RU2545909C2 - Способ иммунохроматографического определения специфических антител - Google Patents
Способ иммунохроматографического определения специфических антител Download PDFInfo
- Publication number
- RU2545909C2 RU2545909C2 RU2013111990/15A RU2013111990A RU2545909C2 RU 2545909 C2 RU2545909 C2 RU 2545909C2 RU 2013111990/15 A RU2013111990/15 A RU 2013111990/15A RU 2013111990 A RU2013111990 A RU 2013111990A RU 2545909 C2 RU2545909 C2 RU 2545909C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- test
- antibodies
- antigen
- strip
- membrane
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 15
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 25
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 abstract description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 abstract description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012505 colouration Methods 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- -1 PhoS Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ иммунохроматографического определения специфических антител. В основе способа лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы. Интенсивность окраски метки, связавшейся в аналитической зоне, детектируется визуально. Отличительной особенностью предлагаемого способа определения антител является то, что в тесте используется конъюгат коллоидного золота с антигеном, а в аналитической зоне тест-полоски иммобилизуется реагент для связывания общих антител, в то время как в стандартной схеме иммунохроматографии для определения специфических антител с коллоидным золотом конъюгируется реагент для связывания антител, а в аналитической зоне тест-полоски иммобилизуется антиген. Использование предложенного способа анализа позволяет повысить чувствительность анализа и/или уменьшить расход антигена. 2 ил., 1 пр.
Description
Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой метод иммунохроматографического определения специфических антител. Наличие в сыворотке крови антител, специфичных к возбудителю определенного заболевания, является эффективным критерием, позволяющим с высокой достоверностью диагностировать соответствующее инфекционное заболевание (Rose N.R. (ed.). Manual of Clinical Laboratory Immunology (4th ed.). Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1992.). В случае диагностики инфекционных заболеваний преимуществами данного подхода по сравнению с непосредственным выявлением и идентификацией возбудителя является определенность при выборе тестируемой пробы (сыворотка крови, тогда как возбудитель может на данной стадии инфекции преимущественно локализоваться в самых разных органах и тканях), а также возможность быстрой детекции достаточно высокого уровня антител, индуцированного контактом с антигеном, в то время как для выявления антигена могут потребоваться довольно продолжительные стадии доращивания до достижения им регистрируемой концентрации. Хотя в настоящее время активно используются как микробиологические, так и иммунологические способы диагностики инфекционных заболеваний, для проведения массового первичного скрининга оптимально иммунологическое определение наличия в сыворотке крови специфических антител (серодиагностика), которое может быть реализовано с высокой экспрессностью и производительностью. Особенный интерес вызывают серодиагностические подходы в тех случаях, когда в силу особенностей роста микроорганизмов получение результатов микробиологического тестирования может потребовать значительного времени.
Благодаря высокой чувствительности и специфичности серологические тесты незаменимы при массовых обследованиях. Кроме того, гуморальный иммунный ответ отражает активный инфекционный процесс, и поэтому результаты иммунохимического тестирования достоверно отражают именно случаи заболевания, дискриминируя их от бактерионосительства.
Иммунохимический анализ может быть реализован в различных форматах. Однако, поскольку для массовых обследований первоочередное значение имеют скорость и производительность тестирования, в данной ситуации несомненными преимуществами обладает иммунохроматографический анализ, для которого все необходимые реагенты предварительно нанесены на мембранные компоненты тест-полоски, и ее контакт с тестируемой пробой непосредственно инициирует движение фронта жидкости по мембранам, протекание специфических реакций и формирование иммунных комплексов, которые благодаря включению в их состав окрашенного маркера могут детектироваться визуально или с помощью оптического детектора (Рис.1).
Применительно к серодиагностике (определению антител, специфичных к определенному антигену или группе антигенов) общая схема иммунохроматографии заключается в следующем.
