RU2653191C1 - Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии - Google Patents
Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2653191C1 RU2653191C1 RU2017105002A RU2017105002A RU2653191C1 RU 2653191 C1 RU2653191 C1 RU 2653191C1 RU 2017105002 A RU2017105002 A RU 2017105002A RU 2017105002 A RU2017105002 A RU 2017105002A RU 2653191 C1 RU2653191 C1 RU 2653191C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- solvent
- acetate
- hydrocortisone acetate
- prepare
- Prior art date
Links
- ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N Cortisone acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 title claims abstract description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 title 1
- 229960001067 hydrocortisone acetate Drugs 0.000 claims abstract description 66
- ALEXXDVDDISNDU-JZYPGELDSA-N cortisol 21-acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O ALEXXDVDDISNDU-JZYPGELDSA-N 0.000 claims abstract description 65
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 57
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 34
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims abstract description 27
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 229960003290 cortisone acetate Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000902 placebo Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- -1 octadecylsilyl silica gel Chemical compound 0.000 claims abstract description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 abstract 6
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 abstract 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract 1
- 239000012489 system suitability test solution Substances 0.000 abstract 1
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 3
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000006877 Insect Bites and Stings Diseases 0.000 description 1
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000011486 lichen planus Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 208000017983 photosensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/10—Preparation using a splitter
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области хроматографии и может быть использовано в фармацевтической промышленности для контроля качества лекарственных препаратов (мазь, крем). В заявленном способе хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии готовят подвижную фазу, в которую дополнительно вводят второй органический модификатор метанол для жидкостной хроматографии в количестве, сопоставимом с количеством ацетонитрила для хроматографии в соотношениях соответственно метанол для жидкостной хроматографии, ацетонитрил для хроматографии, вода - 200:240:560 об/об/об. Готовят растворитель, состоящий из ацетонитрила для хроматографии, тетрагидрофурана и воды в объемном соотношении 20:20:60, а также готовят испытуемый раствор, включающий около 500 мг мази или крема и 10,0 мл растворителя. Готовят раствор «плацебо», включающий 495 мг смеси вспомогательных веществ, входящих в состав мази или крема в соответствующих пропорциях и 10,0 мл растворителя, и готовят раствор сравнения гидрокортизона ацетата, включающий около 10,0 мг стандартного образца гидрокортизона ацетата и 100 мл растворителя. Затем разводят растворителем 1,0 мл в колбу на 10 мл и готовят раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. Готовят исходный раствор кортизона ацетата, включающий 10,0 мг стандартного образца кортизона ацетата и 100 мл растворителя. Готовят исходный раствор метилпарагидроксибензоата, включающий 8,0 мг стандартного образца метилпарагидроксибензоата или стандартного образца метилпарабена и 20 мл растворителя, готовят исходный раствор пропилпарагидроксибензоата, включающий 10,0 мг стандартного образца пропилпарагидроксибензоата или стандартного образца пропилпарабена и 100 мл растворителя. После этого готовят раствор для проверки пригодности хроматографической системы, включающий 5,0 мг стандартного образца гидрокортизона ацетата, 1,0 мл исходного раствора кортизона ацетата, 1,0 мл исходного раствора метилпарагидроксибензоатата и 1,0 мл исходного раствора пропилпарагидроксибензоатата. Затем, по 10 мкл раствора для проверки чувствительности хроматографической системы, раствора для проверки пригодности хроматографической системы, раствора сравнения гидрокортизона ацетата, получая не менее трех хроматограмм, растворителя, раствора «плацебо» и испытуемого раствора хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-спектрофотометрическим детектором, применяют хроматографические условия, при которых колонка 250×4,6 мм, размер частиц 5 мкм, заполненная сорбентом силикагель октадецилсилильный, например Zorbax Eclipse XDB С18, скорость потока 1,2 мл/мин, температура колонки 30°C, детектор УФ, 254 нм, после чего вычисляют содержание любой единичной примеси в препарате и сумму примесей. Технический результат - разработка хроматографического способа разделения четырех составляющих: гидрокортизон ацетат, кортизон ацетат, метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.
