RU2669403C1 - Способ определения белковых фракций сыворотки крови - Google Patents
Способ определения белковых фракций сыворотки крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2669403C1 RU2669403C1 RU2017134218A RU2017134218A RU2669403C1 RU 2669403 C1 RU2669403 C1 RU 2669403C1 RU 2017134218 A RU2017134218 A RU 2017134218A RU 2017134218 A RU2017134218 A RU 2017134218A RU 2669403 C1 RU2669403 C1 RU 2669403C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood serum
- protein fractions
- distilled water
- solutions
- optical density
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения белковых фракций сыворотки крови. Способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами в 6-ти пробирках, определение оптической плотности по степени мутности растворов и вычисление содержания белковых фракций сыворотки крови, отличается тем, что в пробирку №0 вносят 1,0 мл дистиллированной воды, по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки №№1, 2, 3, 4 и 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку №5 с последующим перемешиванием путем перевертывания пробирки №5 и перенесением смеси по 0,1 мл в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4, при этом измерение оптической плотности проводят на биохимическом анализаторе. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.
Description
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для определения белковых фракций сыворотки крови.
Известен способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови. Сущность способа состоит в следующем: из сыворотки крови пациента получают два контрольных образца №1 и №2, затем в акустические ячейки двух аналогичных подключенных к компьютеру устройств для контроля биологических жидкостей с постоянно поддерживаемой в них температурой от 15 до 40°С, которая в первом устройстве ниже, чем во втором, последовательно помещают дистиллированную воду, сыворотку крови и контрольные образцы №1 и №2, пропускают через них ультразвук с частотой, изменяющейся в диапазоне от 2 до 40 МГц, и определяют скорость его прохождения в каждой из сред, относительные изменения скоростей ультразвука в сыворотке крови в первом и втором устройствах при соответствующих температурах и в контрольных образцах №1 и №2 относительно дистиллированной воды, а также частотный коэффициент скорости ультразвука и частотный коэффициент поглощения ультразвука в сыворотке крови. На основании полученных данных определяют концентрацию общего белка, белковых фракций и липидных компонентов в сыворотке крови.
(Пат. 2253115 Российская Федерация, МПК G01N 33/49, N 29/18. Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови / Клемин В.А., Долгов В.В., Клемина А.В.;
патентообладатель Клемин В.А., Долгов В.В., Клемина А.В. - №2003115002/15; заявл. 22.05.2003; опубл. 27.05.2005, Бюл. №15. - 17 с.)
Однако данный способ определения компонентов сыворотки крови обладает недостаточной точностью и длительным временем проведения анализа.
Известен турбодиметрический (нефелометрический) способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами определенной концентрации в 6-ти пробирках, определение оптической плотности и вычисление содержания каждой фракции сыворотки крови в относительных процентах, отличающийся тем, что концентрацию белков в исследуемой пробе определяют по степени мутности растворов, устанавливаемой с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК), при этом измерение оптической плотности проводят в обратной последовательности.
(Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / под ред. И.И. Кондрахина. - М.: КолосС, 2004. - С. 97-98).
Однако этот способ достаточно трудозатратен, занимает много времени, лабораторной посуды. Способ не адаптирован к современным биохимическим анализаторам.
Техническая задача, решаемая предполагаемым изобретением, заключается в расширении номенклатуры способов определения белковых фракций сыворотки крови, снижении трудозатрат, уменьшении трудоемкости, сокращении времени анализа, уменьшении расхода рабочих растворов, сыворотки и реагентов.
Технический результат заключается в расширении номенклатуры способов определения белковых фракций сыворотки крови, снижении трудозатрат, уменьшении трудоемкости подготовки проб, сокращении времени анализа, уменьшении в 5 раз количества рабочих растворов, сыворотки и реагентов, удешевлении способа.
Указанный результат достигается тем, что для определения белковых фракций сыворотки крови готовят 6 пробирок, при этом вносят 1 мл дистиллированной воды в пробирку №0, по 1 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки №№1, 2, 3, 4 и дополнительно 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку №5 с последующим перемешиванием путем перевертывания смеси в пробирке №5 и перенесением этой смеси по 0,1 мл в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4. Содержимое пробирок №№0, 1, 2, 3, 4 тщательно перемешивают. Через 15 минут проводят измерение оптической плотности по степени мутности растворов на биохимическом анализаторе «Stat fax 1904+» в каждой пробирке, в прямой последовательности, начиная с пробирки №1, затем в пробирках №2, 3, 4 против контроля (пробирка №0) или в обратной последовательности, начиная с пробирки №4.
На основании полученных данных вычисляют содержание каждой белковой фракции сыворотки крови в относительных процентах.
Способ осуществляется следующим образом.
Пример 1.
Для анализа использовали биохимический анализатор «Stat Fax 1904+» - компактный, управляемый микропроцессором, фотометр общего назначения с возможностью двух-волнового измерения, с шестью фильтрами и температурой инкубации 37°С.
(«Stat fax 1904+». Биохимический анализатор. Руководство пользователя. - Режим доступа: http://doc.westmedica.com/54RU/инструкции_пользователя/sf1904+_ru.pdf).
Провели анализ крови коровы с клиническими признаками жировой дистрофии печени.
Для проведения анализа подготовили основной фосфатный раствор, для этого взяли 33,5 г натрия гидроксида, растворили в 400 мл дистиллированной воды, добавили 226,8 г калия фосфата однозамещенного. После растворения раствор охладили до комнатной температуры и добавили дистиллированную воду до объема 500 мл.
В мерные колбы на 100 мл взяли 92,4 мл (№1), 74,9 мл (№2), 58,8 мл (№3), 48,7 мл (№4) основного фосфатного раствора и довели объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешали путем встряхивания.
Приготовили 6 боросиликатных пробирок с расстоянием между рабочими гранями 10 мм, обозначив их №№0, 1, 2, 3, 4, 5.
В пробирку №0 внесли 1,0 мл дистиллированной воды. В пробирки №№1, 2, 3, 4 внесли по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№1-4). В пробирку №5 внесли 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды и 0,75 мл основного фосфатного раствора. Закрыли пробкой и перемешали путем перевертывания. После этого перенесли по 0,1 мл смеси в пробирки №№0, 1, 2, 3, 4. Содержимое пробирок осторожно и тщательно перемешали.
Через 15 минут провели измерение оптической плотности по степени мутности растворов на биохимическом анализаторе «Stat fax 1904+» в каждой пробирке-кювете из боросиликатного стекла, начиная с пробирки №1, затем в пробирках №2, 3, 4 против контроля (пробирка №0) в режиме абсорбции при длине волны (фильтре) 600 нм.
Установленные оптические плотности растворов записали и произвели расчет.
Пример расчета:
Оптическая плотность пробирки №1 составила 0,675
Оптическая плотность пробирки №2 составила 0,554
Оптическая плотность пробирки №3 составила 0,519
Оптическая плотность пробирки №4 составила 0,398
Расчет оптической плотности белковых фракций провели по схеме:
- оптическая плотность пробирки №1 равна сумме всех фракций белка;
- оптическая плотность альбуминов равна оптическая плотность пробирки №1 минус оптическая плотность пробирки №2;
- оптическая плотность альфа-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №2 минус оптическая плотность пробирки №3;
- оптическая плотность бета-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №3 минус оптическая плотность пробирки №4;
- оптическая плотность гамма-глобулинов равна оптическая плотность пробирки №4.
Результаты расчета оптической плотности
альбуминов 0,675-0,554=0,121;
альфа-глобулинов 0,554-0,519=0,350;
бета-глобулинов 0,519-0,398=0,121;
гамма-глобулинов 0,398.
Принимая сумму оптической плотности всех фракций белка (0,675) за 100%, вычислили содержание каждой фракции в относительных процентах.
Относительный процент альбуминов 
Относительный процент альфа-глобулинов 
Относительный процент бета-глобулинов 
Относительный процент гамма-глобулинов 
Таким образом, предлагаемый способ расширяет номенклатуру способов определения белковых фракций сыворотки крови, позволяет в короткие сроки провести анализ и определить содержание белковых фракций, снизить трудозатраты, уменьшить трудоемкость подготовки проб, экономить количество рабочих растворов, сыворотки и реагентов, тем самым удешевить анализ.
Claims (2)
1. Способ определения белковых фракций сыворотки крови, включающий осаждение белковых фракций сыворотки крови фосфатными растворами в 6-ти пробирках, определение оптической плотности по степени мутности растворов и вычисление содержания белковых фракций сыворотки крови, отличающийся тем, что в пробирку N 0 вносят 1,0 мл дистиллированной воды, по 1,0 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов в пробирки NN 1, 2, 3, 4 и 0,1 мл сыворотки крови, 0,15 мл дистиллированной воды, 0,75 мл основного фосфатного раствора в пробирку N 5 с последующим перемешиванием путем перевертывания пробирки N 5 и перенесением смеси по 0,1 мл в пробирки NN 0, 1, 2, 3, 4, при этом основной фосфатный раствор готовят путем растворения 33,5 г натрия гидроксида в 400 мл дистиллированной воды, затем добавляют 226,8 г калия фосфата однозамещенного, охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл, рабочие фосфатные растворы готовят путем добавления в колбы на 100 мл 92,4 мл (N 1), 74,9 мл (N 2), 58,8 мл (N 3), 48,7 мл (N 4) основного фосфатного раствора и доведением объема дистиллированной водой до метки, при этом измерение оптической плотности проводят на биохимическом анализаторе.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения оптической плотности растворов используют биохимический анализатор «Stat fax 1904 +» в режиме абсорбции при длине волны 600 нм
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017134218A RU2669403C1 (ru) | 2017-10-02 | 2017-10-02 | Способ определения белковых фракций сыворотки крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017134218A RU2669403C1 (ru) | 2017-10-02 | 2017-10-02 | Способ определения белковых фракций сыворотки крови |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2669403C1 true RU2669403C1 (ru) | 2018-10-11 |
Family
ID=63862259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017134218A RU2669403C1 (ru) | 2017-10-02 | 2017-10-02 | Способ определения белковых фракций сыворотки крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2669403C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU199624U1 (ru) * | 2020-03-20 | 2020-09-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Электрофоретический чип для определения белковых фракций крови |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2253115C2 (ru) * | 2003-05-22 | 2005-05-27 | Клемин Виктор Александрович | Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови |
-
2017
- 2017-10-02 RU RU2017134218A patent/RU2669403C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2253115C2 (ru) * | 2003-05-22 | 2005-05-27 | Клемин Виктор Александрович | Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| И.П.Кондрахин и др. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник / Москва "КолосС", 2004, стр. 97-98. И.В.Семак и др. Биохимия белков / Минск, 2007. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU199624U1 (ru) * | 2020-03-20 | 2020-09-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Электрофоретический чип для определения белковых фракций крови |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| George | The usefulness and limitations of hand‐held refractometers in veterinary laboratory medicine: an historical and technical review | |
| Walters et al. | An ultramicromethod for the determination of conjugated and total bilirubin in serum or plasma | |
| Cerón | Acute phase proteins, saliva and education in laboratory science: An update and some reflections | |
| Ulleberg et al. | Plasma creatinine in dogs: intra-and inter-laboratory variation in 10 European veterinary laboratories | |
| CN112485438B (zh) | 一种特定蛋白反应检测方法和装置 | |
| CN109239065A (zh) | 一种稳定的尿总蛋白质控品及其制备方法和应用 | |
| Thrall et al. | Veterinary hematology, clinical chemistry, and cytology | |
| JP2016529971A (ja) | ヒトまたは動物の信頼できる、規格化されかつ完全なスコアを算出するための非侵襲的システム | |
| RU2669403C1 (ru) | Способ определения белковых фракций сыворотки крови | |
| Abuelo et al. | Point‐of‐care testing in cattle practice: reliability of cow‐side diagnostic tests | |
| Kim et al. | Prevalence and associations for abnormal bleeding times in patients with renal insufficiency | |
| US6146901A (en) | Composition for manipulating optical and electrical properties of particles to achieve target values for such properties and methods for using the composition | |
| Gupta et al. | Refractometric total protein concentrations in icteric serum from dogs | |
| Karabayevich | PROCESS OF DEHYDRATION OF LIQUIDS WITH DIFFERENT COMPONENTS | |
| Oliviero et al. | Synovial fluid analysis to identify osteoarthritis | |
| Kurup et al. | Comparison of urine analysis using manual and sedimentation methods. | |
| Athanasiou et al. | Potential acute renal injury in sheep with bluetongue serotype 4 | |
| Badea et al. | The role of interleukin-6 as an early predictor of sepsis in a murine sepsis model | |
| Metcalf et al. | A simple, accurate, and rapid method for the quantitative determination of dextran in blood and urine | |
| Bradea et al. | Hematologic aspects in chronic kidney disease (CDK) in dogs. | |
| JP2002236127A (ja) | 銀染色による高感度微量蛋白定量法 | |
| Bau-Gaudreault et al. | relevant clinical pathology resources: Emphasis on mice, rats, rabbits, dogs, Minipigs, and non-human primates | |
| CN112485439B (zh) | 特定蛋白质反应检测方法、蛋白质检测装置和定标方法 | |
| RU2279681C2 (ru) | Способ экспресс-определения содержания кальция в моче | |
| RU2253115C2 (ru) | Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191003 |