RU2643579C1 - Method for preventing ischemic neuropathy of the optic nerve by carbamylated darbepoetin in experiment - Google Patents
Method for preventing ischemic neuropathy of the optic nerve by carbamylated darbepoetin in experiment Download PDFInfo
- Publication number
- RU2643579C1 RU2643579C1 RU2017110481A RU2017110481A RU2643579C1 RU 2643579 C1 RU2643579 C1 RU 2643579C1 RU 2017110481 A RU2017110481 A RU 2017110481A RU 2017110481 A RU2017110481 A RU 2017110481A RU 2643579 C1 RU2643579 C1 RU 2643579C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- experiment
- optic nerve
- day
- days
- dose
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F9/00—Methods or devices for treatment of the eyes; Devices for putting-in contact lenses; Devices to correct squinting; Apparatus to guide the blind; Protective devices for the eyes, carried on the body or in the hand
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии.The invention relates to medicine, in particular to experimental pharmacology and ophthalmology.
По известным литературным источникам – артериальная гипертензия, существуя длительно, приводит к возникновению серьезных осложнений со стороны органа зрения [Савина Ю.Н., Долгих В.В., Погодина А.В. и др. Ранние проявления гипертонической ангиохориоретинопатии у подростков с эссенциальной артериальной гипертензией // Офтальмохирургия.– 2014.– №3.– С.48-52]. Следует отметить три главных фактора в патогенезе гипертензивной нейроретинопатии: сужение и повышение проницаемости сосудов, а также артериосклероз. Выраженное сужение артериол сетчатки из-за спазма их стенок происходит в ответ на повышение уровня артериального давления [Khurana A.R., Khurana B., Chauhan S. et al. Hypertensive retinopathy an overview // Haryana J. Ophthalmol.– 2014.– Vol. VII.– P. 64-66].According to well-known literature, arterial hypertension, existing for a long time, leads to serious complications from the organ of vision [Savina Yu.N., Dolgikh VV, Pogodina A.V. et al. Early manifestations of hypertensive angiochorioretinopathy in adolescents with essential arterial hypertension // Ophthalmic Surgery.– 2014.– No. 3.– P.48-52]. Three main factors in the pathogenesis of hypertensive neuroretinopathy should be noted: narrowing and increased vascular permeability, as well as arteriosclerosis. A marked narrowing of the retinal arterioles due to spasm of their walls occurs in response to an increase in blood pressure [Khurana A.R., Khurana B., Chauhan S. et al. Hypertensive retinopathy an overview // Haryana J. Ophthalmol .– 2014.– Vol. VII.– P. 64-66].
Дарбэпоэтин является столь же эффективным нейропротектором, как и эритропоэтин [The comparative effects of recombinant human erythropoietin and darbepoetin-alpha on cerebral vasospasm following experimental subarachnoid hemorrhage in the rabbit / Kertmen H, Gürer B, Yilmaz ER et al. // Acta Neurochir (Wien). – 2014 May; 156(5): 951-62. doi: 10.1007/s00701-014-2008-x], поэтому возможно предположить, что карбамилированный дарбэпоэтин будет проявлять протективное действие на модели ишемической нейропатии зрительного нерва на фоне артериальной гипертензии.Darbepoetin is as effective a neuroprotector as erythropoietin [The comparative effects of recombinant human erythropoietin and darbepoetin-alpha on cerebral vasospasm following experimental subarachnoid hemorrhage in the rabbit / Kertmen H, Gürer B, Yilmaz ER et al. // Acta Neurochir (Wien). - 2014 May; 156 (5): 951-62. doi: 10.1007 / s00701-014-2008-x], therefore it is possible to assume that carbamylated darbepoetin will have a protective effect on the model of ischemic optic neuropathy against arterial hypertension.
В связи с вышесказанным следует отметить актуальность изучения протективных эффектов карбамилированного дарбэпоэтина (препарата Карбамилированный дарбэпоэтин, раствор для инъекций, ООО «Фармапарк», Россия) на модели ишемической нейропатии зрительного нерва в эксперименте.In connection with the foregoing, the relevance of studying the protective effects of carbamylated darbepoetin (Carbamylated darbepoetin, injection, Pharmapark LLC, Russia) on an ischemic optic neuropathy model in an experiment should be noted.
Известен способ лечения нейропатии зрительного нерва или врожденной атрофии зрительного нерва с помощью офтальмологического нейропротектора (заявка на изобретение № 2014152906, публ. 20.08.2016), включающий введение лицу, нуждающемуся в таком лечении, офтальмологической композиции, содержащей по меньшей мере один ингибитор ангиотензинпревращающего фермента (АПФ), и фармацевтически приемлемый носитель, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один ингибитор АПФ представляет собой фозиноприл, рамиприл, каптоприл, трандолаприл и др. Указанная нейропатия зрительного нерва или атрофия зрительного нерва выбрана из группы, включающей: врожденную атрофию зрительного нерва, ишемическую нейропатию зрительного нерва, воспалительную нейропатию зрительного нерва и др. Указанная офтальмологическая композиция имеет форму твердого вещества или раствора, может быть введена перорально, парентерально, внутривенно, внутримышечно, местно или путем внутриглазного введения. Местное введение осуществляется с помощью глазных капель.A known method of treating optic neuropathy or congenital atrophy of the optic nerve using an ophthalmic neuroprotector (patent application No. 2014152906, publ. 08/20/2016), comprising administering to a person in need of such treatment an ophthalmic composition containing at least one angiotensin converting enzyme inhibitor ( ACE), and a pharmaceutically acceptable carrier, characterized in that said at least one ACE inhibitor is fosinopril, ramipril, captopril, trandolapril, etc. optic neuropathy of the optic nerve or atrophy of the optic nerve is selected from the group including: congenital atrophy of the optic nerve, ischemic neuropathy of the optic nerve, inflammatory optic neuropathy of the optic nerve, etc. The specified ophthalmic composition has the form of a solid or solution, it can be administered orally, parenterally, parenterally, intramuscularly, topically or by intraocular administration. Topical administration is via eye drops.
