RU2669693C1 - Способ получения комплекса биологически активных пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы - Google Patents
Способ получения комплекса биологически активных пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2669693C1 RU2669693C1 RU2017128863A RU2017128863A RU2669693C1 RU 2669693 C1 RU2669693 C1 RU 2669693C1 RU 2017128863 A RU2017128863 A RU 2017128863A RU 2017128863 A RU2017128863 A RU 2017128863A RU 2669693 C1 RU2669693 C1 RU 2669693C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptides
- extraction
- acetone
- solution
- biologically active
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 12
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 244000309464 bull Species 0.000 claims abstract description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000190687 Gobius Species 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 6
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 6
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 101000741065 Bos taurus Beta-casein Proteins 0.000 description 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 description 1
- UEJYSALTSUZXFV-SRVKXCTJSA-N Rigin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O UEJYSALTSUZXFV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000013507 chronic prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- OFSHRWCWYJBWJP-CMAHKSKVSA-N neocasomorphin Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)N=C(O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](CCC(O)=O)N=C(O)[C@H](C(C)C)N=C(O)[C@@H]1N(C(=O)[C@H](N)CC=2C=CC(O)=CC=2)CCC1 OFSHRWCWYJBWJP-CMAHKSKVSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003372 organotropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 108010091078 rigin Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/52—Sperm; Prostate; Seminal fluid; Leydig cells of testes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения комплекса биологически активных пептидов из предстательной железы убойных животных, бычков или быков, включающий операции измельчения и гомогенизации замороженной ткани, экстракции гомогената раствором кислоты уксусной, обработки надосадочной жидкости ацетоном, промывки образовавшегося осадка ацетоном, высушивания осадка, экстракции пептидов из высушенного порошка водой для инъекций, отличающийся тем, что экстракцию гомогената проводят раствором 3% кислоты уксусной, содержащим хлористый цинк в концентрации 1,2 г/л, на стадии экстракции пептидов, из высушенного порошка, добавляют фермент - сериновую эндопротеазу до концентрации 0,3%, выдерживают при температуре 65°C при постоянном перемешивании в течение 3 часов, инактивируют фермент при температуре 90°C в течение 30 минут, охлаждают до комнатной температуры, сепарируют или фильтруют и лиофилизируют. Изобретение позволяет увеличить выход и качество целевого продукта. 3 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к технологии получения биологически активных средств животного происхождения из предстательной железы забойных половозрелых быков и/или бычков и последующего использования при изготовлении лекарственных препаратов для лечения больных с нарушенной функцией предстательной железы. Выделенный целевой продукт представляет комплекс биологически активных пептидов обладающий органотропным действием на предстательную железу.
Биологически активные пептиды полученные из предстательной железы животных широко и успешно используется в медицине в качестве лекарственных препаратов для профилактики и лечения хронического простатита и осложнений после операций на предстательной железе. Способствуют уменьшению отека, лейкоцитарной инфильтрации и тромбоза венул предстательной железы, нормализует секреторную функцию эпителиальных клеток, увеличивают количество лецитиновых зерен в секрете ацинусов, стимулирует мышечный тонус мочевого пузыря. Уменьшают тромбообразование, обладают антиагрегантной активностью.
Изобретение может использоваться при получении пептидных препаратов из ткани предстательной железы животных в промышленных масштабах.
Известно несколько способов получения биологически активного пептидов из предстательной железы. Все они предусматривают операции гомогенизации ткани, кислотную экстракцию, отделение осадка и выделение из него целевого продукта (cм. RU №64985, опубл. 2004.03.15, RU №2413525 С2, опубл 2011.03.10). Способы различаются условиями проведения технологических операций и веществами применяемые на данных стадиях. Известные способы не позволяют получать биологически активные пептиды из предстательной в достаточном количестве и высокого качества, а так же являются слишком сложными и длительными.
