RU2570906C2

RU2570906C2 - 1-[ω-ARYLOXYALKYL(BENZYL)]-SUBSTITUTED 2-AMINOBENZIMIDAZOLES, HAVING ACTIVITY ON INFLUENZA VIRUS

Info

Publication number: RU2570906C2
Application number: RU2012123803/04A
Authority: RU
Inventors: Владимир Викторович Зарубаев; Людмила Николаевна Диваева; Любовь Антоновна Карпинская; Олег Иванович Киселев; Анатолий Савельевич Морковник
Priority date: 2012-06-07
Filing date: 2012-06-07
Publication date: 2015-12-20
Also published as: RU2012123803A

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to organic chemistry and particularly to novel benzimidazole derivatives of formula 1a-f:

,

where a, b X=N, R=4-ClC₆H₄OCH₂CH₂, Hal^- is absent, a) R¹ = 2-furoyl, b) R¹ = 2-thenoyl; c-h X=N⁺CH₂R², R¹=H, c) R=3,4-Cl₂C₆H₄CH₂, R²=CONH₂; Hal=Cl; d) R=4-FC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CONH₂; Hal=Cl; e) R=3,4-Cl₂C₆H₄CH₂, R²=CH₂OH; Hal=Cl; f) R=4-ClC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CH₂OH; Hal=Cl; g) R=4-FC₆H₄OCH₂CH₂CH₂, R²=CH=CH₂; Hal=Br; h) R=4-(CH₃)₃CC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CH=CH₂; Hal=Br.

EFFECT: obtaining novel compounds having anti-influenza virus activity.

1 tbl, 10 ex

Description

Изобретение относится к области биологически активных соединений, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых патогенным для человека вирусом гриппа, и касается разработки новых веществ - производных 1-[ω-арилоксиалкил(бензил)]замещенных 2-аминобензимидазолов. Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях, научно-исследовательских лабораториях, а также в животноводстве и птицеводстве.The invention relates to the field of biologically active compounds for the treatment and prevention of diseases caused by a human pathogenic influenza virus, and for the development of new substances derived from 1- [ω-aryloxyalkyl (benzyl)] substituted 2-aminobenzimidazoles. The invention can be used in medical institutions, research laboratories, as well as in livestock and poultry.

Актуальность поиска средств для терапии гриппа (семейство Orthomyxoviridae, род Influenzavirus) диктуется развитием пандемической ситуации в мире и опасностью появления в человеческой популяции высокопатогенных штаммов вируса гриппа, в частности подтипа H5N1. В настоящее время смертность от этой инфекции составляет порядка 70%, при этом заболевание, как и тяжелые формы гриппа другой этиологии, характеризуется острейшим началом и крайне тяжелым течением: высокой (более 40°C) температурой и длительной лихорадкой с резко выраженными симптомами интоксикации (сильной головной болью, ломотой, бессонницей, бредом, анорексией, тошнотой, рвотой, менингиальными симптомами, иногда энцефалитическим синдромом). Вариантом молниеносной формы может быть стремительное развитие геморрагического токсического отека легких и смертельный исход от дыхательной и сердечно-сосудистой недостаточности [Но P.L., Becker М., Chan-Yeung М.М., Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2007 11(7):710-21].The relevance of the search for funds for influenza therapy (the Orthomyxoviridae family, genus Influenzavirus ) is dictated by the development of a pandemic situation in the world and the danger of highly pathogenic influenza virus strains in the human population, in particular the H5N1 subtype. Currently, the death rate from this infection is about 70%, while the disease, like severe forms of influenza of another etiology, is characterized by an acute onset and extremely severe course: high (over 40 ° C) temperature and prolonged fever with pronounced intoxication symptoms (severe headache, aching, insomnia, delirium, anorexia, nausea, vomiting, meningeal symptoms, sometimes encephalitis syndrome). An option of fulminant form may be the rapid development of hemorrhagic toxic pulmonary edema and death from respiratory and cardiovascular failure [But PL, Becker M., Chan-Yeung MM, Int. J. Tuberc. Lung dis. 2007 11 (7): 710-21].

Вирионы гриппа представляют собой сферические или нитевидные частицы диаметром 80-100 нм, покрытые липидной оболочкой с интегрированными молекулами поверхностных гликопротеинов (НА и NA) и ионного канала М2, ассоциированной со слоем мембранного белка Ml. Сердцевина вирионов представлена 8 сегментами однонитевой РНК отрицательной полярности (вРНК), ассоциированной с тремя белками полимеразного комплекса (PA, РВ1, РВ2) и молекулами нуклеопротеина (NP).Influenza virions are spherical or filiform particles with a diameter of 80-100 nm, coated with a lipid membrane with integrated molecules of surface glycoproteins (HA and NA) and the ion channel M2 associated with the layer of membrane protein Ml. The virion core is represented by 8 segments of single-stranded RNA of negative polarity (vRNA) associated with three proteins of the polymerase complex (PA, PB1, PB2) and nucleoprotein (NP) molecules.

После проникновения в клетку и «раздевания» вириона сегменты генома попадают в цитоплазму, где вирусная полимераза осуществляет транскрипцию и репликацию вРНК. В результате образуются молекулы вирусспецифической матричной РНК (мРНК) и комплементарной РНК (кРНК) соответственно. На матрице кРНК впоследствии синтезируется цепь вРНК, входящая затем в состав вирионов потомства. мРНК транслируется при помощи клеточных механизмов с образованием структурных и неструктурных белков, первые из которых образуют вирионы потомства, а последние играют важные регуляторные функции в ходе жизненного цикла вируса.After penetration into the cell and “undressing” of the virion, segments of the genome enter the cytoplasm, where viral polymerase transcribes and replicates vRNA. As a result, molecules of virus-specific messenger RNA (mRNA) and complementary RNA (cRNA), respectively, are formed. On the cRNA matrix, the vRNA chain is subsequently synthesized, which then enters the progeny virions. mRNA is translated using cellular mechanisms with the formation of structural and non-structural proteins, the first of which form progeny virions, and the latter play important regulatory functions during the life cycle of the virus.

2. Предшествующий уровень техники.2. The prior art.

Вакцинация против гриппа является эффективным противоэпидемическим средством, однако вследствие постоянной смены антигенных свойств возбудителя требуется постоянный мониторинг и разработка новых вакцинных штаммов, соответствующих циркулирующим в человеческой популяции в каждый конкретный эпидемический сезон.Vaccination against influenza is an effective anti-epidemic agent, however, due to the constant change in the antigenic properties of the pathogen, constant monitoring and development of new vaccine strains corresponding to those circulating in the human population in each specific epidemic season is required.

Химиопрофилактика и химиотерапия гриппа применяются наряду с вакцинацией для предотвращения и лечения заболевания. Несмотря на наличие в жизненном цикле вируса множества компонентов, представляющих потенциальную мишень для специфической химиотерапии, на сегодняшний день лишь два из них используются в этом качестве.Chemoprophylaxis and chemotherapy for influenza are used along with vaccination to prevent and treat the disease. Despite the presence in the life cycle of the virus of many components that represent a potential target for specific chemotherapy, today only two of them are used in this capacity.

Во-первых, это белок М2 вируса гриппа, играющий роль ионного канала в вирусной мембране, который блокируют препараты адамантанового ряда - ремантадин (а-Метил-1-адамантил-метиламина гидрохлорид) и амантадин (1-аминоадамантан) [Scholtissek С, Quack G., Klenk H.D., Webster R.G., Antiviral Res. 1998, 37, 83-95].Firstly, it is the M2 protein of the influenza virus, which plays the role of an ion channel in the viral membrane, which is blocked by drugs of the adamantane series - remantadine (a-methyl-1-adamantyl-methylamine hydrochloride) and amantadine (1-aminoadamantane) [Scholtissek C, Quack G ., Klenk HD, Webster RG, Antiviral Res. 1998, 37, 83-95].