Основным недостатком способа является то, что в формуле изобретения не приведены дозы и режимы дозирования при разных путях введения офтальмологической композиции для лечения нейропатии зрительного нерва или врожденной атрофии зрительного нерва. Кроме того, нет данных, подтверждающих фармакологическую эффективность данной офтальмологической композиции, а именно результатов доклинических и клинических исследований.The main disadvantage of this method is that in the claims are not given doses and dosage regimens for different routes of administration of an ophthalmic composition for the treatment of optic neuropathy or congenital optic atrophy. In addition, there is no data confirming the pharmacological effectiveness of this ophthalmic composition, namely the results of preclinical and clinical studies.
Наиболее близким к заявленному решению является способ профилактики ишемии сетчатки эритропоэтином в эксперименте (патент на изобретение RU 2539629, опубл. 20.01.2015), включающий воспроизведение модели патологии и введение лабораторному животному рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг, отличающийся тем, что рекомбинантный эритропоэтин вводят однократно в 1-й день эксперимента внутрибрюшинно в качестве прекондиционирующего агента, а через 30 мин проводят моделирование ишемии сетчатки путем оказания механического давления (110 мм рт.ст.) на переднюю камеру глаза в течение 30 мин в 1-й день эксперимента.Closest to the claimed solution is a method of preventing retinal ischemia with erythropoietin in an experiment (patent RU 2539629, published January 20, 2015), including reproducing a pathology model and administering recombinant erythropoietin at a dose of 50 IU / kg to a laboratory animal, characterized in that the recombinant erythropoietin administered once per day on the 1st day of the experiment intraperitoneally as a preconditioning agent, and after 30 min, retinal ischemia is simulated by applying mechanical pressure (110 mmHg) to erednyuyu chamber of the eye for 30 minutes in the 1st day of the experiment.
Основным недостатком способа является то, что профилактика ишемии сетчатки рекомбинантным эритропоэтином в эксперименте подтверждается только результатами оценки уровня микроциркуляции в сетчатке методом лазер-Доплер флоуметрии (ЛДФ) без проведения других информативных методов анализа, а именно офтальмоскопии, электрофизиологических исследований, что не позволяет полностью говорить об эффективной профилактике ишемии сетчатки в эксперименте.The main disadvantage of this method is that the prevention of retinal ischemia with recombinant erythropoietin in the experiment is confirmed only by the results of assessing the level of microcirculation in the retina by laser-Doppler flowmetry (LDF) without other informative methods of analysis, namely ophthalmoscopy, electrophysiological studies, which does not allow us to fully talk about effective prevention of retinal ischemia in an experiment.
Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа профилактики ишемической нейропатии зрительного нерва с использованием карбамилированного дарбэпоэтина в эксперименте, подтверждаемого результатами ЛДФ, офтальмоскопии и электрофизиологических исследований.The objective of the invention is to provide an effective method for the prevention of ischemic optic neuropathy using carbamylated darbepoetin in an experiment, confirmed by the results of LDF, ophthalmoscopy and electrophysiological studies.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ профилактики ишемической нейропатии зрительного нерва карбамилированным дарбэпоэтином в эксперименте, включающий моделирование патологии путем ежедневного внутрибрюшинного (в/б) введения лабораторным крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 12,5 мг/кг массы крысы в течение 28 сут и однократного повышения внутриглазного давления (ВГД) до 110 мм рт.ст. в течение 5 мин на 26 сут эксперимента, а также фармакологическую коррекцию патологии карбамилированным дарбэпоэтином путем его введения подкожно в область холки в дозе 300 мкг/кг массы крысы 1 раз в 3 дня (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 сут эксперимента), причем L-NAME вводят через 30 мин после введения карбамилированного дарбэпоэтина, подтверждаемый результатами офтальмоскопии, лазер-Доплер флоуметрии и электроретинографии (ЭРГ) на 29 сут эксперимента.This object is achieved by the fact that a method for the prevention of ischemic optic neuropathy of the optic nerve with carbamylated darbepoetin in the experiment is proposed, which includes modeling of pathology by daily intraperitoneal (ip) administration to laboratory male rats of the Wistar line of N-nitro-L-arginine-methyl ether (L-NAME ) at a dose of 12.5 mg / kg of rat mass for 28 days and a single increase in intraocular pressure (IOP) to 110 mm Hg. within 5 min on the 26th day of the experiment, as well as pharmacological correction of the pathology with carbamylated darbepoetin by introducing it subcutaneously into the withers at a dose of 300 μg / kg of rat mass once every 3 days (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19 , 22, 25, 28 days of the experiment), and L-NAME is administered 30 minutes after the introduction of carbamylated darbepoetin, confirmed by the results of ophthalmoscopy, laser-Doppler flowmetry and electroretinography (ERG) on the 29th day of the experiment.
Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что введение карбамилированного дарбэпоэтина в дозе 300 мкг/кг массы крысы приводит к выраженной коррекции ишемической нейропатии зрительного нерва в эксперименте, так как карбамилированный дарбэпоэтин обладает цитопротективным эффектом [Derivatives of erythropoietin that are tissue protective but not erythropoietic / Leist M, Ghezzi P, Grasso G et al. // Science. – 2004 Jul 9;305(5681):239-42], что подтверждается офтальмоскопической картиной, улучшением уровня ретинальной микроциркуляции, восстановлением электрофизиологической активности сетчатки при коррекции патологии карбамилированным дарбэпоэтином.The main advantage of the proposed method is that the administration of carbamylated darbepoetin at a dose of 300 μg / kg of rat mass leads to a pronounced correction of ischemic optic neuropathy in the experiment, since carbamylated darbepoetin has a cytoprotective effect [Derivatives of erythropoietin that are tissue protective but not erythrative M, Ghezzi P, Grasso G et al. // Science. - 2004 Jul 9; 305 (5681): 239-42], which is confirmed by the ophthalmoscopic picture, an improvement in the level of retinal microcirculation, and restoration of the electrophysiological activity of the retina during the correction of pathology with carbamylated darbepoetin.
Офтальмоскопию, регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке и ЭРГ проводили на 29 сутки эксперимента.Ophthalmoscopy, registration of the level of microcirculation in the retina and ERG was performed on the 29th day of the experiment.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМThe method is carried out as follows.
Эксперименты проведены на 40 крысах-самцах линии Wistar массой 225-275 г. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим.The experiments were carried out on 40 Wistar male rats weighing 225-275 g. Quarantine-free rats were taken for the study.
Выбор крыс-самцов в эксперименте связан с наличием циклических гормональных изменений у самок и эндотелиопротективных свойств у эстрогенов, что может повлиять на чистоту эксперимента с использованием L-NAME (неселективного блокатора NO-синтаз).The choice of male rats in the experiment is associated with the presence of cyclic hormonal changes in females and endothelioprotective properties in estrogens, which may affect the purity of the experiment using L-NAME (non-selective NO synthase blocker).
Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа – группа интактных животных, вторая группа – с ишемической нейропатией зрительного нерва (контроль), третья группа – с коррекцией патологии карбамилированным дарбэпоэтином (Карбамилированный дарбэпоэтин, раствор для инъекций, ООО «Фармапарк», Россия); четвертая группа - с коррекцией патологии рекомбинантным эритропоэтином («Эпокрин» эпоэтин альфа, ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медико-биологического агентства г. Санкт-Петербург, Россия) (препарат сравнения).Each group included 10 rats. The first group is a group of intact animals, the second group with ischemic optic neuropathy (control), the third group with pathology correction with carbamylated darbepoetin (carbamylated darbepoetin, injection, Pharmapark LLC, Russia); the fourth group - with the correction of pathology by recombinant erythropoietin (Epocrine epoetin alfa, Federal State Unitary Enterprise State Research Institute for High-Purity Preparations of the Federal Medical and Biological Agency St. Petersburg, Russia) (comparison drug).
Моделирование ишемической нейропатии зрительного нерва производили путем ежедневного в/б введения лабораторным крысам-самцам линии Wistar L-NAME в дозе 12,5 мг/кг массы крысы в течение 28 сут и однократного повышения ВГД до 110 мм рт.ст. в течение 5 мин на 26 сут эксперимента. Подтверждением формирования патологии на 29 сут эксперимента служило побеление глаза лабораторных животных вследствие развития ишемии.Modeling of optic ischemic neuropathy was carried out by daily intravenous administration to laboratory male rats of the Wistar L-NAME line at a dose of 12.5 mg / kg rat weight for 28 days and a single increase in IOP to 110 mm Hg. within 5 minutes on the 26th day of the experiment. Confirmation of the formation of pathology on the 29th day of the experiment was the whitening of the eyes of laboratory animals due to the development of ischemia.
Для измерения кровяного давления у крыс (на хвосте) применена система неинвазивного измерения кровяного давления у небольших животных NIBP200 в составе комплекса Biopac-systems MP-150. На фоне ежедневного в/б введения L-NAME в течение 28 сут у крыс сформировалась артериальная гипертензия (на 29 сут эксперимента: САД 204,8 мм рт.ст., ДАД 164,2 мм рт.ст. в группе с патологией; САД 139,2 мм рт.ст., ДАД 104,2 мм рт.ст. в группе интактных, p < 0,05).To measure blood pressure in rats (on the tail), a non-invasive blood pressure measurement system for small animals NIBP200 was used as part of the Biopac-systems MP-150 complex. Against the background of the daily intravenous administration of L-NAME, arterial hypertension developed for 28 days in rats (on the 29th day of the experiment: SBP 204.8 mm Hg, DBP 164.2 mm Hg in the group with pathology; SBP 139.2 mmHg, DBP 104.2 mmHg in the intact group, p <0.05).
