RU2648464C1 - Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18) - Google Patents

Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18) Download PDF

Info

Publication number
RU2648464C1
RU2648464C1 RU2017118528A RU2017118528A RU2648464C1 RU 2648464 C1 RU2648464 C1 RU 2648464C1 RU 2017118528 A RU2017118528 A RU 2017118528A RU 2017118528 A RU2017118528 A RU 2017118528A RU 2648464 C1 RU2648464 C1 RU 2648464C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cataract
mutation
dna
fyco1
ctrct18
Prior art date
Application number
RU2017118528A
Other languages
English (en)
Inventor
Николай Алексеевич Барашков
Айсен Васильевич Соловьев
Федор Михайлович Терютин
Вера Геннадиевна Пшенникова
Георгий Прокопьевич Романов
Ньургун Наумович Готовцев
Сардана Аркадьевна Федорова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Якутский научный центр комплексных медицинских проблем"
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Восточный федеральный университет имени М.К.Аммосова"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Якутский научный центр комплексных медицинских проблем", Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Восточный федеральный университет имени М.К.Аммосова" filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Якутский научный центр комплексных медицинских проблем"
Priority to RU2017118528A priority Critical patent/RU2648464C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2648464C1 publication Critical patent/RU2648464C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
    • C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
    • C12Q2531/113—PCR
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/10—Detection mode being characterised by the assay principle
    • C12Q2565/125—Electrophoretic separation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/16—Ophthalmology
    • G01N2800/166—Cataract

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и офтальмологии, и предназначено для ДНК-диагностики врожденной формы катаракты. Из периферической крови выделяют ДНК. Проводят амплификацию фрагментов ДНК с помощью специфических пар олигонуклеотидных праймеров и обработку полученных амплификатов эндонуклеазой рестрикции PstI с последующей детекцией мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 электрофорезом в агарозном геле. Изобретение обеспечивает высокую точность диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18). 3 ил., 1 табл., 5 пр.

