RU2650792C1 - Способ обработки несеменного зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами - Google Patents
Способ обработки несеменного зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2650792C1 RU2650792C1 RU2017117406A RU2017117406A RU2650792C1 RU 2650792 C1 RU2650792 C1 RU 2650792C1 RU 2017117406 A RU2017117406 A RU 2017117406A RU 2017117406 A RU2017117406 A RU 2017117406A RU 2650792 C1 RU2650792 C1 RU 2650792C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- grain
- strain
- bacillus subtilis
- mycotoxins
- suspension
- Prior art date
Links
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 title claims description 23
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 title claims description 23
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims abstract description 33
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 26
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003053 toxin Substances 0.000 abstract description 7
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 abstract description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 18
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 12
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 9
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 8
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 8
- 241000223192 Fusarium sporotrichioides Species 0.000 description 8
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 description 8
- 239000002115 aflatoxin B1 Substances 0.000 description 8
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 7
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 7
- 241001558145 Mucor sp. Species 0.000 description 7
- 241000228127 Penicillium griseofulvum Species 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- BXFOFFBJRFZBQZ-QYWOHJEZSA-N T-2 toxin Chemical compound C([C@@]12[C@]3(C)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@]3(COC(C)=O)C[C@@H](C(=C1)C)OC(=O)CC(C)C)O2 BXFOFFBJRFZBQZ-QYWOHJEZSA-N 0.000 description 5
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 5
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 4
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 4
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 4
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 3
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101100327917 Caenorhabditis elegans chup-1 gene Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 2
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- XZIDTOHMJBOSOX-UHFFFAOYSA-N 2,3,6-TBA Chemical compound OC(=O)C1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1Cl XZIDTOHMJBOSOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000009849 Cucumis sativus Nutrition 0.000 description 1
- 206010015287 Erythropenia Diseases 0.000 description 1
- 208000004770 Fusariosis Diseases 0.000 description 1
- 206010051919 Fusarium infection Diseases 0.000 description 1
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 244000141359 Malus pumila Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 206010059605 Necrobiosis Diseases 0.000 description 1
- 208000015906 Necrobiotic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011644 Neurologic Gait disease Diseases 0.000 description 1
- VYLQGYLYRQKMFU-UHFFFAOYSA-N Ochratoxin A Natural products CC1Cc2c(Cl)cc(CNC(Cc3ccccc3)C(=O)O)cc2C(=O)O1 VYLQGYLYRQKMFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 1
- 206010040007 Sense of oppression Diseases 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- 241000248520 Stylonychia Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012474 bioautography Methods 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 101150038956 cup-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000000713 mesentery Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N ochratoxin A Chemical compound C([C@H](NC(=O)C1=CC(Cl)=C2C[C@H](OC(=O)C2=C1O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N 0.000 description 1
- DAEYIVCTQUFNTM-UHFFFAOYSA-N ochratoxin B Natural products OC1=C2C(=O)OC(C)CC2=CC=C1C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DAEYIVCTQUFNTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N trans-Zearalenon Natural products O=C1OC(C)CCCC(=O)CCCC=CC2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000009723 vascular congestion Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N zearalenone Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCCC(=O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве. Предложен способ обработки зерна, предназначенного для скармливания сельскохозяйственным животным, предусматривающий обеззараживание зерна перед высушиванием и закладкой на хранение суспензией штамма Bacillus subtilis-93-ДЕП в концентрации 1×1010 КОЕ/мл из расчета 5л на тонну зерна. Изобретение обеспечивает снижение загрязнения зерна микроскопическими грибами и их токсинами. 10 табл., 11 пр.
Description
Способ обработки зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами, предназначенного для скармливания сельскохозяйственным животным.
Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, а именно к защите не семенного зерна при хранении в зернохранилищах от поражения микроскопическими плесневыми грибами и их токсинами с использованием бактериального штамма.
Наиболее часто в кормах обнаруживаются микроскопические плесневые грибы, они способствуют снижению пищевой ценности кормов, контаминируют их продуктами своего метаболизма (микотоксины), которые даже в малых количествах оказывают серьезное неблагоприятное влияние на здоровье сельскохозяйственных животных. Развитие микромицетов и накапливание микотоксинов происходит в период вегетации растений, после уборки урожая до обмолота, при нарушении условий хранения. Обсемененные токсигенными плесневыми грибами растительные субстраты не могут быть использованы в корм без соответствующей санитарной обработки, их необходимо обезвредить от мицелия и ядовитых метаболитов.