В третьей группе животных за 30 мин до введения L-NAME вводили карбамилированный дарбэпоэтин подкожно в область холки в дозе 300 мкг/кг массы тела крысы 1 раз в 3 дня (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 сут эксперимента). Режим дозирования связан с длительным периодом полувыведения препарата (около 69 часов).In the third group of animals, 30 minutes before the introduction of L-NAME, carbamylated darbepoetin was injected subcutaneously into the withers at a dose of 300 μg / kg of rat body weight once every 3 days (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 days of the experiment). The dosage regimen is associated with a long half-life of the drug (about 69 hours).
В четвертой группе животных за 30 мин до введения L-NAME вводили рекомбинантный эритропоэтин подкожно в область холки в дозе 50 МЕ/кг массы тела крысы 1 раз в 3 дня (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 сут эксперимента). Терапевтические дозы препаратов получены в результате переноса доз с человека на крысу с использованием формулы межвидового переноса и коэффициента пересчета доз для разных видов животных в зависимости от массы тела по Улановой И.П.In the fourth group of animals, 30 min before the introduction of L-NAME, recombinant erythropoietin was injected subcutaneously into the withers at a dose of 50 IU / kg of rat body weight once every 3 days (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 days of the experiment). Therapeutic doses of drugs were obtained as a result of dose transfer from a human to a rat using the interspecific transfer formula and the dose conversion factor for different animal species depending on body weight according to IP Ulanova.
О выраженности протективного эффекта судили по офтальмоскопической картине, электрофизиологическим изменениям и уровню микроциркуляции в сетчатке крыс на 29 сут эксперимента. Для этого под наркозом (хлоралгидрат, 300 мг/кг массы тела крысы, в/б) животное фиксировали.The severity of the protective effect was judged by the ophthalmoscopic picture, electrophysiological changes and the level of microcirculation in the rat retina on the 29th day of the experiment. For this, under anesthesia (chloral hydrate, 300 mg / kg rat body weight, ip), the animal was fixed.
Для исследования глазного дна у экспериментальных животных применена прямая офтальмоскопия на 29 сутки эксперимента (офтальмоскоп Bx a Neitz, Япония). Для расширения зрачка использовали глазные капли Ирифрин 2,5%. Офтальмоскоп приближали к глазу крысы и направляли в него пучок света с расстояния 0,5-2 см для получения чёткого изображения картины глазного дна. При неясном изображении глазного дна поворотом диска офтальмоскопа подбирали линзу, дающую чёткие изображения деталей глазного дна. Для увеличения применяли линзу Osher MaxField 78D модель OI-78M.To study the fundus in experimental animals, direct ophthalmoscopy was used on the 29th day of the experiment (Bx a Neitz ophthalmoscope, Japan). Irifrin 2.5% eye drops were used to dilate the pupil. The ophthalmoscope was brought closer to the rat’s eye and a beam of light was directed into it from a distance of 0.5-2 cm to obtain a clear picture of the fundus. With an unclear fundus image, a lens was selected by turning the ophthalmoscope disk, giving clear images of the fundus details. For magnification, the Osher MaxField 78D lens model OI-78M was used.
Функциональное состояние сетчатки оценивали по амплитуде а- и b-волн электроретинограммы. Угнетение волны b является наиболее чувствительным показателем ишемического повреждения ткани и отражает функциональное состояние сетчатки даже при отсутствии заметных структурных повреждений (Константинова Т.С. Протекторная и нейротоксическая роль оксида азота в моделях зрительных патологий [Текст]: автореф. дис. … канд. биол. наук: 03.00.02 / Т. С. Константинова. – Москва, 2009. – 26 с.). Вызванные биопотенциалы пропускались на частоте 1-1000 Гц, усиливались, усреднялись и представлялись графически на экране при помощи Biopac-systems MP-150 с компьютерной программой AcqKnowledge 4.2 (США). The functional state of the retina was evaluated by the amplitude of the a- and b-waves of the electroretinogram. The inhibition of wave b is the most sensitive indicator of ischemic tissue damage and reflects the functional state of the retina even in the absence of noticeable structural damage (Konstantinova TS Protective and neurotoxic role of nitric oxide in models of visual pathologies [Text]: author. Diss. ... cand. Biol. Sciences: 03.00.02 / T. S. Konstantinova. - Moscow, 2009. - 26 p.). The evoked biopotentials were passed at a frequency of 1-1000 Hz, amplified, averaged, and displayed graphically on the screen using Biopac-systems MP-150 with the AcqKnowledge 4.2 computer program (USA).
Оценку микроциркуляции проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-150 и датчика TSD-144 (США). Для этого производили регистрацию уровня микроциркуляции в сетчатке в десяти точках по окружности склеры с шагом 1 мм. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 20 с в каждой точке. Из полученных десяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в сетчатке в данной группе животных.Microcirculation was assessed using a Biopac-systems MP-150 laser-Doppler flowmeter and a TSD-144 sensor (USA). For this, the level of microcirculation in the retina was recorded at ten points around the circumference of the sclera with a step of 1 mm. The microcirculation level curve was recorded for 20 s at each point. From the obtained ten values, the average was deduced, which was entered into the protocol and was taken as the level of microcirculation in the retina in this animal. From 10 obtained values, the average was deduced, which was taken as the level of microcirculation in the retina in this group of animals.
