RU2613366C1 - Method of culture diagnosis of tuberculosis infection - Google Patents

Method of culture diagnosis of tuberculosis infection Download PDF

Info

Publication number
RU2613366C1
RU2613366C1 RU2016100474A RU2016100474A RU2613366C1 RU 2613366 C1 RU2613366 C1 RU 2613366C1 RU 2016100474 A RU2016100474 A RU 2016100474A RU 2016100474 A RU2016100474 A RU 2016100474A RU 2613366 C1 RU2613366 C1 RU 2613366C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
phosphate buffer
temperature
sodium phosphate
minutes
nutrient medium
Prior art date
Application number
RU2016100474A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Фрида Насыровна Гильмиярова
Виктория Марковна Радомская
Юлия Дмитриевна Родионова
Оксана Анатольевна Гусякова
Ирина Васильевна Горбачева
Артем Викторович Лямин
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России) filed Critical федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России)
Priority to RU2016100474A priority Critical patent/RU2613366C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2613366C1 publication Critical patent/RU2613366C1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/32—Mycobacterium

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: invention relates to biotechnology. Method involves following. Collected sputum is subjected to fast freezing at temperature from -20 to -25 °C without preserving agents and kept at this temperature from 16 to 24 hours. It is unfrozen at room temperature and treated with 4 % solution of sodium hydroxide containing N-acetyl-L-cysteine during 20-25 minutes. Sodium phosphate buffer 1 M is added and mixture is centrifuged at 3,000–3,100 g for 20–25 minutes. Sample is decanted to separate precipitate. Iron oxide is added to precipitate in final concentration of 0.04 M, while stirring, in sodium phosphate buffer 1 M, pH 6.8 and inoculated on nutrient medium Lowenstein-Jensen.
EFFECT: invention allows reducing time for obtaining positive results of dense nutrient medium.
1 cl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к способу лабораторной диагностики туберкулезной инфекции у носителей, больных легочной формой туберкулеза.The invention relates to medicine, namely to a method for the laboratory diagnosis of tuberculosis infection in carriers of pulmonary tuberculosis.

Известен способ посева биоматериала на плотную питательную среду Финн - II. Образец мокроты без добавления консервирующих средств хранится в холодильнике 48-72 часа. Для деконтаминации биоматериала в него добавляют активированный раствор NALC-NaOH и оставляют после перемешивания на 15 минут. Вносят фосфатный буфер, увеличивая объем образца и центрифугируют. Осадок промывают повторно фосфатным буфером. Условия посева стандартные. Характерно появление роста на 21-28 день; количество положительных результатов посева 23,3%; уровень контаминации 3,9%; отсутствие роста в 72,8% (1).A known method of sowing biomaterial in a dense nutrient medium Finn - II. A sputum sample without preservatives is stored in the refrigerator for 48-72 hours. For decontamination of the biomaterial, an activated NALC-NaOH solution is added to it and left after stirring for 15 minutes. Phosphate buffer is added, increasing the volume of the sample and centrifuged. The precipitate was washed repeatedly with phosphate buffer. Sowing conditions are standard. Characteristic is the appearance of growth at 21-28 days; the number of positive results of sowing 23.3%; level of contamination 3.9%; a lack of growth of 72.8% (1).

Недостатки способа - трудоемкость выполнения, отсроченный рост культуры, исключающий своевременное адресное назначение лечения пациенту с учетом чувствительности к препаратам.The disadvantages of the method is the complexity of the implementation, the delayed growth of the culture, excluding the timely targeted appointment of treatment to the patient, taking into account sensitivity to drugs.

Известен способ посева биоматериала на питательную среду Школьниковой. Хранение биологического материала, деконтаминация образца и процедура посева аналогичны приведенному выше способу. Отличием является состав жидкой питательной среды, включающей широкий спектр минеральных веществ - соли калия, натрия, включая цитрат, магния, железа, аспарагин, глицерин. Характерно появление роста, начиная со дня посева на 18-21 день; количество положительных результатов посева - 24,9%; уровень контаминации - 6,3%; отсутствие роста в 68,8% (2).A known method of sowing biomaterial on a nutrient medium Shkolnikova. The storage of biological material, decontamination of the sample and the seeding procedure are similar to the above method. The difference is the composition of the liquid nutrient medium, including a wide range of minerals - potassium salts, sodium, including citrate, magnesium, iron, asparagine, glycerin. The appearance of growth is characteristic, starting from the day of sowing on 18-21 days; the number of positive results of sowing - 24.9%; the level of contamination is 6.3%; a lack of growth of 68.8% (2).

