RU2643331C2 - Способы бета-глюкановой иммунотерапии - Google Patents

Способы бета-глюкановой иммунотерапии Download PDF

Info

Publication number
RU2643331C2
RU2643331C2 RU2014148153A RU2014148153A RU2643331C2 RU 2643331 C2 RU2643331 C2 RU 2643331C2 RU 2014148153 A RU2014148153 A RU 2014148153A RU 2014148153 A RU2014148153 A RU 2014148153A RU 2643331 C2 RU2643331 C2 RU 2643331C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
glucan
individual
immune cells
binding
soluble
Prior art date
Application number
RU2014148153A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2014148153A (ru
Inventor
Уилльям Дж. ГРОССМАН
Мэри А. ЭНТОНИСЭМИ
Нандита БОУЗ
Ричард М. УОЛШ
Мариана И. НЕЛЬСОН
Майкл Э. ДЭНИЭЛСОН
Кайл С. МИЧЕЛ
Original Assignee
Байотера, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Байотера, Инк. filed Critical Байотера, Инк.
Publication of RU2014148153A publication Critical patent/RU2014148153A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2643331C2 publication Critical patent/RU2643331C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39583—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials not provided for elsewhere, e.g. haptens, coenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39575—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from other living beings excluding bacteria and viruses, e.g. protozoa, fungi, plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
    • G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • G01N2400/12—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar
    • G01N2400/24—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar beta-D-Glucans, i.e. having beta 1,n (n=3,4,6) linkages between saccharide units, e.g. xanthan

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение в одном из аспектов относится к способу идентификации связывания β-глюкана с иммунными клетками индивида, в другом – к способу улучшения β-глюкановой иммунотерапии у индивида. Способ идентификации связывания β-глюкана с иммунными клетками индивида включает получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление растворимого β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови, инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих растворимому β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение растворимого β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками. Способ улучшения β-глюкановой иммунотерапии у индивида включает идентификацию индивида как: имеющего титр антител IgG против β-глюкана 20000 или менее, или имеющего не более чем 10% иммунных клеток в образце крови индивида, связывающих с растворимым β-глюканом дрожжей после инкубации; и совместно введение индивиду растворимого β-глюкана дрожжей и препарата антител, содержащего сыворотку от индивида, имеющего титр антител IgG против β-глюкана по меньшей мере 25000, или моноклональное антитело, которое специфически связывает растворимый β-глюкан дрожжей. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 10 ил., 1 табл., 2 пр.

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки
По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США 61/640834, поданной 01 мая 2012 года, и предварительной заявки на патент США 61/640397, поданной 30 апреля 2012 года, каждая из которых включена в настоящую заявку в качестве ссылки.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение в одном из аспектов относится к способу идентификации связывания β-глюкана с иммунными клетками индивида. В основном, способ включает получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.
В некоторых вариантах осуществления изобретения обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками, может включать приведение образца в контакт с моноклональным антителом, которое специфично связывается с β-глюканом. В некоторых вариантах осуществления изобретения моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.
В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может дополнительно включать получение второго образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть второго образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу улучшения β-глюкановой иммунотерапии у индивида. В основном, способ включает идентификацию индивида, имеющего низкий уровень связывания, и совместное введение индивиду β-глюкана и препарата антител, способного преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания. В некоторых вариантах осуществления изобретения идентификация индивида, имеющего низкий уровень связывания, может включать получение образца крови индивида, где образец крови содержит титр антител против β-глюкана, измерение титра антитела против β-глюкана по меньшей мере в части образца крови и идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, если титр антител против β-глюкана имеет значение меньше заранее определенного уровня. В других вариантах осуществления изобретения идентификация индивида, имеющего низкий уровень связывания, может включать получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками, и идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, если β-глюкан связывается не более чем с 10% иммунных клеток.
В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать сыворотку крови индивида, имеющего высокий уровень связывания. В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, такое как BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV. В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать внутривенный иммуноглобулин. В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с антителом или фрагментом антитела, таким как Fc-фрагмент.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител вводят совместно одновременно. В других вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител вводят совместно в разные моменты времени. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител вводят совместно в различные области.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.
Изложенная выше сущность настоящего изобретения не предназначена для описания каждого раскрытого варианта осуществления или каждого варианта применения настоящего изобретения. Последующее описание более подробно раскрывает настоящее изобретение на примере иллюстративных вариантов осуществления изобретения. В некоторых местах описания заявки приведены списки примеров, эти примеры могут быть использованы в различных комбинациях. В каждом случае приведенный список служит только в качестве типичной группы и не должен рассматриваться как исчерпывающий список.
Краткое описание чертежей
Фиг.1. Данные проточной цитометрии, показывающие различное связывание β-глюкана (PGG) с полиморфоядерными лейкоцитами в цельной крови здорового человека.
Фиг.2. Данные, показывающие различное связывание β-глюкана с нейтрофилами в цельной крови здорового человека.
Фиг.3. Данные, показывающие различное связывание β-глюкана с моноцитами в цельной крови здорового человека.
Фиг.4. Данные сравнения титров антител против β-глюкана у индивидов с низким уровнем связывания и высоким уровнем связывания.
Фиг.5. Сравнение среднего числа дней терапии пациентов в контрольной и исследуемой группах двухгруппового, открытого, рандомизированного, многоцентрового клинического исследования.
Фиг.6. Данные, показывающие, что сыворотка крови индивида с высоким уровнем связывания способна повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.
Фиг.7. Данные, показывающие, что антитела против β-глюкана способны повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.
Фиг.8. Данные, показывающие, что внутривенный иммуноглобулин способен повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.
Фиг.9. Данные, показывающие связывание конъюгатов PGG-антитело с ПМЛ.
Фиг.10. Данные, показывающие связывание конъюгатов PGG-ВВИГ с ПМЛ.
Подробное описание иллюстративных вариантов осуществления изобретения
В настоящем изобретении описаны способы, относящиеся к применению растворимого β-глюкана в качестве компонента иммунотерапии. Описанные способы основаны на данных изучения различного связывания β-глюкана иммунными клетками в различных популяциях здоровых людей. Неожиданно было обнаружено, что индивиды с высоким уровнем связывания β-глюкана имеют более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам скрининга индивидов для выявления индивидов с высоким уровнем связывания и индивидов с низким уровнем связывания. Настоящее изобретение также относится к способам, которые в основном включают преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания, и таким образом увеличения числа лиц, для которых иммунотерапия, основанная на использовании β-глюкана, может оказаться эффективной. Настоящее изобретение также относится к схемам лечения, которые включают периодический мониторинг индивида на предмет того, является ли он в данный момент индивидом с высоким уровнем связывания или индивидом с низким уровнем связывания, и при необходимости корректировку получаемой индивидом терапии для стимулирования достижения или поддержания статуса индивида с высоким уровнем связывания.
β-Глюканы представляют собой полимеры глюкозы, полученные из различных микробиологических и растительных источников, включая, например, дрожжи, бактерии, микроскопические водоросли, водоросли, грибы, овес и ячмень. Из них β-глюканы дрожжей высоко ценятся за свои иммуномодулирующие свойства. Дрожжевые β-глюканы могут находиться в различных формах, таких как, например, дрожжи в неизменном виде, зимозан, очищенные частицы целого глюкана, солюбилизированный полисахарид зимозан или высокоочищенные растворимые β-глюканы различной молекулярной массы. Структурно дрожжевые β-глюканы состоят из глюкозных мономеров, организованных как основная цепь из молекул глюкопиранозы, связанных β-(1,3) связью, с периодическими β-(1,3) глюкопиранозными ответвлениями, связанными с основной цепью при помощи β-(1,6) гликозидных связей. Различные формы дрожжевых β-глюканов могут по-разному функционировать. На механизм, при помощи которого дрожжевые β-глюканы осуществляют свое иммуномодулирующее действие, могут оказывать влияние структурные различия между различными формами β-глюканов, такие как, например, их твердочастичная или растворимая природа, третичная структура, длина основной цепи, длина боковой цепи и частота боковых цепей. Иммуностимулирующие функции дрожжевых β-глюканов также зависят от участвующих во взаимодействии рецепторов в различных типах клеток у различных видов, которые опять же могут зависеть от структурных свойств β-глюканов.
Как правило, β-глюкановая иммунотерапия может включать введение индивиду любой подходящей формы β-глюкана или любой комбинации двух или более форм β-глюкана. Подходящие β-глюканы и получение подходящих β-глюканов из их природных источников описаны, например, в публикации заявки на патент США US2008/0103112 A1. В некоторых случаях β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых случаях β-глюкан может представлять собой или быть получен из β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозы, также именуемой в настоящем описании как PGG (IMPRIME PGG, Biothera, Eagan, MN), высокоочищенной и хорошо известной формы растворимого β-глюкана, полученного из дрожжей. Кроме того, иммунотерапия на основе β-глюкана может включать применение, например, модифицированного и/или дериватизированного β-глюкана, такого как те β-глюканы, которые описаны в Международной патентной заявке PCT/US12/36795. В других случаях β-глюкановая иммунотерапия может включать введение, например, твердочастичного-растворимого β-глюкана или твердочастичного-растворимого препарата β-глюкана, каждый из которых описан, например, в патенте США 7981447.
Как отмечалось выше, дрожжевые β-глюканы высоко ценятся за свои иммуномодулирующие свойства. В частности, было показано, что PGG β-глюкан обладает преклинической активностью против различных типов злокачественных новообразований, когда вводится в комбинации со связанными с опухолью моноклональными антителами (mAb). Примеры типов злокачественных новообразований и связанных с ними связанных с опухолью mAb включают, например, Т-клеточную лимфому (анти-MUC1, анти-GD2), карциному легкого (анти-MUC1), аденокарциному молочной железы (анти-MMTV), карциному яичника (бевацизумаб), немелкоклеточную карциному легкого (бевацизумаб, цетуксимаб), колоректальный рак (цетуксимаб), хроническую лимфоцитарную лейкемию и неходжкинскую лимфому (ритуксимаб) и карциному поджелудочной железы (цетуксимаб, анти-MUC1). β-Глюканы могут индуцировать нейтрофилы, которые затем рекрутируются в опухоли, меченные связанным с опухолью моноклональным антителом. Рекрутированные нейтрофилы активируются путем двойного связывания рецептора комплемента 3-го типа (CR3) с iC3b/C3b - на поверхности меченных mAb опухолевых клеток - и с введенным β-глюканом, для уничтожения опухолевых клеток.
Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что существуют различные популяции индивидов: одна популяция обладает относительно высокой способностью связывания β-глюкана с первоначальными иммунными клетками в цельной крови; другая популяция обладает относительно низкой способностью связывания β-глюкана с первоначальными иммунными клетками в цельной крови. Это наблюдение оказалось полностью неожиданным с точки зрения данных, полученных на моделях иммунитета мышей и в ходе исследований с использованием изолированных иммунных клеток человека. Многие индивиды изначально обладают некоторым уровнем связывания β-глюкана с иммунными клетками, низким уровнем подверженности воздействию β-глюканов (например, фиг.1, «De novo»). При введении экзогенного β-глюкана, у индивидов, имеющих низкий уровень связывания, имеет место умеренное увеличение процента иммунных клеток, связывающих β-глюкан, в то время как у индивидов, имеющих высокий уровень связывания, имеет место значительное увеличение процента первоначальных иммунных клеток, связывающих β-глюкан (фиг.1, «+Экзогенный PGG»). На фиг.1 и фиг.2 приведены данные, отражающие связывание β-глюкана с полиморфоядерными лейкоцитами (ПМЛ), и на фиг.3 (моноциты) показано, что различное связывание также имеет место в случае других популяций первоначальных иммунных клеток. Кроме того, у индивидов, имеющих высокий уровень связывания, также имеет место тенденция к синтезу большего количества хемоаттрактантных цитокинов и хемокинов, таких как, например, IL-8, MCP, MIP-1 и т.д.
Используемый в настоящем описании термин «статус индивида, имеющего высокий уровень связывания» относится к индивиду, который обладает заранее определенным процентным содержанием популяции конкретных иммунных клеток, которая связывается с экзогенно введенным β-глюканом. Популяция иммунных клеток, используемая для определения того, обладает ли индивид высоким уровнем связывания или низким уровнем связывания, может представлять собой, например, полиморфоядерные лейкоциты (ПМЛ) или моноциты. Индивид может считаться обладающим высоким уровнем связывания, если по меньшей мере 10% ПМЛ или моноцитов в образце крови этого индивида связываются с экзогенно введенным β-глюканом. Таким образом, индивид может быть индивидом, имеющим высокий уровень связывания, если по меньшей мере 10%, по меньшей мере 12%, по меньшей мере 15% или, по меньшей мере 40% ПМЛ или моноцитов в образце крови индивида связываются с экзогенно введенным β-глюканом (см., например, фиг.2 и фиг.3). В некоторых случаях экзогенно введенный β-глюкан может включать PGG, находящийся в конченой концентрации от 10 мкг/мл до 100 мкг/мл. Термин «статус индивида, имеющего низкий уровень связывания» относится к индивиду, который не обладает статусом индивида, имеющего высокий уровень связывания.
Кроме того, индивиды, имеющие высокий уровень связывания, могут иметь более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания (фиг.4). Как правило, титр антител против β-глюкана для индивида, имеющего высокий уровень связывания, может иметь значение по меньшей мере 25000, такое как, например, по меньшей мере 30000, по меньшей мере 35000, по меньшей мере 40000, по меньшей мере 45000, по меньшей мере 50000, по меньшей мер 55000 или по меньшей мере 60000 (см., например, фиг.4). Термин «титр антител против β-глюкана», как правило, относится к IgG. Однако в некоторых случаях присутствие IgM может компенсировать пониженный титр IgG, для присвоения статуса «индивид, имеющий высокий уровень связывания». Как более подробно описано ниже, статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, может оказывать влияние на ответ индивида на β-глюкановую терапию. У индивида, имеющего низкий уровень связывания, можно искусственно вызвать ответ на β-глюкановую терапию, похожий на ответ индивида, имеющего высокий уровень связывания, путем введения определенного антитела против β-глюкана, как части β-глюкановой терапии.
Таким образом, в одном из аспектов настоящее изобретение относится к скринингу индивида для выявления того, является ли индивид в данный момент времени индивидом с высоким уровнем связывания или индивидом с низким уровнем связывания. Способ в основном включает получение образца крови индивида, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть этого образца, инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.
Образец крови включает часть крови достаточную для того, чтобы она включала иммунные клетки. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, образец крови может представлять собой цельную кровь. В других вариантах осуществления изобретения образец крови может быть по меньшей мере частично обработан с целью удаления одного или нескольких компонентов цельной крови, которые не являются необходимыми для скрининг-анализа, такие как, например, эритроциты. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, образец крови может включать продукт крови, такой как, например, любая фракция крови, которая включает по меньшей мере часть лейкоцитарной пленки.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как, например, β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан, связавшийся с иммунными клетками, может быть обнаружен путем приведение образца в контакт с моноклональным антителом, которое специфично связывается с этим β-глюканом. Используемый в настоящем описании термин «специфично» и его варианты означает имеющий отличающуюся или не широкую (т.е. неспецифичную) аффинность в любой степени к конкретной мишени. Примеры моноклональных антител, которые специфично связываются с β-глюканом, включают, например, моноклональные антитела, идентифицированные как BfD I, BfD II, BfD III и/или BfD IV (Biothera, Eagan, MN), каждое из которых описано в патенте США 6294321.
Чтобы облегчить обнаружение антитела против β-глюкана, которое связывается со связанным с иммунной клеткой β-глюканом, антитело против β-глюкана может содержать детектируемую метку. В альтернативном варианте связанное антитело против β-глюкана может быть обнаружено с использованием меченного вторичного антитела. В обоих случаях подходящие метки включают, например, флуоресцентную метку, ферментную метку, колориметрическую метку или радиоактивную метку.
Способ также может включать иммобилизацию связанных с β-глюканом иммунных клеток на субстрате. В некоторых случаях иммунные клетки могут быть иммобилизованы до того, как они будут приведены в контакт с β-глюканом, например, путем приведения по меньшей мере части образца крови в контакт с субстратом до приведения образца крови в контакт с β-глюканом. В других вариантах осуществления изобретения иммунные клетки могут быть иммобилизованы после того, как они будут приведены в контакт с β-глюканом. В обоих случаях иммунные клетки могут быть иммобилизованы с использованием любых подходящих материалов, таких как, например, иммобилизованное антитело, которое специфично связывается с целевой популяцией иммунных клеток.
В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать стадию отмывки для удаления не связавшихся компонентов анализа. Например, некоторые варианты осуществления изобретения могут включать стадию отмывки несвязавшегося β-глюкана и/или несвязавшихся компонентов образца крови от связанных с β-глюканом иммунных клеток. В качестве другого примера, некоторые варианты осуществления изобретения могут включать стадию отмывки несвязавшихся иммунных клеток от субстрата, если он присутствует. В качестве еще одного примера, некоторые варианты осуществления изобретения могут включать стадию отмывки несвязавшихся β-глюкан-специфичных антител от β-глюкана, связанного с иммунными клетками.
В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать повторный продолжительный скрининг индивида для мониторинга того, является ли индивид индивидом с высоким уровнем связывания или индивидом с низким уровнем связывания с течением времени. Некоторые онкологические пациенты, получающие β-глюкановую иммунотерапию, демонстрируют снижение титра антител против β-глюкана с течением времени при повторном введении β-глюкана. Эти пациенты также демонстрируют продолжительное снижение количества связанных с β-глюканом иммунных клеток (например, периферических ПМЛ). Это явление может быть по меньшей мере частично, обусловлено рекрутированием связанных с β-глюканом иммунных клеток из кровяного русла в микроокружение опухоли. В другом случае, это может быть, по меньшей мере, частично, обусловлено изменением плазматических факторов, влияющих на связывание β-глюкана с циркулирующими иммунными клетками (например, снижение с течением времени количества антител против β-глюкана).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания. В двухгрупповом, открытом, рандомизированном, многоцентровом клиническом исследовании 795 индивидов с рецидивным/прогрессирующим колоректальным раком после по меньшей мере двух ранее полученных химиотерапевтических курсов лечения разделили на контрольную группу и исследуемую группу. Индивиды в контрольной группе получали лечение цетуксимабом. Индивиды в исследуемой группе получали лечение цетуксимабом+4 мг/кг PGG β-глюкана. На фиг.5 показано, что индивиды, получавшие β-глюкан, как часть своей иммунотерапии, находились на лечении в течение более длительного среднего периода времени по сравнению с индивидами, получавшими только цетуксимаб, эффект был наиболее выражен у индивидов, имеющих высокий уровень связывания. В этом контексте продолжительность лечения является показателем успешности терапии, так как более длительное время лечения свидетельствует о положительном терапевтическом результате, в то время как более короткое время лечения свидетельствует о неблагоприятном исходе. Таким образом, существуют клинические последствия статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, по сравнению со статусом индивида, имеющего низкий уровень связывания.
Эти клинические последствия проявления статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, по сравнению со статусом индивида, имеющего низкий уровень связывания, означают, что возможность преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания может иметь клинические последствия для этого индивида. На фиг.6 показано, что сыворотка крови индивида с высоким уровнем связывания способна повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) индивида с низким уровнем связывания. Увеличение количества моноклональных антител против β-глюкана также способно повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) в сыворотке крови, полученной от индивида с низким уровнем связывания (фиг.7). Кроме того, внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ), продукт крови, содержащий объединенный поливалентный IgG от многих доноров (как правило, многих сотен и даже тысяч доноров, и, таким образом, естественным образом содержащий антитела против β-глюкана), также способен повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) в сыворотке крови, полученной от индивида с низким уровнем связывания (фиг.8). Следовательно, является возможным преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания, путем введения индивиду, в качестве компонента иммунотерапии, комбинации β-глюкана и препарата, содержащего антитела против β-глюкана. Важно, что преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания может улучшить клинический исход иммунотерапии.
Таким образом, способ включает совместное введение β-глюкана и препарата антител, способного преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания. Используемый в настоящем описании термин «совместное введение» относится к двум или более компонентам комбинации, вводимым так, что терапевтическое или профилактическое действие этой комбинации может быть сильнее, чем терапевтическое или профилактическое действие каждого компонента, вводимого отдельно. Два компонента могут быть совместно введены одновременно или последовательно. Одновременно вводимые компоненты могут находиться в одной или нескольких фармацевтических композициях. Последовательное совместное введение двух или более компонентов включает случаи, в которых компоненты вводятся так, чтобы оба компонента оказались одновременно биодоступными после того, как они оба были введены. Независимо от того, является ли совместное введение компонентов одновременным или последовательным, компоненты могут быть совместно введены в одну область или в различные области.
Аналогичное преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания может быть осуществлено путем введения индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с любым антителом или частью антитела. На фиг.9 приведены данные, иллюстрирующие, что относительно низкое связывание PGG с ПМЛ в цельной крови (Imp Ref, второе изображение) изменяется на высокое связывание путем конъюгации PGG или с BTH1704 (анти-MUC1, патент США 6204366, Biothera, Inc, Eagan, MN, третье изображение) или с ERBITUX (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN, четвертое изображение) противоопухолевыми антителами. На фиг.10 также показано, что относительно низкое связывание PGG с ПМЛ в цельной крови (Imp Ref, второе изображение) изменяется на высокое связывание путем конъюгации PGG с внутривенным иммуноглобулином (ВВИГ, Biolegend, San Diego, CA).
Таким образом, в другом аспекте способ включает введение индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с антителом, терапевтическим антителом, противоопухолевым антителом или фрагментом антитела, таким как Fc-фрагмент антитела. Модифицированные и/или дериватизированные PGG, включая PGG конъюгаты части молекулы PGG и антитела, описаны в Международной патентной заявке PCT/US12/36795, которые также могут быть использованы в конъюгатах с фрагментами антител. Часть молекулы PGG может представлять собой или быть получена из β-1,3/1,6 глюкана. В этом контексте термин «получена из» означает, что конъюгат обязательно может быть получен путем создания ковалентной связи, которая замещает один или несколько атомов PGG β-глюкана. Используемый в настоящем описании термин «полученный из β-1,3/1,6 глюкана» относится к части PGG β-глюкана, которая остается частью конъюгата после замещения одного или нескольких атомов PGG с образованием ковалентной связи конъюгата.
Используемый в настоящем описании термин «способный преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания» относится к свойству изменять статус связывания индивида с низкого уровня связывания (например, ниже заранее определенного порогового значения) на высокий уровень связывания (например, выше заранее определенного порогового значения). Статус индивида как индивида, имеющего низкий уровень связывания, или индивида, имеющего высокий уровень связывания, может быть определен по степени связывания β-глюкана с иммунными клетками по меньшей мере в части образца крови, полученного от индивида. В альтернативном варианте, статус связывания индивида может быть определен по значению титра антител против β-глюкана, измеренному по меньшей мере в части образца крови, полученного от индивида.
В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может содержать сыворотку крови индивида, имеющего высокий уровень связывания.
В других вариантах осуществления изобретения препарат антител может содержать внутривенный иммуноглобулин. В еще других вариантах осуществления изобретения препарат антител может содержать моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом. Примеры моноклональных антител, которые специфично связываются с β-глюканом, включают, например, BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.
β-Глюкан, препарат антител и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в составе композиции вместе с носителем. Используемый в настоящем описании термин «носитель» включает любой растворитель, диспергирующую среду, наполнитель, оболочку, разбавитель, антибактериальное средство и/или противогрибковое средство, изотоническое средство, средство, замедляющее всасывание, буфер, раствор-носитель, суспензию, коллоидную систему и тому подобное. Использование таких сред и/или средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно из уровня техники. За исключением случаев, когда любые стандартные среды или средства являются несовместимыми с β-глюканом или антителом, их использование в терапевтических композициях предполагается. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в состав этих композиций.
«Фармацевтически приемлемым» считается материал, который не является нежелательным с биологической или иной точки зрения, т.е. материал может вводиться индивиду вместе с β-глюканом и/или антителом, не вызывая нежелательных биологических эффектов, или без вредного взаимодействия с любым из других компонентов фармацевтической композиции, в которой он содержится.
β-Глюкан, препарат антител и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в составе фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител могут находиться в составе одного препарата. В других вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител могут находиться в составе разных препаратов. Фармацевтическая композиция может быть изготовлена в различных и/или многих формах, приспособленных к одному или нескольким предпочтительным способам введения. Таким образом, фармацевтическая композиция может быть введена одним или несколькими известными способами, включая, например, пероральное, парентеральное (например, внутрикожное, чрескожное, подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшинное и т.д.) или местное (например, интраназальное, внутрилегочное, интрамаммарное, интравагинальное, внутриматочное, внутрикожное, чрескожное, ректальное и т.д.) введение. Фармацевтическая композиция или ее часть может быть введена на поверхность слизистой оболочки, например, путем введения, например, на слизистую оболочку носа или дыхательных путей (например, в виде спрея или аэрозоля). Фармацевтическая композиция или ее часть также может быть введена путем длительного или замедленного высвобождения.
В целях удобства препарат может быть изготовлен в виде лекарственной формы с отдельными единицами дозы, и может быть получен способами, хорошо известными в области фармацевтики. Способы получения композиции с фармацевтически приемлемым носителем включают стадию приведения β-глюкана и/или препарата антител в контакт с носителем, который содержит один или более вспомогательных ингредиентов. В основном, препарат может быть получен путем равномерного и/или непосредственного приведения активного химического соединения в контакт с жидким носителем, тонко измельченным твердым носителем или им обоими, и затем, при необходимости, формования продукта в необходимые препараты.
β-Глюкан, препарат антител и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в любой подходящей форме, включая без ограничений раствор, суспензию, эмульсию, спрей, аэрозоль или любую форму смеси. Композиция может вводиться в рецептуру препарата с любым фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, носителем или наполнителем. Например, препарат может быть получен в виде стандартной лекарственной формы для местного применения, такой как, например, крем, мазь, аэрозольный препарат, неаэрозольный спрей, гель, лосьон и тому подобное. Препарат также может включать одну или несколько добавок, в том числе такие как, например, адъювант, средство, усиливающее проникновение через кожу, краситель, ароматизатор, вкусовая добавка, увлажнитель, загуститель и тому подобное.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как, например, β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.
В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение индивиду β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 100 нг/кг до примерно 50 мг/кг, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способы могут выполняться путем введения β-глюкана в дозе, находящейся за пределами этого диапазона. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение индивиду β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу от примерно 10 мкг/кг до примерно 10 мг/кг, такую как, например, доза примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг или примерно 10 мг/кг. В одном конкретном варианте осуществления изобретения способ включает введение β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу примерно 4 мг/кг.
В альтернативном варианте доза может быть рассчитана с использованием значения фактической массы тела, измеренного непосредственно перед началом курса лечения. Для дозировок, рассчитанных таким образом, площадь поверхности тела (м2) вычисляют непосредственно перед началом курса лечения по методу Дюбуа: м2 = (масса в кг0,425×рост в см0,725)×0,007184. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 0,01 мг/м2 до примерно 10 мг/м2.
В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение индивиду антитела, которое специфично связывается с β-глюканом, в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 100 нг/кг до примерно 50 мг/кг, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способы могут выполняться путем введения антитела в дозе, находящейся за пределами этого диапазона. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение индивиду антитела в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу от примерно 10 мкг/кг до примерно 5 мг/кг, например, дозу от примерно 100 мкг/кг до примерно 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, может быть введено в виде внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ), продукта крови, содержащего объединенный поливалентный IgG от многих доноров (как правило, многих сотен и даже тысяч доноров, и, таким образом, естественным образом содержащий антитела против β-глюкана). В таких вариантах осуществления изобретения ВВИГ может быть введен в дозе от примерно 0,1 г/кг до примерно 2,0 г/кг, такой как, например, 0,1 г/кг, 0,2 г/кг, 0,3 г/кг, 0,4 г/кг, 0,5 г/кг, 0,6 г/кг, 0,7 г/кг, 0,8 г/кг, 0,9 г/кг, 1,0 г/кг, 1,1 г/кг, 1,2 г/кг, 1,3 г/кг, 1,4 г/кг, 1,5 г/кг, 1,6 г/кг, 1,7 г/кг, 1,8 г/кг, 1,9 г/кг или 2,0 г/кг. В определенных вариантах осуществления изобретения ВВИГ может быть введен в дозе от примерно 0,4 г/кг до примерно 1,0 г/кг.
В альтернативном варианте доза может быть рассчитана с использованием значения фактической массы тела, измеренного непосредственно перед началом курса лечения. Для дозировок, рассчитанных таким образом, площадь поверхности тела (м2) вычисляют непосредственно перед началом курса лечения по методу Дюбуа: м2 = (масса в кг0,425×рост в см0,725)×0,007184. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение антитела в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 0,01 мг/м2 до примерно 10 мг/м2.
В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител могут совместно вводиться, например, от одной дозы до нескольких доз в неделю, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может быть выполнен путем совместного введения β-глюкана и антитела с частотой, находящейся за пределами этого диапазона. В определенных вариантах осуществления изобретения β-глюкан и антитело могут вводиться с частотой от примерно одного раза в год до одного раза в неделю.
В некоторых вариантах осуществления изобретения способ дополнительно включает проведение индивиду иммунотерапии. Иммунотерапия может включать одного или нескольких связанных с опухолью антител (например, цетуксимаб, бевацизумаб, анти-MUC1). В этом контексте совместное введение β-глюкана и препарата антител может повысить эффективность иммунотерапии.
Используемый в настоящем описании термин «и/или» означает один или все из перечисленных элементов или комбинацию любых двух или более из перечисленных элементов; термин «содержит» и его варианты не имеет ограничивающего значения, когда эти термины появляются в описании и формуле изобретения; если не указано иное, то единственное число существительных и термин «по меньшей мере один» используются взаимозаменяемо и означают один или более чем один; и указание числовых диапазонов при помощи их крайних значений включает все числа, находящиеся в пределах этого диапазона (например, диапазон от 1 до 5 включает 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,80, 4, 5 и т.д.).
В предшествующем описании конкретные варианты осуществления изобретения для ясности могут быть описаны по отдельности. Если иное явно не указано, то признаки конкретного варианта осуществления изобретения являются несовместимыми с признаками другого варианта осуществления изобретения, определенные варианты осуществления изобретения могут включать комбинацию совместимых признаков, описанных в настоящем описании в связи с одним или несколькими вариантами осуществления изобретения.
Для любого раскрытого в настоящем описании способа, включающего отдельные стадии, стадии могут быть выполнены в любой возможной последовательности, и, при необходимости, любая комбинация двух или более стадий может быть выполнена одновременно.
Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами. Следует понимать, что конкретные примеры, материалы, количества и методики должны интерпретироваться в широком смысле в соответствии с объемом и сущностью настоящего изобретения, как предусмотрено настоящей заявкой.
Примеры
Пример 1
Материалы
Imprime PGG (Biothera, Eagan, MN) представлял собой не содержащий консервантов препарат β-глюкана, полученный в концентрации 1 мг/мл в 0,8% растворе хлорида натрия и 0,2% растворе однозамещенного цитрата натрия со значением pH 6,4. Это химическое соединение хранили при температуре 4-8°C до момента использования.
Получение образцов
Цельная кровь. Свежую цельную кровь получали от здоровых добровольцев, которые давали информированное согласие перед взятием у них крови (Комиссия по медицинской этике, Новая Англия, май 2007). Кровь собирали в пробирки Vacutainer®, содержащие 158 единиц по фармакопеи США лиофилизированного гепарина натрия (BD Biosciences; San Jose, CA).
Сыворотка и плазма крови. Из цельной крови получали сыворотку или плазму крови путем сбора крови в пробирки Vacutainer® (BD Biosciences; San Jose, CA), которые представляли собой или пробирки для отделения сыворотки (красный верх) или пробирки с гепарином натрия (зеленый верх). Пробирки хорошо перемешивали, инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут и затем центрифугировали при 2000 об./мин (~1150×g) в течение 10 минут. Затем супернатант (или сыворотку или плазму) переносили в свежую поликарбонатную коническую пробирку для хранения.
Метод анти-β-глюкан твердофазного ИФА
Предварительный метод твердофазного ИФА, модифицированный из метода анализа с использованием антител обезьяны против β-глюкана (Noss et al., 2012 Int. Arch. Allergy Immunol., 157:98-108), использовали для проверки образцов сыворотки крови человека. Универсальные планшеты для связывания Costar покрывали 50 мкл β-глюкана в виде 1 мкг/мл очищенного β-глюкана, разведенного в очищенной воде, и инкубировали при температуре 37°C в течение 30 минут. Покрытый планшет подвергали затем воздействию высокоинтенсивного ультрафиолетового света при >1500 мкВт/см2 в течение 5 минут при комнатной температуре и помещали в печь с принудительной подачей воздуха при температуре 50°C до высыхания перед вторым воздействием ультрафиолетового света при >1500 мкВт/см2 в течение пяти минут при комнатной температуре. Затем планшет блокировали 0,5% раствором бычьего сывороточного альбумина в течение >30 минут перед промывкой промывочным буфером (фосфатно-солевой буфер (ФСБ) с 0,05% Твин-20). Образцы сыворотки крови человека разбавляли в промывочном буфере, добавленном в планшет, и затем делали серию разведений в промывочном буфере в планшете. Исследуемые образцы, разбавленные в соотношении 1:400 переносили при помощи пипетки на аналитический планшет с семью дополнительными последовательными двукратными разведениями (разведениями сыворотки крови от 1:400 до 1:12800). Образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут, чтобы дать возможность IgG человека связаться с β-глюкановым антигеном, связанным с планшетом. После инкубации лунки промывали промывочным буфером, и меченное ферментом вторичное антитело (пероксидаза хрена, конъюгированная с аффинно очищенным козьим антителом, специфичным в отношении Fc-гамма фрагмента IgG человека) инкубировали в лунках для связывания его с IgG человека, связанным с β-глюкановым антигеном. Вторичное антитело инкубировали в течение 30 минут перед промывкой промывочным буфером. После полного удаления из лунок промывочного буфера, субстрат пероксидазы инкубировали в лунках, и формирование цвета останавливали ~1M фосфорной кислотой после пяти минут формирования цвета. Оптическую плотность (ОП) при 450 нм измеряли при помощи аппарата для чтения титрационных микропланшетов.
Определение титра антител против β-глюкана
Значения ОП, полученные в результате повторных измерений лунок, усредняли и вычитали среднее значение фона образца. Самое большое разведение, имеющее значение ОП больше или равное 0,100 после вычитания из него значения фона, считали титром образца и выражали в виде обратной величины этого разведения. Для определения надежности анализа определяли значения стандартизированной контрольной сыворотки и строили контрольную кривую для каждого анализируемого планшета. Например, считали, что исследуемый образец, который имеет значение ОП после вычитания из него значения фона равное 0,100, при разведении 1:12800, имеет титр 12800. Когда образцы измеряли несколько раз, и среднее значение их титров находилось между последовательными двукратными разведениями от разведения 1:400, ближайшее наименьшее значение двукратного разведения рассматривали в качестве их титров. Например, исследование сыворотки крови, полученной от одного донора за четыре раза взятия крови и измеренной в пяти отдельных анализах, дало среднее значение титра 28160; титром этого образца считали 25600.
Калибровочная кривая анализа. Значение 160 условных единиц на мл (УЕ/мл) было установлено для стандарта антител против β-глюкана человека. Таким образом, разведение 1:400 при анализе дало значение 400 мУЕ/мл, это была самая высокая точка на калибровочной кривой разведений. Дополнительные последовательные двукратные разведения были приготовлены на аналитическом планшете. Контроли анализа разбавляли в соотношении 1:100 в промывочном буфере ИФА для измерения. Кроме того, независимо готовили два разведения каждого контрольного уровня для параллельного измерения на каждом планшете.
Статистический анализ. Путем построения графика зависимости скорректированной с учетом фона оптической плотности от стандартной концентрации в мУЕ/мл получали стандартную калибровочную кривую. Используя программное обеспечение для ИФА, осуществляли четырехпараметрическую подгонку калибровочной кривой доза-эффект, чтобы определить неизвестные значения для образцов, контролей и тест-сыворотки. Аналитические значения функции, находящиеся между верхней и нижней точками перегиба калибровочной кривой (линейная часть) использовали для определения экспериментальных значений образцов. Для вычисления коэффициента вариации (%КВ) среднее квадратичное отклонение набора значений делили на среднее значение для того же набора значений, и результат умножали на 100.
Связывание PGG с клетками цельной крови (ЦК)
Сто микролитров ЦК, полученной от здоровых доноров, распределяли по полистироловым пробиркам для клеточного сортера с активацией флуоресценции (КСАФ) объемом 5 мл. Эти образцы ЦК стимулировали или Imprime PGG (10 мкг/мл или 100 мкг/мл) или цитратным буфером (контрольная пробирка). Пробирки для КСАФ, содержащие образцы, слабо закрывали соответствующими крышками и инкубировали в течение 30 минут в течение двух часов при температуре 37°C во влажной камере (5% CO2).
Таблица 1
Коктейль антител, использованный для окрашивания образцов цельной крови
Антитело Компания; Клон # Разведение или Конечная концентрация Для идентификации:
Анти-CD15 Biolegend; W6D3 0,2 мкг/мл нейтрофилы
Анти-CD19 Biolegend; HIB19 0,63 мкг/мл B-клетки
Анти-CD14 Biolegend; HCD14 5 мкг/мл моноциты
Анти-CD14 Biolegend; Tük4 1:50 моноциты
Анти-CD3 Biolegend; HIT3a 0,25 мкг/мл T-клетки
Анти-CD45 Biolegend; HI30 0,25 мкг/мл гемопоэтические клетки кроме эритроцитов и тромбоцитов
Козье F(ab')2 против IgM мыши Jackson Immunolab 5 мкг/мл антитело против β-глюкана мыши
В продолжение инкубации с антителом против β-глюкана BfD IV клетки инкубировали с коктейлем антител, который содержал вторичное антитело для распознавания BfD IV, а также антитела для распознавания различных маркеров клеточной поверхности.
После инкубации все образцы промывали путем добавления 2 мл 1x фосфатно-солевого буфера Дульбекко (ДФСБ) и центрифугировали при 1500-1700 об./мин при температуре 4°C в течение пяти минут. После двух циклов промывки и отсасывания жидкости, 5 мкл антитела против β-глюкана BfD IV (~100 мкг/мл) смешивали в каждой пробирке и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Это первичное антитело дважды промывали 1x ДФСБ как описано выше, добавляли коктейль антител, содержащий вторичное антитело, а также антитела, специфичные в отношении маркеров клеточной поверхности (Таблица 1), и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте. Для лизиса эритроцитов в каждый образец добавляли 2 мл 1× лизирующего раствора BD (BD Biosciences; San Jose, CA) и осторожно перемешивали на вортексе. После инкубации в течение одного часа при комнатной температуре образцы центрифугировали при 1500-1700 об./мин при температуре 4°C в течение пяти минут. Лизирующий раствор BD отсасывали, и клетки промывали один раз 1× ДФСБ и жидкость отсасывали как описано выше. Для фиксации в каждый образец добавляли 300-400 мкл 1% параформальдегида. Образцы анализировали на проточном цитометре LSR II (BD Biosciences; San Jose, CA) в течение 20 часов фиксации. Данные анализировали при помощи программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR).
Пример 2
Материалы
Imprime PGG (Biothera, Eagan, MN) представлял собой не содержащий консервантов препарат β-глюкана, полученный в концентрации 1 мг/мл в 0,8% растворе хлорида натрия и 0,2% растворе однозамещенного цитрата натрия со значением pH 6,4. Это химическое соединение хранили при температуре 4-8°C до момента использования.
Анализ связывания цельной крови (ЦК)
Свежую ЦК получали от здоровых добровольцев, которые давали информированное согласие перед взятием у них крови (Комиссия по медицинской этике, Новая Англия. Протокол сдачи крови No. 07-124). Кровь собирали в пробирку Vacutainer®, содержащую 158 единиц по фармакопеи США лиофилизированного гепарина натрия (BD Biosciences; San Jose, CA). Сыворотку крови собирали в пробирку Vacutainer®, содержащую активатор сгустка на основе тромбина (BD Biosciences; San Jose, CA). Приблизительно через 20 минут после сбора пробирку центрифугировали при 2000 об./мин в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку крови отбирали из этой пробирки и хранили при температуре 4°C в течение 8 часов или при температуре -80°C для использования после 8 часов.
Анализ связывания цельной крови проводили путем инкубации образцов цельной крови с Imprime PGG в течение 30 минут или двух часов при температуре 37°C во влажной камере. После промывки 1× фосфатно-солевым буфером Дульбекко (ДФСБ) добавляли антитело против β-глюкана мыши BfDIV и инкубировали с ЦК в течение 30 минут при комнатной температуре. После нескольких циклов промывки добавляли коктейль антител, включающий козье анти-мышиное детекторное антитело и антитела, специфичные в отношении молекул клеточной поверхности, и инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение 30 минут. Эритроциты лизировали лизирующим раствором BD, и образцы ресуспендировали в 1% параформальдегиде. Образцы анализировали на проточном цитометре, и полученные данные анализировали при помощи программного обеспечения FlowJo (Ashland, OR).
Перекрестные исследования ЦК и сыворотки крови
Для перекрестных исследований сыворотки крови цельную кровь центрифугировали при 1200 об./мин в течение 10 минут и удаляли плазму крови. Клетки крови промывали 1-2 раза 1× ДФСБ для удаления остатков плазмы. 50 мкл сыворотки крови добавляли и смешивали перед добавлением Imprime.
Для инкубации с анти-β-глюкан IgG (BioSupplies, Австралия) лиофилизированное антитело ресуспендировали в концентрации 1 мг/мл в 1× ДФСБ и хранили при температуре -80°C или 4°C в качестве исходного раствора. Перед добавлением образцов крови исходный раствор разбавляли в соотношении 1:10, чтобы получить концентрацию 100 мкг/мл, и 10 мкл этого раствора добавляли к 100 мкл крови. Для инкубации с ВВИГ, 10% ВВИГ (100 мг/мл) (PRIVIGEN, CSL Behrling, King of Prussia, PA) добавляли в образец цельной крови при указанных конечных концентрациях.
Примеры вариантов осуществления изобретения
Вариант осуществления изобретения 1. Способ идентификации связывания растворимого β-глюкана с иммунными клетками индивида, где способ включает:
получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки;
добавление растворимого β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих растворимому β-глюкану связываться с иммунными клетками; и
обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.
Вариант осуществления изобретения 2. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 1, в котором растворимый β-глюкан получен из дрожжей.
Вариант осуществления изобретения 3. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 1 или Вариантом осуществления изобретения 2, в котором растворимый β-глюкан содержит β-1,3/1,6 глюкан.
Вариант осуществления изобретения 4. Способ в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, в котором растворимый β-глюкан содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.
Вариант осуществления изобретения 5. Способ в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, в котором обнаружение растворимого β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками, включает приведение образца в контакт с моноклональным антителом, которое специфично связывается с этим β-глюканом.
Вариант осуществления изобретения 6. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 5, в котором моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.
Вариант осуществления изобретения 7. Способ в соответствии с любым предшествующим Вариантом осуществления изобретения, который дополнительно включает:
получение второго образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки;
добавление растворимого β-глюкана по меньшей мере в часть второго образца крови и инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих растворимому β-глюкану связываться с иммунными клетками; и
обнаружение растворимого β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.
Вариант осуществления изобретения 8. Способ улучшения β-глюкановой иммунотерапии у индивида, где способ включает:
идентификацию индивида, имеющего низкий уровень связывания; и
совместное введение индивиду растворимого β-глюкана и препарата антител, способного преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания.
Вариант осуществления изобретения 9. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 8, в котором идентификация индивида, имеющего низкий уровень связывания, включает:
получение образца крови индивида, где образец крови содержит титр антител против β-глюкана;
измерение титра антител против β-глюкана по меньшей мере в части образца крови; и
идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, если титр анти-β-глюкан IgG антител имеет значение меньше 20000.
Вариант осуществления изобретения 10. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 8, в котором идентификация индивида, имеющего низкий уровень связывания, включает:
получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки;
добавление растворимого β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками;
обнаружение растворимого β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками; и
идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, если β-глюкан связывается не более чем с 10% иммунных клеток.
Вариант осуществления изобретения 11. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-10, в котором препарат антител содержит сыворотку крови индивида, имеющего высокий уровень связывания.
Вариант осуществления изобретения 12. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-10, в котором препарат антител содержит моноклональное антитело, которое специфично связывается с растворимым β-глюканом.
Вариант осуществления изобретения 13. Способ в соответствии с Вариантом осуществления изобретения 12, в котором моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.
Вариант осуществления изобретения 14. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-13, в котором препарат антител содержит внутривенный иммуноглобулин.
Вариант осуществления изобретения 15. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-14, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводят совместно одновременно.
Вариант осуществления изобретения 16. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-14, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводят совместно в разные моменты времени.
Вариант осуществления изобретения 17. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-14, в котором растворимый β-глюкан и препарат антител вводят совместно в различные области.
Вариант осуществления изобретения 18. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-16, в котором растворимый β-глюкан получен из дрожжей.
Вариант осуществления изобретения 19. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 8-18, в котором растворимый β-глюкан содержит β-1,3/1,6 глюкан.
Вариант осуществления изобретения 20. Способ в соответствии с любым из Вариантов осуществления изобретения 9-19, в котором растворимый β-глюкан содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.
Полное раскрытие всех патентов, патентных заявок и публикаций и материалов, доступных в электронной форме, (включая, например, нуклеотидные последовательности, зарегистрированные, например, в GenBank и RefSeq, и аминокислотные последовательности, зарегистрированные, например, в SwissProt, PIR, PRF, PDB, и трансляции аннотированных кодирующих областей в GenBank и RefSeq), упомянутые в настоящем изобретении, включены в описание в качестве ссылки в полном объеме. В случае любых разночтений между раскрытием настоящей заявки и раскрытием любого документа, включенного в описание в качестве ссылки, раскрытие настоящей заявки имеет преимущественную силу. Предыдущее подробное описание и примеры были приведены только для ясности понимания, и они не предполагают никаких излишних ограничений. Настоящее изобретение не ограничено конкретными вариантами осуществления, приведенными и описанными в нем, варианты, очевидные для специалиста в данной области техники, будут включены в настоящее изобретение, определенное формулой изобретения.
Если не указано иное, то все числа, выражающие количества компонентов, молекулярные массы и тому подобное, используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать как модифицированные во всех случаях термином «примерно». Соответственно, наоборот, если не указано иное, то числовые параметры, указанные в описании и формуле изобретения, являются приблизительными, и они могут изменяться в зависимости от необходимых свойств, которые должны быть получены при помощи настоящего изобретения. По меньшей мере не пытаясь ограничить принцип эквивалентов объема формулы изобретения, каждый числовой параметр следует рассматривать по меньшей мере как число приведенных значащих цифр и с применением стандартных правил округления.
Несмотря на то, что числовые диапазоны и параметры, устанавливающие широкий объем изобретения, являются приблизительными, числовые значения, приведенные в конкретных примерах, указаны настолько точно, насколько это возможно. Однако все числовые значения изначально содержат диапазон, неизбежно возникающий в результате погрешности, имеющей место при их измерении.
Все заголовки приводятся для удобства читателя и не должны использоваться для ограничения смыслового содержания текста, следующего за заголовком, если это специально не указано.

Claims (26)

1. Способ идентификации связывания растворимого β-глюкана дрожжей с иммунными клетками индивида, где способ включает:
получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки;
добавление растворимого β-глюкана дрожжей по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих растворимому β-глюкану связываться с иммунными клетками; и
обнаружение растворимого β-глюкана дрожжей, связавшегося с иммунными клетками.
2. Способ по п. 1, в котором растворимый β-глюкан дрожжей содержит β-1,3/1,6 глюкан.
3. Способ по пп. 1 и 2, в котором растворимый β-глюкан дрожжей содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.
4. Способ по п. 1, в котором обнаружение растворимого β-глюкана дрожжей, связавшегося с иммунными клетками, включает приведение образца в контакт с моноклональным антителом, которое специфично связывается с β-глюканом дрожжей.
5. Способ по п. 4, в котором моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.
6. Способ по п. 1, который дополнительно включает:
получение второго образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки;
добавление растворимого β-глюкана дрожжей по меньшей мере в часть второго образца крови и инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих растворимому β-глюкану дрожжей связываться с иммунными клетками; и
обнаружение растворимого β-глюкана дрожжей, связавшегося с иммунными клетками.
7. Способ улучшения β-глюкановой иммунотерапии у индивида, где способ включает:
идентификацию индивида как: имеющего титр антител IgG против β-глюкана 20000 или менее, или
имеющего не более чем 10% иммунных клеток в образце крови индивида, связывающихся с растворимым β-глюканом дрожжей после инкубации в условиях, позволяющих растворимому β-глюкану дрожжей связываться с иммунными клетками в образце крови; и
совместное введение индивиду:
растворимого β-глюкана дрожжей и
препарата антител, содержащего:
сыворотку от индивида, имеющего титр антител IgG против β-глюкана по меньшей мере 25000, или
моноклональное антитело, которое специфически связывает растворимый β-глюкан дрожжей.
8. Способ по п. 7, в котором моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.
9. Способ по любому из пп. 7 и 8, в котором растворимый β-глюкан дрожжей и препарат антител вводят совместно одновременно.
10. Способ по любому из пп. 7 и 8, в котором растворимый β-глюкан дрожжей и препарат антител вводят совместно в разные моменты времени.
11. Способ по любому из пп. 7 и 8, в котором растворимый β-глюкан дрожжей и препарат антител вводят совместно в различные области.
12. Способ по любому из пп. 7 и 8, в котором растворимый β-глюкан дрожжей содержит β-1,3/1,6 глюкан.
13. Способ по любому из пп. 7 и 8, в котором растворимый β-глюкан дрожжей содержит β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозу.
RU2014148153A 2012-04-30 2013-03-14 Способы бета-глюкановой иммунотерапии RU2643331C2 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261640397P 2012-04-30 2012-04-30
US61/640,397 2012-04-30
US201261640834P 2012-05-01 2012-05-01
US201261640842P 2012-05-01 2012-05-01
US61/640,842 2012-05-01
US61/640,834 2012-05-01
PCT/US2013/031606 WO2013165591A1 (en) 2012-04-30 2013-03-14 β-GLUCAN IMMUNOTHERAPEUTIC METHODS

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018102251A Division RU2018102251A (ru) 2012-04-30 2013-03-14 СПОСОБЫ β-ГЛЮКАНОВОЙ ИММУНОТЕРАПИИ

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014148153A RU2014148153A (ru) 2016-06-20
RU2643331C2 true RU2643331C2 (ru) 2018-01-31

Family

ID=49514726

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014148155A RU2629334C2 (ru) 2012-04-30 2013-03-14 КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ β-ГЛЮКАНОВОЙ ИММУНОТЕРАПИИ
RU2018102251A RU2018102251A (ru) 2012-04-30 2013-03-14 СПОСОБЫ β-ГЛЮКАНОВОЙ ИММУНОТЕРАПИИ
RU2014148153A RU2643331C2 (ru) 2012-04-30 2013-03-14 Способы бета-глюкановой иммунотерапии

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014148155A RU2629334C2 (ru) 2012-04-30 2013-03-14 КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ β-ГЛЮКАНОВОЙ ИММУНОТЕРАПИИ
RU2018102251A RU2018102251A (ru) 2012-04-30 2013-03-14 СПОСОБЫ β-ГЛЮКАНОВОЙ ИММУНОТЕРАПИИ

Country Status (10)

Country Link
US (4) US10092646B2 (ru)
EP (4) EP2854530B1 (ru)
JP (3) JP6416751B2 (ru)
KR (2) KR20150013206A (ru)
CN (2) CN104812396B (ru)
AU (4) AU2013257141B2 (ru)
CA (2) CA2872009A1 (ru)
ES (2) ES2661393T3 (ru)
RU (3) RU2629334C2 (ru)
WO (2) WO2013165593A1 (ru)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2854530B1 (en) 2012-04-30 2018-01-03 Biothera, Inc. Compositions for beta-glucan immunotherapy
CN106170698A (zh) * 2013-12-05 2016-11-30 生物治疗公司 β‑葡聚糖测定方法
EP3166616B1 (en) * 2014-07-10 2021-04-07 Biothera, Inc. Beta-glucan in combination with anti-cancer agents affecting the tumor microenvironment
EP4046656A1 (en) * 2014-11-06 2022-08-24 HiberCell, Inc. Beta-glucan methods and compositions that affect the tumor microenvironment
EP3400442A4 (en) * 2016-01-08 2019-06-26 Biothera, Inc. BETA-GLUCAN IMMUNOTHERAPIES AFFECTING IMMUNE MICROENVIRONMENT
CN105749290A (zh) * 2016-04-11 2016-07-13 苏州康聚生物科技有限公司 一种含有以β-葡聚糖为辅料的蛋白质药物制剂
WO2018156888A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Biothera Pharmaceuticals, Inc. Beta glucan immunopharmacodynamics
CN110038132A (zh) * 2019-01-29 2019-07-23 苏州杰纳生物科技有限公司 天然高分子-蛋白复合物及其制备方法和应用
WO2022251123A1 (en) * 2021-05-24 2022-12-01 Frank Jordan Alkaline extraction of beta glucan compounds for use in anti-viral and immune therapies
CN113249336B (zh) * 2021-07-15 2021-10-08 天津一瑞生物科技股份有限公司 鼠抗（1,3）-β-D葡聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6355625B1 (en) * 1998-09-14 2002-03-12 Nabi Compositions of β-glucans and specific IGIV

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9019553D0 (en) 1990-09-07 1990-10-24 Unilever Plc Specific binding agents
US6084092A (en) 1997-01-31 2000-07-04 The Collaborative Group, Ltd. β(1-3)-glucan diagnostic assays
US6413715B2 (en) 1997-01-31 2002-07-02 The Collaborative Group β(1-3)-glucan diagnostic assays
US7507724B2 (en) 2001-01-16 2009-03-24 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Therapy-enhancing glucan
US7786094B2 (en) * 2001-10-09 2010-08-31 Biopolymer Engineering, Inc. Use of beta-glucans against biological warfare weapons and pathogens including anthrax
GB0302218D0 (en) * 2003-01-30 2003-03-05 Chiron Sri Vaccine formulation & Mucosal delivery
GB0211118D0 (en) 2002-05-15 2002-06-26 Polonelli Luciano Vaccines
CN1939335A (zh) 2002-09-04 2007-04-04 路易斯维尔大学研究基金会 使用β葡聚糖和抗体治疗癌性的方法
WO2006085895A2 (en) 2004-05-10 2006-08-17 Biopolymer Engineering, Inc. Whole glucan particles in combination with antibiotics, vaccines and viral monoclonal antibodies
GB0420466D0 (en) * 2004-09-14 2004-10-20 Cassone Antonio Anti-glucan antibodies
JP4666284B2 (ja) * 2005-11-30 2011-04-06 味の素株式会社 グルカン感受性予測方法、グルカン感受性増強剤及びそのスクリーニング方法
EP1984004A4 (en) 2006-01-17 2010-03-03 Sloan Kettering Inst Cancer THE THERAPY REINFORCING GLUCAN
US9610303B2 (en) 2006-06-15 2017-04-04 Biothera, Inc. Glucan preparations
TW200825084A (en) 2006-11-14 2008-06-16 Astrazeneca Ab New compounds 521
US7981447B2 (en) 2007-05-08 2011-07-19 Biothera, Inc. Particulate-soluble glucan preparation
CA2760044A1 (en) * 2008-04-29 2009-11-05 Immunexcite, Inc. Immunomodulating compositions and methods of use thereof
WO2012154680A2 (en) 2011-05-06 2012-11-15 Biothera, Inc. MODIFIED AND DERIVATIZED β-GLUCAN COMPOUNDS, COMPOSITIONS, AND METHODS
WO2012154818A1 (en) * 2011-05-09 2012-11-15 Biothera, Inc. B-glucan compounds, compositions, and methods
EP2854530B1 (en) 2012-04-30 2018-01-03 Biothera, Inc. Compositions for beta-glucan immunotherapy
CN106170698A (zh) * 2013-12-05 2016-11-30 生物治疗公司 β‑葡聚糖测定方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6355625B1 (en) * 1998-09-14 2002-03-12 Nabi Compositions of β-glucans and specific IGIV

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALLEN B. KAISER et al. Synergism between Poly-(1-6)-b-DGlucopyranosyl-(1-3)-bD-Glucopyranose Glucan and Cefazolin in Prophylaxis of Staphylococcal Wound Infection in a Guinea Pig Model / ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1998, vol. 42, N 9, p. 2449-2451. *
Oka Masaaki et al. In vitro and in vivo analysis of human leukocyte binding by the antitumor polysaccharide, lentinan / International journal of immunopharmacology, vol.18, N 3, pages 211-216. *
Oka Masaaki et al. In vitro and in vivo analysis of human leukocyte binding by the antitumor polysaccharide, lentinan / International journal of immunopharmacology, vol.18, N 3, pages 211-216. ALLEN B. KAISER et al. Synergism between Poly-(1-6)-b-DGlucopyranosyl-(1-3)-bD-Glucopyranose Glucan and Cefazolin in Prophylaxis of Staphylococcal Wound Infection in a Guinea Pig Model / ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1998, vol. 42, N 9, p. 2449-2451. *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018203444B2 (en) 2020-06-25
AU2018200706A1 (en) 2018-02-22
JP2015517115A (ja) 2015-06-18
RU2629334C2 (ru) 2017-08-28
WO2013165591A1 (en) 2013-11-07
ES2662969T3 (es) 2018-04-10
CA2872010A1 (en) 2013-11-07
EP2844262A4 (en) 2015-12-30
JP6272305B2 (ja) 2018-01-31
EP3373006A1 (en) 2018-09-12
WO2013165593A1 (en) 2013-11-07
RU2014148153A (ru) 2016-06-20
CA2872010C (en) 2021-06-08
AU2013257139B2 (en) 2018-02-22
JP2018150304A (ja) 2018-09-27
RU2018102251A (ru) 2019-02-21
JP2015515983A (ja) 2015-06-04
CN104812396A (zh) 2015-07-29
US10092646B2 (en) 2018-10-09
US20220105181A1 (en) 2022-04-07
EP3363462A1 (en) 2018-08-22
CA2872009A1 (en) 2013-11-07
KR102103366B1 (ko) 2020-04-22
EP2854530A4 (en) 2015-12-30
AU2013257141A1 (en) 2014-11-27
CN104812243A (zh) 2015-07-29
CN104812243B (zh) 2018-06-05
EP2854530A1 (en) 2015-04-08
US11229701B2 (en) 2022-01-25
CN104812396B (zh) 2019-07-09
US20180369376A1 (en) 2018-12-27
AU2013257139A1 (en) 2014-11-27
EP2844262A1 (en) 2015-03-11
EP2844262B1 (en) 2018-01-10
EP2854530B1 (en) 2018-01-03
KR20150016522A (ko) 2015-02-12
ES2661393T3 (es) 2018-03-28
US20150125451A1 (en) 2015-05-07
JP6416751B2 (ja) 2018-10-31
RU2018102251A3 (ru) 2019-02-21
AU2013257141B2 (en) 2016-12-15
US20150125461A1 (en) 2015-05-07
KR20150013206A (ko) 2015-02-04
RU2014148155A (ru) 2016-06-27
AU2018203444A1 (en) 2018-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2643331C2 (ru) Способы бета-глюкановой иммунотерапии
US20080145876A1 (en) Poly(ethylene glycol) anti-body detection assays and kits for performing thereof
EP3077816B1 (en) Beta-glucan assay methods
JP5054426B2 (ja) 抗β−１，３−グルカン・モノクローナル抗体
JP2008273916A (ja) 抗β−１，６−グルカン・モノクローナル抗体
CA2487846A1 (en) Method, composition and kit for antigenic binding of norwalk-like viruses
JP6901731B2 (ja) 膵臓癌の検査方法