RU2636527C1 - Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes - Google Patents
Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes Download PDFInfo
- Publication number
- RU2636527C1 RU2636527C1 RU2016142462A RU2016142462A RU2636527C1 RU 2636527 C1 RU2636527 C1 RU 2636527C1 RU 2016142462 A RU2016142462 A RU 2016142462A RU 2016142462 A RU2016142462 A RU 2016142462A RU 2636527 C1 RU2636527 C1 RU 2636527C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- endometrial
- endometrium
- implantation window
- genes
- value
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
1. Область техники.1. Field of technology.
Изобретение относится к области медицины (в частности, репродуктивной медицины и вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), а также к области науки (в частности, молекулярной биологии и эмбриологии) и может быть использовано для определения персонального «окна имплантации» у женщин в программах экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки.The invention relates to the field of medicine (in particular, reproductive medicine and assisted reproductive technologies (ART), as well as to the field of science (in particular, molecular biology and embryology) and can be used to determine the personal “implantation window” in women in in vitro fertilization programs and transfer of embryos into the uterine cavity.
2. Уровень техники.2. The prior art.
Функциональный слой эндометрия при воздействии стероидных гормонов циклически претерпевает процессы регенерации, секреторной трансформации и отторжения в течение менструального цикла. Цель этих физиологических изменений заключается в синхронизации процессов созревания бластоцисты и тканей эндометрия, а также обеспечении рецептивного статуса эндометрия, восприимчивого к имплантации эмбриона. Имплантация бластоцисты осуществляется в строго определенный период «окна имплантации», соответствующий 7-8 дню после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8), у женщин с 28-дневным менструальным циклом это соответствует 19-21 дню МЦ.The functional layer of the endometrium under the influence of steroid hormones cyclically undergoes the processes of regeneration, secretory transformation and rejection during the menstrual cycle. The purpose of these physiological changes is to synchronize the maturation processes of the blastocyst and endometrial tissues, as well as to ensure the receptive status of the endometrium, susceptible to implantation of the embryo. Blastocyst implantation is carried out in a strictly defined period of the “implantation window”, corresponding to 7-8 days after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8), in women with a 28-day menstrual cycle this corresponds to 19-21 days of MC.
Морфологические изменения эндометрия на протяжении менструального цикла описаны Noyes R.W. более 60 лет назад и широко используются до настоящего времени. Критерии Noyes R.W. и соавт. основаны на таких морфологических параметрах, как наличие вакуолей, отек стромы, секреция желез и др. [1, 2]. Однако точность данных критериев поставлена под сомнение в рандомизированных исследованиях [3, 4]. Поэтому в настоящее время гистологическое исследование функционального слоя эндометрия является недостаточным и должно дополняться новыми высокоинформативными методами оценки рецептивности эндометрия.Morphological changes in the endometrium during the menstrual cycle are described by Noyes R.W. more than 60 years ago and are widely used to date. Criteria Noyes R.W. et al. based on morphological parameters such as the presence of vacuoles, stromal edema, secretion of glands, etc. [1, 2]. However, the accuracy of these criteria has been called into question in randomized trials [3, 4]. Therefore, at present, histological examination of the functional layer of the endometrium is insufficient and should be supplemented by new highly informative methods for assessing the receptivity of the endometrium.
В последние годы были проведены исследования глобальных транскрипционных профилей генов при различных заболеваниях, оказывающих влияние на состояние эндометрия. Помимо этого, накоплен большой объем информации о маркерах рецептивности эндометрия и транскрипционном профиле генов в разные стадии менструального цикла.In recent years, studies have been conducted of global transcriptional gene profiles in various diseases that affect the condition of the endometrium. In addition, a large amount of information has been accumulated on endometrial receptivity markers and the transcriptional profile of genes at different stages of the menstrual cycle.
Большинство исследователей изучали транскрипционные профили в тотальной ткани эндометрия без ее разделения на отдельные компоненты. Ponnampalam А.Р. et al. первыми использовали микроматричный анализ для исследования транкрипционных сигнатур (отпечатков) генов на всех стадиях менструального цикла [5]. Они выделили 425 генов, экспрессия которых повышена хотя бы в одной фазе менструального цикла более чем в 2 раза. На основе анализа этих данных они выделили 7 групп генов, имеющих максимальные уровни экспрессии в определенную стадию менструального цикла: менструация, ранняя пролиферация, средняя пролиферация, поздняя пролиферация, ранняя секреция, средняя секреция, поздняя секреция.Most researchers studied transcriptional profiles in total endometrial tissue without dividing it into separate components. Ponnampalam A.R. et al. The first to use microarray analysis to study transcriptional signatures (fingerprints) of genes at all stages of the menstrual cycle [5]. They isolated 425 genes, the expression of which is increased in at least one phase of the menstrual cycle by more than 2 times. Based on the analysis of these data, they identified 7 groups of genes with maximum expression levels at a certain stage of the menstrual cycle: menstruation, early proliferation, medium proliferation, late proliferation, early secretion, middle secretion, late secretion.
Группа исследователей Talbi S. et al. выделили 4 кластера генов с высоким уровнем экспрессии, позволяющих дискриминировать 4 стадии: пролиферация, ранняя, средняя и поздняя секреция [6]. Помимо этого, они описали связь уровня экспрессии этих генов с их функциями и биологическими процессами, характерными для каждой из выделенных стадий.Research Team Talbi S. et al. 4 clusters of genes with a high level of expression were distinguished, which made it possible to discriminate 4 stages: proliferation, early, middle, and late secretion [6]. In addition, they described the relationship of the level of expression of these genes with their functions and biological processes characteristic of each of the selected stages.
Значительная часть публикаций посвящена сравнению глобальных транскрипционных сигнатур генов стадии «окна имплантации» с другими стадиями менструального цикла: со стадией пролиферации [7, 8, 9], ранней секреции [10, 11, 12, 13, 14, 15, 16], поздней секреции [16, 17].A significant part of the publications is devoted to comparing global transcriptional gene signatures of the “implantation window” stage with other stages of the menstrual cycle: with the proliferation stage [7, 8, 9], early secretion [10, 11, 12, 13, 14, 15, 16], late secretion [16, 17].
Помимо накопления информации об особенностях экспрессионных профилей стадии «окна имплантации», некоторые диагностические платформы уже предложены к практическому применению для определения персонального «окна имплантации» у женщин, реализующих репродуктивную функцию в программах ЭКО и ПЭ. В качестве примера можно привести тест «Endometrial Receptivity Array (ERA)», представляющий собой микрочип, содержащий 238 генов. Применение данного теста рекомендовано в естественном цикле на ЛГ+7 день менструального цикла (д.м.ц.) или цикле с применением заместительной гормональной терапии на 5-й день назначения прогестерона (18). Использование данного чипа позволило повысить частоту имплантации эмбрионов по различным оценкам на 10-20% [19].In addition to the accumulation of information about the features of the expression profiles of the “implantation window” stage, some diagnostic platforms have already been proposed for practical use for determining the personal “implantation window” in women implementing reproductive function in IVF and PE programs. An example is the Endometrial Receptivity Array (ERA) test, which is a microchip containing 238 genes. The use of this test is recommended in the natural cycle on LH + the 7th day of the menstrual cycle (MDC) or in the cycle with the use of hormone replacement therapy on the 5th day of the appointment of progesterone (18). The use of this chip made it possible to increase the frequency of implantation of embryos, according to various estimates, by 10–20% [19].
