RU2650990C1 - Method for prediction of risk of uterine fibroid - Google Patents

Method for prediction of risk of uterine fibroid Download PDF

Info

Publication number
RU2650990C1
RU2650990C1 RU2017122981A RU2017122981A RU2650990C1 RU 2650990 C1 RU2650990 C1 RU 2650990C1 RU 2017122981 A RU2017122981 A RU 2017122981A RU 2017122981 A RU2017122981 A RU 2017122981A RU 2650990 C1 RU2650990 C1 RU 2650990C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
risk
allele
uterine fibroids
women
uterine
Prior art date
Application number
RU2017122981A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Михаил Иванович Чурносов
Ирина Васильевна Пономаренко
Оксана Борисовна Алтухова
Ольга Николаевна Новакова
Светлана Сергеевна Сиротина
Алексей Валерьевич Полоников
Original Assignee
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") filed Critical Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority to RU2017122981A priority Critical patent/RU2650990C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2650990C1 publication Critical patent/RU2650990C1/en

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention relates to the field of medicine and is designed to predict the risk of uterine fibroid in women of Russian nationality, natives of the Central Black-Soil Region. DNA is isolated from peripheral venous blood by polymerase chain reaction. Analyze gene polymorphisms rs7538038, rs1782507, rs7589318. Increased risk of uterine fibroid is predicted if a combination of the allele G rs7538038 with allele C rs1782507 with allele G rs7589318.
EFFECT: invention provides new criteria for assessing the risk of uterine fibroid in women of Russian nationality, natives of the Central Black-Soil Region.
1 cl, 3 ex

Description

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития миомы матки.The invention relates to the field of medical diagnosis, can be used to predict the risk of developing uterine fibroids.

Миома матки представляет собой наиболее распространенную доброкачественную опухоль женской половой сферы [Tаylоr D.K., Hоlthоusеr K., Sеgаrs J.H., et. al. Recent scientific advances in leiomyoma (uterine fibroids) research facilitates better understanding and management // J List. 2015. V. 4. P. 183]. Согласно литературным данным, миому матки диагностируют у 30-35% женщин репродуктивного возраста, а в перименопаузальном периоде частота ее возникновения составляет около 60%.Uterine fibroids are the most common benign tumor of the female genital area [Tailor D.K., Holthouser K., Sagars J.H., et. al. Recent scientific advances in leiomyoma (uterine fibroids) research facilitates better understanding and management // J List. 2015. V. 4. P. 183]. According to published data, uterine fibroids are diagnosed in 30-35% of women of reproductive age, and in the perimenopausal period, its frequency is about 60%.

Среди женщин, подверженных данному заболеванию, отмечается совокупность симптомов, таких как тяжелые или длительные маточные кровотечения, анемия, симптомы сдавления органов малого таза, частое мочеиспускание, хронические тазовые боли, боли при половом акте и репродуктивные осложнения. Выраженность симптомов зависит от размера, а также расположения миомы матки. Кроме того, клинические проявления при миоме матки связаны с возрастными функциональными изменениями репродуктивной системы женщины. Почти у 50% больных с миомой матки к 45-летнему возрасту нарушается ритм менструаций и с течением времени прогрессивно возрастает частота нарушений менструальной функции. Во многих странах мира миома матки является главной причиной гистерэктомии. В России, по различным данным, с миомой матки связано до 50-70% случаев гистерэктомии при заболеваниях матки. Данная патология у большей части женщин является причиной значительного ухудшения качества жизни. Among women susceptible to this disease, a combination of symptoms is noted, such as severe or prolonged uterine bleeding, anemia, pelvic constriction symptoms, frequent urination, chronic pelvic pain, pain during intercourse, and reproductive complications. The severity of symptoms depends on the size and location of the uterine fibroids. In addition, the clinical manifestations of uterine myoma are associated with age-related functional changes in the woman’s reproductive system. In almost 50% of patients with uterine myoma, the rhythm of menstruation is disrupted by the age of 45 and the frequency of menstrual dysfunction increases progressively over time. In many countries of the world, uterine fibroids are the main cause of hysterectomy. In Russia, according to various sources, up to 50-70% of cases of hysterectomy in uterine diseases are associated with uterine myoma. This pathology in most women is the cause of a significant deterioration in the quality of life.

