RU2617515C1 - Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в "окно имплантации" в эндометрии женщин бесплодием и неудачными попытками программы эко - Google Patents
Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в "окно имплантации" в эндометрии женщин бесплодием и неудачными попытками программы эко Download PDFInfo
- Publication number
- RU2617515C1 RU2617515C1 RU2016115705A RU2016115705A RU2617515C1 RU 2617515 C1 RU2617515 C1 RU 2617515C1 RU 2016115705 A RU2016115705 A RU 2016115705A RU 2016115705 A RU2016115705 A RU 2016115705A RU 2617515 C1 RU2617515 C1 RU 2617515C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- expression
- gnrg
- gnrgr
- endometrium
- infertility
- Prior art date
Links
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 44
- 230000036512 infertility Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002513 implantation Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title abstract 2
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 abstract description 26
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 38
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 20
- 229940035638 gonadotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 20
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 19
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000008238 LHRH Receptors Human genes 0.000 description 17
- 108010021290 LHRH Receptors Proteins 0.000 description 17
- 101150110792 GNRHR gene Proteins 0.000 description 15
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 7
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 5
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 4
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 3
- 102100020903 Ezrin Human genes 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000032692 embryo implantation Effects 0.000 description 2
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010055671 ezrin Proteins 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 102100033851 Gonadotropin-releasing hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710082444 Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000001276 Kolmogorov–Smirnov test Methods 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 241000078511 Microtome Species 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000028742 placenta development Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 229940077150 progesterone and estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 229940095055 progestogen systemic hormonal contraceptives Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- -1 prostoglandins Proteins 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к гинекологии, и предназначено для прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в «окно имплантации» в эндометрии женщин с бесплодием и неудачными попытками программ ЭКО. Прогностически неблагоприятными показателями рецептивности эндометрия считают отставание секреторной трансформации эндометрия, снижение количества клеток, содержащих зрелые пиноподии в поверхностном эпителии, менее чем 20%, а также низкую экспрессию (<2 баллов) GnRG и GnRGR. Предложенный способ повышает точность прогнозирования наступления беременности в программах ЭКО и естественных циклах у женщин с бесплодием. 4 ил., 4 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и патологической анатомии, предназначено для прогнозирования рецептивности эндометрия и наступления беременности в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).
В связи с постоянным ростом проблема бесплодия на сегодняшний день приобретает не только медицинское, но и социально-демографическое значение. Таким образом, все большее распространение получает метод лечения бесплодия путем ЭКО и переноса эмбрионов.
Повышение эффективности методов вспомогательных репродуктивных технологий является актуальной задачей современной репродуктивной медицины, а результативность программ ЭКО во многом зависит не только от качества перенесенных эмбрионов, но и от функционального состояния эндометрия, его зрелости и готовности к имплантации.
Таким образом, в изучении функционального состояния эндометрия особое место занимает исследование маркеров рецептивности для адекватной оценки и разработки лечебно-профилактических мероприятий.
Эндометрий восприимчив для имплантации эмбриона только в течение ограниченного периода, в которое наблюдается максимальная его рецептивность. Это так называемое «окно имплантации», период которого составляет несколько дней - примерно с 20-го по 24-й день нормального менструального цикла, на 6-10 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ) [1, 2, 3]. Для успешной имплантации необходима синхронизация между эмбрионом и эндометрием. Таким образом, правильная циклическая экспрессия рецепторов играет критическую роль для восприимчивости эндометрия и успешности имплантации [4].
На сегодняшний день имеется широкий спектр иммуногистохимических маркеров рецептивности эндометрия определяемые в окно имплантации, такие как: прогестероновые и эстрогеновые рецепторы, лейкемия ингибирующий фактор и его рецептор, эзрин, интегрины, селектины, простогландины, муцины [5, 6, 7, 8, 9, 10].
В ряде исследований было показано, что гонадотропин - рилизинг гормон (GnRG) и рецептор гонадотропин - рилизинг гормона (GnRGR) присутствуют в эндометрии женщин на протяжении всего менструального цикла в эпителиальных и стромальных клетках с повышением экспрессии рецепторов GnRG в децидуализированных стромальных клетках в ЛФ [11, 12]. Локальная экспрессия GnRG трофобластом и присутствие его рецепторов в децидуализированном эндометрии предположительно играет важную роль в диалоге между бластоцистой и эндометрием на стадии ранней имплантации, путем модуляции баланса между матриксными металлопротеиназами (ММР) и их ингибиторами [12, 13]. Повышается инвазивная способность трофобласта путем специфического ингибирования тканевых ингибиторов металлопротеиназ (TIMP), что способствует более успешной имплантации бластоцисты [12]. Также было показано, что GnRG индуцирует апоптоз в клетках эндометрия in vitro.
