RU2580033C2 - СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМОНА in vitro - Google Patents
СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМОНА in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2580033C2 RU2580033C2 RU2014120524/10A RU2014120524A RU2580033C2 RU 2580033 C2 RU2580033 C2 RU 2580033C2 RU 2014120524/10 A RU2014120524/10 A RU 2014120524/10A RU 2014120524 A RU2014120524 A RU 2014120524A RU 2580033 C2 RU2580033 C2 RU 2580033C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vitro
- bap
- agar
- lemon
- supplemented
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ культивирования лимона in vitro, заключающийся в том, что стерильные пазушные почки предварительно культивируют до появления микропобегов на питательной среде МС с добавлением БАП 0,1 мг/л, НУК 0,5 мг/л, агар 0,7%, затем вычленяют из них меристемы размером 0,4-0,6 мм с 2-3 примордиями и прививают их на подвой, выращенный in vitro на среде WPM, дополненной БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 0,7%, микропривитые растения культивируют на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л. Изобретение позволяет сохранять в коллекции in vitro ценные генотипы цитрусовых культур с высокой степенью генетической стабильности и однородности растительного материала. 3 табл.
Description
Способ относится к сельскохозяйственной биотехнологии, в частности к культуре тканей в условиях in vitro и может быть использован для микроразмножения и создания in vitro коллекций многолетних древесных культур.
Известно, что культивирование in vitro вегетативных органов древесных плодовых культур сопряжено с рядом трудностей, таких как сложность получения стерильной культуры, низкие коэффициенты размножения и укоренения, низкий уровень жизнеспособности микропобегов. Повышение эффективности размножения и надежности сохранения in vitro сортов коллекции цитрусовых возможно путем оптимизации состава питательных сред и использования техники микропрививки.
Аналогичные способы культивирования цитрусовых in vitro выполнены на сеянцах (Barlaas, Skene, 1982; Marin, Duran Villa, 1999; Chaturvedi et al., 2002; Avenido et al., 2004; Jajoo, 2009; Benabdesselam, 2011; Chen, 2012 и др.). Однако при культивировании сеянцев сортовые особенности утрачиваются и растения зацветают через 5-10 и более лет. Альтернативным путем надежного сохранения сортов цитрусовых in vitro является микропрививка, которая впервые была разработана L. Navarro для культивирования цитрусовых in vitro в 1980-х годах, затем эта техника модифицировалась другими авторами (Naz et al., 2007; Sharma et al., 2007; Hančević et al., 2009). Однако предлагаемая ими техника является трудоемкой и характеризуется высоким риском возникновения вторичной инфекции, так как для культивирования микропривитых растений используются жидкая питательная среда с перфорированными мостиками из фильтровальной бумаги.
Преимущество разработанного нами способа культивирования лимона in vitro состоит в том, что он позволяет сохранять и размножать генотипы с высокой степенью надежности и генетической стабильности за счет модификации техники микропрививки и состава питательной среды.
Научно-техническая задача, на решение которой направлено изобретение - оптимизировать протокол культивирования лимона in vitro для микроразмножения и сохранения ценных генотипов и создания депонированной коллекции цитрусовых культур. Технический результат заключается в увеличении коэффициента размножения и приживаемости микропрививки.
Поставленная задача достигается культивированием микропобегов в 3 этапа:
- культивирование стерильных пазушных почек от молодых побегов на питательной среде МС с добавлением БАП 0,1 мг/л, НУК 0,5 мг/л, агар 0,7%, при стандартных условиях - световом режиме 16/8, температуре +22±2°С;
- выращивание подвоев in vitro - стерильные семена помещают на среду WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 0,7%;
- прививка меристем с 2-3 примордиями от стерильных микропобегов на подвой - 3-4-х недельные сеянцы, выращенные in vitro с последующим культивированием на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л.
Сущность заявленного изобретения иллюстрируется следующими материалами:
На фиг. 1 изображены введенные в культуру пазушные почки лимона через 8 дней (слева) и их пролиферация через 30 дней (справа).
На фиг. 2 изображены подвои - 5-недельные сеянцы для микропрививки. На фиг. 3 изображены микропривитые растения лимона Новоафонский на лимон Мейера через 20 (слева), через 40 (справа) дней после прививки.
На фиг. 3 изображены микропривитые растения лимона Новоафонский на лимон Мейера через 20 (слева), через 40 (справа) дней после прививки.
На первом этапе для введения в культуру пазушных почек молодые побеги обрабатывают 10% раствором Белизны 15 мин, затем 0,3% раствором Велтолен 25 мин и после трехкратной промывки стерильной дистиллированной водой помещают на среду почка с сегментом побега длиной 0,7-1,0 см.
Дальнейшее культивирование полученных из почек микропобегов цитрусовых осуществляется путем микропрививки. Подвой - сеянцы лимона Мейера (Citrus х meyeri Meyer) - получают следующим путем: стерильные семена очищают от семенных оболочек и помещают на среду WPM с добавлением БАП 1, ГК 2 мг/л, при стандартных световом и температурном режимах.
Прививку делают на подвой - 3-5-недельные сеянцы. В качестве привоя используют стерильные меристемы с 2-3 примордиями, размером 0,4-0,6 мм. Меристемы получают от деревьев открытого грунта (in vivo) и от введенных в стерильную культуру пазушных почек (in vitro). Прививку делают следующим способом: отрезают верхнюю часть сеянца, оставляя эпикотиль длиной 1,3-1,5 см. В месте среза делают L-образный надрез коры, под которую помещают меристему привоя. Корневую систему сеянца оставляют длиной 1-1,5 см. Далее микропривитые растения культивируют на свежей питательной среде.
Пример культивирования цитрусовых in vitro показан на 4 генотипах лимона. Первый этап - введение пазушных почек в стерильную культуру путем обработки побегов Белизной 10, 15% (10 мин) с последующей обработкой раствором Велтолен 0,2, 0,3, 0,4% (25 мин). Результат введения в стерильную культуру устанавливался по количеству стерильных жизнеспособных эксплантов (таблица 1).
Лучшим вариантом стерилизации оказался вариант III, где количество стерильных жизнеспособных почек составило 29,7%. В других вариантах этот показатель был ниже по причине контаминации либо некротических поражений тканей дезинфицирующими веществами.
Второй этап - выращивание подвоев in vitro. На этом этапе выявлена оптимальная комбинация регуляторов роста в среде WPM, позволяющая получать коэффициент размножения сеянцев до 4,2 (таблица 2, фиг. 2).
Третий этап - микропрививка сортов на сеянцы лимона Мейера (фиг. 3). Изучаемый показатель - процент приживаемости меристем в прививке - составил 65,8-81,6% при использовании in vitro культивируемых побегов в качестве источника меристем, в 2-3 превысив приживаемость in vivo меристем (таблица 3). Все различия достоверны (Fф≥F05) и существенны (HCP05=8,33). В аналогичных работах по процент успешных микропрививок колеблется от 30 до 75% (Naz et al., 2007; Sharma et al., 2007; Hančević et al., 2009). Микропривитые растения культивируют на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л.
Предложенный способ культивирования лимона in vitro позволяет обеспечить надежное сохранение генотипов и увеличить коэффициент размножения в 1,6 раза и приживаемость микропрививки на 6,6-35,1% по сравнению с аналогичными работами в этой области.
В целом заявленный способ дает возможность сохранять в коллекции in vitro ценные генотипы лимона с высокой степенью генетической стабильности и однородности растительного материала.
