RU2619052C1 - Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro - Google Patents
Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2619052C1 RU2619052C1 RU2016110991A RU2016110991A RU2619052C1 RU 2619052 C1 RU2619052 C1 RU 2619052C1 RU 2016110991 A RU2016110991 A RU 2016110991A RU 2016110991 A RU2016110991 A RU 2016110991A RU 2619052 C1 RU2619052 C1 RU 2619052C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chrysanthemum
- agar
- plants
- callus
- deadrise
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro путем введения в культуру клеток семян с целью каллусообразования и последующей регенерации растений, заключающийся в том, что стерилизованные семена помещают на питательную среду Мурасиге-Скуга с добавлением 0,7% агар-агара, 1 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-1 мг/л индолил-3-уксусной кислоты, доведенную до 1 л стерильной дистиллированной водой, культивируют в течение одного пассажа до появления каллуса, не более 26 суток, затем каллусы пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга с половинной концентрацией всех компонентов и 0,7% агар-агара, добавляют 0,2-1 мг/л 6-бензиламинопурина и культивируют 2-4 пассажа до появления растений-регенерантов. Изобретение позволяет достигнуть высокого процента регенерации растений хризантемы килеватой. 2 табл., 6 пр.
Description
Область применения
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в растениеводстве и для различных биотехнологических исследований в области клеточной инженерии.
Уровень техники
Хризантема - одна из самых популярных декоративных культур, используемых в озеленении городских и приусадебных территорий. Широкое использование однолетних сортов хризантем в озеленении и декоративном садоводстве обуславливает интерес к изучению и получению новых стресс-устойчивых сортов биотехнологическими методами.
Известен способ получения многолетней хризантемы (Chrysanthemum koreanum). Для ввода в культуру клеток в качестве эксплантов использовали листовые пластинки и лепестки растений различных сортов, экспланты стерилизовали 0,1% раствором HgCl2 (сулемы). Культивирование листовых пластинок на питательной среде Мурасиге-Скуга (МС), содержащей индолилуксусную кислоту (ИУК) 1 мг/л в сочетании с 6-бензиламинопурином (БАП) в концентрации 0,1 мг/л, приводило к образованию плотной морфогенной каллусной ткани. Однако в дальнейшем были выявлены отклонения у растений по морфологии от исходного материала. Культивирование лепестков с теми же регуляторами роста в среде стимулировало образование рыхлой каллусной ткани, в которой не происходила дифференциация меристематических очагов, дающих начало развитию побегов (Гранда Х.Р.-К. Идентификация В вируса хризантем и создание коллекции in vitro оздоровленного посадочного материала. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва, 2009, 19 с.). Известен способ получения пиретрума цинерариелистного (Chrysanthemum cinerariaefolium) из узловых эксплантов. Стерилизацию узловых эксплантов проводили выдержкой в 70% спирте в течение 2 минут, далее 1% HgCl2 в течение 2-3 минут, после чего несколько раз промывали стерильной дистиллированной водой. Экспланты культивировали в течение 3 недель на питательной среде 
МС с добавлением 0,9% агар-агара, α-нафтилуксусной кислоты (НУК) в концентрации 0,5 мг/л и БАП - 0,5 мг/л и далее регенерация на той же среде, содержащей БАП 0,5 мг/л (Ihsan Ilahi, Musarrat Jabeen, S. Nazneen Sadaf. Rapid clonal propagation of Chrysanthemum through embroyogenic callus formation. Pakistan Journal of Botany, 39(6), 2007: p. 1945-1952).
Однако эти научные работы посвящены хризантеме многолетней, которая по современной классификации относится к иному виду хризантем - дендрантема (Dendranthema), а не к однолетней (Chrysanthemum carinatum Schousb.).
Задача изобретения
Задачей нашего метода было ввести в культуру клеток хризантему килеватую, получить высокий процент каллусообразования и морфогенных каллусов, получить жизнеспособные регенеранты без морфологических отклонений.
Решение задачи
Поставленная задача решается тем, что создан новый способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro путем введения в культуру клеток семян с целью получения каллусов и последующей регенерации растений, заключающийся в том, что стерилизованные семена помещают на питательную среду МС с добавлением 0,7% агар-агара, 1 мг/л БАП, 0,1-1 мг/л ИУК, доведенную до 1 литра стерильной дистиллированной водой, культивируют в течение одного пассажа до появления каллуса, не более 26 суток, затем каллусы пересаживают на питательную среду МС с половинной концентрацией всех компонентов и 0,7% агар-агара, добавляют 0,2-1 мг/л БАП и культивируют 2-4 пассажа до появления растений-регенерантов.
Заявленные интервалы определяются следующим образом.
При добавлении в питательную среду, на стадии образования каллуса, менее или более 1 мг/л БАП процент образование каллуса снижается и составляет менее 50%.
Добавление, на стадии образования каллуса, менее 0,1 мг/л ИУК увеличивает время образования каллуса, а более 1 мг/л снижает процент образования морфогенного каллуса при дальнейшем культивировании.