Известен способ обезвреживания не семенного зерна от фузариоза путем промывки его в течение нескольких часов в горячей воде, обработки водным раствором щелока, нагретым до 40-45°С в течение двух часов, последующей промывкой чистой водой и высушиванием (патент СССР №77576, опуб. 30.11.1949 г.). Недостатком метода является трудоемкость исполнения, расход большого количества воды, необходимость ее нагрева, наличия емкостей для промывки и последующее высушивание зерна.
Несмотря на широкий ассортимент биопрепаратов, используемых для защиты от грибковых заболеваний посевного материала, зеленой массы растений (патент РФ №2099947, опуб. 25.12.1997 г., патент РФ №2129375, опуб. 27.04.1999 г., авторское свидетельство СССР №256150, авторское свидетельство СССР №262504 и т.д.), нет эффективных мер для обработки не семенного зерна.
Наиболее близкими техническими решениями являются штамм бактерий Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131, используемый для получения препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении (авторское свидетельство СССР №1706504) и штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-7036 - против грибковых заболеваний картофеля, клевера и других кормовых трав, роз разных сортов и огурцов, вызываемых Phytophthore infestans, Microsporium solani, Fusarium solani (патент РФ №2086128, опуб. 10.08.1997 г.). Упомянутые штаммы также как и в предлагаемом решении, рекомендованы для обработки кормов и продуктов для употребления в пищу, однако их не применяют для обработки не семенного зерна, нет данных об их активности в отношении возбудителей грибковых заболеваний зерна и эффективности разложения микотоксинов.
Высокую антагонистическую активность в отношении фитопатогенных грибов рода Fusarium, Aspergillus, Penicillium, Mucor проявляет штамм Bacillus subtilis-93 (патент РФ №2491942, опуб. 10.03.2013 г.). Штамм депонирован 11.04.2001 г. во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) - штамм Bacillus subtilis-93-ДЕП. Местом хранения штамма определена коллекция микроорганизмов ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Штамм В. subtilis-93 активно размножается в питательных средах, принятых в производстве пробиотических препаратов. Устойчив к высушиванию и хранению. Бактерии Bacillus subtilis-93 безопасны для животных. Штамм в целях обработки не семенного зерна и продуктов его переработки против загрязнения микроскопическими грибами и их токсинами не использовался.
Задачей изобретения является разработка способа применения штамма Bacillus subtilis-93, позволяющего повысить качество обеззараживания зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами.
Для достижения поставленной задачи в предлагаемом способе обработки зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами, предназначенного для сельскохозяйственных животных перед высушиванием и закладкой зерна на хранение его обрабатывают суспензией штамма Bacillus subtilis-93-ДЕП в концентрации 1×1010 КОЕ/мл из расчета 5 л на тонну зерна при помощи опрыскивателей (ручных, ранцевых моторных, с приводом ДВС, установок типа ДУК, ВДМ, АДА, ЛСД и т.д.) однократно с последующим тщательным перемешиванием.
Внесение штамма В. subtilis-93 по рекомендуемой схеме в зерно, пораженное микроскопическими грибами, приводит к снижению площади роста микроскопических грибов и снижению содержания токсинов. Не доброкачественный корм, обеззараженный по данному способу, не представляет опасности для животных и пригоден к скармливанию.
Для осуществления предлагаемого способа обеззараживания не семенного зерна культуру Bacillus subtilis-93 высевают в пробирку на скошенный мясо-пептонный агар (МПА), культивируют в термостате при 37°С в течение 24 часов, затем готовят смыв 5 мл мясо-пептонного бульона, переносят в культуральный матрац емкостью 1,5 л, добавляют мясо-пептонный бульон до 100 мл и культивируют в условиях термостата при 37°С. Спустя 48 часов проводят контроль титра, концентрация бактерий должна быть не менее 1013 КОЕ/мл, затем содержимое матраца разливают во флаконы и разбавляют стерильным 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:1000, проверяют бактериальную чистоту. Флаконы закрывают резиновыми пробками, закатывают алюминиевыми колпачками и хранят в темном месте при температуре 4±2°С.
Контроль титра клеток проводят по следующей схеме. Готовят ряд последовательных десятикратных разведений содержимого культурального матраца. Для этого 1 мл культуральной жидкости стерильной пипеткой переносят в пробирку с 9 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида, получая разведение 10-1, затем 1 мл из разведения 10-1 переносят в следующую пробирку с 9 мл стерильного раствора хлорида натрия, получая разведение 10-2 и т.д. до разведения 10-13. Для получения каждого последующего разведения используют отдельную стерильную пипетку. По 1 мл из разведений 10-11 и 10-13 стерильной пипеткой переносят в чашку Петри с МПА (по 3 чашки для каждого разведения). Стерильным шпателем растирают суспензию по поверхности агара, чашки помещают в термостат на 24 часа при температуре 37°С. После подсчитывают количество выросших колоний.
