RU2617953C1 - Preparation for soil and water purufication from oil and oil products - Google Patents

Preparation for soil and water purufication from oil and oil products Download PDF

Info

Publication number
RU2617953C1
RU2617953C1 RU2015157248A RU2015157248A RU2617953C1 RU 2617953 C1 RU2617953 C1 RU 2617953C1 RU 2015157248 A RU2015157248 A RU 2015157248A RU 2015157248 A RU2015157248 A RU 2015157248A RU 2617953 C1 RU2617953 C1 RU 2617953C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
oil
soil
water
drug
preparation
Prior art date
Application number
RU2015157248A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Лариса Анатольевна Ерофеевская
Анастасия Леонидовна Салтыкова
Алина Александровна Вит
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб"
Priority to RU2015157248A priority Critical patent/RU2617953C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2617953C1 publication Critical patent/RU2617953C1/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09CRECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/10Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/14Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Processing Of Solid Wastes (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry.
SUBSTANCE: drug for treatment of soils and water from oil and oil products contains oil, biomass hydrocarbon bacterial strain Bacillus subtilis SNBS-1, deposited in the Russian National Collection of Industrial Microorganisms under accession number VKPM B-12239, anastringent component, which is used as sodium carboxymethylcellulose and organomineral substrate booster - compositional mixture based on clinoptilolite prepared sawdust and humus components at a predetermined ratio.
EFFECT: invention improves the efficiency of purification of soil and water from the crude oil and oil products.
5 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к биотехнологии, а именно препаратам для очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов.The invention relates to biotechnology, namely, preparations for cleaning soils and water from oil and oil products.

В настоящее время загрязнение природной среды нефтяными углеводородами (УВ) является актуальным экологическим вопросом. Проблема реабилитации нарушенных территорий после аварийных нефтеразливов особенно актуальна для районов Крайнего Севера, где эксплуатируются основные нефтегазоносные месторождения Российской Федерации. Будучи высокоорганизованной субстанцией, нефть самостоятельно деградирует очень медленно, процессы окисления одних структур ингибируются другими структурами, трансформация отдельных соединений происходит по пути приобретения устойчивых трудноокисляемых форм (см. Гриценко А.И., Акопова Г.С., Максимов В.М. Экология. Нефть и газ. – М.: Наука, 1997. – 557 с.). Без применения дополнительных мер по реабилитации нарушенных земель процесс самовосстановления нефтезагрязненных почв в регионах с благоприятными климатическими условиями занимает 10-25 лет, в то время как деструкция нефти и ее производных в условиях Севера может длиться до 50 лет и более (см. Пиковский Ю.И. Трансформация техногенных потоков нефти в почвенных экосистемах // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. – М.: Наука, 1988. – С. 7-31; Оборин A.A., Калачникова И.Г., Масливец Т.А., Базенкова Е.И., Плещева О.В., Оглоблина А.И. // Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем. — М.: Наука, 1988. С. 140-159; Foght J.M., Westlike D.W.S. Bioremediation of oil spills // Spill Technol. Newsiett., 1992. – V. 17. – P. 1-10). Currently, environmental pollution with petroleum hydrocarbons (HC) is an urgent environmental issue. The problem of rehabilitation of disturbed territories after emergency oil spills is especially relevant for the Far North, where the main oil and gas fields of the Russian Federation are operated. Being a highly organized substance, oil independently degrades very slowly, the oxidation processes of some structures are inhibited by other structures, the transformation of individual compounds proceeds along the path of acquiring stable hardly oxidized forms (see Gritsenko A.I., Akopova G.S., Maksimov V.M. Ecology. Oil and gas. - Moscow: Nauka, 1997 .-- 557 p.). Without the use of additional measures for the rehabilitation of disturbed lands, the process of self-healing of oil-contaminated soils in regions with favorable climatic conditions takes 10-25 years, while the destruction of oil and its derivatives in the North can last up to 50 years or more (see Pikovsky Yu.I. Transformation of technogenic oil flows in soil ecosystems // Restoration of oil-contaminated soil ecosystems. - M .: Nauka, 1988. - P. 7-31; Oborin AA, Kalachnikova I.G., Maslivets T.A., Bazenkova E.I. , Pleshcheva O.V., Ogloblin A.I. // Vossta the development of oil-contaminated soil ecosystems. - M .: Nauka, 1988.P. 140-159; Foght JM, Westlike DWS Bioremediation of oil spills // Spill Technol. Newsiett., 1992. - V. 17. - P. 1-10) .

Из известных решений, которые позволяют эффективно очистить от нефти почвы северных регионов, экологически наиболее оправданными считаются биологические способы, основанные на интенсификации микробиологической деградации нефтяных УВ (см. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Ильинский В.В. и др. Интродукция бактерий рода Rhodococcus в тундровую почву, загрязненную нефтью // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. Т. 33. №2. С. 198-201).Of the known solutions that can effectively cleanse the soil of northern regions from oil, the biological methods based on the intensification of the microbiological degradation of oil hydrocarbons are considered the most environmentally sound (see Koronelli T.V., Komarova T.I., Ilyinsky V.V. et al. The introduction of bacteria of the genus Rhodococcus into tundra soil contaminated with oil // Applied Biochemistry and Microbiology. 1997. V. 33. No. 2. S. 198-201).

Хорошую эффективность в очистке почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами показал биопрепарат, в котором используют консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов в составе: Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ky-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении 3-12 масс. % каждого микроорганизма (см. RU №2191643, МПК B09C 1/10, C12N 1/20, C12N 1/20, C12R 1/01, опубл. 27.10.2002).A biological product that uses a consortium of oil-oxidizing microorganisms consisting of: Pseudomonas putida PI Ko-1, Pseudomonas fluorescens PI-896, Micrococcus sp. Has shown good efficiency in cleaning soils from oil and oil products pollution. PI Ky-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 with a weight ratio of 3-12 mass. % of each microorganism (see RU No. 2191643, IPC B09C 1/10, C12N 1/20, C12N 1/20, C12R 1/01, publ. 10.27.2002).

При этом для эффективной очистки почв от нефтезагрязнений совместно с суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин (землеудобрительный препарат азотфиксирующих микроорганизмов) в количестве 30-120 г/м2, что усложняет процесс обработки нефтезагрязненного субстрата.At the same time, rizotorfin (a fertilizer of nitrogen-fixing microorganisms) in the amount of 30-120 g / m 2 is introduced into the contaminated medium for effective soil cleaning from oil pollution, which complicates the processing of oil-contaminated substrate.

Известен биопрепарат «Путидойл» (см. SU №1076446, МПК C02F 3/34, B09C 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101/32, C12N 1/20, C12R 1/40, опубл. 28.02.1984), используемый для очистки почвы от нефтяных загрязнений. Биопрепарат создан на основе монокультуры бактерий Pseudomonas putida 36 (см. Дядечко В.Н., Толстокорова Л.Е., Гашев С.Н. и др. О биологической рекультивации нефтезагрязненных песочных почв Среднего Приобья//Почвоведение. - 1990, № 9. - С.148-151). The known biological product “Putidoyl” (see SU No. 1076446, IPC C02F 3/34, B09C 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101/32, C12N 1/20, C12R 1/40, publ. 28.02 .1984) used to clean the soil from oil pollution. The biological product is based on a monoculture of bacteria Pseudomonas putida 36 (see Dyadechko V.N., Tolstokorova L.E., Gashev S.N. et al. On the biological reclamation of oil-contaminated sandy soils of the Middle Ob region // Soil Science. - 1990, No. 9. - S.148-151).

Недостатком известного решения является сложная технология приготовления препарата, которая предусматривает распылительную сушку живой культуры бактерий, что вызывает травмирование бактерий и, как следствие, их гибель или потерю необходимой активности вследствие инактивации клеток под действием высоких температур (+60°С). Для восстановления жизнедеятельности бактерий авторы применяют сложный комплекс мер: подогрев большого количества воды (5 м3) до +18…+28°С, перемешивание, аэрирование, и все это в течение длительного времени (16-24 ч), что в полевых условиях выполнить довольно сложно. A disadvantage of the known solution is the complicated technology of preparation of the drug, which provides for spray drying of a live culture of bacteria, which causes injury to bacteria and, as a result, their death or loss of necessary activity due to inactivation of cells under high temperatures (+ 60 ° C). To restore the vital activity of bacteria, the authors apply a complex set of measures: heating a large amount of water (5 m 3 ) to + 18 ... + 28 ° C, mixing, aeration, and all this for a long time (16-24 hours), which in the field It’s quite difficult to complete.

Известен способ очистки почвы с использованием биопрепарата «Деворойл», содержащего консорциум углеводородокисляющих микроорганизмов Rhodococcus maris, Rhodococcus erythropolis, Pseudomonas stutzeri, Yarrowia lipolytica (см. RU № 2114071, МПК C02F 3/34, B09C 1/10, C12N 1/20, C12N 1/26, C12Q 1/02, опубл. 27.06.1998). Этот способ предусматривает при хранении суспензии микроорганизмов использование NaCl, биологически активных веществ (витамины) и осмопротекторов (бетаин).A known method of cleaning the soil using a biological product "Devoroil" containing a consortium of hydrocarbon-oxidizing microorganisms Rhodococcus maris, Rhodococcus erythropolis, Pseudomonas stutzeri, Yarrowia lipolytica (see RU No. 2114071, IPC C02F 3/34, B09N 1/10, C12N10, C12 1/26, C12Q 1/02, publ. 06/27/1998). This method involves the storage of a suspension of microorganisms using NaCl, biologically active substances (vitamins) and osmoprotectors (betaine).