Наиболее близким решением к предлагаемому изобретению являются способ получения комплекса пептидов из предстательной железы по патенту Российской Федерации №1417244. В соответствии с патентом исходное количество замороженной представленной железы убойных животных, измельчают на волчке и помещают в реактор с охлаждением и мешалкой. Сырье заливают раствором 5%-ной уксусной кислоты до pН 4,0, добавляют 1 г на 1 л хлористого цинка и включают реактор. Экстракцию проводят при 18оС в течение 48 ч при постоянном перемешивании. По окончании экстракции сырье сливают и центрифугируют 15 мин со скоростью 3000 об/мин. Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют 5 частей ацетона на 1 часть экстракта при -5°С, перемешивают и формируют осадок 20 ч, после чего перемешивают и фильтруют. Полученный на фильтре осадок обрабатывают ацетоном (10 объемов). Осадок в количестве 30 г высушивают, измельчают и растворяют в дистиллированной воде из расчета 0,2 кг осадка на 10 кг воды. В течение 2 ч при 18°С перемешивают и удаляют балластные белки фильтрованием. В отфильтрованном растворе устанавливают pН 4,5, стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают в флаконы, лиофилизируют, получают в каждом флаконе по 10 мг порошка. Выход активного вещества составляет 12 г из 1 кг сырья. Целевой продукт представляет собой лиофилизированный порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета, содержит комплекс биологически активных пептидов.
В результате многочисленных экспериментов были выявлены недостатки данного способа, устранение которых позволило повысить процент выхода биологически активной субстанции и повысить ее качество.
Задача настоящего изобретения состоит в разработке способа получения биологически активного целевого продукта, обеспечивающий высокий процент выхода и качества, что делает его наиболее предпочтительными при использовании в промышленных масштабах.
Техническим результатом настоящего изобретения является: увеличение выхода и качества целевого продукта.
Для достижения указанного технического результата предложен способ, который включает в себя следующие стадии:
Предстательную железу животных замораживают, замороженную ткань измельчают, гомогенизируют и проводят экстракцию 3% раствором уксусной кислоты, содержащей хлористый цинк в концентрации 1,2 г/л при массовом соотношении гомогената и раствора уксусной кислоты 1:5. Значение рН раствора должно быть pН 3,5. Для экстракции гомогенат выдерживают при температуре не выше +20°С при постоянном перемешивании в течение 48 часов. По окончании экстракции гомогенат сепарируют, отделяют твердую и жидкую фазы. К надосадочной жидкости добавляют охлажденный ацетона (температура не выше +5°С) в соотношении 1:5. Смесь перемешивают в течение 4 часов при температуре +5°С. Образовавшийся осадок отделяют на центрифуге и несколько раз промывают охлажденным ацетоном. Полученный влажный осадок сушат в вакуум-сушильном шкафу. Получают ацетоновый порошок. Ацетоновый порошок растворяют в воде для инъекций и устанавливают рН 7,0. Добавляют фермент - сериновую эндопротеазу, до конечной концентрации 0,3%, выдерживают при постоянном перемешивании при температуре +65°С в течении 3 часов. Для инактивации фермента температуру реакционной массы увеличивают до +90°С и выдерживают в течение 30 минут. Затем охлаждают до комнатной температуры, сепарируют или фильтруют. Далее проводят стерилизующую фильтрацию путем пропускания раствора через мембрану с диаметром пор 0,22 мм. Раствор разливают в емкости, замораживают и лиофилизируют. Целевой продукт представляет лиофилизированный порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета и содержит комплекс биологически активных пептидов.
Применение протеолитического фермента сериновой эндопротеазы, обладающей широкой субстрат - специфичностью, при высокой ионной силе, способствует более полному высвобождению и накоплению биологически активных пептидов из ацетонового порошка. Оптимальная конечная концентрация фермента при ферментативном гидролизе составляет 0,3%. Проведенными нами исследованиями, по кинетике высвобождения пептидов из ацетонового порошка при ферментативном гидролизе, установлено, что максимальное количество пептидов накапливается в гидролизате в течение 3 часов. В течении данного времени интенсивно протекает протеолиз и происходит максимальное накопление продуктов промежуточного гидролиза белково-пептидных субстратов. Применение ограниченного ферментативного гидролиза способствует полному удалению высокомолекулярных белковых примесей из целевого продукта, которые могут вызывать негативные последствия, такие как аллергические реакции и прионные заболевания. В данном случае ферментативный гидролиз можно рассматривать, как альтернативный вариант методу ультрафильтрации с целью удаления белковых веществ проявляющих побочные свойства. Отсутствие белковых примесей в целевом продукте подтверждено методами ВЭЖХ и электрофореза по Леммли (Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. - М.: Наука, 1985. 536 с., Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот, Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие). - М.: Наука, 1981. 288 с.).