Определение бактериальной чистоты проводят по следующей схеме. По 1 мл из разведений 10-3 и 10-4, приготовленных по схеме приведенной выше, переносят в чашку Петри с МПА (по 3 чашки для каждого разведения). Стерильным шпателем растирают суспензию по поверхности агара, чашки помещают в термостат на 24 часа при температуре 37°С. После проводят микроскопию, посторонняя микрофлора должна отсутствовать.
Ниже приведены примеры, иллюстрирующие изобретение.
Пример 1. Оценка фунгицидного действия испытуемого штамма с помощью метода блоков. Для этого суспензию культуры В. subtilis-93 в объеме 0,1 мл при помощи шпателя равномерно засеяли на поверхность мясо-пептонного агара в чашке Петри, инкубировали в термостате при 37°С в течение 24 часов до образования «сплошного газона», затем стерильным пробочным сверлом вырезали с него блоки и перенесли их на предварительно засеянную тест-грибами поверхность среды (Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Fusarium sporotrichioides, Fusarium oxysporum, Penicillium griseofulvum, Mucor sp.и Alternarium alternata: по 2 чашки на каждый из грибов - опыт и контроль). Грибы засеяли шпателем, агаровые блоки наложили ростом вверх на равном расстоянии один от другого и от краев чашки. Чашки с тест-грибами и агаровыми блоками инкубировали в термостате в течение 7 суток при температуре 26°С. Полученные данные в результате испытаний представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы, предлагаемый штамм обладает фунгицидным потенциалом в отношении исследуемых патогенных грибов.
Пример 2. Оценка фунгицидного действия испытуемого штамма с помощью метода штриха. В четырнадцать стерильных чашек Петри разлили расплавленный мясо-пептонный агар, после застывания агара стерильным скальпелем по диаметру чашки вырезали полоску шириной 1 см. В образовавшийся желобок залили расплавленную и остуженную до 45-50°С агаризованную среду, содержащую суспензию культуры гриба Aspergillus flavus (чашка 1 и 2), Aspergillus niger (чашка 3 и 4), Fusarium sporotrichioides (чашка 5 и 6), Fusarium oxysporum (чашка 7 и 8), Penicillium griseofulvum (чашка 9 и 10), Mucor sp. (чашка 11 и 12), Alternarium alternata (чашка 13 и 14). После застудневания среды в чашки 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 14 отдельным штрихом по диаметру чашки нанесли культуру В. subtilis-93 пересекая в перпендикулярном направлении желобок. Чашки поместили в термостат при 28°С. Результат учитывали на 2-е, 4-е и 7-е сутки по развитию бактериального штамма. Контролем роста тест-грибов служило параллельное выращивание их на чашках 1, 3, 5, 7, 9, 11 и 13 без культуры-антагониста.
Полученные данные представлены в таблице 2.
Как видно из таблицы, предлагаемый штамм обладает фунгицидным потенциалом в отношении исследуемых патогенных грибов.
Пример 3. Определение антифунгальной активности проводили методом двойных (встречных) культур на картофельно-глюкозном агаре. В чашки Петри высеяли агаровый блок с мицелием гриба (Aspergillus flavus (чашка 1), Aspergillus niger (чашка 2), Fusarium sporotrichioides (чашка 3), Fusarium oxysporum (чашка 4), Penicillium griseofulvum (чашка 5), Mucor sp. (чашка 6), Altemarium alternata (чашка 7)), бактериальный штамм Bacillus subtilis-93 (1×1010 КОЕ/мл) при этом нанесли на расстоянии 6 см от блока патогена. Культуры инкубировали в течение 20 дней при температуре 28°С. Контрольные варианты - чашки Петри с чистыми культурами грибов (7 чашек) и бактериями (1 чашка). Учеты провели на 5-е, 10-е, 15-е и 20-е сутки опыта. Отмечали характер взаимоотношений гриба и бактерии: наличие или отсутствие зон роста мицелия, их размер, изменение цвета, плотности, толщины и направления. Степень ингибирования роста мицелия патогена определили по формуле:
И=(1-(А/В))×100,
где И - % ингибирования;
А - рост гриба в опыте;
В - рост гриба в контроле.
Результаты исследования ингибирующей способности роста мицелия грибов бактериальным штаммом Bacillus subtilis-93 отражены в таблице 3.
Отмечены изменения в морфологии патогенных грибов под воздействием бактериального штамма Bacillus subtilis-93: отсутствие воздушного мицелия, лизис и израстание уже сформировавшегося мицелия, ингибирование роста и потемнение мицелия грибов.
Пример 4. Отработка оптимальных доз внесения микроорганизмов.