Недостатками способа являются большой интервал между посевом и появлением роста, высокий процент невысеваемости, высокий уровень контаминации, трудоемкость, сложность состава питательной среды.The disadvantages of the method are the large interval between sowing and the appearance of growth, a high percentage of inoculation, a high level of contamination, the complexity, the complexity of the composition of the nutrient medium.

Известен способ посева биоматериала на жидкую питательную среду MGJT. Питательная среда содержит модифицированную бульонную среду Мидцлбрука, полипептиды казеина, альбумин бычий, каталазу, декстрозу, олеиновую кислоту, полиоксиэтиленстеарат, полимиксин В, триметоприм, амфотерицин, азлоциллин, налидиксоновую кислоту. Методика обработки материала, деконтаминация образца, посев на питательную среду аналогичны приведенным ранее способам. Срок появления роста, начиная со дня посева 14-21 день; количество положительных результатов посева - 30,2%; уровень контаминации - 2,8%; отсутствие роста в 77% (3).A known method of sowing biomaterial on a liquid nutrient medium MGJT. The nutrient medium contains a modified Midzlbrook broth medium, casein polypeptides, bovine albumin, catalase, dextrose, oleic acid, polyoxyethylene stearate, polymyxin B, trimethoprim, amphotericin, azlocillin, nalidixonic acid. The processing technique of the material, decontamination of the sample, sowing on a nutrient medium are similar to the previously described methods. The growth appearance period starting from the day of sowing is 14-21 days; the number of positive results of sowing - 30.2%; level of contamination - 2.8%; lack of growth in 77% (3).

Недостатками способа является низкое количество положительных результатов, высокий процент отсутствия роста, что лежит в основе снижения эффективности лечения больных, так как не позволяет оценить чувствительность к противотуберкулезным препаратам и начать адресное лечение. Кроме того, многокомпонентность среды, наличие импортных добавок создает сложность в ее приготовлении.The disadvantages of the method is the low number of positive results, a high percentage of lack of growth, which underlies the decrease in the effectiveness of treatment of patients, since it does not allow to evaluate the sensitivity to anti-TB drugs and start targeted treatment. In addition, the multicomponent environment, the presence of imported additives creates a difficulty in its preparation.

Известен классический способ посева биоматериала на плотную питательную среду Левенштейна-Йенсена. Хранение биологического материала, деконтаминация образца и процедура посева аналогичны приведенным выше способам. Срок появления роста начиная со дня посева 21-28 дней; количество положительных результатов посева - 15,5%; уровень контаминации - 4,6%; отсутствие роста в 79,9% (4).There is a classic way of sowing biomaterial on a solid nutrient medium Levenshtein-Jensen. The storage of biological material, decontamination of the sample and the seeding procedure are similar to the above methods. The growth appearance period from the day of sowing is 21-28 days; the number of positive results of sowing - 15.5%; the level of contamination is 4.6%; a lack of growth of 79.9% (4).

Недостатками данного способа являются отсроченный рост культуры, что откладывает и осложняет лечение пациента, т.к. через 28-30 дней превентивного лечения, не основанного на оценке чувствительности возбудителя к антибиотикам, развиваются мутации, обуславливающие устойчивость микобактерий к основным противотуберкулезным препаратам. Характерно низкое количество положительных результатов, высокий процент отсутствия роста и контаминации. Данный способ принят за прототипThe disadvantages of this method are the delayed growth of the culture, which delays and complicates the treatment of the patient, because after 28-30 days of preventive treatment, not based on assessing the sensitivity of the pathogen to antibiotics, mutations develop that determine the resistance of mycobacteria to the main anti-tuberculosis drugs. Characterized by a low number of positive results, a high percentage of lack of growth and contamination. This method is adopted as a prototype.

