоры человека. Лабораторное дело. 1967; 5: 301-302].
Недостатком данного способа является связанная со сложным составом питательной среды трудоемкость ее изготовления в условиях практической баклаборатории и длительность культивирования выделяемых микроорганизмов. Однако наиболее существенным недостатком является то, что селективность предложенной среды обеспечивается высокими концентрациями ацетата натрия - 25 г/л. Тогда как показано, что увеличение концентраций ацетата натрия свыше 3 г/л существенно снижает буферную емкость питательных сред. Это в ходе столь продолжительного культивирования неминуемо снизит всхожесть не только сопутствующих бактерий, но непосредственно культивируемых Lactobacillus spp. Показанное снижение буферной емкости данной питательной среды, используемой для культивирования преимущественно факультативно-анаэробных и анаэробных представителей рода Lactobacillus, существенно повышает силу ингибирования их роста в том числе и остаточными концентрациями О2 в связи с увеличением окислительно-восстановительного потенциала (Eh) [Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб.- 2008.- 352 с.].
Наиболее близким аналогом изобретения является способ выделения аутопробиотических Lactobacillus spp., заключающийся в том, что из фекалий осуществляют забор материала у пациентов. Для этого необходимо не менее 0,5 г материала (желательно - 5,0 г), при жидком стуле - слой не менее 1-2 см от дна посуды. Доставку в бактериологическую лабораторию осуществляют не позднее 2 часов после забора материала. Затем в стерильных условиях к 1 г материала добавляют 9 мл стерильного фосфатного буфера (физиологический раствор хлорида натрия с добавлением фосфатов натрия двух- и однозамещенных, смешанных в пропорции, необходимой для создания рН 7,4). Суспензию фекалий в разведении 1:10 высевают в количестве 100 мкл на селективную среду для лактобацилл МРС-4, содержащую: 10,0 г мясного экстракта; 10,0 г протеозопептона; 3,0 г дрожжевого экстракта; 17,5 г гидролизата казеина ферментативного; печеночную воду 100,0 мл; Твин-80 1,0 мл; 2,5 г глюкозы; 0,2 г L-цистеина; 2,0 г калия фосфата двузамещенного; 0,05 г сульфата марганца; 0,2 г сульфата магния; 5,0 г ацетата натрия; 2,0 г цитрата аммония; 15,0 г агара микробиологического и воду дистиллированную до 1 литра (производство НИЦФ, Санкт-Петербург, http://www.nicf.spb.ru/Download/%D0%9A%D0%B0%D1%82%D0%B0% D0%BB%D0%BE%D0%B3_%D0%9D%D0%98%D0%A6%D0%A4.pdf). Культивируют в течение 24-48 часов при 37°С в анаэробных или микроаэрофильных условиях. Затем выбирают типичные для Lactobacillus spp.отдельные колонии и отсевают их на новую чашку Петри со средой МРС-4 секторами с целью получения чистой культуры. Культивируют в течение 24-48 часов при 37°С в анаэробных или микроаэрофильных условиях. При световой микроскопии при окрашивании по методу Грама клетки лактобацилл приобретают темно-синий цвет, имеют форму палочек и располагаются в виде цепочек или отдельных клеток. Чистые культуры направляют на генетический анализ [патент РФ №2546253, 2015 г.]. Наиболее значимым недостатком предложенного способа является применение только богатых питательных сред, не оказывающих селективного эффекта на сопутствующие сапрофитные бактерии, количество которых, например, в фекалиях чрезвычайно велико, и, соответственно, высоки риски ингибирования ими выделяемых аутоштаммов Lactobacillus spp.из клинического материала.
Задачей изобретения является разработка способа селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp.из клинического материала.
Технический результат при использовании изобретения - повышение селективности выделения аутоштаммов известных представителей рода Lactobacillus из клинического материала и выхода биомассы лактобактерий в результате ингибирования роста основных условно-патогенных представителей нормальной микробиоты (Staphylcoccus spp., Streptococcus spp., Proteus spp., Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa).
Предлагаемый способ селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp.из клинического материала осуществляется следующим образом.
Выделение бактерий рода Lactobacillus из клинического материала (отделяемое слизистых влагалища, кал) осуществляют в два этапа: - накопление бактерий рода Lactobacillus на жидкой питательной среде «Бульон MRS для лактобактерий» (HiMedia Laboratories Pvt. Limited (Индия), селективность которой существенно повышается в результате внесения в нее в асептических условиях препарата «Пиобактериофаг поливалентный очищенный» (ФГУП НПО «Микроген», Россия) в соотношении 1:10;
- последующий высев на плотную неселективную питательную среду «Лактобакагар» для получения изолированных колоний.
Первый этап. Для получения накопительной культуры лактобактерий клинический материал (отделяемое слизистых влагалища, кал) вносят в пробирку с модифицированной жидкой селективной питательной средой «Бульон MRS для лактобактерий», содержащей на 1 л: протеозопептон -10,0 г; мясной экстракт - 10,0 г; дрожжевой экстракт - 5,00 г, глюкозу -20,0 г; Твин-80 - 1,0 мл; аммония цитрат - 2,0 г; натрия ацетат - 5,0 г; магния сульфат - 0,10 г; марганца сульфат - 0,05, натрия гидрофосфат - 2,0 г; пиобактериофаг - 100 мл и воду дистиллированную до 1000 мл. Инкубируют в анаэробных условиях при 37°C в течение 24-48 ч (не более 72 ч) до появления признаков роста. Результат учитывают визуально, по наличию общего помутнения среды. При росте бактерий рода Lactobacillus наблюдается диффузное помутнение среды с прозрачной зоной в верхней части. Из образцов накопительных культур с наличием роста готовят фиксированные препараты, окрашивают по Граму. Отмечают характерные по морфологии грамположительные палочки, без капсулы, неспорообразующие, расположенные отдельно или цепочками.
Второй этап - выделение чистой культуры лактобактерий на плотной питательной среде.
