RU2321636C1 - Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces - Google Patents

Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces Download PDF

Info

Publication number
RU2321636C1
RU2321636C1 RU2006135015/13A RU2006135015A RU2321636C1 RU 2321636 C1 RU2321636 C1 RU 2321636C1 RU 2006135015/13 A RU2006135015/13 A RU 2006135015/13A RU 2006135015 A RU2006135015 A RU 2006135015A RU 2321636 C1 RU2321636 C1 RU 2321636C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sample
drug
tuberculin
pathological material
solution
Prior art date
Application number
RU2006135015/13A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Зо Глебовна Воробьева (RU)
Зоя Глебовна Воробьева
Алла Леоновна Лазовска (RU)
Алла Леоновна Лазовская
Клавди Николаевна Слинина (RU)
Клавдия Николаевна Слинина
ну Андрей Иванович Мунт (RU)
Андрей Иванович Мунтяну
Original Assignee
Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук filed Critical Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук
Priority to RU2006135015/13A priority Critical patent/RU2321636C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2321636C1 publication Critical patent/RU2321636C1/en

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology, veterinary microbiology.
SUBSTANCE: method involves preparing pair samples from the pathological material sample. The first sample is poured with 0.5%, and the second sample - with 2.0% aqueous solution of the preparation "Leseptik" taken in the volume ratio 1:2 followed by their exposition for 3 h and 15 min, respectively, at room temperature. Then the "Leseptik" preparation solution is poured off, washed out twice with isotonic sodium chloride solution, and suspension is prepared that is inoculated on solid egg-containing media and grown at temperature +37°C. Invention provides accelerated primary indication and differentiation of positive reactions for PPD-tuberculin for mammals caused by mycobacterium tuberculosis from positive reactions for PPD-tuberculin for mammals caused by corynebacteria, rhodococci and nontuberculosis mycobacteria.
EFFECT: improved method of detection.
6 ex

Description

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, касается способа бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов и может быть использовано при диагностике туберкулеза.The invention relates to veterinary microbiology, relates to a method for bacteriological detection of nocardioform actinomycetes and can be used in the diagnosis of tuberculosis.

Филогенетическая группа, обозначенная как «нокардиоформные актиномицеты», включает роды Corynebacterium, Mycobacterium, Caseobacter, Nocardia, Rhodococcus. Все эти микроорганизмы имеют общие антигены, обусловливающие сенсибилизацию макроорганизма и повышение чувствительности к туберкулину, что является причиной ложно положительных туберкулиновых реакций. Так, по некоторым данным, положительные туберкулиновые реакции могут регистрироваться в более чем 80% хозяйств, причем в 13,3% хозяйств от крупного рогатого скота выделяли возбудителей туберкулеза, в 54,3% хозяйств - атипичные микобактерии и в 32,3% хозяйств природа аллергии к туберкулину не установлена [1]. Положительные туберкулиновые реакции у сенсибилизированных к актиномицетам животных и в большинстве случаев наличие туберкулезоподобных изменений при патологоанатомических исследованиях приводят к неоправданному убою животных. Аллергический метод диагностики туберкулеза подтверждается бактериологическими исследованиями, преимущественно выделением культуры возбудителя из патологического материала, контаминированного сопутствующей микрофлорой, обильный рост которой на полноценных, богатых белком, углеводом, минеральными веществами и стимуляторами роста питательных средах сдерживает рост микобактерий и затрудняет их выделение.The phylogenetic group, designated as “nocardioform actinomycetes”, includes the genera Corynebacterium, Mycobacterium, Caseobacter, Nocardia, Rhodococcus. All these microorganisms have common antigens that cause sensitization of the macroorganism and increase sensitivity to tuberculin, which is the cause of false positive tuberculin reactions. Thus, according to some reports, positive tuberculin reactions can be recorded in more than 80% of households, with tuberculosis pathogens being isolated from cattle in 13.3% of households, atypical mycobacteria in 54.3% of households, and nature in 32.3% of households. allergy to tuberculin has not been established [1]. Positive tuberculin reactions in animals sensitized to actinomycetes and in most cases the presence of tuberculosis-like changes in pathological studies lead to unjustified slaughter of animals. The allergic method for the diagnosis of tuberculosis is confirmed by bacteriological studies, mainly isolating the culture of the pathogen from pathological material contaminated with concomitant microflora, the abundant growth of which on high-grade, protein, carbohydrate, mineral substances and growth stimulants nutrient media inhibits the growth of mycobacteria and makes it difficult to isolate them.