Description
Изобретение относится к области хроматографии и может быть использовано в фармацевтической промышленности для контроля качества лекарственных препаратов (мазь, крем), содержащих в качестве активного вещества гидрокортизона ацетат, а в качестве консервантов метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат, по показателям нормативной документации: «Родственные соединения» или «Посторонние примеси». Данный способ позволяет определять родственные соединения или посторонние примеси гидрокортизона ацетата (кортизон ацетат, единичные неидентифицированные примеси), которые могут в процессе хранения или исследования стабильности образовываться в мазях и кремах, содержащих гидрокортизон ацетат и консерванты. Хроматографическое разделение осуществляется методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ) на колонках, заполненных октадецисилилсиликагелем, например Zorbax Eclipse XDB С18, а в качестве подвижной фазы используется смесь метанол для жидкостной хроматографии - ацетонитрил для хроматографии - вода (200:240:560 об/об/об). Способ позволяет обеспечить высокую степень разделения заявленных веществ.
Гидрокортизон в мягкой лекарственной форме давно известен и применяется в медицинской практике более 20 лет. Активным действующим веществом мази является полусинтетический глюкокортикостероид гидрокортизон ацетат. При нанесении мази на кожу гидрокортизон угнетает высвобождение биологически активных веществ, ответственных за развитие воспалительных и аллергических процессов (простагландинов и цитокинов) из клеток крови. Под действием гидрокортизона уменьшаются воспалительные клеточные инфильтраты, тормозится миграция лейкоцитов и лимфоцитов в область воспаления. При применении в виде коротких курсов лечения на ограниченных участках кожи не вызывает подавления гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы. Применяется мазь гидрокортизон в составе комплексного лечения воспалительных и аллергических заболеваний кожи - атопического дерматита (в том числе нейродермита), экземы, простого и аллергического дерматита, псориаза, фотодерматозов, зуда различного происхождения, укусов насекомых, красного плоского лишая. Для детей мазь применяется с осторожностью.
В настоящее время в Российской Федерации перед лабораториями, занимающимися контролем качества лекарственных средств, стоит задача обязательного контроля родственных соединений или посторонних примесей в препаратах, и гидрокортизон не является исключением.
Из уровня техники известно о существовании фармакопейных монографий на гидрокортизона ацетат мазь и крем. Данные препараты описаны в ведущих фармакопеях мира Британской и Американской, но, к сожалению, разделы «Родственные соединения» или «Посторонние примеси» в них отсутствуют, что не дает возможности производителям контролировать данный показатель в препаратах гидрокортизона ацетата. Активная фармацевтическая субстанция (АФС) гидрокортизона ацетат, на основе которой изготавливаются гидрокортизона ацетат мази и кремы, описана во многих фармакопеях: Американской (The United States Pharmacopeia (USP) and the National Formulary (NF) (USP 39 NF 34, Official Monographs, Hydrocortisone Acetate, p. 4224-4225), Европейской (European Pharmacopeia - 8th Edition, volume 2, Hydrocortisone Acetate, p. 2444-2446), Белорусской (Государственная Фармакопея Республики Беларусь 2009, том III, Гидрокортизона ацетат, стр. 229-231), Казахской (Государственная Фармакопея Республики Казахстан 2009, том II, Гидрокортизона ацетат, стр. 178-180). В данных фармакопеях описан показатель «Родственные примеси» или «Сопутствующие примеси», но методики и подвижные фазы, применяемые для АФС (ацетонитрил для хроматографии - вода (400:600)), оказались полностью непригодными для применения их к готовой лекарственной форме (ГЛФ) мази или крему. Дело в том, что в состав данных мазей или кремов входят антибактериальные и противогрибковые агенты (консерванты) метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат. Эти консерванты обладают синергетическим эффектом и, как правило, используются вместе, чтобы максимально эффективно обеспечить качество препарата по микробиологическим показателям. Молекула пропилпарагид-роксибензоата, не смотря на различное химическое строение (таблица 1) с молекулой гидрокортизона ацетата, обладает одинаковыми с ней сорбционными свойствами, что в условиях методик на АФС выражается в виде совпадения времен удерживания на хроматограмме испытуемого раствора и отсутствием разделения между этими пиками.