Исследовали антагонистическую активность штамма В. subtilis-93 в различных концентрациях в отношении микроскопических грибов методом оценки фунгистатического действия. Для этого суспензию штамма В. subtilis-93 в разведении 1×1010 микробных клеток на 1 мл нанесли на мясо-пептонный агар в чашки Петри в дозах 1; 2; 5; 10; 15 мл/л (по семь чашек на каждую из доз), чашки поместили в термостат и культивировали при 37°С в течение 48 часов. Затем бактерии стерилизовали в парах хлороформа (30 минут) и залили тонким слоем сусло-агара с предварительно внесенной культурой гриба (Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Fusarium sporotrichioides, Fusarium oxysporum, Penicillium griseofulvum, Mucor sp. и Alternarium alternata) в соотношении 1:10. Контролем служили чашки с грибом без бактериальной культуры. Все чашки поместили в термостат и культивировали при 26°С в течение 7 суток. При появлении видимых колоний оценивали ежедневно их линейный рост. Степень антагонистической активности характеризовали размером зон задержки роста гриба. Полученные данные представлены в таблице 4.
Как видно из представленных в таблице данных, оптимальное количество внесения микробных клеток В. Subtilis-93 в разведении 1×1010 составило 5 мл/л. Дальнейшее увеличение количества микробных клеток существенным образом не изменяет специфическую активность штамма в отношении тест-культур грибов.
Пример 5. Лабораторные опыты провели с учетом динамики развития грибов в зерне в период хранения. Для этого навески зерна по 100 г обработали 10 мл суспензии, содержащей гриб и 0,5 мл культуральной жидкости микроба с титром клеток 1×1010 КОЕ/мл: Aspergillus flavus (проба 1), Aspergillus flavus и Bacillus subtilis-93 (проба 2), Aspergillus niger (проба 3), Aspergillus niger и Bacillus subtilis-93 (проба 4), Fusarium sporotrichioides (проба 5), Fusarium sporotrichioides и Bacillus subtilis-93 (проба 6), Fusarium oxysporum (проба 7), Fusarium oxysporum и Bacillus subtilis-93 (проба 8), Penicillium griseofulvum (проба 9), Penicillium griseofulvum и Bacillus subtilis-93 (проба 10), Mucor sp. (проба 11), Mucor sp. и Bacillus subtilis-93 (проба 12), Alternarium alternata (проба 13), Alternarium alternata и Bacillus subtilis-93 (проба 14). Пробы заложили во влажные камеры. По истечении 7 дней провели учет опыта.
В пробах, обработанных бактериальной суспензией, рост грибов был существенно меньше. Таким образом, бактериальный штамм Bacillus subtilis-93 обладает антагонизмом к грибам Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Fusarium sporotrichioides, Fusarium oxysporum, Penicillium griseofulvum, Mucor sp. и Alternarium alternate. Дальнейшее наблюдение в течение месяца показало, что развитие и распространение гриба в обработанных пробах прекратилось, мицелий гриба угнетен.
Пример 6, демонстрирующий эффективность разложения микотоксинов.
Опыты провели на искусственно и естественно загрязненном афлатоксином В1 и Т-2 токсином зерне.
Первую серию опытов провели на искусственно загрязненном зерне. Для этого 100 г зерна поместили во флакон емкостью 500 мл, автоклавировали при давлении 1 атм 45 минут. После остывания зерна во флаконы внесли микотоксины в концентрации 400 мкг/кг (в 1-15 - афлатоксин В1, во флаконы 16-30 - Т-2 токсин). Затем во флаконы 1, 6, 11, 16, 21 и 26 внесли, соответственно, по 1 мл суспензии штамма В. subtilis-93 в разведении 1×109, во флаконы 2, 7, 12, 17, 22 и 27 - в разведении 2×109, во флаконы 3, 8, 13, 18, 23 и 28 - 5×109, во флаконы 4, 9, 14, 19, 24 и 29 - 10×109 с последующим тщательным перемешиванием, флаконы 5, 10, 15, 20, 25 и 30 служили контролем без микробного штамма. Каждые 24 часа проводили исследование зерна на содержание микотоксинов.
Вторую серию опытов провели в лабораторных условиях на экспериментально зараженном микроскопическими грибами зерне. Для этого 100 г зерна поместили во флакон емкостью 500 мл, автоклавировали при давлении 1 атм 45 минут. После остывания зерна во флаконы внесли по 15 мл фильтрата недельной культуры гриба, выращенного на жидкой картофельной среде (флаконы 1-5 - Aspergillus flavus, флаконы 6-10 - Fusarium sporotrichioides). Во флаконы 1-4 и 6-9 внесли, соответственно, по 1 мл суспензии штамма В. subtilis-93 в разведениях 1×109, 2×109, 5×109, 10×109 с последующим тщательным перемешиванием, флаконы 5 и 10 служили контролем без микробного штамма. Все флаконы инкубировали в термостате при 26°С в течение 7 суток. Затем содержимое флаконов автоклавировали при давлении 1 атм 30 минут, просушили при 45°С и размололи на лабораторной мельнице. Содержание афлатоксина В1 определили методом ТСХ и ВЭЖХ, Т-2 токсина - биоавтографии (проявление хроматограммы осуществили с использованием тест-культуры Candida pseudotropicalis, штамм 44 пк), с подтверждением результатов хроматомасс-спектрометрическим анализом.