С помощью микроматричного анализа установлено, что у каждой четвертой пациентки с неудачными попытками эктракорпорального оплодотворения происходит смещение окна имплантации на 2 дня, что имеет фатальные последствия для реализации программы вспомогательных репродуктивных технологий [20]. Концепция универсального соответствия стадии «окна имплантации» 19-21 дню менструального цикла оказалась несостоятельной. В связи с этим, определение персонального «окна имплантации» и коррекция времени переноса эмбрионов может быть одним из способов повышения результативности программ ВРТ.Using microarray analysis, it was found that every fourth patient with unsuccessful attempts at in vitro fertilization has a shift of the implantation window by 2 days, which has fatal consequences for the implementation of the assisted reproductive technology program [20]. The concept of universal correspondence of the stage of the “implantation window” to 19-21 days of the menstrual cycle proved to be untenable. In this regard, the definition of a personal “implantation window” and the correction of embryo transfer time can be one of the ways to increase the effectiveness of ART programs.
В силу высокой стоимости исследований на основе микроматричного анализа, включающей стоимость наборов, оборудования и программной поддержки, этот метод в нашей стране не получил широкого распространения. Как альтернатива дорогому и трудоемкому методу микроматричного анализа предлагается метод обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) - метод, не уступающий по чувствительности и специфичности микроматричному анализу, но более доступный для рутинного использования. Для определения персонального «окна имплантации» у женщин с неудачными попытками в программе ЭКО и ПЭ в отличие от аналога «Endometrial Receptivity Array (ERA)» предлагается исследование не сотен, а одного-двух десятков генов с помощью метода ОТ-ПЦР в режиме реального времени, а также интегральный критерий оценки транскрипционного профиля по соотношению уровней представленности транскриптов.Due to the high cost of research based on microarray analysis, including the cost of kits, equipment and software support, this method is not widespread in our country. As an alternative to the expensive and laborious method of microarray analysis, a reverse transcription and quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) method is proposed - a method that is not inferior in sensitivity and specificity to microarray analysis, but more affordable for routine use. To determine the personal “implantation window” in women with unsuccessful attempts in the IVF and PE program, in contrast to the Endometrial Receptivity Array (ERA) counterpart, a study is proposed of not one hundred, but one or two dozen genes using real-time RT-PCR method , as well as an integral criterion for assessing the transcriptional profile by the ratio of the levels of transcript representation.
На момент подачи заявки из свободных источников было известно о следующих наиболее близких аналогах:At the time of filing an application from free sources, the following closest analogues were known:
- Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием (патент РФ №2553340). Попов Ю.В., Бурыкина П.Н., Коган Е.А., Демура Т.А., Чупрынин В.Д., Аскольская С.И. Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с миомой матки. Способ заключается в определении количества пиноподий в поверхностном эпителии, уровня экспрессии рецепторов прогестерона и эстрогена-альфа в строме эндометрия, их соотношения, а также уровня экспрессии имплантационного фактора LIF на 21-24 день менструального цикла методом ИФА. Нарушение фертильности, связанное с миомой матки, диагностируется при количестве пиноподий менее 35%, уровне соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия менее 3,5, а также уровне экспрессии LIF менее 2 баллов. Данный метод предусмотрен только для пациенток, планирующих беременность, с миомой матки, не деформирующей полость матки и размерами миоматозных узлов до 5,0 см в диаметре.- A method for diagnosing endometrial receptivity disorders in patients with uterine myoma and infertility (RF patent No. 2553340). Popov Yu.V., Burykina P.N., Kogan E.A., Demura T.A., Chuprynin V.D., Askolskaya S.I. The invention relates to medicine, namely to gynecology, is intended for the diagnosis of reproductive dysfunction in patients with uterine myoma. The method consists in determining the number of pinopodia in the surface epithelium, the level of expression of progesterone and estrogen-alpha receptors in the endometrial stroma, their ratio, as well as the level of expression of the implantation factor LIF on days 21-24 of the menstrual cycle by ELISA. Fertility impairment associated with uterine myoma is diagnosed with pinopodia less than 35%, the expression ratio of progesterone and estrogen receptors in the endometrial stroma is less than 3.5, and the level of LIF expression is less than 2 points. This method is provided only for patients planning a pregnancy with uterine myoma not deforming the uterine cavity and the size of myomatous nodes up to 5.0 cm in diameter.
Описанный способ основан на методах морфологического и иммуногистохимического исследования тканей эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии. Недостатком данного способа диагностики является отсутствие интегрального критерия оценки нарушения фертильности. Не понятной остается интерпретация результатов, когда изменены не все показатели.The described method is based on methods of morphological and immunohistochemical studies of endometrial tissues obtained by pipeliopsy. The disadvantage of this diagnostic method is the lack of an integral criterion for assessing impaired fertility. The interpretation of the results remains unclear when not all indicators are changed.
- Способ прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (патент РФ №2562559). Айламазян Э.К., Джемлиханова Л.Х., Гзгзян A.M., Ниаури Д.А., Коган И.Ю., Шарфи Ю.Н. Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Преимущество данного способа состоит в интегральной оценке нескольких параметров: 1) определении оптической плотности экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) в поверхностном и железистом эпителии эндометрия в период «окна имплантации» в цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, 2) определении содержания сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в цервикальной слизи в день трансвагинальной пункции фолликулов, 3) определении систолодиастолического отношения (S/D) и индекса резистентности (IR) спиральных артерий в день введения триггера овуляции. На основании полученных показателей рассчитывают значение регрессионной функции (Z) по формуле. При значении Z>0 прогнозируют, что эндометрий рецептивен, а при Z<0 - эндометрий не рецептивен.- A method for predicting endometrial receptivity in in vitro fertilization cycles (RF patent No. 2562559). Ailamazyan E.K., Dzhemlikhanova L.Kh., Gzzzyan A.M., Niauri D.A., Kogan I.Yu., Sharfi Yu.N. The invention relates to medicine, namely to a method for predicting endometrial receptivity in in vitro fertilization cycles (IVF). The advantage of this method is the integrated assessment of several parameters: 1) determination of the optical density of expression of leukemia inhibitory factor (LIF) in the surface and glandular epithelium of the endometrium during the “implantation window” in the cycle prior to in vitro fertilization, 2) determination of the content of vascular endothelial growth factor (VEGF) in cervical mucus on the day of transvaginal puncture of the follicles, 3) determination of systolodiastolic ratio (S / D) and spiral resistance index (IR) GOVERNMENTAL arteries on the day of ovulation trigger. Based on the obtained indicators, the value of the regression function (Z) is calculated by the formula. With a value of Z> 0, it is predicted that the endometrium is receptive, and with Z <0, the endometrium is not receptive.
