RU2617935C1 - Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps Puton, 1881) на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК - Google Patents
Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps Puton, 1881) на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК Download PDFInfo
- Publication number
- RU2617935C1 RU2617935C1 RU2016115166A RU2016115166A RU2617935C1 RU 2617935 C1 RU2617935 C1 RU 2617935C1 RU 2016115166 A RU2016115166 A RU 2016115166A RU 2016115166 A RU2016115166 A RU 2016115166A RU 2617935 C1 RU2617935 C1 RU 2617935C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- restriction
- cytochrome oxidase
- eurygaster integriceps
- mitochondrial dna
- bamh
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии, а именно к молекулярно-генетическому способу идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps). Производят сбор биологического материала и выделяют ДНК. Проводят ПЦР участка цитохромоксидазы митохондриальной ДНК. В качестве праймеров используют прямой EuCO1F: GAATATGAGCCGGAATAGTAGGA (SEQ ID NO:3) и обратный EuCO1R: ATGTGTTGAAGTTACGGTCA (SEQ ID NO:4). Продукты ПЦР подвергают рестрикции. В качестве рестриктаз используют следующие: Ahl I, BamH I, Bst2U I, Psi I. Визуализацию продуктов рестрикции проводят с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Наличие одного из наборов фрагментов: 317, 268 п.н. для рестриктазы Ahl I, 471, 114 п.н. для BamH I, 364, 221 п.н. для Bst2U I и 435, 150 п.н. для Psi I указывает на принадлежность вредителя к роду Eurygaster integriceps. Изобретение позволяет в течение от 4,5 до 6 часов осуществить идентификацию Eurygaster integriceps на разных стадиях его развития и вне зависимости от пола насекомого. 2 ил., 1 пр.
Description
Изобретение относится к области микробиологии, а именно к молекулярно-генетическим методам идентификации организмов – клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps), и может быть использовано при определении наличия этого вредителя на посевах пшеницы и ячменя.
В составе рода Eurygaster Laporte насчитывается 10 видов, непосредственно в России - 6 ( U. Family Scutelleridae Leach, 1815. In: Aukema В, Rieger С, editors. Catalogue of the Heteroptera of the Palaearctic Region, 5. Pentatomomorpha II. Netherlands Entomological Society; 2006; 233-414). Известно, что в европейской части России распространены 5 видов этого рода. Четыре из них являются вредителями зерновых культур: Еu. integriceps Puton, 1881, Еu. maura (Linnaeus, 1758), Еu. testudinaria (Geoffroy, 1785) и Еu. austriaca (Schrank, 1776). Пятый вид этого рода, встречающийся в фауне России, Еu. dilaticollis (Dohrn, 1860), живет в природных степных экосистемах и на пастбищах, питается соками дикорастущих злаков. Вред, наносимый сельскохозяйственным культурам Еu. dilaticollis, не установлен. Самым опасным представителем Eurygaster является Еu. integriceps. Данный вид широко распространен в Восточной Европе, Средней Азии и Ближнем Востоке, включая такие страны как Турция, Иран, Ирак, Сирия, Израиль, Хорватия, Сербия, Италия, Украина, Греция, Болгария, Румыния, Таджикистан, Узбекистан, Киргизия, Пакистан, Российская Федерация и др. (Critchley B.R. Literature review of sunn pest Eurygaster integriceps Put. (Hemiptera: Scutelleridae). Crop Protection. 1998; 17(4): 271-287). Он способен размножаться в высокой численности на посевах зерновых культур (пшенице, ячмене), снижая их урожайность. Установлено, что при поражении посевов зерновых этим видом клопов общие потери урожая могут достигать 20-30% для ячменя и 50-90% для пшеницы (Gul Α., Cuma Α., Mithat D. Sunn pest control policies and effect of Sunn pest damage on wheat quality and price in Turkey. Quality and Quanity. 2006; 40: 469-480). Кроме прямых потерь урожая пшеницы также сильно ухудшаются хлебопекарные качества муки, полученной из поврежденных зерен вследствие деградации протеолитическими ферментами клопа глютена зерен (Darkoh С., El-Bouhssini M., Baum M., Clack В. Characterization of a prolyl endoprotease from Eurygaster integriceps Puton (Sunn pest) infested wheat. Arch Insect Biochem. Physiol. 2010; 74(3): 163-78).
Из источников информации (Голуб В.Б., Великань B.C., Гурьева Е.Л. и др. Отряд Полужесткокрылые, или Клопы - Hemiptera (=Heteroptera). Определитель вредных и полезных насекомых и клещей зерновых культур в СССР. Сост. Л.М. Копанева. Л.: Колос. Ленингр. Отд-ние, 1980; 80-91) известно, что дифференцирование вредной черепашки от других представителей клопов-черепашек на данный момент возможно только по морфологическим признакам, что является сложной задачей, которую способен решить только высококвалифицированный специалист-энтомолог. Кроме того, данный способ не всегда можно применять при обнаружении вредителя на посевах, т.к. ключевые признаки, позволяющие дифференцировать вредную черепашку от других видов, имеются только у взрослых особей.
Известен способ определения сроков появления личинок вредной черепашки (патент РФ №2010515, МПК А01К 67/033), включающий учет температурных характеристик окружающей среды, отличающийся тем, что в полевых условиях определяют сроки появления первых яйцекладок вредной черепашки на полях озимой пшеницы и длительность развития стадии яйца вредителя, а сроки появления личинок определяют как сумму срока появления первых яйцекладок и длительности развития стадии яйца вредителя, при этом длительность развития стадии яйца определяют по формуле N=(0,2569+0,0358Tcp-0,0009Tcp 2), где Ν - длительность развития стадии яйца, сут; Тср - средняя температура воздуха по данным метеослужбы за две декады вперед.
Недостатком данного способа является то, что не учитывается видовой состав популяции. Невозможно дифференцировать вредную черепашку от других видов того же рода по яйцам только по морфологическим признакам. Идентификация вредителя на основе ДНК позволит дифференцировать яйца вредной черепашки от яиц маврской черепашки, влаголюбивой черепашки и других морфологически сходных видов клопов.
В качестве прототипа рассмотрен способ проведения ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и К гена DGAT1 (патент RU 2528743, МПК C12N 15/06, C12Q 1/68), включающий проведение ПЦР-ПДРФ для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и К гена DGAT1. Детекцию результатов ПЦР-ПДРФ осуществляли методом горизонтального электрофореза в 3% агарозном геле в буфере ТВЕ (рН 8,0), содержащем этидий бромид в концентрации 0,5 мкг/мл, с последующей визуализацией амплифицированных продуктов в ультрафиолетовом трансиллюминаторе (=310 нм). На этапе ПЦР используются последовательности олигонуклеотидных праймеров: DGAT1-1: 5'-CCGCTTGCTCGTAGCTTTCGAAGGTAACGC-3' (SEQ ID NO: 1), DGAT1-2: 5'-CCGCTTGCTCGTAGCTTTGGCAGGTAACAA-3' (SEQ ID NO: 2), DGAT1-3: 5'-AGGATCCTCACCGCGGTAGGTCAGG-3' (SEQ ID NO: 3), а на этапе рестрикции применяется рестриктаза - TaqI, с генерацией генотип-специфичных фрагментов: генотип АА=82/18 bp, генотип КК=100 bp, и генотип АК=100/82/18 bp.
Задачей настоящего изобретения является разработка молекулярно-генетического метода идентификации вредной черепашки, не требующего присутствия узко квалифицированного специалиста, для повышения эффективности мер по обработке посевов от вредителя.
Существенным преимуществом заявляемого молекулярно-генетического метода идентификации вредителя является возможность его определения еще на стадиях яйца, личинки и куколки в независимости от пола, что в свою очередь позволит применять превентивные меры защиты растений.
Нами предварительно проведен анализ нуклеотидной последовательности гена цитохромоксидазы субъединицы 1 у видов рода Eurygaster в России. Последовательности внесены в международную систему Genbank (acession numbers: KR105371.1, KR105370.1, KR105369.1, KU726545, KU760760, KU760761, KU760762, KU760763, KU760764). Установлены отличия в нуклеотидной последовательности между вредной черепашкой (Eurygaster integriceps) и остальными видами клопов-черепашек, которые позволяют разработать метод экспресс-идентификации данного вида клопа на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы.