Недостатком известного способа является то, что, несмотря на добавление к бактериальной суспензии защитных веществ, численность микроорганизмов снижается независимо от температуры хранения.The disadvantage of this method is that, despite the addition of protective substances to the bacterial suspension, the number of microorganisms decreases regardless of the storage temperature.

Известен способ очистки почв и грунтов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, с использованием олеофильного биопрепарата на основе ассоциации нефтеокисляющих микроорганизмов – Rhodococcus erythropolis ИЭГМ 708 и Rhodococcus ruber ИЭГМ 327 и биосурфактанта - Rhodococcus, отличающийся тем, что производят первоначальную обработку сильнозагрязненной почвы/грунта до достижения уровня остаточных нефтепродуктов 5-10 вес. % и последующее добавление органического разрыхлителя, олеофильный биопрепарат вносят в количестве не менее 10 л на 0,5-1,0 м3 почвы/грунта по меньшей мере один раз в неделю в течение первого месяца и в дальнейшем по меньшей мере один раз в месяц до окончания цикла биоремедиации в сочетании с периодическим рыхлением и увлажнением и дополнительно производят фиторемедиацию – засев многолетними травами (см. RU № 2193464, МПК B09C 1/10, C12N 1/26, C12N 1/26, C12R 1/01, опубл. 27.11.2002).A known method of cleaning soils and soils contaminated with oil and oil products using an oleophilic biological product based on the association of oil-oxidizing microorganisms — Rhodococcus erythropolis IEGM 708 and Rhodococcus ruber IEGM 327 and a biosurfactant — Rhodococcus, characterized in that the soil is thoroughly cultivated to reach the initial level residual oil 5-10 weight. % and the subsequent addition of an organic baking powder, an oleophilic biological product is applied in an amount of at least 10 liters per 0.5-1.0 m 3 of soil / soil at least once a week for the first month and subsequently at least once a month before the end of the bioremediation cycle, in combination with periodic loosening and moistening, and additionally produce phytoremediation - sowing with perennial grasses (see RU No. 2193464, IPC B09C 1/10, C12N 1/26, C12N 1/26, C12R 1/01, publ. 27.11 .2002).

Недостатком изобретения является сложная технология применения способа, предполагающего использование твердожидкофазного биореактора и/или аэрируемых почвенных площадок в качестве первоначальной обработки сильнозагрязненной почвы. Такой метод снижения уровня загрязнения трудоемок и предполагает нарушение плодородного слоя почвы (гумусированной части почвенного профиля), что не применимо при авариях и разливах нефти и нефтепродуктов в условиях Крайнего Севера (в том числе в зоне тундры). Поскольку обязательным условием очистки и восстановления нефтезагрязненных мерзлотных почв является сохранение плодородного слоя почвы. Это объясняется тем, что на месте снятия почвенного покрова в мерзлотных условиях возможно образование термокарстовой оттайки с образованием воронок, провалов или аласов, что в свою очередь приводит к развитию термоэрозии и наносит большой ущерб ранимой и трудно восстанавливаемой почвенной экосистеме Крайнего Севера.The disadvantage of the invention is the complex technology of the application of the method, involving the use of solid-liquid bioreactor and / or aerated soil pads as the initial treatment of highly contaminated soil. This method of reducing the level of pollution is time-consuming and involves disruption of the fertile soil layer (humus part of the soil profile), which is not applicable for accidents and oil spills in the Far North (including in the tundra zone). Since a prerequisite for cleaning and restoring oil-contaminated permafrost soils is the preservation of the fertile soil layer. This is explained by the fact that at the place of removing the soil cover under permafrost conditions, the formation of thermokarst defrost with the formation of funnels, dips or alas is possible, which in turn leads to the development of thermoerosion and causes great damage to the vulnerable and difficult to restore soil ecosystem of the Far North.

Известен биопрепарат «Нафтокс», технология получения и применения которого сравнительно проста. Биопрепарат позволяет эффективно очистить почву и воду от нефти и нефтепродуктов (см. RU №2053206, МПК С02F 3/34, C09K 3/32, B09C 1/10, B09C 101/00, опубл. 27.01.1996).Known biological product "Naftox", the technology for the preparation and use of which is relatively simple. The biological product allows you to effectively clean the soil and water from oil and oil products (see RU No. 2053206, IPC С02F 3/34, C09K 3/32, B09C 1/10, B09C 101/00, published on 01.27.1996).

Недостатком «Нафтокса» является малый срок хранения биопрепарата – не более 1 месяца, а также неспособность его применения в условиях пониженных положительных температур (+5°С).The disadvantage of Naftox is the short shelf life of the biological product - not more than 1 month, as well as the inability to use it in conditions of low positive temperatures (+ 5 ° C).

Известен биопрепарат, представляющий собой водную суспензию высокоэффективных бактерий, способных очищать воду и почвы от нефти и нефтепродуктов (см. RU №2428469, МПК C12N 1/20, C02F 3/34, C09K 3/32, B09C 1/10, опубл. 10.09.2011).A biological product is known, which is an aqueous suspension of highly effective bacteria capable of purifying water and soil from oil and oil products (see RU No. 2428469, IPC C12N 1/20, C02F 3/34, C09K 3/32, B09C 1/10, publ. 10.09 .2011).

Его недостатком является то, что бактерии препарата утилизируют только нормальные парафины нефти (С12-С18). Другим недостатком данного изобретения является неспособность биопрепарата работать в условиях пониженных положительных температур (+5°С). Третьим недостатком данного изобретения является получение только жидкой формы препарата, что сокращает сроки хранения биопрепарата. Its disadvantage is that the bacteria of the drug utilize only normal oil paraffins (C12-C18). Another disadvantage of this invention is the inability of the biological product to work in conditions of low positive temperatures (+ 5 ° C). The third disadvantage of this invention is to obtain only a liquid form of the drug, which reduces the shelf life of the biological product.

Известен способ очистки почв от нефти штаммом бактерий Bacillus subtilis, выращенным на мясопептонном агаре при температуре +37°С. Способ позволяет в течение 3 месяцев летнего периода снизить концентрацию нефти в почве до 0,48 % (см. RU № 2446900, МПК B09C 1/10, опубл. 10.04.2012).A known method of purifying soils from oil with a strain of bacteria Bacillus subtilis grown on meat and peptone agar at a temperature of + 37 ° C. The method allows for 3 months of the summer period to reduce the concentration of oil in the soil to 0.48% (see RU No. 2446900, IPC B09C 1/10, publ. 10.04.2012).

Недостатком известного способа является применение только жидкой формы биопрепарата, что снижает сроки сохранения жизнеспособности бактерий, а также то, что штамм осуществляет деградацию только нефти и только в почве и не способен утилизировать нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат), в том числе в условиях широкого диапазона температур от +5 до +40°С.The disadvantage of this method is the use of only a liquid form of biological product, which reduces the shelf life of bacteria, as well as the fact that the strain degrades only oil and only in the soil and is not able to dispose of oil products (diesel fuel, motor oil, hydraulic oil, gas condensate), including in a wide temperature range from +5 to + 40 ° С.

Известен биопрепарат, состоящий из аэробных нефтеокисляющих бактерий, иммобилизованных на твердых субстратах-носителях (см. RU № 2404138, МПК C02F 3/34, C12N 1/26, опубл. 20.11.2010). Биопрепарат обладает высокой активностью по отношению к нефтезагрязнению. При этом биопрепарат предусматривает только очистку морской воды и не позволяет оценить деструктирующую способность биопрепарата по отношению к почве. Кроме того, штамм бактерий Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1, составляющий основу биопрепарата, не способен развиваться при пониженных положительных температурах (от +5°С), что делает его неперспективным для проведения нефтеочистки почвы в районах с коротким тепловым периодом (см. RU № 2268934, МПК C12N 1/20, C02F 3/34, опубл. 27.01.2006).Known biological product consisting of aerobic oil-oxidizing bacteria immobilized on solid substrate substrates (see RU No. 2404138, IPC C02F 3/34, C12N 1/26, publ. 20.11.2010). The biological product is highly active in relation to oil pollution. In this case, the biological product provides only for the purification of sea water and does not allow to evaluate the destructive ability of the biological product in relation to the soil. In addition, the bacterial strain Phyllobacterium myrsinacearum DKS-1, which is the basis of the biological product, is not able to develop at low positive temperatures (from + 5 ° C), which makes it unpromising for oil refining in areas with a short thermal period (see RU No. 2268934 IPC C12N 1/20, C02F 3/34, publ. 01/27/2006).

Наиболее близким к заявляемому техническому решению является бактериальный препарат, состоящий из высокоактивных живых аэробных нефтеокисляющих бактерий (Mycobacterium, Pseudomonas и др.), выращенных на твердых субстратах-носителях с титрами 2,5-7,0·109 кл./г. (см. RU № 2053205, МПК C02F 3/34, C09K 3/32, B09C 1/10, B09C 101/00, опубл. 27.01.1996). В качестве субстрата-носителя для иммобилизации микроорганизмов используют гамма-стерильный торф с рН 6,8-7,0 в количестве 40-45 масс. % и воду в количестве 58,95-53,25 масс. %. С целью поддержания нефтеокисляющей активности в процессе хранения в препарат дополнительно вводят питательные субстраты: аммоний щавелевокислый (0,05-1,0 масс. %) и нормальные парафины (1,0-1,5 масс. %). Closest to the claimed technical solution is a bacterial preparation consisting of highly active live aerobic oil-oxidizing bacteria (Mycobacterium, Pseudomonas and others) grown on solid carrier substrates with titers of 2.5-7.0 · 10 9 cells / g. (see RU No. 2053205, IPC C02F 3/34, C09K 3/32, B09C 1/10, B09C 101/00, publ. 01.27.1996). As a carrier substrate for the immobilization of microorganisms use gamma-sterile peat with a pH of 6.8-7.0 in an amount of 40-45 wt. % and water in the amount of 58.95-53.25 mass. % In order to maintain oil-oxidizing activity during storage, nutrient substrates are additionally introduced into the preparation: ammonium oxalate (0.05-1.0 wt.%) And normal paraffins (1.0-1.5 wt.%).