У изобретения задачей является способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в «окно имплантации» в эндометрии женщин с бесплодием и неудачными попытками программ ЭКО.
Способ прогнозирования рецептивности эндометрия при бесплодии у женщин с неудачными программами ЭКО включает определение уровней экспрессии GnRG и GnRGR в эндометрии в период «окна имплантации».
Как следствие, последнее приобретает чрезвычайную актуальность в связи с высокой перспективностью для разработки новых подходов к патогенетической профилактике бесплодия и подготовке эндометрия к импланатации в программах ЭКО.
В связи с чем было проведено исследование, целью которого явилось изучение морфологических особенностей эндометрия и экспрессии GnRG и GnRGR в эндометрии пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия и неудачными программами ЭКО.
Материалы и методы
В исследование была включена 41 пациентка с трубно-перитонеальным фактором (ТПФ) бесплодия, в возрасте от 26 до 38 лет, имеющие 1-2 неудачные программы ЭКО в анамнезе (основная группа), и 14 здоровых фертильных женщин аналогичного возраста имеющих в анамнезе здоровых детей (группа контроля). Аспирационная пайпель - биопсия эндометрия проводилась из области дна матки в «окно имплантации» (ЛГ+7) на 7-8 день после овуляции. Материалы биоптатов фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 24 ч. Образцы были обработаны по общепринятой стандартной методике и заключены в парафин. Срезы толщиной 4 мкм готовили на роторных микротомах и окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводилось в световом микроскопе Carl Zeiss Axio Imager A2 при увеличении от ×50 до ×600. Гистологическое датирование эндометрия, оценку процента клеток поверхностного эпителия с наличием зрелых пиноподий осуществляли на том же световом микроскопе при увеличении ×400 в 5 полях зрения. Пиноподии оценивались как изобилующие, умеренные и незначительные в зависимости от % занимаемой ими поверхности эндометрия (>40, 20-40 и <20 соответственно).
Иммуногистохимические (ИГХ) реакции проводили на серийных депарафинированных срезах толщиной 3-4 мкм по общепринятым методикам (DAKO protocols).
Экспрессию GnRH выявляли первичными антителами к GnRH (Abcam, 1:400), a GnRHR - первичными антителами к GnRHR (Gene Тех, 1:100).
Результаты ИГХ реакции GnRH и GnRHR оценивали полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике: отсутствие иммуноокрашенных клеток (-) - 0 баллов, менее 5% иммуноокрашенных клеток (±) - 0,5 баллов, менее 20% иммуноокрашенных клеток (+) - 2 балла (низкая), от 20 до 40% окрашенных клеток (++) - 4 балла (умеренная), более 40% окрашенных клеток (+++) - 6 баллов (высокая).
По результатам исследования проводили статистический анализ с использованием метода дисперсионного анализа ANOVA (для нескольких групп) и по методу Манна-Уитни.
Для каждого количественного параметра были определены: среднее значение (М), среднеквадратичное отклонение (δ), ошибка среднего (m), медиана (Me), 95% доверительный интервал, для качественных данных - частоты (%).
При нормальном характере распределения данных результаты представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (M±m). При распределении данных, отличных от нормального (значение теста Колмогорова - Смирнова менее 0,05), исследованные количественные показатели представлены в виде Me (L-H), где Me - медиана, L - 25 (нижний) квартиль, H - 75 (верхний) квартиль.
Результаты исследования
У большинства пациенток с ТПФ бесплодия средний возраст составил - 32,1±0,2 года. Длительность бесплодия в среднем составила 5,3±0,4 года, преобладало первичное бесплодие. У всех пациенток с бесплодием в анамнезе имели место 1-2 неудачных попытки ЭКО. Фертильные женщины контрольной группы были аналогичного возраста.