Описанный способ основан на методах допплерометрического исследования кровотока в сосудах матки, иммуногистохимического определения LIF в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии, а также исследования слизи цервикального канала на содержание VEGF методом мультиплексного ИФА-анализа. Предлагаемый способ отличается от данного аналога тем, что исследование может быть проведено в одном образце биологического материала (ткани эндометрия, полученные путем пайпель-биопсии) с использованием одного метода исследования - ОТ-ПЦР в режиме реального времени.The described method is based on the methods of Dopplerometric study of blood flow in the uterine vessels, immunohistochemical determination of LIF in endometrial tissues obtained by pipeliopsy, as well as the study of mucus of the cervical canal for VEGF content by multiplex ELISA analysis. The proposed method differs from this analogue in that the study can be carried out in one sample of biological material (endometrial tissues obtained by pipe-biopsy) using one research method - RT-PCR in real time.
Способ, описанный в аналоге, позволяет прогнозировать рецептивность эндометрия и наступление беременности в результате стимулированного цикла ЭКО. Предлагаемый способ дает возможность определения персонального «окна имплантации» и его последующего использования метода в естественных циклах и циклах заместительной гормональной терапии при переносах криоконсервированных/размороженных эмбрионов, а также коррекции времени переноса эмбриона.The method described in the analogue allows to predict the receptivity of the endometrium and the onset of pregnancy as a result of a stimulated IVF cycle. The proposed method makes it possible to determine a personal “implantation window” and its subsequent use in natural cycles and hormone replacement therapy cycles during transfers of cryopreserved / thawed embryos, as well as correction of the transfer time of the embryo.
3. Описание изобретения.3. Description of the invention.
Предложен способ оценки рецептивности эндометрия у пациенток, проходящих лечение бесплодия в программе ЭКО и ПЭ, по уровню представленности транскриптов отдельных функциональных генов в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8) с целью оптимизации времени переноса эмбрионов в полость матки, в первую очередь, криоконсервированных/размороженных эмбрионов.A method is proposed for evaluating the endometrial receptivity in patients undergoing infertility treatment in the IVF and PE program according to the level of transcripts of individual functional genes in endometrial tissues obtained by pipe-biopsy on days 7-8 after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8) s the goal of optimizing the time of transfer of embryos into the uterine cavity, primarily cryopreserved / thawed embryos.
В ходе исследования 71 образца эндометрия, соответствующих 19-21 дню менструального цикла, были выбраны наиболее информативные маркеры рецептивности эндометрия и предложен способ определения персонального «окна имплантации» у женщин, реализующих репродуктивную функцию в программе вспомогательных репродуктивных технологий, путем измерения уровня мРНК генов прогестаген-ассоциированного эндометриального протеина РАЕР, дипептидилпептидазы DPP4, главного комплекса гистосовместимости II класса DO-бета-цепь HLA-DOB и гомеобокса 7 НОХ7 (MSX1) по сравнению с уровнем представленности референсных генов, например, В2М, GUSB, ТВР.In the course of the study of 71 endometrial samples corresponding to the 19-21 day of the menstrual cycle, the most informative markers of endometrial receptivity were selected and a method was proposed for determining the personal “implantation window” in women implementing reproductive function in the assisted reproductive technology program by measuring the mRNA level of progestogen genes associated endometrial protein RAEP, dipeptidyl peptidase DPP4, major histocompatibility complex class II DO-beta chain HLA-DOB and homeobox 7 HOX7 (MSX1) compared correlation with the level of representation of reference genes, for example, B2M, GUSB, TBP.
В рецептивном эндометрии (эндометрий стадии средней секреции) по сравнению с пререцептивным (эндометрий стадии ранней секреции) экспрессия мРНК генов PAEP и DPP4 повышена в 144 и 46 раз, а экспрессия мРНК генов HLA-DOB и MSX1 снижена в 17,5 и 2,8 раз соответственно (p<0,001).In the receptive endometrium (endometrium of the stage of middle secretion) compared with the prereceptive (endometrium of the stage of early secretion), the expression of PAEP and DPP4 mRNA is increased by 144 and 46 times, and the expression of mRNA of the HLA-DOB and MSX1 genes is reduced by 17.5 and 2.8 times, respectively (p <0.001).
Уровень представленности мРНК предлагаемых генов может служить как дополнительным, так и независимым исследуемым параметром при оценке рецептивности эндометрия в образцах, полученных путем пайпель-биопсии на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8), диагностированного по данным УЗИ и/или мочевому тесту Clear Blue (Unipaht Ltd, Великобритания) в естественных или в циклах заместительной гормональной терапии, предшествующих переносу криоконсервированных/размороженных эмбрионов.The level of mRNA representation of the proposed genes can serve as an additional as well as an independent studied parameter when assessing endometrial receptivity in samples obtained by pipeliopsy on days 7-8 after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8), diagnosed by ultrasound and / or Clear Blue urine test (Unipaht Ltd, UK) in natural or hormone replacement therapy cycles prior to transferring the cryopreserved / thawed embryos.
Для оценки уровня представленности мРНК исследуемых генов в эндометрии можно использовать метод полимерзазной цепной реакции в режиме реального времени с предварительной стадией обратной транскрипции. Полученные значения уровней представленности транскриптов и их соотношения используют для группировки образцов методами кластерного и многофакторного анализа.To assess the level of mRNA representation of the studied genes in the endometrium, the real-time polymerase chain reaction method with a preliminary stage of reverse transcription can be used. The obtained values of transcript representation levels and their ratios are used to group samples by cluster and multivariate analysis methods.
В качестве примера, для выделения кластеров образцов может быть использован метод бинарной логистической регрессии. В этом случае индекс рецептивности эндометрия может быть рассчитан по формуле:As an example, to distinguish clusters of samples, the method of binary logistic regression can be used. In this case, the endometrial receptivity index can be calculated by the formula:
z - значение регрессионной функции, определяется по формуле:z is the value of the regression function, is determined by the formula:
где
Если значение функции р менее или равно пороговому значению (p≤cut off), делают заключение о несоответствии эндометрия стадии «окна имплантации»; если значение p>cut off, делают заключение о хорошей рецептивности эндометрия и его соответствии стадии окна имплантации. Пороговое значение определяют на основе экспериментальных данных с помощью ROC-анализа.If the value of the function p is less than or equal to the threshold value (p≤cut off), conclude that the endometrium does not match the stage of the “implantation window”; if the value p> cut off, a conclusion is made about the good receptivity of the endometrium and its compliance with the stage of the implantation window. The threshold value is determined based on experimental data using ROC analysis.