Проба, потенциально содержащая специфические антитела, под действием капиллярных сил перемещается вдоль тест-полоски. При этом она вначале взаимодействует с окрашенными частицами (коллоидное золото или иной маркер), на поверхности которых адсорбирован компонент, предназначенный для связывания с антителами. Обычно в качестве такового компонента выбирают антивидовые антитела (иммуноглобулины, выделенные из сыворотки животного, иммунизированного препаратом иммуноглобулинов человека или другого организма, для которого проводится серодиагностика), белок А из Staphylococcus aureus или белок G из Streptococcus spp. Затем фронт жидкости преодолевает аналитическую (тестовую) зону, которая представляет собой участок мембраны с иммобилизованным антигеном (нативным или специально модифицированным для эффективной сорбции). Степень связывания маркера с иммобилизованным антигеном и, соответственно, интенсивность окрашивания мембраны определяются концентрацией специфических антител в пробе. Для проверки качества реагентов и сохранения функциональности тест-системы используется расположенная далее контрольная зона, в которой компонент, сорбированный на окрашенной частице, связывается с соответствующим иммобилизованным на мембране реагентом.
Ниже представлена информация о методике, реализуемой в тест-системе «TB-Check-I» фирмы «Vedalab» (Франция) - см. http://www.sanitamedikal.com/Assets/MD_220002_m3_TB_1408_c.pdf. Данная методика определения антител к возбудителю туберкулеза рассматривается в настоящей заявке в качестве прототипной.
Метод основан на комбинации антител к иммуноглобулинам человека, конъюгированных с хромогеном, и высокоочищенного БЦЖ-белка… При прохождении исследуемого образца через адсорбционную зону тестового устройства конъюгат, содержащий меченые антитела, связывается с IgG, образуя комплекс «антиген-антитело». Этот комплекс взаимодействует с высокоочищенным БЦЖ-белком в тестовой зоне устройства, и если концентрация специфического IgG к возбудителю туберкулеза превышает 350 Е/мл, образует окрашенную полосу. При низкой концентрации антител окрашенная полоса в тестовой зоне не образуется. Несвязавшийся конъюгат взаимодействует с реагентом в контрольной зоне тестового устройства, образуя окрашенную полосу, что указывает на правильное проведение теста… Процедура исследования: …заполнить одноразовую пипетку сывороткой или плазмой и внести 1 каплю в окно для пробы тестового устройства. Добавить в окно для пробы 5-6 полных капель разбавляющего раствора (дилюента). Через 10-15 мин произвести учет результатов.
Одной из наиболее важных задач в иммунохроматографии является повышение чувствительности анализа. Для увеличения чувствительности анализа следует использовать как можно более высокие концентрации конъюгата и рецептора в аналитической зоне. Однако увеличение концентрации коллоидного конъюгата лимитировано тем фактом, что конъюгат должен полностью продиффундировать через иммунохроматографические мембраны за время проведения анализа (~10 мин), поэтому использование конъюгатов с оптической плотностью выше 10 проблематично. Увеличение концентрации центров связывания на поверхности коллоида лимитировано низкой сорбционной емкостью наночастиц золота - обычно концентрация белка около 10 мкг/мл является насыщающей (GHITESCU, L. and M. BENDAYAN. Immunolabeling efficiency of protein A-gold complexes. J. Histochem. Cytochem., 38, 1523-1530, 1990). Сорбционная емкость рабочей мембраны иммунохроматографического теста на несколько порядков выше, чем коллоидного золота - до 15 мг/мл (http://www.millipore.com/publications.nsf/a73664f9i981af8c852569b9005b4eee/348ee7096d9 3729b85256bf40066a40d/$FILE/tb500en00.pdf), но повышение концентрации рецептора в аналитической зоне в стандартном методе иммунохроматографического анализа для серодиагностики нецелесообразно по экономическим причинам, так как рецептором обычно являются самые дорогие компоненты тест-системы: рекомбинантные белки бактерий или вирусов. Поэтому нами был предложен способ иммунохроматографического анализа, в котором молекулы антигена или антигенов сорбируются на поверхности коллоидного золота (при этом расход антигена значительно снижается: с 300-600 нг до 100 нг на тест), а в аналитической зоне тест-полоски иммобилизуется компонент для связывания антител: антивидовые антитела, белок А из Staphylococcus uureus или белок G из Streptococcus spp. Перечисленные реагенты для связывания антител широко используются в иммунохимии (в иммуноанализе, для выделения очистки антител и т.д.), поэтому существует налаженное массовое производство данных реагентов и их стоимость более чем на порядок ниже стоимости рекомбинантных антигенов, поэтому 10-кратное повышение концентрации данных реагентов не приводит к существенному повышению стоимости теста и при этом позволяет значительно повысить чувствительность анализа.