Description

Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18) относится к медицине, а именно к медицинской генетике и офтальмологии.
Врожденная катаракта признана основной причиной детской слепоты во многих популяциях мира, поскольку вызывает физическое помутнение хрусталика глаза, что впоследствии может привести к различным расстройствам зрения вплоть до полной его утраты.
Врожденная катаракта встречается с частотой 1-6 на 10000 новорожденных (см. Robinson GC, Jan JE, Kinnis C. Congenital ocular blindness in children 1945 to 1984. Am J Dis Child. 1987. 141: 1321-1324). При этом от 8,3 до 25,0 % случаев врожденной катаракты являются наследственными (см. Merin S. Inherited Cataracts. Inherited Eye Diseases. 1991. S.Merin (Ed.) Marcel Dekker, Inc., New York: 86–120).
Большинство зарегистрированных в мире наследственных несиндромальных форм врожденной катаракты являются генетически гетерогенными и наследуются как по аутосомно-доминантному и аутосомно-рецессивному, так и по Х-сцепленному рецессивному типу. В настоящее время для человека идентифицировано более 40 локусов врожденной катаракты и примерно для половины из них известны мутации в конкретных генах (см. Shiels A, Bennett TM, Hejtmancik JF. Cat-Map: Putting cataract on the map. Mol. Vis., 2010. 16: 2007-2015).
Впервые наследственная аутосомно-рецессивная врожденная форма катаракты (CTRCT18, ОMIM 610019) была картирована на хромосоме 3 в 2001 году при изучении трех инбредных арабских семей с врожденной катарактой, но генов, ассоциированных с этой формой заболевания, не было идентифицировано (см. Pras E, Pras E, Bakhan T et al. A gene causing autosomal recessive cataract maps to the short arm of chromosome 3. Isr. Med. Assoc. 2001. J.3: 559-562). Позднее, в 2011 году при изучении 12 пакистанских и одной арабо-израильской семьи с аутосомно-рецессивной врожденной катарактой (большинство семей были инбредными) был идентифицирован ген FYCO1, расположенный в критическом регионе сцепления локуса CATC2 (см. Chen J, Ma Z, Jiao X. Mutations in FYCO1 cause autosomal-recessive congenital cataracts. Am J Hum Genet. 2011. 88: 827-38). В кодирующей области этого гена было обнаружено 9 различных изменений нуклеотидной последовательности, затрагивающих функционально значимые домены белка: COILED COIL, LIR и GOLD (см. Chen J, Ma Z, Jiao X. Mutations in FYCO1 cause autosomal-recessive congenital cataracts. Am J Hum Genet. 2011. 88: 827-38).
Известен способ прогнозирования развития катаракты путем обнаружения противохрусталиковых антител в сыворотке крови и слезе, при котором у детей после экстракции врожденной катаракты перед операцией в сыворотке крови и в слезе определяют тканеспецифические антитела к Bl- фракции ткани хрусталика и при наличии их в титре, большем или равном 1:32 в сыворотке и большем или равном 1:256 в слезе, прогнозируют развитие катаракты (см. RU №2021610, МПК G01N 33/53, опубл. 15.10.1994).
Известное решение является «косвенным» свидетельством развития катаракты и его точность может зависеть от множества как экзогенных, так и эндогенных факторов.
Известен способ ДНК-тестирования аутосомно-доминантной зонулярной порошкообразной врожденной катаракты, обусловленной мутацией c.741T>G (p.Ile247Met) в гене GJA8 (коннексин 50) (см. Polyakov AV, Shagina IA, Khlebnikova OV, Evgrafov OV. Mutation in the connexin 50 gene (GJA8) in a Russian family with zonular pulverulent cataract. Clan Genet. 2001 Dec;60(6):476-8), где образцы тестируемых ДНК выделяются из периферической крови, слюны или буккального эпителия, затем выделенные образцы ДНК амплифицируются в термоциклире с помощью специфических пар олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих область мутации с.741T>G в гене GJA50 в присутствии стандартных ионных буферов и термофильного фермента Taq-полимеразы. После проведения всех необходимых раундов ПЦР амплификаты подвергаются ферментативному гидролизу ферментом HinfI, который специфически узнает полиндромный участок, содержащий или не содержащий мутацию c.741T>G (p.Ile247Met).
Известный способ несет частный характер и относится к решению ДНК-диагностики одной из форм врожденной катаракты, обнаруженной в одной семье, и по нему нельзя однозначно оценить возможность тестирования других форм врожденной катаракты, обусловленных иными мутациями в других генах.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является создание способа ДНК-диагностики аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18), распространенной в Якутии.
Технический результат, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в диагностике врожденной формы катаракты (CTRCT18) с высокой точностью.
Для решения поставленной задачи способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18) включает стадии выделения образцов ДНК, тестируемых из периферической крови, амплификации фрагментов ДНК с помощью специфических пар олигонуклеотидных праймеров (F)5'TTGGCCTGCCGGAGCTCTT3', (R)5'AGTGACCTGGAGGAGCAGAAGAAGCAGCGCATT3' и обработки полученных амплификатов эндонуклеазой рестрикции PstI с последующей детекцией мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 в ультрафиолетовом свете после электрофоретического разделения продуктов гидролиза в 4 % агарозном геле.
Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию «новизна».
Совокупность признаков изобретения обеспечивает решение заявленной технической задачи, а именно, получение достоверных результатов молекулярно-генетической диагностики врожденной формы аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18), распространенной в Якутии.