Согласно литературным данным при ограниченном протеолизе белков происходит высвобождение низкомолекулярных пептидов, которые обладают выраженными биологически активными свойствами. Например, при протеолизе казеина (белок содержащийся в молоке) высвобождаются пептиды, которые обладают анальгетическими свойствами - казоморфины, при протеолизе иммуноглобулинов, в частности иммуноглобулинов G, образуются иммуномодулируюшие пептиды - тафцин, ригин, пептиды коллагена и фибронектина участвующие в тканевом и клеточном гомеостазе (Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов. под ред. Чипенса Г.И. Рига: Зинатне, 1990. 324 с., Jinsmaa Y, Yoshikawa М, 1999; «Enzymatic release of neocasomorphin and beta-casomorphinfrom bovine beta-casein»; Peptides 20:957-962). Использование ацетона на одной из стадий технологического процесса позволяет не только удалить липиды пигменты и полисахариды, но и значительно сократить содержание уксусной кислоты и цинка хлористого в готовом продукте. Необходимо подчеркнуть, что из ацетонового порошка в основном извлекаются водорастворимые полипептиды и белки, что особенно важно при учете их фармакокинетики и биодоступности.
Сопоставимый анализ предлагаемого способа показал, что определяющим отличием заявляемого технического решения от прототипа является то, что биологически активные водорастворимые пептиды выделяют на стадии экстракции из ацетонового порошка при ферментативном гидролизе, при этом значительно повышается выход и качество целевого продукта (таблица 1). Выход биологически активного целевого продукта увеличивается более чем в два раза.
Изобретение иллюстрируется примером конкретного выполнения способа: Замороженное сырье, предстательная железа бычков или быков, в количестве 21 кг подвергают измельчению и гомогенизации до получения гомогенной массы с помощью измельчителя. Далее проводят экстракцию 3% раствором кислоты уксусной при pН 3,5, содержащим цинк хлористый в концентрации 1,2 г/л при массовом соотношении измельченной массы и экстракционного раствора 1:5. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании в течение 48 часов при температуре не более +20°С. По окончании процесса экстракции проводят отделение жидкой и твердой части экстракционной смеси при помощи сепаратора. Режим сепарации 2000-3000 об/мин.
Отфильтрованный раствор экстракта охлаждается при перемешивании в течение 24 часов, после чего начинается процесс осаждения. К охлажденному экстракту добавляют в соотношении 1:5 охлажденного ацетона при температуре не выше +5°С. Далее смесь перемешивают и выдерживают в течение 4 часов для формирования осадка. Осадок отделяется от жидкой фазы при помощи центрифуги. Твердая фаза несколько раз (2-3 раза) промывается охлажденным ацетоном до тех пор, пока осадок не приобретет светло-серый или белый цвет. Полученный влажный осадок ацетонового порошка направляют в вакуумно-сушильный шкаф для сушки при температуре не выше +20°С. Время высушивания составляет 2,5-3,0 часа. Получают ацетоновый порошок в количестве 1,0 кг. Водно-ацетоновая смесь направляют на регенерацию ацетона.
К ацетоновому порошку добавляют воды для инъекций при pН 7,0. Затем вносят сериновую эндопротеазу, до конечной концентрации 0,3%. После внесения фермента раствор нагревают при постоянном перемешивании до +65°С в течение 3 часов. Затем температуру реакционной массы увеличивают до +90°С и выдерживают в течение 30 минут для инактивации фермента.
После окончания ферментативного гидролиза реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и подают на сепаратор для удаления твердой фазы. Режим сепарирования при 2000-3000 об/мин. Полученный фильтрат собирают и передают на стадию стерилизующей фильтрации.