Недостатком данного биопрепарата является то, что бактерии биопрепарата утилизируют только нормальные парафины нефти (С12-С18), а это 10-20% от состава нефти. В состав же нефти входят, кроме нормальных парафинов, нафтены, ароматические, полиароматические, непредельные, предельные, изопреноидные и другие углеводороды, все они более токсичны для живой природы, чем нормальные углеводороды, и без их биодеструкции очистка от нефтезагрязнений будет незначительная. Кроме того, биопрепарат содержит нефтеокисляющие бактерии, для поддержания жизнедеятельности которых требуется рН среды 6,8-7,0 и большое количество воды (около 60% воды), что снижает его эффективность во времени.The disadvantage of this biological product is that the biological product bacteria utilize only normal oil paraffins (C12-C18), which is 10-20% of the oil composition. The composition of oil includes, in addition to normal paraffins, naphthenes, aromatic, polyaromatic, unsaturated, saturated, isoprenoid and other hydrocarbons, all of them are more toxic to wildlife than normal hydrocarbons, and without their biodegradation, oil pollution will be negligible. In addition, the biological product contains oil-oxidizing bacteria, which require a pH of 6.8-7.0 and a large amount of water (about 60% water) to maintain their vital functions, which reduces its effectiveness over time.

Задача, на решение которой направлено заявленное изобретение, выражается в устранении указанных недостатков и заключается в расширении номенклатуры препаратов для очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов в широком диапазоне температур, от +5 до +40°С.The problem to which the claimed invention is directed is expressed in eliminating these drawbacks and is to expand the range of products for cleaning soils and water from oil and oil products in a wide temperature range, from +5 to + 40 ° С.

Технический эффект, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в получении препарата для очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов.The technical effect obtained when solving the problem is expressed in the preparation of a preparation for cleaning soils and water from oil and oil products.

Для решения поставленной задачи препарат для очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов, содержащий, в масс. %: нефть - 0,1; биомассу бактерий-биодеструкторов нефти и нефтепродуктов - 1,0; связующий компонент 1,0 и органоминеральный субстрат-носитель для биодеструкторов - до 100,0. При этом в качестве биодеструкторов нефти и нефтепродуктов препарат содержит углеводородокисляющие бактерии Bacillus subtilis СНБС-1. В качестве связующего компонента - натрийкарбоксиметилцеллюлозу. В качестве органоминерального субстрата-носителя содержит композиционную смесь клиноптилолита, подготовленных древесных опилок и перегноя в соотношении, масс. %: клиноптилолит - 10,0; подготовленные опилки древесные - 10,0; перегной - 80,0.To solve this problem, a preparation for cleaning soils and water from oil and oil products, containing, in mass. %: oil - 0.1; the biomass of bacteria, biodestructors of oil and oil products - 1.0; a binder component of 1.0 and an organomineral substrate carrier for biodestructors - up to 100.0. At the same time, the preparation contains hydrocarbon-oxidizing bacteria Bacillus subtilis SNBS-1 as biodestructors of oil and oil products. As a binder component - sodium carboxymethyl cellulose. As an organomineral substrate, the carrier contains a composite mixture of clinoptilolite, prepared wood sawdust and humus in the ratio, mass. %: clinoptilolite - 10.0; prepared wood sawdust - 10.0; humus - 80.0.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию «новизна».A comparative analysis of the characteristics of the claimed solution with the signs of analogues indicates the conformity of the claimed solution to the criterion of "novelty."

Препарат отличается от аналога тем, что в качестве биодеструкторов нефти и нефтепродуков содержит бактерии Bacillus subtilis СНБС-1, способные развиваться и деструктировать нефть и нефтепродукты в условиях широкого диапазона температур (от +5 до +40°С); в качестве твердого субстрата-носителя для биодеструкторов содержит органоминеральную композицию на основе клиноптилолита, подготовленных опилок древесных и перегноя. В качестве связующего компонента содержит натрийкарбоксиметилцеллюлозу.The drug differs from the analogue in that it contains Bacillus subtilis SNBS-1 bacteria as biodestructors of oil and oil products, capable of developing and degrading oil and oil products under a wide temperature range (from +5 to + 40 ° С); as a solid carrier substrate for biodestructors, it contains an organomineral composition based on clinoptilolite, prepared wood sawdust and humus. As a binder component contains sodium carboxymethyl cellulose.

Характеристика штамма, используемого для получения препарата.Characterization of the strain used to obtain the drug.

Предлагаемый штамм бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 выделен 16 февраля 2015 года из мерзлых почвенных образцов, загрязненных дизельным топливом (соляркой), отобранных возле емкостей Момского РЭС ОАО «Сахаэнерго», Северо-Восток Якутии, Момский район, село Хонуу.The proposed bacterial strain Bacillus subtilis SNBS-1 was isolated on February 16, 2015 from frozen soil samples contaminated with diesel fuel (diesel fuel) taken near the containers of the Momsky Distribution Zone of Sakhaenergo OJSC, Northeast Yakutia, Momsky District, Honuu Village.

Штамм идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ), ФГУП «ГосНИИгенетика», 117545, Москва, 1-й Дорожный пр-д, 1, с присвоением регистрационного номера ВКПМ В-12239.The strain was identified and deposited in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms (VKPM), Federal State Unitary Enterprise GosNIIgenetika, 117545, Moscow, 1st Dorozhny pr-d, 1, with assignment of a registration number to VKPM B-12239.

Первичный скрининг по базе данных GenBank и RDP-II показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам: Bacteria; Firmicutes; Bacilli; Bacillales; Bacillaceae; Bacillus.Initial screening using the GenBank and RDP-II database showed that the studied strain belongs to the following systematic groups: Bacteria; Firmicutes Bacilli; Bacillales; Bacillaceae; Bacillus.

По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК (99%), а также ПЦР анализа с использованием видоспецифических праймеров тестируемый штамм отнесен к виду Bacillus subtilis.According to the results of the analysis of sequencing of variable regions of genes encoding 16S rRNA (99%), as well as PCR analysis using species-specific primers, the test strain is classified as Bacillus subtilis.

Полученный штамм характеризуется следующими признаками.The resulting strain is characterized by the following features.

Морфологические признакиMorphological features

Грамположительные споровые палочки, расположенные беспорядочными скоплениями.Gram-positive spore bacilli located in random clusters.

Культуральные признаки Cultural signs

На мясопептонном агаре (МПА) (масс. %): ферментативный пептон – 1,0; натрий хлористый – 0,5; агар – 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2, формирует желтые округлой формы колонии диаметром до 5 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.On meat peptone agar (MPA) (wt.%): Enzymatic peptone - 1.0; sodium chloride - 0.5; agar - 1.0; meat water - the rest, pH 7.0-7.2, forms yellow rounded colonies with a diameter of up to 5 mm. The consistency is soft, easily removed from the surface of the agar, easily smeared.

На питательном агаре на основе гидролизата рыбной муки (масс. %): гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное; рН 7,1 - 7,5, формирует желтые округлой формы колонии диаметром до 1-3 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.On nutrient agar based on a fish meal hydrolyzate (wt.%): A fish meal hydrolyzate - 1.2; enzymatic peptone - 1.2; sodium chloride - 0.6; agar - 1.0; distilled water - the rest; pH 7.1 - 7.5, forms yellow rounded colonies with a diameter of up to 1-3 mm. The consistency is soft, easily removed from the surface of the agar, easily smeared.

На среде Сабуро (масс. %): гидролизат рыбной муки – 1,0; панкреатический гидролизат казеина – 1,0; дрожжевой экстракт – 0,2; натрия фосфат однозамещенный – 0,2; D-глюкоза – 4,0; агар – 1,0; вода дистиллированная – остальное; рН 6,0±3, формирует непрозрачные желтоватые колонии диаметром 1-5 мм. Консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности среды, легко размазываются. On the environment of Saburo (wt.%): Hydrolyzed fish meal - 1.0; casein pancreatic hydrolyzate - 1.0; yeast extract - 0.2; monosubstituted sodium phosphate - 0.2; D-glucose 4.0; agar - 1.0; distilled water - the rest; pH 6.0 ± 3, forms opaque yellowish colonies with a diameter of 1-5 mm. The consistency is soft, easily removed from the surface of the medium, easily smeared.

В мясопептонном бульоне (масс. %): ферментативный пептон – 1,0, натрий хлористый – 0,5, вода мясная – остальное; рН 7,0-7,2, образуют муть и пленку на поверхности бульона.In meat and peptone broth (wt.%): Enzymatic peptone - 1.0, sodium chloride - 0.5, meat water - the rest; pH 7.0-7.2, form a haze and film on the surface of the broth.