Врожденная катаракта – основная причина детской слепоты во многих популяциях мира (см. Robinson GA, Nylander A. Warfarin and cataract extraction. // Br J Ophthalmol. 1989 Sep;73(9):702-3). Но именно в Якутии врожденная аутосомно-рецессивная катаракта является одним из наиболее частых органных заболеваний (частота 1 на 8257 человек) (см. Тарская Л.А., Зинченко Р.А., Ельчинова Г.И. и др., Структура и разнообразие наследственной патологии в Республике Саха (Якутия). Генетика. 2004;40(11):1530-1539). При этом генетические причины данной формы потери зрения ранее не были установлены.
Заявленное решение иллюстрируется чертежом, где
- на фигуре 1 показана схема идентификации мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) в гене FYCO1 в якутской семье с врожденной катарактой: а – фото глаз членов семьи со случаями врожденной катаракты: K1 - здоровый контроль, M - Мать пробанда (II:2), PI - пробанд 1 (I:3); б – идентификация нонсенс-мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter) с помощью прямого секвенирования по Сэнгеру фрагмента 8-го экзона гена FYCO1: вверху - норма, посередине - гетерозигота, внизу - гомозигота по мутации с.1621C>T; в – результаты ПЦР-ПДРФ анализа (4% агарозный гель) и фрагмент родословной обследованной семьи: Mr—маркер молекулярного веса PUC19/MspI, KI – c.[wt];[wt] (контроль 1), F– c.[1621C>T];[wt] (отец пробанда II:1), P1, P2 и P3 - c.[1621C>T];[1621C>T] - пробанд 1 (I:3), пробанд 2 (I:4) и пробанд 3 (I:5), M - Мать пробанда (II:2) c.[1621C>T];[wt], K2 - c.[wt];[wt] (контроль 2);
- на фигуре 2 показана область перекрывания оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров для детекции мутации с.1621C>T в гене FYCO1 (комплиментарная последовательность NM_024513.3), при этом стрелка 1 соответствует прямому олигонуклеотидному праймеру №1 (последовательность выделена жирным и подчеркнута снизу), стрелка 2 соответствует обратному мисс-матч праймеру №2 (последовательность выделена жирным и подчеркнута снизу), a/g – область мутации, (A/C) - искусственно созданная замена А-аденина (нативная последовательность) на С-цитозин (измененная последовательность). При наличии искусственной замены в мисс-матч праймере (замена A на C) появляется сайт рестрикции для PctI: GAATGCN↑ (серая заливка);
- на фигуре 3 показана электрофореграмма ПЦР-ПДРФ анализа для детекции мутации с.1621C>T в гене FYCO1, приводящей к врожденной аутосомно-рецессивной форме катаракты (CTRCT18) (4% агарозный гель), при этом дорожка 1, 9 – маркер молекулярного веса Puc19/MspI, дорожки 2, 8 – индивиды без мутации, дорожки 3 и 7 гетерозиготы по мутации с.1621C>T, дорожки 4, 5 и 6 – гомозиготы по мутации с.1621C>T (примечание: при наличии мутации в гомозиготном состоянии сайт рестрикции отсутствует, размер фрагмента 270 п.н.; при наличии мутации в гетерозиготном состоянии будет наличие двух визуализируемых бэндов: 270 п.н. и 243 п.н.; при отсутствии мутации будет наличие одного визуализируемого бэнда размером в 243 п.н.).
При помощи полноэкзомного секвенирования (Illumina NextSeq 500) соавторами была обнаружена основная молекулярно-генетическая причина аутосомно-рецессивной формы катаракты, распространенной в Якутии, обусловленной ранее неизвестной нонсенс-мутацией с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гене FYCO1 (см. Барашков Н.А., Коновалов Ф.А., Соловьев А.В., Терютин Ф.М., Пшенникова В.Г., Сапожникова Н.В., Вытюжина Л.С., Томский М.И., Джемилева Л.У., Хуснутдинова Э.К., Посух О.Л., Федорова С.А. Новая транзиция c.1621C>T(p.Gln541*) гена FYCO1 – основная причина аутосомно-рецессивной формы катракты (CTRCT18) в Якутии: результаты полноэкзомного секвенирования // Медицинская генетика. 2016. - Т.15. - №10. - (172). – С. 25-34).
Таким образом, для поиска молекулярно-генетических причин врожденной аутосомно-рецессивной формы катаракты было проведено полноэкзомное секвенирование в одной якутской семье с тремя пораженными разнополыми сибсами, у которых родители имели сохранное зрение. В данном случае, полноэкзомный анализ выявил гомозиготную транзицию c.1621C>T (chr3:46009205G>A) в 8-м экзоне гена FYCO1 (FYVE and coiled-coil domain containing 1) (3p21.31). При этом у всех трех пораженных сибсов мутация обнаружена в гомозиготном, а у здоровых родителей – в гетерозиготном состоянии (см. фиг. 1).
Мутации в гене FYCO1 ранее были известны в ассоциации с аутосомно-рецессивной формой катаракты (CTRCT18, OMIM:610019), встречающейся в популяциях Пакистана (см. Chen J, Ma Z, Jiao X, Fariss R. et al. Mutations in FYCO1 cause autosomal-recessive congenital cataracts. // Am J Hum Genet. 2011 Jun 10;88(6):827-38. doi: 10.1016/j.ajhg.2011.05.008).
Выявленная в исследовании нуклеотидная замена c.1621C>T приводит к образованию преждевременного стоп-кодона p.Gln541Ter (NM_024513.3), терминирующего трансляцию белка FYCO1, участвующего в развитии хрусталика глаза человека. В настоящее время сведения о данной мутации отсутствуют в базах данных 1000 Genomes, ESP6500 и ExAC. Прямое секвенирование по Сэнгеру фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 подтвердило полученные результаты.
Заявленный способ детекции данной мутации с помощью молекулярно-генетического метода осуществляется следующим образом.
С информированного согласия пациента производится забор крови из локтевой вены в вакуумные пробирки (вакутейнеры), содержащие антикоагулянт (ЭДТА).
Далее из лимфоцитов крови выделяется ДНК методом фенольно-хлороформной экстракции (см. Mathew C.C.The isolation of high molecular weight eucariotic DNA. // Methods in Molecular Biology /Ed. Walker J.M.Y.L.: Human Press. 1984. -V.2. - P.31-34), для этого:
