RU2610412C2 - Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria - Google Patents
Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria Download PDFInfo
- Publication number
- RU2610412C2 RU2610412C2 RU2015120539A RU2015120539A RU2610412C2 RU 2610412 C2 RU2610412 C2 RU 2610412C2 RU 2015120539 A RU2015120539 A RU 2015120539A RU 2015120539 A RU2015120539 A RU 2015120539A RU 2610412 C2 RU2610412 C2 RU 2610412C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mycobacteria
- sample
- tuberculosis
- growth
- days
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарии, касается способа первичной идентификации микобактерий комплекса М.tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий и может быть использовано в системе противотуберкулезных мероприятий для дифференциации туберкулеза от других микобактериозов.The invention relates to veterinary medicine, relates to a method for the primary identification of M. tuberculosis complex mycobacteria from non-tuberculous mycobacteria and can be used in an anti-tuberculosis system for differentiating tuberculosis from other mycobacterioses.
В системе мер профилактики и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота большое значение имеет своевременная и эффективная диагностика болезни. С этой целью широко применяется внутрикожная туберкулиновая проба, по результатам которой судят о благополучии хозяйства по туберкулезу. Однако в последние годы в благополучных по туберкулезу стадах, количество которых увеличилось благодаря масштабному проведению противотуберкулезных мероприятий, нередко выявляют положительно реагирующих на туберкулин животных, в органах и тканях которых не обнаруживают характерных для туберкулеза изменений, и бактериологическим исследованием патологического материала возбудителя туберкулеза не выделяют, а выделяют нетуберкулезные микобактерий. По некоторым данным частота выделения культур нетуберкулезных микобактерий составила: из асептически отобранного молока - 20%, из биологического материала от реагирующих на микобактериальные аллергены животных - 19%, из проб объектов внешней среды - 66,6%. Подтверждена идентичность нетуберкулезных микобактерий, выделенных из проб объектов внешней среды и из биологического материала от крупного рогатого скота. Нетуберкулезные микобактерии не только обладают сенсибилизирующей способностью, но и определенной патогенностью - способностью приживаться в организме, вызывать изменения, специфичность которых невозможно определить при патоморфологическом исследовании [1, 2, 3]. Это в значительной мере затрудняет правильную оценку эпизоотической ситуации по туберкулезу в хозяйствах, что приводит к большим экономическим потерям в животноводстве из-за неоправданного убоя сенсибилизированного к туберкулину скота.In the system of measures for the prevention and elimination of cattle tuberculosis, timely and effective diagnosis of the disease is of great importance. For this purpose, an intradermal tuberculin test is widely used, according to the results of which they judge the well-being of the tuberculosis economy. However, in recent years, in tuberculosis-free herds, the number of which has increased due to the large-scale implementation of anti-tuberculosis measures, animals that respond positively to tuberculin are often detected in the organs and tissues of which do not show changes characteristic of tuberculosis, and bacteriological studies of the pathological material of the tuberculosis pathogen are not identified, but secrete non-tuberculous mycobacteria. According to some reports, the frequency of isolation of cultures of non-tuberculous mycobacteria was: 20% from aseptically selected milk, 19% from biological material from animals responding to mycobacterial allergens, and 66.6% from samples of environmental objects. The identity of non-tuberculous mycobacteria isolated from samples of environmental objects and from biological material from cattle was confirmed. Non-tuberculous mycobacteria not only have a sensitizing ability, but also a certain pathogenicity - the ability to take root in the body, cause changes whose specificity cannot be determined by pathomorphological research [1, 2, 3]. This greatly complicates the correct assessment of the epizootic situation of tuberculosis in households, which leads to large economic losses in livestock production due to unjustified slaughter of livestock sensitized to tuberculin.
С учетом напряженности эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота и масштабности проведения профилактических и оздоровительных мероприятий проблема неспецифического реагирования животных на туберкулин для млекопитающих приобретает особое значение.Given the tension of the epizootic situation in cattle tuberculosis and the magnitude of preventive and recreational activities, the problem of non-specific response of animals to tuberculin for mammals is of particular importance.