Миомы матки имеют моноклональное происхождение, развиваясь из неопластических клеток миометрия, хотя сам механизм и ранние стадии развития не вполне понятны [Singh S.S., Belland L. Contemporary management of uterine fibroids: focus on emerging medical treatments // Curr. Med. Res. Opin. 2015 Jan. Vol. 31, №1. P. 1-12]. Тем не менее среди факторов, вовлеченных в формирование и последующее развитие опухоли, можно выделить мутации определенных групп генов, а также влияние половых гормонов и биохимические изменения во внеклеточной матрице миом матки.Uterine fibroids are of monoclonal origin, developing from neoplastic myometrial cells, although the mechanism and early stages of development are not fully understood [Singh S.S., Belland L. Contemporary management of uterine fibroids: focus on emerging medical treatments // Curr. Med. Res. Opin. 2015 Jan. Vol. 31, No. 1. P. 1-12]. Nevertheless, among the factors involved in the formation and subsequent development of the tumor, mutations of certain groups of genes can be distinguished, as well as the influence of sex hormones and biochemical changes in the extracellular matrix of uterine fibroids.

С практической точки зрения представляется крайне необходимым выделение критериев индивидуального прогнозирования у женщин риска развития миомы матки на основании исследования генов-кандидатов с целью выявления индивидуумов, предрасположенных к миоме матки.From a practical point of view, it seems extremely necessary to identify the criteria for individual prediction of women at risk of developing uterine fibroids based on the study of candidate genes in order to identify individuals predisposed to uterine fibroids.

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития миомы матки на основе данных о сочетании генетических полиморфизмов rs7538038, rs1782507 и rs7589318.In the studied medical and accessible patent literature, the authors did not find a method for predicting the risk of developing uterine fibroids based on data on the combination of genetic polymorphisms rs7538038, rs1782507 and rs7589318.

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2016 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития миомы матки на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов rs7538038, rs1782507 и rs7589318.To assess the current patent situation, a search was performed on the title documents for the period from 1990 to 2016. The analysis of documents was carried out in the direction: a method for predicting the risk of developing uterine fibroids based on molecular genetic data depending on polymorphic markers of the rs7538038, rs1782507 and rs7589318 genes.

В патенте РФ № 2350259 (дата публикации 27.03.2009), где предложен «Способ прогнозирования быстрого роста миомы матки», заключающийся в определении таких показателей как: количество медицинских абортов в анамнезе, наличие артериальной гипертензии во время предшествующих беременностей, угрозы невынашивания беременности, продолжительность родов, наличие аномалий родовой деятельности в предшествующих родах, воспалительных послеродовых заболеваний, а также хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта и рассчитывают показатель прогноза скорости роста миомы матки.In the patent of the Russian Federation No. 2350259 (publication date 03/27/2009), which proposes a "Method for predicting the rapid growth of uterine fibroids", which consists in determining indicators such as: the number of medical abortions in history, the presence of arterial hypertension during previous pregnancies, the threat of miscarriage, duration childbirth, the presence of abnormalities of labor in the previous birth, inflammatory postpartum diseases, as well as chronic diseases of the gastrointestinal tract and calculate the prognosis indicator scab, uterine fibroids growth.

Выявлен патент РФ №2484473 (дата публикации 10.06.2013), где предложен «Способ прогнозирования развития злокачественной или доброкачественной патологии матки», согласно которому для оценки риска развития миомы матки производят диагностическое выскабливание, определяют содержание в эндометрии прогестерона и тестостерона и при уровнях прогестерона 24,0-29,6 нг/г ткани и тестостерона от 16,8 до 22,4 нг/г ткани прогнозируют развитие миомы матки.A patent of the Russian Federation No. 2484473 was revealed (publication date 10.06.2013), which proposed a “Method for predicting the development of malignant or benign uterine pathology”, according to which diagnostic curettage is performed to assess the risk of developing uterine fibroids, the progesterone and testosterone levels in the endometrium are determined and at progesterone levels 24 , 0-29.6 ng / g of tissue and testosterone from 16.8 to 22.4 ng / g of tissue predict the development of uterine fibroids.