• кровь в пробирке тщательно перемешивают и переливают в центрифужный стакан объемом 50,0 мл, далее добавляют 30,0 мл охлажденного лизирующего буфера, содержащего 320,0 мМ сахарозы, 1,0% раствора тритона Х-100, 5,0 мМ MgCl2 и 10,0 мМтрис HCl (рН 7,6);
• смесь центрифугируют в течение 20 мин при частоте оборота 4000 об/мин;
• надосадочную жидкость сливают, а к получившемуся осадку добавляют 0,4 мл 10,0% SDS и протеиназу К (концентрации 10,0 мг/мл), после чего смесь для лизиса оставляют на 16 часов в термостате при температуре 37°С;
• к лизату добавляют 0,5 мл фенола, насыщенного 1М трис HCl до рН 7,8;
• смесь встряхивают на шейкере и центрифугируют в течение 10 мин при частоте оборота 6000 об/мин;
• отбирают водную фазу, содержащую ДНК и неденатурированные белки;
• отобранную фазу обрабатывают смесью фенол-хлороформа (1:1), а затем хлороформом;
• препараты осаждают двумя объемами охлажденного этанола 96,0%;
• образовавшийся осадок ДНК растворяют в 1,5 мл деионизированной Н2О;
• раствор хранят при температуре -20°С.
В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы при полимеразной цепной реакции (ПЦР) для амплификации нужного фрагмента гена FYCO1. Способ осуществляется с применением стандартного состава реакционной смеси: 0,8 мкг геномной ДНК, соответствующее количество каждого олигонуклеотида, 125,0 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата помещают в 12,5 мкл однократного буфера для ПЦР следующего состава: 67,0 mMTris-HCl (pH 8,8); 6,7 mM MgCl2; 16,6 mM (NH4)2SO4. К полученной смеси прибавляют 5 единиц термофильной ДНК-полимеразы. При этом применяют следующий режим амплификации: 1) предварительная денатурация в течение 5 минут при температуре 95°С, далее 28 циклов со следующими параметрами – 94°С – 45 секунд, 65°С – 45 секунд, 72°С – 45 секунд. После 28-го цикла проводят инкубацию при 72°С в течение 7 минут.
Последующую амплификацию необходимых фрагментов ДНК проводят посредством оригинальных олигонуклеотидных праймеров FYCO1 с помощью ПЦР в стандартных термоциклерах (условия постановки ПЦР приведены в таблице):
№1- (F)5'TTGGCCTGCCGGAGCTCTT3'(19 п.н.),
№2- (R)5'AGTGACCTGGAGGAGCAGAAGAAGCAGCGCATT3'(33п.н.).
При этом отличительной особенностью оригинального дизайна олигонуклеотидных праймеров является структура так называемого мисс-матч праймера, содержащая 33 нуклеотида в последовательности, в которой один нуклеотид (А-аденин) замещен на другой (С-цитозин) (см. фиг. 2). Конструкция обратного мисс-матч праймера позволяет создавать «искусственный» сайт узнавания для эндонуклеазы рестрикции PstI, поскольку в нативной последовательности ДНК человека в 8-м экзоне гена FYCO1 в области обнаруженной мутации с.1621C>T естественный сайт рестрикции для известных эндонуклеаз отсутствует.
Далее проводят ПДРФ анализ, к амплификату добавляют эндонуклеазу рестрикции и смесь буферных растворов в соответствии с рекомендациями производителя и инкубируют полученную смесь при температуре 37°C в течение 12 часов. После этого проводят электрофоретическое разделение продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле с бромистым этидием в 0,5% трис-ацетатном буферном растворе в течение 30-40 минут при напряжении поля в 100 В.
В последующем продукты гидролиза, нанесенные на гель, визуализируют с помощью системы гель-видеодокументации в УФ-свете.
При этом наличие на электрофореграмме одного визуализируемого бэнда в 270 п.н. будет указывать на наличие мутации с.1621C>T в гомозиготном состоянии, наличие двух визуализируемых бэндов в 270 п.н. и 243 п.н. будет свидетельствовать о наличие мутации в гетерозиготном состоянии (гетерозиготное носительство у здоровых индивидов), наличие одного визуализирумего бэнда размером в 243 п.н. будет указывать на отсутствие данной мутации (см. фиг. 3).
Таким образом, общая продолжительность исследования составляет не более 4 суток.
Заявленный способ ДНК-диагностики был апробирован с помощью молекулярно-генетического анализа на наличие данной мутации в 32 семьях с врожденной катарактой, с последующей верификацией результатов с помощью прямого секвенирования по Сэнгеру. При этом в 28 семьях из общего числа обследованных, у пораженных индивидов мутация с.1621C>T в гене FYCO1 была идентифицирована в гомозиготном состоянии и сегрегировала с фенотипами обследованных здоровых родственников (была обнаружена либо в гетерозиготном состоянии, либо отсутствовала).
Проведенный молекулярно-генетический анализ показал, что вклад CTRCT18 в Якутии составил 87,5 %. Таким образом, проведенный молекулярно-генетический анализ позволил провести дифференциальную диагностику аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18) в 32 обследованных семей. Последующая верификация всех полученных результатов с помощью прямого секвенирования по Сэнгеру фрагмента 8 экзона гена FYCO1 не выявила ложноположительных и ложноотрицательных результатов, специфичность метода составила 100 %. Ниже приведены примеры проведенного ДНК-тестирования.