Достоверность изменений абсолютных параметров определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов, средней арифметической и вероятности возможной ошибки (р) по таблицам Стьюдента. Различия оценивали как достоверные при p<0,05. Для расчётов использовали программу статистического анализа Microsoft Excel 2003.The reliability of changes in the absolute parameters was determined by the difference method of variation statistics with finding the average values of the shifts, the arithmetic mean and the probability of a possible error (p) according to Student tables. Differences were evaluated as significant at p <0.05. For calculations, we used the statistical analysis program Microsoft Excel 2003.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯEXAMPLE OF SPECIFIC PERFORMANCE
Офтальмоскопическая картина у интактной крысы Wistar на 29 сут эксперимента: диск зрительного нерва (ДЗН) круглой или овальной формы и выделяется на фоне глазного дна бледно–розовым цветом. Границы ДЗН четкие. Он лежит в плоскости сетчатой оболочки. Из середины ДЗН выходят центральные сосуды сетчатой оболочки. Анастомозов сосуды сетчатой оболочки не имеют. Вены и артерии прямолинейны, калибр равномерный, извитости нет. Общий фон розовый.The ophthalmoscopic picture in an intact Wistar rat on the 29th day of the experiment: the optic nerve disk (optic disc) is round or oval and stands out against the fundus in a pale pink color. The boundaries of the optic line are clear. It lies in the plane of the retina. The central vessels of the retina exit from the middle of the optic disc. The vessels of the retina have no anastomoses. Veins and arteries are straight, the caliber is uniform, there is no crimp. The general background is pink.
Офтальмоскопическая картина у крыс Wistar с моделированием патологии на 29 сут эксперимента: ДЗН отечный, увеличен в размерах, отек распространяется на сетчатку. Незначительная стушёванность границ ДЗН. Наблюдаются очаги «ватного» экссудата, свидетельствующие о нарастании ишемии. Вены полнокровны, извиты на периферии. Артерии сужены. Сосуды неравномерного калибра. Сетчатка бледновата (ишемизирована). Симптом Салюса-Гунна I. В единичных случаях наблюдались очаги твердого экссудата.Ophthalmoscopic picture in Wistar rats with modeling of pathology on the 29th day of the experiment: optic nerve disc edema, enlarged, edema spreads to the retina. Insignificant shading of the borders of the health care system. Foci of "cotton" exudate are observed, indicating an increase in ischemia. The veins are full-blooded, convoluted on the periphery. Arteries are narrowed. Vessels of uneven caliber. The retina is pale (ischemic). Symptom of Salus-Hun I. In isolated cases, foci of solid exudate were observed.
Офтальмоскопическая картина у крыс Wistar с коррекцией патологии карбамилированным дарбэпоэтином на 29 сут эксперимента: ДЗН круглой или овальной формы и выделяется на фоне глазного дна бледно–розовым цветом. Границы ДЗН четкие. Он лежит в плоскости сетчатой оболочки. Анастомозов сосуды сетчатой оболочки не имеют. Вены и артерии прямолинейны, калибр равномерный, извитости нет. Общий фон розовый.Ophthalmoscopic picture in Wistar rats with correction of the pathology by carbamylated darbepoetin on the 29th day of the experiment: optic discs are round or oval and stand out against the fundus pale pink. The boundaries of the optic line are clear. It lies in the plane of the retina. The vessels of the retina have no anastomoses. Veins and arteries are straight, the caliber is uniform, there is no crimp. The general background is pink.
Офтальмоскопическая картина у крыс Wistar с коррекцией патологии рекомбинантным эритропоэтином на 29 сут эксперимента: ДЗН отечный, немного увеличен в размерах. Границы ДЗН четкие. Вены и артерии прямолинейны, калибр равномерный, извитости нет. Общий фон розовый.Ophthalmoscopic picture in Wistar rats with pathology correction by recombinant erythropoietin on the 29th day of the experiment: the optic nerve disc is swollen, slightly enlarged. The boundaries of the optic line are clear. Veins and arteries are straight, the caliber is uniform, there is no crimp. The general background is pink.