На минеральной среде Мюнца (см. Керстен Д.К. Морфологические и культуральные свойства индикаторных микроорганизмов нефтегазовой съемки. - Микробиология, 1963, №5. - С.1024-1030) с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, бензин) следующего состава: (масс. %) KNO3 – 0,4; MgSO4·7H2O – 0,08; NaCl – 0,1; K2HPO4 – 0,14; KH2PO4 – 0,06; агар - 2,0; нефть или нефтепродукты – 1,0; вода дистиллированная – остальное, рН – 7,2, растет в виде серовато-желтых выпуклых колоний диаметром 1 мм.On the mineral environment of Münz (see Kersten D.K. Morphological and cultural properties of indicator microorganisms of oil and gas imaging. - Microbiology, 1963, No. 5. - S.1024-1030) with oil and oil products (diesel fuel, motor oil, hydraulic oil, gas condensate, gasoline) of the following composition: (wt.%) KNO3- 0.4; MgSOfour7H2O - 0.08; NaCl - 0.1; K2HPOfour- 0.14; Kh2POfour- 0.06; agar - 2.0; oil or petroleum products - 1.0; distilled water - the rest, pH 7.2, grows in the form of grayish-yellow convex colonies with a diameter of 1 mm.

Физиолого-биохимические признакиPhysiological and biochemical characteristics

Штамм аэроб, растет при температуре от +5 до +40°С, более интенсивно растет при + 16…+37°С. Растет при рН 5,5–9,0. Оптимум рН 6,0–8,0. Растет в солевом бульоне с добавлением 0,1-2,0% NaCl. The aerobic strain grows at a temperature of +5 to + 40 ° C, grows more intensively at + 16 ... + 37 ° C. It grows at pH 5.5–9.0. The optimum pH is 6.0–8.0. It grows in salt broth with the addition of 0.1-2.0% NaCl.

Используемые источники углерода: сорбит. Used carbon sources: sorbitol.

Проверенные неиспользуемые источники углерода: лактоза, глюкоза, цитрат натрия, малонат натрия. Штамм индол-отрицателен. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Фенилаланиндезоксаминаза отрицательная. Не ферментирует бета-галактозидазу. Утилизирует инозит. Продукт, синтезируемый штаммом: поверхностно-активные вещества, способные деструктировать нефть. Использует в качестве источника энергии углеводороды нефти и нефтепродуктов.Proven unused carbon sources: lactose, glucose, sodium citrate, sodium malonate. The strain is indole negative. The Voges-Proskauer reaction is negative. Phenylalanine deoxaminase is negative. Does not ferment beta galactosidase. Disposes of inositol. Product synthesized by strain: surfactants capable of degrading oil. Uses petroleum hydrocarbons and oil products as an energy source.

Штамм не токсичен по отношению к высшим растениям. Биотестирование проведено на семенах овса обыкновенного и редьки масличной.The strain is not toxic to higher plants. Biotesting was carried out on the seeds of common oats and oil radish.

Штамм может храниться в лиофилизированном состоянии в запаянных ампулах и в пробирках на скошенном мясопептонном агаре при температуре +4°С. The strain can be stored in a lyophilized state in sealed ampoules and in test tubes on beveled meat and peptone agar at a temperature of + 4 ° C.

Характеристика сырья, используемого для приготовления органоминерального субстрата-носителя для иммобилизации бактерийCharacteristics of the raw materials used for the preparation of an organomineral carrier substrate for immobilizing bacteria

Для приготовления твердого субстрата-носителя для иммобилизации штамма Bacillus subtilis СНБС-1 применяется композиционная смесь клиноптилолита, подготовленных древесных опилок и перегноя на основе отходов животноводства (коровьего навоза).To prepare a solid carrier substrate for the immobilization of the Bacillus subtilis SNBS-1 strain, a composite mixture of clinoptilolite, prepared wood sawdust and humus based on animal waste (cow manure) is used.

Основные преимущества органоминерального субстрата-носителя заключаются в повышении почвенного плодородия, улучшении структуры грунтов, активации биологической деструкции нефтезагрязнений, снижении кислотности почвенной среды при одновременном сокращении количества применяемых традиционных минеральных удобрений до 90%. Органоминеральный субстрат-носитель обладает высокой биологической активностью благодаря присутствию гуминовых и фульвокислот, что существенно повышает поступление в растение питательных веществ, активизирует почвенную микрофлору, синтез белков и углеводов, хлорофилла и витаминов, повышает устойчивость растений к воздействию повышенных доз агрохимикатов и нефтяных углеводородов. The main advantages of an organomineral carrier substrate are to increase soil fertility, improve soil structure, activate biological degradation of oil pollution, reduce the acidity of the soil while reducing the amount of traditional mineral fertilizers used up to 90%. The organomineral carrier substrate has a high biological activity due to the presence of humic and fulvic acids, which significantly increases the nutrient intake of the plant, activates the soil microflora, the synthesis of proteins and carbohydrates, chlorophyll and vitamins, and increases the resistance of plants to the effects of high doses of agrochemicals and petroleum hydrocarbons.

Адсорбционные и ионообменные свойства клиноптилолита, входящего в состав органоминеральной композиции, а также содержание в них значительного количества элементов питания растений, определяют их применение в качестве сырья для производства субстратов. Кристаллическая решетка клиноптилолитов сформирована тетраидами с хорошо развитой внутренней поверхностью, что обеспечивает сорбционную способность минералу, позволяя сорбировать нефть, нефтепродукты и другие механические загрязнители не только поверхностью носителя, но и оставаться сорбированным веществам внутри кристаллической решетки. The adsorption and ion-exchange properties of clinoptilolite, which is part of the organomineral composition, as well as the content of a significant amount of plant nutrition elements in them, determine their use as a raw material for the production of substrates. The clinoptilolite crystal lattice is formed by tetraids with a well-developed inner surface, which provides the sorption ability of the mineral, allowing sorbing oil, oil products and other mechanical pollutants not only to the carrier surface, but also to remain sorbed substances inside the crystal lattice.

При изготовлении композиционной смеси применяется предварительно измельченный клиноптилолит месторождения Хонгуруу (Сунтарский район, Западная Якутия) с содержанием цеолита 60…95 % и с химическим составом SiO2 65,01-70,45%; TiO2 0,16-0,18%; Al2O3 10,99-12,00%; Fe2O3 0,70-0,99%; MnO 0-0,02%; MgO 0,77-3,76%; CaO 0,52-3,73%; SrО 0,14-0,24%; Na2O 0,44-3,87%; K2O 0,9-11,63%; H2O 12,96-11,34%; P2O5 0,01-0,21% (см. ТУ 2163-001-5248924-2006. Цеолитовый туф (месторождение Хонгуруу). Технические условия). In the manufacture of the composite mixture, pre-crushed clinoptilolite of the Khonguruu deposit (Suntarsky district, Western Yakutia) with a zeolite content of 60 ... 95% and with a chemical composition of SiO 2 65.01-70.45% is used; TiO 2 0.16-0.18%; Al 2 O 3 10.99-12.00%; Fe 2 O 3 0.70-0.99%; MnO 0-0.02%; MgO 0.77-3.76%; CaO 0.52-3.73%; Sr O 0.14-0.24%; Na 2 O 0.44-3.87%; K 2 O 0.9-11.63%; H 2 O 12.96-11.34%; P 2 O 5 0.01-0.21% (see TU 2163-001-5248924-2006. Zeolite tuff (Honguruu deposit). Technical conditions).

В качестве примеси хонгуринский клиноптилолит может содержать (масс. %): Cd – 0,00422; Pb – 0,00280; V – 0,00190; Cu – 0,00065; Mo - 0,00020; Co – 0,00010; Ве – 0,00003; As – 0,00000; F – 0,00000; Hg – 0,00000; Sb – 0,00000; Sn – 0,00000; Zn – 0,00000 (см. Технологический паспорт на цеолиты месторождения Хонгуруу (хонгурин). Добавка к рациону крупного рогатого скота, свиньям и птице. Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Саха (Якутия), Якутск: Фирма «Хонгурин», 1993. – С. 3-4).Khongurinsky clinoptilolite may contain (mass%) as an impurity: Cd — 0.00422; Pb - 0.00280; V - 0.00190; Cu 0.00065; Mo - 0,00020; Co - 0.00010; Be - 0.00003; As - 0.00000; F is 0.00000; Hg - 0.00000; Sb - 0.00000; Sn is 0.00000; Zn - 0.00000 (see Technological passport for zeolites of the Khonguruu (Hongurin) deposit. Additive to the diet of cattle, pigs and poultry. Ministry of Agriculture and Food of the Republic of Sakha (Yakutia), Yakutsk: Firm Hongurin, 1993. - S. 3-4).

При отсутствии клиноптилолита месторождения Хонгуруу допускается использование природного цеолитового сырья других месторождений, близкого по химическому составу.In the absence of clinoptilolite from the Honguruu deposit, the use of natural zeolite raw materials from other deposits of a similar chemical composition is allowed.

В составе композиционной смеси использованы опилки древесные, получаемые при пилении хвойных пород деревьев на раскройном оборудовании, предварительно подготовленные в соответствии со стандартом (см. ГОСТ 18320-78 Опилки древесные технологические для гидролиза. Технические условия), и перегной, полученный из коровьего навоза в соответствии со стандартами (см. ГОСТ Р 53117-2008 Удобрения органические на основе отходов животноводства. Технические условия; ГОСТ 26074-84 (СТ СЭВ 2705-80). Навоз жидкий. Ветеринарно-санитарные требования к обработке, хранению, транспортированию и использованию).The composition of the composite mixture used wood sawdust obtained by sawing coniferous trees on cutting equipment, previously prepared in accordance with the standard (see GOST 18320-78 technological sawdust for hydrolysis. Technical conditions), and humus obtained from cow manure in accordance with standards (see GOST R 53117-2008 Organic fertilizers based on livestock waste. Specifications; GOST 26074-84 (ST SEV 2705-80). Liquid manure. Veterinary and sanitary requirements for processing, storage s, transportation and use).

Навоз коровий (Cow Manure) – является средством улучшения структуры почвы и улучшения способности почвы удерживать питательные вещества в виде, доступном для растений.Cow Manure (Cow Manure) - is a means of improving the structure of the soil and improving the ability of the soil to retain nutrients in a form accessible to plants.