Культивирование каллуса в течение одного пассажа недостаточно для получения регенерантов, а культивирование более 4 пассажей приводит к существенному снижению укореняемости регенерантов. Культивирование при длительности одного пассажа более 26 дней приводит к накоплению фенольных соединений в клетках, вследствие этого к потемнению и гибели каллусов.
Если на стадии образования регенерантов в среду добавить менее 0,2 мг/л БАП или более 1 мг/л БАП, снижается процент регенерации.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, результаты которых представлены в таблицах 1, 2.
Для введения в культуру клеток хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) использовались семена растений. Предварительно семена стерилизуют однократной обработкой спиртом с последующей стерилизацией раствором, содержащим гипохлорит натрия (с содержанием активного хлора 75-95 г/дм3), в течение 10-20 минут. Затем их три раза промывают стерильной дистиллированной водой. Стерилизация семян в растворе, содержащем гипохлорит натрия, менее 10 минут была неэффективной, наблюдалась высокая зараженность семян при культивировании на питательной среде; более 20 минут - семена обесцвечивались и теряли жизнеспособность.
Пример 1. Каллус формируется из семян растений хризантемы килеватой сорта Эльдорадо на среде МС с добавлением 1 мг/л БАП и 0,1 мг/л ИУК (таблица 1). Затем каллусы культивируют 2 пассажа на среде МС с половинной концентрацией всех компонентов ( концентрации МС) и добавлением 0,2 мг/л БАП (таблица 2).
Пример 2. Каллус формируется из семян растений хризантемы килеватой на среде МС сорта Эльдорадо с добавлением 1 мг/л БАП и 0,1 мг/л ИУК. Затем каллусы культивируют 3 пассажа на среде концентрации МС с добавлением 0,5 мг/л БАП (таблица 2).
Пример 3. Каллус формируется из семян растений хризантемы килеватой сорта Эльдорадо на среде МС с добавлением 1 мг/л БАП и 0,5 мг/л ИУК (таблица 1). Затем каллусы культивируют 4 пассажа на среде концентрации МС с добавлением 1 мг/л БАП (таблица 2).
Пример 4. Каллус формируется с высокой частотой из семян растений хризантемы килеватой сорта Радость на среде МС с добавлением 1 мг/л БАП и 0,1 мг/л ИУК (таблица 1). Затем каллусы культивируют 2 пассажа на среде концентрации МС с добавлением 0,2 мг/л БАП (таблица 2).
Пример 5. Каллус формируется с высокой частотой из семян растений хризантемы килеватой сорта Радость на среде МС с добавлением 1 мг/л БАП и 0,5 мг/л ИУК (таблица 1). Затем каллусы культивируют 3 пассажа на среде концентрации МС с добавлением 0,5 мг/л БАП.
Пример 6. Каллус формируется с высокой частотой из семян растений хризантемы килеватой сорта Радость на среде МС с добавлением 1 мг/л БАП и 1 мг/л ИУК (таблица 1). Затем каллусы культивируют 4 пассажа на среде концентрации МС с добавлением 1 мг/л БАП.
Результаты изобретения.
Результаты таблиц 1, 2 показывают, что предлагаемый метод является эффективным. Достигнут высокий процент каллусообразования для хризантемы килеватой сортов Эльдорадо - 45,1-71,4% и Радость - 48,2-78,2%, а также достигнут высокий процент регенерации хризантемы килеватой у сорта Эльдорадо 42,3-61,0% и у сорта Радость 49,2-64,7%
Введены в культуру клеток семена хризантемы килеватой и получены растения-регенеранты. Достигнут высокий процент каллусообразования и регенерации. Все полученные регенеранты жизнеспособны и не имеют морфологических отклонений. Данные регенеранты адаптированы к почвенным условиям и получены семена.