Общий недостаток указанных способов заключается в том, что не рассматриваются генетические полиморфизмы и их сочетания с риском развития миомы матки.A common disadvantage of these methods is that they do not consider genetic polymorphisms and their combination with the risk of developing uterine fibroids.

В патенте РФ №2475740 (дата публикации 20.02.2013) «Способ выявления наследственной предрасположенности к быстрому росту миомы матки», сущность которого заключается в выделении из лимфоцитов ДНК, из которой амплифицируют фрагменты генов глутатион-S-трансферазы GSTM1 и метионин-синтазы-редуктазы MTRR, и при выявлении генотипа GSTM1 del/del в сочетании с генотипом MTRR 66G/G или MTRR 66A/G делают вывод о наличии у женщины генетической предрасположенности к быстрому росту миоматозных узлов в течение 5 лет с момента их появления.In the patent of the Russian Federation No. 2475740 (publication date 02/20/2013) “A method for identifying a hereditary predisposition to the rapid growth of uterine fibroids”, the essence of which is the isolation of DNA from lymphocytes from which the gene fragments of glutathione S-transferase GSTM1 and methionine synthase reductase are amplified MTRR, and when detecting the GSTM1 del / del genotype in combination with the MTRR 66G / G or MTRR 66A / G genotype, they conclude that a woman has a genetic predisposition to rapid growth of myomatous nodes within 5 years from the moment of their appearance.

Недостаток метода заключается в том, что он позволяет прогнозировать быстрый рост миомы матки при наличии миоматозных узлов, но не дает возможности прогноза развития миомы матки.The disadvantage of this method is that it allows you to predict the rapid growth of uterine fibroids in the presence of myomatous nodes, but does not allow prediction of the development of uterine fibroids.

За прототип выбран патент РФ № 2550933 (дата публикации 20.05.2015) «Способ прогнозирования риска формирования миомы матки», который заключается в выделении ДНК из периферической венозной крови, проведении типирования генетических полиморфизмов генов интерлейкинов и анализе сочетаний полиморфизмов гена интерлейкина -1 (-889 ТТ IL-1) и интерлейкина - 5 (-703 С IL-5).For the prototype, RF patent No. 2550933 was selected (publication date 05/20/2015) "A method for predicting the risk of uterine fibroids formation", which involves isolating DNA from peripheral venous blood, typing genetic polymorphisms of interleukin genes, and analyzing combinations of interleukin -1 gene polymorphisms (-889 TT IL-1) and interleukin - 5 (-703 C IL-5).

Недостаток метода заключается в его ограниченном применении, т.к. используется анализ сочетаний только генов интерлейкинов -889 ТТ IL-1 и -703 С IL-5. The disadvantage of this method is its limited use, because the analysis of combinations of only -889 TT IL-1 and -703 C IL-5 interleukin genes is used.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования развития миомы матки на основе данных о сочетании однонуклеотидных полиморфизмов – rs7538038, rs1782507 и rs7589318. The objective of this study is to expand the arsenal of diagnostic methods, namely the creation of a method for predicting the development of uterine fibroids based on data on a combination of single nucleotide polymorphisms - rs7538038, rs1782507 and rs7589318.

Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития миомы матки у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья на основе данных о сочетаниях генетических вариантов локусов rs7538038, rs1782507 и rs7589318.The technical result of using the invention is to obtain criteria for assessing the risk of developing uterine fibroids in women of Russian nationality, natives of the Central Chernozem region based on data on combinations of genetic variants of the rs7538038, rs1782507 and rs7589318 loci.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития миомы матки, включающий:In accordance with the task, a method for predicting the risk of developing uterine fibroids was developed, including:

- выделение ДНК из периферической венозной крови;- DNA isolation from peripheral venous blood;

- анализ полиморфизмов генов rs7538038, rs1782507 и rs7589318;- analysis of polymorphisms of the rs7538038, rs1782507 and rs7589318 genes;

- прогнозирование повышенного риска развития миомы матки у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья в случае выявления сочетания аллеля G rs7538038 с аллелем С rs1782507 с аллелем G rs7589318.- predicting an increased risk of developing uterine fibroids in women of Russian nationality, a native of the Central Black Earth Region, if a combination of the G rs7538038 allele with the C rs1782507 allele with the G rs7589318 allele is detected.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития миомы матки по данным о сочетании генетических вариантов локусов rs7538038, rs1782507 и rs7589318. The novelty and inventive step consists in the fact that the possibility of predicting the risk of developing uterine fibroids according to a combination of genetic variants of the rs7538038, rs1782507 and rs7589318 loci is not known from the prior art.

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови индивидуумов в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH 7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН 8,0) и 75 мМNaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37ºС в течение 16 часов. DNA is isolated from samples of peripheral venous blood of individuals in 2 stages. At the first stage, 25 ml of lysis buffer containing 320 mM sucrose, 1% Triton X-100, 5 mM MgCl2, 10 mM Tris-HCl (pH 7.6) is added to 4 ml of blood. The resulting mixture was stirred and centrifuged at 4 ° C, 4000 rpm for 20 minutes. After centrifugation, the supernatant is drained, 4 ml of a solution containing 25 mM EDTA (pH 8.0) and 75 mM NaCl are added to the precipitate, and they are resuspended. Then add 0.4 ml of 10% SDS, 35 μl of proteinase K (10 mg / ml) and incubate the sample at 37 ° C for 16 hours.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об./мин. в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -200С. Выделенную ДНК используют для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК. At the second stage, DNA is sequentially extracted from the obtained lysate in equal volumes of phenol, phenol-chloroform (1: 1) and chloroform with centrifugation at 4000 rpm. within 10 minutes. After each centrifugation, the aqueous phase is selected. DNA is precipitated from solution in two volumes of chilled 96% ethanol. The formed DNA is dissolved in bidistilled, deionized water and stored at -200C. Isolated DNA is used to carry out the polymerase chain reaction of DNA synthesis.

Анализ всех локусов (rs7538038, rs1782507 и rs7589318) осуществляют методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. ПЦР проводилась на аппарате IQ5 (Bio-Rad) в режиме real time с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М» и стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол» с последующим анализом полиморфизмов методом дискриминации аллелей. Для дискриминации аллелей используют программу Bio-Rad «IQ5-Standart Edition».Analysis of all loci (rs7538038, rs1782507 and rs7589318) is carried out by polymerase chain reaction (PCR) DNA synthesis. PCR was performed on an IQ5 apparatus (Bio-Rad) in real time using Thermus aquaticus DNA polymerase manufactured by Sileks-M and standard oligonucleotide primers and probes synthesized by Syntol followed by analysis of polymorphisms by allele discrimination. To discriminate alleles, the Bio-Rad program “IQ5-Standart Edition” is used.

Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития миомы матки подтверждает анализ результатов наблюдений 569 женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ больных миомой матки и 981 человек контрольной группы. Обследование пациенток проводили врачи гинекологического отделения и отделения вспомогательных репродуктивных технологий перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. В контрольную группу включали женщин, не имеющих пролиферативных заболеваний органов малого таза и доброкачественных заболеваний молочных желез. Формирование контрольной выборки осуществляли при профилактических осмотрах (диспансеризации). The possibility of using the proposed method for assessing the risk of developing uterine fibroids is confirmed by an analysis of the observation results of 569 women of Russian nationality who are natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation with patients with uterine myoma and 981 people in the control group. The examination of the patients was carried out by the doctors of the gynecological department and the department of assisted reproductive technologies of the perinatal center of the Belgorod Regional Clinical Hospital of St. Joasaph. The control group included women who did not have proliferative diseases of the pelvic organs and benign diseases of the mammary glands. The formation of the control sample was carried out during preventive examinations (medical examination).