4. Реализация изобретения4. The implementation of the invention
Взятие материала путем пайпель-биопсии эндометрия на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8 д.м.ц.). Фрагменты тканей помещают в пластиковую пробирку объемом 1,5 мл, в которую предварительно внесено 700 мкл транспортной среды для стабилизации РНК в биопробах (например, IntactRNA, Евроген, Россия, кат № NL001), обрабатывают и хранят согласно Инструкции производителя. Выделение РНК проводят любым стандартным методом, например, согласно Инструкции к Комплекту реагентов для выделения РНК и ДНК «ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС» (ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Россия, регистрационное удостоверение № ФСР 2010/08867 от 21.09.2010 г/, ТУ 9398-035-46482062-2009). Полученные препараты РНК желательно сразу использовать для постановки реакции обратной транскрипции.Taking material by endometrial pipe-biopsy on the 7-8th day after the peak of the luteinizing hormone (LH + 7-8 d.m.ts.). Tissue fragments are placed in a 1.5 ml plastic tube into which 700 μl of transport medium is preliminarily added to stabilize RNA in biological samples (for example, IntactRNA, Eurogen, Russia, cat. No. NL001), process and store according to the manufacturer's instructions. RNA isolation is carried out by any standard method, for example, according to the Instruction for the RNA and DNA Isolation Kit “PROBA-NK / PROBA-NK-PLUS” (NPF DNA-Technology CJSC, Russia, registration certificate No. ФСР 2010/08867 dated 21.09 .2010 g /, TU 9398-035-46482062-2009). It is advisable to immediately use the obtained RNA preparations for the formulation of the reverse transcription reaction.
Обратную транскрипцию проводят любым стандартным методом, например, согласно Инструкции к набору реагентов с использованием AMV-обратной транскриптазы (Fermentas, Литва, кат № ЕР0641) в комплектации с 5 х буфером для обратной транскрипции (состав: 250 mM Tris-HCl (рН 8.5 при 25°С), 40 mM MgCl2, 150 mM KCl, 5 mM DTT). В состав ОТ-смеси входят дНТФ в конечной концентрации 0,2 мМ каждого и смесь случайных гексамеров в конечной концентрации 0,5 рМ.Reverse transcription is carried out using any standard method, for example, according to the Instructions for the reagent kit using AMV reverse transcriptase (Fermentas, Lithuania, cat. No. EP0641) in combination with 5 x reverse transcription buffer (composition: 250 mM Tris-HCl (pH 8.5 at 25 ° C), 40 mM MgCl 2 , 150 mM KCl, 5 mM DTT). The composition of the RT mixture includes dNTP in a final concentration of 0.2 mM each and a mixture of random hexamers in a final concentration of 0.5 rM.
Для определения уровня представленности мРНК исследуемых генов используют стандартный метод ПЦР «в реальном времени» в стандартных условиях с праймерами и флуоресцентно-мечеными пробами (зонды), специфичными к последовательностям определяемых РНК. Для избежания обработки образцов ДНКазой лучше использовать олигонуклеотиды, не взаимодействующие с геномной ДНК. Например, на конечный объем реакционной смеси 35 мкл состав реакционной смеси может быть следующим: 66 мМ трис-HCl, рН 8,8, 16,6 мМ аммония сульфат, 0,01% Tween-20, 0,001% желатин, 3 мМ хлористый магний, по 250 мкМ каждого из дНТФ по 12.5 пмоль каждого праймера и зонда, 0,8 единиц Taq-полимеразы.To determine the level of mRNA representation of the studied genes, the standard “real-time” PCR method is used under standard conditions with primers and fluorescently-labeled samples (probes) specific to the sequences of the determined RNAs. To avoid processing the samples with DNase, it is better to use oligonucleotides that do not interact with genomic DNA. For example, for a final reaction volume of 35 μl, the composition of the reaction mixture may be as follows: 66 mM Tris-HCl, pH 8.8, 16.6 mM ammonium sulfate, 0.01% Tween-20, 0.001% gelatin, 3 mM magnesium chloride , 250 μM each of dNTPs 12.5 pmol of each primer and probe, 0.8 units of Taq polymerase.
Для повышения чувствительности и специфичности реакции желательно использовать «горячий» старт, который обеспечивается либо использованием Taq-полимеразы, активируемой при высокой температуре, либо методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоев, разделенных слоем парафина. Нижний слой содержит дНТФ, праймеры и зонд, верхний - матрицу и Taq-полимеразу. Смешение слоев и превращение их в реакционную смесь происходит только при плавлении парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки.To increase the sensitivity and specificity of the reaction, it is desirable to use a “hot” start, which is ensured either by using Taq polymerase activated at high temperature or by the method of preparation of the reaction mixture consisting of two layers separated by a paraffin layer. The lower layer contains dNTP, primers and a probe, the upper layer contains a matrix and Taq polymerase. The layers are mixed and converted into a reaction mixture only when paraffin is melted, which eliminates non-specific annealing of the primers on the target DNA during initial heating of the tube.
Проявку накопления продуктов реакции проводят с помощью флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов (зондов) или интекалирующих красителей. Уровень представленности транскриптов и их соотношение можно рассчитывать с помощью метода ΔCq.The manifestation of the accumulation of reaction products is carried out using fluorescently-labeled oligonucleotides (probes) or intercalating dyes. The level of transcript representation and their ratio can be calculated using the ΔCq method.
Полученные значения уровней представленности транскриптов и их соотношения используют для группировки образцов методами кластерного и многофакторного анализа.The obtained values of transcript representation levels and their ratios are used to group samples by cluster and multivariate analysis methods.