По физико-химическим показателям навоз коровий должен соответствовать значениям таблицы 1.According to physical and chemical indicators, cow dung should correspond to the values of table 1.

В качестве связующего компонента и средства для капсулирования субстрата-носителя применяется 0,9-1,0 % водный раствор натрийкарбоксиметилцеллюлозы (КМЦ) (см. ТУ 6-55-39-90. Натрийкарбоксиметилцеллюлоза очищенная).A 0.9-1.0% aqueous solution of sodium carboxymethyl cellulose (CMC) is used as a binder component and means for encapsulating the substrate carrier (see TU 6-55-39-90. Purified sodium carboxymethyl cellulose).

КМЦ - порошкообразный или волокнистый не токсичный продукт белого цвета, с химической формулой [С6H7O2(OH)3-x(OCH2COOH)x]n. Растворяется как в холодной, так и в горячей воде, образуя золь. Водный раствор КМЦ обладает псевдопластичностью.CMC is a white powdery or fibrous non-toxic product with the chemical formula [C 6 H 7 O 2 (OH) 3 -x (OCH 2 COOH) x] n. It is soluble in both cold and hot water, forming a sol. An aqueous CMC solution has pseudoplasticity.

Санитарно-гигиенические показатели сырья должны находится в пределах допустимых норм, установленных требованиями (см. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) (утв. 28.05.10 г. № 299, глава II, раздел 19)).Sanitary and hygienic indicators of raw materials should be within the acceptable standards established by the requirements (see Unified Sanitary and Epidemiological and Hygienic Requirements for Products Subject to Sanitary and Epidemiological Surveillance (Control) (approved on 05.28.10 No. 299, Chapter II, Section 19)).

Технология приготовления препаратаTechnology of preparation

Технология получения препарата включает основные стадии: The technology for producing the drug includes the main stages:

1) термообработка и измельчение компонентов для получения субстрата-носителя;1) heat treatment and grinding of the components to obtain a substrate carrier;

2) приготовление водного раствора натрийкарбометилцеллюлозы; 2) preparation of an aqueous solution of sodium carbomethyl cellulose;

3) смешивание компонентов;3) mixing the components;

4) получение биомассы бактерий Bacillus subtilis СНБС-1; 4) obtaining the biomass of bacteria Bacillus subtilis SNBS-1;

5) иммобилизация бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 на субстрат-носитель; 5) the immobilization of bacteria Bacillus subtilis SNBS-1 on a substrate carrier;

6) прессование полученной смеси с удалением избыточной влаги и гранулирование с размером гранул 0,5-0,8 см с последующей их сушкой до достижения остаточной влажности 3-5 %;6) pressing the resulting mixture with removal of excess moisture and granulation with a grain size of 0.5-0.8 cm, followed by drying to achieve a residual moisture content of 3-5%;

7) расфасовка препарата.7) packaging of the drug.

Получение биомассы бактерий Bacillus subtilis СНБС-1Obtaining the biomass of bacteria Bacillus subtilis SNBS-1

Для получения биомассы для иммобилизации твердого субстрата-носителя используют агаровые культуры штамма Bacillus subtilis СНБС-1. To obtain biomass for the immobilization of a solid support substrate, agar cultures of the Bacillus subtilis SNBS-1 strain are used.

Культуры Bacillus subtilis СНБС-1, выращенные на скошенном ГРМ-агаре промышленного производства, основой которого является гидролизат рыбной муки либо мясопептонный агар (МПА) промышленного производства, смывают стерильной водой, готовят в необходимом количестве суспензию. Концентрация клеток в суспензии должна составлять 1⋅109 кл/см3 по оптическому стандарту ГИСК им. А.М. Тарасевича. Эта суспензия является посевным материалом, используемым для засева в ферментер для увеличения объема до количества, необходимого для получения препарата. Cultures of Bacillus subtilis SNBS-1 grown on a chamfered timing agar of industrial production, the basis of which is a fish meal hydrolyzate or meat production peptone agar (MPA) of industrial production, washed with sterile water, a suspension is prepared in the required amount. The concentration of cells in suspension should be 1⋅10 9 cells / cm 3 according to the optical standard GISK them. A.M. Tarasevich. This suspension is a seed used for inoculation into a fermenter to increase the volume to the amount necessary to obtain the drug.

Приготовление посевного материала состоит из следующих стадий:The preparation of seed consists of the following stages:

1. Получение культуры Bacillus subtilis СНБС-1 на скошенном агаре.1. Obtaining a culture of Bacillus subtilis SNBS-1 on oblique agar.

2. Выращивание культуры Bacillus subtilis СНБС-1 в малом посевном аппарате.2. Growing culture of Bacillus subtilis SNBS-1 in a small sowing machine.

3. Выращивание культуры Bacillus subtilis СНБС-1 в большом посевном аппарате.3. Growing a culture of Bacillus subtilis SNBS-1 in a large sowing apparatus.

4. Накопление культуры культуры Bacillus subtilis СНБС-1 в малом ферментере.4. The accumulation of culture cultures of Bacillus subtilis SNBS-1 in a small fermenter.

Передачу чистых культур Bacillus subtilis СНБС-1 из одного аппарата в другой осуществляют в конце логарифмической фазы роста. Качество полученного посевного материала контролируют путем микроскопирования.The transfer of pure cultures of Bacillus subtilis SNBS-1 from one apparatus to another is carried out at the end of the logarithmic growth phase. The quality of the seed obtained is controlled by microscopy.

Ферментация культуры Bacillus subtilis СНБС-1Fermentation of the culture of Bacillus subtilis SNBS-1

Для ферментации культуры Bacillus subtilis СНБС-1 применяют ферментер типа Ф-300В производства ЗАО «НПС «Элита-Комплекс» (см. Сертификат соответствия № C RU АИ 16. А. 08334 от 15.03.2012 г. ООО Уральский центр сертификации и испытаний «Уралсертификат»).For fermentation of the Bacillus subtilis SNBS-1 culture, an F-300V type fermenter manufactured by CJSC Elite-Complex NPS is used (see Certificate of Conformity No. C RU AI 16. A. 08334 dated March 15, 2012 Ural Certification and Testing Center LLC Ural Certificate ”).

Вначале в ферментере готовят минеральную питательную среду. Для чего в ферментер заливают 240 л чистой профильтрованной воды комнатной температуры, вносят питательные элементы следующего состава (масс. % к воде): KNO3 – 0,4; MgSO4·7H2O – 0,08; NaCl – 0,1; K2HPO4 – 0,14; KH2PO4 – 0,06. First, a mineral nutrient medium is prepared in the fermenter. For this, 240 l of clean filtered water at room temperature is poured into the fermenter, nutrients of the following composition are added (wt.% To water): KNO 3 - 0.4; MgSO 4 · 7H 2 O - 0.08; NaCl - 0.1; K 2 HPO 4 0.14; KH 2 PO 4 - 0.06.

В качестве энергетического субстрата добавляют сырую нефть не менее 1 % (по объему). Закрывают крышку ферментера и включают перемешивание. Затем корректируется рН среды. Для этого через канат посредством шприца отбирают пробу питательной среды, измеряют рН и через этот же канал вводят дозы (по 10-20 мл) либо 10% водного раствора кислоты (HCl), либо раствора щелочи (NaOH).Crude oil of at least 1% (by volume) is added as an energy substrate. Close the lid of the fermenter and turn on stirring. Then the pH of the medium is adjusted. To do this, a sample of the nutrient medium is taken through a rope through a syringe, the pH is measured and doses (10-20 ml) of either a 10% aqueous acid solution (HCl) or an alkali solution (NaOH) are injected through the same channel.

После чего в ферментер вводят посевной материал в объеме 10% от объема питательной среды, включают насос и открывают кран. В процессе культивирования контролируют работу ферментера, заданные значения температуры, степень аэрации и пенообразования, состояние систем обеспечения.After that, inoculum is introduced into the fermenter in a volume of 10% of the volume of the nutrient medium, the pump is turned on and the tap is opened. In the process of cultivation, the operation of the fermenter is controlled, the set temperature, the degree of aeration and foaming, the condition of the support systems.

При необходимости в ферментер через кран вводят химический пеногаситель (солярку), отбирают пробы культуральной жидкости для контроля. If necessary, a chemical defoamer (diesel fuel) is introduced into the fermenter through a tap, samples of the culture fluid are taken for control.

По окончании процесса культивирования наработанную биомассу бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 сливают в стерильные емкости и используют для иммобилизации твердого субстрата–носителя.At the end of the cultivation process, the accumulated biomass of bacteria Bacillus subtilis SNBS-1 is poured into sterile containers and used to immobilize a solid carrier substrate.

Иммобилизация Bacillus subtilis СНБС-1 на субстрат—носительImmobilization of Bacillus subtilis SNBS-1 on a substrate — carrier

В качестве субстрата-носителя для иммобилизации биомассы клеток Bacillus subtilis СНБС-1 используют заранее подготовленную органоминеральную композицию на основе клиноптилолита, древесных опилок и перегноя в соотношении, масс. %: клиноптилолит – 10,0; подготовленные опилки древесные - 10,0; перегной – 80,0.As a carrier substrate for immobilizing the biomass of Bacillus subtilis SNBS-1 cells, a pre-prepared organomineral composition based on clinoptilolite, wood sawdust and humus in the ratio, mass is used. %: clinoptilolite - 10.0; prepared wood sawdust - 10.0; humus - 80.0.