Критерии включения в исследуемые выборки:Criteria for inclusion in the studied samples:

1. Женщины русской национальности, родившиеся в Центральном Черноземье России и не имеющие между собой родства.1. Women of Russian nationality born in the Central Black Earth Region of Russia and not related to each other.

2. Добровольное согласие пациенток на проведение исследования.2. Voluntary consent of patients to conduct the study.

3. В группу больных включались индивидуумы только после установления диагноза миомы матки, подтвержденного с помощью клинических, клинико-инструментальных и клинико-лабораторных методов исследования.3. Individuals were included in the group of patients only after a diagnosis of uterine fibroids was established, confirmed using clinical, clinical, instrumental, and clinical and laboratory research methods.

Критерии исключения из исследуемых выборок:Exclusion criteria from the studied samples:

1. Пациентки со злокачественными заболеваниями органов малого таза и молочных желез.1. Patients with malignant diseases of the pelvic organs and mammary glands.

2. Женщины с нерусской национальностью, родившиеся вне Центрального Черноземья.2. Women with non-Russian nationalities born outside the Central Black Earth Region.

3. Индивидуумы, отказавшиеся от участия в исследовании.3. Individuals who refused to participate in the study.

Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществляли в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.Molecular genetic markers were typed in the laboratory of Human Molecular Genetics at the Medical Institute of the Belgorod State National Research University.

Изучение роли комбинаций генетических вариантов rs7538038, rs1782507 и rs7589318 в формировании миомы матки проводили с помощью программного обеспечения АРSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A. V.Favorov, M. S. Gelfand, A. V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. – 2005. – Vol. 21, № 10. – P. 2240-2245]. The role of combinations of the genetic variants rs7538038, rs1782507 and rs7589318 in the formation of uterine fibroids was studied using the APSampler software [http://sources.redhat.com/cygwin/], using the Monte Carlo method of Markov chains and Bayesian nonparametric statistics [A Gibbs sampler for identi fi cation of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / AVFavorov, MS Gelfand, AV Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. - 2005. - Vol. 21, No. 10. - P. 2240-2245].

Зарегистрированы различия в распространенности сочетания аллелей G rs7538038 с С rs1782507 с G rs7589318 между больными с миомой матки (26,80%) и контролем (18,83%). Эта комбинация аллельных вариантов является фактором риска формирования миомы матки (p=0,0008, OR=1,58, 95% CI 1,23-2,02).Differences in the prevalence of the combination of the G rs7538038 alleles with C rs1782507 with G rs7589318 between patients with uterine myoma (26.80%) and control (18.83%) were registered. This combination of allelic variants is a risk factor for the formation of uterine fibroids (p = 0.0008, OR = 1.58, 95% CI 1.23-2.02).

Таким образом, результаты, полученные с помощью биоинформатического анализа, свидетельствуют о вовлеченности комбинации полиморфных вариантов генов rs7538038, rs1782507 и rs7589318 в формирование миомы матки. Фактором риска развития миомы матки у женщин является сочетание аллеля G rs7538038 с аллелем С rs1782507 с аллелем G rs7589318.Thus, the results obtained using bioinformatics analysis indicate the involvement of a combination of polymorphic variants of the rs7538038, rs1782507 and rs7589318 genes in the formation of uterine fibroids. A risk factor for the development of uterine fibroids in women is the combination of the G allele rs7538038 with the C allele rs1782507 with the G allele rs7589318.

В качестве примеров конкретного выполнения разработанного способа приведено генетическое обследование по локусам rs7538038, rs1782507 и rs7589318 трех женщин (добровольцев) русской национальности, являющихся жителями Центрального Черноземья, не имеющих среди родственников 1-й степени родства больных миомой матки. As examples of the specific implementation of the developed method, a genetic examination of the rs7538038, rs1782507, and rs7589318 loci of three women (volunteers) of Russian nationality who are residents of the Central Chernozem Region and who do not have patients with uterine fibroids among relatives of the 1st degree of kinship is given.