Известны способы бактериологического выявления микобактерий, включающие предпосевную обработку патологического материала для подавления сопутствующей микрофлоры и высвобождения кислотоустойчивых микроорганизмов из органических субстратов с применением химических веществ, бактерицидно действующих на неспецифическую микрофлору и щадящих микобактерий туберкулеза, в различных концентрациях при разной экспозиции, в частности, 3-20%-ных растворов серной кислоты, 3-15%-ных растворов соляной кислоты, 2-4%-ных растворов едкого натра,3-15%-ных растворов щавелевой кислоты, 10%-ного раствора двузамещенного фосфорнокислого натрия, 0,14%-ного раствора хлоргексидинглюконикума [2]. Общим недостатком известных способов является недостаточная эффективность при сложности осуществления из-за необходимости четкой временной экспозиции и тщательной отмывки посевного субстрата. Используемые в медицинской практике для обработки мокроты такие детергенты, как двузамещенный фосфорнокислый натрий, трехзамещенный фосфорнокислый натрий и хлоргексидинглюконикум, при воздействии на патологический материал (лимфатические узлы) в течение 30 минут, 1, 2 часов и 1 суток не обеспечивали подавление сопутствующей микрофлоры, а в 96% случаев посевы были загрязнены банальной микрофлорой. При обработке 3%-ными растворами кислот и 20%-ным раствором едкого натра процент загрязнения составлял от 50 до 80. После обработки 5%-ным раствором щавелевой кислоты без последующего промывания физиологическим раствором посев можно проводить только на среду Гельберга. Кроме того, в 25% случаев при использовании среды Гельберга и в 100% случаев при использовании среды Левенштейна-Йенсена установлено снижение рН, о чем свидетельствовало изменение цвета среды. Процент загрязнения 33. При обработке патологического материала по методу А.П.Аликаевой растворами кислот более высокой концентрации (10-15%) после однократного промывания (в течение 5 минут физиологическим раствором) в 70% случаев отмечено снижение рН среды, и посевы уничтожались. При использовании же щелочей из-за сильного разбухания волокон тканей затруднялись отбор материала и распределение его по среде при посеве [3]. При использовании 10%-ного раствора трехзамещенного фосфорнокислого натрия посевной осадок патологического материала содержит мелкую или крупную дисперсную взвесь кристаллов препарата вследствие его высокой концентрации, что делает посевной осадок мутным, крошковатым и затрудняет визуальную оценку посевов на плотных питательных средах.Known methods for bacteriological detection of mycobacteria, including pre-sowing treatment of pathological material to suppress concomitant microflora and release acid-resistant microorganisms from organic substrates using chemicals that bactericidal to non-specific microflora and sparing mycobacterium tuberculosis, in different concentrations at different exposures, in particular, 3-20 % solutions of sulfuric acid, 3-15% solutions of hydrochloric acid, 2-4% solutions of caustic soda, 3-15% ra creates oxalic acid, 10% solution of disodium phosphate, 0.14% sodium hlorgeksidinglyukonikuma solution [2]. A common disadvantage of the known methods is the lack of effectiveness with the difficulty of implementation due to the need for a clear temporary exposure and thorough washing of the seed substrate. Detergents used in medical practice for the treatment of sputum, such as disubstituted sodium phosphate, trisubstituted sodium phosphate and chlorhexidine gluconicum, when exposed to pathological material (lymph nodes) for 30 minutes, 1, 2 hours and 1 day, did not suppress the associated microflora, and in 96% of cases of crops were contaminated with banal microflora. When treated with 3% acid solutions and 20% sodium hydroxide solution, the percentage of contamination ranged from 50 to 80. After treatment with a 5% oxalic acid solution without subsequent washing with physiological saline, inoculation can only be carried out on Gelberg medium. In addition, in 25% of cases when using Gelberg medium and in 100% of cases when using Levenshtein-Jensen medium, a decrease in pH was established, as evidenced by a change in the color of the medium. Percentage of pollution 33. When processing pathological material according to the method of A.P. Alikayeva with solutions of acids of higher concentration (10-15%) after a single wash (for 5 minutes with physiological saline), in 70% of cases a decrease in pH was noted, and the crops were destroyed. When using alkalis, due to the strong swelling of the tissue fibers, it was difficult to select the material and distribute it over the medium during sowing [3]. When using a 10% solution of trisubstituted sodium phosphate, the inoculum of the pathological material contains a small or large dispersed suspension of the crystals of the preparation due to its high concentration, which makes the inoculum cloudy, crumbly and makes visual assessment of crops in dense nutrient media difficult.