Для этого проводят посев по методу Коха 0,1 мл полученной накопительной культуры на поверхность плотной неселективной питательной среды «Лактобакагар», содержащей в грамм/литр: панкреатический гидролизат рыбной муки - 20,0; дрожжевой экстракт 5,0; экстракт мясной или пептон - 5,0; Д-глюкозу - 20,0; калия монофосфат - 2,0; натрия ацетат 3-водный - 5,0; твин-80 - 1 мл; аммония цитрат - 2,0; магния сульфат 7-водный - 0,1; марганца хлорид 4-водный - 0,05; агар-агар - 13,0±2,0 и воду дистиллированную до 1000 мл, рассевают шпателем по трем чашкам Петри для получения изолированных колоний. Культивирование посевов проводят в течение 24-48 ч при 37°C в анаэростате. Колонии описывают и микроскопируют фиксированные окрашенные препараты. Колонии бактерий рода Lactobacillus вырастают разной величины, от точечных (росинки), до 2-3 мм в диаметре, чаще плоские, шероховатые, слегка опалесцирующие, прозрачные, иногда с возвышением в центре и валиком по краю, редко белого цвета. Для последующей идентификации все колонии рекомендуется проверять путем микроскопии окрашенных по Граму мазков.
Питательная среда для выделения и культивирования лактобацилл «Лактобакагар» (ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (Оболенск)) предназначена для выделения и культивирования лактобацилл при бактериологическом исследовании в клинической лабораторной диагностике, пищевой микробиологии. Достоинством данной среды является то, что совокупность компонентов, входящих в состав Лактобакагара, обеспечивает необходимые питательные потребности для роста лактобактерий и ингибиции отдельных видов микроорганизмов (кишечной палочки, клебсиелл и псевдомонад), недостатком - рост энтерококков и дрожжеподобных грибов.
На первом этапе культивирования на жидкой селективной среде, благодаря добавлению пиобактериофага, задерживается рост сопутствующей микрофлоры, что способствует ускоренному накоплению лактобактерий. На втором этапе культивирования посевов на плотной питательной среде обеспечивается рост изолированных колоний, которые в дальнейшем могут быть охарактеризованы. Колонии штаммов-кандидатов могут использоваться для паспортизации и практического применения. В частности выделенные культуры используют для дальнейшего изучения: определения биосовместимости с эубиотическими штаммами бактерий, приготовления лактобактерина на основе аутоштаммов бактерий рода Lactobacillus, определения чувствительности аутоштаммов бактерий к антибиотикам, антагонизм аутоштаммов по отношению к условно-патогенным бактериям, адгезивность на культурах клеток.
Для подтверждения принадлежности к роду Lactobacillus и определения вида выделенной культуры проводят анализ методом полимеразной цепной реакции с родо- и видоспецифичными праймерами.
Пример 1. Выделение бактерий рода Lactobacillus из клинического материала (вагинальное отделяемое).
Стерильную жидкую селективную питательную среду для выделения лактобактерий «Бульон MRS для лактобактерий» в асептических условиях разливают в подготовленные две пробирки по 10,0 мл. В первую пробирку добавляют 1,0 мл препарата «Пиобактериофаг поливалентный очищенный» (ФГУП НПО «Микроген», Россия), включающего родоспецифические (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Proteus spp.) и видоспецифические (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa) бактериофаги (опыт), во вторую - 1,0 мл дистиллированной воды (контроль). Добавляют клинический материал - 0,1 мл вагинального отделяемого (дисбиоз влагалища, исходная концентрация лактобактерий 103 КОЕ/мл). Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37°С в течение 24 ч. Результат учитывают визуально, наблюдают диффузное помутнение столбика среды с прозрачной зоной в верхней части. Из образцов накопительных культур с наличием роста готовят фиксированные препараты, окрашивают по Граму. Отмечают по морфологии грамположительные палочки бактерий рода Lactobacillus, расположенные отдельно и цепочками.
Затем готовят серию 10-кратных разведений полученных накопительных культур из опытной и контрольной пробирок. Разведения делают в пробирках, содержащих по 4,5 мл жидкой селективной питательной среды, при помощи автоматического дозатора со съемными наконечниками, путем последовательного перенесения из пробирки в пробирку по 0,5 мл. Титрование по 0,5 мл производят до 10-10.
После титрования посевы инкубируют в течение 24 часов в анаэробных условиях при температуре 37°С. Результат учитывают визуально, по наличию общего помутнения среды или росту изолированных колоний. Затем из пробирок с наличием роста готовят мазки, окрашивают по Граму. Оценку количественного содержания лактобактерий определяют по максимальному разведению, в котором обнаружены типичные грамположительные палочки. Пробирки, в которых обнаружена кокковая флора или грамотрицательные палочки, не учитываются.
Конечная концентрация лактобактерий в опытной пробирке с добавлением пиобактериофага составила 109 КОЕ/мл, в контрольной - 105 КОЕ/мл.
Проводят посев 0,1 мл полученной накопительной культуры из опытной пробирки на поверхность плотной питательной среды для выделения лактобактерий «Лактобакагар» по методу Коха, рассевают его шпателем по трем чашкам Петри для получения изолированных колоний. Культивирование посевов проводят в течение 24-48 ч при 37°С в анаэростате. Получают изолированные колонии аутоштаммов Lactobacillus spp.
Получение аутоштаммов с использванием пиобактериофага позволило повысить выход биомассы лактобактерий.
Пример 2. Результаты бактериологического контроля на предлагаемой и известных средах.
Из данных таблицы 2 видно, что предлагаемая модифицированная среда для лактобактерий с добавлением пиобатериофага имеет преимущество, так как на ней подавляется рост Candida albicans и Enterococcus faecium. На известной же среде (без модификаций) энтерококки и дрожжеподобные грибы вырастают в виде гладких, круглых, белых и полупрозрачных колоний. Параллельно проводят контроль жизнеспособности бактерий путем высева на простой питательный бульон.
Способ селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp.из клинического материала
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Способ селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp.из
клинического материала
Figure 00000004
Примечание: «-» - отсутствие роста бактерий; «+» - наличие роста бактерий.