Основой лабораторной диагностики туберкулеза остается выделение возбудителя на питательных средах. Бактериологический метод позволяет получать чистые культуры микобактерий туберкулеза и проводить их видовую идентификацию, определять биологические и биохимические свойства.The basis of laboratory diagnosis of tuberculosis remains the allocation of the pathogen on nutrient media. The bacteriological method allows you to get pure cultures of mycobacterium tuberculosis and carry out their species identification, determine the biological and biochemical properties.
Обычные микробиологические методики не могут быть использованы при проведении исследований на туберкулез. Это связано с тем, что растут микобактерии туберкулеза очень медленно, а большинство проб клинического материала содержат быстрорастущие гноеродные и гнилостные микроорганизмы, грибы. Их бурный рост на богатых питательных средах мешает развитию микобактерий и не позволяет выделить возбудителя туберкулеза, поэтому перед посевом диагностический материал обязательно подвергают предварительной обработке. Все детергенты и деконтаминанты обладают более или менее выраженным токсическим действием на микобактерии. В результате обработки может гибнуть до 90% микобактерий. Чтобы сохранить достаточную часть микобактериальной популяции, необходимо использовать щадящие методы обработки, позволяющие, с одной стороны, подавить быстрорастущие гноеродные и гнилостные микроорганизмы, а с другой - максимально сохранить жизнеспособность присутствующих в материале микобактерий.Conventional microbiological techniques cannot be used in studies of tuberculosis. This is due to the fact that tuberculosis mycobacteria grow very slowly, and most samples of clinical material contain fast-growing pyogenic and putrefactive microorganisms, fungi. Their rapid growth in rich nutrient media impedes the development of mycobacteria and does not allow isolating the causative agent of tuberculosis, therefore, before sowing, diagnostic material must be pretreated. All detergents and decontaminants have a more or less pronounced toxic effect on mycobacteria. As a result of processing, up to 90% of mycobacteria can die. To preserve a sufficient part of the mycobacterial population, it is necessary to use gentle treatment methods that allow, on the one hand, to suppress rapidly growing pyogenic and putrefactive microorganisms, and on the other, to maximally preserve the viability of mycobacteria present in the material.
В зависимости от материала, степени его гомогенности и загрязненности для предпосевной обработки используют различные деконтаминанты: для мокроты - раствор гидроксида натрия 4%, растворы трехзамещенного фосфорнокислого натрия 10%, бензалкониума хлорида тринатрий фосфата, NALC-NaOH (N-ацетил-L-цистеин-гидроксид натрия) с конечной концентрацией NaOH 1%, для мочи и других жидких материалов - раствор серной кислоты 3%, для загрязненных проб, жиросодержащих материалов - раствор щавелевой кислоты до 5%. Для предпосевной обработки применяют дезин-фектанты, содержащие альдегиды («Лизоформин 3000», «Биодез-Р», «Септодор-форте», «Делаксон») и активный хлор («Хлорантоин», «Биохлор»). Кроме того, в некоторых случаях используют ферменты, поверхностно-активные вещества (детергенты). Применение твина и некоторых других детергентов сопровождается меньшей гибелью микобактериальных клеток (выживают 40-50%), однако использовать их можно только для жидких материалов. Деконтаминация тканесодержащих твердых материалов труднее, поскольку угадать степень дисперсности материала в процессе гомогенизации сложно. Например, обработка биоптатов лимфатических узлов нередко сопровождается повышенной частотой контаминации посторонней флорой. В этом случае можно использовать 1% этоний [4, 5].Depending on the material, the degree of its homogeneity and contamination, various decontaminants are used for presowing treatment: for sputum - a solution of sodium hydroxide 4%, solutions of trisubstituted sodium phosphate 10%, benzalkonium chloride trisodium phosphate, NALC-NaOH (N-acetyl-L-cysteine- sodium hydroxide) with a final concentration of NaOH of 1%, for urine and other liquid materials - a solution of sulfuric acid 3%, for contaminated samples, fat-containing materials - a solution of oxalic acid up to 5%. For presowing treatment, disinfectants containing aldehydes (Lysoformin 3000, Biodez-R, Septodor-forte, Delaxon) and active chlorine (Chlorantoin, Biochlor) are used. In addition, in some cases, enzymes, surfactants (detergents) are used. The use of tween and some other detergents is accompanied by less death of mycobacterial cells (40-50% survive), however, they can only be used for liquid materials. Decontamination of tissue-containing solid materials is more difficult, since it is difficult to predict the degree of dispersion of the material during homogenization. For example, the processing of lymph node biopsies is often accompanied by an increased frequency of contamination by extraneous flora. In this case, 1% ethonium can be used [4, 5].