Для иммобилизации используют жидкую биомассу клеток Bacillus subtilis СНБС-1, полученную методом ферментации, в объеме 10% от объема субстрата-носителя. Подготовленные компоненты смешивают в смесительном устройстве типа БС-180 при 50-60 оборотах в минуту. После смешивания и пропитки субстрата–носителя биомассой клеток Bacillus subtilis СНБС-1 его высушивают контактным способом при температуре 37°С до постоянной массы или при комнатной температуре в течение 2-х суток. После чего препарат готов к использованию. Сухой препарат помещают в кеги или двухслойные полиэтиленовые мешки и запаивают. For immobilization using liquid biomass of Bacillus subtilis SNBS-1 cells obtained by fermentation in a volume of 10% of the volume of the substrate carrier. The prepared components are mixed in a mixing device type BS-180 at 50-60 rpm. After mixing and impregnating the carrier substrate with the biomass of the Bacillus subtilis SNBS-1 cells, it is dried by the contact method at a temperature of 37 ° C to constant weight or at room temperature for 2 days. After which the drug is ready for use. The dry preparation is placed in kegs or two-layer plastic bags and sealed.

Параметры препарата должны соответствовать значениям таблицы 2.The parameters of the drug should correspond to the values of table 2.

Применение препарата актуально в следующих направлениях:The use of the drug is relevant in the following areas:

- интродукция активно деградирующих нефть селектированных штаммов УОБ (в загрязненную экосистему) и управление данным процессом;- the introduction of actively degraded oil selected strains of DRR (into a polluted ecosystem) and the management of this process;

- стимуляция естественной углеводородокисляющей микрофлоры нефтезагрязненных субстратов, участвующей в биодеградации нефтяных загрязнений; - stimulation of the natural hydrocarbon-oxidizing microflora of oil-contaminated substrates involved in the biodegradation of oil pollution;

- оптимизация процессов биологической деградации нефтезагрязнений с целью достижения высокого эффекта в очистке и доочистке нефтезагрязненных субстратов. - optimization of the processes of biological degradation of oil pollution in order to achieve a high effect in the cleaning and post-treatment of oil-contaminated substrates.

Указания по применению препаратаDirections for use of the drug

Для очистки почв от нефтезагрязненийFor cleaning soil from oil pollution

При использовании препарата необходимо учитывать содержание микроэлементов в почве (местный геохимический фон) согласно нормативам (см. ГН 2.1.7.2041. Предельно допустимые концентрации (ПДК) химических веществ в почве).When using the drug, it is necessary to take into account the content of trace elements in the soil (local geochemical background) according to the standards (see GN 2.1.7.2041. Maximum allowable concentrations (MAC) of chemicals in the soil).

Препарат вносят в почву без предварительной подготовки (в том виде, в котором он поступил на объект) с помощью The drug is applied to the soil without preliminary preparation (in the form in which it entered the object) using

- специальной техники (сеялки, навозоразбрасыватели, машины для внесения удобрений и др.) при больших объемах работ;- special equipment (seeders, manure spreaders, fertilizer spreaders, etc.) for large volumes of work;

- вручную при небольших площадях нефтезагрязнений. - manually with small areas of oil pollution.

Препарат рекомендуется вносить при среднесуточных температурах почвы +5…+40°С. Допустимый уровень кислотности рН 4,5-9,0. Влажность почвы в пределах 40-60%. Рекомендуемый временной интервал между внесениями биопрепарата в почву – 30-45 суток. Нормы расхода препарата представлены в таблице 3.The drug is recommended to be applied at an average daily soil temperature of + 5 ... + 40 ° C. Permissible acidity is pH 4.5-9.0. Soil moisture in the range of 40-60%. The recommended time interval between introducing a biological product into the soil is 30-45 days. The consumption rates of the drug are presented in table 3.

Через 30-45 суток проводится повторный отбор почвенных проб на содержание остаточного количества нефти и нефтепродуктов. Данный анализ позволит определить необходимость проведения повторной обработки. After 30-45 days, re-sampling of soil samples for the content of residual amounts of oil and oil products is carried out. This analysis will determine the need for re-processing.

Качество очистки почв от нефтезагрязнений контролируется гравиметрическим методом (см. РД 52.18.647-2003 Определение массовой доли нефтепродуктов в почвах. Методика выполнения измерений гравиметрическим методом). The quality of soil purification from oil pollution is controlled by the gravimetric method (see RD 52.18.647-2003 Determination of the mass fraction of oil products in soils. Measurement method by gravimetric method).

Для очистки водных объектов от нефтезагрязненийFor cleaning water bodies from oil pollution

Препарат вносят в водные объекты без предварительной подготовки (в том виде, в котором он поступил на объект) с помощью:The drug is introduced into water bodies without preliminary preparation (in the form in which it entered the object) using:

- специальной техники (сеялки, навозоразбрасыватели, машины для внесения удобрений и др.) при больших объемах работ;- special equipment (seeders, manure spreaders, fertilizer spreaders, etc.) for large volumes of work;

- вручную при небольших площадях нефтезагрязнений, из расчета 1 кг препарата на 0,1 куб.м воды.- manually with small areas of oil pollution, at the rate of 1 kg of the drug per 0.1 cubic meter of water.

Препарат рекомендуется вносить при среднесуточных температурах воды выше +5…+37°С. Допустимый уровень кислотности рН 4,5-9,0. Рекомендуемый временной интервал между внесениями биопрепарата 30-45 суток.The drug is recommended to be applied at daily average water temperatures above + 5 ... + 37 ° C. Permissible acidity is pH 4.5-9.0. The recommended time interval between introductions of a biological product is 30-45 days.

Через 30-45 суток проводится повторный отбор проб воды на содержание остаточного количества нефти и нефтепродуктов. Данный анализ позволит определить необходимость проведения повторной обработки. After 30-45 days, re-sampling of water for the content of the residual amount of oil and oil products is carried out. This analysis will determine the need for re-processing.

Качество очистки воды от нефтезагрязнений контролируется ИК-фотометрическим методом (см. ФР.1.31.2010.07127 МВИ01.02.161 «Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера нефтепродуктов ИКН-025»; РД 52.24.476-2007 Массовая концентрация нефтепродуктов в водах. Методика выполнения измерений ИК-фотометрическим методом).The quality of water purification from oil pollution is monitored by the IR photometric method (see FR.1.31.2010.07127 MVI01.02.161 "Methodology for measuring the mass concentration of oil products in drinking, natural and waste waters by the IR spectrometric method using the oil product concentrator IKN-025"; RD 52.24 .476-2007 Mass concentration of oil products in waters. Measurement technique by IR-photometric method).

УтилизацияDisposal

Утилизация некондиционных отходов и отсевов сырья осуществляется в соответствии с указаниями СанПиН 2.1.7.1322-03, требованиями по защите окружающей среды и действующего законодательства, а также органов местной власти (см. СанПиН 2.1.7.1322-03 Гигиенические требования к размещению и обезвреживанию отходов производства и потребления). По возможности следует избегать образования отходов или минимизировать их количество. Утилизация неотработанного препарата проводится по требованиям, предъявляемым к веществам 4 класса опасности.Disposal of substandard waste and screenings of raw materials is carried out in accordance with the instructions of SanPiN 2.1.7.1322-03, requirements for environmental protection and applicable laws, as well as local authorities (see SanPiN 2.1.7.1322-03 Hygienic requirements for the disposal and disposal of production waste and consumption). Where possible, waste generation should be avoided or minimized. Disposal of an untreated drug is carried out according to the requirements for substances of hazard class 4.

Требования к условиям производства и техники безопасностиRequirements for production and safety conditions

Помещения для работы с микроорганизмами должны отвечать Санитарно-эпидемиологическим правилам (см. СП 1.3.2322-08 Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней).Premises for working with microorganisms must comply with the Sanitary and Epidemiological Rules (see SP 1.3.2322-08 Safety of working with microorganisms of the III-IV pathogenicity (danger) groups and pathogens of parasitic diseases).

Изобретение поясняется следующими примерамиThe invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Очистка почвы от нефтезагрязнений с применением препарата.Example 1. Cleaning the soil from oil pollution using the drug.

Опыты с применением препарата проведены на супесчанной почве, загрязненной нефтью. Исходное содержание нефтепродуктов (НП) в почве до внесения препарата составило от 2780 до 2960 мг/кг (см. таблицу 4). Experiments with the use of the drug were carried out on sandy loam soil contaminated with oil. The initial content of oil products (NP) in the soil prior to application of the drug ranged from 2780 to 2960 mg / kg (see table 4).

Эффективность применения препарата оценивали по степени деградации нефтезагрязнения согласно инструкции (см. РД 39-0177098-015-90 «Инструкция по контролю за состоянием почв на объектах предприятий Миннефтепрома»).The effectiveness of the drug was evaluated by the degree of degradation of oil pollution according to the instructions (see RD 39-0177098-015-90 "Instructions for monitoring the state of soils at the facilities of enterprises of the Ministry of Oil and Oil Industry").

Для этого образцы почвы до и после обработки биопрепаратом подвергались экстракции в аппарате Сокслета четыреххлористым углеродом, после чего экстрагент удаляли перегонкой с дефлегматором, доводя остаток до постоянного веса. Определение влажности образцов проводили общепринятым методом (см. ГОСТ 28268-89 «Почвы. Методы определения влажности, максимальной гигроскопической влажности»), после чего производили перерасчет содержания нефтепродуктов на сухую почву.For this, soil samples before and after treatment with a biological product were subjected to extraction with carbon tetrachloride in a Soxhlet apparatus, after which the extractant was removed by distillation with a reflux condenser, bringing the residue to a constant weight. The moisture content of the samples was determined by the generally accepted method (see GOST 28268-89 “Soils. Methods for determining moisture, maximum hygroscopic humidity”), after which the content of oil products was recalculated on dry soil.