Целью изобретения является разработка культурального способа диагностики инфицированности легочной формой туберкулеза, обеспечивающего сокращение сроков получения положительного результата посева на плотной питательной среде, снижение контаминации сопутствующей микрофлорой.The aim of the invention is to develop a cultural method for the diagnosis of infection with pulmonary tuberculosis, which reduces the time required to obtain a positive result of sowing on a solid nutrient medium, and reduces contamination with the accompanying microflora.

Эта цель достигается тем, что нативную мокроту без применения консервантов подвергают быстрому замораживанию при температуре от -20 до -25°С и хранят при данной температуре от 16 до 24 часов; размораживают при комнатной температуре; после центрифугирования к оставшемуся осадку при перемешивании добавляют оксид железа в конечной концентрации 0,04 М в натрий фосфатном буфере 1 М, рН 6,8.This goal is achieved by the fact that native sputum without the use of preservatives is subjected to rapid freezing at a temperature of from -20 to -25 ° C and stored at this temperature from 16 to 24 hours; thawed at room temperature; after centrifugation, iron oxide is added to the remaining precipitate with stirring at a final concentration of 0.04 M in 1 M sodium phosphate buffer, pH 6.8.

Техническим результатом заявляемого способа культуральной диагностики инфицированности туберкулезом является снижение контаминации мокроты сопутствующей микрофлорой, конкурирующей с микобактериями туберкулеза за нутриенты питательной среды и за счет этого препятствующая росту возбудителя туберкулеза. Кроме этого, сокращается время получения результата на 48-50% по сравнению с прототипом и аналогами за счет ускорения роста микобактерий, что позволяет во время определить чувствительность к антибиотикам и начать раннее адекватное лечение, а также имеет эпидемиологическое значение, так как позволяет ограничить контакты больного.The technical result of the proposed method for the cultural diagnosis of tuberculosis infection is the reduction of sputum contamination with concomitant microflora, which competes with tuberculosis mycobacteria for nutrients in the nutrient medium and, thereby, prevents the growth of the tuberculosis pathogen. In addition, the time to obtain the result is reduced by 48-50% compared with the prototype and analogues due to the acceleration of the growth of mycobacteria, which allows you to determine the sensitivity to antibiotics and start early adequate treatment, and also has epidemiological significance, as it allows you to limit the patient’s contacts .

Технический результат достигается тем, замораживание и оттаивание являются деструктивными факторами, разрушающими хрупкие мембраны случайных граммположительных и граммотрицательных бактерий в мокроте. Микобактерии туберкулеза обладают капсулой, толстой многослойной клеточной стенкой, насыщенной липидами, что обеспечивает их механическую и осмотическую устойчивость и высокую гидрофобность, благодаря чему они не подвергаются разрушению при быстром замораживании и оттаивании при таких условиях. Результатом использования этого приема является получение практически монокультуры возбудителя туберкулеза с контаминацией 2,9-3,0%.The technical result is achieved by the fact that freezing and thawing are destructive factors that destroy the fragile membranes of random gram-positive and gram-negative bacteria in sputum. Mycobacterium tuberculosis have a capsule, a thick multilayer cell wall saturated with lipids, which ensures their mechanical and osmotic stability and high hydrophobicity, so that they do not undergo destruction under rapid freezing and thawing under such conditions. The result of using this technique is to obtain a practically monoculture of the tuberculosis pathogen with contamination of 2.9-3.0%.