Другой мишенью для лекарственного вмешательства является вирусная нейраминидаза - фермент, необходимый для нормального почкования вирусных частиц и проявления инфекционных свойств вируса гриппа, против которой эффективны нейраминидазные ингибиторы занамивир (5-(ацетиламино)-4-[(аминоиминометил)-амино]-2,6-ангидро-3,4,5-тридезокси-D-глицеро-D-галакто-нон-2-еноновая кислота), озелтамивир (Тамифлю™) [Colman P.M., J. Antimicrob. Chemother. 1999 Nov;44 Suppl B:17-22] и перамивир (1S,2S,3S,4R)-3-[(1S)-1-ацетамидо-2-этил-бутил]-4-(диаминометилиденамино)-2-гидроксициклопентан-1-карбоновая кислота) [Mancuso С.Е., Gabay М.Р., Steinke L.M., VanOsdol S. J., Ann. Pharmacother. 2010 44(7-8): 1240-9].Another target for drug intervention is viral neuraminidase, an enzyme necessary for the normal budding of viral particles and the manifestation of the infectious properties of the influenza virus, against which the neuraminidase inhibitors zanamivir (5- (acetylamino) -4 - [(aminoiminomethyl) amino] -2,6 are effective anhydro-3,4,5-tridesoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-enonic acid), oseltamivir (Tamiflu ™) [Colman PM, J. Antimicrob. Chemother. 1999 Nov; 44 Suppl B: 17-22] and peramivir (1S, 2S, 3S, 4R) -3 - [(1S) -1-acetamido-2-ethyl-butyl] -4- (diaminomethylideneamino) -2-hydroxycyclopentane -1-carboxylic acid) [Mancuso C.E., Gabay M.P., Steinke LM, VanOsdol SJ, Ann. Pharmacother 2010 44 (7-8): 1240-9].

Обе группы соединений имеют свои недостатки.Both groups of compounds have their drawbacks.

В отношении группы производных адамантана можно отметить сравнительно высокую токсичность, узкий спектр действия (препараты активны против гриппа А, но не против гриппа В) и быстрое формирование устойчивости вируса к препаратам.In relation to the group of adamantane derivatives, one can note a relatively high toxicity, a narrow spectrum of action (the drugs are active against influenza A, but not against influenza B) and the rapid formation of virus resistance to drugs.

Для ингибиторов нейраминидазы характерны формирование резистентности вирусов и высокая стоимость синтеза, что делает эти препараты менее доступными для широкого использования.Neuraminidase inhibitors are characterized by the formation of virus resistance and the high cost of synthesis, which makes these drugs less accessible for widespread use.

Ограниченность выбора противовирусных препаратов является причиной низкой эффективности лечения острых и хронических вирусных инфекций [De Clercq Е., Nature Rev. Microbiol. 2004, 2, 704-720; De Clercq E., Nature Rev. Drug. Discov. 2007, Vol.6, p.1001 - 1018].The limited choice of antiviral drugs is the reason for the low effectiveness of the treatment of acute and chronic viral infections [De Clercq E., Nature Rev. Microbiol. 2004, 2, 704-720; De Clercq E., Nature Rev. Drug. Discov. 2007, Vol.6, p. 1001 - 1018].

Разнообразные патогенетические и симптоматические препараты, применяемые при лечении гриппа, направлены на корректировку только реактивных процессов в организме и не устраняют причину заболевания.A variety of pathogenetic and symptomatic drugs used in the treatment of influenza are aimed at correcting only reactive processes in the body and do not eliminate the cause of the disease.

Многочисленные химические соединения, не дошедшие до клинических испытаний, относятся к различным химическим классам, направлены на различные мишени в жизненном цикле вируса и демонстрируют различный уровень противогриппозной активности в клеточных культурах и в редких случаях лабораторных животных (Kim Yunjeong, Narayanan Sanjeev, Chang Kyeong-Ok, Antiviral Research 88 (2010) 227-235; Wolf Mike C, Freiberg Alexander N. et al, PNAS 2010, vol. 107, 3157-3162; Iwaia Yuma, Takahashib Hitoshi et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry 18 (2010) 5379-5390; Doncel Gustavo F., R. Clark Meredith Antiviral Research 88 (2010) 10-18; Pleschka St., Stein M., Schoop R. and Hudson J. В., Virology Journal 2009, 6:197; Song G., Yang S., Zhang W., Cao Y., Wang P., Ding N., Zhang Z., Guo Y., Li Y., J. Med. Chem. 2009, 52, 7368-7371).Numerous chemical compounds that have not reached clinical trials belong to different chemical classes, are aimed at different targets in the life cycle of the virus and exhibit different levels of anti-influenza activity in cell cultures and, in rare cases, laboratory animals (Kim Yunjeong, Narayanan Sanjeev, Chang Kyeong-Ok , Antiviral Research 88 (2010) 227-235; Wolf Mike C, Freiberg Alexander N. et al, PNAS 2010, vol. 107, 3157-3162; Iwaia Yuma, Takahashib Hitoshi et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry 18 (2010) 5379 -5390; Doncel Gustavo F., R. Clark Meredith Antiviral Research 88 (2010) 10-18; Pleschka St., Stein M., Schoop R. and Hudson J. B., Virology Journal 2009, 6: 197; Song G ., Yang S., Zhang W., Cao Y., Wang P., Ding N., Zhang Z., Guo Y., Li Y., J. Med. Chem. 2009, 52, 7368-7371).

Известен препарат нуклеозин, имеющий высокую степень сродства к белку NP вируса гриппа и эффективно ингибирующий его репликацию. Однако все изоляты вируса, вызвавшего пандемию 2009 г., оказались устойчивы к этому препарату (Као R. Y., Yang Dan, et al, Nature Biotechnology, 2010, 28, 6: 600-607).Known drug nucleosine having a high degree of affinity for the protein NP of the influenza virus and effectively inhibiting its replication. However, all isolates of the 2009 pandemic virus proved to be resistant to this drug (Kao R. Y., Yang Dan, et al, Nature Biotechnology, 2010, 28, 6: 600-607).

Известен также препарат Рибавирин, представляющий собой нуклеозидный аналог, эффективный против 85% РНК-геномных вирусов млекопитающих. Применение его ограничено побочными последствиями, преимущественно анемией, проявляющимися вследствие его сходства с субстратами клеточных ферментов. Являясь аналогом нуклеозидов, рибавирин эффективен в субтоксических концентрациях, и системное его применение вызывает побочные реакции, в частности анемию и тератогенный эффект при употреблении во время беременности. Преимущественно рибавирин в комбинации с интерфероном применяется при лечении гепатита, однако эффект его показан при местном (ингаляционном) применении в случае PC-вирусной и ранних стадий гриппозной инфекции.The drug Ribavirin is also known, which is a nucleoside analogue effective against 85% of mammalian RNA genomic viruses. Its use is limited by side effects, mainly anemia, manifested due to its similarity with the substrates of cellular enzymes. Being an analog of nucleosides, ribavirin is effective in subtoxic concentrations, and its systemic use causes side reactions, in particular anemia and teratogenic effect when used during pregnancy. Mostly ribavirin in combination with interferon is used in the treatment of hepatitis, however, its effect is indicated for local (inhalation) use in the case of PC-virus and early stages of influenza infection.

Тем не менее, при появлении случаев заболевания человека атипичной пневмонией (SARS), а позднее - гриппом птиц подтипа H5N1 рибавирин использовался внутривенно при терапии тяжелых случаев заболевания. После использования рибавирина были отмечены случаи облегчения болезни и полного выздоровления пациентов.However, in cases of human atypical pneumonia (SARS), and later with bird flu of the H5N1 subtype, ribavirin was used intravenously in the treatment of severe cases of the disease. After using ribavirin, cases of relief of the disease and complete recovery of patients were noted.

Рибавирин является препаратом комплексного механизма действия. Он влияет на репликацию вируса гриппа двумя путями - прямо, вмешиваясь в полимеразные процессы при транскрипции и репликации вирусного генома, и опосредованно - угнетая клеточный фермент инозинмонофосфатдегидрогеназу и истощая тем самым клеточный пул ГТФ, необходимого для построения вирусных РНК. Поскольку основная мишень препарата - не вирусный, а клеточный фермент, то устойчивые к рибавирину штаммы вируса гриппа отмечаются крайне редко или не обнаруживаются вообще. В то же время существенные побочные эффекты (согласно рекомендациям FDA - 129 разновидностей) позволяют рекомендовать его только при тяжелых состояниях больных гриппом (DeClercq Е. //Nat. Rev. Drug Discov. 2006; 5: 1015-25; Beigel J., Bray M. //Antiviral Research 2008; 78:91-102).Ribavirin is a drug of a complex mechanism of action. It affects the replication of the influenza virus in two ways - directly by interfering with the polymerase processes during transcription and replication of the viral genome, and indirectly by inhibiting the cellular enzyme inosine monophosphate dehydrogenase and thereby depleting the cell pool of GTP necessary for building viral RNA. Since the main target of the drug is not a viral, but a cellular enzyme, influenza virus strains resistant to ribavirin are extremely rare or not detected at all. At the same time, significant side effects (according to the recommendations of the FDA - 129 varieties) allow us to recommend it only in severe conditions of patients with influenza (DeClercq E. // Nat. Rev. Drug Discov. 2006; 5: 1015-25; Beigel J., Bray M. // Antiviral Research 2008; 78: 91-102).