Claims (1)
- Способ культивирования лимона in vitro, заключающийся в том, что стерильные пазушные почки предварительно культивируют до появления микропобегов на питательной среде МС с добавлением БАП 0,1 мг/л, НУК 0,5 мг/л, агар 0,7%, затем вычленяют из них меристемы размером 0,4-0,6 мм с 2-3 примордиями и прививают их на подвой, выращенный in vitro на среде WPM, дополненной БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 0,7%, микропривитые растения культивируют на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014120524/10A RU2580033C2 (ru) | 2014-05-21 | 2014-05-21 | СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМОНА in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014120524/10A RU2580033C2 (ru) | 2014-05-21 | 2014-05-21 | СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМОНА in vitro |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014120524A RU2014120524A (ru) | 2015-11-27 |
RU2580033C2 true RU2580033C2 (ru) | 2016-04-10 |
Family
ID=54753378
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014120524/10A RU2580033C2 (ru) | 2014-05-21 | 2014-05-21 | СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМОНА in vitro |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2580033C2 (ru) |
-
2014
- 2014-05-21 RU RU2014120524/10A patent/RU2580033C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
САМАРИНА Л.С., Оптимизация приемов микроразмножения и сохранения лимона in vitro, автореферат, Москва, 2013, с.6, 9-20. САМАРИНА Л.С., Оценка регенерационной способности эксплантов цитрусовых in vitro, Садоводство и виноградарство, N6, 2012, с.26-30. САМАРИНА Л.С., Разработка приемов культивирования цитрусовых in vitro, Субтропическое и декоративное садоводство, Научные труды, выпуск 46, Сочи, 2012, с.174-179. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2014120524A (ru) | 2015-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Batukaev et al. | Use of growth regulators in grapes grinding by in vitro method | |
Batukayev et al. | In vitro reproduction and ex vitro adaptation of complex resistant grape varieties | |
Romadanova et al. | In vitro collection methods for Malus shoot cultures used for developing a cryogenic bank in Kazakhstan | |
Yancheva et al. | In vitro propagation of grape cultivars and rootstocks for production of pre-basic planting material. | |
Tian et al. | Comparison of shoot induction ability of different explants in herbaceous peony (Paeonia lactiflora Pall.) | |
RU2619052C1 (ru) | Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro | |
Hosseinpour et al. | High frequency in vitro propagation of M× M60, a cherry rootstock: the effects of culture media and growth regulators | |
CN105941147A (zh) | 纸桦组织培养种苗繁育方法 | |
Parmar et al. | Direct organogenesis in Punica granatum L. cv. Kandhari Kabuli from hypocotyl explants | |
Mishra et al. | Micropropagation of guava (Psidium guajava L.) | |
Chaitanya et al. | Review on Propagation Techniques of Jasmine (Jasminum sambac (L.)) | |
RU2580033C2 (ru) | СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМОНА in vitro | |
Wang et al. | A grafting technique for efficiently transplanting transgenic regenerated plants of cotton | |
RU2092036C1 (ru) | Способ микроразмножения стевии stevia rebaudiana l. | |
RU2668153C2 (ru) | Способ получения безвирусного посадочного материала картофеля ценных сортов | |
Amer et al. | Micropropagation and acclimatization of Gardenia jasminoides Ellis | |
Wang et al. | Studies on factors affecting the microshoot grafting survival of walnut | |
KR101839997B1 (ko) | 체세포배발생을 통한 음나무 노령목의 대량번식방법 | |
Bhattacharjee et al. | Development of an efficient protocol for in vitro germination and enhancing protocorm-like body development in three indigenous orchid species in Bangladesh | |
RU2516341C2 (ru) | Способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro) | |
KR100302206B1 (ko) | 민두릅나무의 기내 대량생산방법 및 포지 이식방법 | |
¿ edivá et al. | Micropropagation of common ash clones resistant to fungus Hymenoscyphus fraxineus | |
Batukaev et al. | IN VITRO BIOTECHNOLOGICAL TECHNIQUES FOR HEALTH IMPROVEMENT AND REPRODUCTION OF GRAPE | |
Behera et al. | Micropropagation of greater yam (Dioscorea alata L. cv. Hatikhujia) through vine nodes | |
RU2634966C2 (ru) | Способ создания и поддержания коллекции оздоровленных сортов картофеля в виде моноклональных мини-клубней |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170522 |