Claims (5)

  1. Способ селективного выделения аутоштаммов Lactobacillus spp. из клинического материала, включающий на первом этапе высев исследуемого клинического материала на питательную среду для лактобактерий, содержащую: протеозопептон - 10,0 г; мясной экстракт - 10,0 г; Твин-80 - 1,0 мл; аммония цитрат - 2,0 г; натрия ацетат - 5,0 г; марганца сульфат - 0,05 г, дрожжевой экстракт, глюкозу, магния сульфат и воду до 1000 мл, инкубирование посева в анаэробных условиях при 37°C в течение 24-48 ч, на втором этапе выделение чистой культуры путем пересева на плотную питательную среду для выделения и культивирования лактобактерий, рассевание на чашку Петри для получения изолированных колоний и культивирование посевов в течение 24-48 ч при 37°C в анаэробных условиях, отличающийся тем, что на первом этапе высев проводят на жидкую питательную среду, содержащую дополнительно натрия гидрофосфат и пиобактериофаг поливалентный очищенный при следующем соотношении компонентов среды, г/л:
  2. протеозопептон 10,0 мясной экстракт 10,0 дрожжевой экстракт 5,0 глюкоза 20,0 аммония цитрат 2,0 натрия ацетат 5,0 магния сульфат 0,10 марганца сульфат 0,05 натрия гидрофосфат 2,0
  3. а также, мл:
  4. Твин-80 1,0 пиобактериофаг поливалентный очищенный 100 вода дистиллированная до 1000
  5. а на втором этапе для пересева используют среду «Лактобакагар», разведенную водой дистиллированной до 1000 мл.
RU2018114180A 2018-04-17 2018-04-17 Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала RU2675315C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018114180A RU2675315C1 (ru) 2018-04-17 2018-04-17 Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018114180A RU2675315C1 (ru) 2018-04-17 2018-04-17 Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2675315C1 true RU2675315C1 (ru) 2018-12-18