Близкими аналогами изобретения являются как рибавирин, так и разработанный японскими исследователями препарат Т-705 (фавипиравир), представляющий собой высокоэффективный противовирусный аналог нуклеозида, ингибирующий вирусные полимеразы (Furuta Yousuke, Takahashi Kazumi, Shiraki Kimiyasu, Sakamoto Kenichi, Smee D.F, Barnard D. L., Gowen В. B, Julander J. G, Morrey J. D., Antiviral Research, 2009, 82, 95-102). Несмотря на высокую эффективность, точный механизм его действия не выяснен, а его химическая природа как нуклеотидного аналога предполагает, по аналогии с Рибавирином, побочные последствия при широком клиническом применении.Close analogues of the invention are both ribavirin and the drug T-705 (favipiravir) developed by Japanese researchers, which is a highly effective antiviral analog of nucleoside that inhibits viral polymerases (Furuta Yousuke, Takahashi Kazumi, Shiraki Kimiyasu, Sakamoto Kenichi, Smee DF Gow, Darn B. B, Julander J. G, Morrey JD, Antiviral Research, 2009, 82, 95-102). Despite its high efficiency, the exact mechanism of its action has not been elucidated, and its chemical nature as a nucleotide analogue suggests, by analogy with Ribavirin, side effects with widespread clinical use.

Задачей изобретения является расширение ассортимента ингибиторов репродукции вируса гриппа, обладающих высокой эффективностью и низкой токсичностью. Задача решается применением в качестве ингибиторов репродукции вируса гриппа арилоксиалкилзамещенных 2-аминобензимидазола.The objective of the invention is to expand the range of inhibitors of reproduction of the influenza virus, with high efficiency and low toxicity. The problem is solved by the use of aryloxyalkyl substituted 2-aminobenzimidazole as inhibitors of influenza virus reproduction.

В ряду бензимидазолов имеется много примеров структур, обладающих противовирусным действием, которые часто относятся к классу нуклеозидов [Xue F., Luo X., Ye С, Ye W., Wang Y.//Bioorg. Med. Chem. 2011; 19(8): 2641-9; Prichard M.N. Frederick S.L., Daily S., Borysko K.Z., Townsend L.B., Drach J.C. Kern E.R.// Antimicrob Agents Chemother. 2011;55(5):2442-5; Tonelli M., Simone M., Tasso В., Novelli F., Boido V., Sparatore F., Paglietti G., Pricl S., Giliberti G., Blois S., Ibba C, Sanna G., Loddo R., La Colla P.//Bioorg Med Chem. 2010; 18(8): 2937-53]. Однако такие производные нередко имеют недостаточно высокую активность, активность узкого спектра либо значительную токсичность. Эти особенности ограничивают их применение жизненными показаниями и не позволяют использовать их для терапии широко распространенных инфекций, в частности гриппа.Among the benzimidazoles, there are many examples of structures with antiviral activity, which often belong to the class of nucleosides [Xue F., Luo X., Ye C, Ye W., Wang Y.// Bioorg. Med. Chem. 2011; 19 (8): 2641-9; Prichard M.N. Frederick S.L., Daily S., Borysko K.Z., Townsend L. B., Drach J.C. Kern E.R. // Antimicrob Agents Chemother. 2011; 55 (5): 2442-5; Tonelli M., Simone M., Tasso B., Novelli F., Boido V., Sparatore F., Paglietti G., Pricl S., Giliberti G., Blois S., Ibba C, Sanna G., Loddo R. , La Colla P. // Bioorg Med Chem. 2010; 18 (8): 2937-53]. However, such derivatives often have insufficiently high activity, narrow spectrum activity, or significant toxicity. These features limit their use to vital indications and do not allow their use for the treatment of widespread infections, in particular influenza.

Раскрытие изобретения.Disclosure of the invention.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является нахождение нового класса химических соединений, обладающих выраженной активностью против вируса гриппа. Указанный технический результат достигается тем, что для этой цели предложено использовать производные 1-ω-арилоксиалкил-замещенных 2-аминобензимидазолов и их фиксированных иминотаутомерных форм - 3-R-производных 1-ω-арилоксиалкил- и бензилзамещенных 2-иминобензимидазолина, имеющих общую формулу 1:The technical result of the invention is to find a new class of chemical compounds with pronounced activity against influenza virus. The specified technical result is achieved by the fact that for this purpose it is proposed to use derivatives of 1-ω-aryloxyalkyl-substituted 2-aminobenzimidazoles and their fixed iminotautomeric forms - 3-R-derivatives of 1-ω-aryloxyalkyl- and benzyl-substituted 2-iminobenzimidazoline having the general formula 1 :

а, б X=N, R=4-ClC₆H₄OCH₂CH₂, Hal^- отсутствует, a) R¹ = 2-фуроил, б) R¹ = 2-теноил; a, b X = N, R = 4-ClC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , Hal ^- absent, a) R ¹ = 2-furoyl, b) R ¹ = 2-tenoyl;

в-з X=N⁺CH₂R², R¹=H, в) R=3,4-Cl₂C₆H₄CH₂, R²=CONH₂; Hal=Clcz X = N ⁺ CH ₂ R ² , R ¹ = H, c) R = 3,4-Cl ₂ C ₆ H ₄ CH ₂ , R ² = CONH ₂ ; Hal = Cl

г) R=4-FC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CONH₂; Hal=Cld) R = 4-FC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CONH ₂ ; Hal = Cl

д) R=3,4-Cl₂C₆H₄CH₂, R²=CH₂OH; Hal=Cld) R = 3,4-Cl ₂ C ₆ H ₄ CH ₂ , R ² = CH ₂ OH; Hal = Cl

е) R=4-ClC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CH₂OH; Hal=Cle) R = 4-ClC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CH ₂ OH; Hal = Cl

ж) R=4-FC₆H₄OCH₂CH₂CH₂, R²=CH=CH₂; Hal=Brg) R = 4-FC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ , R ² = CH = CH ₂ ; Hal = Br

з) R=4-(CH₃)₃CC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CH=CH₂; Hal=Brh) R = 4- (CH ₃ ) ₃ CC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CH = CH ₂ ; Hal = Br

Соединения 1а, б синтезируют из 2-аминобензимидазола (3) путем алкилирования его 2-(4-хлорфенокси)этилбромидом в щелочной среде с последующим N-ацилированием образующегося 1-[2-(4-хлорфеноксиэтил)]-2-аминобензимидазола (4) хлорангидридами фуран- и тиофенкарбоновых кислот:Compounds 1a, b are synthesized from 2-aminobenzimidazole (3) by alkylating it with 2- (4-chlorophenoxy) ethyl bromide in an alkaline medium followed by N-acylation of the resulting 1- [2- (4-chlorophenoxyethyl)] - 2-aminobenzimidazole ( 4 ) furan and thiophenecarboxylic acid chlorides:

Соединения 1в-з также синтезируют из 1-замещенных-2-аминобензимидазолов, кватернизуя их амидом хлоруксусной кислоты (соединения 1в, 1г), этиленхлоргидрином (соединения 1д, е). Четвертичные соли 1ж, з получены путем взаимодействия 1-аллил-2-аминобензимидазола и соответствующих ω-арилоксиалкилбромидов.Compounds 1c-3 are also synthesized from 1-substituted-2-aminobenzimidazoles, quaternizing them with chloroacetic acid amide (compounds 1c, 1d ), ethylene chlorohydrin (compounds 1d, f ). The quaternary salts 1g, h were obtained by reacting 1-allyl-2-aminobenzimidazole and the corresponding ω-aryloxyalkyl bromides.