Процессы стадии стерилизующей фильтрации осуществляют в помещении класса чистоты В. Санитарный статус фильтра для стерилизующей фильтрации предел отсечения 0,2 мкм. Фильтродержатель вместе с фильтром подвергают стерилизации на стерилизаторе температура стерилизации +134°С. Стерильный раствор разливают в предварительно подготовленные стерильные поддоны и передают на стадию лиофильной сушки. Процессы стадии осуществляются в помещении класса чистоты В с локальной зоной А в зоне загрузки/выгрузки сушки. Процесс производства осуществляют на лиофильной сушке в автоматическом режиме.
Высушенный готовый продукт представляет собой хорошо сформированный порошок белого или желтовато-белого цвета, потери в массе при высушивании не должны превышать 10%. Выход готового продукта составляет 0,587 кг сухого лиофилизированного порошка.
Высушенный готовый продукт упаковывается в первичную упаковку и передается в помещение для хранения, где маркируется и временно хранится в холодильнике.
Далее проводят контроль параметров полученного продукта:
Полученный заявляемым способом целевой продукт был проверен на специфическую активность. Специфическую активность продукта оценивают по влиянию на процесс восстановление активности щелочной фосфатазы ингибированной цистеином. Повышение активности щелочной фосфатазы при различных заболеваниях и патологических процессах следует рассматривать как проявление защитно-приспособительных процессов, которые имеют исключительно важное значение в развитии, течении и исходе болезни Шубин М.Г., Нагоев Б.С. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии. - М.: Медицина, 1980., 223 с.)
В пробирки при температуре (20±1)°С разливают компоненты реакционной смеси (общий объем 3 мл) в последовательности и объемах, описанных в таблице. На определение берут 0,3 мл испытуемого раствора, прибавляют раствор щелочной фосфатазы и через 5 мин останавливают реакцию 1 мл 2 М раствором гидроксида натрия, содержащего этилендиаминтетраацетат. Измеряют оптическую плотность растворов на спектрофотометре при длине волны 405 нм против соответствующего контроля (без щелочной фосфатазы) в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Влияние препарата на восстановление активности щелочной фосфатазы выражают в процентах.
Выявлено, что продукт, полученный заявленным способом, обладает выраженной специфической активностью - процент восстановления активности щелочной фосфатазы достоверно превышали 13%.
Представленные в таблице 3 данные демонстрируют, что полученный заявленным способом целевой продукт имеет аналогичные качественные и количественные характеристики, а по некоторым параметрам заявленный продукт превосходит известный.
Таким образом, целевой продукт, полученный предлагаемым способом, соответствует всем параметрам фармацевтического продукта - субстанции.
Сравнение показателей качества продуктов, полученных известным и заявленным способами
Claims (1)
- Способ получения комплекса биологически активных пептидов из предстательной железы убойных животных, бычков или быков, включающий операции измельчения и гомогенизации замороженной ткани, экстракции гомогената раствором кислоты уксусной, обработки надосадочной жидкости ацетоном, промывки образовавшегося осадка ацетоном, высушивания осадка, экстракции пептидов из высушенного порошка водой для инъекций, отличающийся тем, что экстракцию гомогената проводят раствором 3% кислоты уксусной, содержащим хлористый цинк в концентрации 1,2 г/л, на стадии экстракции пептидов, из высушенного порошка, добавляют фермент - сериновую эндопротеазу до концентрации 0,3%, выдерживают при температуре 65°C при постоянном перемешивании в течение 3 часов, инактивируют фермент при температуре 90°C в течение 30 минут, охлаждают до комнатной температуры, сепарируют или фильтруют и лиофилизируют.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017128863A RU2669693C1 (ru) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Способ получения комплекса биологически активных пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017128863A RU2669693C1 (ru) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Способ получения комплекса биологически активных пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2669693C1 true RU2669693C1 (ru) | 2018-10-15 |
Family