Установлено, что степень биодеградации нефти и нефтепродуктов в опытных образцах через 45 суток после однократной обработки почв полученным препаратом составила при температуре +5±1°С – 28,1-29,0%; при температуре +20±1°С – 71,9-72,2%; при температуре +30±1°С – 72,2-73,4%; при температуре +40±1°С – 63,6-65,2% (см. таблицу 4). It was established that the degree of biodegradation of oil and oil products in experimental samples 45 days after a single soil treatment with the obtained preparation was at a temperature of + 5 ± 1 ° C - 28.1-29.0%; at a temperature of + 20 ± 1 ° C - 71.9-72.2%; at a temperature of + 30 ± 1 ° C - 72.2-73.4%; at a temperature of + 40 ± 1 ° C - 63.6-65.2% (see table 4).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об эффективности препарата для очистки почв от нефтезагрязнений. Thus, the obtained results indicate the effectiveness of the drug for cleaning soils from oil pollution.

Пример 2. Очистка воды от нефтезагрязнений с применением препаратаExample 2. Water purification from oil pollution using the drug

Для опыта в эксикатор объемом 5,0 дм3 вносили 3,0 дм3 водопроводной воды отстоявшейся в течение суток, и 0,03 л препарата. Для создания нефтяной пленки в емкости добавили 2880 мг/дм3 нефти и нефтепродуктов. В качестве контроля использовали воду в количестве 3,0 дм3 с добавлением 2880 мг/дм3 нефти и без внесения препарата.For the experiment, 3.0 dm 3 of tap water settled for 24 hours and 0.03 L of the preparation were added to a desiccator with a volume of 5.0 dm 3 . To create an oil film in the tank, 2880 mg / dm 3 of oil and oil products were added. As a control used water in an amount of 3.0 DM 3 with the addition of 2880 mg / DM 3 oil and without making the drug.

Эксперимент проводили в течение 45 суток, поддерживая температуру воды в интервале +15…+20°С. Полученные результаты показали, что деструкция нефти за 45 суток под действием препарата составила 59,0% для варианта с нефтью; 62,1% - с соляркой; 64,6% - с керосином; 65,3% - с маслом моторным; 61,8% - с маслом гидравлическим (см. таблицу 5). The experiment was carried out for 45 days, maintaining the water temperature in the range + 15 ... + 20 ° С. The results showed that the destruction of oil for 45 days under the influence of the drug was 59.0% for the variant with oil; 62.1% - with diesel fuel; 64.6% - with kerosene; 65.3% - with motor oil; 61.8% - with hydraulic oil (see table 5).

Таким образом, преимуществом препарата является то, что он благодаря совокупности уникальных свойств органоминерального субстрата-носителя и иммобилизованного на него штамма бактерий Bacillus subtilis СНБС-1 обладает способностью стимулировать в почвах и воде биологическую деградацию нефтезагрязнений.Thus, the advantage of the drug is that, due to the combination of the unique properties of the organomineral carrier substrate and the Bacillus subtilis SNBS-1 bacterial strain immobilized on it, it has the ability to stimulate biological degradation of oil pollution in soils and water.

Способ приготовления и использования предлагаемого препарата экономически выгоден, так как для своего осуществления не требует сложного технологического оборудования, а составные компоненты субстрата-носителя являются одновременно и доступным, и дешевым сырьем. The method of preparation and use of the proposed drug is economically viable, since it does not require sophisticated technological equipment for its implementation, and the components of the carrier substrate are both affordable and cheap raw materials.

Таблица 1Table 1

Физико-химические показатели коровьего навоза Physico-chemical characteristics of cow manure

Наименование показателяName of indicator НормативNormative Консистенция (фазовое состояние), визуальный осмотрConsistency (phase state), visual inspection СыпучееLoose Массовая доля сухого вещества, %, не менееMass fraction of dry matter,%, not less than 8585 Массовая доля органического вещества, на сухое вещество, не менееMass fraction of organic matter, on dry matter, not less than 50fifty рНpH 6,0-8,56.0-8.5 Азот общий, с исходной влажностью, не менееTotal nitrogen, with initial humidity, not less than 0,60.6 Фосфор общий (в пересчете на Р2О5), с исходной влажностьюTotal phosphorus (in terms of P 2 O 5 ), with initial humidity 0,50.5 Калий общий (в пересчете на K2О), с исходной влажностьюTotal potassium (in terms of K 2 O), with initial humidity 0,60.6 Содержание тяжелых металлов, мг/кг сухого вещества:
- свинца
- мышьяка
- кадмия
- ртути
The content of heavy metals, mg / kg dry matter:
- lead
- arsenic
- cadmium
- mercury

130,0
10,0
2,0
2,1

130.0
10.0
2.0
2.1
Санитарно-показательные микроорганизмы, клеток/г:
- колиформы
- энтеробактерии
- индекс патогенных микроорганизмов
- цисты кишечных патогенных простейших, экз/100 г
Sanitary indicative microorganisms, cells / g:
- coliforms
- enterobacteria
- index of pathogenic microorganisms
- cysts of intestinal pathogenic protozoa, ind./100 g

1-9
1-9
Отсутствуют
Отсутствуют

1-9
1-9
Are absent
Are absent

Таблица 2table 2

Биологические и физико-химические свойства препарата Biological and physico-chemical properties of the drug

Номенклатура испытанийTest Nomenclature НормативNormative Внешний вид, цвет
Appearance, color
Гранулы от коричневого до черного цвета с включениями желтого (от древесных опилок) и светло-зеленого цвета (от клиноптилолита)Granules from brown to black with inclusions of yellow (from sawdust) and light green (from clinoptilolite)
Размер гранул, ммGranule size mm 0,5-0,80.5-0.8 Соотношение компонентов, %:
- цеолит
- опилки
- карбоксиметилцеллюлоза
- биомасса биодеструкторов
- навоз (помет)
The ratio of components,%:
- zeolite
- sawdust
- carboxymethyl cellulose
- biomass of biodestructors
- manure (litter)

10
10
1
1
остальное

10
10
one
one
rest
Сорбционная емкость, кг/кгSorption capacity, kg / kg 2-32-3 Влажность сорбента, %The moisture content of the sorbent,% 3-53-5 Санитарно-бактериологические показатели:
- индекс бактерий группы кишечных палочек
- индекс энтерококков
- индекс патогенных микроорганизмов
- цисты кишечных патогенных простейших, экз/100 г
Sanitary and bacteriological indicators:
- coliform bacteria index
- enterococcal index
- index of pathogenic microorganisms
- cysts of intestinal pathogenic protozoa, ind./100 g

1-9

1-9
Отсутствуют
Отсутствуют

1-9

1-9
Are absent
Are absent
Нефтеокисляющая активность, % не менееOil oxidizing activity,% not less

Таблица 3Table 3

Нормы расхода препаратаThe consumption rate of the drug

Концентрация нефтяного загрязнения в почвеThe concentration of oil pollution in the soil Расход препарата, л/кг почвыThe consumption of the drug, l / kg of soil %% мг/кгmg / kg кг/1 кг почвыkg / 1 kg of soil кг/10 кг почвыkg / 10 kg of soil кг/100 кг почвыkg / 100 kg of soil кг/1000 кг почвыkg / 1000 kg of soil 1-51-5 10 000 - 50 00010,000 - 50,000 0,01 – 0,05 0.01 - 0.05 0,1-0,50.1-0.5 1,0-5,01.0-5.0 10,0-50,010.0-50.0 5-105-10 50 000 - 100 00050,000 - 100,000 0,05 – 0,1 0.05 - 0.1 0,5-1,00.5-1.0 5,0-10,05.0-10.0 50,0-100,050.0-100.0 10-3010-30 10 000 - 300 00010,000 - 300,000 0,1 – 0,3 0.1 - 0.3 1,0-3,01.0-3.0 10,0-30,010.0-30.0 100,0-300,0100.0-300.0 30-10030-100 300 000 – 1000 000300,000 - 1,000,000 0,3 – 1,0 0.3 - 1.0 3,0-10,03.0-10.0 30,0-100,030.0-100.0 300,0-1000,0300.0-1000.0

Таблица 4Table 4

Деструкция нефтепродуктов в почве под влиянием препаратаThe destruction of petroleum products in the soil under the influence of the drug