Предпосевная обработка патологического материала с применением известных детергентов уничтожает не только сопутствующую микрофлору, но и слабокислотоустойчивые микобактерии, коринебактерии, родококки и нокардии, что снижает эффективность их выделения.Presowing treatment of pathological material using well-known detergents destroys not only associated microflora, but also weakly acid-resistant mycobacteria, corynebacteria, rhodococci and nocardia, which reduces the efficiency of their isolation.

В качестве предпочтительного аналога нами рассматривается способ выявления микобактерии туберкулеза, включающий предпосевную обработку патологического материала водным раствором препарата «Лесептик» в концентрации 0,1% смешиванием в равных объемах, выдержку в течение 18-24 часов при комнатной температуре, посев на плотную питательную среду и бактериоскопию посевного остатка [4]. Известный способ позволяет выявлять микобактерии, утратившие способность расти на искусственных питательных средах.As a preferred analogue, we consider a method for detecting mycobacterium tuberculosis, including pre-sowing treatment of pathological material with an aqueous solution of the drug "Leptic" in a concentration of 0.1% by mixing in equal volumes, exposure for 18-24 hours at room temperature, inoculation on a solid nutrient medium and bacterioscopy of the seed residue [4]. The known method allows the detection of mycobacteria that have lost the ability to grow on artificial nutrient media.

Цель изобретения - эффективный и простой в осуществлении способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов в патологическом материале от животных с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих.The purpose of the invention is an effective and easy to implement method of bacteriological detection of nocardioform actinomycetes in pathological material from animals with a positive reaction to PPD-tuberculin for mammals.

Поставленная цель достигается предпосевной обработкой парных образцов пробы патологического материала препаратом «Лесептик» различной концентрацией при разной экспозиции.The goal is achieved by pre-sowing treatment of paired samples of samples of pathological material with the preparation "Leseptic" of various concentrations at different exposures.

Сущность способа поясняется примерами.The essence of the method is illustrated by examples.