В зерне флаконов 3, 4, 8 и 9 токсинов обнаружено не было, 1, 2, 6 и 7 - в следовых количествах, в контрольных флаконах 5-280 мкг/кг (афлатоксин В1) и 10-330 мкг/кг (Т-2 токсин).
Как видно из представленных данных, оптимальное количество внесения микробных клеток В. Subtilis-93 в разведении 1×109 составило 5 мл/100 г зерна (50 мл/кг), или 5 мл/кг в разведении 1×1010. Дальнейшее увеличение количества микробных клеток существенным образом не изменяло специфическую активность штамма в отношении деградации микотоксинов.
Пример 7. Исследование безвредности, вирулентности, токсичности и токсигенности штамма Bacillus subtilis-93.
Для определения безвредности суспензию суточной культуры Bacillus subtilis-93 в физиологическом растворе (разведением 1×1010 КОЕ/мл) в объеме 0,5 мл перорально ввели 10 белым мышам. Все мыши оставались живы.
Для исследования вирулентности суспензию суточной культуры Bacillus subtilis-93 в физиологическом растворе с концентрацией клеток 109-1011 КОЕ/мл ввели 30 белым мышам однократно внутрибрюшинно в объеме 1 мл и пятикратно перорально в объеме 0,5 мл.
Схема постановки опытов исследования токсичности идентична исследованию вирулентности, отличие состояло в инактивации микробной суспензии (прогревание в течение 1,5 ч при 100°С). Каждую концентрацию испытывали на 10 белых мышах, вводили внутрибрюшинно.
Результаты исследования отражены в таблице 6.
Установили отсутствие вирулентных и токсичных свойств, однократное внутрибрюшинное и многократное пероральное введение микробной суспензии Bacillus subtilis-93 не привело к гибели подопытных животных. На протяжении всего периода наблюдения (10 сут) после окончания инъекций или перорального введения видимых изменений в клиническом состоянии не отмечали.
Токсигенность суспензии Bacillus subtilis-93 в разведении 1010 изучили при внутрибрюшинном введении центрифугата, полученном центрифугированием культуральной жидкости в течение 30 мин при 3000 об/мин. Гибели мышей не отметили, в период наблюдения все животные оставались активными, хорошо поедали корм.
Пример 8. Исследование токсичности зерна, пораженного микроскопическими грибами после обработки суспензией штамма Bacillus subtilis-93. Для этого сформировали 7 групп белых крыс по 5 голов в каждой. Животным первой группы скармливали зерно, контаминированное афлатоксином В1 в дозе 400 мкг/кг корма, второй группы - Т-2 токсином в дозе 400 мкг/кг, третьей - сочетанно афлатоксином В1 и Т-2 токсином в тех же дозах, у крыс четвертой - шестой групп корм контаминировали токсинами и обработали суспензией Bacillus subtilis-93 в разведении 1×1010 в дозе 5 мл/кг. Животные седьмой группы служили контролем и получали чистое зерно. Продолжительность опыта составила 45 суток, ежедневно оценивали общее состояние животных, потребление корма и воды, на 15, 30 и 45 сутки опыта проводили взвешивание крыс и взятие крови.
В группах, где крысы потребляли корм, контаминированный микотоксинами, клинические признаки отравления начали проявляться на 4 сутки опыта в виде угнетения, шаткости походки, тремора, взъерошенности шерстного покрова, диареи. В группах, где корм обработали суспензией штамма, клиника интоксикации проявилась в более поздние сроки и с менее выраженной симптоматикой, диареи не отмечали. Прирост массы тела за опыт у крыс первой - третьей групп был ниже контроля на 19,3; 22,0 и 34,2%, соответственно, в четвертой - шестой группах - на 6,3; 8,1 и 10,5%. При исследовании крови у животных первой - третьей групп на протяжении всего опыта наблюдалась эритроцитопения, лейкопения, снижение уровня гемоглобина, общего белка, глюкозы, изменение соотношения белковых фракций, повышение СОЭ, продуктов перекисного окисления липидов (МДА). Исследуемые показатели в крови крыс, потреблявших корм, обработанный микробной суспензией, не имели достоверных отличий с контролем.