Добавление оксида железа в фосфатном буфере 1 М, рН 6,8 в конечной концентрации 0,04 М с последующим посевом на среду Левенштейна-Йенсена обуславливает обильный рост культуры уже на 12-14 день. Такое действие связано с тем, что ионы железа активируют ферменты, образуя комплекс с субстратом и активным центром, могут играть роль мощного акцептора электронов на определенной стадии каталитического цикла. Это лежит в основе участия его в клеточном дыхании, аккумуляции энергии. Железо является одним из основных микроэлементов, необходимых для роста и развития бактериальных клеток. Оно входит в состав гемов, сирогемов, Fe-S кластеров в составе многих оксидоредуктаз и ферментов некоторых других классов, является важнейшим переносчиком электронов. Установлено, что железо активирует рибонуклеотид-редуктазу, катализирующую образование восстановленных рибонуклеотидов, и таким образом участвует в биосинтезе нуклеиновых кислот. Этот элемент активирует деление и пролиферацию клеток, результатом чего является ускоренный обильный рост микобактерий.The addition of iron oxide in 1 M phosphate buffer, pH 6.8 at a final concentration of 0.04 M, followed by plating on Levenshtein-Jensen medium, causes a significant growth of the culture for 12-14 days. This action is due to the fact that iron ions activate enzymes, forming a complex with a substrate and an active center, can play the role of a powerful electron acceptor at a certain stage of the catalytic cycle. This is the basis of his participation in cellular respiration, the accumulation of energy. Iron is one of the main trace elements necessary for the growth and development of bacterial cells. It is a part of gems, syrohemes, Fe-S clusters as a part of many oxidoreductases and enzymes of some other classes, it is the most important electron carrier. It was found that iron activates ribonucleotide reductase, which catalyzes the formation of reduced ribonucleotides, and thus participates in the biosynthesis of nucleic acids. This element activates cell division and proliferation, resulting in accelerated abundant growth of mycobacteria.

Способ культуральной диагностики инфицированности туберкулезом реализуют следующим образом.A method for the cultural diagnosis of tuberculosis infection is implemented as follows.

Собранную мокроту подвергают низкотемпературному воздействию путем быстрого замораживания при t=-20-25°С без применения консервантов и хранят при данной температуре 16-24 часа. Далее размораживают при комнатной температуре, обрабатывают 4% раствором едкого натрия, содержащим N-ацетил-L-цистеин. После 20-25 минутной экспозиции добавляют натрий фосфатный буфер 1 М, рН 6,8, затем центрифугируют при 3000-3100 g в течение 20-25 минут. Декантируют образец, супернатант отбрасывают и к оставшемуся осадку при перемешивании добавляют оксид железа в конечной концентрации 0,04 М в натрий фосфатном буфере рН 6,8, 1 М. Производят посев обработанного материала на классическую плотную среду Левенштейна-Йенсена.The collected sputum is subjected to low-temperature exposure by rapid freezing at t = -20-25 ° C without the use of preservatives and stored at this temperature for 16-24 hours. Then it is thawed at room temperature, treated with 4% sodium hydroxide solution containing N-acetyl-L-cysteine. After a 20-25 minute exposure, add 1 M sodium phosphate buffer, pH 6.8, then centrifuged at 3000-3100 g for 20-25 minutes. The sample is decanted, the supernatant is discarded, and iron oxide at a final concentration of 0.04 M in sodium phosphate buffer, pH 6.8, 1 M is added to the remaining precipitate with stirring. The treated material is inoculated onto a classical dense Levenshtein-Jensen medium.

Способ иллюстрируется клиническим примером.The method is illustrated by a clinical example.

Больная С., 16 лет, учащаяся 10 класса. Направлена в поликлинику туб. диспансера с жалобами на боли в области грудной клетки справа, покашливание, одышку при ходьбе, слабость, субфебрильную температуру.Patient S., 16 years old, student of grade 10. Sent to the clinic tube. dispensary with complaints of pain in the chest on the right, coughing, shortness of breath when walking, weakness, low-grade fever.

Анамнез жизни: в возрасте 15 лет имела кратковременный квартирный контакт с больным активным туберкулезом, ВК-. Вакцинация БЦЖ в родильном доме, ревакцинация в 1 и 8 классе. В семье: родители, брат 2 года.Anamnesis of life: at the age of 15 years had a short-term apartment contact with a patient with active tuberculosis, VK-. BCG vaccination in the maternity hospital, booster vaccination in grades 1 and 8. In the family: parents, brother 2 years.

Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы чистые. На левом плече 3 рубчика 5-6-4 мм. Периферические лимфоузлы не пальпируются. При перкуссии отмечается укорочение легочного звука справа от 4-го ребра, здесь же ослабленное дыхание. Тоны сердца ритмичные, пульс 96 в/мин, АД - 110/70 мм рт.ст. На обзорной рентгенограмме легких гомогенное интенсивное затемнение справа над диафрагмой, синус не дифференцируется. Сердечная тень в пределах нормы.Objectively: the condition is satisfactory, the skin is clean. On the left shoulder there are 3 scars 5-6-4 mm. Peripheral lymph nodes are not palpable. With percussion, shortening of the pulmonary sound to the right of the 4th rib is noted, here weakened breathing. Rhythmic heart sounds, pulse 96 rpm, blood pressure - 110/70 mm Hg On a panoramic radiograph of the lungs, homogeneous intense darkening on the right above the diaphragm, the sinus does not differentiate. Heart shadow within normal limits.