Пример 1. Для предпосевной обработки патологического материала готовили 0,5%- и 2,0%-ные водные растворы препарата «Лесептик» смешиванием 5 и 20 мл концентрата с дистиллированной водой до 1000 мл. Из пробы патологического материала (брыжеечные, заглоточные, подчелюстные лимфатические узлы, участки тощей и подвздошной кишок, печень, легкие) готовили парные образцы, которые разрезали на кусочки размером 0,5×0,5 см, заливали первый образец 0,5%-ным, второй образец - 2,0%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в объемном соотношении 1:2 с экспозицией 3 часа и 15 минут соответственно при комнатной температуре, после чего раствор препарата «Лесептик» сливали, образцы отмывали дважды изотоническим раствором хлорида натрия, тщательно растирали в ступке, полученную суспензию засевали на плотные яичные среды и выращивали в термостате при температуре +37°С.Example 1. For presowing treatment of pathological material prepared 0.5% - and 2.0% aqueous solutions of the drug "Leptic" mixing 5 and 20 ml of concentrate with distilled water up to 1000 ml. Paired samples were prepared from a sample of pathological material (mesenteric, pharyngeal, submandibular lymph nodes, areas of the jejunum and ileum, liver, lungs), which were cut into pieces 0.5 × 0.5 cm in size, and the first sample was filled with 0.5% the second sample - a 2.0% aqueous solution of the drug "Leceptic" in a volume ratio of 1: 2 with an exposure of 3 hours and 15 minutes, respectively, at room temperature, after which the solution of the drug "Leceptic" was drained, the samples were washed twice with isotonic sodium chloride solution thoroughly rubbed in a mortar, the resulting suspension was seeded on dense egg media and grown in an incubator at a temperature of + 37 ° C.

Пример 2. Для обоснования заявленных параметров способа изучали бактерицидное действие различных концентраций препарата «Лесептик» при разных экспозициях на микроорганизмы 1, 2 и 3 групп устойчивости in vitro. Использовали культуры микроорганизмов, полученные из ГИСК им. Л.А.Тарасовича - Всероссийской коллекции микроорганизмов, и следующие среды: Эндо, Сабуро, Чапека-Докса, висмут-сульфитный агар, солевой агар, Левенштейна-Йенсена. Результаты представлены в таблице 1.Example 2. To justify the claimed parameters of the method studied the bactericidal effect of various concentrations of the drug "Leptic" with different exposures to microorganisms 1, 2 and 3 resistance groups in vitro. Used cultures of microorganisms obtained from GISK them. L.A. Tarasovich - The All-Russian Collection of Microorganisms, and the following environments: Endo, Saburo, Chapek-Doks, bismuth-sulfite agar, salt agar, Levenshtein-Jensen. The results are presented in table 1.

Таблица 1.Table 1. Бактерицидное действие препарата «Лесептик» в зависимости от концентрации и экспозицииThe bactericidal effect of the drug "Leceptic" depending on the concentration and exposure КультураCulture Концентрация препарата «Лесептик» (%), экспозиция (часов)The concentration of the drug "Leceptic" (%), exposure (hours) 0,30.3 0,50.5 1,01,0 2,02.0 1one 22 33 1one 22 33 0,40.4 0,20.2 1,01,0 0,40.4 0,20.2 1,01,0 Prot. mirabilis, №237Prot. mirabilis, No. 237 ++ ++ ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- -- Shig. flexneri, №170Shig. flexneri, No. 170 ++ ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- -- -- Е.coli, №17E. coli, No. 17 ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- Staph. aureus, №209Staph. aureus, no.209 ++ ++ ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- -- Enterobac. faecalis, №4Enterobac. faecalis, No. 4 ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- Salm. tm., №18Salm. tm., No.18 ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- M.aviumM.avium ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ M.bovis (Vallee)M.bovis (Vallee) ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ M.tuberculosis (H37Ra)M.tuberculosis (H 37 Ra) ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ Coryn. pseudotuberculosis, №2Coryn. pseudotuberculosis, No. 2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- Coryn. pseudotuberculosis, №3Coryn. pseudotuberculosis, No. 3 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- Rhodococcus equiRhodococcus equi ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- -- -- Примечание: (+) - рост; (-) - отсутствие ростаNote: (+) - growth; (-) - lack of growth