Пример использования изобретенияAn example of using the invention
В амбулаторных условиях с помощью аспирационной кюретки «Pipelle de Cornier» (Laboratorie C.C.D.», Франция) проведена аспирационная пайпель-биопсия эндометрия. Обследовано две группы женщин репродуктивного возраста. Первую группу составили 47 пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, обратившихся для проведения программы ЭКО и ПЭ, с успешным результатом реализации данной программы. Критериями включения пациенток в исследование были: возраст женщин до 39 лет; регулярный менструальный цикл; трубно-перитонеальный фактор бесплодия; сохраненный овариальный резерв; наличие в анамнезе не более 3-х неудачных попыток ЭКО; отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ; отсутствие противопоказаний к проведению ЭКО и вынашиванию беременности; фертильная или субфертильная сперма супруга; нормальный кариотип обоих супругов. Критерии исключения: бесплодие, обусловленное иммунологическим фактором; бесплодие, связанное с отсутствием овуляции; миома матки любых размеров; острые воспалительные заболевания органов малого таза; хронические заболевания в стадии обострения; олигоастенотератозооспермия (по нормативам ВОЗ, 2010 год); пороки развития внутренних половых органов; соматические и психические заболевания, являющиеся противопоказанием для вынашивания беременности и родов. Биоптат эндометрия получен на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8 д.м.ц.), диагностированного по данным УЗИ и/или мочевому тесту Clear Blue (Unipath Ltd, Великобритания), основанном на определении уровня ЛГ в моче. Пайпель-биопсия выполнена в цикле, предшествующем стимуляции суперовуляции.On an outpatient basis, using an aspiration curette “Pipelle de Cornier” (Laboratorie C.C.D. ”, France), an endometrial aspiration pipeline biopsy was performed. Two groups of women of reproductive age were examined. The first group consisted of 47 patients with tubal-peritoneal infertility factor who applied for the IVF and PE program, with a successful outcome of this program. The criteria for inclusion of patients in the study were: the age of women under 39; regular menstrual cycle; tubal-peritoneal factor of infertility; stored ovarian reserve; history of no more than 3 unsuccessful IVF attempts; the absence of endometrial pathology according to ultrasound; the absence of contraindications for IVF and gestation; spouse fertile or subfertile sperm; normal karyotype of both spouses. Exclusion criteria: infertility due to an immunological factor; infertility associated with a lack of ovulation; uterine fibroids of any size; acute inflammatory diseases of the pelvic organs; chronic diseases in the acute stage; oligoastenoteratozoospermia (according to WHO guidelines, 2010); malformations of the internal genital organs; somatic and mental diseases, which are a contraindication for gestation of pregnancy and childbirth. An endometrial biopsy was obtained 7-8 days after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8 dm.ts.), diagnosed by ultrasound and / or urine test Clear Blue (Unipath Ltd, UK), based on the determination of LH level in urine. Pipel biopsy was performed in a cycle prior to stimulation of superovulation.
Вторую группу составили 24 условно-здоровые женщины (группа сравнения), обратившихся с целью профилактического осмотра или подбора средств контрацепции. Критерии включения: возраст женщин до 39 лет; регулярный 28-дневный менструальный цикл; наличие детей; отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ, соответствие эндометрия 19-21 дню менструального цикла. Критерии исключения: миома матки любых размеров; острые воспалительные заболевания органов малого таза; хронические заболевания в стадии обострения.The second group consisted of 24 conditionally healthy women (comparison group) who applied for the purpose of a routine examination or selection of contraception. Inclusion criteria: women age up to 39 years; regular 28-day menstrual cycle; the presence of children; the absence of endometrial pathology according to ultrasound, the correspondence of the endometrium to 19-21 days of the menstrual cycle. Exclusion criteria: uterine fibroids of any size; acute inflammatory diseases of the pelvic organs; chronic diseases in the acute stage.
Помимо исследования транскрипционного профиля генов выполнено гистологическое исследование. Биоптаты эндометрия фиксировали в 10%-м нейтральном формалине в течение 24 часов, после соответствующей стандартной обработки заключали в парафин. Срезы толщиной 5 мкн окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводилось в световом микроскопе при увеличении от ×50 до ×400.In addition to studying the transcriptional profile of genes, a histological study was performed. Endometrial biopsies were fixed in 10% neutral formalin for 24 hours, after appropriate standard processing they were enclosed in paraffin. Sections 5 microns thick were stained with hematoxylin and eosin. The study of histological preparations was carried out under a light microscope at magnifications from × 50 to × 400.
Кластерный анализ результатов исследования транскрипционных профилей генов позволил выделить 2 группы образцов: пререцептивного и рецептивного эндометрия (фиг. 1). На фигуре представлены тепловые карты дерева иерархической классификации 71 образца тканей биоптатов эндометрия на основе исследования уровней экспрессии мРНК функциональных генов с помощью количественной ОТ-ПЦР. Выделено две группы образцов, которые можно охарактеризовать как пререцептивный и рецептивный эндометрий. По градиенту изменения содержания транскриптов темно-серым цветом отмечены образцы с высоким уровнем экспрессии, светло-серым - с низким.Cluster analysis of the results of the study of transcriptional gene profiles allowed us to distinguish 2 groups of samples: prereceptive and receptive endometrium (Fig. 1). The figure shows heat maps of a tree of hierarchical classification of 71 tissue samples of endometrial biopsies based on a study of the levels of mRNA expression of functional genes using quantitative RT-PCR. Two groups of samples were identified that can be described as prereceptive and receptive endometrium. According to the gradient of the transcript content change, samples with a high level of expression are marked with dark gray, light gray with low.
Разделение на группы хорошо соотносилось, однако не во всех случаях совпадало с данными гистологического исследования биоптатов эндометрия. Так, только 27 (77,1%) из 35 образцов стадии средней секреции согласно данным гистологического исследования были определены методом ОТ-ПЦР как «рецептивный эндометрий». 8 образцов, идентифицированных гистологическим методом как стадия средней секреции, функционально были незрелыми и не готовыми к имплантации эмбриона, все они относились к группе женщин с бесплодием.The division into groups was well correlated, but not in all cases it coincided with the data of a histological examination of endometrial biopsies. So, only 27 (77.1%) of 35 samples of the stage of medium secretion according to histological data were determined by RT-PCR as “receptive endometrium”. Eight samples identified by the histological method as the stage of medium secretion were functionally immature and not ready for implantation of the embryo; all of them belonged to the group of women with infertility.
Из 36 образцов стадии ранней секреции согласно данным гистологического исследования 32 (88,9%) были определены методом ОТ-кПЦР как «пререцептивный эндометрий». 4 образца, идентифицированных гистологическим методом как стадия ранней секреции, функционально были готовыми к нидации эмбриона, все они также относились к группе женщин с бесплодием.According to the histological data, 32 out of 36 samples of the stage of early secretion were determined by RT-qPCR as “prereceptive endometrium” according to histological data. Four samples identified by the histological method as the stage of early secretion were functionally ready for nidation of the embryo, all of them also belonged to the group of women with infertility.
Разделения образцов в отдельные кластеры в зависимости от группы обследованных женщин (группа сравнения или женщины с бесплодием) не наблюдалось.Separation of samples into separate clusters was not observed depending on the group of women examined (comparison group or women with infertility).