Собрана мокрота, которая обработана по предлагаемому способу. На двенадцатый день на поверхности появились шероховатые вкрапления цвета слоновой кости, прогрессивно увеличивающиеся в диаметре к 3 неделе. Уровень контаминации составил 2,9%. Проведена проба чувствительности возбудителя к антибиотикам, благодаря которым было назначено своевременное эффективное лечение пациентки рифампицином.Sputum collected, which is processed by the proposed method. On the twelfth day, rough spots of ivory appeared on the surface, progressively increasing in diameter by 3 weeks. The level of contamination was 2.9%. A test of the sensitivity of the pathogen to antibiotics was carried out, due to which timely effective treatment of the patient with rifampicin was prescribed.

Способ культуральной диагностики инфицированности туберкулезом может широко использоваться в специальных лабораториях и фтизиатрических стационарах.A method for the cultural diagnosis of tuberculosis infection can be widely used in special laboratories and phthisiatric hospitals.

Источники информацииInformation sources

1. Основы биохимии Ленинджера, том 21 / Под ред. Нельсон Д. Кокс. М.: Издательство Бином, 2014. - 43 с.1. Fundamentals of Biochemistry of Leninger, Volume 21 / Ed. Nelson D. Cox. M .: Binom Publishing House, 2014 .-- 43 p.

2. Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. Книга II / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Костюковой Н.Н., Ивановой С.М. - М.: Издательство Бином, 2010. - 1152 с.2. Guide to medical microbiology. Private medical microbiology and etiological diagnosis of infections. Book II / Coll. authors // Edited by Labinskaya A.S., Kostyukova N.N., Ivanova S.M. - M .: Binom Publishing House, 2010 .-- 1152 p.

3. Современная микробиология. Прокариоты: В 2-х томах. Т. 1. Пер. с англ. / Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. - М: Мир, 2005, - 656 с.3. Modern microbiology. Prokaryotes: In 2 volumes. T. 1. Per. from English / Ed. J. Langelera, G. Drevs, G. Schlegel. - M: Mir, 2005, - 656 p.

4. Приказ №109 от 21 марта 2003 года «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации». Метод приготовления питательных сред изложен в приложении №11, с. 266, с. 268, с. 2704. Order No. 109 of March 21, 2003 “On the improvement of anti-TB measures in the Russian Federation”. The method of preparation of culture media is described in Appendix No. 11, p. 266, p. 268, p. 270

Claims (1)

Способ культуральной диагностики инфицированности туберкулезом, включающий обработку нативной мокроты 4% раствором едкого натрия, содержащим N-ацетил-L-цистеин в течение 20-25 минут, добавление при перемешивании раствора натрий фосфатного буфера 1М, рН 6,8, центрифугирование при 3000-3100 g в течение 20-25 минут, суспендирование осадка в растворе натрий фосфатного буфера рН 6,8, 1М, посев на питательную среду Левенштейна-Йенсена, отличающийся тем, что нативную мокроту без применения консервантов подвергают быстрому замораживанию при температуре от -20 до -25°С и хранят при данной температуре от 16 до 24 часов; размораживают при комнатной температуре; после центрифугирования к оставшемуся осадку при перемешивании добавляют оксид железа в конечной концентрации 0,04 М в натрий фосфатном буфере 1М, рН 6,8.A method for the cultural diagnosis of tuberculosis infection, including treating native sputum with a 4% sodium hydroxide solution containing N-acetyl-L-cysteine for 20-25 minutes, adding 1M sodium phosphate buffer solution with stirring, pH 6.8, centrifugation at 3000-3100 g for 20-25 minutes, suspension of the precipitate in a solution of sodium phosphate buffer pH 6.8, 1M, inoculation on a Levenshtein-Jensen culture medium, characterized in that the native sputum without the use of preservatives is subjected to rapid freezing at a temperature of from -20 to -25 ° C and stored at this temperature from 16 to 24 hours; thawed at room temperature; after centrifugation, iron oxide is added to the remaining precipitate with stirring at a final concentration of 0.04 M in 1M sodium phosphate buffer, pH 6.8.
RU2016100474A 2016-01-11 2016-01-11 Method of culture diagnosis of tuberculosis infection RU2613366C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016100474A RU2613366C1 (en) 2016-01-11 2016-01-11 Method of culture diagnosis of tuberculosis infection