Анализ морфологической структуры эндометрия, показал, что у большинства пациенток исследуемой группы наблюдалась секреторная трансформация эндометрия, при этом ранняя стадия фазы секреции обнаружена у 5 (12,2%), средняя стадия фазы секреции - у 32 (78%) и поздняя стадия фазы секреции - у 4 (9,8%) пациенток основной группы. В группе контроля также превалировал эндометрий средней стадии фазы секреции у 13 (92,9%), ранняя стадия фазы секреции наблюдалась - у 1 (7,1%) женщины (таблица 1).
Результаты морфологического исследования эндометрия показали, что в исследуемой группе зрелые пиноподии наблюдались у 35 (85,4%), регрессирующие у 6 (14,6%) пациенток, тогда как в контрольной группе у всех женщин выявлялись зрелые пиноподии (100%). Количество зрелых пиноподий в исследуемой группе было достоверно ниже (p<0,05), чем в контрольной. При этом медиана количества клеток поверхностного эпителия, содержащих пиноподии в естественном цикле в «окно имплантации», у пациенток основной группы составила 20% (интерквартильный интервал 17-25%), что было существенно ниже, чем в группе фертильных женщин (медиана 30%, интерквартильный интервал 20-35%; р=0,003) (таблица 2).
При ИГХ исследовании GnRH экспрессировался в виде коричневого окрашивания цитоплазмы клеток поверхностного эпителия, эпителия желез и стромы эндометрия.
У пациенток с бесплодием экспрессии GnRG в поверхностном эпителии (медиана 2 и 5 интерквартильный интервал 2-4 и 4-6, р=0,0001), в эпителии желез (медиана 2 и 4 интерквартильный интервал 1-2 и 2,75-4, р=0,0001) и в строме (медиана 1 и 2 интерквартильный интервал 1-2 и 2-4, р=0,0001) была значительно ниже по сравнению с фертильными женщинами (табл. 3).
Таким образом, у пациенток с бесплодием отмечена низкая экспрессия GnRH в поверхностном эпителии и строме. У фертильных женщин уровни экспрессии GnRG были выше в поверхностном эпителии - в 1,75 раза, в эпителии желез - в 1,9 раза и в строме - в 2 раза по сравнению с пациентками с бесплодием (фиг. 1, 2)
ИГХ экспрессию GnRHR в эндометрии оценивали путем исследования иммуноокрашивания цитоплазмы клеток эпителия и стромы эндометрия. GnRH выявлялся в цитоплазме клеток эндометрия в виде коричневого окрашивания.
Уровни экспрессии GnRGR в поверхностном эпителии (медиана 1 и 4, интерквартильный интервал 0,5-1 и 3,2-4, р=0,0001), в эпителии желез (медиана 1 и 3,7, интерквартильный интервал 0,5-1 и 2,5-4, р=0,0001) и строме (медиана 0,75 и 4 интерквартильный интервал 0,5-1 и 2,3-4, р=0,0001) были существенно выше в группе фертильных женщин по сравнению с группой пациенток с бесплодием (таблица 4).
Оценка средних уровней экспрессии GnRGR показала, что в группе пациенток с бесплодием уровни экспрессии GnRHR были низкими в поверхностном эпителии и строме. У фертильных женщин уровни экспрессии GnRGR были выше в поверхностном эпителии - в 4,2 раза, в эпителии желез - в 4,1 раза, в строме - в 4,5 раза в сравнении с пациентками с бесплодием (фиг. 3, 4)
Полученные результаты свидетельствует о нарушении рецептивности эндометрия в «окно имплантации» у исследуемых пациенток с бесплодием.
Приведенные данные свидетельствуют о том, что снижение экспрессии рецепторов GnRH и GnRHR в эндометрии у пациенток с бесплодием отражает нарушение его рецептивности. И, в свою очередь, может явиться неблагоприятным прогностическим признаком для наступления беременности.
Обсуждение
В работе Raga F., 1998, исследовали экспрессию мРНК GnRH и GnRHR в эндометрии фертильных женщин в пременопаузе в динамике менструального цикла [11]. Было показано, что GnRH и GnRHR присутствуют в эндометрии женщин на протяжении всего менструального цикла, как в эпителии, так и в строме, с повышением экспрессии GnRH и GnRHR в секреторную фазу по сравнению с фазой пролиферации [11]. Кроме того, были показаны наиболее высокие уровни мРНК GnRH и GnRH-R в ЛФ в эпителиальных и стромальных клетках.