Предложенный подход был реализован заявителями для серодиагностики туберкулеза с использованием антигена 38 кДа (Ag78, antigen 5, PhoS, Rv0934) M. tuberculosis. Ниже представлено описание способа получения тест-полосок и проведения иммунохроматографического анализа, а также полученные результаты.
Пример
Для формирования тест-системы использовали набор мембран «mdi Easypack» фирмы «Advanced Microdevices» (Индия), включающий рабочую мембрану CNPC-SN12 L2-P25 (размер пор 15 мкм), мембрану под конъюгат PT-R5, мембрану для нанесения образца GFB-R4, адсорбирующую мембрану АР 045, для нанесения БСА использовалась мембрана PT-R5.
На мембраны были нанесены следующие реагенты:
1. Белок А из Staphylococcus aureus, производства ООО «Имтек» (Россия).
2. Конъюгат коллоидного золота со средним диаметром частиц 30 нм и рекомбинантного антигена 38 кДа М. tuberculosis (Rv0934), фирмы «Arista Biologicals Inc.» (США), кат. № AGMTB-0220.
3. Моноклональные антитела НТМ81 против рекомбинантного антигена 38 кДа M. tuberculosis. Центр молекулярной диагностики и терапии, Москва (Россия).
Для формирования аналитической зоны использовали белок А, контрольной зоны - моноклональные антитела НТМ81 против рекомбинантного антигена 38 кДа M. tuberculosis. На 1 см полосы наносили 2 мкл раствора белка А (10,0 мг/мл в 50 мМ фосфатном буфере, pН 7,4) и 2 мкл раствора антител (0,5 мг/мл в том же буфере). Конъюгат коллоидного золота с антигеном наносили в разведении, соответствующем D520=6,5, в объеме 10 мкл на 1 см полосы. Для нанесения реагентов использовали диспенсер «IsoFlow» фирмы «Imagene Technology» (США). После нанесения реагентов мембраны высушивали не менее 24 ч в помещении с контролируемыми температурой и влажностью. Листы мембран с нанесенными иммунореагентами нарезали на индивидуальные тест-полоски шириной 3,5 мм.
Для сравнения изготавливали тест-полоски по стандартной схеме с использованием тех же реагентов и мембран, но с коллоидным золотом. Конъюгировали белок А (10 мкг/мл, конъюгат наносили на мембрану из оптической плотности 7), а в аналитической зоне иммобилизовали рекомбинантный белок 38 кДа М. tuberculosis.
Иммунохроматографический анализ проводили при комнатной температуре. Тест-полоску погружали в пробу на 1 мин в вертикальном положении, а затем извлекали и помещали на горизонтальную поверхность. Детекцию связывания коллоидного золота осуществляли через 10 мин визуально (Рис.2).
Достигнутая при использовании предложенного способа анализа чувствительность на порядок превышает чувствительность, достигнутую при использовании стандартного способа анализа.
Рис.1. Принцип иммунохроматографического анализа для серодиагностики. 1 - мембрана, адсорбирующая образец; 2 - частицы коллоидного золота; 3 - реагент для связывания антител: антивидовые антитела, белок А, белок G или др.; 4 - пластиковая основа; 5 - рабочая мембрана; 6 - конечная адсорбирующая мембрана; 7 - антиген, иммобилизованный в аналитической зоне; 8 - антивидовые антитела, иммобилизованные в контрольной зоне.
Рис.2. Тестирование сывороток крови больных туберкулезом (3 пробы): А - стандартным методом и Б - альтернативным методом, предложенным заявителями (стрелкой указано положение аналитической зоны).