В рецептивном эндометрии по сравнению с пререцептивным была повышена экспрессия мРНК генов РАЕР в 144 раза (53-663, р=5,8×10-14), GPX3 в 143 (61-299, р=1,5×10-12), IGFBP1 в 52 раза (3,7-3395, р=2,8×10-7), DPP4 в 46 (16-138, р=1,7×10-12), НАВР2 в 26 (14-54, р=4,0×10-11), AQP3 в 5,9 (1,7-8,5, р=1,0×10-7), IMPA2 в 4,7 (3,6-7,8, p=2,5×10-11), TAGLN в 3,3 (2,7-8,1, р=1,5×10-9), ММР7 в 2,4 (1,2-6,4, р=0,03) раз, снижена экспрессия мРНК генов HLA-DOB в 17,5 (9,5-26,5, р=8,2×10-12), MSX1 в 2,8 (1,4-4,2, р=3,4×10-7), POSTN в 1,6 (0,9-3,3, р=0,002) раз (фиг. 2). На фигуре отражено изменение уровня экспрессии мРНК функциональных генов в биоптатах тканей эндометрия женщин в пререцептивном и рецептивном эндометрии. По оси «x» перечислены гены. Значение медианы уровня экспрессии мРНК в пререцептивном эндометрии принято за 1 о.е. По оси «y» отложено значение медианы уровня экспрессии мРНК в тканях рецептивного эндометрия (данная величина показывает во сколько раз количество мРНК выше по сравнению с пререцептивным эндометрием). Столбцы, направленные вверх, свидетельствуют о повышении экспрессии, вниз - о понижении.In the receptive endometrium, as compared with the preceptive one, the expression of mRNA of the RAEP genes was increased by 144 times (53-663, p = 5.8 × 10 -14 ), GPX3 by 143 (61-299, p = 1.5 × 10 -12 ) IGFBP1 52 times (3.7-3395, p = 2.8 × 10 -7 ), DPP4 46 (16-138, p = 1.7 × 10 -12 ), NAVP2 26 (14-54, p = 4.0 × 10 -11 ), AQP3 at 5.9 (1.7-8.5, p = 1.0 × 10 -7 ), IMPA2 at 4.7 (3.6-7.8, p = 2.5 × 10 -11 ), TAGLN at 3.3 (2.7-8.1, p = 1.5 × 10 -9 ), MMP7 at 2.4 (1.2-6.4, p = 0.03) times, decreased mRNA expression of HLA-DOB genes by 17.5 (9.5-26.5, p = 8.2 × 10 -12 ), MSX1 by 2.8 (1.4-4 , 2, p = 3.4 × 10 -7 ), POSTN 1.6 (0.9-3.3, p = 0.002) times (Fig. 2). The figure shows the change in the level of expression of mRNA of functional genes in biopsy samples of endometrial tissues of women in preceptive and receptive endometrium. The x-axis lists genes. The median value of the mRNA expression level in the preceptive endometrium is taken as 1 p.u. The y axis shows the median of the mRNA expression level in the tissues of the receptive endometrium (this value shows how many times the amount of mRNA is higher compared with prereceptive endometrium). Columns directed upwards indicate an increase in expression, downwards indicate a decrease.
На основе многофакторного анализа подобрана дискриминантная функция, позволяющая классифицировать образцы по уровню экспрессии 4 генов: РАЕР, DPP4, MSX1 и HLA-DOB. Уравнение линейной функции имело вид:Based on multivariate analysis, a discriminant function was selected that allows us to classify samples according to the expression level of 4 genes: PAEP, DPP4, MSX1 and HLA-DOB. The equation of the linear function was:
z - классифицирующая дискриминантная функция;z - classifying discriminant function;
Распределение значения ИРЭ в образцах представлено на рисунке (фиг. 3). Оптимальное значение величины порога отсечения (точки cut off) определено с помощью ROC-анализа. Площадь под ROC-кривой составила AUC=1,0 (р=6,6×10-13). Пороговое значение (cut off) ИРЭ составило 62. Значения показателей cut off выше 62 классифицирует образцы как «рецептивный эндометрий». Чувствительность и специфичность предложенного метода оценки рецептивности эндометрия в области порогового значения составила 100% по сравнению с кластерным анализом.The distribution of the IRE value in the samples is shown in the figure (Fig. 3). The optimal value of the cutoff threshold (cut off points) was determined using ROC analysis. The area under the ROC curve was AUC = 1.0 (p = 6.6 × 10 -13 ). The cut-off value of the IRE was 62. The cut off values above 62 classify the samples as “receptive endometrium”. The sensitivity and specificity of the proposed method for assessing endometrial receptivity in the region of the threshold value was 100% compared with the cluster analysis.
ЛИЕРАТУРАLIERATURE
1. Noyes R.W., Hertig AT., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil Steril. 1950; 1: 3-17.1. Noyes R.W., Hertig AT., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil Steril. 1950; 1: 3-17.
2. Noyes R.W., Hertig A.T., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol. 1975; 122: 262-263.2. Noyes R.W., Hertig A.T., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol. 1975; 122: 262-263.
3. Murray M.J., Meyer W.R., Zaino R.J., Lessey B.A., Novotny D.B., Ireland K, et al. A critical analysis of the accuracy, reproducibility, and clinical utility of histologic endometrial dating in fertile women. Fertil Steril. 2004; 81: 1333-1343.3. Murray M.J., Meyer W.R., Zaino R.J., Lessey B.A., Novotny D. B., Ireland K, et al. A critical analysis of the accuracy, reproducibility, and clinical utility of histologic endometrial dating in fertile women. Fertil Steril. 2004; 81: 1333-1343.
4. Coutifaris C., Myers E.R., Guzick D.S., Diamond M.P., Carson S.A., Legro R.S., et al. Histological dating of timed endometrial biopsy tissue is not related to fertility status. Fertil Steril. 2004; 82: 1264-1272.4. Coutifaris C., Myers E.R., Guzick D.S., Diamond M.P., Carson S.A., Legro R.S., et al. Histological dating of timed endometrial biopsy tissue is not related to fertility status. Fertil Steril. 2004; 82: 1264-1272.
5. Ponnampalam A.P., Weston G.C., Trajstman A.C., Susil В., Rogers PA. Molecular classification of human endometrial cycle stages by transcriptional profiling. Mol Hum Reprod. 2004; 10 (12): 879-893.5. Ponnampalam A.P., Weston G.C., Trajstman A.C., Susil B., Rogers PA. Molecular classification of human endometrial cycle stages by transcriptional profiling. Mol Hum Reprod. 2004; 10 (12): 879-893.
6. Talbi S., Hamilton A.E., Vo K.C., Tulac S., Overgaard M.T., Dosiou C., Le Shay N., Nezhat C.N., Kempson R., Lessey B.A., Nayak N.R., Giudice L.C. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 2006; 147 (3): 1097-1121.6. Talbi S., Hamilton A.E., Vo K.C., Tulac S., Overgaard M.T., Dosiou C., Le Shay N., Nezhat C.N., Kempson R., Lessey B.A., Nayak N.R., Giudice L.C. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 2006; 147 (3): 1097-1121.
7. Kao L.C., Germeyer A., Tulac S., Lobo S., Yang J.P., Taylor R.N., et al. Expression profiling of endometrium from women with endometriosis reveals candidate genes for disease based implantation failure and infertility. Endocrinology. 2003; 144: 2870-2881.7. Kao L.C., Germeyer A., Tulac S., Lobo S., Yang J.P., Taylor R.N., et al. Expression profiling of endometrium from women with endometriosis reveals candidate genes for disease based implantation failure and infertility. Endocrinology. 2003; 144: 2870-2881.