Таким образом, экспрессия GnRH трофобластом и присутствие его рецепторов в децидуализированном эндометрии, по-видимому, играет важную роль на стадии имплантации и плацентации, как молекулярный аутокринно/паракринный регулятор взаимоотношений эмбрион/эндометрий в период ранней имплантации, изменяя баланс между матриксными металлопротеиназами и их ингибиторами [12, 13].
Результаты нашего исследования показали существенное снижение экспрессии GnRH у пациенток с бесплодием в поверхностном эпителии - в 1,75 раза, в эпителии желез - в 1,9 раза и в строме - в 2 раза, GnRHR в поверхностном эпителии - в 4,2 раза, в эпителии желез - в 4,1 раза, в строме - в 4,5 раза в сравнении с группой фертильных женщин в «окно имплантации» (р=0,0001). Кроме того, в ходе проведенного нами морфологического и ИГХ исследования эндометрия у пациенток с бесплодием было отмечено более низкое количество клеток поверхностного эпителия, содержащих пиноподии (медиана 20% и 30%, р=0,003), и количество зрелых пиноподий (р<0,05).
Таким образом, прогностически благоприятными критериями наступления беременности являются: наличие в период «окна имплантации» более 20% клеток поверхностного эпителия со зрелыми пиноподиями, а также высокий уровень экспрессии GnRH и GnRHR в эндометрии. Эндометрий женщины с бесплодием и неудачными программами ЭКО характеризуется нарушением рецептивности эндометрия, что проявляется отставанием секреторных изменений, более низким количество клеток поверхностного эпителия содержащих зрелые пиноподии, а также низкой экспрессий GnRH и GnRHR.
Определение клинических и молекулярно-биологических факторов рецептивности эндометрия позволяют достоверно прогнозировать наступление беременности как в естественном цикле, так и в программе ЭКО.
Полученные результаты исследования позволяют расширить спектр маркеров рецептивности эндометрия при бесплодии и повторных неудачах программ ЭКО в анамнезе.
Выявленное снижение экспрессии GnRH и GnRHR в эндометрии в «окно имплантации» при бесплодии, открывает перспективы для разработки новых подходов к патогенетической подготовке слизистой тела матки к имплантации бластоцисты.
Клинический пример 1
Больная А., 26 лет, обратилась с жалобами на отсутствие беременности в течение 2 лет в 1 браке. Гинекологический анамнез - отягощен. При гинекологическом осмотре патология не выявлена. В анамнезе 2 неудачные попытки программы ЭКО. Морфологический диагноз (21 день м./цикл.) - эндометрий ранней стадии фазы секреции, зрелые пиноподии определяются на 15% поверхностного эпителия. Методом иммуногистохимии определены уровни экспрессии GnRG и GnRGR в эпителии и строме. Выявлен низкий уровень экспрессии GnRG (2 балла) и GnRGR (1,5 балла) в эпителии и в строме GnRG (2 балла) и GnRGR (1 балл).
Пациентка направлена в программу ЭКО, в результате которой беременность не наступила.
Клинический пример 2
Больная Д., 28 лет, обратилась с жалобами на отсутствие беременности в течение 3 лет в 1 браке. В анамнезе 1 самостоятельные роды после программы ЭКО, без особенностей. Гинекологический анамнез - не отягощен. Морфологический диагноз (22 день м./цикл.) - эндометрий средней стадии фазы секреции и зрелые пиноподии определяются более чем на 45% поверхностного эпителия. Методом иммуногистохимии определены уровни экспрессии GnRG и GnRGR в эпителии и строме. Выявлен высокий уровень экспрессии GnRG (5,5 баллов) и GnRGR (5 баллов) в эпителии и в строме GnRG (4 балла) и GnRGR (4,5 балла).
Пациентка направлена в программу ЭКО, в результате которой была достигнута беременность.
Клинический пример 3
Больная Т., 30 лет, жалобы на отсутствие беременности в течение 6 лет в 1 браке. В анамнезе 1 неудачная программа ЭКО. Гинекологический анамнез - не отягощен. Морфологический диагноз (21 день м./цикл.) - эндометрий ранней стадии фазы секреции и зрелые пиноподии определяются на 20% поверхностного эпителия. Методом иммуногистохимии определены уровни экспрессии GnRG и GnRGR в эпителии и строме. Выявлен низкий уровень экспрессии GnRG (2 балла) и GnRGR (2 балла) в эпителии и в строме GnRG (1 балл) и GnRGR (1,5 балла).
Пациентка направлена в программу ЭКО, в результате которой беременность не наступила.
Список литературы
1. Tavaniotou A., Smitz J., Bourgain С., Devroey P. Ovulation induction disrupts phase function // Ann NY Acad Sci. - 2001; 943:55-63.
2. Lessey B.A. The role of the endometrium during embryo implantation // Hum Reprod. - 2000; 15:39-50.
3. Bourgain C., Devroey P. The endometrium in stimulated cycles for IVF // Hum Reprod Update. - 2003; 9(6): 515-522.
4. Lessey B.A. Two pathways of progesterone action in the human endometrium: implications for implantation and contraception // Steroids. - 2003. - Vol. 68. - P. 809-815.
5. Expression and activation of the membrane-cytoskeleton protein ezrin during normal endometrial cycle / Tan O., Ornek Т., Fadiel A. et al. // Fertility Sterility. - 2012. - Vol. 97. - №1. - P. 192-199.
6. Бурлев B.A., Кузьмичев Л.Н., Онищенко A.C., Ильясова Н.А., Щетинина Н.С. Функциональная активность эндометрия влияет на результаты ЭКО и перенос эмбрионов: молекулярные механизмы регуляции фертильности. Пробл. репрод., 2010; 2:41-52.
7. Garcia Е., Bouchard Р. et al. Use of immunocytochemistry of progesterone and estrogen receptors for endometrial dating // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1988; 67:80-87.
8. Gemzell-Danielsson K., Bygdeman M. Effects of Progestogens on Endometrial Maturation in the Implantation Phase Ernst Schering Res Found Workshop. 2005; (52): 119-38.
9. Johnson P.M., Christmas S.E., Vince G.S. Immunological aspects of implantation and implantation failure // Human Reproduction. - 1999. - Vol. 14. - Suppl. 2. - P. 26-36.
10. Leukaemia inhibitory factor (LIF) gene mutations in women diagnosed with unexplained infertility and endometriosis have a negative impact on the IVF outcome. A pilot study / 
et al. // Folia Biology (Praha). - 2009. - Vol. 55. - P. 92-97.
11. Raga F, Casan EM, Kruessel JS, Wen Y, Huang HY, Nezhat C, Polan ML: Quantitative gonadotropin-releasing hormone gene expression and immunohistochemical localization in human endometrium throughout the menstrual cycle. Biol Reprod – 1998. - Vol. 59. - P. 661-669.
12. Raga F, Casan EM, Wen Y, Huang HY, Bonilla-Musoles F, Polan ML: Independent regulation of matrix metalloproteinase-9, tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIМР-1), and TIMP-3 in human endometrial stromal cells by gonadotropin-releasing hormone: implications in early human implantation. J Clin Endocrinol Metab - 1999 - Vol. 84. - P. 636-642.
13. Chou CS, Tai CJ, MacCalman CD, Leung PC: Dose-dependent effects of gonadotropin releasing hormone on matrix metalloproteinase (MMP)-2, and MMP-9 and tissue specific inhibitor of metalloproteinases-1 messenger ribonucleic acid levels in human decidual Stromal cells in vitro. J Clin Endocrinol Metab. - 2003. - Vol. 88. - P. 680-688.
Фиг. 1. Показатели средних уровней экспрессии GnRH у пациенток с бесплодием и фертильных женщин.
р<0,05 по сравнению с группой с фертильными женщинами (U-критерий Манна-Уитни).
Фиг. 2. Иммуногистохимическое исследование экспрессии GnRH в эндометрии в «окно имплантации» у пациенток с бесплодием и фертильных женщин (иммунопероксидазная реакция) (×200).
а - основная группа (отсутствие экспрессии);
б - контрольная группа (высокая экспрессия).
Фиг. 3. Показатели средних уровней экспрессии GnRHR у пациенток с бесплодием и фертильных женщин.
р<0,05 по сравнению с группой с фертильными женщинами (U-критерий Манна-Уитни).