Микобактерии различных видов имеют ряд морфологических, культурных, биохимических и биологических особенностей, которые позволяют дифференцировать их друг от друга. Практическое значение имеет дифференциация туберкулезных от нетуберкулезных микобактерий, которую осуществляют по следующим характеристикам: скорость роста на плотных питательных средах, пигментообразование, морфология колоний, наличие кислотоустойчивости и температурный оптимум роста. Для дифференциации туберкулезных от нетуберкулезных микобактерий применяют основные биохимические тесты, выявляющие наличие следующих признаков: способности продуцировать никотиновую кислоту (ниациновый тест): нитратредуктазной активности; термостабильной каталазы; роста на среде с натрием салициловокислым (1 мг/мл). В качестве дополнительных можно использовать также тесты роста на среде, содержащей 500 мкг/мл паранитробензойной кислоты или 5% хлорида натрия. В большинстве же случаев на практике для дифференциации М.tuberculosis и М.bovis бывает достаточно следующих тестов: ниацинового, на наличие нитратредуктазы, на наличие пиразинамидазы и регистрации роста на среде, содержащей 2 мкг/мл гидразида тиофен-2-карбоксиловой кислоты. При этом учитывают, что микобактерии комплекса М.tuberculosis характеризуются следующей совокупностью признаков: медленным ростом (более 3 недель); температурой роста в пределах 35-37°C; отсутствием пигментообразования (цвет слоновой кости); выраженной кислотоустойчивой окраской; положительным ниациновым тестом; положительным нитратредуктазным тестом; отсутствием термостабильной каталазы (68°C); отсутствием роста на среде Левенштейна-Йенсена, содержащей 1000 мкг/мл натрия салициловокислого, 500 мкг/мл паранитробензойной кислоты, 5% хлорида натрия; ростом в присутствии 1-5 мкг/мл тиофен-2-карбоксиловой кислот [6].Mycobacteria of various species have a number of morphological, cultural, biochemical and biological features that allow them to differentiate from each other. Differentiation of tuberculosis from non-tuberculous mycobacteria is of practical importance, which is carried out according to the following characteristics: growth rate on solid nutrient media, pigmentation, colony morphology, acid resistance and temperature optimum growth. For the differentiation of tuberculosis from non-tuberculous mycobacteria, basic biochemical tests are used that reveal the presence of the following symptoms: the ability to produce nicotinic acid (niacin test): nitrate reductase activity; thermostable catalase; growth on a medium with sodium salicylic acid (1 mg / ml). Growth tests on media containing 500 μg / ml paranitrobenzoic acid or 5% sodium chloride can also be used as additional tests. In most cases, in practice, for the differentiation of M. tuberculosis and M. bovis, the following tests are sufficient: niacin, for the presence of nitrate reductase, for the presence of pyrazinamidase and growth registration on a medium containing 2 μg / ml thiophene-2-carboxylic acid hydrazide. At the same time, it is taken into account that the mycobacteria of the M. tuberculosis complex are characterized by the following set of signs: slow growth (more than 3 weeks); growth temperature in the range of 35-37 ° C; lack of pigmentation (ivory); pronounced acid-resistant color; positive niacin test; positive nitrate reductase test; lack of thermostable catalase (68 ° C); the lack of growth on Levenshtein-Jensen medium containing 1000 μg / ml sodium salicylic acid, 500 μg / ml paranitrobenzoic acid, 5% sodium chloride; growth in the presence of 1-5 μg / ml thiophene-2-carboxylic acid [6].