в) R=3,4-Cl₂C₆H₄CH₂, R²=CONH₂; Hal=Cl^- c) R = 3,4-Cl ₂ C ₆ H ₄ CH ₂ , R ² = CONH ₂ ; Hal = Cl ^-

г) R=4-FC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CONH₂; Hal=Cl^- d) R = 4-FC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CONH ₂ ; Hal = Cl ^-

д) R=3,4-Cl₂C₆H₄CH₂, R²=CH₂OH; Hal=Cl^- d) R = 3,4-Cl ₂ C ₆ H ₄ CH ₂ , R ² = CH ₂ OH; Hal = Cl ^-

е) R=4-ClC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CH₂OH; Hal=Cl^- e) R = 4-ClC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CH ₂ OH; Hal = Cl ^-

ж) R=4-FC₆H₄OCH₂CH₂CH₂, R²=CH=CH₂; Hal=Br^- g) R = 4-FC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ , R ² = CH = CH ₂ ; Hal = Br ^-

з) R=4-(CH₃)₃CC₆H₄OCH₂CH₂, R²=CH=CH₂; Hal=Br^- h) R = 4- (CH ₃ ) ₃ CC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CH = CH ₂ ; Hal = Br ^-

Четвертичные соли 1в-з могут находится в виде двух таутомерных форм - аминой (А) и иминной (В).Quaternary salts 1b-3 can be in the form of two tautomeric forms - amine (A) and imine (B).

Заявляемые соединения представляют собой бесцветные или бледно-бежевые кристаллические высокоплавкие вещества, растворимые в метаноле, ацетоне, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, умеренно растворимые или нерастворимые в воде. Данные элементного анализа и ЯМР-спектроскопии полностью соответствуют приведенным выше структурным формулам.The inventive compounds are colorless or pale beige crystalline high-melting substances soluble in methanol, acetone, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, sparingly soluble or insoluble in water. The data of elemental analysis and NMR spectroscopy are fully consistent with the above structural formulas.

Исследования биологической активности соединений, проведенные в отношении вируса гриппа, показали их высокую эффективность как ингибиторов репродукции этого вируса. В результате исследований выявлено, что соединения 1в, 1д, 1е, 1з наиболее активно влияют на репродукцию вируса гриппа, что подтверждается приведенными ниже данными.Studies of the biological activity of the compounds conducted against the influenza virus have shown their high efficiency as inhibitors of the reproduction of this virus. As a result of studies, it was found that compounds 1c, 1d, 1e, 1z most actively affect the reproduction of the influenza virus, which is confirmed by the data below.

Полученные количественные показатели ингибирования подтверждают высокую степень подавления репликации вируса гриппа в культуре клеток MDCK изученными соединениями, превышающую, например, тот же показатель у эталона сравнения - ремантадина в 12-68 раз.The obtained quantitative indicators of inhibition confirm the high degree of suppression of influenza virus replication in the MDCK cell culture with the studied compounds, which exceeds, for example, the same indicator in the reference standard - remantadine by 12-68 times.

Важным преимуществом соединений типа 1 является то, что некоторые из них одновременно обладают и высокой антимикробной активностью, главным образом, в отношении грамположительных патогенных бактерий, в том числе резистентных к используемым в настоящее время антимикробным препаратам [Морковник А.С., Диваева Л.Н., Зубенко А.А., Подладчикова О.Н., Фетисов Л.Н., Акопова А.Р., Пат. РФ №2423355].An important advantage of type 1 compounds is that some of them simultaneously possess high antimicrobial activity, mainly against gram-positive pathogenic bacteria, including those that are resistant to currently used antimicrobial agents [Morkovnik AS, Divaeva L.N. ., Zubenko A.A., Podladchikova O.N., Fetisov L.N., Akopova A.R., Pat. RF №2423355].

Противовирусные свойства синтезированных соединений в отношении вирусов гриппа изучались в культуре клеток MDCK на модели экспериментальной гриппозной инфекции, вызванной вирусами гриппа человека A(H1N1)pdm09.The antiviral properties of the synthesized compounds against influenza viruses were studied in an MDCK cell culture using a model of experimental influenza infection caused by human influenza A (H1N1) pdm09 viruses.

Испытание 1-арилоксиалкилпроизводных 2-аминобензимидазола 1 в опытах по угнетению репликации вирусов гриппа выявило, что эти соединения эффективно снижают инфекционную активность вируса гриппа человека A(H1N1)pdm09 (наименьшее значение EC₅₀ составляет 0,3 мкг/мл). В качестве сравнения использован противовирусный препарат ремантадин.A test of 1-aryloxyalkyl derivatives of 2-aminobenzimidazole 1 in experiments to inhibit the replication of influenza viruses revealed that these compounds effectively reduce the infectious activity of human influenza A (H1N1) pdm09 virus (the lowest EC ₅₀ value is 0.3 μg / ml). The antiviral drug remantadine was used as a comparison.

Результаты испытаний представлены в таблице.The test results are presented in the table.

Как видно из представленных данных, изученные соединения проявляли в среднем сопоставимый уровень токсичности по сравнению с существующим противовирусным препаратом ремантадином, что выражалось в более высоких значениях 50% цитотоксических концентраций (CTD₅₀) - от 6,3 до 829 мкг/мл. В то же время уровень противовирусной активности был намного выше (EC₅₀=0.3-2.7, у препарата сравнения ремантадина - 12). На основании полученных результатов был рассчитан индекс селективности - отношение CTD₅₀ к EC₅₀. За редким исключением, противовирусная активность производных аминобензимидазола была существенной, что выражалось в высоких значениях индекса селективности (24-340), и была намного выше, чем у препарата сравнения - ремантадина (индекс селективности 5,0).As can be seen from the data presented, the studied compounds showed an average comparable level of toxicity compared to the existing antiviral drug remantadine, which was expressed in higher values of 50% cytotoxic concentrations (CTD ₅₀ ) - from 6.3 to 829 μg / ml. At the same time, the level of antiviral activity was much higher (EC ₅₀ = 0.3-2.7, in the comparison drug remantadine - 12). Based on the results obtained, the selectivity index was calculated - the ratio of CTD ₅₀ to EC ₅₀ . With rare exceptions, the antiviral activity of aminobenzimidazole derivatives was significant, which was expressed in high selectivity indices (24-340), and was much higher than that of the reference drug remantadine (selectivity index 5.0).

Представленные данные, таким образом, убедительно подтверждают вывод, что в условиях проведенных экспериментов 1-арилоксиалкилпроизводные 2-аминобензимидазола 1 проявляют высокую противовирусную активность в отношении вируса гриппа человека, ингибируя репликацию вируса H1N1 в 5-68 раз сильнее, чем препарат сравнения - ремантадин.The presented data, thus, convincingly confirm the conclusion that, under the conditions of the experiments, the 1-aryloxyalkyl derivatives of 2-aminobenzimidazole 1 exhibit high antiviral activity against human influenza virus, inhibiting the replication of the H1N1 virus 5-68 times more than the reference drug remantadine.

Дополнительным и весьма важным преимуществом соединений типа 1 является то, что некоторые из них обладают еще и высокой антимикробной активностью, главным образом, по отношению к грамположительным патогенным бактериям, в том числе к их резистентным формам [Морковник А.С., Диваева Л.Н., Зубенко А.А., Подладчикова О.Н., Фетисов Л.Н., Акопова А.Р., Пат. РФ №2423355].An additional and very important advantage of type 1 compounds is that some of them also have high antimicrobial activity, mainly in relation to gram-positive pathogenic bacteria, including their resistant forms [A. Morkovnik, L. Divaeva ., Zubenko A.A., Podladchikova O.N., Fetisov L.N., Akopova A.R., Pat. RF №2423355].

Отмеченные преимущества заявляемого класса соединений делают этот класс соединений перспективным для использования в качестве фармпрепаратов для борьбы с гриппозной инфекцией.The noted advantages of the claimed class of compounds make this class of compounds promising for use as pharmaceuticals for the fight against influenza infection.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. 1-[2-(4-Хлорфеноксиэтил)]-2-(фуроил-2)-аминобензимидазол (1а).Example 1. 1- [2- (4-Chlorophenoxyethyl)] - 2- (furoyl-2) -aminobenzimidazole (1a).

Стадия 1. 1-[2-(4-Хлорфеноксиэтил)]-2-аминобензимидазол.Stage 1. 1- [2- (4-Chlorophenoxyethyl)] - 2-aminobenzimidazole.