Фиг. 4. Иммуногистохимическое исследование экспрессии GnRHR в эндометрии в «окно имплантации» у пациенток с бесплодием и фертильных женщин (иммунопероксидазная реакция) (×400).
а - основная группа (низкая экспрессия);
б - контрольная группа (высокая экспрессия).
Claims (1)
- Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в «окно имплантации» в эндометрии женщин с бесплодием и неудачными попытками программ ЭКО, отличающийся тем, что определяют на основании иммуногистохимического исследования в биоптате эндометрия в «окно имплантации» уровни экспрессии GnRG и GnRGR, прогностически неблагоприятными показателями рецептивности эндометрия считают отставание секреторной трансформации эндометрия, снижение количества клеток, содержащих зрелые пиноподии в поверхностном эпителии, менее чем 20%, а также низкую экспрессию (<2 баллов) GnRG и GnRGR.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016115705A RU2617515C1 (ru) | 2016-04-22 | 2016-04-22 | Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в "окно имплантации" в эндометрии женщин бесплодием и неудачными попытками программы эко |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016115705A RU2617515C1 (ru) | 2016-04-22 | 2016-04-22 | Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в "окно имплантации" в эндометрии женщин бесплодием и неудачными попытками программы эко |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2617515C1 true RU2617515C1 (ru) | 2017-04-25 |
Family
ID=58643058
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016115705A RU2617515C1 (ru) | 2016-04-22 | 2016-04-22 | Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в "окно имплантации" в эндометрии женщин бесплодием и неудачными попытками программы эко |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2617515C1 (ru) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2651762C1 (ru) * | 2017-06-14 | 2018-04-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Способ оценки рецептивности эндометрия в период "имплантационного окна" |
| RU2706683C1 (ru) * | 2019-06-05 | 2019-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Способ прогнозирования готовности эндометрия к успешной имплантации эмбриона у женщин с маточной формой бесплодия с использованием компьютерной морфометрии |
| RU2724384C1 (ru) * | 2020-03-10 | 2020-06-23 | Мекан Рахимбердыевич Оразов | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при пролиферативно-воспалительных нарушениях в эндометрии при эндометриозе, ассоциированном с эндометриальным фактором бесплодия |
| RU2724381C1 (ru) * | 2020-03-10 | 2020-06-23 | Мекан Рахимбердыевич Оразов | Способ оценки рецептивности эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии |
| RU2731203C1 (ru) * | 2020-03-30 | 2020-08-31 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Способ оценки рецептивности эндометрия в секреторную фазу у женщин с первичным бесплодием, обусловленным гипоплазией эндометрия |
| WO2020215902A1 (zh) * | 2019-04-22 | 2020-10-29 | 苏州亿康医学检验有限公司 | 一种判断子宫内膜容受性的方法及其应用 |
| RU2765639C1 (ru) * | 2021-06-15 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия на основании эндометриальной экспрессии vdr, hoxa 11 в программах врт у женщин старшего репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия |
| RU2783247C1 (ru) * | 2021-08-05 | 2022-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ прогнозирования живорождения в программах эко у женщин позднего репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2553340C1 (ru) * | 2014-04-21 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием |
| RU2562559C1 (ru) * | 2014-05-27 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук | Способ прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения |
-
2016
- 2016-04-22 RU RU2016115705A patent/RU2617515C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2553340C1 (ru) * | 2014-04-21 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием |
| RU2562559C1 (ru) * | 2014-05-27 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук | Способ прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RAGA F. et al. Quantitative gonadotropin-releasing hormone gene expression and immunohistochemical localization in human endometrium throughout the menstrual cycle. R Biol Reprod. 1998 Sep; 59(3): 661-669. * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2651762C1 (ru) * | 2017-06-14 | 2018-04-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Способ оценки рецептивности эндометрия в период "имплантационного окна" |
| WO2020215902A1 (zh) * | 2019-04-22 | 2020-10-29 | 苏州亿康医学检验有限公司 | 一种判断子宫内膜容受性的方法及其应用 |