Цель изобретения - способ первичной идентификации микобактерий комплекса М.tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий. Технический результат - повышение эффективности бактериологической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота за счет оптимизации условий предпосевной обработки биологического материала.The purpose of the invention is a method for the primary identification of mycobacteria of the M. tuberculosis complex from non-tuberculous mycobacteria. EFFECT: increasing the efficiency of bacteriological diagnosis of cattle tuberculosis by optimizing the conditions for pre-treatment of biological material.
Поставленная цель достигается оптимизацией предпосевной обработки парных образцов пробы патологического материала дезинфекционным средством «Септустин».The goal is achieved by optimizing the pre-sowing treatment of paired samples of samples of pathological material with the disinfectant “Septustin”.
Дезинфекционное средство «Септустин» (изготовитель ООО «Урал-стинол БИО», Россия) рекомендован для дезинфекции объектов ветеринарного надзора. Данный препарат из группы катионных ПАВ содержит в качестве дезинфицирующего вещества катамин АБ, а также спирт изопропиловый, неионогенное ПАВ, гидрокарбонат натрия и бромфеноловый синий [7], обладает широким спектром действия в отношении возбудителей инфекционных болезней бактериальной (включая туберкулез), вирусной и грибковой этиологии.Septutin disinfectant (manufacturer of Ural-Stinol BIO LLC, Russia) is recommended for disinfection of veterinary surveillance facilities. This preparation from the group of cationic surfactants contains catamine AB as a disinfectant, as well as isopropyl alcohol, nonionic surfactant, sodium bicarbonate and bromphenol blue [7], has a wide spectrum of action against pathogens of infectious bacterial diseases (including tuberculosis), viral and fungal etiology .
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
Из пробы патологического материала (лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, селезенка, легкие) готовят парные образцы. В объемном соотношении 1:2 первый образец заливают водным раствором дезинфекционного средства «Септустин» концентрацией 0,5% с экспозицией 30 минут, второй образец - водным раствором дезинфекционного средства «Септустин» концентрацией 5,0% с экспозицией 60 минут при комнатной температуре с последующим посевом отмытого дважды в течение 15 минут стерильным изотоническим раствором хлорида натрия патологического материала на плотные яичные среды, выращиванием при температуре +37°С, при появлении роста в первом образце в течение 7 дней идентифицируют нетуберкулезные микобактерий, а при появлении роста во втором образце после 60 дней культивирования при отсутствии роста в первом образце в течение 7 дней - микобактерий комплекса М. tuberculosis.Paired samples are prepared from a sample of pathological material (lymph nodes, areas of the jejunum and ileum, liver, spleen, lungs). In a volume ratio of 1: 2, the first sample is poured with an aqueous solution of the Septutin disinfectant concentration of 0.5% with an exposure of 30 minutes, the second sample is filled with an aqueous solution of the Septutin disinfectant concentration of 5.0% with an exposure of 60 minutes at room temperature followed by By sowing the pathological material with a sterile isotonic solution of sodium chloride twice in the course of 15 minutes on dense egg media, growing at a temperature of + 37 ° C, if growth appears in the first sample for 7 days, identify non-tuberculous mycobacteria are cultured, and when growth in the second sample appears after 60 days of cultivation, in the absence of growth in the first sample for 7 days, mycobacteria of the M. tuberculosis complex.
Сущность способа поясняется примерами.The essence of the method is illustrated by examples.
Пример 1. Воздействие дезинфекционного средства «Септустин» в зависимости от концентрации и экспозиции определяли на культурах микроорганизмов, полученных из ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Результаты представлены в таблице 1.Example 1. The effect of the disinfectant "Septustine" depending on the concentration and exposure was determined on cultures of microorganisms obtained from GISK them. L.A. Tarasevich. The results are presented in table 1.
Данные, приведенные в таблице 1, подтвердили обоснованность параметров способа, касающихся концентрации и экспозиции: увеличение заявленных значений не влияло на полученные результаты.The data shown in table 1, confirmed the validity of the method parameters related to concentration and exposure: an increase in the declared values did not affect the results.