Синтез этого соединения проводился по методике, описанной ранее [Морковник А.С., Диваева Л.Н., Зубенко А.А., Подладчикова О.Н., Фетисов Л.Н., Акопова А.Р., Пат. РФ 2423355]. Т. пл. 183 - 184°С (из ацетонитрила).The synthesis of this compound was carried out according to the method described previously [Morkovnik A.S., Divaev L.N., Zubenko A.A., Podladchikova O.N., Fetisov L.N., Akopova A.R., Pat. RF 2423355]. T. pl. 183 - 184 ° C (from acetonitrile).

Стадия 2. 1-[2-(4-Хлорфеноксиэтил)]-2-(фуроил-2)-аминобензимидазол.Stage 2. 1- [2- (4-Chlorophenoxyethyl)] - 2- (furoyl-2) -aminobenzimidazole.

К нагретому до 50°C раствору 1.4 г (5 ммоль) 2-амино-1-[2-(4-хлорфеноксиэтил)]бензимидазола в смеси 5 мл ацетонитрила и 2 мл пиридина прибавляют 0.78 г (6 ммоль) хлорангидрида пирослизиевой кислоты. Сразу же начинается выделение осадка. Смесь кипятят 2 часа, охлаждают, добавляют 2 мл воды и продукт отфильтровывают. Выход 1.5 г (79%). Далее его очищают на колонке с окисью алюминия в хлороформе (R_f0,6). Светло-бежевые кристаллы с т.пл. 183-184°C (из толуола). Спектр ЯМР ¹Н (300 МГц), δ, м.д. (CDCl₃): 4.38 (т, 2Н, NCH₂); 4.58 (т, 2Н, ОСН₂); 6.44 (т, 1Н, протон 4-Н фурильной группы); 6.78 (д, 2Н, орто-Н пара-фениленовой группы); 7.15 - 7.38 (м, 6Н, 2 мета-Н пара-фениленовой группы +5,6,7-Н + протон 5-Н фурильной группы); 7.40 (д, 1Н, 4-Н), 7.55 (с, 1Н, протон 3-Н фурильной группы), 12.02 To a solution of 1.4 g (5 mmol) of 2-amino-1- [2- (4-chlorophenoxyethyl)] benzimidazole in a mixture of 5 ml of acetonitrile and 2 ml of pyridine heated to 50 ° C, 0.78 g (6 mmol) of pyroslytic acid chloride is added. Precipitation immediately begins. The mixture is boiled for 2 hours, cooled, 2 ml of water are added and the product is filtered off. Yield 1.5 g (79%). Then it is purified on a column of alumina in chloroform (R _f 0.6). Light beige crystals with so pl. 183-184 ° C (from toluene). ¹ H NMR spectrum (300 MHz), δ, ppm (CDCl ₃ ): 4.38 (t, 2H, NCH ₂ ); 4.58 (t, 2H, OCH ₂ ); 6.44 (t, 1H, proton 4-H of the furyl group); 6.78 (d, 2H, ortho- H of the para- phenylene group); 7.15 - 7.38 (m, 6H, 2 meta -H para- phenylene group + 5,6,7-H + 5-H proton of the furyl group); 7.40 (d, 1H, 4-H), 7.55 (s, 1H, proton 3-H of the furyl group), 12.02

(с, 1Н, NH). Элементный анализ. Найдено (%): С 62.64; Н 4.40; Сl 9.09; N 10.66. C₂₀H₁₆ClH₃O₃. Вычислено (%): С 62.91; Н 4.22; С1 9.29; N 11.01.(s, 1H, NH). Elemental analysis. Found (%): C 62.64; H 4.40; Cl 9.09; N, 10.66. C ₂₀ H ₁₆ ClH ₃ O ₃ . Calculated (%): C 62.91; H 4.22; C1 9.29; N, 11.01.

Пример 2. 1-[2-(4-Хлорфеноксиэтил)]-2-(теноил-2)-аминобензимидазол (1б).Example 2. 1- [2- (4-Chlorophenoxyethyl)] - 2- (tenoyl-2) -aminobenzimidazole (1b).

Получают аналогично соединению 1а из 1-[2-(4-хлорфеноксиэтил)]-2-аминобензимидазола и хлорангидрида тиофенкарбоновой кислоты с выходом 67%. Бесцветные кристаллы с т.пл. 204-206°C (из толуола). Спектр ЯМР ¹Н (300 МГц), δ, м.д (CDCl₃): 4.36 (т, 2Н, NCH₂); 4.55 (т, 2Н, ОСН₂), 6.82 (д, 2Н, орто-H ArO,); 7.02 (т, 2Н, мета-H ArO); 7.15-7.18 (м, 3Н, 5,6-H_{бензимидазол}+ 4-H_тиофен), 7.41 (дд, 2Н, 7-H_{бензимидазол}+ 5-H_тиофен), 7.52 (д, 1Н, (4-H_{бензимидазол}); 7.95 (д, 1Н, 3-H_тиофен), 12.52 (с, 1Н, NH). Элементный анализ. Найдено (%): С 60.14; Н 3.88; N 10.22. C₂₀H₁₆ClN₃O₂S. Вычислено (%): С 60.37; Н 4.05; N 10.56.Prepared analogously to compound 1a from 1- [2- (4-chlorophenoxyethyl)] - 2-aminobenzimidazole and thiophenecarboxylic acid chloride in 67% yield. Colorless crystals with so pl. 204-206 ° C (from toluene). ¹ H NMR spectrum (300 MHz), δ, ppm (CDCl ₃ ): 4.36 (t, 2H, NCH ₂ ); 4.55 (t, 2H, OCH ₂ ); 6.82 (d, 2H, ortho- H ArO,); 7.02 (t, 2H, meta- H ArO); 7.15-7.18 (m, 3H, 5,6-H _{benzimidazole} + 4-H _thiophene ), 7.41 (dd, 2H, 7-H _{benzimidazole} + 5-H _thiophene ), 7.52 (d, 1H, (4-H _{benzimidazole} ) ; 7.95 (d, 1H, 3-H _thiophene ), 12.52 (s, 1H, NH). Elemental analysis. Found (%): C 60.14; H 3.88; N 10.22. C ₂₀ H ₁₆ ClN ₃ O ₂ S. Calculated (%): C 60.37; H 4.05; N 10.56.

Пример 3. 2-Имино-1-(3,4-дихлорбензил)-3-карбоксамидометилбензимидазолина гидрохлорид (1в)Example 3. 2-Imino-1- (3,4-dichlorobenzyl) -3-carboxamidomethylbenzimidazoline hydrochloride (1B)

Стадия 1. 2-Амино-1-(3,4-дихлорбензил)бензимидазол. Раствор 0.67 г КОН, 1.31 г (10 ммоль) 2-аминобензимидазола в 15 мл ДМСО перемешивают при 35°C 15 минут, а затем прикапывают 2,20 г (10 ммоль) 3,4-дихлорбензилбромида с такой скоростью, чтобы температура реакции не превышала 50°C. Смесь выдерживают при этой температуре 30 минут, охлаждают и постепенно добавляют 40 мл воды. При этом выпавший в процессе бензилирования обильный кристаллический осадок сначала растворяется, а затем выпадает ватообразный объемный осадок 2-амино-1-(3,4-дихлорбензил)бензимидазола, который фильтруют, промывают 5% раствором КОН, водой и высушивают. Выход 2.16 г (74%). Бесцветные мелкие кристаллы с т.пл. 186-186°C (из изопропанола). Спектр ЯМР ¹H, (300 МГц), δ, м.д. (CDCl₃): 4.52 (уш. с, 2Н, NH₂); 5.09 (с, 2Н, СН₂); 6.95-7.26 (м, 5Н, 3H Bn + 5,6-H_{бензимидазол}); 7.36 (д, 1Н, 7-H_{бензимидазол}); 7.48 (д, 1Н, 4-H_{бензимидазол}). Элементный анализ. Найдено (%): С 57.21; Н 3.46; Cl 23.87; N 14.40. C₁₄H₁₁Cl₂N₃. Вычислено (%): С 57.55; Н 3.79; С1 24.27; N 14.38.Stage 1. 2-amino-1- (3,4-dichlorobenzyl) benzimidazole. A solution of 0.67 g of KOH, 1.31 g (10 mmol) of 2-aminobenzimidazole in 15 ml of DMSO was stirred at 35 ° C for 15 minutes, and then 2.20 g (10 mmol) of 3,4-dichlorobenzyl bromide was added dropwise so that the reaction temperature did not exceeded 50 ° C. The mixture is kept at this temperature for 30 minutes, cooled and 40 ml of water are gradually added. In this case, an ample crystalline precipitate formed during benzylation first dissolves and then a cotton-like volume precipitate of 2-amino-1- (3,4-dichlorobenzyl) benzimidazole precipitates, which is filtered, washed with a 5% KOH solution, water and dried. Yield 2.16 g (74%). Colorless small crystals with so pl. 186-186 ° C (from isopropanol). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (CDCl ₃ ): 4.52 (br s, 2H, NH ₂ ); 5.09 (s, 2H, CH ₂ ); 6.95-7.26 (m, 5H, 3H Bn + 5,6-H _{benzimidazole} ); 7.36 (d, 1H, 7-H _{benzimidazole} ); 7.48 (d, 1H, 4-H _{benzimidazole} ). Elemental analysis. Found (%): C 57.21; H 3.46; Cl 23.87; N, 14.40. C ₁₄ H ₁₁ Cl ₂ N ₃ . Calculated (%): C 57.55; H 3.79; C1 24.27; N, 14.38.