Таким образом, проблема заключается в невозможности разделения пиков гидрокортизона ацетата и пропилпарагидроксибензоата в условиях, описанных в методике по показателю «Родственные соединения» или «Посторонние примеси» в АФС. Консерванты в препаратах определяются количественно, и при использовании подвижной фазы с кислотой (муравьиная кислота (99,7%) : ацетонитрил для хроматографии : тетрагидрофуран : вода (2,3:200:265:535)) разделение пиков метилпарагидроксибензоата, гидрокортизона ацетата и пропилпарагидроксибензоата происходит хорошо, но возникает вторая проблема: пик гидрокортизона ацетата не разделяется с примесью кортизоном ацетататом. Подводя итог вышесказанному, из предшествующего уровня техники не удалось выявить способов, позволяющих разделить четыре пика: гидрокортизон ацетат, кортизон ацетат, метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат. Существует необходимость исследования и разработки способов хроматографического разделения данных пиков, так как это необходимо для разработки методик контроля качества ГЛФ.
Задачей настоящего изобретения является разработка хроматографического способа разделения четырех составляющих: гидрокортизон ацетат, кортизон ацетат, метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат.
Авторы данного изобретения установили, что, добавляя в подвижную фазу второй органический модификатор (метанол для жидкостной хроматографии в количестве, сопоставимом с количеством ацетонитрила для хроматографии): метанол для жидкостной хроматографии - ацетонитрил для хроматографии - вода (200:240:560 об/об/об), удалось разделить все четыре компонента и предложили способ хроматографического разделения.
Подвижная фаза. Смешивают метанол для жидкостной хроматографии, ацетонитрил для хроматографии и воду в объемном соотношении 200:240:560, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр из регенерированной целлюлозы с размером пор 0,45 мкм и дегазируют любым удобным способом.
Раствор используют свежеприготовленным.
Растворитель. Смешивают ацетонитрил для хроматографии, тетрагидрофуран и воду в объемном соотношении 20:20:60. Раствор используют свежеприготовленным.
Испытуемый раствор. Около 500 мг (точная навеска) мази или крема помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10,0 мл растворителя, перемешивают при нагревании на водяной бане, охлаждают раствор до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр «синяя лента», отбрасывая первые 2 мл фильтрата. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр из регенерированной целлюлозы с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 2 мл фильтрата (концентрация гидрокортизона ацетата 0,5 мг/мл).
Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор «плацебо». 495 мг смеси вспомогательных веществ, входящих в состав мази или крема в соответствующих пропорциях, помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10,0 мл растворителя, перемешивают при нагревании на водяной бане, охлаждают раствор до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр «синяя лента», отбрасывая первые 2 мл фильтрата. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр из регенерированной целлюлозы с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 2 мл фильтрата.
Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор сравнения гидрокортизона ацетата. Около 10,0 мг (точная навеска) стандартного образца гидрокортизона ацетата (USP RS, BP CRS, ЕР CRS) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин, охлаждают раствор до комнатной температуры, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают.
1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора растворителем до метки и перешивают (концентрация гидрокортизона ацетата 0,01 мг/мл).
Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. 5,0 мл раствора сравнения гидрокортизона ацетата помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают (концентрация гидрокортизона ацетата 0,00025 мг/мл).
Раствор используют свежеприготовленным.