Для проведения ЭРГ животных выдерживают в темноте 30 мин (Effects of the duration of dark adaptation on the retinal function of normal SD rats [Text] / L. Zahng, Y.-h. Gu, J. An [et al.] // Chinese journal of optometry ophthalmology and visual science. – 2013. – Vol.15, №6. – P.323-326), далее наркотизируют и фиксируют на столике, изолированном от электромагнитного излучения. Роговичный серебряный электрод помещают на роговицу, предварительно смоченную физраствором для более полного контакта, референтный игольчатый электрод помещают подкожно в области черепа, заземляющий игольчатый электрод помещают подкожно в области основания хвоста. Стробоскоп со вспышкой белого света, подключенный к стимулятору, размещают за спиной животного, регистрацию ЭРГ проводят в ответ на одиночную стимуляцию. Вызванные биопотенциалы пропускают на частоте 1-1000 Гц, усиливают, усредняют и представляют графически. Запись ЭРГ проводят в течение 0,5 с у каждой крысы. Для оценки степени развития ишемии сетчатки используют соотношение амплитуд b- и а-волн ЭРГ – коэффициент b/a (Константинова Т.С. Протекторная и нейротоксическая роль оксида азота в моделях зрительных патологий [Текст]: автореф. дис. … канд. биол. наук: 03.00.02 / Т.С. Константинова. – Москва, 2009. – 26 с.; Нероев В.В. Ишемия сетчатки и оксид азота [Текст]/ В.В. Нероев М.М. Архипова // Вестник РАМН. – 2003. – № 5. – С.37-40).For conducting ERG, animals are kept in the dark for 30 minutes (Effects of the duration of dark adaptation on the retinal function of normal SD rats [Text] / L. Zahng, Y.-h. Gu, J. An [et al.] // Chinese journal of optometry ophthalmology and visual science. - 2013. - Vol.15, No. 6. - P.323-326), then anesthetized and fixed on a table isolated from electromagnetic radiation. The corneal silver electrode is placed on the cornea, previously moistened with saline for more complete contact, the reference needle electrode is placed subcutaneously in the region of the skull, the grounding needle electrode is placed subcutaneously in the region of the base of the tail. A stroboscope with a flash of white light connected to the stimulator is placed behind the back of the animal; ERG is recorded in response to a single stimulation. The evoked biopotentials are passed at a frequency of 1-1000 Hz, amplified, averaged and presented graphically. ERG recording is carried out for 0.5 s in each rat. To assess the degree of development of retinal ischemia, the ratio of the amplitudes of b- and a-waves of the ERG is used - the coefficient b / a (Konstantinova T.S. Protective and neurotoxic role of nitric oxide in models of visual pathologies [Text]: abstract of thesis ... candidate of biol. Sciences: 03.00.02 / TS Konstantinova. - Moscow, 2009. - 26 p .; Neroev VV Retinal ischemia and nitric oxide [Text] / VV Neroev MM Arkhipova // Vestnik RAMS . - 2003. - No. 5. - P.37-40).
Результаты оценки электрофизиологической активности сетчатки крыс на 29 сут эксперимента представлены в таблице 1.The results of evaluating the electrophysiological activity of rat retina on the 29th day of the experiment are presented in table 1.
Таблица 1Table 1
Результаты оценки электрофизиологической активности сетчатки крыс на 29 сут эксперимента (М±m), усл.ед.The results of the assessment of the electrophysiological activity of rat retina on the 29th day of the experiment (M ± m), conv.
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных; у - р<0,05 в сравнении с группой контроля.Note: * - p <0.05 in comparison with a group of intact animals; y - p <0.05 in comparison with the control group.
В нашем исследовании при моделировании ишемической нейропатии зрительного нерва на 29 сут эксперимента коэффициент b/a снижался до 1,9±0,08 при его нормальных значениях у крыс линии Wistar 2,6±0,07 (р<0,05). На фоне коррекции патологии карбамилированным дарбэпоэтином коэффициент b/a достоверно возрастал до 2,5±0,10 (р<0,05) по сравнению с группой контроля и не отличался достоверно от значений группы интактных крыс (табл. 1). При коррекции рекомбинантным эритропоэтином b/a составил 2,3±0,06, что достоверно отличается как от значений в группе контроля (р<0,05), так и от значений в группе интактных крыс (р<0,05).In our study, when modeling ischemic neuropathy of the optic nerve on the 29th day of the experiment, the b / a coefficient decreased to 1.9 ± 0.08 at its normal values in Wistar rats of 2.6 ± 0.07 (p <0.05). Against the background of pathology correction with carbamylated darbepoetin, the b / a coefficient significantly increased to 2.5 ± 0.10 (p <0.05) compared with the control group and did not differ significantly from the values of the intact rat group (Table 1). When corrected with recombinant erythropoietin, b / a was 2.3 ± 0.06, which significantly differed both from the values in the control group (p <0.05) and from the values in the group of intact rats (p <0.05).
Уровень микроциркуляции в сетчатке интактных крыс составил 743,6±20,9 п.е. Уровень микроциркуляции после моделирования патологии в группе контроля составил на 29 сут эксперимента 417,2±13,1 п.е. (р<0,05 в сравнении с группой интактных животных), что меньше значения в группе интактных животных на 44%, и подтверждают формирование ишемии сетчатки. На фоне коррекции карбамилированным дарбэпоэтином уровень микроциркуляции в сетчатке достоверно увеличивается до 734,7±15,3 п.е. (р<0,05) по сравнению с группой контроля. При коррекции патологии рекомбинантным эритропоэтином уровень микроциркуляции в группе возрастает до 704,8±15,9 п.е. и достоверно отличается как от значений в группе контроля (р<0,05), так и от значений в группе интактных крыс (р<0,05).The level of microcirculation in the retina of intact rats was 743.6 ± 20.9 p.u. The level of microcirculation after modeling the pathology in the control group was 417.2 ± 13.1 b.p. on the 29th day of the experiment. (p <0.05 compared with the group of intact animals), which is less than the value in the group of intact animals by 44%, and confirm the formation of retinal ischemia. Against the background of carbamylated darbepoetin correction, the level of microcirculation in the retina significantly increases to 734.7 ± 15.3 p.u. (p <0.05) compared with the control group. With the correction of pathology by recombinant erythropoietin, the level of microcirculation in the group increases to 704.8 ± 15.9 p.u. and significantly different both from the values in the control group (p <0.05) and from the values in the group of intact rats (p <0.05).