Стадия 2. 2-Имино-1-(3,4-дихлорбензил)-3-карбоксамидометилбензимидазолина гидрохлорид.Stage 2. 2-Imino-1- (3,4-dichlorobenzyl) -3-carboxamidomethylbenzimidazoline hydrochloride.

К раствору 1.46 г (10 ммоль) 2-амино-1-(3,4-дихлорбензил)бензимидазола в 10 мл ДМФА при температуре 80°C прибавляют 0.47 г (10 ммоль) амида хлоруксусной кислоты и выдерживают при температуре 120°C 1 час. Реакционную массу охлаждают, фильтруют 3.70 г (96%) гидрохлорида 2-имино-1-(3,4-дихлорбензил)-3-карбоксамидометилбензимидазолина. Полученный в этих условиях продукт не требует дополнительной очистки. Т. пл. 289.5-290.5°C (из этанола). Спектр ЯМР ¹H, (300 МГц), δ, м.д. (DMSO-d₆): 4.92 (с, 2Н, CH₂Bn); 5.55 (с, 2Н, СН₂СО); 7.28-7.34 (м, 3H, Bn); 7.46-7.60 (м, 3H, 5,6,7-H_{бензимидазол}); 7.64 (д, 1Н, 4-H_{бензимидазол}); 9,25 (с, 2Н, =N⁺H₂). Элементный анализ. Найдено (%): С 49.49; Н 3.65; N 14.40. C₁₆F₁₅Cl₃N₄O. Вычислено (%): С 49.83; Н 3.92; N 14.53.To a solution of 1.46 g (10 mmol) of 2-amino-1- (3,4-dichlorobenzyl) benzimidazole in 10 ml of DMF at a temperature of 80 ° C, 0.47 g (10 mmol) of chloroacetic acid amide was added and kept at a temperature of 120 ° C for 1 hour . The reaction mass is cooled, 3.70 g (96%) of 2-imino-1- (3,4-dichlorobenzyl) -3-carboxamidomethylbenzimidazoline hydrochloride is filtered. The product obtained under these conditions does not require additional purification. T. pl. 289.5-290.5 ° C (from ethanol). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (DMSO-d ₆ ): 4.92 (s, 2H, CH ₂ Bn); 5.55 (s, 2H, CH ₂ CO); 7.28-7.34 (m, 3H, Bn); 7.46-7.60 (m, 3H, 5,6,7-H _{benzimidazole} ); 7.64 (d, 1H, 4-H _{benzimidazole} ); 9.25 (s, 2H, = N ⁺ H ₂ ). Elemental analysis. Found (%): C 49.49; H 3.65; N, 14.40. C ₁₆ F ₁₅ Cl ₃ N ₄ O. Calculated (%): C 49.83; H 3.92; N, 14.53.

Пример 4. 2-Имино-1-[2-(4-фторфеноксиэтил)]-3-карбоксамидометилбензимидазолина гидрохлорид (1г)Example 4. 2-Imino-1- [2- (4-fluorophenoxyethyl)] - 3-carboxamidomethylbenzimidazoline hydrochloride (1g)

Получен из 1-[2-(4-фторфеноксиэтил)]-2-аминобензимидазола и амида хлоруксусной кислоты с выходом 65%. Белоснежные пластинки с т.пл. 253-254.5°C (из этанола). Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц), δ, м.д. (DMSO-d₆): 4.25 (т, 2Н, NCH₂CH₂OAr); 4.65 (т, 2Н, CH₂OAr); 4.98 (т, 2Н, СН₂СО); 6.75 (д, 2Н, орто-R ArO); 6.82-6.95 (м, 4Н, 2 мета-H ArO + 5,6-H_{бензимидазол}); 7.25 - 7.40 (м, 2Н, 7-H_{бензимидазол}+ 1H, CONH₂); 7.48 (д, 1Н, 4-H_{бензимидазол}); 7.90 (с, 1H, CONH₂); 9.65 (с, 2Н, =N⁺H₂). Элементный анализ. Найдено (%): С 55.64; Н 4.67; N 15.00. C₁₇H₁₈ClFN₄O₂. Вычислено (%): С 55.97; Н 4.98; N 15.36.Obtained from 1- [2- (4-fluorophenoxyethyl)] - 2-aminobenzimidazole and chloroacetic amide in 65% yield. Snow-white plates with so pl. 253-254.5 ° C (from ethanol). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (DMSO-d ₆ ): 4.25 (t, 2H, NCH ₂ CH ₂ OAr); 4.65 (t, 2H, CH ₂ OAr); 4.98 (t, 2H, CH ₂ CO); 6.75 (d, 2H, ortho- R ArO); 6.82-6.95 (m, 4H, 2 meta- H ArO + 5,6-H _{benzimidazole} ); 7.25 - 7.40 (m, 2H, 7-H _{benzimidazole} + 1H, CONH ₂ ); 7.48 (d, 1H, 4-H _{benzimidazole} ); 7.90 (s, 1H, CONH ₂ ); 9.65 (s, 2H, = N ⁺ H ₂ ). Elemental analysis. Found (%): C 55.64; H 4.67; N 15.00. C ₁₇ H ₁₈ ClFN ₄ O ₂ . Calculated (%): C 55.97; H 4.98; N, 15.36.

Пример 5. 2-Имино-1-(3,4-дихлорбензил)-3-(2-гидроксиэтил)бензимидазолина гидрохлорид (1д)Example 5. 2-Imino-1- (3,4-dichlorobenzyl) -3- (2-hydroxyethyl) benzimidazoline hydrochloride (1e)

Нагретый до 50°C раствор 2.92 г (10 ммоль) 2-амино-1-(3,4-дихлорбензил)бензимидазола в 20 мл ДМФА смешивают с 1.61 г (20 ммоль, 1,34 мл) этиленхлоргидрина и полученную реакционную массу кипятят 1 час. Охлаждают, фильтруют мелкие белоснежные кристаллы и тщательно промывают их ацетоном. Выход 3.64 г (91%). Т. пл. 225.5-226.5°C (из смеси метанол ДМФА 5:1). Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц), δ, м.д. (DMSO-d₆): 3.78 (т, 2Н, NCH₂Bn); 4.50 (т, 2H, NCH₂CH₂OH; 4.70-5.30 (уш.с, 1H, ОН); 5.50 (т, 2Н,CH₂OH; 6.55 (т, 2Н, орто-H Bn); 7.00-7.25 (м, 4Н, 5,6,7-H_{бензимидазол}+ 1 мета-Н Bn); 7.60 (д, 1Н, 4-H_{бензимидазол}); 9.35-9.80 (уш. с, 2Н, =N⁺H₂). Элементный анализ. Найдено (%): С 50.79; Н 4.66; N 11.58. C₁₆H₁₆Cl₃N₃O. Вычислено (%): С 51.57; Н 4.33; N 11.27.A solution of 2.92 g (10 mmol) of 2-amino-1- (3,4-dichlorobenzyl) benzimidazole in 20 ml of DMF, heated to 50 ° C, is mixed with 1.61 g (20 mmol, 1.34 ml) of ethylene chloride and the resulting reaction mass is boiled 1 hour. Cool, filter small white crystals and wash them thoroughly with acetone. Yield 3.64 g (91%). T. pl. 225.5-226.5 ° C (from a mixture of methanol DMF 5: 1). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (DMSO-d ₆ ): 3.78 (t, 2H, NCH ₂ Bn); 4.50 (t, 2H, NCH ₂ CH ₂ OH; 4.70-5.30 (br s, 1H, OH); 5.50 (t, 2H, CH ₂ OH; 6.55 (t, 2H, ortho- H Bn); 7.00-7.25 (m, 4H, 5,6,7-H _{benzimidazole} + 1 meta-H Bn); 7.60 (d, 1H, 4-H _{benzimidazole} ); 9.35-9.80 (br s, 2H, = N ⁺ H ₂ ). Elemental analysis Found (%): C 50.79; H 4.66; N 11.58. C ₁₆ H ₁₆ Cl ₃ N ₃ O. Calculated (%): C 51.57; H 4.33; N 11.27.