Исходный раствор кортизона ацетата. 10,0 мг стандартного образца кортизона ацетата (USP RS, ЕР CRS, BP CRS) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин, охлаждают раствор до комнатной температуры, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают.
Раствор используют свежеприготовленным.
Исходный раствор метилпарагидроксибензоата. 8,0 мг стандартного образца метилпарагидроксибензоата (ЕР CRS) или стандартного образца метилпарабена (USP RS) помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, прибавляют 10 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают.
Раствор используют свежеприготовленным.
Исходный раствор пропилпарагидроксибензоата. 10,0 мг стандартного образца пропилпарагидроксибензоата (ЕР CRS) или стандартного образца пропилпарабена (USP RS) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 5 мин, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают.
Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 5,0 мг стандартного образца гидрокортизона ацетата (USP RS, BP CRS, ЕР CRS) помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляют 1,0 мл исходного раствора кортизона ацетата, 1,0 мл исходного раствора метилпарагидроксибензоатата и 1,0 мл исходного раствора пропилпарагидроксибензоатата, обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин, охлаждают раствор до комнатной температуры, доводят объем раствора растворителем до метки и перемешивают (концентрация гидрокортизона ацетата 0,5 мг/мл, кортизона ацетата 0,01 мг/мл, метилпарагидроксибензоата 0,04 мг/мл, пропилпарагидроксибензоата 0,01 мг/мл).
Раствор используют свежеприготовленным.
Хроматографические условия:
- колонка: 250×4,6 мм, размер частиц 5 мкм, заполненная сорбентом силикагель октадецилсилильный, например Zorbax Eclipse XDB С18 или аналогичная, для которой выполняются условия пригодности хроматографической системы,
- скорость потока: 1,2 мл/мин,
- температура колонки: 30°С,
- детектор: УФ, 254 нм,
- объем пробы: 10 мкл.
Подвижная фаза: метанол для жидкостной хроматографии - ацетонитрил для хроматографии - вода (200:240:560).
Время хроматографирования испытуемого раствора не менее 2,5 времени удерживания пика гидрокортизона ацетата.
Время удерживания пика гидрокортизона ацетата около 21 мин.
Предложенные условия являются предпочтительными, но при необходимости могут быть изменены для обеспечения пригодности хроматографической системы.
Допускается незначительно изменять содержание метанола для жидкостной хроматографии в подвижной фазе, для достижения требуемого разрешения между пиками пропилпарагидроксибензоата и гидрокортизона ацетата, и между пиками гидрокортизона ацетата и кортизона ацетата.
По 10 мкл раствора для проверки чувствительности хроматографической системы, раствора для проверки пригодности хроматографической системы, раствора сравнения гидрокортизона ацетата (получая не менее трех хроматограмм), растворителя, раствора «плацебо» и испытуемого раствора хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-спектрофотометрическим детектором.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора сравнения гидрокортизона ацетата:
- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику гидрокортизона ацетата, не менее 2000 теоретических тарелок,
- фактор асимметрии пика гидрокортизона ацетата не более 2,0.
- относительное стандартное отклонение площадей пиков гидрокортизона ацетата не более 5,0%.
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
- разрешение между пиком пропилпарагидроксибензоата и пиком гидрокортизона ацетата не менее 2,0,
- разрешение между пиком гидрокортизона ацетата и пиком кортизона ацетата не менее 2,0,
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы: отношение сигнал/шум для пика гидрокортизона ацетата - не менее 10.
Содержание любой единичной примеси в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:
где
S - площадь пика любой единичной примеси на хроматограмме испытуемого раствора,
S0 - площадь пика гидрокортизона ацетата на хроматограмме раствора сравнения гидрокортизона ацетата,
а0 - навеска стандартного образца гидрокортизона ацетата, в миллиграммах,
а - навеска препарата, в миллиграммах,
Р - содержание гидрокортизона ацетата в стандартном образце в миллиграммах на миллиграмм (USP RS), в процентах (BP CRS, ЕР CRS),
К - коэффициент учета выражения концентрации основного вещества в стандартном образце гидрокортизона ацетата (k=1 для USP RS k=100 для BP CRS, ЕР CRS),
L - заявленное содержание гидрокортизона ацетата в препарате в процентах.
