RU2613708C2

RU2613708C2 - Способ лечения угревой болезни

Info

Publication number: RU2613708C2
Application number: RU2014144507A
Authority: RU
Inventors: Борис Борисович Яцинюк; Александр Игоревич Даскал; Иван Александрович Булатов; Вадим Вячеславович Леонов; Валерия Вадимовна Шелестюк; Татьяна Харитоновна Тимохина; Юлия Валерьевна Христофорова; Татьяна Петровна Афанасьева; Татьяна Николаевна Соколова; Любовь Николаевна Деревянко
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "Сибмедика"
Priority date: 2014-11-07
Filing date: 2014-11-07
Publication date: 2017-03-21
Also published as: RU2014144507A

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лечения угревой болезни. Для этого в стерильную тиогликолевую среду проводят посев суспензии В. bifidum №1 в физиологическом растворе (10⁶ КОЕ/мл), приготовленной из препарата «Бифидумбактерин» в соотношении 100:1, затем посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 48 ч, полученной бульонной культурой бифидобактерий пропитывают стерильную марлевую салфетку, которую накладывают на пораженные участки кожи на 30 мин, процедуру повторяют 2 раза в сутки. Способ позволяет уменьшить вирулентные и персистентные свойства возбудителей угревой болезни за счет действия экзометаболитов и интактных клеток молочнокислых бактерий. 3 ил., 1 табл., 3 пр.

Description

Заявляемое изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в косметологии и дерматологии как способ и средство для лечения угревой болезни средней степени тяжести.

Угревая болезнь (акне) – хроническое, рецидивирующее, полиморфное, многофакторное воспалительное заболевание сально-волосяного фолликула, занимающее ведущее место в структуре дерматологической патологии среди лиц подросткового и молодого возраста. По статистическим данным, угревой сыпью страдают до 80-90% подростков, 8% людей в возрасте от 25 до 34 лет и 5% – в возрасте 35-44 лет. У 14% детей и подростков это заболевание протекает в среднетяжелой и тяжелой форме, что может сопровождаться психологическими и социальными проблемами. Актуальность данной проблемы с годами не только не снижается, а напротив увеличивается в связи с изменением биологических свойств возбудителей и распространением резистентности к антимикробным препаратам.

Наиболее часто встречающимися возбудителями угревой сыпи являются условно-патогенные микроорганизмы: Propionibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemoliticus, Malassezia и др. (Кубанова А.А., Самсонов В.А., Забненкова О.В. Современные особенности патогенеза и терапии акне. Вестник дерматологии и венерологии. 2003; 1:9-15, Leeming J.P., Holland K.T., Cunliffe W.J. The microbial colonization of inflamed acne vulgaris lesions. Brit. J. Derm, 1988, 118 (2), 203-8).

Современные способы лечения угревой болезни предусматривают использование лекарственных средств в зависимости от этиологии угревой болезни [Патент РФ №2425682, А61К31/7048, А61Р17/10 Кунгуров Н.В., Кохан М.М., Шабардина О.В.; Рациональная фармакотерапия заболеваний кожи и инфекций, передаваемых половым путем: Руководство для практикующих врачей / Кубанова А.А., Кисина В.И., Блатуч Л.А., Вавилов A.M. и др. М.: Литтерра, 2005; 882 с.] (аналоги). Однако, несмотря на успехи клинической медицины и фармакологии, проблема лечения угревой болезни не перестает быть актуальной. Вопросы эффективного лечения с учетом этиологии угревой болезни не всегда решаются корректно. Использование спреев и мазей, содержащих растительные экстракты, масла и этиловый спирт [Патент РФ №2190388, A61K7/48, A61K7/00, A61K9/06 Высоков В.И.; Герасимова Н.М.; Ларионов Л.П.; Малыхина Н.О.; Пашкевич К.И.; Пашкевич Т.К.; Ратнер В.Г.; Терешин П.И.; Федотовских И.В.] (аналог), раздражает кожу и снижает ее колонизационную резистентность. Применение антибиотиков в отношении антибиотикорезистентных возбудителей неэффективно и может увеличивать их вирулентность и способствовать персистенции, приводя к рецидивированию воспалительного процесса.

В связи с этим оправданным становится поиск новых способов и средств лечения угревой сыпи, способных повышать колонизационную резистентность кожи и ингибировать вирулентные и персистентные свойства возбудителей угревой болезни.

Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ лечения угревой болезни с применением гидрофильного геля («Васма», ООО НПЦ Ветор-Инвест), в котором в качестве основы используют модифицированный микрогранулированный хитозан (93%) [Патент РФ №2197971 A61K31/722, A61K33/38, A61P17/02, A23L1/054 Майер Б.О. Биологически активная композиция], как наиболее эффективную гидрофильную основу для проникновения действующего начала в кожу, ускорения восстановления и стимуляции обменных и регенеративных процессов поврежденных тканей, и ионы серебра как микробоцидный компонент (прототип).

Основные недостатки прототипа в том что, приготовленный по способу-прототипу гель не способствует повышению колонизационной резистентности кожи, так как ионы серебра неизбирательны в отношении только возбудителей угревой болезни и восстанавливаются под действием солнечных лучей, что может приводить к модификации патогенных свойств возбудителей угревой болезни и рецидиву заболевания.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является подавление вирулентных и персистентных свойств возбудителей угревой болезни с помощью бульонной культуры пробиотического штамма Bifidobacterium bifidum №1 («Бифидумбактерин», Микроген).

Для достижения указанного технического результата в заявляемом изобретении на область поражения накладывают марлевую салфетку, пропитанную бульонной культурой пробиотического штамма B. bifidum №1 (способ лечения угревой болезни) или втирают массирующими движениями в пораженные участки кожи косметический гель, содержащий модифицированный микрогранулированный хитозановый гель и бульонную культуру пробиотического штамма B. bifidum №1 при следующем количественном содержании в ней всех компонентов (мас.%): 93:7 (средство для лечения угревой болезни).

В источниках патентной и научно-технической информации сведений о способах лечения угревой болезни микробной этиологии с использованием интактных клеток и экзометаболитов B. bifidum не обнаружено.

Основные признаки заявляемого изобретения, общие с прототипом: использование в качестве гелевой основы модифицированного микрогранулированного хитозана.

Основными отличиями от прототипа, обеспечивающими получение заявляемого технического результата, является добавление 7%-ной бульонной культуры пробиотического микроорганизма, одновременно содержащей интактные клетки и экзометаболиты B. bifidum.

В заявляемом изобретении экспериментально выявлено уменьшение вирулентных (гемолитической активности – ГА) и персистентных свойств (каталазной и антилизоцимной активность – КА и АЛА соответственно) возбудителей угревой болезни под действием экзометаболитов и интактных клеток молочнокислых бактерий. Выбор данных биологических свойств обусловлен их важностью для выживания патогена в организме хозяина.

Материалом для исследования послужили пробиотический штамм Bifidobacterium bifidum №1 («Бифидумбактерин», Микроген) и 20 штаммов микроорганизмов, выделенных от 18 пациентов с угревой болезнью средней степени тяжести. Идентификацию микроорганизмов до рода и вида проводили общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных и биохимических свойств в соответствии с определителем бактерий Берджи [Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Пер. с англ./ Под ред. Хоулт Дж., Криг Н., Снит П. и др. – М.: Мир, 1997].

Бифидобактерии культивировали в тиогликолевой среде (НПО «Питательные среды», Махачкала). Экзометаболиты от микробных клеток отделяли центрифугированием при 3000 g в течение 15 мин 48 часовой культуры Bifidobacterium bifidum. Супернатанты стерилизовали добавлением хлороформа, в соотношении супернатант : хлороформ – 20 : 1, осадок интактных клеток троекратно промывали физиологическим раствором от остатков разрушенных клеток и стерилизовали парами хлороформа. Экзометаболиты или суспензию интактных клеток в физиологическом растворе (10⁶ КОЕ/мл) добавляли в мясопептонный бульон (НПО «Питательные среды», Махачкала) – 1 : 10 и инокулировали по 0,2 мл культуральной жидкостью возбудителя (10⁸ КОЕ/мл), контролем служили посевы в бульон, не содержащий экзометаболитов. Посевы выращивали в течение 12 ч при 37°С.

Антилизоцимную активность определяли фотометрическим методом и выражали в мкг/мл⋅ОП [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. – М.: Медицина, 1999. – С.88-89]. Гемолитическую активность определяли фотометрическим методом по уровню гемолиза эритроцитов человека и выражали в % [Леонов В.В., Костерина В.В., Варницына В.В., Тимохина Т.Х., Курлович Н.А. Железозависимый синтез гемолизинов Staphylococcus aureus // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2012. - Т. 153. - №1. – С.49-51]. Каталазную активность определяли фотометрическим методом по убыли пероксида водорода и выражали в мкмоль/мин [Бухарин О.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В., Иванов Ю.Б. Изменение активности каталазы Staphylococcus aureus ATCC 6538 Р под влиянием метаболитов микроорганизмов, выделенных из разных экотопов // Микробиология, 2002. Т. 71, №2. – С. 183-186].