Пример 6. 2-Имино-1-[2-(4-хлорфеноксиэтил)]-3-(2-гидроксиэтил)бензимидазолина гидрохлорид (1е).Example 6. 2-Imino-1- [2- (4-chlorophenoxyethyl)] - 3- (2-hydroxyethyl) benzimidazoline hydrochloride (1e).

Получают аналогично соединению 1д по вышеописанной методике из 1-[2-(4-хлорфеноксиэтил)]-2-аминобензимидазола и этиленхлогидрина с выходом 73%. Бесцветные мелкие кристаллы с т.пл. 225-226°C (из этанола). Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц), δ, м.д. (DMSO-d₆): 3.75 (т, 2Н, NCH₂CH₂OAr); 4.30 (NCH₂CH₂OH), 4.40 (т, 2Н, CH₂OAr); 4.80 (т, 2Н, СН₂ОН), 5.02 (уш. с, 1Н, ОН); 6.78 (д, 2Н, орто-H ArO,); 7.15-7.25 (м, 4Н, 2 мета-R ArO + 5,6-H_{бензимидазол}); 7.50 (дд, 2Н, 4, 7-H_{бензимидазол}), 9.45 (уш. с, 2Н, =N⁺H₂). Элементный анализ. Найдено (%): С 55.22; Н 5.06; С1 19.00; N 11.05. C₁₇H₁₉Cl₂N₃O. Вычислено (%): С 55.40; Н 5.16; С1 19.28; N 11.00.Prepared analogously to compound 1e by the above procedure from 1- [2- (4-chlorophenoxyethyl)] - 2-aminobenzimidazole and ethylene chlorohydrin in 73% yield. Colorless small crystals with so pl. 225-226 ° C (from ethanol). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (DMSO-d ₆ ): 3.75 (t, 2H, NCH ₂ CH ₂ OAr); 4.30 (NCH ₂ CH ₂ OH); 4.40 (t, 2H, CH ₂ OAr); 4.80 (t, 2H, CH ₂ OH), 5.02 (br s, 1H, OH); 6.78 (d, 2H, ortho- H ArO,); 7.15-7.25 (m, 4H, 2 meta- R ArO + 5,6-H _{benzimidazole} ); 7.50 (dd, 2H, 4, 7-H _{benzimidazole} ), 9.45 (br s, 2H, = N ⁺ H ₂ ). Elemental analysis. Found (%): C 55.22; H 5.06; C1 19.00; N 11.05. C ₁₇ H ₁₉ Cl ₂ N ₃ O. Calculated (%): C 55.40; H 5.16; C1 19.28; N 11.00.

Пример 7. 2-Имино-1-аллил-3-[γ-(4-фторфеноксипропил)]бензимидазолина гидрохлорид (1ж).Example 7. 2-Imino-1-allyl-3- [γ- (4-fluorophenoxypropyl)] benzimidazoline hydrochloride (1g).

Смесь 2.35 г (10 ммоль) 2-амино-1-аллилбензимидазола и 2.33 г (10 ммоль) γ-(4-фторфеноксипропил)бромида в 20 мл толуола кипятят 1.5 часа. Охлаждают, осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и высушивают. Выход 2.96 г (92%). Бесцветные ватообразные кристаллы с т.пл. 217.5-219°C (из этанола). Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц), δ, м.д. (DMSO-d₆): 2.20 (т, 2Н, CH₂CH₂CH₂); 4.25 (т, 2Н, NCH₂CH₂CH₂OAr); 4.55 (т, 2Н, CH₂OAr); 4.95 (д, 2Н, NCH₂CH=CH₂); 5.65 (дд, 2Н, СН₂=СН); 5.85-6.00 (м, 1Н, СН=СН₂); 6.80 (т, 2Н, орто-H ArO); 6.92 (т, 2Н, мета-H ArO); 7.20 (дд, 5,6-H_{бензимидазол}); 7.40 (дд, 2Н, 4,7-H_{бензимидазол}); 9.90 (с, 2Н,=N⁺H₂). Элементный анализ. Найдено (%): С 62.68; Н 5.44; N 11.42. C₁₉H₂₁ClFN₃O. Вычислено (%): С 63.01; Н 5.80; N 11.61.A mixture of 2.35 g (10 mmol) of 2-amino-1-allylbenzimidazole and 2.33 g (10 mmol) of γ- (4-fluorophenoxypropyl) bromide in 20 ml of toluene is boiled for 1.5 hours. It is cooled, the precipitate is filtered off, washed with acetone and dried. Yield 2.96 g (92%). Colorless cotton-like crystals with mp 217.5-219 ° C (from ethanol). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (DMSO-d ₆ ): 2.20 (t, 2H, CH ₂ CH ₂ CH ₂ ); 4.25 (t, 2H, NCH ₂ CH ₂ CH ₂ OAr); 4.55 (t, 2H, CH ₂ OAr); 4.95 (d, 2H, NCH ₂ CH = CH ₂ ); 5.65 (dd, 2H, CH ₂ = CH); 5.85-6.00 (m, 1H, CH = CH ₂ ); 6.80 (t, 2H, ortho- H ArO); 6.92 (t, 2H, meta- H ArO); 7.20 (dd, 5,6-H _{benzimidazole} ); 7.40 (dd, 2H, 4.7-H _{benzimidazole} ); 9.90 (s, 2H, = N ⁺ H ₂ ). Elemental analysis. Found (%): C 62.68; H 5.44; N, 11.42. C ₁₉ H ₂₁ ClFN ₃ O. Calculated (%): C 63.01; H 5.80; N, 11.61.

Пример 8. 2-Имино-1-аллил-3-[β-(4-трет-бутилфеноксиэтил)]бензимидазолина гидробромид (1з).Example 8. 2-Imino-1-allyl-3- [β- (4-tert-butylphenoxyethyl)] benzimidazoline hydrobromide (1h).

Получают аналогично гидрохлориду 2-имино-1-аллил-3-[γ-(4-фторфенокси)пропил]бензимидазолина из 2-амино-1-аллилбензимидазола и β-(4-трет-бутилфеноки)этилбромида с выходом 74%. Бесцветные кристаллы с т.пл. 276-277°C (из метанола). Спектр ЯМР ¹Н, (300 МГц), δ, м.д. (DMSO-d₆): 1.20 [с, 9Н, С(СН₃)₃]; 4.08 (т, 2Н, NCH₂CH₂CH₂OAr); 4.22 (т, 2Н, NCH₂CH=CH₂); 4.70 (т, 2Н, CH₂ArO); 5.35 (т, 2Н, СН₂=CH); 5.85-6.00 (м, 1H, СН=СН₂); 6.69 (т, 2Н, орто-H ArO); 7.05 (т, 2Н, мета-H ArO); 7.26 (дд, 2Н, 5,6-H_{бензимидазол}); 7.50 (д, 1Н, 4-H_{бензимидазол}); 7.62 (д, 2Н, 7-H_{бензимидазол}); 9.20 (с, 2Н,=N⁺H₂). Элементный анализ. Найдено (%): С 61.00; Н 6.22; N 9.49. C₁₉H₂₁ClFN₃O. Вычислено (%): С 61.34; Н 6.51; N 9.76.2-Imino-1-allyl-3- [γ- (4-fluorophenoxy) propyl] benzimidazoline is obtained from 2-amino-1-allylbenzimidazole and β- (4- tert- butylphenoxy) ethyl bromide in a yield of 74%. Colorless crystals with so pl. 276-277 ° C (from methanol). ¹ H NMR spectrum, (300 MHz), δ, ppm (DMSO-d ₆ ): 1.20 [s, 9H, C (CH ₃ ) ₃ ]; 4.08 (t, 2H, NCH ₂ CH ₂ CH ₂ OAr); 4.22 (t, 2H, NCH ₂ CH = CH ₂ ); 4.70 (t, 2H, CH ₂ ArO); 5.35 (t, 2H, CH ₂ = CH); 5.85-6.00 (m, 1H, CH = CH ₂ ); 6.69 (t, 2H, ortho- H ArO); 7.05 (t, 2H, meta- H ArO); 7.26 (dd, 2H, 5,6-H _{benzimidazole} ); 7.50 (d, 1H, 4-H _{benzimidazole} ); 7.62 (d, 2H, 7-H _{benzimidazole} ); 9.20 (s, 2H, = N ⁺ H ₂ ). Elemental analysis. Found (%): C 61.00; H, 6.22; N, 9.49. C ₁₉ H ₂₁ ClFN ₃ O. Calculated (%): C 61.34; H 6.51; N, 9.76.