Результаты исследований глазного дна при проведении офтальмоскопии обнаружили наиболее выраженные протективные эффекты у карбамилированного дарбэпоэтина в дозе 300 мкг/кг на модели ишемической нейропатии зрительного нерва у крыс Wistar. Коррекция ишемической нейропатии зрительного нерва карбамилированным дарбэпоэтином в дозе 300 мкг/кг массы тела крысы приводит к достижению более высоких значений уровня микроциркуляции в сетчатке лабораторных крыс и коэффициента b/a электороретинограммы на 29 сутки эксперимента по сравнению с группой с коррекцией рекомбинантным эритропоэтином в дозе 50 МЕ/кг массы тела крысы и достоверно данные показатели не отличаются от соответствующих значений в группе интактных крыс.The results of ocular fundus studies during ophthalmoscopy revealed the most pronounced protective effects in carbamylated darbepoetin at a dose of 300 μg / kg in a model of ischemic optic neuropathy in Wistar rats. Correction of ischemic neuropathy of the optic nerve with carbamylated darbepoetin at a dose of 300 μg / kg of rat body weight leads to higher microcirculation in the retina of laboratory rats and the coefficient b / a of electoretinograms on the 29th day of the experiment compared with the group with correction of recombinant erythropoietin at a dose of 50 IU / kg rat body weight and reliably these indicators do not differ from the corresponding values in the group of intact rats.
Таким образом, в предлагаемом способе введение карбамилированного дарбэпоэтина подкожно в область холки в дозе 300 мкг/кг массы тела крысы 1 раз в 3 дня (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 сут эксперимента) приводит к более выраженной коррекции ишемической нейропатии зрительного нерва, чем введение рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг массы тела крысы по той же схеме, что подтверждается результатами офтальмоскопии, достижением более высоких значений уровня ретинальной микроциркуляции и восстановлением электрофизиологической активности сетчатки на 29 сут эксперимента.Thus, in the proposed method, the introduction of carbamylated darbepoetin subcutaneously into the withers at a dose of 300 μg / kg of rat body weight 1 time in 3 days (1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28 days of the experiment) leads to a more pronounced correction of ischemic neuropathy of the optic nerve than the introduction of recombinant erythropoietin at a dose of 50 IU / kg of rat body weight according to the same scheme, which is confirmed by the results of ophthalmoscopy, achievement of higher levels of retinal microcirculation and restoration of electrophysiological activity of the retina and on the 29th day of the experiment.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017110481A RU2643579C1 (en) | 2017-03-29 | 2017-03-29 | Method for preventing ischemic neuropathy of the optic nerve by carbamylated darbepoetin in experiment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017110481A RU2643579C1 (en) | 2017-03-29 | 2017-03-29 | Method for preventing ischemic neuropathy of the optic nerve by carbamylated darbepoetin in experiment |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2643579C1 true RU2643579C1 (en) | 2018-02-02 |
Family
ID=61173654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017110481A RU2643579C1 (en) | 2017-03-29 | 2017-03-29 | Method for preventing ischemic neuropathy of the optic nerve by carbamylated darbepoetin in experiment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2643579C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2707057C1 (en) * | 2019-06-14 | 2019-11-21 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method of endothelial dysfunction correction with carbamylated darbepoetin in adma-like model of preeclampsia |
| RU2720103C1 (en) * | 2019-10-16 | 2020-04-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method of correction of microcirculation disorders in placenta with carbamylated darbepoetin in adma-like model of preeclampsia |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2539629C1 (en) * | 2013-07-05 | 2015-01-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prevention of ischemia of retina with erythropoetin experimentally |
| EA022418B1 (en) * | 2008-10-22 | 2015-12-30 | Кварк Фармасьютикалс, Инк. | Methods for treating eye disorders |
| RU2575773C2 (en) * | 2013-07-09 | 2016-02-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Фармапарк" (ООО "Фармапарк") | Carbamylated darbepoetin 9c-depo, method for production thereof and use thereof as medicinal agent having cytoprotective action |
-
2017
- 2017-03-29 RU RU2017110481A patent/RU2643579C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA022418B1 (en) * | 2008-10-22 | 2015-12-30 | Кварк Фармасьютикалс, Инк. | Methods for treating eye disorders |
| RU2539629C1 (en) * | 2013-07-05 | 2015-01-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for prevention of ischemia of retina with erythropoetin experimentally |
| RU2575773C2 (en) * | 2013-07-09 | 2016-02-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Фармапарк" (ООО "Фармапарк") | Carbamylated darbepoetin 9c-depo, method for production thereof and use thereof as medicinal agent having cytoprotective action |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| KERTMEN H et al. The comparative effects of recombinant human erythropoietin and darbepoetin-alpha on cerebral vasospasm following experimental subarachnoid hemorrhage in the rabbit. Acta Neurochir (Wien), 2014 May;156(5):951-62. * |