Пример 2. Из патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, легкие) от белых мышей, зараженных культурой М.bovis (шт. Vallee), готовили парные образцы, которые измельчали в стерильной ступке стерильными ножницами, кусочки заливали растворами дезинфекционного средства «Септустин» концентрацией 0,5% и 5,0% при различной экспозиции в объемном соотношении 1:2 при комнатной температуре. Затем сливали надосадочную жидкость и промывали кусочки патологического материала стерильным изотоническим раствором хлорида натрия дважды в течение 15 минут, хорошо перемешивали и сливали, а кусочки растирали песком стерильным пестиком. Полученную суспензию засевали на питательную среду Левенштейна-Йенсена, посевы инкубировали при +37°C. Учет результатов проводили ежедневно. Результаты представлены в таблице 2.Example 2. From pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular lymph nodes, sections of the jejunum and ileum, liver, lungs) from white mice infected with M. bovis culture (pieces Vallee), paired samples were prepared, which were crushed in a sterile mortar with sterile with scissors, the pieces were poured with solutions of the Septutin disinfectant concentration of 0.5% and 5.0% at various exposures in a volume ratio of 1: 2 at room temperature. Then the supernatant was drained and the pieces of pathological material were washed with a sterile isotonic sodium chloride solution twice for 15 minutes, mixed well and drained, and the pieces were ground with sand with a sterile pestle. The resulting suspension was seeded on a Levenshtein-Jensen nutrient medium, the crops were incubated at + 37 ° C. Analysis was carried out daily. The results are presented in table 2.
Пример 3. Из патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, легкие) от белых мышей, зараженных культурой M.tuberculosis (шт.Academia), готовили парные образцы, которые обрабатывали, как в примере 2. Результаты представлены в таблице 3.Example 3. From pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular lymph nodes, sections of the jejunum and ileum, liver, lungs) from white mice infected with M. tuberculosis culture (Academia pieces), paired samples were prepared, which were processed as in the example 2. The results are presented in table 3.
Пример 4. Из патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, легкие) от белых мышей, зараженных культурой М.avium (шт. ГИСК), готовили парные образцы, которые обрабатывали, как в примере 2. Результаты представлены в таблице 4.Example 4. From pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular lymph nodes, areas of the jejunum and ileum, liver, lungs) from white mice infected with M.avium culture (pieces of GISC), paired samples were prepared, which were processed as in the example 2. The results are presented in table 4.
Пример 5. Из пробы патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, легкие) от белых мышей, зараженных культурой М.smegmatis, которые обрабатывали, как в примере 2. Результаты представлены в таблице 5.Example 5. From a sample of pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular lymph nodes, sections of the jejunum and ileum, liver, lungs) from white mice infected with M. smegmatis culture, which were processed as in example 2. The results are presented in table 5.
Пример 6. Из пробы патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, легкие) от белых мышей, зараженных культурой М.scrofulaceum, которые обрабатывали, как в примере 2. Результаты представлены в таблице 6.Example 6. From a sample of pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular lymph nodes, sections of the jejunum and ileum, liver, lungs) from white mice infected with M. scrofulaceum culture, which were processed as in example 2. The results are presented in table 6.