Пример 1. Семья №1, пациент (шифр 779) 1990 года рождения, пол мужской, якут, диагноз - врожденная катаракта, наследственность отягощена (есть два брата и сестра с врожденной катарактой). Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемого обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача-генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пациент (шифр 780) 1992 года рождения, пол женский, якутка, диагноз - врожденная катаракта, наследственность отягощена (сестра пациента 779, есть два брата с врожденной катарактой). Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемой обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пациент (шифр 781) 2009 года рождения, пол мужской, якут, диагноз - врожденная катаракта, наследственность отягощена (брат пациента 779, есть брат и сестра с врожденной катарактой). Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемого обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Мать обследованных пациентов (шифр 782) 1970 года рождения, якутка, здорова, наследственность отягощена (трое детей с врожденной катарактой). Образец ДНК обследуемой экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемой обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гетерозиготном состоянии, что подтверждает статус гетерозиготного носительства аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Отец обследованных пациентов (шифр 783) 1968 года рождения, якут, здоров, наследственность отягощена (трое детей с врожденной катарактой). Образец ДНК обследуемого экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемого обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гетерозиготном состоянии, что подтверждает статус гетерозиготного носительства аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пример 2. Семья №2, пациент (шифр 860) 1998 года рождения, пол мужской, якут, диагноз - врожденная катаракта, наследственность отягощена, есть однояйцовый брат-близнец с врожденной катарактой. Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемого обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пациент (шифр 861) 1998 года рождения, пол мужской, якут, диагноз - врожденная катаракта, наследственность отягощена (есть однояйцовый брат-близнец с врожденной катарактой - 860). Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемого обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Родная сестра пациентов (шифр 862), 2001 года рождения, пол женский, якутка, здорова, наследственность отягощена (есть братья-близнецы с врожденной катарактой - 860 и 861). Образец ДНК обследуемой экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемой мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter) не обнаружено, что не подтверждает статус гетерозиготного носительства аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019).
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пример 3. Семья №3, пациент (шифр 819) 2004 года рождения, пол мужской, якут, диагноз - врожденная катаракта, наследственность не отягощена, артефакия на левом глазу, афакия на правом глазу. Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемого обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пример 4. Семья №4, пациент (шифр 823) 2006 года рождения, пол женский, якутка, диагноз - врожденная катаракта, наследственность не отягощена, артефакия на оба глаза. Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемой обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Пример 5. Семья №5, пациент (шифр 823) 1998 года рождения, пол женский, якутка, диагноз - врожденная катаракта, наследственность не отягощена, артефакия на оба глаза. Образец ДНК пациента экстрагирован и очищен по стандартной методике из периферической крови. В результате молекулярно-генетического исследования на наличие мутации c.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 (аутосомно-рецессивная катаракта, CTRCT18 каталог OMIM #610019) предложенным способом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров и эндонуклеазы рестрикции PstI c последующим электрофоретическим разделением продуктов гидролиза в 4%-ном агарозном геле и визуализацией с помощью системы гель-видеодокументации у обследуемой обнаружена мутация с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гомозиготном состоянии, что подтверждает диагноз наследственной аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18 каталог OMIM #610019). Рекомендуется: ДНК-тестирование близких родственников (супруг/супруга, родители/дети, братья/сестры и др.) и консультация врача генетика при планировании семьи.
Продолжительность исследования составила 4 суток. Полученный результат верифицирован с помощью прямого секвенирования фрагмента 8-го экзона гена FYCO1 по Сэнгеру.
Таким образом, заявленный способ с использованием оригинальной последовательности олигонуклеотидных праймеров (конструкция одного из которых имеет «искусственную» замену аденина на цитозин) позволяет создать сайт рестрикции для эндонуклеазы PstI и при электрофоретическом разделении продуктов гидролиза в агарозном геле с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете детектировать с высокой точностью наличие у человека нонсенс-мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter) в гене FYCO1, что, в относительно короткие сроки (средняя продолжительность исследования 4 суток), делает возможным получение достоверных результатов молекулярно-генетической диагностики врожденной формы аутосомно-рецессивной катаракты (CTRCT18), распространенной в Якутии.
Таблица
Условия детекции мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter)
Ген Последовательность праймеров от 5’ → 3’ конца ПЦР ПДРФ-анализ Электрофорез
FYCO1 №1- F- TGGCCTGCCGGAGCTCTT
№2- R-AGTGACCTGGAGGAGCAGAAGAAGCAGCGCATT		 Раунд 1. 95°С – 5 мин
Раунд 2. 95°С - 45 с
65°С - 45 с
72°С - 45 с
Раунд 3. 72°С - 7 мин
Раунд 4. 10°С - 5 мин (охлаждение).
Раунд 2 повторяется 28 раз		 1. Обработка амплификатов эндонуклеазой рестрикции PstI
(GAATGCN↑)
2. Инкубация при 37°С в течение 12 часов.		 Электрофоретическое разделение в 4% агарозном геле с бромистым этидием и визуализацией в УФ-свете.