Пример 1. У женщины А. было выявлено сочетание аллеля G rs7538038 с аллелем С rs1782507 с аллелем G rs7589318. На основании этого женщина включена в группу риска по развитию миомы матки. Повторное обследование через 1 год подтвердило обоснованность прогноза. Назначен комплекс лечебных мероприятий, регулярный профилактический осмотр (посещение гинеколога раз в 6 месяцев). Example 1. In woman A., a combination of the G rs7538038 allele with the C rs1782507 allele with the G rs7589318 allele was detected. Based on this, a woman is included in the risk group for the development of uterine fibroids. Repeated examination after 1 year confirmed the validity of the forecast. A complex of therapeutic measures was appointed, regular preventive examination (visit to the gynecologist every 6 months).

Пример 2. У женщины В. было выявлено сочетание аллеля G rs7538038 с алелем С rs1782507 с аллелем G rs7589318. На основании этого у нее прогнозируют повышенный риск развития миомы матки. Данная женщина включена в группу риска по развитию миомы матки, и ей назначен комплекс профилактических мероприятий по предупреждению развития миомы матки (лечение хронических гинекологических заболеваний, рациональное питание, физическая активность, нормализация психо-эмоционального состояния, регулярный профилактический осмотр (посещение гинеколога раз в 6 месяцев и УЗИ органов малого таза) и др. Повторные осмотры подтвердили эффективность проведенного комплекса профилактических мероприятий.Example 2. In woman B., a combination of the allele G rs7538038 with the allele C rs1782507 with the allele G rs7589318 was revealed. Based on this, she is predicted to have an increased risk of developing uterine fibroids. This woman is included in the risk group for the development of uterine fibroids, and she is assigned a set of preventive measures to prevent the development of uterine fibroids (treatment of chronic gynecological diseases, a balanced diet, physical activity, normalization of the psycho-emotional state, regular preventive examination (visit the gynecologist every 6 months and pelvic ultrasound) and others. Repeated examinations confirmed the effectiveness of the complex preventive measures.

Пример 3. У женщины С. было выявлено сочетание аллеля A rs7538038 с алелем A rs1782507 с аллелем A rs7589318. На основании этих результатов у данной пациентки прогнозируют низкий риск развития миомы матки, что подтверждено дальнейшим наблюдением. Example 3. In woman S., a combination of the A rs7538038 allele with the A rs1782507 allele with the A rs7589318 allele was detected. Based on these results, this patient predicts a low risk of developing uterine fibroids, which is confirmed by further observation.

Применение данного способа позволит формировать среди женщин на доклиническом этапе группы риска по развитию миомы матки и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития миомы матки.The application of this method will allow to form at-risk women groups for the development of uterine fibroids among women at the preclinical stage and to timely implement the necessary therapeutic and preventive measures in these groups to prevent the development of uterine fibroids.

Claims (1)

Способ прогнозирования риска развития миомы матки, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, анализ полиморфизмов, отличающийся тем, что анализируют полиморфизмы генов rs7538038, rs1782507, rs7589318 и прогнозируют повышенный риск развития миомы матки у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья в случае выявления сочетания аллеля G rs7538038 с аллелем С rs1782507 с аллелем G rs7589318.A method for predicting the risk of developing uterine fibroids, including the extraction of DNA from peripheral venous blood by the method of polymerase chain reaction of DNA synthesis, analysis of polymorphisms, characterized in that they analyze the polymorphisms of the rs7538038, rs1782507, rs7589318 genes and predict an increased risk of developing uterine fibroids in women of Russian nationality, a native of Central Chernozem region in the case of a combination of the allele G rs7538038 with the allele C rs1782507 with the allele G rs7589318.
RU2017122981A 2017-06-29 2017-06-29 Method for prediction of risk of uterine fibroid RU2650990C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017122981A RU2650990C1 (en) 2017-06-29 2017-06-29 Method for prediction of risk of uterine fibroid

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017122981A RU2650990C1 (en) 2017-06-29 2017-06-29 Method for prediction of risk of uterine fibroid

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2650990C1 true RU2650990C1 (en) 2018-04-18

