RU2574210C1 - Модифицированная питательная среда эндо для выявления и идентификации энтеробактерий - Google Patents
Модифицированная питательная среда эндо для выявления и идентификации энтеробактерий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2574210C1 RU2574210C1 RU2015110441/10A RU2015110441A RU2574210C1 RU 2574210 C1 RU2574210 C1 RU 2574210C1 RU 2015110441/10 A RU2015110441/10 A RU 2015110441/10A RU 2015110441 A RU2015110441 A RU 2015110441A RU 2574210 C1 RU2574210 C1 RU 2574210C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium
- endo
- enterobacteria
- medium
- nutrient medium
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 9
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 title claims description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 18
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L Sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 13
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 claims abstract description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 229960004799 Tryptophan Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 10
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241001486863 Sprattus sprattus Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000001187 sodium carbonate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940052223 Basic fuchsin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- JUQPZRLQQYSMEQ-UHFFFAOYSA-N Pararosaniline Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC=C1C(C=1C=CC(N)=CC=1)=C1C=CC(=[NH2+])C=C1 JUQPZRLQQYSMEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 6
- NIKFYOSELWJIOF-UHFFFAOYSA-O Fuchsine Chemical group Cl.C1=C(N)C(C)=CC(C(=C2C=CC(=[NH2+])C=C2)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 NIKFYOSELWJIOF-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 5
- 229940093761 Bile Salts Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- -1 sodium bile salts Chemical class 0.000 claims description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 2
- 229960001375 Lactose Drugs 0.000 abstract 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000208465 Proteaceae Species 0.000 description 2
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 2
- 229940055033 Proteus mirabilis Drugs 0.000 description 2
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 2
- 229940007042 Proteus vulgaris Drugs 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 229940115939 Shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 238000009632 agar plate Methods 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 101710011975 bw Proteins 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии и может быть использовано при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды на наличие как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий. Модифицированная питательная среда Эндо содержит гидролизат кильки панкреатический, экстракт дрожжей кормовых, лактозу, фуксин основной, натрия сульфит, натрия хлорид, натрия карбонат, натриевые соли желчных кислот, L-триптофан, агар микробиологический и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет выделить культуру в чистом виде и провести точный количественный учет выросших микроорганизмов. 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к санитарной и клинической микробиологии, и может быть использовано при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды на наличие как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий.
Как известно, питательная среда Эндо является одной из наиболее широко используемых сред в бактериологической практике для первичного посева исследуемого материала с целью выявления как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий (5, 10, 2, 8). Также назначением среды Эндо, согласно действующим САНПиН, является использование ее при санитарном микробиологическом контроле объектов окружающей среды, в том числе воды и пищевых продуктов (6). Питательная среда Эндо - это традиционная дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения грамотрицательных бактерий, в которой заложен принцип ферментации лактозы. Однако недостаток среды заключается в том, что среда Эндо не подавляет «роение» протея, в силу чего в случае наличия в микробной ассоциации «роящихся» форм протеев (Proteus mirabilis, Proteus vulgaris) невозможно выделить изолированную колонию, а также произвести подсчет числа выросших колоний, вследствие образования сплошной пленки протеев на поверхности среды. Следует отметить, что именно эти два вида протеев наиболее часто выделяются как при клинических, так и при санитарных исследованиях (7). Разработанные ранее многочисленные модификации среды Эндо не устраняют этого недостатка (4, 9).
При проведении исследований по избавлению от этого недостатка нами было обнаружено, что только при сочетанном внесении в среду Эндо натриевых солей желчных кислот и L-триптофана обеспечивается рост «роящихся» форм протеев в О-Н-форме (т.е. без «роения»), а также выявляется специфический фермент протеев триптофандезаминаза.
В состав известной среды Эндо, согласно каталогам различных производителей, входят в г/л (1,3):
Причиной, препятствующей достижению указанного ниже технического результата при использовании сухой питательной среды для выделения энтеробактерий, принятой за прототип, является образование пленки протеями (Proteus vulgaris, Proteus mirabilis), что не дает возможности провести количественный учет выросших колоний и выделить культуры в чистом виде (Табл. 1)
Задачей изобретения является создание модифицированной питательной среды Эндо, позволяющей подавить «роение» протеев, что в случае наличия их в исследуемой микробной ассоциации позволит проводить эффективный количественный учет энтеробактерий.
Для достижения поставленной задачи в известную среду Эндо добавляют натриевые соли желчных кислот и L-триптофан в определенных концетрациях, сочетание которых позволяет подавить «роение» протеев и выявить специфический фермент протеев - триптофандезаминазу. Под воздействием триптофандезаминазы протеев L-триптофан расщепляется с образованием продукта вишнево-коричневого цвета, окрашивающего только колонии протеев и среду вокруг них в вишнево-коричневый цвет.
Для микроорганизмов, не продуцирующих триптофандезаминазу, в составе среды присутствуют лактоза и фуксин, которые позволяют выявить образование кислоты из лактозы при росте указанных микроорганизмов, вследствие чего они окрашиваются в красный цвет в отличие от колоний протеев вишнево-коричневого цвета. Лактозоотрицательные энтеробактерии вырастают на среде бесцветного цвета. Идентификация протеев на предлагаемой среде осуществляется одновременно с их выделением, т.е. одноэтапно. «Роение» протеев ингибируется, в отличие от традиционной среды Эндо, взятой за прототип. Грамположительные микроорганизмы подавляются при посеве из разведения 10-1 в результате введения в среду фуксина основного.
Состав предлагаемой среды Эндо в г/л дистиллированной воды:
| Гидролизат кильки панкреатический | 15,0-16,0 |
| Экстракт дрожжей кормовых | 0,65-0,7 |
| Лактоза | 10,5-11,0 |
| Фуксин основной | 0,2-0,25 |
| Натрия сульфит | 0,8-0,85 |
| Натрия хлорид | 4,0-5,0 |
| Натрия карбонат | 0,025-0,035 |
| Натриевые соли желчных кислот (фирма «Oxoid») | 1,4-1,6 |
| L-триптофан | 4,0-5,0 |
| Агар микробиологический | 7,0-7,8 |
Данный состав среды обеспечивает четкую дифференциацию по цвету протеев (вишнево-коричневого с таким же преципитатом) от патогенных энтеробактерий (бесцветных) и условно-патогенных энтеробактерий (красных), что не представляется возможным при использовании традиционной среды Эндо.
Заявляемую питательную среду Эндо для выявления и идентификации энтеробактерий получают следующим образом.
Пример 1. В 1 литр дистиллированной воды последовательно вносят 15,0 г гидролизата кильки панкреатического, 0,65 г экстракта кормовых дрожжей, 10,5 г лактозы, 0,2 г фуксина основного, 7,0 г агара микробиологического, 4,0 г L-триптофана, 1,4 г натриевых солей желчных кислот, 0,8 г натрия сульфита, 4,0 г натрия хлорида и 0,025 г натрия карбоната. Смесь тщательно перемешивают, трехкратно кипятят по 1-2 мин при помешивании, не допуская пригорания агара, до появления крупнопузырчатой пены. Среду охлаждают до температуры 45-50°C, после чего разливают в стерильные чашки Петри. После застывания агаровой пластинки чашки со средой подсушивают в термостате при 37°C в течение 50-60 мин с соблюдением правил асептики. Готовая к употреблению среда прозрачная, бледно-розового цвета, pH среды 7,4±0,2. Исследуемый материал наносят на поверхность среды и растирают стерильным шпателем. Инкубируют посев при температуре 37°C в течение 24 ч.
Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 литр дистиллированной воды последовательно вносят 15,5 г гидролизата кильки панкреатического, 0,67 г экстракта кормовых дрожжей, 10,7 г лактозы, 0,23 г фуксина основного, 7,04 г агара микробиологического, 4,5 г L-триптофана, 1,5 г натриевых солей желчных кислот, 0,83 г натрия сульфита, 4,5 г натрия хлорида и 0,03 г натрия карбоната. Далее - по примеру 1.
Пример 3. Отличается от примеров 1 и 2 тем, что в 1 литр дистиллированной воды последовательно вносят 16,0 г гидролизата кильки панкреатического, 0,7 г экстракта кормовых дрожжей, 11,0 г лактозы, 0,25 г фуксина основного, 7,8 г агара микробиологического, 5,0 г L-триптофана, 1,6 г натриевых солей желчных кислот, 0,85 г натрия сульфита, 5,0 г натрия хлорида и 0,035 г натрия карбоната. Далее - по примеру 1.
Через 24 ч инкубации посевов (при 37±1°C) на предлагаемой среде патогенные энтеробактерии (Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Shigella sonnei S-form) формируют типичные колонии бесцветного цвета, диаметром от 1,5 до 2,0 мм в S-форме. Колонии протеев вырастают вишнево-коричневого цвета, в O-H форме, диаметром 2,5-3,0 мм. При этом вокруг колоний протеев четко виден преципитат вишнево-коричневого цвета. Колонии условно-патогенных энтеробактерий - эшерихий, клебсиелл, цитробактера, энтеробактера, серраций вырастают в виде типичных для каждого вида колоний красного цвета, иногда с металлическим блеском, на фоне бледно-розового цвета питательной среды (Табл. 1).
Использование предлагаемой среды позволяет выделить культуру в чистом виде и провести точный количественный учет выросших микроорганизмов, что особенно важно при проведении клинических и санитарных исследований.
Литература
1. Диагностические препараты. Каталог продукции ФБУН ГНЦ ПМБ. - Оболенск. - 2012 г. - С. 14.
2. Загайнова А.В. Способ определения степени эпидемической опасности патогенных и потенциально-патогенных бактерий, выделенных из воды различного вида водопользования. / Рахманин Ю.А. // Патент на изобретение №2446214 от 27.03.2012 г.
3. Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. - М.: Медицина, 2003. - С. 33-34.
4. Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях. Под ред. Г.Я. Синая и О.Г. Биргера. - М. 1949. - С. 64.