8. Borthwick J., Charnock-Jones S., Tom B.D., Hull M.L., Teirney R., Phillips S.C., et al. Determination of the transcript profile of human endometrium. Mol Hum Reprod. 2003; 9: 19-33.8. Borthwick J., Charnock-Jones S., Tom B. D., Hull M. L., Teirney R., Phillips S. C., et al. Determination of the transcript profile of human endometrium. Mol Hum Reprod. 2003; 9: 19-33.
9. Kuokkanen S., Chen В., Ojalvo L., Benard L., Santoro N., Pollard J.W. Genomic profiling of microRNAs and messenger RNAs reveals hormonal regulation in microRNA expression in human endometrium. Biol Reprod. 2010; 82 (4): 791-801.9. Kuokkanen S., Chen B., Ojalvo L., Benard L., Santoro N., Pollard J.W. Genomic profiling of microRNAs and messenger RNAs reveals hormonal regulation in microRNA expression in human endometrium. Biol Reprod. 2010; 82 (4): 791-801.
10. Diaz-Gimeno P, Horcajadas JA, Martmez-Conejero JA, Esteban FJ, P, Pellicer A, C. A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature. Fertil Steril. 2011; 95(1): 50-60.10. Diaz-Gimeno P, Horcajadas JA, Martmez-Conejero JA, Esteban FJ, P, Pellicer A, C. A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature. Fertil Steril. 2011; 95 (1): 50-60.
11. Carson D., Lagow E., Thathiah A., Al-Shami R., Farach-Carson M.C., Vernon M., et al. Changes in gene expression during the early to mid-luteal (receptive phase) transition in human endometrium detected by high-density microarray screening. Mol Hum Reprod. 2002; 8: 971-979.11. Carson D., Lagow E., Thathiah A., Al-Shami R., Farach-Carson M.C., Vernon M., et al. Changes in gene expression during the early to mid-luteal (receptive phase) transition in human endometrium detected by high density microarray screening. Mol Hum Reprod. 2002; 8: 971-979.
12. Riesewijk A., Martin J., Horcajadas J.A., Polman J., Pellicer A., Mosselman S., et al. Gene expression profiling of human endometrial receptivity on days LH+2 versus LH+7 by microarray technology. Mol Hum Reprod. 2003; 9: .253-264.12. Riesewijk A., Martin J., Horcajadas J.A., Polman J., Pellicer A., Mosselman S., et al. Gene expression profiling of human endometrial receptivity on days LH + 2 versus LH + 7 by microarray technology. Mol Hum Reprod. 2003; 9: .253-264.
13. Mirkin S., Arslan M., Churikov D., Corica A., Diaz J.I., Williams S., et al. In search of candidate genes critically expressed in the human endometrium during the window of implantation. Hum Reprod. 2005; 20: 2104-2117.13. Mirkin S., Arslan M., Churikov D., Corica A., Diaz J.I., Williams S., et al. In search of candidate genes critically expressed in the human endometrium during the window of implantation. Hum Reprod. 2005; 20: 2104-2117.
14. Franchi A., Zaret J., Zhang X., Bocca S., Oehninger S. Expression of immunomodulatory genes, their protein products and specific ligands/receptors during the window of implantation in the human endometrium. Mol Hum Reprod. 2008; 14 (7): 413-421.14. Franchi A., Zaret J., Zhang X., Bocca S., Oehninger S. Expression of immunomodulatory genes, their protein products and specific ligands / receptors during the window of implantation in the human endometrium. Mol Hum Reprod. 2008; 14 (7): 413-421.
15. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M., Bendhaou K., Dechaud H., De Vos J., Т., Dewailly D., Hamamah S. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle. Hum Reprod. 2009; 24 (1): 198-205.15. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M., Bendhaou K., Dechaud H., De Vos J., T., Dewailly D., Hamamah S. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle. Hum Reprod. 2009; 24 (1): 198-205.
16. Tseng L.H., Chen I., Chen M.Y., Yan H., Wang C.N., Lee C.L. Genome-based expression profiling as a single standardized microarray platform for the diagnosis of endometrial disorder: an array of 126-gene model. Fertil Steril. 2010; 94 (1): 114-119.16. Tseng L.H., Chen I., Chen M.Y., Yan H., Wang C.N., Lee C.L. Genome-based expression profiling as a single standardized microarray platform for the diagnosis of endometrial disorder: an array of 126-gene model. Fertil Steril. 2010; 94 (1): 114-119.
17. Critchley H.O., Robertson K.A., Forster Т., Henderson T.A., Williams A.R., Ghazal P. Gene expression profiling of mid to late secretory phase endometrial biopsies from women with menstrual complaint. Am J Obstet Gynecol. 2006; 195 (2): 406.e1-416.17. Critchley H.O., Robertson K.A., Forster T., Henderson T.A., Williams A.R., Ghazal P. Gene expression profiling of mid to late secretory phase endometrial biopsies from women with menstrual complaint. Am J Obstet Gynecol. 2006; 195 (2): 406.e1-416.
18. Garrido-Gomez Т., Ruiz-Alonso M., Blesa D., Diaz-Gimeno P., Vilella F., C. Profiling the gene signature of endometrial receptivity: clinical results. Fertil Steril. 2013; 99 (4): 1078-1085.18. Garrido-Gomez T., Ruiz-Alonso M., Blesa D., Diaz-Gimeno P., Vilella F., C. Profiling the gene signature of endometrial receptivity: clinical results. Fertil Steril. 2013; 99 (4): 1078-1085.
19. Mahajan N. Endometrial receptivity array: Clinical application. J Hum Reprod Sci. 2015; 8(3): 121-129.19. Mahajan N. Endometrial receptivity array: Clinical application. J Hum Reprod Sci. 2015; 8 (3): 121-129.
20. Ruiz-Alonso M., Galindo N., Pellicer A., C. What a difference two days make: "personalized" embryo transfer (pET) paradigm: a case report and pilot study. Hum Reprod. 2014; 29 (6): 1244-1247.20. Ruiz-Alonso M., Galindo N., Pellicer A., C. What a difference two days make: "personalized" embryo transfer (pET) paradigm: a case report and pilot study. Hum Reprod. 2014; 29 (6): 1244-1247.
Описание фигурDescription of figures
Фиг. 1. Тепловые карты дерева иерархической классификацииFIG. 1. Heat maps of the hierarchical classification tree
Фиг. 2. Изменение уровня экспрессии мРНК функциональных генов в биоптатах тканей эндометрия женщин в пререцептивном (стадия средней секреции) и рецептивном эндометрии (стадия средней секреции - окно имплантации).FIG. 2. Change in the level of mRNA expression of functional genes in biopsy specimens of endometrial tissues of women in prereceptive (stage of middle secretion) and receptive endometrium (stage of middle secretion - implantation window).