Claims (1)
- Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro путем введения в культуру клеток семян с целью каллусообразования и последующей регенерации растений, заключающийся в том, что стерилизованные семена помещают на питательную среду Мурасиге-Скуга с добавлением 0,7% агар-агара, 1 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-1 мг/л индолил-3-уксусной кислоты, доведенную до 1 л стерильной дистиллированной водой, культивируют в течение одного пассажа до появления каллуса, не более 26 суток, затем каллусы пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга с половинной концентрацией всех компонентов и 0,7% агар-агара, добавляют 0,2-1 мг/л 6-бензиламинопурина и культивируют 2-4 пассажа до появления растений-регенерантов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016110991A RU2619052C1 (ru) | 2016-03-25 | 2016-03-25 | Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016110991A RU2619052C1 (ru) | 2016-03-25 | 2016-03-25 | Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2619052C1 true RU2619052C1 (ru) | 2017-05-11 |
Family
ID=58715890
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016110991A RU2619052C1 (ru) | 2016-03-25 | 2016-03-25 | Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2619052C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2743967C1 (ru) * | 2020-06-25 | 2021-03-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева" (ФГБОУ ВО РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева) | Способ получения посадочного материала хризантемы в условиях in vitro |
| CN115968788A (zh) * | 2022-07-28 | 2023-04-18 | 中国农业大学 | 一种基于利用花瓣组织培养的菊花诱变育种方法 |
| PL442418A1 (pl) * | 2022-09-30 | 2024-04-02 | Politechnika Bydgoska Im. Jana I Jędrzeja Śniadeckich | Sposób wytwarzania i stymulacji kiełkowania in vitro i ex vitro sztucznych nasion ziemniaka i chryzantemy z wykorzystaniem nanocząstek cynku lub tlenku cynku |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141198C1 (ru) * | 1998-09-16 | 1999-11-20 | Научно-производственный центр по животноводству РАСХН | Среда для обеспечения введения различных веществ в личинки домашней мухи musca domestica |
-
2016
- 2016-03-25 RU RU2016110991A patent/RU2619052C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141198C1 (ru) * | 1998-09-16 | 1999-11-20 | Научно-производственный центр по животноводству РАСХН | Среда для обеспечения введения различных веществ в личинки домашней мухи musca domestica |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЛИТВИНОВА И.И., и др., Введение в культуру клеток и получение растений брахикомы иберисолистной и хризантемы килеватой, Известия МГТУ МАМИ, научный ецензируемый журнал, том 4, Москва, октябрь, 2012, с.276-279. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2743967C1 (ru) * | 2020-06-25 | 2021-03-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева" (ФГБОУ ВО РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева) | Способ получения посадочного материала хризантемы в условиях in vitro |
| CN115968788A (zh) * | 2022-07-28 | 2023-04-18 | 中国农业大学 | 一种基于利用花瓣组织培养的菊花诱变育种方法 |
| PL442418A1 (pl) * | 2022-09-30 | 2024-04-02 | Politechnika Bydgoska Im. Jana I Jędrzeja Śniadeckich | Sposób wytwarzania i stymulacji kiełkowania in vitro i ex vitro sztucznych nasion ziemniaka i chryzantemy z wykorzystaniem nanocząstek cynku lub tlenku cynku |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Batukayev et al. | In vitro reproduction and ex vitro adaptation of complex resistant grape varieties | |
| CN107094625B (zh) | 一种南方红豆杉组织培养种苗繁育方法 | |
| Demeke et al. | Effects of plant growth regulators on in vitro cultured nodal explants of cassava (Manihot esculenta Crantz) clones | |
| Carra et al. | Potential use of new diphenylurea derivatives in micropropagation of Capparis spinosa L. | |
| Romadanova et al. | In vitro collection methods for Malus shoot cultures used for developing a cryogenic bank in Kazakhstan | |
| RU2619052C1 (ru) | Способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro | |
| CN106417033B (zh) | 一种高唐栝楼快速繁殖方法 | |
| Guranna et al. | Micropropagation in pomegranate (Punica granatum L.) cv.‘Bhagwa’through indirect organogenesis and assessment of genetic fidelity by RAPD marker | |
| Yerbolova et al. | The effect of growth regulators on in vitro culture of some Vitis vinifera L. cultivars | |
| Bala et al. | Assessment of viability and enhancement of germination potential of jojoba seeds under in vitro condition using plant growth regulator | |
| CN103461119A (zh) | 粗枝云杉体细胞胚胎发生与植株再生方法 | |
| Romyanon et al. | Direct-shoot organogenesis as an alternative protocol for in vitro regeneration of oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) | |
| Onay et al. | Micrografting of pistachio (Pistacia vera L. cv. Siirt) | |
| Mayerni | The Direct Organogenesis In Local Clones Of Patchouli Plant (Pogostemon cablin Benth) InVitro | |
| RU2653436C1 (ru) | Получение полиплоидных растений березы | |
| RU2092036C1 (ru) | Способ микроразмножения стевии stevia rebaudiana l. | |
| Zarnadze et al. | In vitro reproduction of Kidney Tea (Orthosiphon stamineus Bents) | |
| Thinesh et al. | In vitro callogenesis from bud and stem explants of dragon fruit (Hylocereus undatus) | |
| Karimi Alavijeh et al. | An efficient method for economic micropropagation of three aquatic plant species (Lobelia cardinalis, Staurogyne repens, and Alternanthera reineckii) | |
| KR101839997B1 (ko) | 체세포배발생을 통한 음나무 노령목의 대량번식방법 | |
| Arias-Pérez et al. | Encapsulation of immature somatic embryos of Coffea arabica L. for in vitro preservation | |
| Amin et al. | Morphogenesis studies on Amaranthus gangeticus in vitro | |
| Nerbass et al. | Use of temporary immersion bioreactors and solid culture medium in the in vitro propagation of pear rootstocks | |
| CN104054578A (zh) | 滇丁香的组培快繁方法 | |
| Batukaev et al. | IN VITRO BIOTECHNOLOGICAL TECHNIQUES FOR HEALTH IMPROVEMENT AND REPRODUCTION OF GRAPE |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180326 |