Пример 3. Для подтверждения осуществимости способа из пробы патологического материала (кусочки органов с характерными для туберкулеза изменениями) от положительно реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих животных в хозяйстве, благополучном по туберкулезу, готовили парные образцы, которые обрабатывали, как в примере 1, и помещали в термостат. Через 4-7 дней выращивания при температуре +37°С в образце, обработанном 0,5%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 3 часов, вырастали крупные белые или желтые слизистые колонии без поверхностного мицелия. При окраске по Цилю-Нильсену в мазках из колоний выявили два типа клеток. Первый тип клеток - некислотоустойчивые палочки, овальные с темно-вишневыми или темно-синими многочисленными гранулами внутри клетки. При окраске по Романовскому-Гимза вокруг клеток обнаруживали розовую капсулу. По отсутствию кислотоустойчивости и морфологическим признакам (форма клеток, наличие зерен волютина, морфология колоний) клетки идентифицировали как коринебактерии. На среде с теллуритом калия вырастали слизистые черные колонии. Идентификацию подтверждали исследованием жирнокислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии (отсутствие на хроматограммах эфиров жирных кислот туберкулостеариновой кислоты, значительное содержание олеиновой кислоты (С18:1), отсутствие высших жирных кислот и числом атомов больше 20). Второй тип клеток - крупные полиморфные кислотоустойчивые и некислотоустойчивые палочки и кокки с темно-красными зернами внутри клеток, которые идентифицировали методом газожидкостной хроматографии (выраженный пик туберкулостеариновой кислоты, низкомолекулярные эфиры жирных кислот с числом углеродных атомов от 12 до 20 и отсутствие высокомолекулярных миколовых кислот) как родококки. В образце, обработанном 2%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 15 минут, рост отсутствовал.Example 3. To confirm the feasibility of the method from a sample of pathological material (pieces of organs with changes characteristic of tuberculosis) from positively reacting to PPD-tuberculin for mammals in a tuberculosis-free farm, paired samples were prepared that were processed as in Example 1, and placed in a thermostat. After 4-7 days of cultivation at a temperature of + 37 ° C, large white or yellow mucous colonies without surface mycelium grew in a sample treated with a 0.5% aqueous solution of the drug "Leptic" for 3 hours. When stained according to Ziehl-Nielsen in smears from the colonies revealed two types of cells. The first type of cells is non-acid-resistant rods, oval with dark cherry or dark blue numerous granules inside the cell. When stained according to Romanowski-Giemsa, a pink capsule was found around the cells. By the absence of acid resistance and morphological characteristics (cell shape, the presence of volutin grains, colony morphology), the cells were identified as corynebacteria. On the medium with potassium tellurite, mucous black colonies grew. Identification was confirmed by studying the fatty acid spectrum of cells by gas-liquid chromatography (the absence of tuberculostearic acid fatty acid esters in the chromatograms, the significant content of oleic acid (C 18: 1 ), the absence of higher fatty acids and the number of atoms is more than 20). The second type of cells is large polymorphic acid-resistant and non-acid-resistant bacilli and cocci with dark red grains inside the cells that were identified by gas-liquid chromatography (pronounced peak of tuberculostearic acid, low molecular weight fatty acid esters with carbon atoms from 12 to 20 and the absence of high molecular weight mycolic acids) as rhodococcus. In the sample treated with a 2% aqueous solution of the drug "Leptic" for 15 minutes, there was no growth.

Пример 4. Для подтверждения осуществимости из пробы патологического материала (печень, легкие) от положительно реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих животных в хозяйстве, благополучном по туберкулезу, готовили парные образцы, которые обрабатывали, как в примере 1, и помещали в термостат. Через 5-8 дней выращивания при температуре +37°С в образце, обработанном 0,5%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 3 часов, вырастали пигментированные мелкие колонии S- или R-формы, содержавшие кислотоустойчивые полиморфные зернистые палочки и зерна, идентифицированные методом газожидкостной хроматографии (хорошо выраженный пик туберкулостеариновой кислоты и высшие миколовые кислоты) как быстрорастущие микобактерии. В образце, обработанном 2%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 15 минут, рост отсутствовал.Example 4. To confirm the feasibility of a sample of pathological material (liver, lungs) from positively reacting to PPD-tuberculin for mammals in a tuberculosis-free farm, paired samples were prepared, which were processed as in example 1 and placed in a thermostat. After 5-8 days of cultivation at a temperature of + 37 ° C in a sample treated with a 0.5% aqueous solution of the drug "Leptic" for 3 hours, pigmented small colonies of S- or R-form grew, containing acid-resistant polymorphic granular bacilli and grains identified by gas chromatography (a pronounced peak of tuberculostearic acid and higher mycolic acids) as fast-growing mycobacteria. In the sample treated with a 2% aqueous solution of the drug "Leptic" for 15 minutes, there was no growth.