5. Приказ МЗ СССР №535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». - М.: Медицина, 1985.
6. СанПиН 2.3.2.1280-02. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Дополнения и изменения N 2 к СанПиН 2.3.2.1078-01 - М.: Минздрав России, 2003. - 32 с.
7. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований. - С-Пб.: СпецЛит, 2007. - С. 359-362.
8. Снежков Н.И. Способ выявления возбудителей пищевых токсикоинфекций из продуктов животноводства. / Смирнова В.Н. // Патент на изобретение №2175443 от 27.10.2001 г.
9. Справочник по микробиологическим методам исследования. Под ред. М.О. Биргера. - М.: Медицина, 1982. - С. 462.
10. Энтеробактерии: Руководство для врачей. Под ред. В.И. Покровского. - М.: Медицина, 1985. - 318 с.
Claims (1)
- Модифицированная питательная среда Эндо для выявления и идентификации энтеробактерий, содержащая в качестве источника азота гидрализат кильки панкреатический, индикатор фуксин основной, лактозу, натрия сульфит, натрия хлорид, натрия карбонат и агар микробиологический, отличающаяся тем, что она дополнительно включает натриевые соли желчных кислот и L-триптофан при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
гидролизат кильки панкреатический 15,0-16,0 экстракт дрожжей кормовых 0,65-0,7 лактоза 10,5-11,0 фуксин основной 0,2-0,25 натрия сульфит 0,8-0,85 натрия хлорид 4,0-5,0 натрия карбонат 0,025-0,035 натриевые соли желчных кислот 1,4-1,6 L-триптофан 4,0-5,0 агар микробиологический 7,0-7,8
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2574210C1 true RU2574210C1 (ru) | 2016-02-10 |
Family
ID=
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ПОЛЯК М.С., СУХАРЕВИЧ В.И., СУХАРЕВИЧ М.Э., Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии, СПб, ЭЛБИ-СПб, 2008, стр. 306. СТЕПАНОВА Э.Д., МЕДЖИДОВ М.М., и др., Модификация питательных сред для выделения и идентификация клинически значимых условно патогенных микроорганизмов, Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 2012,N 2, с. 117- 119. Методические рекомендации. Микробиологическая диагностика дисбактериоза кишечника. М, 2007, с. 40,42. Под ред. МЕДЖИДОВА М.М., Справочник по микробиологическим питательным средам, Махачкала, 1989, с. 22. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cook et al. | Selective medium for culture of Mycoplasma hyopneumoniae | |
| BR112014000414B1 (pt) | Meio de cultura para crescimento seletivo de listeria spp e métodos para cultura seletiva de listeria e para detecção de listeria | |
| RU2574210C1 (ru) | Модифицированная питательная среда эндо для выявления и идентификации энтеробактерий | |
| RU2759831C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов из Burkholderia cepacia complex | |
| CN108285917A (zh) | 同时检测大肠菌群和沙门氏菌的显色培养基及检测片 | |
| Limya et al. | Antimicrobial resistance of bacteria associated with raw milk contaminated with antibiotics residues in Khartoum State, Sudan | |
| RU2660708C1 (ru) | Способ получения питательной среды для выделения гемокультуры при диагностике инфекции кровотока | |
| Mondal et al. | Omphalitis in ducklings with Staphylococcus aureus infection | |
| McCue et al. | Microbiology: Microbial Culture | |
| RU2481394C2 (ru) | Питательная среда для выделения, культивирования и определения гемолитических свойств бактерий из клинического материала | |
| RU2510416C1 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
| ElNasri et al. | Packaging type and their effects on the chemical and microbial quality of Sudanese white cheese (Gibna bayda) | |
| Borovyc et al. | Evaluation of contamination of cow milk with various conditionally pathogenic microflora for mastitis: genera Staphylococcus | |
| ES2529132T3 (es) | Medio de cultivo de microorganismos que comprende el ácido para-aminobenzoico como agente selectivo | |
| TWI627277B (zh) | Medium, including the set of the group, and its application | |
| RU2788607C1 (ru) | Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris | |
| RU2508399C1 (ru) | СУХАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ И УЧЕТА E.coli И КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ | |
| RU2604804C1 (ru) | Способ определения безопасности пробиотических микроорганизмов с помощью клеточных тест-систем | |
| Akter et al. | Raw Milk In Noakhali, Bangladesh: Quality Assessment and Antibiotic Resistance of Identified Microorganisms. | |
| Rogachev et al. | METHODS OF STUDYG STAPHYLOCOCCAL INFECTION | |
| Al-Ani et al. | Hydatidosis of slaughtered sheep in Baghdad City; bacteriological study of infected hydatid cyst fluid | |
| RU2654669C1 (ru) | Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию | |
| Soliman et al. | Phenotypic characterization of food born bacteria isolated from different chicken organs in Al-Sharkia Governorate, Egypt | |
| RU2644248C2 (ru) | Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба | |
| JP3895658B2 (ja) | 黄色ブドウ球菌の迅速検出法 |