Фиг. 3. Распределение индекса рецептивности эндометрия в кластерах пререцептивного и рецептивного эндометрия.FIG. 3. Distribution of the endometrial receptivity index in prereceptive and receptive endometrial clusters.
Claims (6)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016142462A RU2636527C1 (en) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016142462A RU2636527C1 (en) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2636527C1 true RU2636527C1 (en) | 2017-11-23 |
Family
ID=63853216
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016142462A RU2636527C1 (en) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2636527C1 (en) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2735218C1 (en) * | 2020-02-19 | 2020-10-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of implantation in programs of ancillary reproductive technology in women of senior reproductive age with tuboperitoneal infertility factor |
WO2020215902A1 (en) * | 2019-04-22 | 2020-10-29 | 苏州亿康医学检验有限公司 | Method of determining endometrial receptivity and application thereof |
RU2765639C1 (en) * | 2021-06-15 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for estimation of implantation status of endometry based on endometrial expression vdr, hoxa 11 in art programs in elder reproductive women with tube-bodybodyes |
RU2770288C1 (en) * | 2021-03-24 | 2022-04-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for predicting implantation and childbirth in art programs in women of older reproductive age with tuboperitoneal infertility factor based on the level of endometrial expression of hoxa11 |
RU2783247C1 (en) * | 2021-08-05 | 2022-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of live birth in ivf programs in women of late reproductive age with tubal-peritoneal infertility factor |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2553340C1 (en) * | 2014-04-21 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Diagnostic technique for disturbed endometrial receptivity in patients suffering uterine myoma and infertility |
RU2562559C1 (en) * | 2014-05-27 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук | Method for prediction of endometrial receptivity in in vitro fertilisation cycles |
RU2580629C1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of endometrial receptivity based on evaluation of expression and intracellular localisation of ezrin in sterile women and repeated failures of ivf program |
RU2597845C1 (en) * | 2015-06-25 | 2016-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Method for improvement of endometrial receptivity in patients suffering from infertility associated with endometriosis |
-
2016
- 2016-10-28 RU RU2016142462A patent/RU2636527C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2553340C1 (en) * | 2014-04-21 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Diagnostic technique for disturbed endometrial receptivity in patients suffering uterine myoma and infertility |
RU2562559C1 (en) * | 2014-05-27 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук | Method for prediction of endometrial receptivity in in vitro fertilisation cycles |
RU2580629C1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of endometrial receptivity based on evaluation of expression and intracellular localisation of ezrin in sterile women and repeated failures of ivf program |
RU2597845C1 (en) * | 2015-06-25 | 2016-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Method for improvement of endometrial receptivity in patients suffering from infertility associated with endometriosis |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
A.A. ACOSTA et al. Endometrial dating and determination of the window of implantation in healthy fertile women / FERTILITY AND STERILITY, 2000, V. 73, p.788-798. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020215902A1 (en) * | 2019-04-22 | 2020-10-29 | 苏州亿康医学检验有限公司 | Method of determining endometrial receptivity and application thereof |
RU2735218C1 (en) * | 2020-02-19 | 2020-10-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of implantation in programs of ancillary reproductive technology in women of senior reproductive age with tuboperitoneal infertility factor |
RU2770288C1 (en) * | 2021-03-24 | 2022-04-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for predicting implantation and childbirth in art programs in women of older reproductive age with tuboperitoneal infertility factor based on the level of endometrial expression of hoxa11 |
RU2765639C1 (en) * | 2021-06-15 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for estimation of implantation status of endometry based on endometrial expression vdr, hoxa 11 in art programs in elder reproductive women with tube-bodybodyes |
RU2783247C1 (en) * | 2021-08-05 | 2022-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of live birth in ivf programs in women of late reproductive age with tubal-peritoneal infertility factor |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lédée-Bataille et al. | Role of the endometrial tripod interleukin-18,-15, and-12 in inadequate uterine receptivity in patients with a history of repeated in vitro fertilization–embryo transfer failure | |
Makker et al. | Endometrial expression of homeobox genes and cell adhesion molecules in infertile women with intramural fibroids during window of implantation | |
JP5117852B2 (en) | Prognosis method and kit for breast cancer | |
Baczyk et al. | Complex patterns of GCM1 mRNA and protein in villous and extravillous trophoblast cells of the human placenta | |
RU2636527C1 (en) | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes | |
US20200017912A1 (en) | Methods and systems for assessing infertility and related pathologies | |
Cuman et al. | Preimplantation human blastocysts release factors that differentially alter human endometrial epithelial cell adhesion and gene expression relative to IVF success | |
CA2732849C (en) | Gene expression profile as an endometrial receptivity marker | |
KR102089559B1 (en) | Biomarker for diagnosing or predicting reactivity to FSH of ovary | |
Margioula-Siarkou et al. | LIF endometrial expression is impaired in women with unexplained infertility while LIF-R expression in all infertility sub-groups | |
O’Brien et al. | Upregulation of PSCDBP, TLR2, TWIST1, FLJ35382, EDNRB, and RGS12 gene expression in human myometrium at labor | |
US20140206572A1 (en) | Ovarian markers of follicular maturity and uses thereof | |
Allegra et al. | Endometrial expression of selected genes in patients achieving pregnancy spontaneously or after ICSI and patients failing at least two ICSI cycles | |
Atia et al. | Azoospermia factor microdeletion in infertile men with idiopathic severe oligozoospermia or non-obstructive azoospermia | |
Alfer et al. | Endometrial delay is found to be part of a normal individual dynamic transformation process | |
Vallvé-Juanico et al. | Aberrant expression of epithelial leucine-rich repeat containing G protein–coupled receptor 5–positive cells in the eutopic endometrium in endometriosis and implications in deep-infiltrating endometriosis | |
US20190276890A1 (en) | Gene expression profile as an endometrial receptivity marker | |
EP3607095A1 (en) | Kit and method for determining the receptivity status of an endometrium | |
Sharpe-Timms | Haptoglobin expression by shed endometrial tissue fragments found in peritoneal fluid | |
CN108728523B (en) | Application of Bcl-3 as marker for diagnosing early renal fibrosis | |
Ghosh et al. | Effect of low-dose mifepristone administration on day 2 after ovulation on transcript profiles in implantation-stage endometrium of rhesus monkeys | |
Schöniger et al. | Expression of toll-like receptors 2, 4 and 6 in the equine chorioallantois | |
Miravet-Valenciano et al. | Transcriptomics of the Human Endometrium and Embryo Implantation | |
Chan | Application of Minimally-Invasive Uterine Fluid Aspiration to Identify Candidate Biomarkers of Endometrial Receptivity through a Transcriptomic Approach | |
Kalakota et al. | Endometrial adhesion G protein-coupled receptors are dynamically expressed across the menstrual cycle and expression is altered by ovarian stimulation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181029 |