Пример 9. Исследование токсичности корма пораженного микроскопическими грибами после обработки суспензией штамма Bacillus subtilis-93 на стилонихиях. Для этого взяли 7 проб зерна по 10 г, подготовленного для опыта на крысах, поместили его в конические колбы объемом 100 мл, залили ацетоном, размешали в течение 5 мин, отстаивали 10 мин, отобрали 0,5 мл надосадочной жидкости экстракта и перенесли в стакан с 100 мл водного раствора Лозина-Лозинского. Затем на предметные стекла нанесли по 20 мкл среды со стилонихиями и 20 мкл водно-ацетонового экстракта зерна. Через 1 час экспозиции подсчитали численность простейших.
В экстракте проб зерна первой - третьей групп выживаемость стилонихий составила 20, 15 и 5%, четвертой - шестой групп - 90, 85 и 75%, соответственно, в контроле - 100%.
Таким образом, обработка суспензией штамма Bacillus subtilis-93 корма, контаминированного микотоксинами, способствует снижению его токсичности.
Пример 10. Исследование влияния скармливания сельскохозяйственным животным корма пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами после обработки суспензией штамма Bacillus subtilis-93.
Опыты провели на 24 поросятах крупно-белой породы 8 - недельного возраста, живой массой 14-17 кг, разделенных по принципу аналогов на две группы по 8 голов. Животным первой и второй групп задавали не доброкачественный комбикорм, контаминированный микроскопическими грибами рода Aspergillus, и Fusarium, микотоксинами: Т-2 и афлатоксином В1 в дозах 400 мкг/кг, однако корм поросят второй группы предварительно с помощью ручного опрыскивателя обработали суспензией штамма Bacillus subtilis-93 в разведении 1×1010 из расчета 5 мл/кг с последующим тщательным перемешиванием. Животные третьей группы служили контролем и получали доброкачественный комбикорм. Продолжительность опыта составила 45 суток.
У поросят, потреблявших токсичный корм, на 14-16 сут исследования наблюдали понижение аппетита и активности, животные имели вялый вид, бока становились запавшими, появилось расстройство со стороны желудочно-кишечного тракта. Наблюдали отставание в росте и развитии. Прирост массы тела (табл. 7) составил 2,1 кг на 15 сут, 2,39 кг - на 30 сут и 3,29 кг - на 45 сут. У поросят при потреблении токсичного корма, обработанного микробной суспензией, клинических признаков отравления отмечено не было. Прирост массы тела на 15 сут составил 3,07 кг, 30 сут - 3,50 кг, 45 сут - 5,10 кг, разница прироста за опыт по сравнению с приростом массы животных второй группы - 48,3%, среднесуточный прирост был выше на 84,4 г, отличия с контрольными показателями были не достоверные.
Примечание: * - различия с контролем достоверны, р≤0,05
Результаты гематологических исследований крови поросят третьей группы (табл. 8) показали повышение количества эритроцитов в исследуемые сроки на 4,8; 7,5 и 16,7%, лейкоцитов - на 5,5; 21,6 и 24,3%, гемоглобина - 3,3; 4,1 и 6,9%, понижение гематокрита - на 5,7; 6,4 и 7,9%, соответственно, по сравнению с показателями животных получавших токсичный корм. С контрольными показателями различия были не достоверными.
У поросят третьей группы на 15; 30 и 45 сут эксперимента отмечали повышение содержания общего белка на 10,1; 10,6 и 14,2%, альбуминов - на 7,4; 12,4 и 13,8%, понижение концентрации β-глобулинов на 9,5; 11,7 и 18,7%,
γ-глобулинов - 7,1; 7,3 и 11,8%, соответственно в сравнении с показателями животных второй группы (табл. 9), с контролем отличия были не достоверны.
Примечание: * - различия с контролем достоверны, р≤0,05
Активность аланин- и аспартатаминотрансферазы (АЛТ и ACT) в крови поросят третьей группы была на уровне контроля и ниже, чем у животных второй группы на 15 сут на 48,1 и 14,1%, 30-е - на 32,9 и 18,6%, 45-е - 20,1 и 34,4%, соответственно. Содержание щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови в исследуемые сроки было ниже значений поросят второй группы на 10,1; 17,9 и 23,0%, уровень холестерина был ниже на 11,9; 18,3 и 21,5%, концентрация билирубина общего - на 23,7; 17,7 и 30,8%, содержание мочевины - на 21,6; 25,8 и 26,5%, креатинина - 5,9; 6,6 и 9,0%, амилазы - 11,2; 20,0 и 30,4%, концентрация глюкозы была выше на 3,9; 9,0 и 16,7%.