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016100474A RU2613366C1 (en) 2016-01-11 2016-01-11 Method of culture diagnosis of tuberculosis infection

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2613366C1 true RU2613366C1 (en) 2017-03-16

Family

ID=58458464

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016100474A RU2613366C1 (en) 2016-01-11 2016-01-11 Method of culture diagnosis of tuberculosis infection

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2613366C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2069698C1 (en) * 1993-09-07 1996-11-27 Свердловское областное объединение "Фтизиопульмонология" Method of detection of tuberculosis mycobacteria
RU2141665C1 (en) * 1998-04-14 1999-11-20 Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Method of detection of tuberculosis mycobacterium
RU2190220C1 (en) * 2001-04-02 2002-09-27 Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Method for finding tuberculosis micobacteria

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2069698C1 (en) * 1993-09-07 1996-11-27 Свердловское областное объединение "Фтизиопульмонология" Method of detection of tuberculosis mycobacteria
RU2141665C1 (en) * 1998-04-14 1999-11-20 Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Method of detection of tuberculosis mycobacterium
RU2190220C1 (en) * 2001-04-02 2002-09-27 Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Method for finding tuberculosis micobacteria

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С. и др., Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций, 2015,М, БИНОМ, стр. 249-256. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tully et al. A newly discovered mycoplasma in the human urogenital tract
McKinney In vivo veritas: the search for TB drug targets goes live
Mitchison The search for new sterilizing anti-tuberculosis drugs
Oliva et al. Pacemaker lead endocarditis due to multidrug-resistant Corynebacterium striatum detected with sonication of the device
Wang et al. Hydrogen metabolism in Helicobacter pylori plays a role in gastric carcinogenesis through facilitating CagA translocation
Edagiz et al. Empyema caused by Clostridium bifermentans: a case report
Xue et al. Probiotic extracts ameliorate nasal allergy by inducing interleukin‐35‒producing dendritic cells in mice
RU2613366C1 (en) Method of culture diagnosis of tuberculosis infection
Geronimus et al. The relationship between the virulence of tubercle bacilli and the vigor of their oxidative attack upon certain substrates
Barba et al. Aortic valve-derived calcifyng nanoparticles: no evidence of life
Neumann et al. Identifying dormant growth state of mycobacteria by orthogonal analytical approaches on a single cell and ensemble basis
Costescu Strachinaru et al. A case of Escherichia coli and Peptoniphilus species mixed osteomyelitis successfully identified by MALDI TOF-MS with a review of the literature
JP6435462B2 (en) Microbial culture method
US20110256583A1 (en) Method and medium for accelerating target analyte growth in a test sample
Yalew et al. Antibacterial effects of the tellurium compound OTD on E. coli isolates
RU2759413C1 (en) Method for detecting mycobacterium tuberculosis from resected lung tissue
Yang et al. Engineered Bacillus subtilis as oral probiotics to target circulating lactic acid
Batten et al. C. acnes in the joint, is it all just a false positive?
RU2707941C1 (en) Method for modeling the dormant state of mycobacterium tuberculosis in vitro
Fakhri et al. BIOCHEMICAL STUDY OF TAPEWORM POSTGANGESIA INARMATA (DE CHAMBRIER; AL-KALLAK AND MARIAUX, 2003): AN ENDOPARASITE OF CATFISH SILURUS GLANIS.
Parija Actinomycetes
Gadhave et al. Tuberculosis: A dreaded or curable disease–A Review
Tarekegn Factors affecting the frequency of lipid body positive tubercle bacilli in human sputum
Butterly et al. Culture negative mitral valve endocarditis caused by Neisseria gonorrhoeae confirmed by 16S rDNA sequence analysis of resected valvular tissue
Kistaubayeva et al. Use of carbon materials in medicine

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190112