Claims (1)
- Способ иммунохроматографического определения специфических антител, отличающийся тем, что для анализа используется конъюгат коллоидного золота с антигеном, а в аналитической зоне тест-полоски иммобилизуется реагент для связывания общих антител, в качестве которого могут использоваться антивидовые антитела, белок А из Staphylococcus aureus или белок G из Streptococcus spp.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013111990/15A RU2545909C2 (ru) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Способ иммунохроматографического определения специфических антител |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013111990/15A RU2545909C2 (ru) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Способ иммунохроматографического определения специфических антител |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013111990A RU2013111990A (ru) | 2014-09-27 |
| RU2545909C2 true RU2545909C2 (ru) | 2015-04-10 |
Family
ID=51656205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013111990/15A RU2545909C2 (ru) | 2013-03-19 | 2013-03-19 | Способ иммунохроматографического определения специфических антител |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2545909C2 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2741199C1 (ru) * | 2020-09-25 | 2021-01-22 | Федеральное государственное учреждение"Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Способ иммунохроматографической серодиагностики с последовательным добавлением реагентов |
| RU2851009C1 (ru) * | 2024-09-13 | 2025-11-17 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ определения антител к альфа-токсину стафилококка в твердой фракции β- и γ-глобулинов |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006065166A1 (en) * | 2005-07-26 | 2006-06-22 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu 'rusgen' | Protein l1 and protein e7 peptide-based composition for treating and preventing a human papillomaviral infection |
| RU2395092C2 (ru) * | 2008-09-17 | 2010-07-20 | Институт биохимии имени А.Н. Баха Российской академии наук | Способ определения антител к возбудителю туберкулеза |
| WO2012015327A1 (ru) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Veliev Sabir Nasirovich | Тест-система для определения сердечного белка, связывающего жирные кислоты, и тропонина i (варианты) |
-
2013
- 2013-03-19 RU RU2013111990/15A patent/RU2545909C2/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006065166A1 (en) * | 2005-07-26 | 2006-06-22 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu 'rusgen' | Protein l1 and protein e7 peptide-based composition for treating and preventing a human papillomaviral infection |
| RU2395092C2 (ru) * | 2008-09-17 | 2010-07-20 | Институт биохимии имени А.Н. Баха Российской академии наук | Способ определения антител к возбудителю туберкулеза |
| WO2012015327A1 (ru) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Veliev Sabir Nasirovich | Тест-система для определения сердечного белка, связывающего жирные кислоты, и тропонина i (варианты) |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Tong Lin ET AL., Development of a serotype colloidal gold strip using monoclonal antibody for rapid detection type Asia1 foot-and-mouth disease. Virology Journal 2011, 8: 418. PP. 1-6 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2741199C1 (ru) * | 2020-09-25 | 2021-01-22 | Федеральное государственное учреждение"Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Способ иммунохроматографической серодиагностики с последовательным добавлением реагентов |
| RU2851009C1 (ru) * | 2024-09-13 | 2025-11-17 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ определения антител к альфа-токсину стафилококка в твердой фракции β- и γ-глобулинов |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013111990A (ru) | 2014-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2020233741B2 (en) | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections | |
| AU2018204793B2 (en) | Signal amplification in lateral flow and related immunoassays | |
| US10408835B2 (en) | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections | |
| US8962260B2 (en) | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections | |
| JP2013072663A (ja) | マイコプラズマ・ニューモニエ検出用イムノクロマトグラフィー試験デバイスおよびキット | |
| US20210072235A1 (en) | Method for diagnosing tuberculosis | |
| WO2007138964A9 (ja) | 免疫測定用ラテックス組成物 | |
| JP5541748B2 (ja) | アビジン−ビオチン連結標識試薬を用いたイムノクロマトグラフ用試験具及びその利用 | |
| RU2395092C2 (ru) | Способ определения антител к возбудителю туберкулеза | |
| RU2532352C2 (ru) | Способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики | |
| RU2545909C2 (ru) | Способ иммунохроматографического определения специфических антител | |
| RU2530560C2 (ru) | Метод получения межмолекулярных конъюгатов для иммунохроматографического опредеелния специфических антител | |
| RU2741199C1 (ru) | Способ иммунохроматографической серодиагностики с последовательным добавлением реагентов | |
| Byzova et al. | Manufacturing lateral flow tests for tuberculosis diagnosis: choosing a reactants completion and sensing regime | |
| JP2023518742A (ja) | 抗インターフェロンγ抗体を検出するための免疫クロマトグラフィーによる方法及びキット | |
| HK40019586A (en) | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections | |
| HK40006500A (en) | Signal amplification in lateral flow and related immunoassays | |
| HK40006500B (en) | Signal amplification in lateral flow and related immunoassays | |
| NA et al. | Design of Immunochromatographic System for Express Detection of Mycobacterium tuberculosis Cells | |
| HK1214308B (en) | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections | |
| JP2007300817A (ja) | 細菌の検出方法、検出用試薬及び検出用キット。 | |
| BR112017021686B1 (pt) | Método para detectar uma ou várias carbapenemases oxa, dispositivo para detectar imunocromatográfico e uso do dispositivo para detectar imunocromatográfico |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |