RU2643312C1 - Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх - Google Patents
Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх Download PDFInfo
- Publication number
- RU2643312C1 RU2643312C1 RU2017107442A RU2017107442A RU2643312C1 RU 2643312 C1 RU2643312 C1 RU 2643312C1 RU 2017107442 A RU2017107442 A RU 2017107442A RU 2017107442 A RU2017107442 A RU 2017107442A RU 2643312 C1 RU2643312 C1 RU 2643312C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- allantoin
- mobile phase
- taurin
- taurine
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/10—Preparation using a splitter
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу количественного определения методом ВЭЖХ таурина и аллантоина при их совместном присутствии в различных лекарственных препаратах, биологически активных добавках, косметической и пищевой продукции. Способ включает растворение навески исследуемого вещества в подвижной фазе (ПФ), разделение раствора на хроматографической колонке, измерение оптической плотности полученного раствора и определение концентрации исследуемых веществ по калибровочным графикам. В качестве подвижной фазы для таурина использовали 30 мкмоль/л раствора ацетата натрия рН 6.0, а растворение проводили из расчета 250 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором ПФ. В качестве подвижной фазы для аллантоина использовали смесь раствора гидрофосфат аммония с рН 7.78 и ацетонитрила 9:1, а растворение проводили из расчета 1000 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором ПФ. Для таурина перед разделением раствора с ПФ на хроматографической колонке к нему добавляли боратный буферный раствор с рН 9.0 и 0,1% раствор 2,4-динитрохлорбензола в растворе ацетонитрил - вода (2:1) при соотношении 1:1:1, нагревали полученную смесь, охлаждали до комнатной температуры и на 6 об. ч. полученной смеси добавляли 1 об. ч. 10% раствора уксусной кислоты и 13 об. ч. воды. Детектирование проводили при длинах волн 360±2 нм и 218±2 нм для таурина и аллантоина, соответственно. Способ позволяет идентифицировать и количественно определять таурин и аллантоин при их совместном присутствии в различных лекарственных препаратах. 9 ил.
Description
Изобретение относится к способам оценки качества, для идентификации и количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии в различных лекарственных препаратах, биологически активных добавках, косметической и пищевой продукции.
Известен способ количественного определения таурина в продукции, выпускаемой фармацевтическими предприятиями и аптеками (RU 2167410, G01N 21/78, 20.05.2001 г.), где определение проводят путем обработки исследуемого образца спиртовым раствором нингидрина в среде фосфатного буферного раствора с рН от 6,4 до 7,6 в присутствии аскорбиновой кислоты. Полученный окрашенный раствор разбавляют водой и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре.
Известен способ количественного определения субстанции таурина с помощью формолового титрования (ФС.2.1.0039.15, ГФ XIII), включающий растворение субстанции в воде, прибавление формалина и титрование раствором натрия гидроксида до появления слаборозового окрашивания (индикатор-фенолфталеин) или определение точки эквивалентности потенциометрически. Параллельно проводят контрольный опыт.
Известен способ количественного определения субстанции аллантоина с фенилгидразином спектрофотометрическим методом (Chen, Х.В. and M.J. Gomes, 1992. Estimation of microbial protein supply to sheep and cattle based on urinary excretion of purine derivatives An overview of the technical details, International Feed Resources Unit, Rowett Research Institute, Bucksburn Aberdeen AB2 9SB, UK Occasional Publication).
Известен способ количественного определения аллантоина в биологических, косметических и фармацевтических образцах спектрофотометричеким методом: готовят раствор аллантоина с использованием гидроксида натрия и измеряют спектр полученного раствора (Determination of allantoin in biological, cosmetic, and pharmaceutical samples. JAOAC Int. 1996 May-Jun; 79(3):628-35).
Все вышеперечисленные методы с указанными пробоподготовками, не предоставляют возможности количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии в лекарственных препаратах, биологически активных добавках и косметических средствах. При проведении патентного поиска и анализа литературных источников не выявлено разработанной методики количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии.
Задача изобретения - разработка методики определения подлинности и количественного содержания таурина и аллантоина при совместном присутствии в различных лекарственных препаратах, биологически активных добавках, косметической и пищевой продукции.
Технический результат заключается в разработке способа на основе метода ВЭЖХ для количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии таурина и аллантоина в различных лекарственных формах или смесях.
Технический результат достигается тем, что способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом ВЭЖХвключает растворение навески исследуемого вещества в подвижной фазе (ПФ), разделение раствора на хроматографической колонке, измерение оптической плотности полученного раствора и определение концентрации исследуемых веществ по калибровочным графикам, причем в качестве подвижной фазы для таурина использовали 30 мкмоль/л раствора ацетата натрия рН 6.0, а растворение проводили из расчета 250 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором ПФ; в качестве подвижной фазы для аллантоина использовали смесь раствора гидрофосфат аммония с рН 7.78 и ацетонитрила 9:1, а растворение проводили из расчета 1000 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором ПФ; для таурина перед разделением раствора с ПФ на хроматографической колонке к нему добавляли боратный буферный раствор с рН 9.0 и раствор 0,1% 2,4-динитрохлорбензола в растворе ацетонитрил - вода (2:1) при соотношении 1:1:1, нагревали полученную смесь, охлаждали до комнатной температуры и на 6 об. ч. полученной смеси добавляли 1 об. ч. 10% раствора уксусной кислоты и 13 об. ч. воды; детектирование проводили при длинах волн 360±2 нм и 218±2 нм для таурина и аллантоина соответственно.
На фиг. 1 приведена метрологическая оценка результатов количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии в геле на основе хитозана с таурином и аллантоином. На фиг. 2 и фиг. 3 представлены хроматограммы растворителей образца геля ХТА для определения таурина и аллантоина соответственно.
На фиг. 4 - хроматограммараствора стандартного образца таурина и на фиг. 5 - хроматограмма раствора стандартного образца аллантоина. На фиг. 6 - хроматограмма испытуемого раствора таурина в растворе геля ХТА и на фиг. 7 - хроматограмма испытуемого раствора аллантоина в растворе геля ХТА. На фиг. 8 и фиг. 9 приведены калибровочные графики таурина и аллантоина соответственно
Использованные в способе растворы получали следующим образом.
Подвижная фаза для количественного определения таурина. В мерную колбу на 1000 мл помещали 2,46 г СН3СООNа⋅3Н2О, приливали около 900,0 мл воды для хроматографии и полностью растворяли соли. Устанавливали значение рН 6,0 потенциометрически при добавлении 5% триэтиламина или 10% ледяной уксусной кислоты, доводили водой для хроматографии до метки.
Боратный буферный раствор с рН 9.0 0,62 г тетрабората натрия помещали в мерную колбу на 100 мл, доводили значение рН 9.0, при помощи 1М раствора NaOH.
Раствор 0,1% 2,4-динитрохлорбензола. Растворяли 10 мг 2,4-динитрохлорбензолапомещали в 10 мл раствора ацетонитрил - вода (2:1).
Подвижная фаза для количественного определения аллантоина. В мерную колбу на 1000 мл помещали 6,61 г (NH4)2HPO4, приливали 300,0 мл воды для хроматографии и полностью растворяли соль, доводили объем в колбе до метки водой для хроматографии и еще раз тщательно перемешивали, рН 7,78 устанавливали потенциометрически. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещали 900 мл полученного раствора, прибавляли 100 мл ацетонитрила и тщательно перемешивали. Полученную подвижную фазу фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазировали.
Пример.
Анализ геля на основе хитозана с таурином и аллантоином.
Пробоподготовка 1.
Навеску геля ХТА массой 250 мг помещали в мерную колбу на 10 мл, растворяли навеску в ПФА. 100 мкл полученного раствора помещали в эппендорф вместимостью 1,5 мл. Добавляли 100 мкл боратного буферного раствора с рН 9.0 и 100 мкл 0,1% раствора 2,4-динитрохлорбензола, закрывали эппендорф и помещали в водяную баню с температурой 90°С на 90 мин, охлаждали до комнатной температуры, добавляли 50 мкл 10% раствора уксусной кислоты и доводили до 1 мл водой для хроматографии. Фильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм, полученные пробы перемешивали и вводили в хроматограф. Использовали колонку LunaC18 размером 4,6×250 мм, заполненную сферическими частицами силикагеля размером 5 мкм. Детекцию осуществляли спектрофотометрически при длине волны 360 нм. На хроматограммах идентифицировали пики таурина и определяли их площади. Время удерживания составило 30 мин. Количественное определение таурина в геле ХТА проводили методом калибровочного графика. Содержание таурина составляло 100,33±0,82 мкг/мл.
Для подтверждения точности метода был получен стандартный раствор с точно известной концентрацией таурина. 10,0 мг стандартного образца таурина помещали в мерную колбу на 10 мл, растворяли навеску в ПФА. 100 мкл полученного раствора помещали в эппендорф вместимостью 1,5 мл и добавляли 100 мкл боратного буферного раствора с рН 9.0 и 100 мкл 0,1% раствора 2,4-динитрохлорбензола. Закрывали эппендорф и помещали в водяную баню с температурой 90°С на 90 мин. Охлаждали до комнатной температуры, добавляли 50 мкл 10% раствора уксусной кислоты и доводили раствор до 1 мл водой для хроматографии, с последующим фильтрованием через фильтр размером пор 0,45 мкм. Полученные пробы перемешивали и вводили в хроматограф. Использовали колонку LunaC18 размером 4,6×250 мм, заполненную сферическими частицами силикагеля размером 5 мкм
Статистическая обработка данных показала, что средняя ошибка определения количественного содержания таурина заявленным методом не превышала 0,63%.
Пробоподготовка 2.
1000 мг геля помещали в мерную колбу на 10 мл и растворяли в 5 мл раствора подвижной фазы, использовали ультразвуковую ванну при комнатной температуре в течение 5 минут, затем доводили объем до метки раствором подвижной фазы и еще раз тщательно перемешивали, с последующей фильтрацией через бумажный складчатый фильтр. Детекцию осуществляли УФ спектрофотометрически при длине волны 218 нм. На хроматограммах идентифицировали пики аллантоина и определяли их площади. Время удерживания равнялось 4 мин. Количественное определение аллантоина в геле ХТА проводили методом калибровочного графика. Содержание аллантоина составляло 0,5 мг/мл.
Для подтверждения точности метода был получен стандартный раствор с точно известной концентрацией аллантоина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещали 50,0±0,5 мг аллантоина, приливали 50 мл подвижной фазы, растворяли полностью и доводили объем подвижной фазой до метки. Использовали колонку LunaC18 размером 4,6×250 мм, заполненную сферическими частицами силикагеля размером 5 мкм. Концентрация аллантоина 0,500±0,0005 мг/мл. Статистическая обработка данных показала, что средняя ошибка определения количественного содержания аллантоина заявленным методом не превышала 0,85%.
Методика позволяет идентифицировать и количественно определять таурин и аллантоин при совместном присутствии в различных лекарственных формах или смесях, что может служить для стандартизации геля ХТА.
Claims (1)
- Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом ВЭЖХ, включающий растворение навески исследуемого вещества в подвижной фазе, разделение раствора на хроматографической колонке, измерение оптической плотности полученного раствора и определение концентрации исследуемых веществ по калибровочным графикам, причем в качестве подвижной фазы для таурина использовали 30 мкмоль/л раствора ацетата натрия рН 6.0, а растворение проводили из расчета 250 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором подвижной фазы; в качестве подвижной фазы для аллантоина использовали смесь раствора гидрофосфат аммония с рН 7.78 и ацетонитрила 9:1, а растворение проводили из расчета 1000 мг исследуемого вещества на 10 мл и доведение до объема раствором подвижной фазы; для таурина перед разделением раствора с подвижной фазой на хроматографической колонке к нему добавляли боратный буферный раствор с рН 9.0 и 0,1% раствор 2,4-динитрохлорбензола в растворе ацетонитрил - вода (2:1) при соотношении 1:1:1, нагревали полученную смесь, охлаждали до комнатной температуры, и на 6 об. частей полученной смеси добавляли 1 об. часть 10% раствора уксусной кислоты и 13 об. частей воды; детектирование проводили при длинах волн 360±2 нм и 218±2 нм для таурина и аллантоина соответственно.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017107442A RU2643312C1 (ru) | 2017-03-06 | 2017-03-06 | Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017107442A RU2643312C1 (ru) | 2017-03-06 | 2017-03-06 | Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2643312C1 true RU2643312C1 (ru) | 2018-01-31 |
Family
ID=61173565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017107442A RU2643312C1 (ru) | 2017-03-06 | 2017-03-06 | Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2643312C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2698515C1 (ru) * | 2018-12-06 | 2019-08-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" | Способ количественного определения действующих веществ в лекарственных препаратах методом ИК-спектроскопии |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2167410C2 (ru) * | 1999-08-03 | 2001-05-20 | Пермская государственная фармацевтическая академия | Способ количественного определения алифатических аминокислот |
| RU2597787C2 (ru) * | 2014-10-30 | 2016-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ВГУ") | Способ количественного определения производных имидазола (группы имидазолина) |
| RU2611400C2 (ru) * | 2015-04-23 | 2017-02-21 | Закрытое акционерное общество "Воронежский инновационно-технологический центр" (ЗАО ВИТЦ) | Ранозаживляющий гель для наружного применения |
-
2017
- 2017-03-06 RU RU2017107442A patent/RU2643312C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2167410C2 (ru) * | 1999-08-03 | 2001-05-20 | Пермская государственная фармацевтическая академия | Способ количественного определения алифатических аминокислот |
| RU2597787C2 (ru) * | 2014-10-30 | 2016-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "ВГУ") | Способ количественного определения производных имидазола (группы имидазолина) |
| RU2611400C2 (ru) * | 2015-04-23 | 2017-02-21 | Закрытое акционерное общество "Воронежский инновационно-технологический центр" (ЗАО ВИТЦ) | Ранозаживляющий гель для наружного применения |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Kovalenko Svetlana et al., Development and validation of HPLC metod for determining ALLANTOIN in the compound drug for external use to treat diabetic ulcers, Журнал Наука и Технология, Изд-во SCIEURO (Лондон), том 1, N3 с.7-13. * |
| Т.И. Ярыгина, Разработка методики количественного определения тауфона (таурина), Журнал Вестник Российского университета дружбы народов, Серия: Медицина, 2010, N4, стр.522-525. * |
| Т.И. Ярыгина, Разработка методики количественного определения тауфона (таурина), Журнал Вестник Российского университета дружбы народов, Серия: Медицина, 2010, N4, стр.522-525. Kovalenko Svetlana et al., Development and validation of HPLC metod for determining ALLANTOIN in the compound drug for external use to treat diabetic ulcers, Журнал Наука и Технология, Изд-во SCIEURO (Лондон), том 1, N3 с.7-13. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2698515C1 (ru) * | 2018-12-06 | 2019-08-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" | Способ количественного определения действующих веществ в лекарственных препаратах методом ИК-спектроскопии |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kesner et al. | Automatic Determination of Weak Organic Acids by Means of Partition Column Chromatography and Indicator Titration. | |
| Brundu et al. | Validation of a reversed-phase high performance liquid chromatography method for the simultaneous analysis of cysteine and reduced glutathione in mouse organs | |
| Alasha Abdalla et al. | Development and validation of spectrophotometric methods for the determination of mesalazine in pharmaceutical formulation | |
| CN104678031B (zh) | 高效液相色谱法检测苍术苷和/或羧基苍术苷的方法 | |
| RU2643312C1 (ru) | Способ количественного определения таурина и аллантоина при совместном присутствии методом вэжх | |
| Meena et al. | Validated HPTLC method for simultaneous analysis of pyrimethamine and sulphadoxine in pharmaceutical dosage forms | |
| Santini et al. | A new potentiometric ibuprofenate ion sensor immobilized in a graphite matrix for determination of ibuprofen in tablets | |
| Peeters et al. | In situ dissolution testing using potentiometric sensors | |
| Tagliari et al. | Terbinafine: optimization of a LC method for quantitative analysis in pharmaceutical formulations and its application for a tablet dissolution test | |
| CN103512979A (zh) | 一种药物组合物坐珠达西的检测方法 | |
| RU2652355C1 (ru) | Способ количественного спектрофотометрического определения таурина и аллантоина при совместном присутствии в лекарственной форме гель | |
| JPH071257B2 (ja) | 混合ビタミン剤中の水溶性ビタミン類の同時定量法 | |
| CN105486651A (zh) | 一种铅基合金中镧的化学分析方法 | |
| Gupta et al. | Simultaneous Estimation of Racecadotril and Ofloxacin by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography Method in Pharmaceutical Dosage Forms. | |
| Annisa et al. | Validation of RP-HPLC method for determination of pH-dependent solubility of ketoconazole in phosphate buffer pH 6.8 | |
| Konoz et al. | Development and validation of a reversed-Phase HPLC method for the estimation of zolpidem in bulk drug and tablets | |
| Barla et al. | Development and Validation of RP-HPLC Method for the Estimation of Nilotinib in Bulk and Pharmaceutical Dosage form. | |
| Ertokus | The Determination of Parkinson’s Drugs in Human Urine by Applying Chemometric Methods | |
| Mannan et al. | Spectrophotometric Estimation of Polyvinylpyrrolidone, Iodate and Iodine Simultaneously in Povidone-Iodine Complex in Pure and Pharmaceutical Preparations | |
| Sayqal et al. | Sensitive and rapid spectrophotometric methods for sertraline monitoring in pharmaceutical formulations | |
| CN109580842B (zh) | 一种复方胆氨片溶出度的测定方法 | |
| RU2564860C1 (ru) | Способ хроматографического анализа парабенов (эфиров 4-гидроксибензойной кислоты) в жидких и суспензионных фармацевтических препаратах и жидких биологически активных добавках | |
| Chandru et al. | Simple and rapid methods for the analysis of captopril in dosage forms | |
| Naveen et al. | A new stability indicating ultra-fast liquid chromatographic (rp-uflc) method for the quantification of nilotinib-a drug for blood cancer | |
| RU2801885C1 (ru) | Способ количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственных растительных препаратах |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190307 |