Пример 7. Провели культуральное исследование патологического материала (кусочки органов без характерных для туберкулеза изменений) от коровы с положительной реакцией на ППД - туберкулин для млекопитающих из хозяйства, благополучного по туберкулезу, в соответствии с заявляемым способом. Через 7 дней выращивания в первом образце выросли мелкие колонии белого цвета, которые окрашивали по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам идентифицировали как нетуберкулезные микобактерии, что подтверждали исследованием жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (по соотношению на хроматограммах эфиров миколовых кислот с числом атомов углерода больше 20, пик С24:0 больше пика С22:0, пик С26:0 отсутствовал) микобактерий идентифицировали как М.scrofulaceum. В течение 60 дней выращивания во втором образце роста не наблюдали.Example 7. Conducted a cultural study of pathological material (pieces of organs without changes characteristic of tuberculosis) from a cow with a positive reaction to PPD - tuberculin for mammals from a tuberculosis-free farm in accordance with the claimed method. After 7 days of cultivation, small white colonies grew in the first sample, which were stained by Zil-Nielsen and identified by morphological characteristics as non-tuberculous mycobacteria, which was confirmed by studying the fatty acid spectrum of cells by gas-liquid chromatography. By chemotaxonomic characteristics (the ratio of the chromatograms mycolic acid esters with carbon numbers greater than 20, the peak of C 24: 0 more peak C 22: 0, the peak C 26: 0 absent) identified as M.scrofulaceum mycobacteria. Within 60 days of growth, no growth was observed in the second sample.
Пример 8. Провели культуральное исследование патологического материала (кусочки органов с характерными для туберкулеза изменениями) от коровы с положительной реакцией на ППД - туберкулин для млекопитающих из хозяйства, благополучного по туберкулезу, заявляемым способом. В первом образце в течение первых 7 дней выращивания рост колоний отсутствовал. Во втором образце через 60 дней выросли мелкие колонии белого цвета, которые окрашивали по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам идентифицировали как микобактерий комплекса M.tuberculosis, что подтверждали исследованием жирнокислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (по соотношению на хроматограммах эфиров миколовых кислот с числом атомов углерода 22, 24, 15, 26) микобактерий идентифицировали как М.tuberculosisbovis.Example 8. Conducted a cultural study of pathological material (pieces of organs with changes characteristic of tuberculosis) from a cow with a positive reaction to PPD - tuberculin for mammals from a tuberculosis-free farm using the claimed method. In the first sample, colony growth was absent during the first 7 days of cultivation. In the second sample, after 60 days, small white colonies grew, which were stained by Zil-Nielsen and identified by morphological characteristics as mycobacteria of the M. tuberculosis complex, which was confirmed by gas-liquid chromatography by studying the fatty acid spectrum of cells. According to chemotaxonomic characteristics (according to the ratio in the chromatograms of mycolic acid esters with the number of carbon atoms 22, 24, 15, 26), mycobacteria were identified as M. tuberculosisbovis.
Пример 9. Провели культуральное исследование патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные, лимфатические узлы, печень, легкие) от коровы с положительной реакцией на ППД - туберкулин для млекопитающих заявляемым способом. Через 7 дней в первой пробе выросли слизистые блестящие колонии желтого цвета. По результатам окраски по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам их идентифицировали как нетуберкулезные микобактерии, что подтверждали исследованием жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (четко выражены пики кислот с 17 и 19 атомами углерода и ненасыщенных жирных кислот с числом атомов углерода больше 20, преобладала бегеновая кислота С22:0 пик С26:0 - отсутствует) микобактерий идентифицировали как M. vaccae. В течение 60 дней во втором образце рост отсутствовал.Example 9. Conducted a cultural study of pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular, lymph nodes, liver, lungs) from a cow with a positive reaction to PPD - tuberculin for mammals by the claimed method. After 7 days, mucous shiny yellow colonies grew in the first sample. According to Ziehl-Nielsen staining and morphological characteristics, they were identified as non-tuberculous mycobacteria, which was confirmed by studying the fatty acid spectrum of cells by gas-liquid chromatography. According to chemotaxonomic characteristics (peaks of acids with 17 and 19 carbon atoms and unsaturated fatty acids with more than 20 carbon atoms are clearly pronounced, behenic acid C 22: 0 prevailed ; C 26: 0 peak is absent) mycobacteria were identified as M. vaccae. For 60 days, growth was absent in the second sample.