Технический результат - проведение идентификации вредителя на его ранних стадиях развития (яйца, личинки) и взрослых вне зависимости от пола насекомого, а также возможность проведения идентификационных процедур в течение нескольких часов без привлечения энтомолога.
Технический результат достигается тем, что в способе идентификации вредной черепашки (Eurygaster integriceps) на основе рестрикционного анализа предварительно амплифицированного гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК, включающем выделение ДНК из предварительно собранного биологического материала, последующее проведение ПНР участка цитохромоксидазы митохондриальной ДНК, рестрикционного анализа ампликона, проведение электрофореза в агарозном геле, согласно изобретению, при проведении ПЦР используют праймеры прямой EuCO1F: GAATATGAGCCGGAATAGTAGGA (SEQ ID NO: 3) и обратный EuCO1R: ATGTGTTGAAGTTACGGTCA (SEQ ID NO: 4), а для рестрикционного анализа используют рестриктазы Аhl I, BamH I, Bst2U I, Psi I, причем наличие одного из наборов фрагментов: 317, 268 п.н. для рестриктазы Аhl I, 471, 114 п. н. для BamH I, 364, 221 п. н. для Bst2U I и 435, 150 п.н. для Psi I указывает на принадлежность вредителя к роду Eurygaster integriceps
Способ идентификации вредной черепашки (Eurygaster integriceps) на основе рестрикционного анализа предварительно амплифицированного гена цитохромоксидазы субъединицы 1 реализуется следующим образом:
1. Производится сбор биологического материала (взрослые насекомые, яйца, личинки) с посевов пшеницы или ячменя. Если анализ производится не в тот же день, то образцы для хранения помещают в 70% спиртовой раствор.
2. Производится выделение ДНК из полученных образцов, выделение ДНК можно проводить как с помощью коммерческих наборов отечественных и зарубежных производителей ("ДНК-технологии", "Праймтех", "Zymo research", БиоСилика и др.), так и общепринятыми методами (фенол-хлороформная экстракция, ЦТАБ-метод).
3. Проводят ПЦР. Используют следующие температурные циклы: 94°С 4 мин, 35 циклов: 94°С 30 сек, 58°С 30 сек, 72°С 40 сек, конечная элонгация 72°С 8 мин. В качестве праймеров используют следующие: прямой EuCO1F: GAATATGAGCCGGAATAGTAGGA (SEQ ID NO: 3), обратный EuCO1R: ATGTGTTGAAGTTACGGTCA (SEQ ID NO: 4), данные праймеры высокоспецифичны к роду Eurygaster и амплифицируют продукт гена цитохромоксидазы длиной 569 п.н.
4. Продукты ПЦР подвергают рестрикции по следующей схеме: берут 10 мкл ПЦР продукта, добавляют 1,5 мкл 10Х реакционного буфера, индивидуального для каждой рестриктазы, и 10 ед. рестриктазы. Объем доводят до 15 мкл деионизированной водой. Инкубируют смесь в течение 1,5 часов при 37°С, фермент инактивируют нагревом до 75°С в течение 15 минут. Визуализацию продуктов рестрикции проводят с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. В качестве рестриктаз используют следующие: Аhl I, BamH I, Bst2U I, Psi I. Каждый из рестрикционных ферментов образует уникальные фрагменты у вредной черепашки (таблица 1). При этом для идентификации вредителя Е. integriceps можно использовать любую из представленных рестриктаз, либо несколько рестриктаз.
На фиг. 1 приведена Таблица 1 длины ожидаемых фрагментов при расщеплении последовательности цитохромоксидазы длиной 569 п. н.
На фиг. 2 изображена электрофореграмма продуктов рестрикции ПЦР цитохромоксидазы, субъединица 1.
Пример
На электрофореграмме (фиг. 2) 1 - рестриктаза BamH I, образец ДНК №1; 2 - рестриктаза BamH I, образец ДНК №2; 3 - Рестриктаза Ahl I, образец ДНК №1; 4 - Рестриктаза Ahl I, образец ДНК №2; M - маркер длин фрагментов ДНК, значения выражены в пар нуклеотидов.