Family

ID=64753238

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018114180A RU2675315C1 (ru) 2018-04-17 2018-04-17 Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2675315C1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2139070C1 (ru) * 1999-03-31 1999-10-10 Шендеров Борис Аркадьевич Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобациллы
RU2320355C1 (ru) * 2006-06-20 2008-03-27 Людмила Егоровна Черных Способ получения биомассы аутоштамма лактобактерий жидкой "лакти"
RU2580002C1 (ru) * 2015-05-19 2016-04-10 Дмитрий Евгеньевич Денисов Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобактерии

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2139070C1 (ru) * 1999-03-31 1999-10-10 Шендеров Борис Аркадьевич Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобациллы
RU2320355C1 (ru) * 2006-06-20 2008-03-27 Людмила Егоровна Черных Способ получения биомассы аутоштамма лактобактерий жидкой "лакти"
RU2580002C1 (ru) * 2015-05-19 2016-04-10 Дмитрий Евгеньевич Денисов Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобактерии

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0768375B1 (fr) Bactérie lactique
Savage Associations of indigenous microorganisms with gastrointestinal mucosal epithelia
US20220133819A1 (en) Multi-lactobacillus composition and application thereof to vaginal health of females
CN110373342B (zh) 罗伊氏乳杆菌及其用途
CN1888051B (zh) 一株植物乳杆菌及其应用
TWI627276B (zh) 新穎之卷曲乳酸桿菌（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）菌株
US8632766B2 (en) Strain composition of the Lactobacillus genus and the application of strain composition of the Lactobacillus genus
CN110577912B (zh) 一种格氏乳杆菌及其在制备发酵乳中的应用
RU2580002C1 (ru) Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобактерии
RU2460778C1 (ru) Способ получения аутопробиотика на основе enterocuccus faecium, представителя индигенной микрофлоры кишечника хозяина
CN109266576A (zh) 一种粪肠球菌及其使用方法
WO2018112740A1 (zh) 一种加氏乳杆菌及其培养方法和应用
CN107653199B (zh) 一株健康人肠道大肠杆菌及其应用
RU2675315C1 (ru) Способ селективного выделения аутоштаммов lactobacillus spp. из клинического материала
Pato et al. Bile and acid tolerance of lactic acid bacteria isolated from tempoyak and their probiotic potential.
RU2546253C2 (ru) Способ получения персонифицированного аутопробиотического продукта и способ лечения синдрома раздраженной кишки с использованием этого продукта
RU2148640C1 (ru) Штамм бактерий bifidobacterium adolescentis 2 ф1 для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих микрофлору при нарушениях микробиоценоза влагалища
CN112063566B (zh) 一株屎肠球菌及其应用
Rahman et al. Studies on yogurt production using Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus isolated from market yogurt
RU2528867C2 (ru) Способ оценки выживаемости бифидо- и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных
Raju et al. Isolation, Characterization and Sequencing of Lactobacillus from the Oral and Fecal Samples of Healthy Dogs
Dallal et al. Probiotic properties of Lactobacilli isolated from human milk and their inhibitory effect on gastrointestinal pathogenic bacteria
RU2803350C1 (ru) Штамм бактерий Bifidobacterium longum 174 для приготовления регион-специфичных пробиотических препаратов для профилактики и персонализированного лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта у жителей Карачаево-Черкесской республики и/или для обогащения традиционного кисломолочного напитка "Гыпы айран" на основе индигенных кефирных зерен
TWI788840B (zh) 嗜酸乳桿菌ｔｗ０１菌株及其益生菌組合物與用途
RU2608871C1 (ru) Штамм бактерий Lactobacillus paracasei 1, используемый для приготовления пробиотического препарата

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200418