Пример 10. Проводили первичную идентификацию микобактерий комплекса М. tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий в пробах патологического материала (подчелюстные, заглоточные, брыжеечные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень и селезенка) от павших и убитых животных с изменениями, характерными для туберкулеза, заявляемым способом с подтверждением полученных результатов анализом жирно-кислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Результаты представлены в таблице 7.Example 10. The primary identification of mycobacteria of the M. tuberculosis complex from non-tuberculous mycobacteria in samples of pathological material (submandibular, pharyngeal, mesenteric lymph nodes, portions of the jejunum and ileum, liver and spleen) from fallen and killed animals with changes characteristic of tuberculosis, was claimed method with confirmation of the results by analysis of the fatty acid spectrum of cells by gas-liquid chromatography (GLC). The results are presented in table 7.
Как видно из таблицы 7, результаты первичной дифференциации микобактерий комплекса М. tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий заявляемым способом полностью совпали с результатами газохроматографических исследований, что указывает на специфичность способа.As can be seen from table 7, the results of the primary differentiation of mycobacteria of the M. tuberculosis complex from non-tuberculous mycobacteria by the claimed method completely coincided with the results of gas chromatographic studies, which indicates the specificity of the method.
Проведенные исследования показали, что заявляемый способ первичной идентификации микобактерий комплекса М. tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий позволяет выявлять эпидемические штаммы микобактерий с различной степенью вирулентности, эффективен при исследовании для выяснения причин сенсибилизации животных к туберкулину, соответствует требованиям при работе с патологическим материалом, безопасен и прост в осуществлении.Studies have shown that the claimed method for the primary identification of mycobacteria of the M. tuberculosis complex from non-tuberculous mycobacteria allows the identification of epidemic strains of mycobacteria with varying degrees of virulence, is effective in the study to determine the causes of sensitization of animals to tuberculin, meets the requirements when working with pathological material, is safe and easy to implementation.
Источники информацииInformation sources
1. Толстенко Н.Г. Патогенные свойства некоторых видов микобактерий, выделенных от животных и объектов внешней среды: автореф. дис… канд. вет. наук: 16.00.03 - М., 2006. - 27 с. 1. Tolstenko N.G. Pathogenic properties of certain types of mycobacteria isolated from animals and environmental objects: abstract. dis ... cand. vet. Sciences: 16.00.03 - M., 2006. - 27 p.
2. Рабухин Е.А. Микобактериоз, вызываемый М. fortuitum II Проблемы туберкулеза. - 1972. - №10. - С. 58-60.2. Rabukhin EA Mycobacteriosis caused by M. fortuitum II. Problems of tuberculosis. - 1972. - No. 10. - S. 58-60.
3. Колоскова Э. Л. Патоморфологические изменения у животных, зараженными разными видами микобактерий: автореф. дис… канд. вет. наук: 16.00.02 - М., 2007. - 22 с. 3. Koloskova E. L. Pathomorphological changes in animals infected with different types of mycobacteria: abstract. dis ... cand. vet. Sciences: 16.00.02 - M., 2007. - 22 p.
4. Режим доступа http://www. humbio.ru.4. Access mode http: // www. humbio.ru.
5. Режим доступа http://www. nbuv.ua.5. Access mode http: // www. nbuv.ua.
6. Майорова А.А. Идентификация нетуберкулезных микобактерий и выбор оптимальной комбинации методов для их видовой дифференциации: автореф. дис… канд. биолог. наук: 03.00.07 - М., 2007. - 26 с. 6. Mayorova A.A. Identification of non-tuberculous mycobacteria and the selection of the optimal combination of methods for their species differentiation: abstract. dis ... cand. biologist. Sciences: 03.00.07 - M., 2007. - 26 p.