| RU2706683C1 (ru) * | 2019-06-05 | 2019-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Способ прогнозирования готовности эндометрия к успешной имплантации эмбриона у женщин с маточной формой бесплодия с использованием компьютерной морфометрии |
| RU2724384C1 (ru) * | 2020-03-10 | 2020-06-23 | Мекан Рахимбердыевич Оразов | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при пролиферативно-воспалительных нарушениях в эндометрии при эндометриозе, ассоциированном с эндометриальным фактором бесплодия |
| RU2724381C1 (ru) * | 2020-03-10 | 2020-06-23 | Мекан Рахимбердыевич Оразов | Способ оценки рецептивности эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии |
| RU2731203C1 (ru) * | 2020-03-30 | 2020-08-31 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ ОММ" Минздрава России) | Способ оценки рецептивности эндометрия в секреторную фазу у женщин с первичным бесплодием, обусловленным гипоплазией эндометрия |
| RU2765639C1 (ru) * | 2021-06-15 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия на основании эндометриальной экспрессии vdr, hoxa 11 в программах врт у женщин старшего репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия |
| RU2783247C1 (ru) * | 2021-08-05 | 2022-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Способ прогнозирования живорождения в программах эко у женщин позднего репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2617515C1 (ru) | Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии GnRG и GnRGR в "окно имплантации" в эндометрии женщин бесплодием и неудачными попытками программы эко | |
| Victoria et al. | Anti Müllerian hormone: more than a biomarker of female reproductive function | |
| Salvetti et al. | Cell proliferation and survival mechanisms underlying the abnormal persistence of follicular cysts in bovines with cystic ovarian disease induced by ACTH | |
| Serafini et al. | Endometrial claudin-4 and leukemia inhibitory factor are associated with assisted reproduction outcome | |
| RU2651762C1 (ru) | Способ оценки рецептивности эндометрия в период "имплантационного окна" | |
| RU2724381C1 (ru) | Способ оценки рецептивности эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии | |
| Schäfer‐Somi et al. | Kisspeptin‐10 and the G protein‐coupled receptor 54 are differentially expressed in the canine pregnant uterus and trophoblast cells | |
| Bozkurt et al. | Hysteroscopic polypectomy decreases NF-κB1 expression in the mid-secretory endometrium of women with endometrial polyp | |
| Klonos et al. | Endometrial changes in estrogen and progesterone receptor expression during implantation in an oocyte donation program | |
| Tan et al. | Anti-phospholipid antibody may reduce endometrial receptivity during the window of embryo implantation | |
| Meng et al. | Decreased NDRG1 expression is associated with pregnancy loss in mice and attenuates the in vitro decidualization of endometrial stromal cells | |
| Liu et al. | Evidence from three cohort studies on the expression of MUC16 around the time of implantation suggests it is an inhibitor of implantation | |
| Hosseinirad et al. | Evaluation of expression and phosphorylation of progesterone receptor in endometrial stromal cells of patients with recurrent implantation failure compared to healthy fertile women | |
| Bischof et al. | Implantation of the Human Embryo: Research Lines and Models: From the Implantation Research Network ‘Fruitful’ | |
| RU2553340C1 (ru) | Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием | |
| Rempel et al. | Do uterine PTGS2, PGFS, and PTGFR expression play a role in canine uterine inertia? | |
| Kim et al. | Gene expression and localization of 20α-hydroxysteroid dehydrogenase (HSD) in reproductive tissues during early pregnancy of cattle | |
| Silva et al. | Hormonal profile prior to luteolysis modulates the uterine luminal transcriptome in the subsequent cycle in beef cross-bred cows | |
| RU2565449C1 (ru) | Способ отбора пациенток с синдромом "слабого" ответа яичников для проведения программы "донация ооцитов" | |
| RU2694882C1 (ru) | Способ прогнозирования рецидива эндометриоидных кист яичника | |
| RU2724384C1 (ru) | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при пролиферативно-воспалительных нарушениях в эндометрии при эндометриозе, ассоциированном с эндометриальным фактором бесплодия | |
| RU2734840C1 (ru) | Способ оценки имплантационного потенциала эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии | |
| RU2681219C1 (ru) | Способ прогнозирования рецидивирования эндометриоидных кист яичников после оперативного лечения при помощи иммуногистохимических маркеров | |
| EP3356830B1 (en) | A method of treatment and prognosis | |
| RU2735218C1 (ru) | Способ прогнозирования имплантации в программах врт у женщин старшего репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180423 |