Claims (1)

  1. Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты, включающий выделение образцов ДНК, тестируемых из периферической крови, амплификацию фрагментов ДНК с помощью специфических пар олигонуклеотидных праймеров (F)5'TTGGCCTGCCGGAGCTCTT3', (R)5'AGTGACCTGGAGGAGCAGAAGAAGCAGCGCATT3' и обработку полученных амплификатов эндонуклеазой рестрикции PstI с последующей детекцией мутации с.1621C>T (p.Gln541Ter) гена FYCO1 в ультрафиолетовом свете после электрофоретического разделения продуктов гидролиза в агарозном геле.
RU2017118528A 2017-05-30 2017-05-30 Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18) RU2648464C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017118528A RU2648464C1 (ru) 2017-05-30 2017-05-30 Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017118528A RU2648464C1 (ru) 2017-05-30 2017-05-30 Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2648464C1 true RU2648464C1 (ru) 2018-03-26

Family

ID=61707916

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017118528A RU2648464C1 (ru) 2017-05-30 2017-05-30 Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18)

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2648464C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2799541C1 (ru) * 2022-11-11 2023-07-05 Публичное акционерное общество "Центр Генетики и Репродуктивной Медицины "ГЕНЕТИКО" Способ преимплантационного генетического тестирования наследственной зонулярной катаракты

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU1817854C (ru) * 1990-03-05 1993-05-23 Республиканский Научно-Исследовательский Центр Охраны Здоровья Матери И Ребенка Минздрава Республики Казахстан Способ прогнозировани врожденной патологии у детей

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU1817854C (ru) * 1990-03-05 1993-05-23 Республиканский Научно-Исследовательский Центр Охраны Здоровья Матери И Ребенка Минздрава Республики Казахстан Способ прогнозировани врожденной патологии у детей

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
БАРАШКОВ Н.А. и др. Новая транзиция c.1621C>T (p.Gln541*) гена FYCO1 - основная причина аутосомно-рецессивной формы катаракты (CTRCT18) в Якутии: результаты полноэкзомного секвенирования. Медицинская генетика. 2016; 15(10): 25-33. CHEN J. et al. Mutations in FYCO1 Cause Autosomal-Recessive Congenital Cataracts. Am J Hum Genet. 2011 Jun 10; 88(6): 827-838. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2799541C1 (ru) * 2022-11-11 2023-07-05 Публичное акционерное общество "Центр Генетики и Репродуктивной Медицины "ГЕНЕТИКО" Способ преимплантационного генетического тестирования наследственной зонулярной катаракты

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gillespie et al. Personalized diagnosis and management of congenital cataract by next-generation sequencing
Hansen et al. Genetic heterogeneity in microcornea-cataract: five novel mutations in CRYAA, CRYGD, and GJA8
Kaul et al. Autosomal recessive congenital cataract linked to EPHA2 in a consanguineous Pakistani family
Mackay et al. Exome sequencing identifies a missense variant in EFEMP1 co-segregating in a family with autosomal dominant primary open-angle glaucoma
Zhang et al. Mutation spectrum of PAX6 in Chinese patients with aniridia
Méndez-Vidal et al. Whole-exome sequencing identifies novel compound heterozygous mutations in USH2A in Spanish patients with autosomal recessive retinitis pigmentosa
CN115141837B (zh) 一种新slc9a6突变基因及其诊断试剂
Zhu et al. Diagnosis for choroideremia in a large Chinese pedigree by next‑generation sequencing (NGS) and non‑invasive prenatal testing (NIPT)
Wang et al. A novel beaded filament structural protein 1 (BFSP1) gene mutation associated with autosomal dominant congenital cataract in a Chinese family
Said et al. Posterior microphthalmia and nanophthalmia in Tunisia caused by a founder c. 1059_1066insC mutation of the PRSS56 gene
Chen et al. Screening of the LTBP2 gene in 214 Chinese sporadic CYP1B1-negative patients with primary congenital glaucoma
CN107723359A (zh) 一种先天性白内障致病基因及其应用、检测引物、检测试剂盒
RU2648464C1 (ru) Способ ДНК-диагностики врожденной формы катаракты (CTRCT18)
Happ et al. Case report of homozygous deletion involving the first coding exons of GCNT2 isoforms A and B and part of the upstream region of TFAP2A in congenital cataract
Xiao et al. Whole exome sequencing reveals novel EYS mutations in Chinese patients with autosomal recessive retinitis pigmentosa
CN116287213A (zh) 导致mrd7型智力障碍的致病基因、检测及应用
WO2015016392A1 (ja) 筋萎縮性側索硬化症の新規病因遺伝子
CN115927585B (zh) WAS致病突变基因及在制备Wiskott-Aldrich综合征诊断试剂盒中的应用
CN115851898B (zh) 一种bpes综合征致病基因foxl2突变位点的应用及其诊断试剂
CN115851918B (zh) 一种导致视网膜营养不良的致病基因cfap410突变位点的应用及检测试剂
CN117467761B (zh) Fktn基因突变体、突变体蛋白、试剂、试剂盒及应用
CN115927354B (zh) 一种sh3tc2基因致病突变体及其在制备腓骨肌萎缩症4c型诊断试剂盒中的应用
CN116004799B (zh) Crtap致病突变体及在制备脆骨症ⅶ型诊断试剂盒中的应用
Tsujikawa et al. Chromosomal sharing in atypical cases of gelatinous drop-like corneal dystrophy
CN117487906B (zh) Gamt基因突变体、试剂、试剂盒及应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200531

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20211220