Схема опытаExperience outline Содержание НП, мг/кгThe content of NP, mg / kg Деградация НП,
%
Degradation of NP,
%
до очисткиbefore cleaning после очисткиafter cleaning Температура+5±1°СTemperature + 5 ± 1 ° С Почва+нефтьSoil + oil 29602960 29402940 0,70.7 Почва+нефть+B.subtilis СНБС-1 Soil + oil + B.subtilis SNBS-1 29602960 27202720 8,18.1 Почва+нефть+органоминеральный субстратSoil + oil + organic mineral substrate 29602960 25202520 14,814.8 Почва+нефть+препаратSoil + oil + drug 29602960 21002100 29,029.0 Почва+соляркаSoil + diesel fuel 29202920 29002900 0,70.7 Почва+солярка+B.subtilis СНБС-1 Soil + diesel fuel + B.subtilis SNBS-1 29202920 26402640 10,610.6 Почва+солярка+органоминеральный субстратSoil + diesel fuel + organic mineral substrate 29202920 25202520 13,713.7 Почва+солярка+препаратSoil + diesel fuel + preparation 29202920 21002100 28,128.1 Температура+20±1°СTemperature + 20 ± 1 ° С Почва+нефтьSoil + oil 29202920 28202820 2,02.0 Почва+нефть+B.subtilis СНБС-1 Soil + oil + B.subtilis SNBS-1 29202920 13001300 53,953.9 Почва+нефть+органоминеральный субстратSoil + oil + organic mineral substrate 29202920 24802480 15,115.1 Почва+нефть+препаратSoil + oil + drug 29202920 820820 71,971.9 Почва+соляркаSoil + diesel fuel 28802880 28202820 3,43.4 Почва+солярка+B.subtilis СНБС-1 Soil + diesel fuel + B.subtilis SNBS-1 28802880 13001300 8,18.1 Почва+солярка+органоминеральный субстратSoil + diesel fuel + organic mineral substrate 28802880 23902390 17,017.0 Почва+солярка+препаратSoil + diesel fuel + preparation 28802880 800800 72,272,2 Температура+30±1°СTemperature + 30 ± 1 ° С Почва+нефтьSoil + oil 28602860 27942794 2,32,3 Почва+нефть+B.subtilis СНБС-1 Soil + oil + B.subtilis SNBS-1 28602860 11501150 53,853.8 Почва+нефть+органоминеральный субстратSoil + oil + organic mineral substrate 28602860 24902490 12,912.9 Почва+нефть+препаратSoil + oil + drug 28602860 780780 72,772.7 Почва+соляркаSoil + diesel fuel 28602860 28002800 2,062.06 Почва+солярка+B.subtilis СНБС-1 Soil + diesel fuel + B.subtilis SNBS-1 28602860 12201220 56,456.4 Почва+солярка+органоминеральный субстратSoil + diesel fuel + organic mineral substrate 28602860 24402440 14,714.7 Почва+солярка+препаратSoil + diesel fuel + preparation 28602860 760760 73,473,4 Температура+40±1°СTemperature + 40 ± 1 ° С Почва+нефтьSoil + oil 28002800 27602760 1,421.42 Почва+нефть+B.subtilis СНБС-1 Soil + oil + B.subtilis SNBS-1 28002800 12701270 53,953.9 Почва+нефть+органоминеральный субстратSoil + oil + organic mineral substrate 28002800 24602460 12,112.1 Почва+нефть+препаратSoil + oil + drug 28002800 10201020 63,663.6 Почва+соляркаSoil + diesel fuel 27602760 27002700 1,11,1 Почва+солярка+B.subtilis СНБС-1 Soil + diesel fuel + B.subtilis SNBS-1 27602760 12401240 54,954.9 Почва+солярка+органоминеральный субстратSoil + diesel fuel + organic mineral substrate 27602760 24002400 13,013.0 Почва+солярка+препаратSoil + diesel fuel + preparation 27602760 960960 65,265,2

Таблица 5 Table 5

Динамика деструкции нефти в воде после внесения препарата The dynamics of the destruction of oil in water after making the drug

Вариант опытаExperience option Содержание НП, мг/дм3 The content of the NP, mg / DM 3 Деструкция НП,
%
Destruction of NP,
%
до опытаto experience после опытаafter experience Контроль (вода+нефть)Control (water + oil) 28802880 27402740 4,864.86 Вода+нефть+ПрепаратWater + Oil + Drug 28802880 11801180 59,059.0 Вода+солярка+ПрепаратWater + diesel fuel + Drug 28802880 10901090 62,162.1 Вода+керосин+ПрепаратWater + Kerosene + Drug 28802880 10201020 64,664.6 Вода+газовый конденсат+ПрепаратWater + gas condensate + Drug 28802880 10001000 65,365.3 Вода+масло моторное+ПрепаратWater + motor oil + Preparation 28802880 10001000 65,365.3 Вода+масло гидравлическое+ПрепаратWater + hydraulic oil + Preparation 28802880 11001100 61,861.8

Claims (1)

Препарат для очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов, включающий, масс. %: нефть - 0,1, биомассу бактерий-биодеструкторов нефти и нефтепродуктов - 1,0, связующий компонент - 1,0 и органоминеральный субстрат-носитель для биодеструкторов - до 100,0, при этом в качестве биодеструкторов нефти и нефтепродуктов препарат содержит углеводородокисляющие бактерии Bacillus subtilis ВКПМ В-12239, в качестве связующего компонента - натрийкарбоксиметилцеллюлозу, в качестве органоминерального субстрата-носителя - композиционную смесь на основе клиноптилолита, подготовленных древесных опилок и перегноя в соотношении, масс. %: клиноптилолит - 10,0, подготовленные опилки древесные - 10,0, перегной - 80,0.A preparation for cleaning soils and water from oil and oil products, including, mass. %: oil - 0.1, biomass of bacteria-biodestructors of oil and oil products - 1.0, a binder component - 1.0 and an organic mineral substrate-carrier for biodestructors - up to 100.0, while the preparation contains hydrocarbon-oxidizing agents as biodestructors of oil and oil products bacteria Bacillus subtilis VKPM B-12239, as a binder component - sodium carboxymethyl cellulose, as an organomineral carrier substrate - a composite mixture based on clinoptilolite, prepared wood sawdust and humus in the ratio, mass. %: clinoptilolite - 10.0, prepared wood sawdust - 10.0, humus - 80.0.
RU2015157248A 2015-12-31 2015-12-31 Preparation for soil and water purufication from oil and oil products RU2617953C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015157248A RU2617953C1 (en) 2015-12-31 2015-12-31 Preparation for soil and water purufication from oil and oil products

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015157248A RU2617953C1 (en) 2015-12-31 2015-12-31 Preparation for soil and water purufication from oil and oil products

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2617953C1 true RU2617953C1 (en) 2017-04-28

Family

ID=58697550

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015157248A RU2617953C1 (en) 2015-12-31 2015-12-31 Preparation for soil and water purufication from oil and oil products

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2617953C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2816706C1 (en) * 2023-12-08 2024-04-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук Oil biosorbent for cleaning and recovery of oil-contaminated lands

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2053205C1 (en) * 1994-09-29 1996-01-27 Всероссийский нефтяной научно-исследовательский геологоразведочный институт Biopreparation for soil and water treatment from oil and petroleum products
RU2361686C2 (en) * 2007-08-13 2009-07-20 Институт химии нефти Сибирского отделения Российской академии наук Biopreparation for cleaning soil and water from oil and oil products
RU2446900C2 (en) * 2010-07-13 2012-04-10 Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии Method of cleaning out of frozen soil from crude oil by spore-forming bacteria bacillus subtilis
RU2565549C2 (en) * 2013-12-17 2015-10-20 Общество с ограниченной ответственностью "Транснефть-Восток" (ООО "Транснефть-Восток") Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2053205C1 (en) * 1994-09-29 1996-01-27 Всероссийский нефтяной научно-исследовательский геологоразведочный институт Biopreparation for soil and water treatment from oil and petroleum products
RU2361686C2 (en) * 2007-08-13 2009-07-20 Институт химии нефти Сибирского отделения Российской академии наук Biopreparation for cleaning soil and water from oil and oil products
RU2446900C2 (en) * 2010-07-13 2012-04-10 Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии Method of cleaning out of frozen soil from crude oil by spore-forming bacteria bacillus subtilis
RU2565549C2 (en) * 2013-12-17 2015-10-20 Общество с ограниченной ответственностью "Транснефть-Восток" (ООО "Транснефть-Восток") Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2816706C1 (en) * 2023-12-08 2024-04-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук Oil biosorbent for cleaning and recovery of oil-contaminated lands

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2732026B1 (en) Biological product for clearing of water, industrial wastewater and soil from chemicals, which are resistant to degradation and method for using the same
RU2565549C2 (en) Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north
JPH0436758B2 (en)
Semenyuk et al. Effect of activated charcoal on bioremediation of diesel fuel-contaminated soil
CN113215033B (en) Sulfonamide antibiotic degrading bacteria and application thereof
CN106957809B (en) Biological synergistic remediation method for soil organic pollution
Strizhenok et al. Assessment of the efficiency of using organic waste from the brewing industry for bioremediation of oil-contaminated soils
Fletcher Practical considerations during bioremediation
Ule et al. Myco-enhanced Bioremediation in Open Field Crude Oil Contaminated Soil Using Mucor racemosus and Aspergillus niger
RU2615464C1 (en) Preparation for soils and water bodies purification from oil products
RU2421291C2 (en) Method to reclaim soils contaminated with oil and oil products
RU2617953C1 (en) Preparation for soil and water purufication from oil and oil products
RU2553337C2 (en) Rhodococcus erythropolis STRAIN FOR CLEANING WATER, SOIL, COASTAL AREAS AND BOTTOM SEDIMENTS FROM OIL AND OIL PRODUCTS
RU2616398C1 (en) Bioremediant for carrying out remediation of soils polluted with oil and/or oil products
RU2735870C1 (en) Method of extracting microorganisms for purification and recovery of oil-contaminated soil and soil by phyto-bioremediation
RU2618699C1 (en) Method for biological cleaning of soils contaminated by oil products
RU2564391C1 (en) Method of biotransformation of contaminated soil
RU2571219C2 (en) Preparation for biodegradation of petroleum products "bioionit" and method of obtaining thereof
RU2529735C1 (en) Method of producing biopreparation for cleaning and restoring fertility of soil contaminated with petroleum products
Williams et al. Comparative Bioremediation Potentials of Pseudomonas aeruginosa KX828570 and Bacillus megaterium KY085976 on Polluted Terrestrial Soil Treated with Oil Spill dispersant
RU2816706C1 (en) Oil biosorbent for cleaning and recovery of oil-contaminated lands
RU2191753C2 (en) Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from water and ground
RU2600868C2 (en) Preparation for cleaning soil from oil contaminants
RU2755687C1 (en) Method for purifying the cryolithic zone soils from petroleum pollution
RU2600872C2 (en) Preparation for cleaning soil and water from oil contaminants

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190101