Примечание: * - различия с контролем достоверны, р≤0,05
Выявили угнетение показателей иммунной системы у поросят, потреблявших токсичный корм. У животных, комбикорм которых был обработан микробной суспензией, исследуемые показатели не имели достоверных отличий с контролем. Так, у поросят второй группы в сравнении с животными третьей группы понижение фагоцитарной активности нейтрофилов на 15; 30; 45 сут исследования составило, соответственно, 6,3; 12,7; 17,9%, активность лизоцима сыворотки была ниже на 7,6; 12,7; 18,9%, содержание Т-лимфоцитов - на 3,4; 12,1; 13,7%, В - лимфоцитов - на 3,3; 6,1; 8,7% (табл. 10).
Примечание: * - различия с контролем достоверны, р≤0,05
Патологоанатомическая картина вскрытия умерщвленных поросят, потреблявших не доброкачественный комбикорм, обработанный суспензией штамма Bacillus subtilis-93, не имела отличий с контрольными животными. При вскрытии поросят второй группы, потреблявших токсичный корм без обеззараживания, отмечали незначительную инъекцию сосудов брыжейки и кишечника, гиперемию слизистой оболочки тонкого отдела кишечника, коричнево-красную окраску печени, слабую выраженность границы между корковым и мозговым веществом почек, отечность вещества головного мозга, кровенаполненность сосудов. Легкие, сердце, селезенка не имели видимых патологических изменений. При гистологическом исследовании отмечали внутриклеточный и периваскулярный отек в сердце, дистрофические изменения гепатоцитов и эпителия извитых канальцев почек (в виде белковой дистрофии) с очаговыми некробиозами и десквамацией.
Таким образом, у поросят, потребляющих токсичный корм, содержащий микромицеты и микотоксины, отмечались внешние признаки отравления, изменения гематологических, биохимических, иммунологических показателей крови и выявлялись патологические изменения внутренних органов. У животных, потреблявших токсичный корм обработанный суспензией штамма Bacillus subtilis-93, клиника отравления не проявилась, отмечено благоприятное воздействие на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови, установлено отсутствие патологических изменений в органах.
Пример 11. Провели отбор проб кормов, почвы, воды, крови у крупного рогатого скота в хозяйствах Апастовского района РТ с целью мониторинга содержания микотоксинов и анализа микобиоты. Исследования провели согласно существующим ГОСТ и МУ. В ходе анализа результатов опытов на кроликах и белых мышах 55% проб признаны слаботоксичными, 45% - токсичными. Микологические исследования показали одновременную контаминацию проб патогенными грибами родов Aspergillus (28,6%), Fusarium (22,2%), Mucor (26,1%), Penicillium (12,4%), Althernarium (7,0%), Risopus (3,7%). Выявили содержание микотоксинов Т-2, зеараленон, афлатоксин В1, охратоксин А, ДОН в концентрациях превышающих МДУ. Таким образом, отобранные пробы имеют высокую степень контаминации микромицетами и микотоксинами и могут быть источниками кормовых микотоксикозов.
С целью снижения контаминированности проб микромицетами, содержания микотоксинов и общей токсичности провели микробиологическую обработку суспензией на основе штамма Bacillus subtilis-93 по рекомендуемому способу. В результате отмечены изменения в морфологии патогенных грибов под воздействием бактериального штамма Bacillus subtilis-93: отсутствие воздушного мицелия, лизис и израстание уже сформировавшегося мицелия, ингибирование роста и потемнение мицелия грибов, что свидетельствует о наличии антагонистической активности. Содержание микотоксинов после обработки отмечали лишь в следовых количествах. В опытах на токсичность проб после обработки установили, что они являются не токсичными.
Затем в условиях хозяйств, из которых был произведен отбор проб, провели обеззараживание кормов по рекомендуемому способу. Через 30 дней повторно провели отбор проб кормов и забор крови у взрослого и молодняка крупного рогатого скота. В результате исследований установили существенное снижение контаминации проб микромицетами и микотоксинами, нормализацию гематологических и биохимических показателей крови у животных.