Пример 9. Изучение токсичности препаратов.Example 9. The study of the toxicity of drugs.

Токсичность продуктов была предварительно изучена в отношении клеток MDCK Клетки MDCK сеяли в 96-луночные планшеты и культивировали при 37°C в среде MEM с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота в атмосфере 5% CO₂ (в газопроточном инкубаторе Sanyo-175) до состояния монослоя. Из исследуемых препаратов готовили маточный раствор концентрации 10 мг/мл в диметилсульфоксиде, после чего готовили серию двукратных разведений препаратов в среде MEM от 1000 до 3.75 мкг/мл. Растворенные препараты вносили в лунки планшетов и инкубировали 2 суток при 37°C. По истечении этого срока клетки промывали 2 раза по 5 минут фосфатно-солевым буфером и количество живых клеток оценивали при помощи микротетразолиевого теста (МТТ). С этой целью в лунки планшетов добавляли по 100 мкл раствора (5 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазолил-2) 2,5-дифенилтетразолия бромида (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) на физиологическом растворе. Клетки инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO₂ в течение 2 часов и промывали 5 минут фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в 100 мкл на лунку ДМСО, после чего оптическую плотность в лунках планшетов измеряли на многофункциональном ридере Victor 1420 (Perkin Elmer, Finland) при длине волны 535 нм. По результатам теста для каждого продукта определяли 50% цитотоксическую дозу (CTD₅₀), т.е. концентрацию препарата, вызывающую гибель 50% клеток в культуре.Product toxicity was previously studied for MDCK cells. MDCK cells were seeded in 96-well plates and cultured at 37 ° C in MEM supplemented with 10% cattle serum in an atmosphere of 5% CO ₂ (in a Sanyo-175 gas flow incubator) to monolayer. From the studied preparations, a mother solution of a concentration of 10 mg / ml in dimethyl sulfoxide was prepared, after which a series of twofold dilutions of the preparations in MEM medium from 1000 to 3.75 μg / ml was prepared. Dissolved preparations were added to the wells of the plates and incubated for 2 days at 37 ° C. After this period, the cells were washed 2 times for 5 minutes with phosphate-buffered saline and the number of living cells was evaluated using microtetrazolium test (MTT). For this purpose, 100 μl of a solution (5 mg / ml) of 3- (4,5-dimethylthiazolyl-2) 2,5-diphenyltetrazolium bromide (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) in physiological saline was added to the wells of the plates. Cells were incubated at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO ₂ for 2 hours and washed 5 minutes with phosphate-buffered saline. The precipitate was dissolved in 100 μl per well of DMSO, after which the absorbance in the wells of the plates was measured on a Victor 1420 multifunction reader (Perkin Elmer, Finland) at a wavelength of 535 nm. According to the test results, a 50% cytotoxic dose (CTD ₅₀ ) was determined for each product, i.e. the concentration of the drug, causing the death of 50% of the cells in the culture.

Пример 10. Противовирусная активность препаратов.Example 10. Antiviral activity of drugs.

Определение противовирусной активности препаратов проводили на клетках MDCK в 96-луночных планшетах для клеточных культур. Соединения растворяли в поддерживающей среде для клеток, вносили в лунки панелей с клеточным монослоем и инкубировали в течение 1 часа при 36°C в атмосфере 5% CO₂.The antiviral activity of the preparations was determined on MDCK cells in 96-well cell culture plates. The compounds were dissolved in a cell support medium, introduced into the wells of the cell monolayer panels and incubated for 1 hour at 36 ° C. in an atmosphere of 5% CO ₂ .

Из вируссодержащей жидкости (штамм A/California/07/09 (H1N1)v) готовили серию десятикратных разведении от 10^-1 до 10^-7, добавляли в лунки с препаратами и инкубировали при 36°C в течение 48 часов в атмосфере 5% CO₂. По окончании срока инкубации аликвоту культуральной жидкости смешивали с равным объемом 1% куриных эритроцитов в отдельных планшетах с круглым дном. Учет результатов проводили через 60 минут инкубации при 20°C. За титр вируса в контроле и опыте принимали величину, обратную десятичному логарифму наибольшего разведения исходного вируса, способного вызвать положительную реакцию гемагглютинации в лунке, и выражали в количестве 50% инфекционных доз (ID₅₀). Вирусингибирующее действие исследуемых соединений оценивали по снижению титра вируса в опыте по сравнению с контролем. На основании полученных данных рассчитывали 50% ингибирующую дозу ED₅₀, т.е. концентрацию препарата, снижающую уровень вирусной репликации вдвое (на 0,3 lg ID₅₀), и индекс селективности, или химиотерапевтический индекс (ХТИ), представляющий собой отношение CTD₅₀ к ED₅₀.From a virus-containing fluid (strain A / California / 07/09 (H1N1) v) a series of ten-fold dilutions of 10 ^-1 to 10 ^{-7 was} prepared, added to drug wells and incubated at 36 ° C for 48 hours in an atmosphere of 5% CO ₂ . At the end of the incubation period, an aliquot of the culture fluid was mixed with an equal volume of 1% chicken red blood cells in separate round-bottom plates. Analysis was carried out after 60 minutes of incubation at 20 ° C. For the titer of the virus in control and experiment, the reciprocal of the decimal logarithm of the highest dilution of the original virus, capable of inducing a positive hemagglutination reaction in the well, was taken and expressed in the amount of 50% of infectious doses (ID ₅₀ ). The virus-inhibiting effect of the test compounds was evaluated by the decrease in virus titer in the experiment compared with the control. Based on the data obtained, a 50% inhibitory dose of ED _{50 was} calculated, i.e. the concentration of the drug, which reduces the level of viral replication by half (by 0.3 lg ID ₅₀ ), and the selectivity index, or chemotherapeutic index (CTI), which is the ratio of CTD ₅₀ to ED ₅₀ .

Claims

1-ω-aryloxyalkyl- and 1-benzyl substituted 2-aminobenzimidazoles and their fixed iminotautomeric forms - 3-R-substituted 1-ω-aryloxyalkyl- and 1-benzyl-2-iminobenzimidazoline hydrohalides

a, b X = N, R = 4-ClC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , Hal ^- absent, a) R ¹ = 2-furoyl, b) R ¹ = 2-tenoyl;
cz X = N ⁺ CH ₂ R ² , R ¹ = H, c) R = 3,4-Cl ₂ C ₆ H ₄ CH ₂ , R ² = CONH ₂ ; Hal = Cl
d) R = 4-FC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CONH ₂ ; Hal = Cl
d) R = 3,4-Cl ₂ C ₆ H ₄ CH ₂ , R ² = CH ₂ OH; Hal = Cl
e) R = 4-ClC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CH ₂ OH; Hal = Cl
g) R = 4-FC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ , R ² = CH = CH ₂ ; Hal = Br
h) R = 4- (CH ₃ ) ₃ CC ₆ H ₄ OCH ₂ CH ₂ , R ² = CH = CH ₂ ; Hal = Br
possessing activity against the flu virus.