| RAMIREZ R et al. Carbamylated darbepoetin derivative prevents endothelial progenitor cell damage with no effect on angiogenesis. J Mol Cell Cardiol. 2009 Dec; 47(6): 781-8. * |
| САМСОНОВА К.И. и др. Эффективность карбамилированного дарбэпоэтина (СdEPO) при экспериментальной ишемии головного мозга. Современное решение актуальных научных проблем медицины, Материалы конференции, 15-16 марта 2017 г., Н. Новгород, с. 197. * |
| САМСОНОВА К.И. и др. Эффективность карбамилированного дарбэпоэтина (СdEPO) при экспериментальной ишемии головного мозга. Современное решение актуальных научных проблем медицины, Материалы конференции, 15-16 марта 2017 г., Н. Новгород, с. 197. KERTMEN H et al. The comparative effects of recombinant human erythropoietin and darbepoetin-alpha on cerebral vasospasm following experimental subarachnoid hemorrhage in the rabbit. Acta Neurochir (Wien), 2014 May;156(5):951-62. RAMIREZ R et al. Carbamylated darbepoetin derivative prevents endothelial progenitor cell damage with no effect on angiogenesis. J Mol Cell Cardiol. 2009 Dec; 47(6): 781-8. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2707057C1 (en) * | 2019-06-14 | 2019-11-21 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method of endothelial dysfunction correction with carbamylated darbepoetin in adma-like model of preeclampsia |
| RU2720103C1 (en) * | 2019-10-16 | 2020-04-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method of correction of microcirculation disorders in placenta with carbamylated darbepoetin in adma-like model of preeclampsia |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sugiyama et al. | Effects of fasudil, a Rho-associated protein kinase inhibitor, on optic nerve head blood flow in rabbits | |
| Tesfaye et al. | Arterio-venous shunting and proliferating new vessels in acute painful neuropathy of rapid glycaemic control (insulin neuritis) | |
| Peresypkina et al. | Correction of retinal angiopathy of hypertensive type by minoxidil, sildenafil in experiment | |
| Krempler et al. | Simvastatin improves retinal ganglion cell survival and spatial vision after acute retinal ischemia/reperfusion in mice | |
| RU2643579C1 (en) | Method for preventing ischemic neuropathy of the optic nerve by carbamylated darbepoetin in experiment | |
| Yamamoto et al. | Inner retinal changes in acute-phase Vogt-Koyanagi-Harada disease measured by enhanced spectral domain optical coherence tomography | |
| Chen et al. | Changes in retinal vasculature and thickness after small incision lenticule extraction with optical coherence tomography angiography | |
| Bouskila et al. | Scotopic vision in the monkey is modulated by the G protein-coupled receptor 55 | |
| US6218411B1 (en) | Therapeutics for diabetic complications | |
| Li et al. | Neuroprotective effect of minocycline on rat retinal ischemia-reperfusion injury | |
| Kurysheva | Assessment of the optic nerve head, peripapillary, and macular microcirculation in the newly diagnosed patients with primary open-angle glaucoma treated with topical tafluprost and tafluprost/timolol fixed combination | |
| Uyhazi et al. | Treatment potential for LCA5-associated leber congenital amaurosis | |
| Sanjari et al. | Visual outcomes of adding erythropoietin to methylprednisolone for treatment of retrobulbar optic neuritis | |
| RU2663643C1 (en) | Method for correcting ischemic neuropathy of the optic nerve with a dimethylaminoethanol derivative 7-16 in an experiment | |
| MUNDORF et al. | The safety and efficacy of switching timolol maleate 0.5% solution to timolol hemihydrate 0.5% solution given twice daily | |
| Eibenberger et al. | Effects of intravitreal dexamethasone implants on retinal oxygen saturation, vessel diameter, and retrobulbar blood flow velocity in ME secondary to RVO | |
| Breusegem et al. | The effect of trabeculectomy on ocular pulse amplitude | |
| Sakai et al. | Comparison of latanoprost monotherapy and combined therapy of 0.5% timolol and 1% dorzolamide in chronic primary angle-closure glaucoma (CACG) in Japanese patients | |
| Mehlsen et al. | Lack of effect of short‐term treatment with amlodipine and lisinopril on retinal autoregulation in normotensive patients with type 1 diabetes and mild diabetic retinopathy | |
| KOLLARITS et al. | Norepinephrine therapy of ischemic optic neuropathy | |
| Peresypkina | A comparative evaluation of the efficacy of dimethylaminoethanol derivative 7–16, C7070 and picamilon in correction of experimental hypertensive neuroretinopathy. Research Results in Pharmacology 4 (3): 1–8 | |
| RU2575966C2 (en) | Method of treating neovascular glaucoma | |
| Lee et al. | Effects of a dorzolamide/timolol fixed combination on diurnal intraocular pressure, heart rate, blood pressure, and ocular perfusion pressure in normal-tension glaucoma | |
| RU2578953C1 (en) | Method of treatment of glaucomatous optic neuropathy | |
| Van Eijgen et al. | The relevance of arterial blood pressure in the management of glaucoma progression: a systematic review |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190605 Effective date: 20190605 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: SUB-LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190619 Effective date: 20190619 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210330 |