Пример 5. Для подтверждения осуществимости способа из пробы патологического материала (брыжеечные лимфатические узлы) от убитой с контрольно-диагностической целью коровы с положительной реакцией на ППД-туберкулин для млекопитающих без видимых патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, в хозяйстве, неблагополучном по туберкулезу, готовили парные образцы и обрабатывали, как в примере 1. В образце, обработанном 0,5%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 3 часов, в течение первых 7 дней выращивания рост колоний отсутствовал. В образце, обработанном 2%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 15 минут, через 2 недели выросли мелкие колонии белого цвета, которые окрашивали по Цилю-Нильсену и по морфологическим признакам идентифицировали как микобактерии, что подтверждали исследованием жирнокислотного спектра клеток методом газожидкостной хроматографии. По хемотаксономическим характеристикам (по соотношению на хроматограммах эфиров миколовых кислот с числом атомов углерода 22, 24, 15, 26) микобактерии идентифицировали как М.tuberculosis-bovis.Example 5. To confirm the feasibility of the method from a sample of pathological material (mesenteric lymph nodes) from a cow killed with a diagnostic test for a mammal with a positive reaction to PPD-tuberculin for mammals without visible pathological changes characteristic of tuberculosis, in a farm unfavorable for tuberculosis, they were prepared paired samples and processed, as in example 1. In the sample treated with a 0.5% aqueous solution of the drug "Leptic" for 3 hours, during the first 7 days of growth, colony growth th was absent. In the sample treated with a 2% aqueous solution of the drug “Leseptic” for 15 minutes, small white colonies grew in 2 weeks, which were stained by Ziehl-Nielsen and identified by morphological characteristics as mycobacteria, which was confirmed by gas-liquid analysis of the cell spectrum by the gas-liquid method chromatography. According to chemotaxonomic characteristics (according to the ratio on the chromatograms of mycolic acid esters with the number of carbon atoms 22, 24, 15, 26), mycobacteria were identified as M. tuberculosis-bovis.

Пример 6. Для подтверждения эффективности способа в пробах патологического материала (лимфоузлы, печень, легкие) от разных половозрастных групп свиней Ильиногорского свинокомплекса (Нижегородская область) и крупного рогатого скота семи хозяйств Нижегородской и Рязанской областей выявляли нокардиоформные актиномицеты способом в соответствии с изобретением в сравнении с базовым, включающим предпосевную обработку по А.П.Аликаевой - 6% раствором серной кислоты при экспозиции 30 минут. Всего было исследовано 68 проб. После обработки патологического материала по методу А.П.Аликаевой нетуберкулезные микобактерии и нокардиоформные актиномицеты выявлены в 12 пробах (17,6%) способом в соответствии с изобретением - в 44 пробах (64,7%). При оценке сроков появления первичных колоний и скорости роста колоний установлено, что если при обработке патологического материала по методу А.П.Аликаевой первичные колонии нокардий и бытрорастущих микобактерии появлялись на 16-18 сутки, а интенсивный рост отмечался на 19-20 сутки, то при обработке патологического материала способом в соответствии с изобретением в образце, обработанном 0,5%-ным водным раствором препарата «Лесептик», эти показатели составили 2-3 и 5-8 суток соответственно. В образце, обработанном 2%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в течение 15 минут, рост отсутствовал.Example 6. To confirm the effectiveness of the method in samples of pathological material (lymph nodes, liver, lungs) from different sex and age groups of pigs of the Ilyinogorsk pig complex (Nizhny Novgorod region) and cattle of seven farms in the Nizhny Novgorod and Ryazan regions, nocardioform actinomycetes were detected by the method in accordance with the invention in comparison with basic, including presowing treatment according to A.P. Alikayeva - 6% solution of sulfuric acid at an exposure of 30 minutes. A total of 68 samples were investigated. After processing the pathological material according to the method of A.P. Alikayeva, non-tuberculous mycobacteria and nocardioform actinomycetes were detected in 12 samples (17.6%) by the method in accordance with the invention in 44 samples (64.7%). When assessing the timing of the appearance of primary colonies and the growth rate of colonies, it was found that if, when processing pathological material according to the method of A.P. Alikayeva, primary colonies of nocardia and rapidly growing mycobacteria appeared on days 16-18, and intensive growth was observed on days 19-20, then when the processing of pathological material by the method in accordance with the invention in a sample treated with a 0.5% aqueous solution of the drug "Leptic", these indicators were 2-3 and 5-8 days, respectively. In the sample treated with a 2% aqueous solution of the drug "Leptic" for 15 minutes, there was no growth.