7. Наставление по применению препарата «Септустин» для дезинфекции объектов ветнадзора. Уралстинол. - БИО. – 2002.7. Manual on the use of the drug "Septustine" for the disinfection of objects of veterinary surveillance. Uralstinol. - BIO. - 2002.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015120539A RU2610412C2 (en) | 2015-05-29 | 2015-05-29 | Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015120539A RU2610412C2 (en) | 2015-05-29 | 2015-05-29 | Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015120539A RU2015120539A (en) | 2016-12-20 |
| RU2610412C2 true RU2610412C2 (en) | 2017-02-10 |
Family
ID=57759192
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015120539A RU2610412C2 (en) | 2015-05-29 | 2015-05-29 | Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2610412C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711954C1 (en) * | 2019-05-14 | 2020-01-23 | Артем Викторович Лямин | Method for preliminary identification of non-tuberculosis mycobacteria using a universal chromogenic medium |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2321636C1 (en) * | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces |
| RU2402781C1 (en) * | 2009-06-23 | 2010-10-27 | Государственное научное учреждение "Прикаспийский зональный НИВИ" Россельхозакадемии | Method of pre-inoculation processing of samples collected from environment objects for release of microbacteria |
| RU2428484C2 (en) * | 2009-06-08 | 2011-09-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Method of specific differentiation of tuberculosis mycobacteria |
-
2015
- 2015-05-29 RU RU2015120539A patent/RU2610412C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2321636C1 (en) * | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces |
| RU2428484C2 (en) * | 2009-06-08 | 2011-09-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук | Method of specific differentiation of tuberculosis mycobacteria |
| RU2402781C1 (en) * | 2009-06-23 | 2010-10-27 | Государственное научное учреждение "Прикаспийский зональный НИВИ" Россельхозакадемии | Method of pre-inoculation processing of samples collected from environment objects for release of microbacteria |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЛИСКОВА Е.А. И ДР. Антимикробная активность Септустина in vitro в отношении микроорганизмов III и IV групп патогенности // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. 2004, N2, с. 65-66. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711954C1 (en) * | 2019-05-14 | 2020-01-23 | Артем Викторович Лямин | Method for preliminary identification of non-tuberculosis mycobacteria using a universal chromogenic medium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2015120539A (en) | 2016-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Whittington | Cultivation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. | |
| Corner et al. | Primary isolation of Mycobacterium bovis from bovine tissues: conditions for maximising the number of positive cultures | |
| Islam et al. | Isolation and identification of Escherichia coli and Salmonella from poultry litter and feed | |
| Getahun et al. | Bovine mastitis and antibiotic resistance patterns in Selalle smallholder dairy farms, central Ethiopia | |
| EP0876504B1 (en) | Method to detect bacteria | |
| Mendez et al. | The use of a CDC biofilm reactor to grow multi-strain Listeria monocytogenes biofilm | |
| US9290789B2 (en) | Method for measuring cells, and reagent for cell measurement | |
| Kuria | Diseases caused by Bacteria in cattle: tuberculosis | |
| US6461833B1 (en) | Method to detect bacteria | |
| RU2610412C2 (en) | Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria | |
| JP2019103491A (en) | Isolation method of hay bacillus, hay bacillus thereof, microbe formulation including hay bacillus, and medium set for isolation of hay bacillus | |
| RU2428484C2 (en) | Method of specific differentiation of tuberculosis mycobacteria | |
| RU2542460C1 (en) | Method for pre-inoculation processing of pathological material for mycobacterial recovery | |
| Santona et al. | Metagenomic detection of eumycetoma causative agents from households of patients residing in two Sudanese endemic villages in White Nile State | |
| RU2559523C1 (en) | Method of pre-seeding treatment of pathological material for extraction of nocardioformal actinomycetes | |
| RU2321636C1 (en) | Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces | |
| Adetunji et al. | Biofilms formed by Mycobacterium tuberculosis on cement, ceramic, and stainless steel surfaces and their controls | |
| RU2288953C1 (en) | Method for differentiating allergic responses for bcg-tuberculin for mammals | |
| Zavgorodniy et al. | Isolation of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis from zoo animals | |
| Sen et al. | Impact of bovine tuberculosis on public health hazards from frozen bovine meat consumption in world | |
| Zavgorodnii et al. | Etiological factors in triggering non-specific allergic reactions to tuberculin in cattle | |
| RU2619220C1 (en) | Method for mycobacteria detection from surfaces | |
| RU2364629C1 (en) | Method for determination of efficiency of disinfectants used in tb facilities | |
| Bolgova et al. | Optimal recultivation conditions of Candida albicans staying in non-culturable state | |
| UA26856U (en) | Method for determination of disinfection effectiveness at tuberculosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170530 |