ID=63862367
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017128863A RU2669693C1 (ru) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Способ получения комплекса биологически активных пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2669693C1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU622468A1 (ru) * | 1976-07-21 | 1978-09-05 | Московский технологический институт мясной и молочной промышленности | Способ выделени биологически активной фракции из семенной жидкости животных |
WO1990004404A1 (en) * | 1988-10-25 | 1990-05-03 | The Victoria University Of Manchester | Gynaecological procedure |
RU1417244C (ru) * | 1986-02-03 | 1994-06-30 | Хавинсон Владимир Хацкелевич | Способ получения вещества, восстанавливающего функцию предстательной железы |
-
2017
- 2017-08-14 RU RU2017128863A patent/RU2669693C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU622468A1 (ru) * | 1976-07-21 | 1978-09-05 | Московский технологический институт мясной и молочной промышленности | Способ выделени биологически активной фракции из семенной жидкости животных |
RU1417244C (ru) * | 1986-02-03 | 1994-06-30 | Хавинсон Владимир Хацкелевич | Способ получения вещества, восстанавливающего функцию предстательной железы |
WO1990004404A1 (en) * | 1988-10-25 | 1990-05-03 | The Victoria University Of Manchester | Gynaecological procedure |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Якубке Х.Д., Ешкайт Х. Аминокислоты. Пептиды. Белки. - М. "Мир", 1985, стр. 166-169. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2017209066C1 (en) | Walnut oligopeptide powder, preparation method and application thereof | |
KR910009342B1 (ko) | 생물학적 활성 추출물의 제조방법 | |
US8759497B2 (en) | Method for producing protein hydrolysates | |
US20070017447A1 (en) | Avian eggshell membrane polypeptide extraction via fermentation process | |
JP2008228727A (ja) | ローヤルゼリー分解酵素含有物 | |
RU2428196C1 (ru) | Способ получения биологически активного комплекса и биологически активный белково-полипептидный комплекс | |
RU2386444C1 (ru) | Способ получения биологически активного продукта из сырых пантов | |
RU2409291C1 (ru) | Способ получения водорастворимого полипептидного комплекса из печени рыб лососевых пород | |
RU2669693C1 (ru) | Способ получения комплекса биологически активных пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы | |
EP2730586B1 (en) | Protein-polypeptide complex obtained from tissues of hoofed livestock embryos, process for preparing same and pharmaceutical composition | |
RU2669692C1 (ru) | Способ получения комплекса биологически активных пептидов обладающих нейротропной активностью | |
RU2669691C1 (ru) | Способ получения комплекса биологически активных пептидов, обладающих иммуностимулирующей активностью | |
KR20020074746A (ko) | 누에고치 단백질로부터 제조된 항유전독성 및 면역활성증강 효과를 갖는 항암제 | |
RU2509775C1 (ru) | Средство, обладающее противоопухолевой, антикоагулянтной, ранозаживляющей, противовоспалительной, антиоксидантной активностью, способностью ингибировать коллагеназу и ангиотензинпревращающий фермент (апф), и способ его получения | |
RU2562581C1 (ru) | Способ получения биологически активного средства из голотурий, обладающего общеукрепляющими и иммуномодулирующими свойствами | |
EP2730584A1 (en) | Protein-polypeptide complex with a specific activity on the nervous system, process for preparing same and pharmaceutical composition on the basis thereof | |
RU2488634C1 (ru) | Способ получения днк из молок лососевых рыб | |
RU2132688C1 (ru) | Способ изготовления биологически активных препаратов из эмбриональных тканей | |
RU2563816C1 (ru) | Способ получения иммуностимулятора | |
RU2128511C1 (ru) | Способ получения лечебного средства при заболеваниях, сопровождающихся нарушением функций центральной нервной системы | |
RU2663132C1 (ru) | Способ получения низкомолекулярной днк высокой степени чистоты | |
RU2226841C1 (ru) | Способ получения белковой пищевой добавки | |
Pa’ee et al. | Microalgae protein derived from Chlorella vulgaris using subcritical water treatment | |
RO133817A0 (ro) | Procedeu de obţinere a unor peptide colagenice antioxidante din piele de peşte de apă dulce | |
RU2370093C1 (ru) | Способ получения модифицированного белково-алейронового продукта |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200815 |