Claims (1)
- Способ обработки зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами, предназначенного для скармливания сельскохозяйственным животным, характеризующийся тем, что перед высушиванием и закладкой зерна на хранение его обеззараживают суспензией штамма Bacillus subtilis-93-ДЕП в концентрации 1×1010 КОЕ/мл из расчета 5 л на тонну зерна при помощи опрыскивателей однократно с последующим тщательным перемешиванием.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017117406A RU2650792C1 (ru) | 2017-05-18 | 2017-05-18 | Способ обработки несеменного зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017117406A RU2650792C1 (ru) | 2017-05-18 | 2017-05-18 | Способ обработки несеменного зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2650792C1 true RU2650792C1 (ru) | 2018-04-17 |
Family
ID=61977091
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017117406A RU2650792C1 (ru) | 2017-05-18 | 2017-05-18 | Способ обработки несеменного зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2650792C1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2337955C1 (ru) * | 2007-06-28 | 2008-11-10 | Вера Степановна Дашкевич | Штамм бактерий bacillus subtilis, используемый для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий |
-
2017
- 2017-05-18 RU RU2017117406A patent/RU2650792C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2337955C1 (ru) * | 2007-06-28 | 2008-11-10 | Вера Степановна Дашкевич | Штамм бактерий bacillus subtilis, используемый для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ИВАНОВ Е.Н. "Фармако-токсикологическая и биологическая оценка препарата "Микосубтил" и его эффективность при обезвреживании кормов от микотоксинов."//Авто дисс. канд. биол. наук, Казань, 20.08.2009. * |
ИВАНОВ Е.Н. "Фармако-токсикологическая и биологическая оценка препарата "Микосубтил" и его эффективность при обезвреживании кормов от микотоксинов."//Автореферат дисс. канд. биол. наук, Казань, 20.08.2009. ХАЙРУЛЛИН Р.М. И ДР., "Эффективность новых эндофитных штаммов Bacillus subtilis в повышении устойчивости пшеницы к болезням"// Вестник ОГУ, 2009, N 2, с.133-137. * |
ХАЙРУЛЛИН Р.М. И ДР., "Эффективность новых эндофитных штаммов Bacillus subtilis в повышении устойчивости пшеницы к болезням"// Вестник ОГУ, 2009, N 2, с.133-137. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108603161A (zh) | 具有有益活性的芽孢杆菌菌株及制剂 | |
JP2008518977A (ja) | アルスロスピラをベースとする組成物及びその利用 | |
CN103374526A (zh) | 一种球虫卵囊培养保存液及应用方法 | |
RU2440413C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus licheniformis (его варианты), обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью, и препарат на основе этого штамма | |
RU2650792C1 (ru) | Способ обработки несеменного зерна, пораженного микроскопическими грибами и микотоксинами | |
RU2398872C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus licheniformis, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОЙ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННЫХ КОРМОВ, ПОВЫШАЮЩИХ ПРОДУКТИВНОСТЬ И СНИЖАЮЩИХ РИСК ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ, ПТИЦЫ И РЫБ | |
Kolchyk et al. | Biofilms of pathogenic bacteria in pig industry | |
CN105505825A (zh) | 一种产抗生素的链霉菌txaf2及其应用 | |
RU2292132C2 (ru) | Способ биологической борьбы с плесневением сена | |
AU636623B2 (en) | Acaricidal compositions and process for preparing same | |
RU2297842C2 (ru) | Способ профилактики микотоксикозов животных | |
RU2539762C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ К РАСЩЕПЛЕНИЮ САХАРОВ И АНТАГОНИСТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ В ОТНОШЕНИИ ПАТОГЕННЫХ И УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ И ГРИБОВ, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ. | |
RU2665547C1 (ru) | Бесклеточная культуральная жидкость на основе штамма Bacillus subtilis, консервант для силоса и полифункциональное средство для растений с фунгицидными, бактерицидными и ростстимулирующими свойствами | |
RU2422511C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Brevibacillus laterosporus, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ШИРОКИЙ СПЕКТР БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ | |
Borkar et al. | Yeast species of diverse functionality in health sciences: A concise report | |
CN101849608B (zh) | 油菜饼抗菌肽 | |
Bencheikh et al. | Evaluation of the spirulina (Arthrospira platensis Gomont) antimicrobial activity | |
CN111991384A (zh) | 原儿茶酸及其复方原儿茶酸在提高畜禽性能中的应用 | |
RU2604802C1 (ru) | Способ определения безопасности пищевых ингредиентов с помощью клеточных тест-систем | |
RU2542484C1 (ru) | Способ стимулирования роста сельскохозяйственных культур | |
Dewinta et al. | Inhibition effectivity of Halimeda macroloba seaweed extract against fish indigenous bacteria for safety fisheries product | |
Okpo et al. | Occurrence and Antibiogram of Staphylococcus aureus in some Dairy Products sold in parts of Kaduna State, Nigeria | |
CN103947684A (zh) | 一种混合配方制剂在褐飞虱防治中的应用 | |
CN115141764B (zh) | 蜡样芽孢杆菌菌剂及在消除动物体内氯氰菊酯中的应用 | |
Nendissa et al. | Test for the antibacterial inhibition of kaffir lime leaf (Citrus hysteric DC) extract against pathogen bacteria in improving food safety |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190519 |