Сумму примесей в процентах рассчитывают путем сложения содержания любых единичных примесей.
При расчете не учитывают пики, относящиеся к растворителю, пики «плацебо», (включая пик метилпарагидроксибензоата с относительным временем удерживания около 0,24 относительно пика гидрокортизона ацетата, пропилпарагидроксибензоата с относительным временем удерживания около 0,73 относительно пика гидрокортизона ацетата, а также пики с площадью, равной или менее площади пика гидрокортизона ацетата на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (0,05% и менее 0,05%)).
Нормы.
Любая единичная примесь - не более 2,0%, сумма примесей - не более 4,0%.
Используя данный способ, удалось разделить все интересующие пики и рассчитать содержание родственных соединений в препарате.
Параметры пригодности хроматографической системы удовлетворяют заявленным требованиям и приведены в таблице 2.
Типовая хроматограмма раствора для проверки пригодности хроматографической системы представлена на Фиг. 1.
Как видно на представленной хроматограмме (Фиг. 1), пики всех четырех компонентов раствора для проверки пригодности хроматографической системы хорошо разделяются.
Таким образом, экспериментальным путем были подобраны оптимальные условия хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Предложенный способ удовлетворяет стандартным требованиям проверки пригодности хроматографической системы и позволяет разделить пики анализируемых веществ в гидрокортизоне креме или мази.
Claims (2)
1. Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, при котором готовят подвижную фазу, в которую дополнительно вводят второй органический модификатор метанол для жидкостной хроматографии в количестве, сопоставимом с количеством ацетонитрила для хроматографии в соотношениях соответственно метанол для жидкостной хроматографии, ацетонитрил для хроматографии, вода - 200:240:560 об/об/об, готовят растворитель, состоящий из ацетонитрила для хроматографии, тетрагидрофурана и воды в объемном соотношении 20:20:60, готовят испытуемый раствор, включающий около 500 мг (точная навеска) мази или крема и 10,0 мл растворителя (концентрация гидрокортизона ацетата 0,5 мг/мл), готовят раствор «плацебо», включающий 495 мг смеси вспомогательных веществ, входящих в состав мази или крема в соответствующих пропорциях и 10,0 мл растворителя, готовят раствор сравнения гидрокортизона ацетата, включающий около 10,0 мг (точная навеска) стандартного образца гидрокортизона ацетата (USP RS, BP CRS, ЕР CRS) и 100 мл растворителя, затем разводят растворителем 1,0 мл в колбу на 10 мл (концентрация гидрокортизона ацетата 0,01 мг/мл), готовят раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, включающий 5,0 мл раствора сравнения гидрокортизона ацетата и растворитель (концентрация гидрокортизона ацетата 0,00025 мг/мл), готовят исходный раствор кортизона ацетата, включающий 10,0 мг стандартного образца кортизона ацетата (USP RS, ЕР CRS, BP CRS) и 100 мл растворителя, готовят исходный раствор метилпарагидроксибензоата, включающий 8,0 мг стандартного образца метилпарагидроксибензоата (ЕР CRS) или стандартного образца метилпарабена (USP RS) и 20 мл растворителя, готовят исходный раствор пропилпарагидроксибензоата, включающий 10,0 мг стандартного образца пропилпарагидроксибензоата (ЕР CRS) или стандартного образца пропилпарабена (USP RS) и 100 мл растворителя, после чего готовят раствор для проверки пригодности хроматографической системы, включающий 5,0 мг стандартного образца гидрокортизона ацетата (USP RS, BP CRS, ЕР CRS), 1,0 мл исходного раствора кортизона ацетата, 1,0 мл исходного раствора метилпарагидроксибензоатата и 1,0 мл исходного раствора пропилпарагидроксибензоатата (концентрация гидрокортизона ацетата 0,5 мг/мл, кортизона ацетата 0,01 мг/мл, метилпарагидроксибензоата 0,04 мг/мл, пропилпарагидроксибензоата 0,01 мг/мл), причем все растворы используют свежеприготовленными, затем, по 10 мкл раствора для проверки чувствительности хроматографической системы, раствора для проверки пригодности хроматографической системы, раствора сравнения гидрокортизона ацетата, получая не менее трех хроматограмм, растворителя, раствора «плацебо» и испытуемого раствора хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-спектрофотометрическим детектором, применяют хроматографические условия, при которых колонка 250×4,6 мм, размер частиц 5 мкм, заполненная сорбентом силикагель октадецилсилильный, например Zorbax Eclipse XDB С18, скорость потока 1,2 мл/мин, температура колонки 30°C, детектор УФ, 254 нм, после чего вычисляют содержание любой единичной примеси в препарате и сумму примесей.
2. Способ по п. 1, при котором время хроматографирования испытуемого раствора не менее 2,5 времени удерживания пика гидрокортизона ацетата, а время удерживания пика гидрокортизона ацетата около 21 мин.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017105002A RU2653191C1 (ru) | 2017-02-15 | 2017-02-15 | Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017105002A RU2653191C1 (ru) | 2017-02-15 | 2017-02-15 | Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2653191C1 true RU2653191C1 (ru) | 2018-05-07 |
Family
ID=62105451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017105002A RU2653191C1 (ru) | 2017-02-15 | 2017-02-15 | Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2653191C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108107122A (zh) * | 2017-12-12 | 2018-06-01 | 中华人民共和国台州出入境检验检疫局 | 高效液相色谱-紫外法检测4种对羟基苯甲酸酯特定迁移量的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU494382A1 (ru) * | 1973-12-13 | 1975-12-05 | Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср | Способ получени гидрокортизона и ацетата кортизона |
| CN102778494A (zh) * | 2012-06-01 | 2012-11-14 | 江南大学 | 一种分离测定护肤类化妆品中6种皮质激素的方法 |
| RU2475733C1 (ru) * | 2011-08-22 | 2013-02-20 | Открытое акционерное общество "Нижегородский химико-фармацевтический завод" | Способ определения содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате методом вэжх |
| RU2532237C1 (ru) * | 2013-06-19 | 2014-10-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославский государственный университет им. П.Г. Демидова" | Способ хроматографического анализа парабенов (эфиров 4-гидроксибензойной кислоты) в продуктах питания, косметике, фармацевтических препаратах и биологически активных добавках |
-
2017
- 2017-02-15 RU RU2017105002A patent/RU2653191C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU494382A1 (ru) * | 1973-12-13 | 1975-12-05 | Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср | Способ получени гидрокортизона и ацетата кортизона |
| RU2475733C1 (ru) * | 2011-08-22 | 2013-02-20 | Открытое акционерное общество "Нижегородский химико-фармацевтический завод" | Способ определения содержания троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственном препарате методом вэжх |
| CN102778494A (zh) * | 2012-06-01 | 2012-11-14 | 江南大学 | 一种分离测定护肤类化妆品中6种皮质激素的方法 |
| RU2532237C1 (ru) * | 2013-06-19 | 2014-10-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославский государственный университет им. П.Г. Демидова" | Способ хроматографического анализа парабенов (эфиров 4-гидроксибензойной кислоты) в продуктах питания, косметике, фармацевтических препаратах и биологически активных добавках |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Осипов А.С. и др. "Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа эфиров 4-гидроксибензойной кислоты". Журнал: Успехи современного естествознания. - 2016. - N11 (часть2) - с. 256-260. * |
| Осипов А.С. и др. "Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа эфиров 4-гидроксибензойной кислоты". Журнал: Успехи современного естествознания. - 2016. - N11 (часть2) - с. 256-260. Сумцов М.А. и др. "Анализ и стандартизация производных парагидроксибензойной кислоты". Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук, Москва 2007. * |
| Сумцов М.А. и др. "Анализ и стандартизация производных парагидроксибензойной кислоты". Авто диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук, Москва 2007. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108107122A (zh) * | 2017-12-12 | 2018-06-01 | 中华人民共和国台州出入境检验检疫局 | 高效液相色谱-紫外法检测4种对羟基苯甲酸酯特定迁移量的方法 |
| CN108107122B (zh) * | 2017-12-12 | 2020-07-14 | 中华人民共和国台州出入境检验检疫局 | 高效液相色谱-紫外法检测4种对羟基苯甲酸酯特定迁移量的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Santoro et al. | Quantitative determination of gatifloxacin, levofloxacin, lomefloxacin and pefloxacin fluoroquinolonic antibiotics in pharmaceutical preparations by high-performance liquid chromatography | |
| Colthup et al. | Determination of ondansetron in plasma and its pharmacokinetics in the young and elderly | |
| Fierens et al. | The qualitative and quantitative determination of quinolones of first and second generation by capillary electrophoresis | |
| Scherer et al. | Determination of ciprofloxacin in pharmaceutical formulations using HPLC method with UV detection | |
| Shaikh et al. | A simple RP-HPLC method for the simultaneous quantitation of chlorocresol, mometasone furoate, and fusidic acid in creams | |
| Siewert | Validation of a levofloxacin HPLC assay in plasma and dialysate for pharmacokinetic studies | |
| Yıldırım et al. | Determination of levofloxacin, ciprofloxacin, moxifloxacin and gemifloxacin in urine and plasma by HPLC–FLD–DAD using pentafluorophenyl core–shell column: Application to drug monitoring | |
| CN107315059B (zh) | 一种利福平胶囊中利福平及其杂质的含量测定方法 | |
| CN104749269A (zh) | 一种利用hplc测定阿格列汀原料药及制剂中对映异构体杂质的方法 | |
| RU2653191C1 (ru) | Способ хроматографического разделения гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, метилпарагидроксибензоата, пропилпарагидроксибензоата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии | |
| Espada et al. | HPLC assay for determination of amphotericin B in biological samples | |
| Amin et al. | Ion-pairing and reversed phase liquid chromatography for the determination of three different quinolones: enrofloxacin, lomefloxacin and ofloxacin | |
| Lesko et al. | High‐pressure liquid chromatography of amiodarone in biological fluids | |
| CN106474048A (zh) | 一种质量更加稳定的地奈德凝胶制剂 | |
| CN103954705A (zh) | 一种中药山药及含山药制剂中尿囊素含量的测定方法 | |
| CN106074422A (zh) | 一种琥珀酸曲格列汀口服固体制剂及其制备方法 | |
| Zahálka et al. | Simultaneous determination of propranolol hydrochloride and sodium benzoate in oral liquid preparations by HPLC | |
| CN114184716A (zh) | 一种用于测定卤米松乳膏中组分的高效液相色谱分析方法 | |
| CN102269749A (zh) | 一种猴头菌片中腺苷含量的检测方法 | |
| Zimmerer Jr et al. | Assay of hyoscyamine, atropine, scopolamine, and phenobarbital in unit doses of tablets and elixirs | |
| CN114814060B (zh) | 一种缬沙坦氨氯地平片有关物质的检测方法 | |
| Brkich et al. | Development and validation of a method for determining lidocaine hydrochloride and miramistin in an innovative wound-healing gel | |
| Kučerová et al. | Fast determination of omeprazole in extemporaneous suspensions used in paediatrics and stability studies | |
| Watson et al. | Assay for trimethoprim in serum and urine by means of ion-pair chromatography. | |
| CN115032284A (zh) | 一种分离检测咀嚼片中有关物质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210216 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20220201 |