При обработке рестриктазой BamH I продукта ПЦР образца ДНК №1 фрагменты не образовались, следовательно, это ДНК Еu. maura или Еu. testudinaria или Eu. dilaticollis. При обработке рестриктазой BamH I продукта ПЦР образца ДНК №2 образовались два фрагмента длиной 471 и 114 п.н., следовательно, это ДНК Eu. integriceps.
При обработке рестриктазой Аhl I продукта ПЦР образца ДНК №1 образовались 3 фрагмента длиной 316, 175, 93, следовательно, это ДНК Еu. maura или Eu. testudinaria или Eu. dilaticollis. При обработке рестриктазой Аhl I продукта ПЦР образца ДНК №2 образовались два фрагмента длиной 317 и 268 п. н., следовательно, это ДНК Eu. integriceps.
Предлагаемый способ идентификации вредной черепашки является высокочувствительным, хорошо воспроизводимым и недорогим. В зависимости от используемого способа выделения ДНК из биологических образцов анализ занимает от 4,5 до 6 часов. Анализ можно проводить в лабораториях, имеющих термоциклер, центрифугу, камеру для электрофореза и сопутствующие реактивы и расходные материалы.
Claims (1)
- Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps) на основе рестрикционного анализа предварительно амплифицированного гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК, включающий выделение ДНК из предварительно собранного биологического материала, последующее проведение ПЦР участка цитохромоксидазы митохондриальной ДНК, рестрикционного анализа ампликона, проведение электрофореза в 2% агарозном геле, отличающийся тем, что при проведении ПЦР используют праймеры: прямой EuCO1F: GAATATGAGCCGGAATAGTAGGA (SEQ ID NO: 3) и обратный EuCO1R: ATGTGTTGAAGTTACGGTCA (SEQ ID NO: 4), a для рестрикционного анализа используют рестриктазы Ahl I, BamH I, Bst2U I, Psi I, причем наличие одного из наборов фрагментов: 317, 268 п.н. для рестриктазы Ahl I, 471, 114 п.н. для BamH I, 364, 221 п.н. для Bst2U I и 435, 150 п.н. для Psi I указывает на принадлежность вредителя к роду Eurygaster integriceps.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016115166A RU2617935C1 (ru) | 2016-04-19 | 2016-04-19 | Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps Puton, 1881) на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016115166A RU2617935C1 (ru) | 2016-04-19 | 2016-04-19 | Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps Puton, 1881) на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2617935C1 true RU2617935C1 (ru) | 2017-04-28 |
Family
ID=58697597
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016115166A RU2617935C1 (ru) | 2016-04-19 | 2016-04-19 | Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps Puton, 1881) на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2617935C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110804664A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-02-18 | 拱北海关技术中心 | 一种用于鉴定美雕齿小蠹的引物对、试剂盒及其应用 |
RU2740480C1 (ru) * | 2019-11-25 | 2021-01-14 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") | Способ идентификации клопов вредителей рода Polymerus - P.cognatus и P.vulneratus на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2010515C1 (ru) * | 1991-02-20 | 1994-04-15 | Игорь Олегович Ястребов | Способ определения сроков появления личинок вредной черепашки |
CN102181552A (zh) * | 2011-04-20 | 2011-09-14 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 鉴别蔬菜叶螨种类的pcr方法 |
US20130011836A1 (en) * | 2011-07-05 | 2013-01-10 | Ernie Colaizzi | Kit for the detection of bed bugs |
RU2528743C1 (ru) * | 2013-01-29 | 2014-09-20 | Рамиль Ришадович Вафин | Способ проведения пцр-пдрф для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям а и к гена dgat1 |
-
2016
- 2016-04-19 RU RU2016115166A patent/RU2617935C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2010515C1 (ru) * | 1991-02-20 | 1994-04-15 | Игорь Олегович Ястребов | Способ определения сроков появления личинок вредной черепашки |
CN102181552A (zh) * | 2011-04-20 | 2011-09-14 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 鉴别蔬菜叶螨种类的pcr方法 |
US20130011836A1 (en) * | 2011-07-05 | 2013-01-10 | Ernie Colaizzi | Kit for the detection of bed bugs |
RU2528743C1 (ru) * | 2013-01-29 | 2014-09-20 | Рамиль Ришадович Вафин | Способ проведения пцр-пдрф для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям а и к гена dgat1 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
СНЕГИН Э.А. и др. "Генетическая структура популяций клопа Eurygaster integriceps в условиях агроценозов юга Среднерусской возвышенности", Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Естественные науки, 2013, т.24, no.7(160), с.56-61. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2740480C1 (ru) * | 2019-11-25 | 2021-01-14 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Воронежский государственный университет" (ФГБОУ ВО "ВГУ") | Способ идентификации клопов вредителей рода Polymerus - P.cognatus и P.vulneratus на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК |
CN110804664A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-02-18 | 拱北海关技术中心 | 一种用于鉴定美雕齿小蠹的引物对、试剂盒及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Randhawa et al. | Loop-mediated isothermal amplification: rapid visual and real-time methods for detection of genetically modified crops | |
Fullaondo et al. | Identification of potato cyst nematode species Globodera rostochiensis and G. pallida by PCR using specific primer combinations | |
CN107475458A (zh) | 鹅星状病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒 | |
CN111719008A (zh) | 一种与小麦白粉病抗病基因Pm5e共分离的SNP及其应用 | |
RU2617935C1 (ru) | Способ идентификации клопа вредной черепашки (Eurygaster integriceps Puton, 1881) на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК | |
Kim et al. | A portable detection assay for apple stem pitting virus using reverse transcription-recombinase polymerase amplification | |
JP4515524B2 (ja) | 正常眼圧緑内障疾患感受性遺伝子及びその利用 | |
Gawande et al. | Heteroplasmy due to coexistence of mtCOI haplotypes from different lineages of the Thrips tabaci cryptic species group | |
Huang et al. | Detection and characterization of carboxylic acid amide-resistant Plasmopara viticola in China using a TaqMan-MGB real-time PCR | |
Poon et al. | Differential gene expression analysis of Secreted in Xylem (SIX) genes from Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4 in Musa acuminata cv. Berangan and potential application for early detection of infection | |
Cherrad et al. | New insights from short and long reads sequencing to explore cytochrome b variants in Plasmopara viticola populations collected from vineyards and related to resistance to complex III inhibitors | |
KR101999070B1 (ko) | 새우 조기폐사 증후군(Early mortality syndrome)과 새우흰점바이러스(White spot syndrome virus) 병원체의 동시 진단용 멀티플렉스(Multiplex) PCR 프라이머 세트 및 이의 용도 | |
Mittapalli et al. | Characterization of a serine carboxypeptidase in the salivary glands and fat body of the orange wheat blossom midge, Sitodiplosis mosellana (Diptera: Cecidomyiidae) | |
US8329406B2 (en) | Method of separating and distinguishing walnut from pecan nut | |
JP5043985B2 (ja) | 正常眼圧緑内障疾患感受性遺伝子及びその利用 | |
Ruan et al. | The SNPs of three immunity genes in striped catfish, Pangasianodon hypophthalmus are associated with resistance against infection of Aeromonas hydrophila | |
RU2740480C1 (ru) | Способ идентификации клопов вредителей рода Polymerus - P.cognatus и P.vulneratus на основе рестрикционного анализа гена цитохромоксидазы митохондриальной ДНК | |
CN109321658B (zh) | 一种检测宫颈癌易感性的试剂盒 | |
JP7091237B2 (ja) | 遺伝子組換え作物の検出方法 | |
Trzmiel et al. | Biological and molecular characterisation of the two Polish Wheat streak mosaic virus isolates and their transmission by wheat curl mites. | |
US20100055703A1 (en) | Organism-Specific Hybridizable Nucleic Acid Molecule | |
Khodaparast et al. | Searching the genome of beluga (Huso huso) for sex markers based on targeted Bulked Segregant Analysis (BSA) | |
RU2653435C1 (ru) | Способ дифференциации ключевых пород медоносных пчел в россии на основе мутагенной пцр-пдрф | |
JP7486147B2 (ja) | ホクベイコメクイゴミムシダマシ検出用オリゴヌクレオチド | |
KR101166786B1 (ko) | 벼흰잎마름병원균의 k3 또는 k5 레이스의 판별용 유전자 마커 및 이를 이용한 판별 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190420 |