Проведенные исследования подтвердили достижение технического результата - выявление нокардиоформных актиномицетов в патологическом материале, причем обеспечивается раздельное выявление патогенных медленно растущих микобактерий и быстро растущих микобактерий, родококков и коринебактерий, что позволяет проводить ускоренную первичную индикацию и дифференциацию положительных реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, вызываемых микобактериями туберкулеза, от положительных реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, вызываемых коринебактериями, родококками и нетуберкулезными микобактериями.Studies have confirmed the achievement of a technical result - the identification of nocardioform actinomycetes in pathological material, and provides separate identification of pathogenic slowly growing mycobacteria and rapidly growing mycobacteria, rhodococci and corynebacteria, which allows for accelerated primary indication and differentiation of positive reactions to PPD-caused tuberculin for mammals caused by tuberculosis, from positive reactions to PPD-tuberculin for mammals caused by corynebacteria, rhodococci and non-tuberculous mycobacteria.

Источники информацииInformation sources

1. Ветеринария, 1996, №3. С.28.1. Veterinary Medicine, 1996, No. 3. S.28.

2. Туберкулез сельскохозяйственных животных / Под ред. Шишкова В.П., Урбана В.П. - М.: Агропромиздат, 1991. - C.114-118.2. Tuberculosis of farm animals / Ed. Shishkova V.P., Urbana V.P. - M .: Agropromizdat, 1991 .-- C.114-118.

3. Ветеринария, 1984. - №5. - С.67-68.3. Veterinary medicine, 1984. - No. 5. - S. 67-68.

4. Патент RU 2190220C1, 27.09.2002 - прототип.4. Patent RU 2190220C1, 09/27/2002 - prototype.

Claims (1)

Способ бактериологического выявления нокардиоформных актиномицетов, включающий предпосевную обработку пробы патологического материала водным раствором препарата «Лесептик» с выдержкой при комнатной температуре с последующим посевом на плотную питательную среду, отличающийся тем, что из пробы патологического материала готовят парные образцы, первый образец заливают 0,5%-ным, второй образец - 2,0%-ным водным раствором препарата «Лесептик» в объемном соотношении 1:2 с экспозицией 3 ч и 15 мин соответственно, после чего раствор препарата «Лесептик» сливают, образцы отмывают в изотоническом растворе натрия хлорида и готовят суспензию.A method for bacteriological detection of nocardioform actinomycetes, including pre-sowing treatment of a sample of pathological material with an aqueous solution of the drug "Leseptic" with exposure at room temperature, followed by seeding on a solid nutrient medium, characterized in that paired samples are prepared from a sample of pathological material, the first sample is filled with 0.5% -th, the second sample - a 2.0% aqueous solution of the drug "Leseptic" in a volume ratio of 1: 2 with an exposure of 3 hours and 15 minutes, respectively, after which the solution of the drug "Forest “septic tank” is drained, the samples are washed in an isotonic sodium chloride solution and a suspension is prepared.
RU2006135015/13A 2006-10-03 2006-10-03 Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces RU2321636C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006135015/13A RU2321636C1 (en) 2006-10-03 2006-10-03 Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006135015/13A RU2321636C1 (en) 2006-10-03 2006-10-03 Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2321636C1 true RU2321636C1 (en) 2008-04-10