Таблица. Изменение биологических свойств стафилококков под действием интактных клеток и экзометаболитов B. bifidum

Биологическое свойство	Интактные клетки	Экзометаболиты	Контроль (без воздействия интактных клеток и экзометаболитов)
S. aureus
ГА, %	11,2±0,3	17,0±0,3	24,1±1,3
КА, мкмоль/мин	2,0±0,03	2,9±0,03	3,7±0,02
АЛА, мкг/мл⋅ОП	0,7±0,2	0,5±0,2	1,5±0,1
S. epidermidis
ГА, %	5,3±0,5	13,3±	18,0±1,0
КА, мкмоль/мин	1,8±0,03	1,5±0,0,2	2,4±0,02
АЛА, мкг/мл⋅ОП	1,0±0,1	1,2±0,2	1,8±0,1

Как видно из таблицы, под действием интактных клеток и экзометаболитов B. bifidum происходит достоверное снижение ГА, КА и АЛА в отношении представленных микроорганизмов.

Таким образом, экспериментальным путем показано, что как экзометаболиты, так и интактные клетки B. bifidum №1 способны снижать активность факторов вирулентности и персистенции возбудителей угревой болезни.

Заявляемое изобретение обеспечивает высокую эффективность и сокращение продолжительности лечения угревой болезни за счет ингибирующего действия интактных клеток и экзометаболитов бифидобактерий на биологические свойства возбудителей угревой болезни.

Предлагаемое изобретение осуществляется следующим образом. В стерильную тиогликолевую среду (НПО «Питательные среды», Махачкала) проводят посев суспензии B. bifidum №1 в физиологическом растворе (10⁶ КОЕ/мл), приготовленной из препарата «Бифидумбактерин» (Микроген) в соотношении 100 :1. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 48 ч, полученную культуру бифидобактерий используют для лечения угревой болезни. Для этого смешивают в стерильной посуде 7 г бульонной культуры бифидобактерий и 93 г модифицированного микрогранулированного хитозана или пропитывают ей стерильную марлевую салфетку. В первом случае, после установления диагноза угревой болезни, полученный гель втирается массирующими движениями в пораженные участки кожи 4 раза в сутки. Во втором случае на пораженные участки на 30 мин накладывается марлевая салфетка, процедура повторяется 2 раза в сутки.

Возможность практического использования изобретения подтверждается примерами конкретного выполнения. Заявляемым способом было проведено лечение 26 больных угревой болезнью.

Пример 1. После установления диагноза получили 48 ч бульонную культуру Bifidobacterium bifidum №1. В стерильную тиогликолевую среду (НПО «Питательные среды», Махачкала) провели посев суспензии B. bifidum №1 в физиологическом растворе (10⁶ КОЕ/мл), приготовленной из препарата «Бифидумбактерин» в соотношении 100 :1. Посевы инкубировали при (37±1)°С в течение 48 ч. Полученной культурой бифидобактерий пропитали стерильную марлевую салфетку и накладывали на 30 мин на пораженные участки кожи 2 раза в сутки. Эффективность лечения оценивалась визуально после недельного курса лечения. Результаты лечения приведены на фотоснимках (фотоиллюстрация 1).

Пример 2. Проведен аналогично примеру 1, но с использованием микрогранулированного хитозана в качестве основы для приготовления геля. Смешивали 93 г модифицированного микрогранулированного хитозана («Васма», ООО НПЦ Ветор-Инвест) с 7 г бульонной культуры бифидобактерий. Полученный гель втирали массирующими движениями в пораженные участки кожи 4 раза в сутки. Эффективность лечения оценивалась визуально после недельного курса лечения. Результаты лечения приведены на фотоснимках (фотоиллюстрация 2).

Пример 3. Для сравнения эффективности лечения угревой болезни известным способом и заявляемым были отобраны 2 больных с угревой болезнью, которым после установления диагноза втирали массирующими движениями в пораженные участки кожи 4 раза в сутки хитозановый гель с ионами серебра «Васма». Эффективность лечения оценивалась визуально после недельного курса лечения. Видимых изменений после недельного использования хитозанового геля с ионами серебра «Васма» нами не обнаружено. Очевидно, что для достижения желаемого терапевтического эффекта необходимо увеличение сроков лечения.

Из представленных результатов видно, что заявляемый способ и средство приводит к улучшению состояния кожи уже после недельного курса лечения. Полученные результаты говорят о высокой эффективности заявляемого изобретения по сравнению с прототипом в лечении угревой болезни. Изобретение обеспечивает высокую эффективность и сокращение продолжительности лечения за счет снижения активности факторов вирулентности и персистенции возбудителей и способствует повышению колонизационной резистентности кожи.

Claims

Способ лечения угревой болезни, заключающийся в том, что в стерильную тиогликолевую среду проводят посев суспензии В. bifidum №1 в физиологическом растворе (10⁶ КОЕ/мл), приготовленной из препарата «Бифидумбактерин» в соотношении 100:1, затем посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 48 ч, полученной бульонной культурой бифидобактерий пропитывают стерильную марлевую салфетку, которую накладывают на пораженные участки кожи на 30 мин, процедура повторяется 2 раза в сутки.