Family

ID=61976730

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017122981A RU2650990C1 (en) 2017-06-29 2017-06-29 Method for prediction of risk of uterine fibroid

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2650990C1 (en)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2550933C1 (en) * 2014-04-22 2015-05-20 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" Method for predicting risk of hysteromyoma

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2550933C1 (en) * 2014-04-22 2015-05-20 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" Method for predicting risk of hysteromyoma

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YERMACHENKO A. et al. UGT2B4 previously implicated in the risk of breast cancer is associated with menarche timing in Ukrainian females. Gene. 2016 Sep 15; 590(1): 85-9. Epub 2016 Jun 7. *
АЛТУХОВА О.Б. Изучение молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с миомой матки. Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва, 2010, 18 c. [Найдено 26.02.2018] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: http://www.dissercat.com/content/izuchenie-molekulyarno-geneticheskikh-markerov-assotsiirovannykh-s-miomoi-matki. *
АЛТУХОВА О.Б. Изучение молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с миомой матки. Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва, 2010, 18 c. [Найдено 26.02.2018] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: http://www.dissercat.com/content/izuchenie-molekulyarno-geneticheskikh-markerov-assotsiirovannykh-s-miomoi-matki. YERMACHENKO A. et al. UGT2B4 previously implicated in the risk of breast cancer is associated with menarche timing in Ukrainian females. Gene. 2016 Sep 15; 590(1): 85-9. Epub 2016 Jun 7. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Heinonen et al. MED12 mutation frequency in unselected sporadic uterine leiomyomas
Özcan et al. HOXA-10 gene expression in ectopic and eutopic endometrium tissues: Does it differ between fertile and infertile women with endometriosis?
Najmutdinova et al. STUDY OF THE ROLE OF POLYMORPHIC VARIANTS OF THE Arg72Pro LOCUS OF THE TP53 GENE IN THE DEVELOPMENT OF CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA IN THE FEMALE POPULATION OF TASHKENT
Navruzova Clinical and Laboratory Aspects in the Assessment of Neck Diseases Uterus
RU2468367C1 (en) Method of predicting risk of development of endometrium hyperplasia in women with genital endometriosis
RU2558854C1 (en) Method for prediction of risk of endometriosis
JP2016077234A (en) Diagnostic kit, diagnostic marker, and detection method for early diagnosis of endometriosis
RU2650990C1 (en) Method for prediction of risk of uterine fibroid
RU2480763C1 (en) Method for prediction of risk of developing benign mammry dysplasia in females with genital endometriosis
RU2557954C1 (en) Method of predicting development of risk of combined proliferative reproductive system diseases in women
RU2642939C1 (en) Method for prediction of risk of preeclampsia
RU2550933C1 (en) Method for predicting risk of hysteromyoma
RU2453850C2 (en) Method for prediction of character of uterine involvement in myomatous nodes
RU2557977C1 (en) Method for prediction of risk of hyperplastic processes of endometrium
RU2650994C1 (en) Method for prediction of risk of genital endometriosis
Xie et al. Diagnostic gene biomarkers for predicting immune infiltration in endometriosis
RU2650988C1 (en) Method for predicting risk of endometrial hyperplastic processes based on genetic data
RU2677866C1 (en) Method for predicting risk of developing combination of uterine fibroids and adenomyosis using genetic data
RU2679637C1 (en) Method for forecasting the risk of development of combination of genital endometriosis and hyperplastic endometry processes based on molecular-genetic data
RU2678970C1 (en) Method for forecasting risk of development of combination of uterine fibroid and endometrial hyperplastic processes
RU2557944C1 (en) Method of predicting level of arterial pressure in women in late pregnancy
RU2616246C1 (en) Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma
RU2580308C1 (en) Method for prediction of risk of developing primary open-angle glaucoma stage iii-iv
RU2808924C1 (en) Method of predicting risk of developing preeclampsia in pregnant women with fetal growth restriction
RU2646455C1 (en) Method for prediction of risk of preeclampsia development in women depending on hereditary burden

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190630