Family

ID=39366755

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006135015/13A RU2321636C1 (en) 2006-10-03 2006-10-03 Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2321636C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2542460C1 (en) * 2013-10-15 2015-02-20 Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук Method for pre-inoculation processing of pathological material for mycobacterial recovery
RU2610412C2 (en) * 2015-05-29 2017-02-10 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" (ФГБНУ "НИВИ НЗ России") Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Туберкулез сельскохозяйственный животных под ред. В.П. ШИШКОВА, В.П. УРБАНА. - М.: Агропромиздат, 1991, с.114-118. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2542460C1 (en) * 2013-10-15 2015-02-20 Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук Method for pre-inoculation processing of pathological material for mycobacterial recovery
RU2610412C2 (en) * 2015-05-29 2017-02-10 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации" (ФГБНУ "НИВИ НЗ России") Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Islam et al. Isolation and identification of Escherichia coli and Salmonella from poultry litter and feed
CN112358999B (en) Lactobacillus reuteri and application thereof
CN114621885B (en) Bacillus subtilis for efficiently removing ammoniacal nitrogen and nitrite nitrogen and application of bacillus subtilis in aquaculture
CN110028560B (en) Bacteriocin produced by bacillus coagulans and application thereof
JP6975701B2 (en) Bacillus subtilis isolation method, Bacillus subtilis, microbial preparation containing Bacillus subtilis, medium set for Bacillus subtilis isolation
RU2321636C1 (en) Method for bacteriological detection of nocardiomorphous actinomyces
CN110272850A (en) New category bacterial strain with molten algae ability and its to the application of phaeocystis globosa
RU2402781C1 (en) Method of pre-inoculation processing of samples collected from environment objects for release of microbacteria
Dickman Studies on the intestinal flora of termites with reference to their ability to digest cellulose
Burgess et al. Laboratory transmission of Enterobacteriaceae by the oriental cockroach, Blatta orientalis
CN113005068B (en) Two kinds of animal pathogenic bacteria with multiple drug resistance and capable of forming biological membrane and application thereof
Nwibo et al. Identification and methods for prevention of Enterococcus mundtii infection in silkworm larvae, Bombyx mori, reared on artificial diet
RU2288953C1 (en) Method for differentiating allergic responses for bcg-tuberculin for mammals
Hossain et al. Aspergillus niger grows faster than Escherichia coli in eosin methylene blue media and deter their growth by reducing the pH of the media
RU2795907C1 (en) Selective nutrient medium for isolating aeromonads from water bodies
Osuntokun et al. Bacteriological assessment of African catfish (Clarias gariepinus) isolated from earthen and concrete fish Pond
US2230130A (en) Method of obtaining microbian enzymes
RU2610412C2 (en) Method of primary identification of mycobacteria of mycobacterium tuberculosis complex from non-tuberculosis mycobacteria
US20230227886A1 (en) Selective medium composition for detection of p. carotovorum and detection method using the same
RU2559523C1 (en) Method of pre-seeding treatment of pathological material for extraction of nocardioformal actinomycetes
RU2678804C1 (en) Nutrient medium for bacillus anthracis differentiation
RU2484141C1 (en) Elective-differential nutrient medium for extraction of choleraic vibrios
CN112143682B (en) Color development solid culture medium of nocardia seriolae and preparation method and application thereof
RU2767782C1 (en) Nutrient medium for obtaining listeria biomass
CN109652332B (en) Microbial inoculum capable of improving incubation efficiency of soldier fly eggs and application

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20081004